Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Вегетативная нервная система млекопитающих животных и человека в онтогенезе

и 6 011 - 8 01« й98

На правах рукописи

КРУГЛЯКОВ ПАВЕЛ ПАВЛОВИЧ

ВЕГЕТАТИВНАЯ НЕРВНАЯ СИСТЕМА МЛЕКОПИТАЮЩИХ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА В ОНТОГЕНЕЗЕ (сравнительное ультраструктурное исследование)

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САРАНСК - 1996

Работа выполнена на кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии Мордовского ордена Дружбы народов государственного университета имени Н.П.Огарева

Научные консультанты:

доктор медицинскох наук, профессор А.А.Сосунов доктор медицинских наук, профессор В.М.Чучков

Официальные оппоненты:

академик Российской Академии медицинских наук, доктор медицинских наук, профессор В.Н.Ярыгин,

член-корреспондент Российской Академии медицинских наук, доктор медицинских наук, профессор Н.Н.Боголепов,

доктор медицинских наук, профессор Ю.А.Челышев Ведущая организация - Институт биологии развития

на заседании диссертационного совета Д 063 7 !ри Мордовском государственном университете имени Н.П.Огарева (430000, г.Саранск, ул.Большевистская,68).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского государственного университета имени Н.П.Огарева

имени Н.К.Кольцова РАН

Защита диссертации состоится

Автореферат разослан

1996г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор

Л.П.Тельцов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Сравнительное исследование разных отделов вегетативной нервной системы (ВНС) в онтогенезе позволяет выяснить многие принципиальные проблемы развития и устройства нервной системы в целом (Боголепов, 1975-1994; Бабминдра, Брагина, 1982; Ярыгин, 1976-1994; Швалев и др., 1980-1994; Сосунов, Чучков, 1995; Burnstock, 1992). Отличаясь разнообразием в строении и функционировании разные отделы нервной системы, тем не менее, имеют общие принципы деятельности, вследствие единой структурной основы - нейронов и глиальных клеток и принципиальной гомоло-гичности механизмов межклеточных взаимоотношений, лежащих в основе "замыкания" рефлекторных цепей передачи и обработки информации.

ВНС, включающая в себя множество ганглиев, одиночных нейронов и обширные нервные сплетения, имеет общий источник развития - нервный гребень (НГ), плюрипотентные клетки которого способны дифференцирооаться п самые разнообразные тканевые производные (Кнорре,Суворова, 1984; La Douarin, 1993). Ганглии ВНС различаются как по строению клеток и устройству межклеточных взаимоотношений, так и по нейрохимическому фенотипу нейронов, а также по их возрастным перестройкам. Морфогенетическое и нейрохимическое разнообразие вегетативных нейронов закладывается в эмбриогенезе и определяющими факторами в детерминации и дифференцировке клеток НГ здесь признают локальные условия микроокружения (Le Douarin, 1986; Anderson, 1992).

Несмотря на грандиозный прогресс молекулярно-биологических методов морфологические цито-и гистологические исследования остаются значимым и информативным способом познания окружающего мира, в том числе и живых организмов и человека. Развитие иммунохимических методик в морфологии открыло новую эпоху в познании структурно-функциональной организации нервной системы, и следует отметить, что хотя первые нейроактивные пептиды были обнаружены в периферической нервной системе (вещество Р) и сосуществование нейро-пептидов, выполняющих роль нейромодуляторов и нейромедиаторов, было также впервые показано в ВНС, однако многое в вопросах нейрохимической природы нейронов и межнейронной коммуникации остается не выясненным и противоречивым (Campbell, 1986; Lundberg, 1990; Morris, Gibbins, 1992).

К настоящему времени накоплен обширный материал о структуре разных ганглиев ВНС многих видов млекопитающих животных, а также человека в разные периоды онтогенеза (Корочкин, 1965; Хабарова, 1975; Колосов, 1976; Колосов, Хабарова, 1978; Кнорре, Суворова, 1984; Новиков, 1990; Швалев и др., 1992; Сосунов, Чучков, 1995; Burnstock, Costa, 1975; Gabella, 1976). Вместе с тем, известные данные являются во многом фрагментарными, а нередко и противоречивыми, и не дают полной картины онтогенетического развития структуры ганг-лиозного отдела ВНС, практически отсутствует сравнительный анализ как разных ганглиев одного вида животных в онтогенезе, так и анализ межвидовых особенностей в строении ВНС. Имеющиеся исследования по эмбриональному и раннему постнатальному периодам развития вегетативных ганглиев рассматривают только некоторые стороны дифференцировки клеток и межклеточных взаимоотношений и не представляют полной картины формирования вегетативных нервных узлов. Кроме того, в связи с познанием многих молекулярных механизмов и закономерностей деятельности клеток и межклеточных взаимосвязей в нервной ткани становится необходимым пересмотреть некоторые традиционные морфологические положения, касающиеся как эмбрионального развития, так и структурной организации вегетативных узлов в зрелости.

Мало внимания уделяется возрастным перестройкам ганглиев ВНС и сравнительным исследованиям изменений, развивающихся в разных ганглиях при старении. Анализ возрастных нарушений особенно значим для практического здравоохранения поскольку многие заболевания инициируются нарушениями нервного контроля, особенно ярко выраженными с возрастом.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось выяснение общих закономерностей строения вегетативных ганглиев в онтогенезе, а также проведение сравнительного анализа структурных особенностей отдельных ганглиев млекопитающих животных и человека.

Исходя из поставленной цели были определены следующие задачи:

1) проанализировать эмбриональное развитие некоторых вегетативных ганглиев (симпатических паравертебральных, внутрисердечных и кишечных) у зародышей человека и крысы;

2) провести сравнительный анализ строения разных ганглиев ВНС у ряда представителей млекопитающих животных и человека;

3) иммуноцитохимически в сердце исследовать клетки, содержащие N0-синтазу и нейропептид У, и выяснить их взаимоотношения с собственными нейронами сердца и кровеносными сосудами;

4) исследовать возрастные перестройки вегетативных ганглиев; выяснить общие закономерности и свойственные разным ганглиям частные особенности изменений вегетативных нейронов и межнейронных взаимосвязей в старости.

Научная новизна результатов. Проведенные исследования позволили получить много новых результатов, среди которых следует выделить следующие:

1) подтверждена общая закономерность ранних сроков развития ганглиоз-ного аппарата - морфологическое проявление нейронального фенотипа клетками НГ начинается после подрастания преганглионарных нервных волокон, образующих с клетками простые контакты;

2) нейральные клетки в закладках всех изученных вегетативных ганглиев проявляют признаки адренергического фенотипа, причем дифференцировка нейробластов опережает и, возможно, регулирует созревание глиальных клеток;

3) становление ацетилхолинэстеразной активности в развивающихся вегетативных нейронах следует закономерной динамике - вначале продукт реакции находится в ядре, затем в мембранах ядерной оболочки, потом определяется в цитоплазме, преимущественно в гранулярной эндоплаз-матической сети и, наконец, на плазматической мембране;

4) установлено наличие в сердечных ганглиях МО-синтаза-содержащих нейронов и мелких гранулярных клеток и выяснены их взаимосвязи с другими внутрисердечными нейронами; показано большое число МО-синтаза-содержащих нервных волокон в стенке коронарных сосудов;

5) в сердечных ганглиях впервые выявлены мелкие гранулярные клетки, содержащие нейропептид У; установлены межклеточные взаимоотношения между нейропептид У-содержащими элементами в сердечных ганглиях и в стенке коронарных сосудов;

6) показаны особенности ультраструктуры ганглиев мочевого пузыря собак и кошек (наличие протяженных дендродендритических и дендросоматических контактов), установлены видовые особенности цитоскелета нейронов мочевого пузыря собак ( наличие включений, аналогичных тельцам Хирано);

7) особенности нейронов крыс линии вНГ^ (со спонтанной гипертензией) проявляются на морфологическом уровне только в зрелом возрасте в симпати-

ческих и внутрисердечных ганглиях и заключаются преимущественно в гипертрофии телец Ниссля; —

8) наряду с общими структурными изменениями имеются различия в возрастных перестройках вегетативных ганглиев человека и крысы.

Научно-практическая значимость работы. Материалы работы имеют значение прежде всего для познания и расширения представлений об устройстве и функционировании нервной системы и представляют значительный теоретический интерес для сравнительной морфологии и физиологии млекопитающих животных и человека. Результаты исследования могут быть введены в учебные программы биологических и медицинских учебных заведений и использоваться в учебном процессе по курсам цитологии, гистологии и эмбриологии, анатомии, физиологии и молекулярной биологии. Полученные данные по эмбриогенезу ВНС могут служить показателями нормы развития с целью изучения и определения возможных причин ряда врожденных заболеваний, связанных с недоразвитием интрамурального нервного аппарата.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Закономерные морфологические черты ранних сроков формирования вегетативных ганглиев.

2. Особенности в эмбриональном развитии вегетативных ганглиев разной локализации.

3. Иммуноцитохимические данные о внутрисердечных нейронах, содержащих (\Ю-синтазу и нейропептид У.

4. Сравнительный анализ вегетативных ганглиев разной локализации у млекопитающих животных и человека.

5. Возрастные перестройки вегетативных нейронов.

Апробация работы. Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на научной конференции по биомембранам (Саранск, 1984), 4-й Республиканской конференции АГЭ Литвы (Вильнюс, 1985), научных конференциях по гистологии (Ленинград, 1985-1987), научных конференциях МОИП (Москва, 1986, 1988), 3-м симпозиуме международного общества по изучению сердца (Баку, 1986), 10-м и 11-м Всесоюзных съездах АГЭ (Винница, 1986; Смоленск, 1992), конференции АМН СССР "Методология, теоретические и методические аспекты современной нейроморфологии" (Москва,1987), 4-й научной конференции "Ультраструктурные основы патологии органов и тканей" (Тбилиси,

1989), научной конференции "Реактивность и регенерация тканей" (Ленинград,

1990), научной конференции морфологов Литвы (Каунас, 1990), 1-м и 2-м международных медико-биологических симпозиумах АЕН РФ (Саранск, 1991, 1994), научной конференции "Морфология раневого процесса" (С.-Петербург, 1992), 4-м и 5-м европейских Конгрессах нейропатологов (Берлин, 1992, 1993), 15-м ежегодном Конгрессе Международного общества по изучению сердца (Колумбия, США, 1993), 3-м Всероссийском съезде АГЭ (Тюмень, 1994), 23-й научной конференции "Огаревские чтения" (Саранск, 1994), 2-й Всероссийской научной конференции "Университеты России" (Нальчик, 1994), 4-м Международном Конгрессе по морфологии позвоночных (Чикаго, 1994), 2-й и 3-й Всероссийских научно-практических конференциях "Антропогенные воздействия и здоровье человека" (Калуга, 1995, 1996), 3-м Конгрессе Ассоциации морфологов-АГЭ (Тверь, 1996), 6-й научной конференции морфологического общества Литвы (Каунас, 1996). Материалы диссертации и полученные данные используются в учебном процессе на биологическом и медицинском факультетах Мордовского государственного унинор-ситета и отражены в 34 печатных работах (статьи в отечественных и зарубежных периодических изданиях, глава монографии, тезисы и материалы симпозиумов).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 186 страницах машинописного текста и включает следующие главы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение (3 главы), заключение, выводы и библиографический указатель. Содержание работы иллюстрировано £06 рисунками (микрофотографии, схема) и 2 таблицами. Библиографический указатель включает 419 отечественных и иностранных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Объектами исследования служили млекопитающие животные: лабораторные крысы линий Wistar, Sprague-Dawley и SHR (spontaneously hypertensive rats), морские свинки (Dunkin Hartley), беспородные собаки, кошки и человек.

Материалом исследования являлись симпатические шейно-грудные (звездчатые) паравертебральные нервные узлы, интрамуральные нервные ганглии сердца, тонкого отдела кишечника и мочевого пузыря. Для изучения развития

вегетативных ганглиев в эмбриогенезе использовали зародышей белых крыс и эмбрионов человека.

Зародышей крыс извлекали из матки под нембуталовым наркозом (40 мг/кг), а самок затем забивали декапитацией. Возраст эмбрионов крысы определяли по первому дню после спаривания животных в течение одной ночи, который считали нулевым днем беременности. Всего изучено 184 эмбриона белых крыс линии УУЫаг и 154 эмбриона линии БНЯ (с 9-х по 21-е сутки). Зародышей на ранних сроках эмбриогенеза (размером до 1 см.) фиксировали и заливали целиком. Более крупных эмбрионов разрезали поперечно кранио-каудальной оси на несколько сегментов, которые фиксировали и заливали в смолу. У более крупных плодов крысы (18-21 сутки эмбриогенеза) под бинокулярным стереомикроскопом производили вскрытие, препаровку и взятие отдельных участков органов.

Взятие материала у новорожденных и взрослых животных производили под нембуталовым наркозом. В сердце вырезались участки задней стенки левого и правого предсердий. В пищеварительном тракте для исследования нервного аппарата брали начальный участок тощей кишки (4-5 см. от места перехода желудка в 12-ти перстную кишку). Для исследования ганглиев мочевого пузыря у собак и кошек вырезали участок стенки в области треугольника Льето, где наблюдается наибольшая концентрация интрамуральных ганглиев. Всего изучено 145 белых крыс от одного дня после рождения до старости (30-32 месяца), 15 морских свинок, 11 беспородных собак и 7 половозрелых кошек.

Эмбрионы человека получали из абортариев и гинекологических отделений клиник г.Саранска (максимальное время до начала фиксации - 30 минут). Возраст зародышей определяли по клиническим данным и размерам тела в соответствии с периодизацией Б.М.Пэттена (1959) и Я.О.КаМШ (1973). Всего изучено 102 эмбриона человека (от 5-ти до 27-ми недельного возраста).

Ш'ейно-грудные (звездчатые) и интрамуральные кишечные (в тощей кишке на расстоянии 25-30 см. от сфинктера привратника желудка) вегетативные ганглии взрослых людей исследовали у лиц скончавшихся от заболеваний, не связанных с патологией нервной системы. Всего изучен материал от 19 трупов. Возраст умерших 24 - 65 лет. Взятие и фиксацию исследуемого материала начинали не позднее трех часов после наступления смерти.

Подготовку материала для электронно-микроскопического исследования проводили традиционным методом. Поиск нервных ганглиев проводили на полутонких срезах (0,5 - 1 мкм), окрашенных толуидиновым или метиленовым синим. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца.

Электронно-гистохимические исследования. Выявление активности ацетил-холинэстеразы (АХЭ) проводили по методике M.J.Karnovsky и L.A.Roots (1964) на криостатных срезах толщиной 50 мкм. В качестве инкубационной среды использовали раствор: ацетилтиохолин иодид-5мг.;0,1М цитрат натрия-0,5мл.; 0,1М натрий-малеатный буфер (рН 6,0)-6,5мл.; ЗОмМ сульфат меди-1мл.; 1мМ iso-ОМРАИмл.; 5мМ феррицианид калия-1мл.; сахароза-1,5 г. Контроль проводили инкубацией материала в среде без субстрата. Всего изучено 145 эмбрионов и 60 животных после рождения линии Wistar и соответственно 128/50 линии SHR, а также 24 эмбриона человека (от 7 до 18 недель).

Электронно-гистохимическое выявление катехоламин-содержлщих клеток проводили по методу J.P.Transer, G Richards (1976) с использованием хромптл и бихромата калия. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца. Продукт реакции выявлялся в виде электронно-плотного материала в содержимом маленьких и больших гранулярных пузырьков. Всего изучено 119 эмбрионов и 64 крысы после рождения линии Wistar и соответственно 119/47 линии SHR..

Гистохимическую реакцию на НАДФН-диафоразу проводили по методу K.Tanaka и др. (1993). Предсердия фиксировали целиком, погружением в 4% раствор параформальдеЫда в 0,1 М ФБ в течение 2,5 часов и после промывки в 0,15 М ФБ инкубировали в среде, содержащей 0,2 мг/мл тетранитросинего тетразо-лия, 2,7 мг/мл L-яблочной кислоты, 1,0 мг/мл (NADPH, 0,1% Тритона Х-100 в 0,1 М ТРИС-буфере (рН 7,6) в темноте при комнатной температуре в течение 45 мин. Мелкие кусочки ткани предсердий, содержащие окрашенные в темно-синий цвет ганглиозные нейроны, выделяли в поле бинокулярного микроскопа и подготавливали для электронномикроскопического исследования.

Иммуноцитохимическое исследование. Животных забивали под наркозом вскрытием грудной клетки или перфузией фиксатором. После выделения сердце помещалось в раствор фиксатора на 2,5 часа при комнатной температуре. В качестве фиксатора использовали 4 % раствор параформа и 0,1 % раствор глута-рового альдегида в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,3). После промывки в 0,15

фосфатном буфере и криопротекции в растворе сахарозы сердце замораживали при температуре жидкого азота. Замороженные срезы толщиной 30-35 мкм получали в криостате. Для иммуноцитохимической реакции использовали маленькие кусочки замороженных срезов, в которых предварительно на параллельных серийных срезах были обнаружены нервные ганглии. Иммуноцитохимическую реакцию проводили методом "преэмбеддинг" с пероксидазой-антипероксидазой (ПАП) по методике, описанной А.1оеэсЬ и С.Вигпэ^ск (1993). Использовали кроличьи антитела на МО-синтазу I типа и кроличьи антитела на нейропептид У (выражаем благодарность проф. Дж.Бэрнстоку за предоставленные антитела) в разведении 1:250, 1:500 и 1:1000. Различий в степени интенсивности реакции и в количестве выявляемых нервных элементов при этих разведениях не было установлено. В качестве контроля использовали срезы не инкубированные в растворах первичных антител на МО-синтазу или нейропептид У.

Работа выполнена на электронных микроскопах ЭМВ-100Б и ЭМ-125.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. РАЗВИТИЕ ВЕГЕТАТИВНЫХ ГАНГЛИЕВ В ПРЕНАТАЛЬНОМ И ПОСТНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДАХ ОНТОГЕНЕЗА.

В данной части работы представлены результаты исследования развития

симпатических паравертебральных (звездчатых), кишечных и внутрисердечных ганглиев зародышей крысы и человека. Анализ этих ганглиев, отличающихся по нейромедиаторному статусу и по межклеточным взаимоотношениям, позволил выяснить как общие закономерности развития нервных узлов, так и особенности в становлении тканеспецифического фенотипа, связанные с органной и видовой принадлежностью ганглиев.

К общим закономерностям развития вегетативных ганглиев следует отнести прежде всего постоянное наличие преганглионарных нервных волокон около клеток в ранних закладках нервных узлов. Во всех изученных ганглиях первые клетки нейральной направленности дифференцировки находились около нервных волокон, соответствующих по своей ультраструктуре аксонным окончаниям. Подрастающие аксоны были лишены глиальной оболочки и обычно находились в небольших пучках. Они образовывали простые контакты с нейральными клетками. До подрастания нервных волокон определить среди мезенхимы клетки нервого гребня традиционными методами электронной микроскопии не представлялось возможным. Полученные в исследованиях результаты позволяют считать, что

фактором определяющим конкретную локализацию ганглиев, а значит и остановку миграции и начало специфической дифференцировки клеток НГ, могут являться подрастающие преганглионарные волокна.

Это положение не находится в противоречии с известными данными о ранних стадиях развития ганглиев и о влиянии местных факторов микроокружения (компоненты внеклеточного матрикса, нейроактивные вещества) и подтверждается рядом наблюдений.

Так, влияние межклеточных контактов на развитие клеток вегетативных ганглиев показано в исследованиях in vitro, причем действующие агенты находились непосредственно в плазматической мембране (Adler, Black, 1986; Seilheimer et al., 1989; Clendening, Hume, 1990).

Преганглионарные влияния имеют также большое значение для реализации и "поддержания" определенного медиаторного и структурного фенотипа нервных клеток (Wu, Black, 1988; Call, 1992; Hockfield, Kalb, 1994).

Значимость преганглионарных волокон для развития ганглиев кишечник.1 была отмечена Л.И.Корочкиным (1965), который также полагал, что именно преганглионарные влияния могут являться инициирующим фактором в дифференци-ровке вегетативных нейронов. Высказанное положение подтверждается и при иммуногистохимическом исследовании развивающихся симпатических стволов у крыс: иммунореактивность на нейрофиламенты, которые являются маркером зрелости нервных клеток и в частности аксонов, выявляется в закладках симпатического ствола одновременно с иммунореактивностью на тирозин-гидроксилазу (маркер начала дифференцировки клеток НГ в нейробласты) (Abonen, 1991).

Следует отметить, что в изученных ганглиях начальные стадии их формирования протекают в разных условиях, если в ранних закладках паравертеб-ральных и внутрисердечных узлов определяются только единичные нервные волокна, то в стенке кишечника во время начала агрегации клеток НГ имеется уже значительное количество крупных нервных стволов, состоящих из многочисленных нервных волокон. Вторым важным положением работы является заключение о неравномерной дифференцировке клеточных типов вегетативных ганглиев. Во всех изученных ганглиях первоначально происходило выделение нейробластов и мелких гранулярных (МГ) клеток. Первые отличались наличием отростков, содержащих микротрубочки и нейрофиламенты, округлыми ядрами с малоконденси-

рованным хроматином, узкими короткими канальцами эндоплазматической сети, МГ-клетки характеризовались наличием многочисленных крупных (диаметром 80140 нм) гранулярных пузырьков.

Обращало внимание, что во внутриорганных ганглиях нейробласты ультра-структурно дифференцировались (если качественно сравнивать всю популяцию клеток и рассматривать не эмбриональный возраст, а время от момента идентификации первых нейральных клеток в закладках органов) раньше, чем в симпатическом стволе. Это особенно ярко проявлялось в образовании у клеток отростков, которые, однако, были лишены ультраструктурной специализации аксонов и денд-ритов. В настоящее время можно только предполагать о возможных причинах "ускоренного" развития нейрональных клеток в интраорганных ганглиях, но, в любом случае, важным фактором является влияние окружающих структур. Первые глиальные клетки начинали образовываться по периферии зачатков ганглиев (особенно ярко выражено в симпатическом стволе и сердечных ганглиях, где граница формирующихся нервных узлов выражена более четко в сравнении с ганглиями кишечника, представленными вначале сплошным клеточно-волокнис-тым слоем по периметру стенки кишки). Полученные данные позволяют считать влияние со стороны окружающих не нервных клеток важным фактором дифференцировки глиальных клеток.

Проблеме детерминации и дифференцировки клеток НГ в разные клеточные типы посвящено большое число исследований. Более разработанной является последовательность нейропоэза для производных НГ в симпатических пара-вертебральных и желудочно-кишечных ганглиях, где признается существование промежуточной стадии - общего предшественника нейронов и МГ-клеток в виде клеток, содержащих большие гранулярные пузырьки, (Carnaham et al., 1991).

Полученные в работе данные свидетельствуют в пользу такого положения о последовательности нейропоэза НГ. В перикарионе многих нейральных клеток в ранних закладках симпатических и кишечных ганглиев определялись крупные гранулярные пузырьки. Однако следует отметить, что ни число этих пузырьков (относительно небольшое), ни другие ультраструктурные характеристики клеток не позволяют считать их МГ-клетками, как полагали ранее, рассматривая МГ-клетки предшественниками симпатических нейронов, хромафинных клеток и, возможно, других типов нейронов ( Landis, Patterson, 1981; Hansen et al., 1989).

Результаты проведенного исследования позволяют считать, что и внутри-сердечные нейроны развиваются из того же общего предшественника. Такое заключение базируется на собственных данных: 1) наличие в сердце, также как и в кишечнике и в симпатическом стволе, на ранних стадиях развития ВНС клеток, содержащих большие гранулярные пузырьки; 2) наличие на ранних сроках развития в сердце МГ-клеток, предшественником которых по рассматриваемой схеме является клетка, единая для всех нейральных производных; а также на результатах эмбриологических экспериментов по ауто- и гетеротрансплантации НГ и данных клонального анализа in vitro, свидетельствующих о плюри-потентности клеток НГ (Le Douarin, 1986; Le Douarin, Dupin, 1993; Anderson, 1993).

Анализируя ранние сроки развития ганглиев, следует обратить внимание на наличие множества простых контактов между собствено ганглиозными и преганг-лионарными нейронами. Такая особенность, хотя и отмечается всеми исследователями развития вегетативных ганглиев, обычно рассматривается только как проявление незрелости и самих нервных клеток и глиальных клеток, не сформировавших еще глиального покрова нейронов (Рарка, 1976). Вместе с тем, именно в это время начинается синаптогенез и активный процесс арборизации отростков, а значит происходит выбор и определение тех участков тела и отростков клоток, где будут образовываться как синапсы, так и новые разветвления дендритов. Возможно, что большая площадь соприкосновения нейронов позволяет им интенсивно "обмениваться" позиционной информацией и предопределять свое развитие в зависимости от влияния соседних нейронов и преганглионарных волокон.

Особенно подробно значение межклеточных взаимосвязей, посредством прямых несинаптических контактов, показано при формировании нервно-эффек-торной связи, где большое значение имеют взаимотропные влияния посредством обмена биологически активными веществами, определяющими в частности рост и арборизацию отростков нейронов и даже выживание клеток (Ярыгин, 1979; Clarke, 1990; Altman, 1992).

Нельзя не отметить интересную особенность, присущую кишечным ганглиям на всем протяжении их развития - наличие протяженных простых контактов нейронов с эффекторным субстратом (гладкомышечными клетками), причем эти контакты образуются как отростками, так и телами нейрональных клеток. Являются ли они отражением "простых" механических сил, "придавливающих"

нейроны к мышцам или отражают невыясненные еще взаимовлияния клеток разного фенотипа, пока не известно.

Прямые межклеточные контакты и обмен нейроактивными веществами во многом связаны с объемом свободного межклеточного внутриганглионарного пространства, которое значительно отличается в симпатическом паравертеб-ральном стволе (а затем и в формирующихся симпатических ганглиях) и внутри-органных ганглиях, в особенности в кишечных, где свободное межклеточное пространство практически отсутствует. Это может означать, что в развивающихся симпатических ганглиях диффузия нейроактивных веществ осуществляется в большем объеме и имеет большое значение, чем во внутриорганных нервных узлах (это положение находит подтверждение и при анализе возрастных перестроек ганглиев). Нельзя исключить и фактор' величины ганглиев и необходимость большей диффузии в симпатических узлах вследствие их значительных размеров и большего числа клеток. Следует отметить, что проблема межклеточного "свободного" пространства является весьма актуальной и для ЦНС и рассматривается с точки зрения обмена нейроактивных веществ и электролитов как в норме, так и при патологии (Сеп/оз-№7агго, 1991).

Анализируя особенности в развитии изученных ганглиев, необходимо отметить характерную динамику формирования кишечных узлов. Вначале, когда стенка кишечника представлена только эпителием и окружающей мезенхимой, в последней встречаются маленькие пучки нервных волокон и только единичные ней-ральные клетки. Позже, но до появления ультраструктурных признаков гладко-мышечного фенотипа, выявляются нейрональные клетки, располагающиеся ближе к серозной оболочке. Нейрональные клетки лежат компактно и нередко, вместе с нервными волокнами, располагаются по всему периметру кишечника. Диффе-ренцировка первых гладкомышечных клеток происходит из мезенхимы, расположенной между слоем развивающихся нейрональных клеток и эпителием, и с оформлением мышечного слоя нейрональные клетки располагаются латераль-нее и тесно прилежат к последнему. Наружный мышечный слой образуется из ме-зенхимных клеток, находящихся между слоем нейрональных клеток и серозной оболочкой, и с его развитием оформляется межмышечное Ауэрбаховское нервное сплетение. Формирование подслизистого сплетения и дифференцировка его нейрональных клеток осуществляется значительно позднее и лишь после об-

разования межмышечного сплетения. В чем причина гетерохронии в развитии межмышечного и подслизистого сплетений точно не выяснено.

В развитии внутрисердечных ганглиев подтверждена описанная раннее (Швалев, Сосунов, 1989) морфогенетическая динамика, в которой можно выделить три основные стадии: диффузной локализации малодифференцированных нейральных клеток, компактной агрегации нейрональных клеток и дефинитивной структуры.

Сравнивая развитие изученных вегетативных ганглиев у зародышей человека и белой крысы, необходимо отметить принципиальное положение, что дифференцировка всех клеточных элементов нервных узлов у человека происходит "быстрее" и к рождению нервный аппарат внутренних органов у человека сформирован в большей степени в сравнении с крысой. Это проявляется как в качественной степени зрелости нейронов и глиальных клеток и межклеточных взаимоотношений, так и в сравнительной визуальной количественной оценке числа синапсов и дифференцированных клеток.

Известно, что зрелорождающиеся животные имеют более сформированный нервный аппарат внутренних органов в сравнении с незрелорождающимисп (Кнорре, Суворова, 1984). Человек, также как и крыса, относится к незролорож-дающимся видам, поэтому ускоренное развитие вегетативных ганглиев может являться отражением общей закономерности филогенетического прогресса: в эволюционно вышестоящих видах развитие систем и органов опережает более низко стоящие виды.

Следует обратить внимание, что хотя развитие вегетативных ганглиев у зародышей человека и идет более "ускоренными темпами", в ганглиях или по ходу нервных стволов всегда имеются малодифференцированные нейральные и ней-рональные клетки, которые, как показывают данные светооптических исследований; остаются даже в юношеском возрасте (Дробышева,1967; Хабарова, 1975; Кнорре, Суворова, 1984).

Гетерохронность в развитии нервных клеток в настоящее время объясняют с позиций концепции о системогенезе ПХАнохина (1968), согласно которой оставшиеся без связи с эффекторным субстратом и не включенные в рефлекторные связи развивающиеся нейроны погибают в результате генетически запрограммированных процессов (апоптоз) (Ярыгмн, 1979; Максимова, 1985). Однако

почему остаются клетки в состоянии крайней степени недифференцированное™, соответствующей, более вероятно, уровню клеток НГ, остается не ясным.

Возможно, что эти клетки "не встретили" необходимых инициирующих агентов (растворимые факторы или контактные воздействия со стороны окружающих клеток) для своей детерминации и дифференцировки. Учитывая, что клетки НГ могут превращаться в соединительно-тканные элементы, нельзя исключить, что малодифференцированные предшественники в зрелых ганглиях "внешне" не отличаются от соединительно-тканных клеток, например адвентициальных. Однако они не утрачивают "память" о своем нейральном происхождении и, возможно, сохраняют нейральные потенции.

Важным событием в развитии нервной ткани является становление медиа-торного фенотипа клеток, когда нейроны приобретают способность синтезировать и выделять вещества, выполняющие функции нейромедиаторов, объединяясь, тем самым, в нейронные сети и формируя рефлекторные дуги. Одним из наиболее распространенных нейромедиаторов в центральной (ЦНС) и вегетативной нервной системе (ВНС) является ацетилхолин (АХ).

Большое количество исследований, посвященных анализу развития холин-ергических систем в онтогенезе, выполнено на светооптическом уровне, элект-ронномикроскопических исследований значительно меньше, к тому же вопросы становления холинергических свойств нервных клеток изучены преимущественно у птиц - традиционного объекта нейрогистолоти позвоночных. В клетках НГ, образующегося на 9-е сутки развития эмбрионов крыс, положительной реакции на АХЭ обнаружено не было, что совпадает сданными других авторов (Drews, 1975; Martins-Green, Erickson,1988).

Самое раннее появление энзима, по нашим наблюдениям, относится к 12-м суткам эмбрионального развития крысы. Первые АХЭ-положительные клетки выявлялись в закладках симпатического парав'ертебрального ствола и спиналь-ных ганглиев. Появление первых АХЭ-положительных клеток совпадает с началом образования зачатка ганглия и с установлением первых контактов с подрастающими преганглионарными волокнами. Интересно отметить, что начиная с 12-х суток эмбрионального развития крысы нейробласты симпатических ганглиев содержат тирозингидроксилазу (Cohard и др.,1978), а несколько позже, с 12,5

суток, гистохимически выявляемые катехоламины (в клетках определяются большие гранулярные пузырьки с положительной реакцией на биогенные амины).

В ганглиях кишечника АХЭ-активность была обнаружена на 13-е сутки эмбрионального развития крысы. В это время отдельные клетки зачатков ганглиев содержали малочисленные гранулы продукта реакции преимущественно в канальцах гранулярной ЭПС. Активность АХЭ в клетках формирующихся внутри-сердечных ганглиев определялась в отдельных нейробластах на 15-е сутки.В этот период фермент локализуется главным образом в ядре нейробластов. Интересно отметить, что первые ацетилхолиновые рецепторы в кардиомиоцитах появляются также на 15-е сутки эмбрионального развития крысы и их количество увеличивается в период с 15-х до 19-х суток (Nedoma et al.,1986). Увеличение количества рецепторов авторы связывают с увеличением популяции нервных клеток и нервных волокон.

К 19-м суткам эмбрионального развития крысы активность АХЭ в сердце наблюдалась во многих нейробластах и нервных волокнах. Локализация фермента в эти сроки во многом соответствовала таковой в зрелых нервных клетках. В то же время следует отметить значительно меньшую, по сравнению со зпоэд-чатым ганглием, интенсивность реакции, связанную с канальцами гранулярного ретикулума.

По данным W.J. Marvin (1980) нейроэффекторная (нейромышечная) активность в сердце крыс появляется в конце эмбрионального периода ( 21-е сутки). В это время, по нашим данным, внутриклеточное распределение АХЭ активности практически соответствует зрелому возрасту. Продукт реакции определялся как в теле нейрона (перинуклеарное пространство, гранулярная ЭПС, плазмалемма), так и в отростках (наружная мембрана, область синапсов).

Проведенный сравнительный анализ времени появления и локализации АХЭ у крыс линии Wistar и крыс линии SHR не выявил каких-либо различий в'сроках появления и внутриклеточном распределении фермента в изученных ганглиях. Полученные данные свидетельствуют о следующей динамике субклеточной локализации АХЭ: фермент начинает выявляться в ядерном материале, затем в перинукпеарном пространстве, несколько позже в канальцах гранулярной эндо-плазматической сети, цистернах комплекса Гольджи и, наконец, на плазмалемме.

2. УЛЬТРАСГРУКТУРА ЗРЕЛЫХ ВЕГЕТАТИВНЫХ ГАНГЛИЕВ.

В данном разделе представлены результаты сравнительного исследования некоторых вегетативных ганглиев (симпатических щейно-грудных, внутрисер-дечных, кишечных и мочевого пузыря) млекопитающих животных и человека.

Изученные ганглии можно условно подразделить на два морфологических типа в зависимости от: а) степени развития глиальных оболочек, б) наличия внутриганглионарной соединительной ткани, в том числе и капилляров, в) наличия в составе ганглиев МГ-клеток. Кишечные ганглии относятся к узлам, в которых вышеуказанные признаки отсутствуют, а остальные ганглии следует считать альтернативным вариантом строения нервных узлов.

ВНУТРИСЕРДЕЧНЫЕ ГАНГЛИИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ЖИВОТНЫХ.

Внутрисердечные ганглии были изучены в аспекте сравнения с другими вегетативными ганглиями и основное внимание было уделено иммуноцитохимичес-кому анализу распределения в клетках NO-синтазы и нейропептида Y.

Наши данные по ультраструктурной организации внутрисердечных нервных узлов (крыса, морская свинка, собака) не отличаются от представленных ранее (Рарка, 1976; Ellison, Hibbs, 1976; Швалев, Сосунов, 1982; Сосунов, 1988). Нервные узлы у крысы и собаки состояли из разного числа нейронов, в среднем от 5 до 20-30, ганглии морских свинок обычно были малого размера и состояли из меньшего числа нейронов. В ганглиях хорошо развиты соедительно-тканные прослойки с кровеносными сосудами, а нейроны, их тела и отростки, имеют развитую и цельную глиальную оболочку. Собственные отростки нейронов и отростки соседних клеток, преганглионарные волокна и окружающие их глиальные оболочки создают "сложную" картину перинейронального нейропиля. Можно отметить, что внутрисердечные нейроны морских свинок отличаются наличием многочисленных маленьких выростов перикариона, не изолированных друг от друга глиальными прослойками.

МГ-клетки обнаруживались в сердечных ганглиях крысы гораздо чаще, чем в ганглиях сердца морской свинки и собаки, так в сердце крысы они обнаруживались в среднем в каждом из 6 ганглиев, а у морской свинки и собаки - только в одном из 10 нервных узлов. МГ-клетки обычно находились около мелких кровеносных сосудов и капилляров с фенестрированным эндотелием.

NO- СИНТАЗА-СОДЕРЖАЩИЕ НЕРВНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ В СЕРДЦЕ.

В сердечных ганглиях выявлены два вида иммунопозитивных нейронов: 1) интенсивно-иммуноположительные клетки, в которых электронноплотный материал целиком заполнял тело и отростки нейронов, не проникая в ядро и в митохондрии, и 2) нейроны с умеренной реакцией в теле, в виде "очагового" отложения электронноплотного материала и повышения электронной плотности преимущественно канальцев гранулярной эндоплазматической сети, пластинчатого комплекса Гольджи и мультивезикулярных телец.

Нейроны второго вида соответствуют описанным ранее NO-иммунопозитив-ным клеткам в ганглиях желудочно-кишечного тракта (Llewellyn-Smith et al., 1992), а нейроны первого вида можно считать "истинно" NO-эргическими клетками (Blottneret al., 1993).

По форме (звездчатая) и размерам (небольшие, 20-25 мкм) тела нервные клетки первого вида правомерно отнести к вставочным нейронам. Кроме того, при качественной визуальной оценке количества NO синтаза иммунореактивных волокон в сердечных ганглиях, было отмечено, что в ганглиях, где находились NO -синтаза-содержащие нейроны первого типа, их число было выше, чем в ганглиях без таких клеток. Заключение об интернейронной функции высказывается и для NO-иммунопозитивных нейронов желудочно-кишечного тракта (Llewellyn-Smith et al., 1992). Следует отметить, что нейроны второго вида встречаются в сердечных ганглиях значительно чаще нейронов первого вида. Электронноплотный материал определялся по всей длине иммунопозитивных нервных волокон и локализовался преимущественно в цитозоле. В пресинаптических варикозных расширениях иммунопозитивных нервных волокон электронноплотный материал располагался на мембране маленьких синаптических пузырьков, не проникая в их полость, а во многих" больших гранулярных пузырьках осмиофильный материал заполнял и центральную часть везикул. Причем последняя особенность была характерна только для морской свинки, но не крысы.

Такие наблюдения подтверждают известные данные, что N0- синтаза нейронов является преимущественно цитозольным ферментом, а также свидетельствуют о возможной локализации фермента в крупных гранулярных пузырьках (у морских свинок), по-видимому, совместно с другими нейропептидами.

В работе были показаны синапсы, образованные N0- синтаза-иммунопо-зитивными нервными окончаниями с телами и дендритами N0- синтаза-иммуно-негативных нейронов, в свою очередь на N0- синтаза-иммунопозитивных нейронах имелись синапсы, образованные N0- синтаза-иммунонегативными нервными отростками. Однако синаптические контакты для [Ю-продуцирующих нейронов отражают только сосуществование N0- синтазы с другими нейромедиаторами/-нейропептидами и взаимосвязь клеток посредством классических нейромедиато-ров. Ранее синаптические контакты между внутрисердечными ЫО-продуцирую-щими нейронами и нейронами, не содержащими N0- синтазу, были показаны только у морской свинки (Тапака е1 а1„ 1993).

Возможность выделения N0 в любом участке нейрона (сома, аксон, денд-риты) позволяет считать N0- синтаза-содержащие нервные клетки особым видом нейронов, способных влиять на соседние клетки не только посредством нейро-медиаторов через синапсы, но и через N0 на всем протяжении своей плазмалем-мы, создавая, таким образом, своеобразное "поле влияния" модулирующее деятельность соседних нейронов. Условно можно называть ГЮ-продуцирующие нейроны - "полевыми", в отличие от "традиционных нейронов", для которых больше свойственно "точечное" влияние через синапсы. Здесь, конечно, нельзя исключить возможность того, что "обычные" нейроны способны выделять нейроактив-ные вещества не только в области синапсов, но и в других участках тела и отростков, которые посредством диффузии в межклеточном пространстве распространяются на значительное расстояние.

Изученные в работе миелиновые нервные волокна не содержали иммуно-позитивный материал, что может быть связано с затруднением проникновения реагентов в центральную часть волокна.

В исследовании впервые было показано, что МО-иммунореактивность • присуща и некоторым МГ-клеткам, причем основное количество продукта реакции, если судить по интенсивности окрашивания, наблюдалось в центральной части больших гранулярных пузырьков. Такой результат может означать, что N0 -синтаза присутствует и сосуществует вместе с катехоламинами в больших гранулярных пузырьках МГ-клеток. В этом заключается принципиальное отличие МГ-кпеток от нейронов, где фермент находится преимущественно в цитозоле.

Гистохимическая реакция на НАДФН-диафоразу с солями тетразолия еще с 60-х годов была предложена E.Thomas и A.Pearse (1961) для выявления отдельных нервных клеток не ясной природы в ЦНС. Выяснение механизмов и природы этих нейронов оказалось возможным после доказательства тождества субстрата при постановке реакции на НАДФН-диафоразу и NO синтазу (Dawson et al., 1991; Hope et al., 1991; Hassall et al„ 1993).

Реакция на НАДФН-диафоразу проявлялась на световом уровне в виде синей окраски разной интенсивности тела и отростков нейронов. При электронно-микроскопическом исследовании в цитоплазме сине-окрашенных нейронов определялись электронноплотные гранулы, не имеющие специфической локализации и сродства к каким-либо органеллам.

Открытие сосудорасширяющего эффекта окиси азота, продуцируемой эндотелием кровеносных сосудов, привело к распространенному мнению, что именно эндотелий является главным источником N0 в стенке сосудов и именно эндотелий ответственней за диллятацию сосудов (Knowles, Moneada, 1992; Gardiner, Bennett, 1993). В проведенном исследовании показано, что коронарныо сосуды разного калибра имеют большое количество NO-синтаза-содержащих нервных волокон, которые могут оказывать значимый эффект и существенным образом влиять на степень диллятации коронарного русла. Следует отметить, что обычно рядом с иммуноположительными нервными волокнами находились иммунонегативные нервные отростки.

УЛЬТРАСТРУКТУРА NPY-ИММУНОРЕАКТИВНЫХ НЕРВНЫХ КЛЕТОК В СЕРДЦЕ.

Многие нейроны внутрисердечных ганглиев обладали положительной реакцией на нейропептид У (NPY), которая проявлялась в виде очагового повышения электронной плотности отдельных канальцев гранулярной эндоплазматической сети, пластинчатого комплекса Гольджи и мультивезикулярных телец. Более интенсивная реакция была выявлена со стороны пластинчатого комплекса и мультивезикулярных телец. Следует отметить, что даже в иммунореактивных нейронах встречались мультивезикулярные тельца не содержащие электронноплотный материал.

Нейроны, тела которых были полностью заполнены электронноплотным материалом, не были обнаружены в сердечных ганглиях. Даже при внимательном исследовании ганглиев в них обнаруживались только единичные нервные волок-

на, иммунореактивные на NPY. Их цитоплазма была полностью заполнена осмио-фильным материалом, что затрудняло анализ их ультраструктуры. Синапсы, образованные иммунореактивными нервными волокнами с внутрисердечными нейронами, не были обнаружены.

Впервые показано, что многие МГ-клетки обладают иммунореактивностью на NPY. Обычно рядом с иммунореактивными клетками находились иммунонега-тивные МГ-клетки. В иммунореактивных МГ-клетках большие гранулярные пузырьки давали положительную реакцию на NPY, их содержимое было высокой электронной плотности.

Большое количество NPY-иммунореактивных нервных волокон обнаруживалось в стенке кровеносных сосудов разного калибра: от основных еетвей коронарных артерий до мелких артериол и капилляров.

В миокарде NPY-иммунореактивные волокна обычно определялись по ходу мелких кровеносных сосудов, причем многие из их терминалей находились вблизи кардиомиоцитов.

Из полученных результатов иммуноцитохимического исследования распределения нейропептида Y в сердце следует выделить постоянную положительную реакцию со стороны некоторых мультивезикулярных телец. Аналогичные данные были получены и в отношении NO-синтазы. Следует отметить, что функция мультивезикулярных телец до сих пор точно не установлена (Peters et al., 1991). На основании наших данных можно предположить, что мультивезикулярные тельца могут служить местом накопления и транспорта нейроактивных веществ, в первую очередь нейропептидов, из сомы нейрона в их отростки, прежде всего в дендриты.

Следует обратить внимание, что интенсивной реакции, аналогичной той, которая была обнаружена при исследовании NO-синтазы в сердечных нейронах не выявлялось, а нервные окончания, содержащие нейропептид Y, отличались гораздо большей осмиофильностью, а значит и интенсивностью реакции. Известно, что нейропептид Y обычно находится в адренергических нейронах (Owman et al., 1986; Lundberg, 1990) и является косвенным маркером этих клеток. Возможно, что часть из нейропептид-Y иммунореактивных волокон в сердечных

ганглиях является отростками адренергических нейронов симпатических ганглиев.

В настоящее время в нейронах сердечных ганглиев на световом уровне показано наличие, в разных количествах, практически всех известных нейропеп-тидов (Kastin et al., 1990; Gordon et al., 1993 ), наши данные значительно расширяют представления об тонкой организации межнейронных взаимосвязей клеток с разными биологическим активными веществами.

УЛЬТРАСТРУКТУРА СИМПАТИЧЕСКИХ ШЕЙНО-ГРУДНЫХ ГАНГЛИЕВ

МЛЕКОПИТАЮЩИХ ЖИВОТНЫХ.

Из полученных результатов анализа шейно-грудных ганглиев крысы, собаки и кошки наибольшего внимания заслуживают выявленные особенности синаптических контактов и видовые особенности нейронов собак.

Большая часть синаптических контактов в симпатических ганглиях находится не перинейронально, а в "клубках" переплетающихся отростков, лежащих в стороне и между телами нейронов. В зрелом возрасте в постсинаптических отделах синапсов вблизи активных зон находились маленькие светлые пузырьки по размерам аналогичные синаптическим везикулам и короткие фрагменты гладкой эндоплазматической сети. В нейропиле ганглиев нередко встречаются несинаптические дендро-соматические и дендродендритические контакты.

В шейно-грудных ганглиях собак в перикарионе многих нейронов были обнаружены скопления микротрубочек впервые показанные Y. Atoji с соавторами (1988). Следует отметить, что подобные включения не были найдены ни у крыс, ни у кошек.

УЛЬТРАСТРУКТУРА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ГАНГЛИЕВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ЖИВОТНЫХ.

Нервные ганглии желудочно-кишечного траста были изучены у крыс, собак и кошек и отличались, прежде всего, компактным расположением тел и отростков нейронов, не разграниченных прослойками глии. Прослойки соединительной ткани и капилляры отсутствовали среди нервных элементов, а располагались вокруг скопления нейронов и нервных волокон.

Слабое развитие глии, рассматривают как "недоразвитие" кишечных ганглиев (Gabella, 1982), а глиальные клетки сравнивают в астроцитами ЦНС (Gershon, Rothman, 1991).

В отношении первого положения следует отметить, что может быть многочисленные простые контакты между нейронами в ганглиях кишечника свидетельствуют не о "незрелости", а наоборот об "эволюционной прогрессивности" этого отдела ВНС (конечно, если сравнивать с ЦНС, как эволюционно более молодой области нервной системы).

Нейроглиальные клетки, образующие оболочки и тел и отростков кишечных нейронов отличаются большим размером тела, крупными отростками со "светлой" цитоплазмой, богатой глиофиламентами (особенно крупные нейроглиальные клетки обнаружены в ганглиях кишечника человека). Одним из отличительных признаков нейроглиальных клеток в кишечных ганглиях является отсутствие базальной мембраны в центральных отделах ганглиев (что рассматривается также, как сходство с астроцитами) и наличие ее только по периферии ганглиев, где базальная мембрана часто "переходит" с глии на "обнаженные" участки нейронов. Отсутствие базальной мембраны глии в центральных отделах ганглиев, по-видимому, связано с очень тесным расположением нейронов и глиальных клеток и практическим отсутствием свободного межклеточного про-странства. Последнее отличает нейропиль кишечных ганглиев от нейропиля ЦНС.

Размер тела нейронов был обычно небольшой в среднем 20 - 25 мкм, крупных скоплений канальцев гранулярной эндоплазматической сети не было выявлено. С телами нейронов контактировало большое число нервных волокон, среди синапсов преобладали аксосоматические контакты.

УЛЬТРАСТРУКТУРА ГАНГЛИЕВ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

ЖИВОТНЫХ.

Нервные ганглии мочевого пузыря изучены у белой крысы, кошки и собаки. Основное внимание уделялось анализу нервных ганглиев собак. Типичные нервные ганглии, состоящие из многих нервных клеток, были обнаружены только у собаки и кошки, у белых крыс в стенке мочевого пузыря находились только немногочисленные одиночные нейроны, располагающиеся в нервных стволах.Такая

видовая особенность отмечена также О.ОаЬеПа (1982), который не смог найти нервные узлы в мочевом пузыре крыс и мышей. В мочевом пузыре белой крысы, однако, находится довольно много отростчатых МГ-клеток..

В ганглиях собак и кошек можно выделить крупные (средний диаметр тела 40-50 мкм) и мелкие (средний диаметр 20-25 мкм) нейроны. Особенностью ганглиев мечевого пузыря собак и кошек является тесное расположение тел нервных клеток, формирующих протяженные сома-соматические, дендро-соматические и дендро-дендритические контакты.

Такие связи на большем протяжении соответствуют простым контактам и только иногда обнаруживалась специализация в виде симметричного отложения осмиофильного материала на плазмалеммах.

Значительный интерес представляют обнаруженные в телах нейронов мочевого пузыря собак особые включения, состоящие из переплетающихся правильным образом филаментов. В теле одной клетки часто находилось несколько таких включений. Обычно они располагались по периферии перикариона, но могли встречаться и в центральных отделах около ядра. Анализ серийных срезов и использование гониометра позволило установить форму филаментозных включений - уплощенная изогнутая дискообразная структура и произвести объемную реконструкцию расположения филаментов.

Следует отметить, что такие филаментозные включения были обнаружены только в нейронах мочевого пузыря собаки, ни у кошки, ни в одиночных нейронах крысы подобные тельца не были найдены.

У собак они встречались в каяадом изученном ганглии, как правило, в нескольких нейронах одного ганглия. Можно отметить, что с возрастом (сравнение проводилось между щенятами 4-5 месяцев и зрелыми собаками в возрасте 5-8 лет) их число несколько увеличивается.

Такие включения не были обнаружены у собак в других изученных вегетативных ганглиях: сердца, симпатических паравертебральных (шейно-грудные, звездчатые) и желудочно-кишечных. Их можно считать видовой и органной особенностью цитоскелета нерных клеток мочевого пузыря собаки.

По своему строению они аналогичны, так называемым, тельцам Хирано, типичным для нейронов ЦНС человека при многих нейродегенеративных забо-

леваниях таких, как болезнь Альцгеймера, болезнь Пика, амиотрофический латеральный склероз, деменции (Hirano et al., 1965, 1986; Field et al., 1969; Gibson, 1978) а также встречающихся у животных при медленной вирусной инфекции, врожденных метаболических нарушениях и даже при посмертном аутолизе (Field, Narang, 1972; Beal et al., 1977; Yagishita etal., 1979).

Причины и механизмы образования телец Хирано не выяснены. Иммунногистохимические исследования телец Хирано у человека показали, что их основным компонентом является белок актин (Goldman, 1983; Galloway et al., 1987), и в следовых количествах другие белки цитоскелета - тропомиозин, винкулин, альфа-актинин, тау-белок (Galloway etal.,1987; Peterson etal., 1988).

ВЕГЕТАТИВНЫЕ ГАНГЛИИ ЧЕЛОВЕКА.

В данной части работы основное внимание обращено на симпатические шейно-грудные ганглии людей (аутопсийный материал) в возрасте 24 - 65 лет.

Ганглии молодых людей (24 года) отличались компактным расположением клеток и нервных волокон. Уже при анализе полутонких срезов обращало внимание, что многие нейроны содержали многочисленные гранулы липофусцина. В нервных узлах постоянно обнаруживались крупные нервные окончания, заполненные полиформными везикулами, нейрофиламентами, анастамозирую-щими тонкими канальцами гладкой эндоплазматической сети и митохондриями. Аналогичные окончания были показаны в симпатических ганглиях людей, полученных после операций, и расценивались как возрастные перестройки или изменения вследствие диабета (Schroer et al., 1992). Постоянное наличие таких нервных окончаний и в молодом возрасте, что показано в настоящем исследовании, позволяет считать их не только проявлением патологии или возрастных изменений, но и видовой или органной особенностью симпатических ганглиев.

Большая часть синаптических контактов соответствовала аксодендритичес-ким. Обращало внимание, что в постсинаптических отделах вблизи активных зон нередко находились маленькие синаптически-подобные пузырьки. Некоторые пресинаптические крупные аксонные профили содержали миелиноподобные тельца. Часто встречались дендродендритические контакты, в которых наблюдалось отложение осмиофильного материала на контактирующих плазмалеммах.

Полученные данные о межнейронных связях в вегетативных ганглиях человека и крысы показывают, что кроме "традиционного способа" - синаптических контактов в межнейронной коммуникации большое значение имеет и связь посредством дендритов. Особенно разнообразны межнейронные связи между дендритами в симпатических ганглиях, где имеются так называемые "триады" (Kiraly et al., 1989; Asmar, Kummer, 1993), представленные аксоном, образующим синапс на дендрите, формирующим несинаптический контакт с другим дендритом или телом нейрона.

Подобные "триады" часто обнаруживались при исследовании шейно-груд-ного ганглия млекопитающих животных и человека и в ганглиях мочевого пузыря собаки и кошки. Многочисленные простые контакты между нервными элементами часто определялись и в ганглиях кишечника вследствие отсутствия цельных глиальных оболочек вокруг нейронов. В сердце дендро-дендритические контакты не были частыми находками и отличались короткой протяженностью.

Большая часть изученных дендро-дендритических и дендро-соматических контактов была лишена специализации и только изредка определялись, как правило короткие, осмиофильные участки и прилежащие к плазмалемме единичные синаптически-подобные маленькие светлые и большие гранулярные пузырьки, а также и элементы гладкой эндоплазматической сети.

Дендро-дендритические и дендро-соматические простые контакты могут определять различные формы межнейронной коммуникации. Во-первых, это эфаптические взаимосвязи, когда возбуждение, спайк или доспайковая деполяризация плазмалеммы, посредством электромагнитного возмущения изменяет потенциал плазматической мембраны соседнего нейрона и способно вызывать электротоническое возбуждение (Бреже, 1979). Такая взаимосвязь, конечно, не будет приводить к "замыканию рефлекторной дуги", но может способствовать •"усилению" межнейронной связи, действовать аналогично синапсу Хэбба (Вартанян, Лохов, 1987).

Другая возможность связана с нейроактивными химическими веществами, выделяющимися из дендритов. Дендриты содержат значительное количество нейромедиаторов и нейропептидов, это показано, прежде всего, иммунохими-ческими методами (Hassall et al., 1992). Структурным эквивалентом этого может служить наличие в дендритах маленьких и больших гранулярных пузырьков,

аналогичных тем, которые находятся в пресинаптических расширениях аксонов. Возможность выделения дендритами нейроактивных веществ может происходить в участках, не покрытых глией (в этом случае происходит диффузное влияние нейроактивных веществ, распространяющихся по межклеточному пространству), а также и в местах их контакта с другими нейронами. Особенно ярко, как будет отмечено ниже, такое влияние проявляется с возрастом.

Значимым механизмом межнейронной комуникации следует считать и "диффузное" влияние нейромедиаторов и нейропептидоа, выделяющихся из непокрытых глией участков перикариона, дендритов и аксонов, где с возрастом наблюдается скопление синаптически-подобных пузырьков.

3. ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВЕГЕТАТИВНЫХ ГАНГЛИЕВ.

Возрастные изменения вегетативных ганглиев изучены у крыс и у человека. У старых крыс линии Wistar и SHR в возрасте 24 - 30 месяцев изучена ультраструктура симпатических шейно-грудных, внутрисердечных и кишечных ганглиев. У человека исследована ультраструктура симпатических шейно-грудных и кишечных ганглиев.

Результаты исследований показали, что из изученных вегетативных ганглиев симпатические паравертебральные узлы отличаются наибольшими изменениями ультраструктуры клеток. Большая степень возрастных изменений симпатических ганглиев отмечалась ранее (Швалев и др., 1992) и, возможно, отражает "онтогенетическую нестабильность" симпатического звена вегетативной нервной системы, как наиболее молодого отдела периферической нервной системы в филогенезе. Значительное снижение адренергической иннервации внутренних органов с возрастом при относительной сохранности холинергиеского компонента отмечалось в работах В.Н.Швалева (1979 - 1992) и послужило основанием для выделения "постмедиаторного этапа" онтогенеза ВНС.

_ Накопление липофусцина преимущественно в нейронах звездчатых ганглиев может быть связано с рядом метаболических и функциональных особенностей, среди которых следует особо выделить отличия нейронов изученных ганглиев в количестве гранулярной ЭПС. Конкретные механизмы и источники образования липофусцина не известны (Schlote, Boellard,1983; Brizzer, 1985), однако имеющиеся данные: прямая связь числа липофусциновых гранул с объемом телец Ниссля, обнаружение липофусцина только в дендритах, но не в аксонах, где

отсутствуют элементы гранулярной ЭПС, различия между нейронами, глиоцитами и МГ-клетками по качеству липидогенных "возрастных" включений, позволяют считать, что образование липофусцина имеет прямую связь с гранулярной ЭПС.

С возрастом в симпатических нейронах крыс ярко проявляется увеличение количества ламеллярных телец и нематосом, которые можно обнаружить в каждом изученном ганглии во многих нейронах. Значение этих структур не выяснено, хотя они и показаны как уникальные находки в нейронах разных отделов нервной системы (Peters et al., 1991).

Ламеллярные тельца могут, пс нашему мнению, отражать нарушение взаимосвязи между мембранами и рибосомами в процессе синтеза или распада структур гранулярной ЭПС, что, естественно, имеет место с возрастом. Появление мембранных миелино-подобных телец было показано о нейронах супраопти-ческих ядер крыс и рассматривалось проявлением старения (Сгег.ро ot л!.. 19П2).

Отражением процессов, связанных с нарушением рлсппдп и утилизации внутриклеточных белков, могут являться, по нашему мнению, "ядрышко-подобные" тельца или нематосомы. Их появление и накопление с возрастом является, возможно, структурным отражением накопления протеосом и свидетельствует о нарушениях функции белков, в частности убиквитина, ответственных за процессы распада и утилизации внутриклеточных белков (Hershko, Ciechanover, 1992). Расположение скоплений филаментов около них может свидетельствовать, что образование нематосом связано в большей степени с нарушениями в обмене цитоскелетных белков нейронов с возрастом.

Возрастные изменения вегетативных нейронов человека и крысы значительно различаются. Более ярко это обнаруживается на примере симпатических шейно-грудных ганглиев и проявляется в развитии выраженного склероза и уменьшении числа нейронов и нервных волокон у человека.

Обращает внимание, что с возрастом наблюдается увеличение размеров перикариона симпатических нейронов, особенно ярко выраженное у человека. У старых крыс многие нейроны симпатических ганглиев содержали большой объем гранулярной эндоплазматической сети и, возможно, именно пролиферация канальцев гранулярной сети и определяет гипертрофию тела клеток. В симпатических ганглиях человека не было отмечено значительного числа канальцев гра-

нулярной эндоплазматической сети, что может быть связано и с посмертными изменениями.

В симпатических ганглиях человека ламеллярные тельца встречались редко, а нематосомы не были обнаружены. Не исключая возможность видовЫх особенностей, следует отметить, что одной из причин таких различий могут быть посмертные аутолитические изменения.

В отличие от нейронов у крыс, в нейронах ганглиев человека значительно чаще наблюдались митохондрии с осмиофильными включениями. Появление осмиофильных включений в митохондриях довольно типично для нейронов и наблюдается как с возрастом, так и при патологии (Швалев и др., 1992). По данным J.Vanneste и Ph.Van den Bosch de Aguilar (1981) такие изменененные митохондрии являются типичным проявлением старения нейронов.

Характерной чертой возрастных изменений вегетативных нейронов является появление большого числа маленьких синаптически-подобных пузырьков в теле и дендритах.

Появление большого числа таких пузырьков в перикарионах и дендритах нейронов может свидетельствовать о перераспределении нейромедиаторов в теле нейрона с возрастом и преимущественном накоплении их в местах, приближенных к белоксинтетическому аппарату. Снижение скорости аксотока, имеющее место с возрастом (McQuarrie et al., 1989), может являться одной из причин подобных изменений. Скопление маленьких синаптических пузырьков около плазмалеммы без глиальной оболочки может отражать выделение их содержимого в межклеточное пространство ганглиев и диффузное влияние нейроактив-ных веществ, диффундирующих в межклеточном веществе, на соседние нейроны. Полученные данные свидетельствуют, что с возрастом повышается выделение нейромедиаторов/нейромодуляторов в межклеточное пространство ганглиев.

Особого внимания заслуживают часто встречающиеся скопления маленьких синаптически-подобных и больших гранулярных пузырьков около постсина-птических активных зон синапсов, что может означать возможность выделения нейромедиаторов/нейромодуляторов из постсинаптических окончаний. В настоящее время подобное постсинаптическое влияние признается только для некоторых синапсов ЦНС, где наблюдается длительная потенциация и в качестве выделяющегося из постсинапса вещества рассматривается газ - окись азота (Bliss,

СоШпдпёде, 1993). Можно предположить, что длительное функционирование синапсов в вегетативных ганглиях, более детерминированных в своей деятельности в сравнении в синапсами ЦНС, приводит к более яркому структурному проявлению "обратного" влияния постсинапса на пресинапс посредством химических веществ.

Различия между крысами линии \Mstar и вНЯ ярко проявляются в степени развития гранулярной ЭПС в нейронах симпатических и внутрисердечных ганглиев, где у крыс линии ЭНЯ выявлена гипертрофия телец Ниссля. Отсутствие подобных изменений в нейронах кишечника позволяет считать, что причинами гипертрофии белок продуцирующего аппарата является не только "внутриклеточные", возможно генетически запрограммированные влияния, но и "внешние" факторы, связанные с трофическим влиянием эффекторного субстрата, обусловленные, в первую очередь, гипертрофией мышц сердца и сосудов. Это положение подтверждается результатами сравнительного изучения звездчатых ганглиен гипертензивных и гиперактивных линий крыс (Регигг1 е1 а1., 1991).

Ультраструктурные изменения в нервных волокнах, находящихся в ганглиях, наиболее ярко проявлялись в появлении крупных нервных профилей, заполненных многочисленными органеллами, нетипичными дпя "нормальных" волокон - мелкими митохондриями, полиморфными везикулами, в том числе и синап-тическими, миелиноподобными тельцами, скоплениям фипаментов. Такая структурная особенность может отражать, в первую очередь, нарушение аксотока (цитотока), связанное" как с изменениям молекулярных механизмов транспорта внутриклеточных структур, так и с перестройкой архитектоники отростков нейронов, в частности с "кугель-феноменом" при "ампутации" периферических участков дендритов. Обращало внимание, что обычно крупные нервные профили с "необычным" содержимым располагались около тел нейронов. В тех случаях, когда в них находились многочисленные везикулы по форме и размерам аналогичные синаптическим, можно предполагать изменения в терминальных (или варикозных) участках преганглионарных аксонов. Такие ультраструктурные перестройки находят свое подтверждение в классических работах, выполненных нейрогистологи-ческими методиками, и соответствуют крупным бутонам на теле нейронов.

выводы

1. На основании сравнительного ультраструктурного анализа выявлены общие закономерности (I) и особенности (II) эмбрионального развития вегетативных ганглиев разной локализации (симпатические паравертебральные, внутрисердечные и кишечные):

(I) - клетки, имеющие ультраструктурные признаки нейральной детерминации определяются в закладках ганглиев только после подрастания нервных преганглионарных волокон, образующих с ними простые контакты;

ранние клетки нейральной детерминации проявляют признаки адрен-ергического фенотипа, что выражается в наличие крупных гранулярных пузырьков, содержащих катехоламины;

дифференцировка нервных клеток опережает и, возможно, детерминирует созревание глиальных клеток;

ранние стадии формирования ганглиев характеризуются множеством простых контактов между нейрональными клетками;

динамика становления ацетилхолинэстеразной активности в нейро-нальных клетках не зависит от медиаторного статуса зрелых ганглиев;

(II) - морфологическое проявление нейронального фенотипа ней-ральными клетками в закладках ганглиев соответствует последовательности: симпатические паравертебральные ганглии, внутрикишечные и внутрисердечные нервные узлы;

агрегация и, возможно, дифференцировка нейральных клеток в кишечных и сердечных ганглиях в большей степени, чем в симпатических паравертебральных нервных узлах, определяется преганглионарными нервными волокнами;

нейробласты и глиобласты кишечных ганглиев созревают в условиях более тесных взаимосвязей с формирующимся эффекторным субстратом (гладко-мышечными клетками);

нейробласты кишечных ганглиев содержат больше крупных гранулярных пузырьков, что свидетельствует о более раннем проявлении нейро-пептидного фенотипа клеток.

2. Установлена динамика развития ацетилхолинэстеразной активности внутриклеточных структур нейрональных клеток вегетативных ганглиев. Продукт реакции вначале локализуется в ядре, затем определяется в перинукпеарном пространстве, несколько позже в канальцах гранулярной эндоплазматической сети и затем на плазматической мембране. Ацетилхолинэстеразная активность проявляется в клетках нервного гребня крысы только после начала их агрегации в зачатки вегетативных ганглиев.

3. Иммуноцитохимически выявлены МО-синтаза-содержаицие нейроны и мелкие гранулярные клетки в сердечных ганглиях крысы и морской свинки. Эти клетки находятся в синаптических взаимосвязях с нейронами, не содержащими N0 синтазу. Выявлено внутриклеточное распределение продукта реакции в нейронах при иммуноцитохимической реакции на МО-синтазу (преимущественно цитозоль, одиночные канальцы гранулярной эндоплазма-тической сети, цистерны пластинчатого комплекса, некоторые мульвезику-лярные пузырьки) и при гистохимической реакции на НАДФН-диафоразу (только в цитоплазме, боз конкретной закономерности в локализации). Показаны наличие и взаимоотношения МО-синтаза-содержащих нервных волокон с кровеносными сосудами сердца разного калибра.

4. Иммуноцитохимически показано наличие нейронов и мелких гранулярных клеток, содержащих нейропептид У, в сердечных ганглиях крысы и морской свинки. Выяснены ультраструктурные особенности взаимоотношений нейропептид У - иммуноположительных нервных структур с внутрисердечными

г

нейронами и с сосудистым руслом сердца.

5. Впервые показаны особенности структурной организации ганглиев мочевого пузыря млекопитающих животных (крыса, кошка, собака): наличие многочисленных межнейронных сомасоматических, дендросоматических и дендродендритических простых контактов, присутствие гранул гликогена в телах и отростках нервных клеток, большое число лизосом и липофусциновых гранул в нейронах. Отмечены видовые особенности ганглиозного нервного аппарата мочевого пузыря крысы: наличие только одиночных нейронов по ходу нервных волокон и многочисленных мелких гранулярных клеток.

6. Установлены видовые особенности цитоскелета вегетативных нейронов собак. В нервных клетках шейно-грудных ганглиев встречаются скопления микротрубочек, в телах нейронов ганглиев мочевого пузыря постоянно

обнаруживаются кристалло-подобные включения в виде уплощенных дискообразных структур, состоящие из тонких филаментов. Трехмерная реконструкция этих образований позволяет отнести их к включениям типа телец Хирано.

7. Особенности ультраструктуры вегетативных нейронов симпатических шейно-грудных, внутрисердечных и внутрикишечных ганглиев у крыс линии ЭНК проявляются только в зрелом возрасте. На протяжении эмбрионального развития и постнатально до наступления зрелости нейроны не имеют ультраструктурных особенностей строения. Нервные клетки внутрисердечных и шейно-грудных ганглиев зрелых и старых животных линии БНК харак-теризуются гипертрофией перикариона, преимущественно за счет увеличения объема телец Ниссля, появлением нематосом и ламеллярных мембранных структур в цитоплазме. Кишечные ганглии крыс ЭНИ не отличаются от контрольных. Различия в строении изученных ганглиев свидетельствуют о том, что возрастные особенности строения симпатических и внутрисердечных нейронов связаны с эфферентным субстратом, в частности гипертрофией мышц.

8. Возрастные изменения вегетативных нейронов (симпатические шейно-грудные, внутрисердечные и кишечные ганглии) выражены наиболее ярко в симпатических ганглиях и проявляются в накоплении гранул липофусцина, появлении ламеллярных мембранных телец и ядрышкоподобных включений (нематосом), типичных изменений митохондрий (осмиофильные включения), образовании "клубков" из филаментов в нервных волокнах. С возрастом происходит накопление маленьких синаптическиподобных пузырьков в телах и дендритах нейронов, появляются также их скопления около плазмалеммы клеток в местах без глиального покрова и около постсинаптических активных зон, это может свидетельствовать о перераспределении нейроактивных веществ в нейронах и об усилении их выделения в межклеточное пространство ганглиев.

9. При сравнении вегетативных ганглиев крысы и человека в онтогенезе установлено, что эмбриональное развитие всех вегетативных ганглиев у человека проходит "быстрее", чем у крысы и к концу антенатального периода ганглии зародышей человека являются более зрелыми в сравнении с ганглиями зародышей крысы. Возрастные изменения ганглиев крысы и человека наряду с общими ультраструктурными чертами (накопление липофусцина, образование осмиофильных включений в митохондриях, изменения нервных волокон)

отличаются по степени склероза (преобладает у человека) и ультраструктурным нарушениям (формирование ламеллярных телец и нематосом в нейронах нервных узлов крысы) и более выражены у человека.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Сравнительный анализ строения вегетативных ганглиев млекопитающих животных и человека в процессе индивидуального развития имеет большое значение для познания и расширения представлений о строении и функционировании нервной системы в целом и представляет значительный интерес для сравнительной морфологии и физиологии, а также позволяет сформулировать новые концептуальные направления и перспективные задачи в развитии актуальной проблемы нейробиологии - онто- и филогенез нервной системы.

Результаты исследования могут быть использованы в учебном процессе по курсам цитологии, гистологии и эмбриологиии, анатомии, физиологии и молекулярной биологии, а также могут иметь применение в практическом здравоохранении при лечении некоторых врожденных заболеваний, связанных с недоразвитием и нарушением функции ганглиозного аппарата вегетативной нервной системы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ультраструктура некоторых ганглиев вегетативной нервной системы зародышей человека в начале медиаторного этапа онтогенеза.//Архив анат.-1984. N 4. С. 5-12. (в соавт. с В.М.Швалевым, Р.Е.Киселевой, Н.М.Ивановым, А.А.Сосуновым, И.П.Головиным).

2. Развитие нейро-нейрональных и нейроглиальных взаимоотношений в вегетативной нервной системе в пренатальном онтогенезе млекопитающих животных и человека. //Биомембраны.- Саранск; 1984. С. 107-114. (в соавт. с А.А.Сосуновым, И.П.Головиным).

3. Электронно-микроскопическое исследование синаптогенеза в узлах вегетативной нервной системы зародышей человека.//Тез. докл. 4-ой Республ. конф. АГЭ,- Вильнюс;1985. С. 83-84. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Р.Е.Киселевой).

4. Эмбриогенез вегетативной нервной системы зародышей человека. //Гистогенез и регенерация.- Л.; 1986.- С. 91-92. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Р.Е.Киселевой).

5. Синаптогенез в интраорганных узлах вегетативной нервной системы человека в эмбриогенезе. //Тез. докл. 10-го Всесоюзн. съезда АГЭ.- Полтава; 1986. С. 166. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Р.Е.Киселевой).

6. infrastructure of the heart nervous sistem in embriogenesis. //Metabolism, structure and function of cardiac cell.- Baku; 1986,- P. 47. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Р.Е.Киселевой).

7. Достижения и перспективы электронно-микроскопических исследований межнейронных связей в ганглиях вегетативной нервной системы, а также внутрисердечных нейротканевых связей в пренатальном онтогенезе. //Методологические, теоретические и методические аспекты современной нейроморфологии.- М.; 1987. С. 163-164. (в соавт. с В.Н.Швалевым, А.А.Сосуновым).

8. Ультраструктура эпимиокарда и миокарда у ранних зародышей белых крыс. //Архив анат,- 1987. N 12. С. 32-37. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Беляниной, В.Н.Швалевым).

9. Ультраструктура клеток нервного гребня. //Архив анат.- 1988. N 5. С. 5-11. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Беляниной, В.Н.Швалевым).

10. Синаптогенез в нервных ганглиях сердца зародышей человека. //Цитология,- 1988. N 9. С. 1067-1072. (в соавт. с А.А.Сосуновым, В.Н.Швалевым).

11. Влияние электромагнитных волн на адаптационные процессы в организме. Саранск; 1989. 126 с. ( в соавт. с Р.Е.Киселевой, Л.С.Дорофеевой, Е.А.Сосуновым, Н.В.Апьба, А.А.Сосуновым, В.Н.Пишковым, А.Н.Шабановым).

12. Транзиторные реактивно-дегенеративные изменения клеток в развивающихся ганглиях вегетативной нервной системы. //Ультраструктурные основы патологии органов и тканей,- Тбилиси; 1989. С. 158-159. (в соавт. с Г.В.Беляниной, А.А.Сосуновым, В.Н.Абрамовым).

13. Ультраструктура нервных волокон в экспериментах in vitro. //Воздействие физических и химических факторов на метаболизм и структуру биомембран.- Саранск; 1989. С. 50-53. (в соавт. с В.Н.Абрамовым, В.В.Ревиным, А.А.Сосуновым).

14. Дифференцировка нейрональных и вспомогательных клеток вегетативных ганглиев. //Реактивность и регенерация тканей.-Л.; 1990..64. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Беляниной,В.Н.Абрамовым).

15. Становление медиаторного фенотипа нейрональных клеток нервного гребня. //Труды Респ. конференции морфологов Литвы.-Вильнюс; 1990. С. 43-44. (в соавт. с В.Н.Абрамовым, А.А.Сосуновым).

16. Ультраструктура интраорганных вегетативных ганглиев млекопитающих. //Zmogaus ontogeneza normos ir patologi joss saligomis.- Kaunas; 1990. P. 112-113. (в соавт. с И.Н.Чаиркиным, Г.В.Беляниной, Н.М.Ивановым).

17. Электронногистохимическое исследование развивающихся вегетативных ганглиев. //Тезисы докл. 11-го съезда АГЭ,- Полтава; 1992. С.123.(в соавт. с Г.В.Беляниной, В.Н.Абрамовым).

18. Ультраструктура вегетативных ганглиев в эмбриогенезе. //Морфология раневого процесса. - С.-Петербург; 1992. С.42. (в соавт. с А.А.Сосунопым, В.Н.Абрамовым, Г.В.Беляниной).

19. Maturation and adeing of autonomic neurons. //Clin. Neuropathol.- 1992. V.11. N 4. P. 233. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Беляниной, В.Н.Абрамовым, В.Н.Швалевым).

20. Ageing innervous tissue in vertebrates and invertebrates. //Clin. Neurohathol.- 1993. V.12. N 5. P. 268-269. (в соавт. с Г.В.Беляниной,

A.А.Сосуновым, И.Н.Чаиркиным).

21. Inclusions similar to Hirano bodies in urinari bladder neurons of dogs. //Zentralbl.Pathol.- 1993. V.139. N 6.P. 471-476. (в соавт. с Г.Гуски, В.Н.Швалевым, H. M. Ивановым,И.Н.Чаиркиным).

22.. Heart innervation in aging. //XY Annual Scientific Session of International Society for Heart Research. 1993. P.25. (в соавт. с А.А.Сосуновым, В.Н.Абрамовым, Г.В.Беляниной, И.Н.Чаиркиным).

23. Сравнительный анализ строения периферических ганглиев вегетативной нервной системы. //Морфология,- 1993. N 7-8. С.34. (в соавт. с

B.Н.Абрамовым, И.Н.Чаиркиным, Л.Е.Грошевой).

24. Ультраструктура вегетативных ганглиев в онтогенезе крыс со спонтанной гипертензией. //Материалы 3-го съезда АГЭ РФ,- Тюмень; 1994. С. 107-108. (в соавт. с В.Н.Абрамовым, А.Н.Захаровым).

25. Ультраструктура вегетативных ганглиев млекопитающих животных при старении. //Фундаментальные основы жизнедеятельности организма в норме и патологии.- Нальчик; 1994. С. 125-128. (в соавт. с А.А.Сосуновым, В.Н.Абрамовым, Г.В.Смирновой).

26. Ultrastructure of autonomic ganglia in mammals. //J.Morfology.- 1994. V.220. N 3.- P.332. (в соавт. с И.Н.Чаиркиным, В.Н.Абрамовым, Р.Н.Исаевым, А.Н.Кочетковым).

27. Development and maturation of autonomic ganglia in mammals. //J.Morpholody.- 1994. V.220. N 3. P. 363-364. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Беляниной, В.Н.Абрамовым, А.В.Ховряковым).

28. NO-синтаза-содержащие нервные элементы в сердце. //Российские Морфологические Ведомости,- 1995. N 1. С.26-29. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Г.В.Смирновой).

29. Синтаза окиси азота в нервном аппарате сердца. //Антропогенные воздействия и здоровье человека,- Калуга; 1995. С.95-96. (в соавт. с А.А.Сосуновым, Л.Р.Одывановой, Г.В.Смирновой).

30. Aging in autonomic neurons: what could be used for understanding of brain aging. //J. Neuropath. Experimen. Neurol.- 1995. V.54.- P. 78. (в соавт. с А.А.Сосуновым, И.Н.ЧаиркинымДР.Одывановой.В.Н.Швалевым, Д.Цервос-Наварро).

31. Ганглиозный аппарат сердца человека в эмбриогенезе.//Морфология.-1996. N 2. С. 45. (в соавт. с И.П.Головиным, Н.М.Ивановым, А.А.Сосуновым).

32. Возрастные перестройки межнейронных взаимосвязей вегетативных ганглиев. //Морфология,- 1996. N 2. С.48. (в соавт. с Т.В.Демидовой, В.Н.Абрамовым, Л.Р.Одывановой, Г.В.Смирновой,'А.А.Сосуновым).

33. Interneuronal communication in the autonomic ganglia. //Medicina. Leidzia Lietovos Gydytoju .Sajunga.- 1996. V.32. N 3. P. 100-101. (в соавт. с А.А.Сосуновым,'И.Н-.Учватовой, Л.Р.Одывановой, В.Н.Абрамовым).

34. Возрастные особенности межнейронных взаимосвязей в вегетативных ганглиях. //Антропогенные воздействия и здоровье'человека,- Калуга; 1996.- С. 237-238. (в соавт. с А.А.Сосуновым, В.Н.Абрамовым, И.Н.Учватовой, Л.Р.Одывановой, И.П.Головиным).