Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Трансплантация клеток фетальной печени и хориона при тяжелой печеночной недостаточности
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.27
Автореферат диссертации по медицине на тему Трансплантация клеток фетальной печени и хориона при тяжелой печеночной недостаточности
На правах рукописи
Омарова Хадижат Загирбеговна
□03054В15
Трансплантация клеток фетальной печени и хориона при тяжелой печеночной недостаточности (Экспериментальное исследование)
14.00.27.- «хирургия»,
14.00.41,- «трансплантология и искусственные органы».
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Махачкала - 2007
003054615
Работа выполнена в ГОУ В ПО «Дагестанская государственная медицинская академия ФАЗ СР » и ФГУ «Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов Росздрава».
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Р.Г. Алиев, доктор медицинских наук, профессор H.A. Онищенко.
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор И.М. Ильинский, доктор медицинских наук, профессор А. Г. Магомедов.
Ведущая организация: Российский научный центр хирургии Российской академии медицинских наук.
Защита состоится 22 февраля 2007 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д.208.025.01. в ГОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия ФАЗ СР» (367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, пл. им. В.И. Ленина, 1).
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия ФАЗ СР» (367025, г. Махачкала, Ш.Алиева, 1).
Автореферат разослан 20 января 2007 года.
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор ^J
М.Р.Абдуллаев
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Тяжелая печеночная недостаточность (ТПН) является одним из грозных осложнений многих заболеваний (хронического гепатита, цирроза печени, механической желтухи и др.)- Общая смертность от хронической печеночной недостаточности занимает 5-е место в мире, а острая печеночная недостаточность в 80% случаев заканчивается летально, достигая 100% при тяжелой ее форме (Э.И Гальперин и соавт., 1978, В.И. Шумаков и соавт., 1981, 1994).
Пересадка донорской печени является единственным радикальным методом лечения больных с ТПН. Однако из-за большого дефицита донорских органов, чрезвычайно высокой стоимости операции, сложности и ее травматич-ности, трансплантация печени в России выполняют лишь единицам нуждающихся (В.И. Шумаков, 2005; C.B. Готье и соавт., 2005).
Трансплантация фетальных гепатоцитов, способны активизировать регенерацию поврежденной печени, стимулировать функциональную активность сохранившихся клеток печени (B.C. Репин, Г.Т. Сухих, 1998; В.И. Кулаков, Г.Т. Сухих, 1998; А.Я. Величко и соавт., 2005; С.М. Habibullah et al, 1994).
Для избежания этических проблем использования тканей и органов плода в клинической медицине, мы считали важным изучить возможность восстановительной индукции с помощью внезародышевых тканей, в частности, хориона. Последний для плода выполняет функцию плаценты на ранних сроках гесгации (5-12 нед.) и вьщеляет биологически активные вещества (В.М. Маркушев; 1970; Г.Г. Мингазов, 1988; О.П. Рябчиков и соавт., 1998), способствующие регенерации поврежденной печени и потенцирующие терапевтическую активность биоматериала при его комплексном применении.
Актуальность данной работы обосновывается также необходимостью дальнейшего совершенствования биотехнологии консервирования, введения ФК и поиска доступных и легитимных источников донорского биоматериала, способного улучшить функцию тяжело поврежденной печени и снизить летальность при ТПН.
Цель работы: сравнительное изучение в опытах на экспериментальных животных эффективности раздельного и сочетанного применения криокон-сервированного биоматериала - фетальных клеток печени и клеток хориона, для повышения терапевтической активности указанных клеток при ТПН.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Воспроизвести экспериментальные модели ТПН путем резекции больших объемов печени и затравки живогных ССЦ, пригодные для изучения влияния клеточной терапии на процессы регенерации печени
2. Оценить иммунологическую толерантность организма взрослого реципиента к трансплантации фетального нативного и криоконсервированно-го биоматериала.
3. На травматической и токсической моделях ТПН изучить отдельно динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при изолированной трансплантации КПФ и КХ.
4. Изучить динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при сочетанной трансплантации криоконсервированных КФП и КХ.
Научная новизна. Впервые в эксперименте изучена эффективность трофоб-ластических КХ и КФП при двух разных моделях ТПН. Установлено, что одномоментная резекции 3/5 объема П и курсовая затравка ССЦ (в дозе 0,4/100 г массы 40% масляного раствора) создают адекватные патогенетические модели ТПН, пригодные для изучения эффективности КТ. Двухэтапная резекция (сначала резекция 2/5, спустя 3 недели резекция 3/5 объема печени) повышает резистентность П к травматическому повреждению и поэтому не может быть использована для моделирования ТПН и изучения эффективности КТ. Впервые установлено, что внезародышевые КХ стимулируют восстановительные процессы в поврежденной П так же, как КФП; КХ могут потенцировать процессы восстановительной регенерации при сочетанном применении с КФП. Трансплантированный фетальный нативный и криоконсервированный биоматериал под кожу экспериментальных животных не подвергается иммунному отторжению и сопровождается высоким уровнем митотической активности фетальных клеток.
При стимуляции репаративной регенерации токсически поврежденной печени ФК важная роль принадлежит ядерному аппарату Г. Уменьшение количества Г с внутриядерными липидными включениями происходит на фоне снижения интенсивности жировой дистрофии клеток П и постоянно нарастающего увеличения двуядерных Г.
Праюическая значимость работы. ФК по своей доступности и экономической выгодности могут быть использованы как самостоятельный метод для лечения больных, находящихся на «листе ожидания» для пересадки печени. Однократная доза КФП и КХ (6x104 /100 г массы в 1 мл) способны инициировать процессы восстановительной регенерации в печени при ОПН.
Личное участие автора в получении научных результатов, изложенных в диссертации. Автором освоены методы морфологического: и биохимического контроля эффективности КТ; предложен способ оценки иммунологической реакции организма на введение фетального биоматериала; усовершенствована технология выделения и криоконсервации ФК с помощью аппарата для механического диспергирования фетального материала, на который получен патент. Эксперименты и анализ полученных данных проводились лично автором.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Экспериментальные модели с резекцией больших объемов печени у собак и с токсической затравкой СС1( у крыс являются адекватными воспроизводимыми моделями тяжелой ОПН, пригодными для изучения эффективности КТ.
2. Клетки хориона являются одним из перспективных видов клеточного материала, способного стимулировать регенерационную активность клеток печени.
3. Комбинированное применение клеток хориона и фетальных клеток печени способно более эффективно стимулировать восстановительные процесс-сы в печени, чем при их раздельном применении.
Внедрение результатов исследований в клиническую практику и учебный процесс. Основные положения диссертации и результаты исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре факультетской хирургии №2 ГОУ ВПО «Даггосмедакадемия ФАЗ СР».
Апробация основных положений работы: материалы исследования доложены на Республиканской научно-практической конференции «Новое в хирургии Дагестана» (Махачкала, 2000); XIV съезде хирургов Дагестана (2002); 56-й научно-практической конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2002); Всероссийской конференции, посвяшенной 75-летию Б.С. Брискина (Москва, 2003); на Ш-й Республиканской научно-практической конференции «Новые технологии в хирургии» (Махачкала, 2003); I съезде врачей железнодорожного транспорта России (Москва, 2004); I, II и III Всероссийских конференциях «Стволовые клетки и перспективы их применения в здравоохранении» (Москва, 2004, 2005, 2006 гг.); на X Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гепатологии: новое в диагностике и терапии» (Махачкала, 2005). Апробация работы состоялась на межкафедральной научной конференции в ДГМА (12.05.2006).
Публикации. По теме диссертации опубликовано И работ (1 статья - в рекомендованном ВАК МОИ РФ рецензируемом журнале «Южно-российский медицинский журнал»). Получен 1 патент на изобретение (№2275864 от 10.05.06).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах, состоит из введения, обзора литературы (глава I), материала и методов исследования (глава II), трех глав, посвященных результатам собственных исследований и их обсуждению, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 232 источника, из которых 123 отечественных и 109 иностранных; работа иллюстрирована 18 таблицами и 35 рисунками.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на 122 животных (32 беспородные собаки весом 15- 25 кг, из них 5 беременных самок и 27 самцов; а также 90 белых крыс породы Вистар весом 180-250 г из них 20 беременных самок и 70 самцов), которых содержали в виварии при свободном доступе к воде и пище.
Эксперименты производили в утренние часы (10-11 ч утра) для исключения влияния суточных ритмов митотической активности.
Моделирование ОПН проведено на 21 животном (11 собак и 10 крыс); исследование иммунологической толерантности проведено на 20 крысах; при отработке техники выделения и криоконсервирования ФК использованы 25 животных (5 собак и 20 крыс); изучение влияния ФК на регенерацию печени при ОПН проведено на 56 животных (16 собак и 40 крыс).
Травматическую модель ОПН у собак воспроизводили резекцией 2, 3 и 4 долей печени для изучения эффективности КТ. Для оценки эффективности ФК при терапии ОПН адекватной бьшз признана модель с удалением 3 из 5 долей (3/5 объема печени), что соответствовало 65% от общей массы П. Токсическую модель ОПН у крыс воспроизводили путем курсовой затравки СС14 Через день в течение 14 дней подкожно вводили 40% масляный раствор ССЦ в дозе 0,4 мл/100 г массы тела животного (И.Ф. Колпащикова, 1979). Критериями развития ОПН были биохимические показатели крови (увеличение активности АЛТ, АСТ, ЩФ, мочевины, общего билирубина, МДА, уменьшение общего белка).
В качестве донорского материала использовали КФП и КХ от 5 беременных самок собак со сроком гестации 30-40 дней и от 20 беременных самок крыс со сроком гестации 13-18 дней.
Забор и приготовление донорского материала проводилось в экспериментальной операционной ЦНИЛ ДГМА с соблюдением условий асептики (зав. лабораторией проф. Р.Г. Алиев). Выделение ФК включало несколько последовательных этапов:
1. Дезагрегация ткани печени и хориона на кусочки размерами 0,3-0,5 см в чашке Петри с питательной средой Игла или 199 при температуре +4 °С и трехкратное отмывание кусочков в ССР +4 "С.
2. Гомогенизация клеточного материала ферментно-механическим способом, с использованием гомогенизатора собственной конструкции (патент №2275864 от 10.05.06) с фильтрованием полученной суспензии клеток через нейлоновое сито.
3. Пятикратная отмывка фетальных клеток ССР с антибиотиками при +4°С с последующим центрифугированием при скорости 2000 ц/мин в течение 25 мин (стандартный режим) и удаление надосадочной жидкости.
4. Наслоение клеточной суспензии на раствор Фикола (плотность 1,077 гр/мл) в соотношении 3:2 и центрифугирование. Полученный интерфазный слой, содержащий суммарную фракцию ФК отмывали тройным объемом ССР.
9. Подсчет ядросодержащих клеток осадка клеток с определением их жизнеспособности выполняли в камере Горяева после окраски трипановым синим.
10. Суспензию клеток ресуспендировали в среде Игла или 199, состоящей из 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 15% криопротектора-гли-церина (или 10% диметилсульфоксида - ДМСО) и антибиотиков. Затем их переносили в герметичные криоустойчивые ампулы, с указанием шифра клеток и подвергали криогенному хранению.
Количество биоматериала, используемого для введения во всех сериях опытов, составляло 6 х 10ч/100 г массы тела в 1 мл. При комбинированном ис-поль-зовании взвеси КФП и КХ применяли дозу 6 х Ю4 /100 г массы тела в 0,5 мл каждого типа клеток. Во избежание дополнительной травмы ФК собакам вводили внутримышечно на 3-е сутки после резекции печени. Крысам ФК вводили внутрипортально через 1 сутки после завершения курсовой затравки.
Изменения клинического состояния животных при моделировании ОПН и трансплантации ФК оценивали в динамике через 1,2,3 суток и далее на 7,15 и 21 сутки. Биохимические показатели в сыворотке крови подопытных животных определяли в лаборатории биохимии на анализаторе «Синхрон-5» фирмы Beckman (США) с использованием стандартного набора реактивов этой же фирмы. Исследовали концентрацию общего белка, общего билирубина, мочевины, цитолити-ческих ферментов (ACT, AJTT, ЩФ). Содержание МДА в сыворотке крови у крыс определяли флоуметрическим методом (Гаврилов В.Б. с соавт. 1987).
Для изучения морфологических изменений в сохранившихся долях П после резекции у умерших или забитых животных производили наливку желчных протоков латексом через холедох изолированной П с последующей рентгенографией приготовленного препарата. Для гистологического исследования резецированные кусочки П фиксировали в 10% формалине, затем готовили срезы из фиксированного материала толщиной 6-7 микронов на замораживающем микротоме и окрашивали гематоксилин - эозином. Для электронной микроскопии образцы П фиксировали в глютаровом альдегиде, после их дегидратации осуществляли проводку по стандартной методике. Срезы просматривали в электронном микроскопе JEM 100В (Япония). На ультрато'нких срезах, полученных с каждого блока, фотографировали по 2 случайно выбранных участка цитоплазмы Г. Морфометрический анализ проводили на фотографиях при конечном увеличении х80000. Исследования были проведены в экспериментальной лаборатории НИИТ и ИО Росздрава, г. Москва (зав. лабораторией проф. Онищенко H.A.).
1. Моделирование ОПН у собак и крыс
При создании травматической модели ОПН у собак мы установили, что оптимальной моделью ОПН, при которой остается субкритическая масса П, является удаление 3 из 5 ее долей. К периоду максимально выраженной функциональной недостаточности (на 3-7сутки) в ткани П морфологически сохраняется балочная структура, отмечается пщроиическая дистрофия клеток и инфильтрация ткани П гистиолимфоцитарными клетками, что, следует рассматривать как начало восстановительной регенерации ткани П. При исследовании биохимических показателей - подъем общего билирубина, AJIT, ACT, ЩФ и снижение общего белка отмечали на 3-е сутки, а затем, начиная с 7 суток после резекции, наступала нормализация исследуемых показателей к 21 суткам, причем значения ACT, AJIT не достигали значений таковых у интактных животных.
При моделировании токсического гепатита уже через 1 сутки наблюдались морфологические нарушения ткани П, выражавшиеся в интенсивной жировой дистрофии, очаги локализации которой имеют векторный характер.
Наиболее поврежденными оказались периферические участки печеночных долек. По мере приближения к центральной вене интенсивность жировой дистрофии уменьшалась.
В течение 21 суток наблюдения за динамикой изменения цитологических показателей отмечалось прогрессивное снижение количества двуядерных Г, увеличение полиплоидных Г и Г с внутриядерными липидными включениями вплоть до 14-15 суток. Однако до 21 суток позитивная динамика наметилась у лишь Г с внутриядерными липвдными включениями, дегенерирующими ядрами и признаками жировой дистрофии. При ЭМ морфологические изменения при токсическом гепатите характеризовались вакуолизацией цитоплазмы и гомогенизацией матрикса митохондрий, нарушение'! карнолеммы ядра и маргинацией хроматина, липвдные включения наблюдали не только в цитоплазме, но и в ядре.
Токсическое повреждение П сопровождалось выраженными изменениями показателей функционального состояния: повышением общего билирубина, ACT, AJIT, мочевины, ЩФ, МДА и снижением общего белка. Указанные показатели с 5-7 дня имели тенденцию к нормализации, однако к 21 суткам восстанавливаются лишь такие показатели, как общий билирубин, ЩФ и мочевина, повышенными остаются ACT, АЛТ, несколько сниженным остается общий белок.
2. Изучение иммунологической толерантности взрослого организма при трансплантации фетальных клеток (приживление и пролифератнв-ная активность).
Приступая к изучению эффективности трансплантации ФК нам необходимо было убедиться и в том, что они способны сохранять свою жизнеспособность (как в нативном, так и в криоконсервированном виде) в организме взрослого ре-
ципиента. Важно было доказать, что трансплантированные ФК приживляются в организме и в условиях иммунологической толерантности организма, ингибиру-ют его иммунный ответ при трансплантации. Для этого мы подкожно крысам трансплантировали срезы (3-5 мм) нативной и криоконсервированной ткани фе-тальной печени и хориона и через 11 суток изучали их приживление. Из прижившихся трансплантатов готовили срезы с последующей окраской гемактокси-лин-эозином и подсчитывали количество митозов в срезах, которые подтверждали высокую жизнеспособность трансплантатов.
Наши исследования показали, что из 5 трансплантированных срезов нативной печени и хориона прижились по 4 (80%) образца каждого типа ткани, а из 5 крионсервированных образцов печени и хориона прижилось 3 и 2 (60% и 40% соответственно).
Таблица 1
Мнтотнческин индекс клеток феталыюй печени после трансплантации (%)
Здн 7дн 11 дк
I серия (срезы нативной фет.печени) (п= 10) Зб,7±7,5 * 2б,4± 4,2 * 30,6±6,4*
II серия (срезы криоконсер. фет.печени) (п=10) 34,3± 6,3 * 22,8 ±3.2 * 29,1± 3,6*
III серия контроль (срезы ткани взрослой печени) (п=5) 0,3 ± 0,2 0,2 ±0,1 0,37 ±0,2
Р<0,05 * достоверно по сравнению с контролем. Для сравнения использованы критерии Фридмана и Даннета.
По сравнению с контролем (клетки печени взрослых крыс) митотический индекс КФП был выше, причем высокий уровень митотической активности сохранялся на 3, 7, 11 сутки (табл. 1). Следовательно, при трансплантации на-тивных ФК при ОПН наблюдается длительный биорегуляторный эффект.
3. Коррекция печеночной недостаточности у собак при раздельном и сочетанием применении клеток феталыюй печени и хориона.
Трансплантацию КФП выполняли через 3 суток после резекции 3/5 печени, т.е. на высоте развития ОПН. При трансплантации КФП на 5-7 сутки происходило достоверное снижение ACT, AJIT и ЩФ по сравнению с контролем (опыты со спонтанной регенерацией, табл. 2). В эти же сроки происходила стабилизация уровня белка, билирубина и мочевины. На 14-15 сутки процессы регенерации усиливались, и отдельные показатели при трансплантации КФП достигали значений таковых у интактных животных (мочевина, билирубин, общий белок). ACT и AJIT приближались к значениям у интактных животных (табл. 2). На 21 сутки наблюдения при исследовании показателей функции П констатировали клиническое выздоровление животных. При трансплантации КХ на 3 сутки ОПН показатели регенерации П мало отличались от этих же показателей после трансплантации КФП.
Таблица 2
Динамика изменении важнейших показателей функции печени при трансплантации фетальных клеток на 3-е сутки после ОПН
Покашгели 1 У интакн. животн. 72 часа после резекции (исходи) Контрольная группа Введение КФП Введение КХ Введение КФП и КХ
Сутки наблюдения
5-7 14-15 21 5-7 14-15 21 5-7 14-15 21 5-7 14-15 21
АСТ (мкмоль ч/л) 0,34± 0.09 2,26± 0.6 1.9±0,6 0» 1.7± 0,05« 1,2± 0,03» 0,8± 0,03*» 0,41± 0,02*» 0,3± 0,05*« 1,2± 0,02» 0,49± 0,02*» 0,38± 0,05*4 0,53± 0,02 0,32± 0,06 0,29± 0,08
АЛТ (мкмоль ч/л) 0,42± 0,08 3,8± 0,42 1,3± 0,7« 1,0± 0,09» 0,86± 0,01» 0,64± 0,3*» 0,53± 0,07*« 0,32± 0,01*« 0,5± 0,3* 0,4 3± 0,07* 0,29± 0,01*» 0,46± 0,3*» 0.30± 0,06«* 0,25+0, 06»*
ЩФ (ммкмоль Ч-'Л) 109,8± 3.6 159,8-Ь 19,3 153 ±10,3 130,4 ±21,4 120,1 ±18,1 136,0 ±9,5* 131,3 ±11,2* 101,4 ±6,8 138± 9,5 120,3 ± 1,0 110,2 ±16,3» 129± 9,5* 120,3 ±11,4 105,2± 14,3*
Общий белок (г/л) 85± 12,0 73,4 ± 8,1 79,1 ±6,5 84,0 ±7,7 85,1 ±6,2 82,2 ±7.4 85,9 ±5,3 88,9 ± 8,4 82,9 ±7,2 86± 5,3 89± 8,4 84,7± 7,1 88± 5.3 90,0 ± 8,2
Общий билирубин (мкмоль/'л) 25,3± 2,6 41,1± 3,3 37,7 ±2,9 29.9 ±2,6 27,4 ±2,8» 35,6 ±4,1 26,1 ±3,3 23,9 ±2,7» 35,7 ±4,1 32,1 ±3,3 24.4 ±2.2» 30,7 ±4,3 26.4 ±3,3 22,4± 2,9*
Мочевина | (ммоль/л) 6,3± 0,4 8,8± 0,57 7,6 ±0,48 6,9 ±0,5 6,6 ±0,46 6,8 ±3,9 6,2 ±0,9 5,9± 1,2 5,6± 3,4 5,4 ±0,9 5,0 ± 1,7 6,0 ±3,6 5,6 ± 0,7 5,0 ± 1,7
*-Р<0,05 по сравнению с соответствующим конгролем, Р<0,05 по сравнению с исходными значениями соответствующих показателей. Для достоверности использованы критерии Фридмана и Даннета.
Уже на 5-7 сутки намечалась позитивная динамика изменений содержания мочевины, билирубина, белка, 1ЦФ, ACT, AJ1T. Снижение АЛТ и ACT было менее выраженным, чем при использовании КФП. На 14-15 сутки восстановительные процессы в П нарастали, и это выражалось нормализацией показателей ACT, АЛТ, снижением ЩФ и билирубина. Содержание общего белка и мочевины к этому сроку достигали значений у интактных животных (табл. 2). Данные клинического обследования собак на 21 сутки указывали на полное восстановление состояния животных. При сочетанном применения КФП и КХ нормализация важнейших показателей функции П происходила более высоким темпом, чем при раздельном их применении. Уже на 5-7 сутки ферменты АЛТ, ACT, ЩФ не только достоверно отличались от контрольных значений, но и не отличались от значений у интактных животных. На 14-15 сутки в результате сочетанного применения КФП и КХ значения исследуемых показателей функции П достоверно не отличаются от значений у интактных животных (табл.2). При сочетанном применении КФП и КХ клиническое выздоровление наступало на 1 неделю раньше, т.е на 14-15 сутки, а не на 21 сутки, как это имело место при раздельном использовании ФК. Сочетаняое применение биоматериала оказывает более выраженный биорегуляторный эффект, связанный с более богатым спектром биологически активных веществ, поступающих из указанных клеток в организм.
Таким образом, на модели травматического повреждения П мы показали, что КХ могут в той же степени стимулировать восстановительные процессы, как и при использовании КФП, и при необходимости могут быть использованы для ускорения темпов выздоровления при ОПН. Для большей активизации репара-тивных процессов в П целесообразно использовать комбинацию КФП и КХ.
4. Коррекция токсической печеночной недостаточности у крыс при раздельном и сочетанном применении клеток феталыюй печени и хориона.
При интрапортальном введении КФП уже на 7 сутки начиналось восстановление балочной структуры П, которая усиливалась к 14 суткам. Между тем, гистологическая характеристика Г оставалась измененной, так к 7 суткам снижалось количество Г с признаками жировой дистрофии (682,8±68,1%о), стабилизировались изменения количества двуядерных Г (29,2± 4,4 %о), полиплоидных Г (70,4±4,7%о) и Г с внутриядерными липидными включениями (30,6±2Д%о). На 14-15 сутки происходило достоверное снижение количества Г с признаками жировой дистрофии (322,5±34,3%о), Г с дегенерирующими ядрами (120,6±16,6%о) по сравнению с исходным уровнем (760± 69,4 %0 и 207±23,6%о, соответственно). Начиналось снижение количества двуядерных Г (30,1±4,7%о), которое было достоверным по сравнению со значениями у интактных животных (54,8±7,2%о). На 21 сутки, исследуемые показатели сше в большей степени нормализовались: количество Г с признаками жировой дистрофии составляло 78,4±14,3%о, Г с дегенерирующими
ядрами 28,2±2,8 % и Г с внутриядерными липидными включениями 6,2±1,2 %о, что по отношению к контролю (459,8±32,2 %0,2723± 20,4 %о и 34,6±3,3 %о, соответственно), было статистически достоверным. Количество двуядерных Г нарастало (33,7±3,5 %о против 26,7±2,6 %о в контроле).
Таким образом, при токсическом гепатите трансплантация КФП способствует ускорению процессов регенерации Г по сравнению с контролем на 21 сутки. Под влиянием КФП происходила нормализация показателей функции П более интенсивно, чем в контроле. По функциональным показателям мы констатировали на 21 сутки клиническое выздоровление животных. Клиническое выздоровление животных под воздействием КФП опережало морфологическое восстановление П. При ЭМ гепатоцитов на 7 сутки отмечали позитивную динамику изменений клеточных структур: электронно-плотные митохондрии, сохраненную структуру ядра и кариолеммы, частичное восстановление цитоплазматических структур, единичные мелкие жировые вакуоли. Аналогичная динамика структурных изменений в печени выявляется при внутрипортальном введении КХ в той же дозе. Так же, как и КФП при введении КХ, на 21 сутки достоверно снижалось количество Г с жировой дистрофией (80,8± 11,7%о), Г с дегенерирующими ядрами (29,6±4,3%о), отмечалось снижение возросшего количества Г с внутриядерными липидными включениями (7,0± 2,1 %о) по сравнению с контролем и исходным уровнем. Нарастало количество двуядерных Г (32,3±4,9%о против 26,7±2,6%о в контроле). Динамика изменений исследуемых функциональных показателей П становилась отчетливо выраженной на 5-7 сутки, и к 14-15 суткам исследуемые показатели приближались к норме, к 21 суткам, ориентируясь на функциональные показатели, мы отмечали клиническое выздоровление животных. На 15 сутки наступало восстановление балочной структуры П. На ЭМ в цитоплазме встречались единичные липид-ные включения, большое количество округлых митохондрий, структура ядерного аппарата и кариолеммы нормализовалась, т.е. к 14-15 суткам происходила нормализация структуры П по сравнению с исходным уровнем и контролем.
На модели токсического гепатита сочетанное применение КФП и КХ способствовало достоверно быстрой нормализации морфо-функциональных показателей П. Уже на 5-7 сутки наступало достоверно снижение Г с жировой дистрофией (282,7±69,1 %о) и Г с дегенерирующими ядрами (107,6± 15,4%о) против контроля (768,2±82,3 %о и 230±21,4 %о соответственно). На 14-15 сутки восстановительный процесс активно нарастал и к 21 суткам приближался к значениям у интактных животных. Клиническое выздоровление при применении КФП и КХ наступает на 14-15 сутки. На 14 сутки терапии ФК имеет место восстановление гистологической структуры П, балочной архитектоники, на фоне единично встречающихся клеток с жировой дистрофией. На 21 сутки сочетанной КТ при ЭМ структура П восстанавливалась более полно, в цитоплазме большое количе-
ство эндоплазматического ретикулума, митохондрий, однако в ядре сохраняется маргинация хроматина.
Таким образом, на модели токсического гепатита отмечено, что восстановление клинического состояния животных происходит на фоне нормализации структурных нарушений, вызванного воздействием ССЦ. Снижение количества Г с признаками жировой дистрофии и Г с дегенерирующими ядрами происходило на фоне снижения количества Г с внутриядерными липидными включениями. Этот факт указывает на то, что в стимуляции регенерации токсически поврежденной П под влиянием трансплантации КФП и КХ важная роль принадлежит ядерному аппарату. Об этом же свидетельствует повышение количества двуядерных Г (40,2± 2,3%о против 54,8±7,2%о). Наши исследования подтверждают тот факт, что КХ могут заменять КФП при стимуляции восстановительных процессов. Соче-танное применение КФП и КХ способствует более быстрому клиническому выздоровлению животных, т.к. нормализация функциональных показателей наступала на 14-15 сутки, вместо 21 суток при раздельном применении КФП и КХ.
ВЫВОДЫ:
1. Резекция 3/5 объема печени у собак и курсовая затравка крыс четыреххло-ристым углеродом создают адекватные модели острой печеночной недостаточности, пригодные для изучения эффективности клеточной терапии тяжелого поражения печени.
2. Развитие токсического гепатита, вызванного курсовым введением че-тыреххлористого углерода, сопровождается жировой инфильтрацией паренхимы печени, характеризуется постепенным снижением интенсивности поражения печеночных долек от перипортальной зоны к центру.
3. Срезы нативного и криоконсервированного фетального биоматериала обладают достаточно высоким уровнем приживления, что подтверждает иммунологическую толерантность взрослого реципиента к фетальным клеткам.
4. Однократное введение клеток фетальной печени собакам и крысам в дозе 6х104/100 г массы 1 мл при тяжелой печеночной недостаточности ускоряет темп восстановительной регенерации печени.
5. Клетки хориона, введенные собакам и крысам однократно в количестве 6x10 /100 г массы 1 мл, так же, как и клетки фетальной печени ускоряют процесс восстановительной регенерации печени и могут служить биоматериалом выбора при проведении клеточной терапии.
6. Сочетанное введение клеток фетальной печени и хориона достоверно ускоряет на 7 дней темпы восстановительной регенерации печени по сравнению с раздельным применением этих клеток. Это свидетельствует о потенцировании их биорегуляторной активности, обусловленном более богатым спектром биологически активных веществ, поступающих из указанных клеток.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для создания травматической модели тяжелой острой печеночной недостаточности следует использовать метод одномоментной резекции 3/5 объема печени, а при создании токсической модели проводить курсовую затравку четырех-хлористым углеродом.
2. При необходимости ускорен™ репаративной регенерации печени клетки хориона могут заменять клетки фетальной печени.
3. Для лечения тяжелой острой печеночной недостаточности можно использовать не только интрапорталыюе введение, но и внутримышечное введение фетальных клеток.
4. Для индуцирования восстановительных процессов в печени при тяжелой острой печеночной недостаточности достаточно однократное интрапортальное или внутримышечное введение клеток печени и клеток хориона в количестве 6х104 /100г массы в 1 мл. При сочетанном применении фетальных клеток доза клеток составляет 6х104 /ШОг массы каждого типа в 0,5 мл.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:
1. Оценка эффективности фетальных гепатоцитов на экспериментальной модели острой печеночной недостаточности.// Южно- российский медицинский журнал,-2004,-№5-6.-С. 106-108 (Алиев Р.Г, Курбанисмаилова М.Г).
2. Пятилетние итоги и перспективы развития клеточной хирургии в Дагестане // Сб. науч. трудов к 70- летию ДГМА. Юбилейный выпуск.- Махачкала, 2002.- т. 1,- С. 80-82, (Р.Г. Алиев).
3. Роль эмбриональных и фетальных гепатоцитов при тяжелой печеночной недостаточности. // Кавказский вестник, 2002 - №8.- С. 227-229. (Р.Г.Алиев, З.В. Курбанова).
4. Применение фетальных гепатоцитов при печеночной недостаточности. //Актуальные вопросы хирургии: Сб. научных трудов, посвященный к 75-летию С.Д. Атаева.- Махачкала, 2002.-. С. 63-68 (Р.Г. Алиев, Курбанисмаилова М.Г.„ Алиев Б.О.).
5. Лечение острой фульминантной печеночной недостаточности трансплантацией ашюгенных фетальных гепатоцитов. // Мат. Всероссийски конференции, посвященной 75-летию Б.С. Брискина - М, 2003.- С. 65-67 (Р.Г.Алиев).
6. Комплексное лечение острой фульминантной печеночной недостаточности. //Неотложная хирургия: Мат. научно-практической конференции к 70 летнему юбилею проф. Магомедова А.З., - Махачкала, 2003.- С. 176-178 (Р.Г.Алиев).
7. Трансплантация эмбриональных и фетальных гепатоцитов для коррекции тяжелой печеночной недостаточности. // В сб. науч. трудов 1 съезда врачей железнодорожного транспорта России. -М, 2004,- С. 201-202 (Алиев Р.Г).
8. Лечение острой фульминантной печеночной недостаточности трансплантацией аллогенных фетальных гепатоцитов. // В сб. научн. трудов X Республиканской научно- практической конференции: Актуальные вопросы ге-патологии: новое в диагностике и терапии. - Махачкала, 2005.- С. 3-4 (Алиев Р.Г, Курбанова З.В).
9. Роль аллогенных эмбриональных клеток в терапии экспериментальной печеночной недостаточности. // Там же.- С. 5-8. (Алиев Р.Г).
10. Новые клеточные технологии в медицине. // В сб. науч. трудов «Новые технологии в медицине»,- Махачкала, 2004,- С. 34-36. (Алиев Р.Г).
11. Комбинированная аллоэмбриотрансплантация при острой печеночной недостаточности.// В сб. науч. трудов IV научно-практической конференции «Стволовые клетки и перспективы их применения в здравоохранении». - М, 2006.-С. 49-51 (Р.Г.Алиев).
Патент на изобретение по теме диссертации.
1. Аппарат для механического диспергирования эмбриональных и фетальных тканей. №2275864 от 10.05.06 (Алиев Р.Г.).
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛТ - аланинаминотрансфераза
ACT - аспартатаминотрансфераза
ВАК МОН РФ - Высшая Аттестационная Комиссия
Г - гепатоциты
КТ - клеточная терапия
КХ - клетки хориона
КФП — клетки феталыюй печени
МДА - малоновый диальдешд
ОПН - острая печеночная недостаточность
П - печень
СС14_ четыреххлористый углерод
ССР - сбалансированный солевой раствор
ТПН - тяжелая печеночная недостаточность
ФК - фетальные клетки
ЩФ - щелочная фосфатаза
ЭМ - электронная микроскопия
НИИТ иИО- Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов
Сдано в набор 11.0] .07 г. Подписано в печать 19.01.07 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печ. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 6.
Издательско-полиграфический центр ДГМА Махачкала, ул. Ш.Алиева,!.
Оглавление диссертации Омарова, Хадижат Загирбеговна :: 0 ::
Список сокращений.
Введение.
Глава Т.Современные биотехнологии, используемые для лечения тяжелой печеночной недостаточности (обзор литературы).
1.1.Тяжелая печеночная недостаточность и трансплантация печени.
1.2.Применение изолированных зрелых гепатоцитов.
1.2.1.Экстракорпоральное подключение изолированных клеток печени. 14 1.2.2.Трансплантация изолированных гепатоцитов в организм реципиента.
1.3. Пересадка фетальных гепатоцитов и клеток хориона
Глава II. Материалы и методы исследования
2.1. Общая характеристика работы.
2.2. Техника моделирования острой печеночной недостаточности у собак и крыс.
2.3. Техника заготовки фетального донорского материала.
2.4. Выделение суммарной фракции клеток фетальной печени и клеток хориона.
2.5.Технология криогенного хранения клеток фетальной печени и клеток хориона и их размораживание.
2.6. Методика трансплантации и дозы используемых фетальных клеток у животных с О ПН.
2.7. Методы исследования терапевтической эффективности трансплантации фетальных клеток животным с ОПН
2.7.1. Биохимические методы исследования.
2.7.2. Морфологические методы исследования.
2.8.Методы оценки иммунологической толерантности взрослого организма к фетальным клеткам (приживляемость и пролиферативная активность клеток фетальной печени после трансплантации).
2.9. Методы статистического исследования.
Глава III. Биологическая оценка иммунологической толерантности взрослого организма реципиента при трансплантации фетальных клеток (приживление и пролиферативная активность клеток фетальной печени)
Глава IV. Коррекция нарушенных функций печени при ОПН и трансплантации клеток фетальной печени и /или клеток хориона (результаты собственных исследований).
4.1. Коррекция нарушений структуры и функций печени у собак при моделировании ОПН путем резекции печени.
4.1.1.Оптимизация модели ОПН, пригодной для оценки эффективности клеточной терапии.
4.1.2.Коррекция нарушений структуры и функций печени у собак при раздельном и сочетанном применении КФП и КХ.
4.2. Коррекция нарушений структуры и функции печени у крыс с ОПН. .81 4.2.1 .Создание модели пригодной для оценки эффективности клеточной терапии у крыс.
4.2.2. Коррекция нарушений функции печени при раздельном и сочетанном применении КФП и КХ при токсически поврежденной печени.
Введение диссертации по теме "Хирургия", Омарова, Хадижат Загирбеговна, автореферат
Тяжелая форма печеночной недостаточности (ТГШ) является одним из грозных осложнений многих заболеваний (перитонита, хронического гепатита, цирроза печени, механической желтухи и др.). Так, по данным ВОЗ, общая смертность от хронической печеночной недостаточности занимает 5-е место в мире среди других нозологии, смертность от острой печеночной недостаточности (ОПН) достигается 80%, и даже 100% при фулминантном течении ОПН (Гальперин Э.И. и др., 1978, В.И.Шумаков и др., 1981, 1990).
Эффективность лечения ТПН, несмотря на совершенствование терапевтических и хирургических (гемосорбция, лимфосорбция, плазмаферез) методов ее лечения все еще остается неудовлетворительной.
Не получили широкого применения и методы временного органозамещающего подключения аллогенных гепатоцитов и гетеротоиического подключения печени (Э.И. Гальперин и др., 1978г., Ю.М. Лопухин, М.С.Маргулис и др., 1984г.). Малоэффективными оказались установки плазмообмена и гемоперфузии без подключения к ним биологически активных клеток при ТПН (B.C. Репин, Г.Т.Сухих, 1998).
Пересадка гистосовместимой донорской печени, которая стала клинической реальностью в развитых странах мира является единственным радикальным методом лечения этих больных. Однако из-за большого дефицита донорских органов, чрезвычайно высокой себестоимости самой операции, сложности и травматичности операции, трансплантация печени остается эксклюзивным методом лечения больных с печеночной недостаточностью. Лишь 1/10 часть больных нуждающихся в пересадке печени, подвергается спасительной операции в США, а остальные больные умирают без адекватной хирургической помощи из-за отсутствия донорского органа (B.Moden, O.Shpilerg, 1995).
В связи с этим, поиск более эффективных и экономически доступных методов лечения ТПН остается чрезвычайно актуальным и сегодня.
Альтернативным методом лечения ТПН является трансплантация фетальных гепатоцитов, которые способны активизировать регенерацию поврежденной печени, стимулировать заместительную функцию, сохранившихся клеток печени в организме реципиента, и соответственно улучшать функцию печени.
В 1994 впервые индийские хирурги (С.М Habibullah и др, 1994) успешно имплантировали культуру фетальных аллогенных гепатоцитов пациенту с летальной формой ТПН, а в 1997 году американские хирургии (Strom S.C et.al., 1997), также провели лечение больных с ТПН, трансплантацией фетальных гепатоцитов в селезенку.
Несмотря на позитивные результаты применения клеток фетальной печени, работы, в которых анализируется клинический опыт трансплантации аллогенных фетальных гепатоцитов при ТПН у хирургических больных, малочисленны (N.Matsumura и др., 1987, И.М.Шадин, 1993, В.В.Сачко, 1993, В.И.Шумаков, Н.А.Онищенко, 1994, А.М.Велигоцкий, 1994, В.С.Репин, Г.Т.Сухих, 1998, В.И.Кулаков, Т.Сухих, 1998, А.Я.Величко с соавт., 2005).
Мы полагаем, что это в значительной степени связано с имеющимися этическими проблемами использования абортного фетального материала — главного источника получения клеток фетальной печени.
Поскольку фетальная печень 8-12 недель гестации содержит не более 1% дифференцированных гепатоцитов, а основную массу клеток составляют стволовые и бластные клетки гемопоэтического ряда, то можно полагать что позитивный эффект от трансплантации клеток фетальной печени обусловлен индукционным механизмом, т.е. связан с продукцией этими клетками регуляторных пептидов и ростостимулирующих факторов, которые и способствуют реализации восстановительных процессов в поврежденной печени.
Для избежания этических проблем использования тканей и органов плода в клинической медицине, мы считали важным для целей регуляции восстановительных процессов в поврежденных органах изучить возможность восстановительной индукции репаративных процессов в печени с помощью околоплодных тканей, в частности хориона, который для плода выполняет функцию плаценты на ранних сроках гестации (5-12 нед) и который выделяет чрезвычайно богатый арсенал биологически активных веществ (Маркушев В.М., 1970, Мингазов Г.Г., 1988, Рябчиков О.П. с соавт., 1998), которые могли бы способствовать активной регенерации поврежденной печени.
Однако вопрос использования клеток хориона в медицине остается практически не изученным, т.к. такие исследования единичны. Кроме того, в медицине обычно используются свежевыделенные культуры клеток, в том числе клеток фетальной печени, тогда как в клинической (практической) медицине более удобно было бы использовать криоконсервиро ванный донорский материал. Остается также не изученной возможность потенцирования терапевтической эффективности биоматериала при комплексном (комбинированном) применении клеток фетальной печени и хориона.
Актуальность данной работы обосновывается также необходимостью дальнейшего совершенствования биотехнологических методов лечения ТПН и поиска доступных и легитимных источников донорского биоматериала, способного улучшить функцию поврежденной печени и снизить летальность при этой тяжелой патологии
Цель исследования:
Сравнительное изучение в опытах на экспериментальных животных эффективности раздельного и сочетанного применения криоконсервированного биоматериала — клеток фетальной печени и хориона, с целью повышения терапевтической активности указанных клеток при тяжелой печеночной недостаточности.
8 . , .
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Воспроизвести экспериментальные модели тяжелой печеночной недостаточности путем резекции больших объемов печени и затравки животных четыреххлористым углеродом, пригодные для изучения влияния клеточной терапии на процессы регенерации печени.
2. Оценить иммунологическую толерантность организма взрослого реципиента к трансплантации фетального нативного и криоконсервированного биоматериала.
3. На травматической и токсической моделях тяжелой печеночной недостаточности изучить отдельно динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при изолированной трансплантации клеток фетальной печени и клеток хориона.
4. Изучить динамику восстановительных процессов в поврежденной печени при сочетанной трансплантации криоконсервированных клеток фетальной печени и клеток хориона.
Научная новизна Впервые изучена эффективность трофобластических клеток хориона и клеток фетальной печени при двух разных моделях тяжелой печеночной недостаточности в эксперименте. Установлено, что одномоментная резекции 3/5 объема печени и курсовая затравка ССЦ (в дозе 0,4/ 100г массы 40% масляного раствора) создают адекватные патогенетические модели острой печеночной недостаточности, пригодные для изучения эффективности клеточной терапии. Двухэтапная резекция печени (сначала резекция 2/5 спустя 3 недели резекция 3/5 объема печени) повышает резистентность печени к травматическому повреждению и поэтому не должна использоваться для моделирования острой печеночной недостаточности и изучения эффективности клеточной терапии. Впервые установлено что:-внезародышевые клетки стимулируют восстановительные процессы в поврежденной печени так же, как и клетки фетальной печени. В частности, клетки хориона являются одним из перспективных материалом в трансплантационной регенерации печени;
-процессы восстановительной регенерации могут быть потенцированы при сочетанном применении клеток фетальной печени и хориона; -трансплантация аллогенного фетального нативного и криоконсерви-рованного биоматериала под кожу экспериментальных животных не подвергается иммунному отторжению и этот эффект сопровождается высоким уровнем митотической активности фетальных клеток; -при стимуляции репаративной регенерации токсически поврежденной печени фетальными клетками, важная роль принадлежит ядерному аппарату гепатоцитов. Уменьшение количества гепатоцитов с внутриядерными липидными включениями происходит на фоне снижения интенсивности жировой дистрофии клеток печени и постоянно нарастающего увеличения двуядерных гепатоцитов.
Практическая значимость работы Фетальные клетки по своей доступности и экономической выгодности могут быть использованы как самостоятельный метод для лечения больных, находящихся на «листе ожидания» для пересадки печени. Однократная доза клеток печени и хориона (6x104 / 100 г массы тела в 1 мл) способны инициировать процессы восстановительной регенерации в печени при острой печеночной недостаточности.
Личное участие автора в получении научных результатов, изложенных в диссертации. Автором освоены методы морфологического и биохимического контроля эффективности корригирующей терапии; усовершенствована технология выделения и криоконсервации ФК с помощью аппарата для механического диспергирования фетального материала, на который получен патент. Эксперименты и анализ полученных данных проводились лично автором.
Основные положения, выносимые на защиту: 1. Экспериментальные модели с резекцией больших объемов печени у собак и с токсической затравкой CCL4 у крыс, являются адекватными воспроизводимыми моделями тяжелой острой печеночной недостаточности, пригодными для изучения эффективности клеточной терапии.
2. Клетки хориона являются одним из перспективных видов клеточного материала, способные стимулировать регенерационную активность клеток печени.
3. Комбинированное применение клеток хориона и фетальных клеток печени способно более эффективно стимулировать восстановительные процессы в печени, чем при их раздельном применении.
Внедрение результатов исследований в клиническую практику и учебный процесс Основные положения диссертации и результаты исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре факультетской хирургии №2 ГОУ ВПО «Дагтосмедакадемия ФАЗ СР».
Апробация основных положений работы: Материалы исследования представлены на Республиканской научно-практической конференции «Новое в хирургии Дагестана» (Махачкала, 2000); Первой Республиканской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы детской хирургии» (Махачкала, 2001); научно-практической конференции, посвященной 70-летию ДГМА (Махачкала, 2002); 56-й научно-практической конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2002); XIV съезде хирургов Дагестана (2002); Республиканской научно-практической конференции, посвященной 70-летию АК ДАН и ААН, д.м.н. А.З.Магомедова (Махачкала, 2003); на III-й Республиканской научно-практической конференции «Новые клеточные технологии в хирургии» (Махачкала, 2003); на Всероссийской конференции, посвященной 75-летию Б.Г.Брискина (Москва, 2003); первом съезде врачей железно-дорожного транспорта России (Москва, 2004); I, II, III Всероссийских ежегодных конференциях «Стволовые клетки и перспективы их применения в здравоохранении» (Москва, 2004, 2005, 2006 гг.); на X Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гепатологии: новое в диагностике и терапии» (Махачкала, 2005).
Апробация диссертации состоялась иа межкафедральной научной конференции в Дагосмедакадемии (12.05.2006 г.).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 11 работ (1 статья - в рекомендованном ВАК МОН РФ рецензируемом журнале «Южнороссийский медицинский журнал»). Получен 1 патент на изобретение - «Аппарат для механического диспергирования эмбриональных и фетальных тка-ней»№2275864 от 10.05.06.
Объем и структура диссертации - Диссертация изложена на 146 страницах, состоит из введения, обзора литературы (глава I), материала и методов исследования (глава И), трех глав, посвященных результатам собственных исследований и их обсуждению, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 232 источника, из которых 123 отечественных и 109 иностранных; работа иллюстрирована 18 таблицами и 35 рисунками.
Заключение диссертационного исследования на тему "Трансплантация клеток фетальной печени и хориона при тяжелой печеночной недостаточности"
ВЫВОДЫ:
1. Резекция 3/5 объема печени у собак и курсовая затравка крыс четырех-хлористым углеродом создают адекватные модели острой печеночной недостаточности, пригодные для изучения эффективности клеточной терапии и тяжелого поражения печени т.к. воспроизводят структурные и функциональные признаки печеночной недостаточности сроком до 3-х недель.
2. Развитие токсического гепатита, вызванного курсовым введением че-тыреххлористого углерода сопровождается жировой инфильтрацией паренхимы печени и характеризуется постепенным снижением интенсивности поражения печеночных долек от перипортальной зоны к центру.
3. Срезы нативного и криоконсервированного фетального биоматериала обладают достаточно высоким уровнем приживления, что подтверждает иммунологическую толерантность взрослого реципиента к фетальным клеткам.
4. Однократное введение клеток фетальной печени собакам и крысам в дозе 6х104/100г массы в 1 м при тяжелой печеночной недостаточности ускоряет темп восстановительной регенерации печени.
5. Клетки хориона, введенные собакам и крысам однократно в количестве 6х104/100гмассы в 1 мл, так же как и клетки фетальной печени ускоряют процесс восстановительной регенерации печени и могут служить биоматериалом выбора, при проведении клеточной терапии.
6. Сочетанное введение клеток фетальной печени и хориона достоверно ускоряет на 7 дней темпы восстановительной регенерации печени по сравнению с раздельным применением этих клеток. Это свидетельствует о потенцировании их биорегуляторной активности, обусловленного более богатым спектром биологически активных веществ, поступающих из указанных клеток.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для создания травматической модели тяжелой острой печеночной недостаточности следует использовать метод одномоментной резекции 3/5 объема печени, а создании токсической модели проводить курсовую затравку четыреххлористым углеродом.
2. При необходимости ускорения репаративной регенерации печени клетки хориона могут заменять клетки фетальной печени по своему биорегуляторному эффекту.
3. Для лечения тяжелой острой печеночной недостаточности может использоваться не только интрапортальное введение, но и внутримышечное введение фетальных клеток.
4. Для индуцирования восстановительных процессов в печени при тяжелой острой печеночной недостаточности достаточно однократное интрапортальное или внутримышечное введение клеток печени и клеток хориона в количестве 6x104 /100г массы в 1 мл. При сочетанном применении фетальных клеток доза клеток составляет 6x104 /ЮОг массы каждого типа в 0,5 мл.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 0 года, Омарова, Хадижат Загирбеговна
1. Андрейман Л.А. Пути повышения эффективности сорбционных методов при лечении печеночной недостаточности: Автореф.дис. к.м.н. — М., 1983.-с.18.
2. Арчаков А.И., Карузина И.И. Молекулярные механизмы взаимодействия четыреххлористого углерода с мембранами эндоплазматического ретикулума печени. // Усп. гепатол.- Рига: Б.И., 1973.- с. 39-59.
3. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов.//.-JL: ЛГУ, 1975.-с.77
4. Базиева Ф.Х. Подержание функции пораженной печени методами экстракорпоральной гемоперфузии через взвесь криоконсервированных изолированных гепатоцитов и фрагментов селезенки: Автореф. дис.к.м.н. М.- 1992.- 30 с.
5. Батанов А.Н. Возможность применения фетальных тканей человека при лечении хронического гепатита и цирроза печени//Новые технологии в здравоохранении.-Челябинск. вып 2.- 1999.-с.252-286.
6. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Биохимия мембран. Замораживание и криопротекция.// Харьков: Высшая школа, 1987.- с.80.
7. Белоус A.M., Суббота Н.П., Петренко А.Ю. Сукач А.Н. Способ получения изолированных клеток печени.// А.С. 131426.-5/00.-1987.-Бюл.- с.18.
8. Бельков А.В., Писаревский А.А. Живые изолированные клетки печени их свойства и клиническое применение (обзор).//Анестезиология и ре-ан.-1991 .-с.75-77.
9. Блюгер А.Ф. Тайны и парадоксы печени. М., 1988.
10. Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н. Практическая гепатология Рига., Б.И.,1984.-228 с.
11. Блохин Б.М. Острая церебральная недостаточность при инфекционных токсикозах у детей: Дис. к.м.н.-1985.- 130 с.
12. Берелявичус В.Ю. Перитонеальный диализ взвесью печеночных клеток в лечении гепато-целлюлярной недостаточности: Автореф. Дис.к.м.н. М.-1975.-21 с.
13. Биленко М.В., Серегина Л.А., Комаров H.F., Абакумова О.Ю. Регенера-ционная способность ишемизированной печени и влияние на нее резекции и экстрактов, стимулирующих пролиферацию // Вопр.мед.химии.-1989.-35.-2.-с.93-98.
14. Блохин Б.М. Лечение острой гепатоцеребральной недостаточности при инфекционных токсикозах у детей: Автореф. дис. канд.мед.наук: М.1985.-24 с.
15. Бочаров А.В. Использование культивируемых на микроносителях гепатоцитов для поддержания функции печени при ОПН: Авто-реф.дис.к.б.н.- М.-1990.- с.20-26.
16. Брюховецкий А.С.,Иконников Д.Г., Градобоев В.Н. Применение высоких технологий в клеточной трансплантологии.//В бюлл.эксперим.медицины.-М.-1998.-с.193-194.
17. Бруслик В.Г. Трансплантация изолированных клеток аллогенной печени в лечении острой печеночной недостаточности: Автореф. дис.д-ра мед.наук, М.- 1984.-33 е.
18. Бруслик В.Г, Логинов А.С., Сперанский Н.Г. и др. Методы использования изолированных гепатоцитов (обзор). // Вестник академии наук.-1994.-2.- с.8-14.
19. Бруслик В.Г., Гаспарян С.А. Берелавичус В.Ю. // Экспериментальные основы лечения печеночной недостаточности.-М., 1975.-с. 123-133.
20. Бруслик В.Г., Островерхов Г.Е., Шиманко И.И., и др.// Способ лечения заболеваний печени. А.с. 784873, А61В 17/00., 26.05.78- 07.12.80.
21. Васильев Н.В, Коляда Т.Н., Волянский Ю.Л. О возможных механизмах метода терапевтического использования фетальных клеток и тканей // Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.- М.-1996.- с. 2830.
22. Велигоцкий A.M. Использование криоконсервированных ксеногепато-цитов у хирургических больных с диффузными поражениями печени: Автореф. дис.канд.биол.наук-Харьков,1994.-16 с .
23. Вишневский В.А., Шадин И.Н., Брус лик В.Г. Профилактика и лечение печеночной недостаточности у больных с механической желтухой. // Тр. Первого московского международного конгресса хирургов.- М., 1995. — с 27-28.
24. Волошин П.В., Грищенко В.И., Черненков В.Г., и др. Предварительная оценка результатов метода трансплантации эмбриональных тканей в неврологии.// В сб. бюлл.экспер.мед.,- М.- 1998.- с. 78-79.
25. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Маждуль Л.М. Анализ методов перекис-ного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой//Вопросы мед.химии.-1987.-т. 33. .-1,-с. 118-122.
26. Гальперин Э.И., Семендяева М.И., Неплюдова Е.А. Недостаточность печени. М,- 1978.- с.123-130.
27. Галкина Г.С. Изменение центральной гемодинамики у больных с острой печеночно-почечной недостаточностью в основные периоды ее развития и при проведении активных методов детоксикации: Автореф. дис. канд.мед.наук.- М.- 1982.- 18 с.
28. Герасимова Л.И. Кроветврная функция печени в онтогенезе человека // Гематология и трансфузиология.-1984.-№11.-С.46-50.
29. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М.: Практика, 1999. 459 с.
30. Гаспарян С.А., Малюгин Э.Ф., Бруслик В.Г. и др. Способ дезинтоксикации организма в эксперименте. Описанные изобретения.- 1979.1873889/28-13.
31. Готье С.В., Константинов Б.А с соавт. Опыт трансплантации печени Российского научного центра хирургии. Родственная трансплантация // Вестник трансплантологии и искусственных органов.-2005.-№3.-с.23-24.
32. Гладских Л.В., ШтукареваМ.Ю. Применение гепатоцитов свиней для лечения печеночной недостаточности // Мясная промышленность. -1993-3-с.19-20.
33. Гладышев Ю.В. Коррекция токсического гепатита эмбриональными клетками печени в эксперименте // Актуальные вопросы реконстр. и вос-стан.хирургии. М.- 1999.- с.-ЗЗО-ЗЗЗ.
34. Гройзик JI.A. Трансплантация криоконсервированных изолированных клеток печени при острой печеночной недостаточности: Автореф.дис. . .канд.мед.наук.-Алма-Ата.-1985.- 24 с.
35. Григорьев П.Я., Исаков В.А., Яковенко М.Ю. Печеночная энцефалопатия, этиология, патогенез, клинические критерии, диагностика и принципы лечения. //Терапевтический архив.- 1990.- № 9.- с. 131-139.
36. Грищенко В.И., Лобынцев Г.С. Трансплантация гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека при нарушениях гемопоэза./ЛГезисы докладов Всесоюзн.конф.- М.,-1990.- с.54
37. Грищенко В.И., Суббота Н.П. Перспективы использования криоконсервированных гепатоцитов плодов человека в качестве компонента для клеточной терапии.//Тезисы докл. XI-й Всесоюзн.конф. по трансплантации органов. Львов.-1990.- с.203-204.
38. Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий. Киев: Науково думка, 1994.- 142 с.
39. Гулак П.В., Дубченко A.M., Зайцев В.В. и др. Гепатоцит: функционально-метаболические свойства.// М.-1986.-271 с.
40. Данилов М.А., Тощаков В.Ю., Шестакова М.К. и др. Итоги разработки длительного хранения гепатоцитов.// Вопр.трансплант. искусс. органов. 1988.-с. 124-127.
41. Данилова А.И. Трансплантологические методы лечения сахарного диабета.- Рига.-1998.-с.65-67.
42. Дизна С.Н. Явления физиологического гипобиоза плода и новорожденного//Акушерство и гинекология.-1989,-1.-С.9-14.
43. Ерухимов Е.А, Экстракорпоральная геоперфузия через взвесь живых гепатоцитов при лечении тяжелых форм печеночной недостаточности: Автореф.дис. . канд.мед.наук.- Рига, 1985.- 22 с.
44. Железнова А.Р. Функциональная и морфологическая характеристика хориона и децидуальной ткани при беременности // Ак. и гинек.-1976.-№1.-с.5-10.
45. Заварзин А.А. Очерки эволюционной гистологии крови и соединительной ткани.//М.-Изд.АН СССР.-1953.-с.718.
46. Зайцев В.М., Лифляндский В.Г., Маринкин В.И. Прикладная медицинская статистика.// СПб: Фолиант, 2003. — с.432.
47. Зимина Л.Н. Морфологические изменения в печени и почках при некоторых экзогенных интоксикациях в условиях современной интенсивной терапии: Автореф.дис. . канд.мед.наук.-М., 1972.-21 с.
48. Зимина Л.Н., Уманский B.C. Морфологические тесты в выборе донора и оценки аллогенных изолированных гепатоцитов, применяемых в лечении острой печеночной недостаточности.// Сб.науч.трудов., Моск.НИИ скорой помощи,-1988.-74.-c. 149-154.
49. Кириченко И.П. Сорбционные методы детоксикации в хирургическом лечении печеночной недостаточности: Автореф.дис. . канд.мед.наук.-М.- 1984.- 18с.
50. Колосов Н.Г., Повещенко О.В., Ефремов А.В. и др. Использование фетальных клеток и тканей в лечении поверхностных ран и трофических язв.// В сб. трансплан. фет. тканей и клеток БЭБ и М.- 1998.- с. 128.
51. Корухов Н.Ю. Создание аппарата «вспомогательная печень» и его применение в комплексном интенсивном лечении ОПН: Автореф. дис.д-ра мед.наук.- 1989.- 31с.
52. Комаров Б.Д., Шиманко И.И., Островерхов Г.Е. Первый клинический опыт использования изолированных клеток аллогенной печени в комплексном лечении острой печеночной недостаточности.// Терапевт. Архив.- 1982.- с. 54.
53. Комаров Ф.И., Коровкин Б.Ф., Меныциков В.В. Биохимические исследования в клинике.//Л.: Медицина, 1981 .-407с.
54. Козлова С.И. Формирование фетальных органов и их взаимосвязи в норме и при патологии.// В кн.: Формирование эндокринной системы человека в процессе онтогенеза: Труды ЛПМИ.-1974, Т 66.- с. 4-17.
55. Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Молнар В.В. и др. Иммуноцитотерапия. Новое направление в трансплантации фетальных тканей.// Бюлл.эксп.биол.и мед.1994.-т.4.-с. 412-415.
56. Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Ерин А.Н. Некоторые этические проблемы имплантации ФТЧ. // Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.-М.,-1996.-с.10-13.
57. Лазаренко Ф.М. Закономерности роста и превращения тканей и органов условиях культивирования их в организме ИМ.:- Медгиз.-1959.- 400 с.
58. Лебедева Л.М., Свердел В.П. Тканевая и видовая специфичность «факторов регенерации» из цитозоля гепатоцитов крыс. // Докл.АН УССР Сер.5.1986.-Б,-11.-С.63-64.
59. Лепехова С.А. Клеточный состав печени при ОПН корригирующий трансплантацией культуры клеток печени.// В сб. Фундамент.и при-кладн. проблемы соврем.мед.-2000.- с.65.
60. Логинов А.С., Блок Ю.Е. Хронический гепатит и цирроз печени. М:-Медицина.-1987.-272с.
61. Лопухин Ю.М. Актуальные проблемы пересадки органов.// М.-1974.
62. Малахов О.А., Сухих Г.Т., Омельяненко Н.П. Изучение влияния фетальных тканей на репарацию костей в эксперименте.//В сб.:Трансплантация фетальных тканей и клеток.- М.,- 1998.- с. 96-98.
63. Малюгин Э.Ф., Бруслик В.Г.Острая печеночная недостаточность в клинике и эксперименте.//Рига: Б.И., 1977.-с.94.
64. Маргулис М.С., Ерухимов Е.А. Использование криоконсервированных гепатоцитов для лечения печеночной недостаточности.// Хирургия.-1990.-N» 3.- с. 29-31.
65. Маргулис М.С., Андрейман Л.А. Лечение печеночной недостаточности с помощью гемоперфузии через взвесь живых изолированных гепатоцитов (обзор). Анестезиол. и реан.-1986.- № 3.- с. 29-31.
66. Маргулис М.С., Ерухимов Е.А. Использование изолированных живых гепатоцитов для лечения печеночной недостаточности.// Хирургия.-1987.-6.-с. 19-32.
67. Мгелиашвили Т.И., Абдушелишвили К.О. Оценка стимулирующего влияния печени новорожденного донора на печень реципиента с помощью динамической сцинтиграфии // X Всес.научн.конф. по трансплантации органов: Тез. докл.Киев: Б.И., 1984.- с.208 .
68. Милованов А.П. Стандартизация методов морфологии плаценты человека //АГЭ.-1986.- №8.-с.72-77.
69. Миллер И. Иммунитет человеческого плода и новорожденного// Прага.-1983.-c.228.
70. Мингазов Г.Г. Аллогенная плацентарная ткань в хирургической реабилитации больных с послеоперационными костными дефектами челюстей (клинико-эксперимен.обоснование). // Дис. .д-ра.мед.наук.- Киев.-1987.- с.32-40.
71. Митин А.С., Суббота Н.П., Лебедева Ю.Н. К механизму действия имплантированных гепатоцитов при экспериментальной печеночной недостаточности. //Росс, гастроэнтер. гепат.ю- 1995,- с.3-157.
72. Мусселиус С.Г., Рык А.А., Донова Л.В. и др. Острая гепатонефропатия при отравлении техническими жидкостями и ее лечение // Анестезиология и реаниматология, 1993.-№1.-с.31-34.
73. Островерхов Н.Е., Комаров Б.Ю., Малюгин Э.Ф. и др. Способ детокси-кации лимфы у больных с эндотоксикозом. А.С. 644644 А 61 В 17/00 01 0777 30.05.79.
74. Остапенко В.А. Клинико-экспериментальная оценка эффективности экстракорпоральных гемо- и лимфосорбции при печеночной недостаточности: Автореф. дис. канд.мед.наук.-Минск, 1989.-c.21
75. Петров Р.В., Зарецкая Ю.М. Трансплантационный иммунитет и радиационные химеры.//М. 1965.-247 с.
76. Подымова С.Д. Болезни печени.-М.: Медицина, 1993.-с.544.
77. Под ред. М.И.Прохоровой. Методы биохимических исследований (ли-пидный и энергетический).// Учеб. пособие .Л.-1982.- с.238-239.
78. Пол Д. Культура клеток и ткани. Пер. с англ.// М.- 1963.
79. Рахматуллин С.И. Экспериментальное обоснование возможности лечения цирроза и других заболеваний печени путем пересадки гепатоцитов. эмбриона: Автореф. дис. канд. мед. наук.-2000.-45-58 с.
80. Репин B.C., Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология.// М.- 1998.
81. Репин B.C. Трансплантация клеток: новые реальности в медицине.// В сб.: Трансплантация фетальных тканей и клеток. М.-1998.- с. 14-28.
82. Рималис Б.Ц. Гепаторенальный синдром при острых отравлениях четы-реххлористым углеродом (клиника, хирургическое и консервативное лечение): Автореф. дис. . канд. мед. наук.- М., 1983.- с. 16.
83. Рыжавский Б.Я. Состояние важнейших систем в эмбриогенезе: отдаленные последствия.//Хабаровск.-1999.
84. Рыжавский Б.Я., Ковальский Г.Б. Старение. Адаптация. Обратимость.// Владивосток.- 1992.-302 с.
85. Рыжавский Б.Я., Ивашкина С.И. Влияние инсулина и аденокортико-тропного гормона на кору головного мозга у крыс в раннем постана-тальном периоде // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1996.- т. 121.- с.582-584.
86. Рябчиков О.П., Кузнецова JI.B., Назимова С.В. Гормональный и клеточный состав препаратов фетальных тканей человека.// В сб.: ТФТ и К, М.-1998,.-с.156-158.
87. Савельев С.В., Лебедев В.В., Корочкин Л.И. и др. Гистологическое исследование мозга больного паркинсонизмом в области трансплантации фетальной и ксеногенной нервной ткани.// В сб.: Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.- М. -1998.-е. 69-71.
88. Сергеев В.С.Иммунологические свойства стромальных мезенхи-мальных стволовых клеток, http://celltranspl.ru/joumal/publications.
89. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения.-М. :Иностр. лит-ра.- т. 1987.- 503 с.
90. Суббота Н.П. Функциональное состояние криконсервированных гепатоцитов человека и животных: Автореф. дисс. д-ра.биол.наук., Харь-kob.-1993.-38c.
91. Суббота Н.П., Грищенко В.И. Клетки и ткани плодов человека как источник криоконсервированного трансплантационного материала // «Проблемы криобиологии», 1991-. С.25-29.
92. Субботин М.Я. Материалы к функциональной диагностике гемохори-альных плацент: Авт .дис. д-ра .мед.наук.-М.-1954.-24 с.
93. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее.// В сб.: Трансплантация фетальных клеток и тканей. М.- 1998.-с. 3-13.
94. Сухих Г.Т., Богданова И.М., Малайцев В.В. Иммунологические аспекты трансплантации фетальных клеток.// В сб.: Трансплантация фетальных клеток и тканей. М.- 1998.-с. 178-179.
95. Сухих Г.Т., Ерин А.Н. Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.// М.- 1996.
96. Сухих Г.Т., Молнар Е.М., Малайцев В.В. Трансплантация фетальных клеток человека в гематологии.// Бюлл.эксперим. биол. и мед.-1994.- 4,.-с.375-377.
97. Титов В.Н.Биохимические методы диагностики патологии печени // Терапевтический архив, 1993.-65(2).-с. 85-89.
98. Тощаков В.Ю. Методические аспекты создания низкотемпературного банка изолированных клеток печени: Автореф. дисс. к.м.н.-1990,- 29 с.
99. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков.// М.: Изд-во АН СССР.- 1963. 323 с.
100. Цепляева Г.И. Оценка поглотительно-выделительной функции печени ее кровотока у больных с гепатопатией различного генеза в ранней стадии и при проведении активных методов детоксикации: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М.- 1987.-18 с.
101. Цирятьева С.Б., Фельдблюм П.С. Стимуляция восстановительных процессов в патологически измененной печени. // Клеточно-тканевые механизмы адаптации к действию повреждающих факторов.-Омск: Б.И., 1990.-е. 69-71.
102. Чечельницкая С.М. Внутрипортальное введение взвеси аллогенных гепатоцитов для лечения печеночной недостаточности: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1987.-18 с.
103. Фалин Л.И. Эмбриология человека. //М., 1976.
104. Хлыстова З.С. Закономерности превращения тканей в условиях их трансплантации.//Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1994.- 4.- с.341-348.
105. Хлыстова З.С., Шмелова С.П., Мишина Т.А. и др. Реакция печени мыши на введение фетальных тканей печени и плаценты человека.// В сб.: Трансплантация фетальных клеток и тканей,- М, 1998.- 1765.- с.177.
106. Шиманко И.М., Мусселиус С.Г., Бруслик Г и др. Использование взвеси интактных клеток аллогенной печени в лечении больных с острой печеночной и печеночно-почечной недостаточностью различной этиологии: Метод, реком., М.- 1986.- 15 с.
107. Шиманко И.М., Нигматулина А.В., Мусселиус С.Г. Острая печеночно-почечная недостаточность.- Mr-Медицина.-1991.- 145 с.
108. Шиманко И.И., Лебедева Ю.Н., Васина Н.В. Эффективность использования криоконсервированнных гепатоцитов у больных с острой и хронической почечно-печеночной недостаточностью. //Успехи современной криобиологии,- М.- 1992.- с. 204.
109. Шумаков В.И., Козин С.М., Брюховецкий А.С. и др. Особенности раннего периода и осложнения при эндолюмбальной перфузии клеток эмбриональной нервной ткани.// В сб.: Трансплантация фетальных клеток и тканей. М.-1998.-с.72-76.
110. Шумаков В.И., Скалецкий Н.М. Трансплантация фетальных тканей и клеток.-М.-1998.-с.109-114.
111. Шумаков В.И., Онищенко Н.А., Писаревский А.А. и др. Способ получения и консервации взвеси клеток печени для экстракорпорального лечения печеночной недостаточности: Метод, рек., Mi-1990.-с. 4.
112. Шумаков В.И, Арзуманов B.C., Онищенко Н.А. Лечение печеночной недостаточности перфузией крови через взвеси криоконсервированных гепатоцитов//Хирургия, 1990.-№2.-с.113-116.
113. Шумаков В.И., Онищенко Н.А. (под ред.). Лечение печеночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей (биологические и клинические аспекты).-М. Медицина.-1994.-298 с.
114. Чолаков В. Ученые и открытия. //М.- 1987.
115. Энгельгардт В.А. Клетки на службе медицины.// В кн.: Фундаментальные науки.-М: Медицина, 1981.-е. 147-150.
116. Aouda E. Tsubouchi., Manajama H. et al Human hepatocyte growth factor in plasma of patient with Fulminant Chatic Failure.|| Exp.Cell.Res. 1986.-166.-p.139-150.
117. Asimov I. The Human Body .// New York, Signet.- 1963.
118. Amoroso E.G.Placantation// London.- 1952.-33 lp.
119. Baccarani U, Adani GL, Sainz M, Donini A, Risaliti A, Bresadola F.Human hepatocyte transplantation for acute liver failure: state of the art and analysis of cell sources.//Transplant Proc.- 2005 Jul-Aug.- V.37(6).-p.2702-4.
120. Barnard C.N. A human cardiac transplant, an interim report of a successful operation performed at grootee schuut hospital // S.Afr.med. J, 1967.- 41.-p. 1271-1274. ;
121. Bartholomew A., Sturgeon C., Siatskas M. et al. Mesenchymal stem cellssup press lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp. ematol. 2002.-30.p. 42-48.
122. Baumgartner G.Y., Fasola C., Sutherland D.E.R. Prospects for hepatocyte trasplantion//Hepatology.,-1998-3. P.l 158-1161.
123. Benten D, Kumaran V, Joseph B, Schattenberg J, Popov Y, Schuppan D, Gupta S.Hepatocyte transplantation activates hepatic stellate cells with beneficial modulation of cell engraftment in the rat // Hepatology.- 2005 Nov.-№42(5).-p. 1072-81.
124. Berry M. N., Friend P. S. High yield preparation on isolated rat liver parenchymal cell. J. Cell Biol. 1969,-43.-p.506-520.
125. Beer A.E., Sio J.O. Placenta as immunological barrier || Biol.reprod.-1982.-V.26.-P.15-27.
126. Burnet F. M. Cellular immunology, 1970.
127. Bourne G.L. The human amnion and chorion||. Biol.reprod.-1982.- V.24.-P.19-32.
128. Bramii C.J et al. HLA D,R antigen of trofoblast population in early human preghancy with the use|| Amer.J.Obstet.Gynec.-1984.-V.148-P.19-26.
129. Bruzzone P, Strom SC. Historical aspects of hepatocyte transplantation //Transplant Proc.-2006 May.-№ 38(4).- p. 1179-80.
130. Cardinale A., Laggera R., De Maria M. et al Biology effects liver cells of rat embrios//ActaRadial.-1987-v.-2-p. 221-224.
131. Chang T.M.S. Haemoperfiision exchange transfusion, hormones and immobilized enzymes// In.Artificial Liver Support, Bruner O. And Schaldt F. W.ed., Berlin Springer-Verlag Heidlberg.,-1984.-4.-P.l 16.
132. Chung N.G., Jeong D.C., Park S.J. et al. Cotransplantation of m; stromal cells may prevent lethal graft-versus-host disease in г histocom patibility complex ismatched murine hematopoietic stem transplant tation. Int. J. Hematol. 2004; 80; 4: p.370.
133. Chen S.,I. Rozda, E. Kaharu et.al. Organs.-1995.V. 18, 8 .- p 462.
134. Cobourn C.S., Makowka L., Falki et al. Allogenic intrasaplenic hepatocytes transplantation in the gunn rat using cyclosporine A immunosuppression // Transl.Proc.-1987.-19.-P. 1002.
135. Cuervas- Mos V., Cienfiiegos J. Time-related efficiency of liver cell iso-graphs in fulminant hepatic failure || Transplantation.-1984.-38,N1.- P.23-25.
136. Christ B, Fleig WE.Hepatocyte transplantation // Med Klin (Munich).-2005 Oct №15 .-V100(10).-p.650-5.
137. Di Nicola M., Carlo-Stella C., Magni M. et al. Human bone marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli. Blood 2002; 99: 3838-43.
138. Di Campli C, Gasbarrini G, Gasbarrini A.Review article: a medicine based on cell transplantation ~ is there a future for treating liver diseases?//Aliment Pharmacol Ther.-2003 Sep l.-p.473-80.
139. Demetriou A.A., Whiting J.F. Replacement of liver functioning rats by transplantation of microcarryer- attached hepatocytes || Science.- 1986.- 4769.-P.l 190-1192.
140. Demetriou A.A., Barbour R., Chowhury J.R and Moseini A.D. Transplantation of cryopreserved of microcarryer- attached human hepatocytes into Gunn rats || Gastrouterol.- 1987 .- 92,-5.-P .1728-1732.
141. Demetriou A A., Reiser A., Sancher J. et al. Transplantation of microcarryer-attached hepatocytes into 90% partially hepatetectomised rats // Hepatology. -1988.-8,-5.-P. 1006-1009.
142. Drukker M., Katz G., Urbach A. et al. Characterization of the expression of MHC proteins in human embryonic stem cells. PNAS 2002; 99: 9864-9.
143. Djouad F., Plence P., Bony G. et al. Immunosuppressive effect
144. Of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals.1. Blood 2003 .-102:3837-44.
145. Eiseman В., Van Wyk J., Griffen W.O. Methods for extracorporall hepatic assist.// Surg.Gynec. Obstet. 1966.-123. - P.522-530.
146. Eiseman В., Norton L. and Kralov V.C. Hepatocyte perfusion within a centrifuge//Surg.Gynecol.Obstet.-1976.-142. P.21-28.
147. Eroles G., Maganato P. et al. Functional changes in cirrhotic animals after syngeneic hepatocellular transplantation // Abstr.Europ.Soc.Surg.Res.-1984.-P.l 14-124
148. Frassoni F., Podesta M., Piaggio G. et al. Expanded mesenchymal^" cells (MSC),coinfused with HLA identical hematopoietic stem cell tram reduce acute and chronic graft-versus-host disease: a matched pair a Bone Marrow .// Transplant. 2002; p.29.
149. Fuller B.J., De Loecker W. Changes in the permeability characteristics of isolated hepatocytes during slow freezing // Cryo-Lett. 1985/-6. - P. 361-370.
150. Gerlach JC.Prospects of the use of hepatic cells for extracorporeal liver sup-port.//Acta Gastroenterol Belg.- 2005 Jul-Sep.- №68(3).- p.358-68.
151. Gupta S., Johnstone R., Darby H. et al. Transplanted isolated hepatocytes effect of partial hepatectomy on proliferation of long-term syngeheic implants in rat spleen //Pathology. 1987.-19,-1.-P.28-30.
152. Howard R.B., Pesch L.A. Respiratory activity of intact isolated parenchymal cell from rat liver// J.Biol.Chem.-l968.-243.-P.3105-3109.
153. Habibullah C.M. Hepatocytes transplantation as a substitute for orthopic liver transplantation // XXX. Nat. Conf. Indian Soc.Gastroenterol. 1994.-P.8.
154. Harimoto N, Taketomi A, Kitagawa D, Kuroda Y, Itoh S, Gion T, Tanaka S, ShirabeK, Shimada M, Maehara Y.The newly established human hepatocyte cell line: application for the bioartificial liver//.J Hepatol.- 2005 Apr.-V.42(4).-p.557-64.
155. Hillian К J., Burt A.D., George W.D et al. Intrasplenic hepatocyte transplantation in rats experimental liver injuri: morphological and morfhometric sta-dies//J.Pathol.- 1989.-159/-1.-P.67-73.
156. Kimoto S. the artificial liver: Experimental and clinical application // Trans.Am. Society Intern.Artif.Organs.-1959.-5-P. 102-109.
157. Kashani S.A., Chang T.M. Release of hepatic stimulatory substance from cultures of free and microencapsulated hepatocytes: preliminary report // Bioma-ter. Artif. Cell and Artif. Organs. 1988.-16 (4). - P.741-746.
158. Lavon N, Benvenisty N.Study of hepatocyte differentiation using embryonic stem cells //J Cell Biochem.- 2005 Dec №15.-V 96(6).-p.l 193-202.
159. Lazarus H.M., Кос O.N., Devine S.M. et al. Cotransplantation ofrt) identical sibling culture-expanded mesenchymal stem cells and hematc stem cells in hematologic malignancy patients. Biol. Blood. Marrow.|| Trans 2005; 11; 5: 38998.
160. Le Blanc К., Rasmusson I., Gotherstrom C. et al. Mesenchymal stem cells inhibit the expression of CD25 interleukin-2 receptor) and GD3 8 on phyto aemagglutinin-activated lymphocytes. Scand. J. Immunol. 2004; 60:307-15.
161. Matsumura K.N., Robles G., Huston H. et al. Transplantation of hepatocytes for treatment of surgically induced acute hepatic failure in the Rat // Eur. Surg.Res.-1992.6,-13.-P. 162-169.
162. Maganato P., Cienfuegos J.A. et al. Transplanted cryopreserved hepatocytes: Approach for Future in liver Failure // Trans.Proc.-1986.-V XVTII,-1224.'-P.26.
163. Maganato P., Cienfuegos J.A., santamaria et al. Cryopreservation and transplantation of hepatocytes; an approach
164. Marni A., Gnordlinger В., Wang S.P., Bouma M. Can hepatocytes regenerative when transplanted in the spleen //Abstr.21 th Congr. Europ.Soc. Surg.Res.-1986,-P 104-105.
165. Majumdar A., Ferber I., Lebkowski J. et al. Human embryonic stem cells possess immune-privileged properties. Stem Cells 2004; 22: 448-56.
166. Meisel R, Zibert A., Laryea M. et al. Human bone marrow stromal cells inhibit allogeneic T-cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase-mediated tryptophan degradation. Blood 2004; 103: 4619-21.
167. Mendez-Sanchez N, Chavez-Tapia NC, Uribe M.Hepatocyte transplantation for acute and chronic liver diseases//.Ann Hepatol.- 2005 Jul-Sep.-V 4(3).-p.212-5.
168. Mizuguchi T, Mitaka T, Katsuramaki T, Hirata K.Hepatocyte transplantation for total liver repopulation.//J Hepatobiliary Pancreat Surg.- 2005.-№12(5).-p.378-85.
169. Mito M.,Ebata H., Kusano M., Onishi T et al. Studies on ectopic liver utilizing hepatocyte transplantation into the rat sleen // Trans.Proc.-1979.- 11.-6.-P.585-591.
170. Najimi M, Sokal E.Liver cell transplantation .//Minerva Pediatr.-2005 Oct.- V .57(5).- p.243-57.
171. Nose Y. Artificial liver for a bridge to liver transplantation // Artif. Organs-1989.-3,-5.-P. 415-461.
172. Strom SC, Bruzzone P, Cai H, Ellis E, Lehmann T, Mitamura K, Miki T. Hepatocyte transplantation: clinical experience and potential for future us //Cell Transplant.-2006.-№ 15 Suppl 1.-SI05-110.
173. Sommer B.G., Sutherland D.E.R et al. Hepatocellular transplantation for experimental ischimic acute liver failure in dogs // J.Surg. Res.- 1980.-29,-4.-P.319-325.
174. Wake M.C., Mikos A.G., Sarakinos G. et al // Cell Transplant. 1995.-Vol.4.- P. 275-279.
175. Zhigiang V., Weisong V., Wenbin Z. Human hepatic regenerative stimulator substance: partial purification and biological characterization of hepatic stimulator substance from human fetal.
176. Inoue N. Approach to hepatic assist utilized in Japan// Artif. Organs. -1988.-12.-P.296-299.
177. Kasai S. et al. Evaluation of an artificial liver support device using isolated hepatocytes//Prog. Artif. Organs. 1983. - V. 2. - P. 734-739.
178. Kashani S.A. Chang T.M.S. Release of hepatic stimulatory substance from cultures of free and microencapsulated hepatocytes: preliminary re-port//Biomater. Artif Cell and Artif. Organs. 1988. - 16 (4). - P.-741-746.
179. Karlberg J., Lindahl Kiessling K. Preservation of freshly isolated liver cells in liquid nitrogen at -196° С// Mutation Res. - 1987. - 85. - P. 41 M 16.
180. Kawashita Y, Guha C, Yamanouchi K, Ito Y, Kamohara Y, Kanematsu T.Liver repopulation: a new concept of hepatocyte transplantation.//Surg Today.-2005 .-V35(9).-p.705-10.
181. Keynes W.M. Hemodialysis in the treatment of liver failure// Lancet. -1968.-2.-P. 1236-1238.
182. Kimoto S. The artificial liver: Experimental and clinical application// Trans. Am. Society Intern. Artif. Organs. 1959. - 5. - P. 102-109.
183. Krebs R., Flyrm M. Treatment of hepatic coma with exchange transfusion and peritoneal dialysis// J.A.M.A. 1967. - 199. - P. 430-432.
184. Kudakotseva E.V., Gordienko A.D., Belous A.M. The content of cytochrome b and P-450 in isolated hepatocytes on freezing// Cryo-Lett. -1981. -2,-8.-P. 257-262.
185. Kuge H, Ohashi K, Yokoyama T, Kanehiro H, Hisanaga M, Koyama F, Bumgardner GL,
186. Koenig S, Stoesser C, Krause P, Becker H, Markus PM.Liver repopulation after hepatocellular transplantation: integration and interaction of transplanted hepatocytes in the host.//Cell Transplant.- 2005.-V. 14(1).- p.31-40.
187. Kosai K, Nakajima Y.Genetic modification of hepatocytes towards hepato-cyte transplantation and liver tissue engineering // Cell Transplant.- 2006.-№15(1).- p.1-12
188. Kusano M., Ebata H., Oniski T. et al. Transplantation of cryopreserved isolated hepatocytes into the rat spleen// Transplant. Proc. ~ 1981.-13,-1.-P. 848-854.
189. La Brecque D.R., Pesch L.A. Preparation and partial charaterization of hepatic regenerative stimulator substance from rat liver//J, Physiol. (Lond). -1975.-246.-P. 273-284.
190. La Brecque D.R. The role of hepatotrophic factors in liver regeneration: A brief review including a preliminary report of the in vitro effect of hepatic regenerative stimulator substances (SS)// The J. Biol. Med. 1979. - 52, -1.-P. 49-52.
191. La Brecque D.R. and Bachur N.R. Hepatic stimulator substance: Psychicochemical characteristics and specificity//Am. J. Physiol. Gas-trointest. Liver Physiol. 1982. - 242. - P. 6281-6288.
192. Lee C., Medline A. et al. Transplantation of hepatocytes from normal and preneoplastic livers into spleens of syngeneic host rats//
193. Transplantation. 1983.-36,-2.-P. 218-221.
194. Lepare MJ.; Mattel A.J. Plasmapheresis with plasma exchange in hepatic coma//Ann. Intern. Med. 1970. - 72. - P. 164-174.
195. Liederman M.A. The presence of both growth inhibitory and growth stimulator factors on membranes prepared from mouse liver //
196. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984. - 120. - P. 891-897.
197. Lowenberg В. Vossen J.M., Dooren L.J. Transplantation of fetal liver cells in the treatment of severe combined immunodefficiency diseases //ВЫ, 1977.-34-3.-P. 181-195
198. Maganto P., Cienfuegos J.A. et al. Transplanted cryopreserved hepatocytes: Approach for Future Support in Liver Failure/TTransp. Proc.1986.- VXVIII, 1224.-P. 26.
199. Maganto P. Cienfuegos J.A., Santamaria L. et al. Cryopreservation and transplantation of hepatocytes: an approach for culture and clinical application // Cryobiology. 1988. -25, - 4. - P. 311-322.
200. Makowka L., Rotstein L.E., Falk R.E. et al. Reversal of toxic and anoxic induced hepatic failure by syngeneic, allogeneic and xenogeneic hepatocyte transplantation// Surgery. 1980. - 88, - 2. - P. 244-253.
201. Makowka L., Rotstein L.E., Falk R.E. et al. Allogeneic and xenogeneic hepatocyte transplantation//Transp. Proc. 1981. -13,-1 Pt.2. - P. 855-859.
202. Makowka L., Rotstein L.E., Falk R.E., Falk J.A., Nassal N.A. and Phillips M.I Use of liver cytosol fractions in treatment of acute liverfailure//Syrgery. 1982.-91.-P. 120-122.
203. Manabu Т., Hirokaru M, Michiaki M., Yasuaki N. and Junichi U. Isolation of Human Hepatocytes from Resected Liver Tissue as a Bioreactor for a Hybrid Artificial Liver// Blukwell Scientific Publications. Inc., Boston. 1993.
204. Marni A., Gnordlinger В., Wang S.P., Bouma ME, Can hepatocytes regenerate when transplanted in the spleen// Abstr. 21th Congr. Europ.
205. Soc. Surg.Res.-1986.-P. 104-105.
206. Masanori О., Haruyuki H., Irshad H. Effects of regenerating liver cytosol on drug-induced hepatic failure // Surgery. 1985. - 22 - P, 455-462.
207. Matsubaka S., Abe Y„ Blaustig E. Treatment of cholestatic liver disease plasma sorptionand filtration for improved bilirubin removed// Trans. Am. Soc. Artif. Inter. Organs. 1983. - 29. - P. 693-697.
208. Matsushura M., Nose Y. Artifical liver// Artirlcal Organs. 1986.-- 5. -P. 378-384.
209. Matsumura K.N., Robles G., Huston H. et al. Hybrid bioartifical liver in hepaticfailure, preliminary clinical report. // Transplant. Proc., 1987. -101, vol. Kp. 99-104.
210. Minato M., Houssen D., Demma I., Morin J. et al. Transplantation of hepatocytes for treatment of surgically induced acute hepatic failure in the Rat// Eur. Surg. Res. 1984, - 16,-13. -P. 162- 169.
211. Mito M., Ebata H., Kusano M., Onishi T. et al. Studies on ectopic liver utilizing hepatocyte transplantation into the rat spleen// Trans. Proc. 1979. -11.-6.-P. 585-591.
212. Mito M. Hepatic assist: present and future// Artif. Organs -1986. -10. -P. 214-218.
213. Morales С. M. Gomez F. M. Casanova R. ei al. Transplante. Hepato cellular alogenico en bazo de rats normales// Rev. Esp. Enferm. Apar. Dig.-1986. 70,-6.-P. 487-492.
214. Morimoto Т., Matsushima M, Sawa N., ide K., Sawanishi K. Plasma absorbtion using bilirubin-absorbent materials as a treatment for patients with hepatic failure//Artif. Organs 1989. - 13, -5. - P. 447-452.
215. Moscioni A.D., Roy-Chowdhury 1., Batbout R. et al. Human liver cell transplantation. Prolonged function in athymic and athymic- analbumenic hybrid rats// Gastroenterology. 1989. - 96, -6. - P. 1546-1551.
216. Nakoyama H., Tsubouchi H., Gonda E. et al Stimulation of
217. DNA synthesis in adult rat hepatocytes in primary culture by sera from patients with fulminant hepatic failure//Biomed. Research. 1985.- 6.-P. 231-237.
218. Nawamura A., Meguna J., Kukita K. et al. The development of a new hepatic support system using frozen liver pieces// Artif. Organs. 1987. - 11, -P.- 311.
219. Nowak G, Ericzon BG, Nava S, Jaksch M, Westgren M, Sumitran-Holgersson S.Identification of expandable human hepatic progenitors which differentiate into mature hepatic cells in vivo //.Gut.- 2005 Jul.- V.54(7).-p.972-9.
220. O'Neill P.Z., Baumgartner D., Lewis W.L et al. Cell-free supernatant from hepatocyte cultures improves survival of rats with chemically indued aute liver failure//! Surg. Res. -1982. 32, - 4. - P. 347-559.
221. Neusil F., Rozga J., Moscioni A.D. et al. Use of a novel biartiflcial liver in a patient with acute liver insuffieciency. //Surgery v. 113.-3 1993. - P. 340 -343.
222. Nordlinger B.; Wang S.R., Bouma M.E. et al. Can hepatocyte proliferate when transplanted into the spleen// Eur. Surg. Res. 1987. - 19. -P. 381-387.
223. Norgren G., Ebenal T. Nerve growth activities present in the developing chick embryo//Neurosi. Lett. Suppl. 1983. - 14. - p. 262.
224. Nose Y., Mikami J. and Kasai Y. An experimental artificial liver utilising extracorporal metabolism with sliced granulated canine liver// Trans. Am. Soc. Artif. Int. Organs 1963. 9; - P. 358- 362.
225. Nose Y. Artificial liver for a bridge to liver transplantation // Artif. Organs- 1989.-3,-5.-P. 415-416.
226. Nutt L.H., Attenburrow V.D., Fuller B.J. Investion into repair of freeze-thaw damage in isolated rat hepatocytes// Cryo-Lett. 1980. - 1, - 15. - P. 513-518.
227. Oerlach J., Encke J., Schnoy N. Hepatocyte culture in a bioreactor for ahybrid liver support system/VAbstr. of the XXlth Congress of ESAO. Barcelona Spain, 1994.
228. Olumide F., Eliashiv A.„ Kralios N., Norton L., and Eiseman B. Hepatic support with hepatocyte suspensions in a permeable membrane dializer// Surgery.-1979.-89.-P. 599-609.
229. Ouchi K., Okabe K., Asanuma V., Kojama K., Soto T. Clinical and experimental studies for plasma treatment in hepatic failure // Artif. Organs. -1983.-7 (A). -P.77
230. Ochenashko OV, Volkova NA, Mazur SP, Somov AY, Fuller В J, Petrenko AY. Cryopreserved fetal liver cell transplants support the chronic failing liver in rats with CC14-induced cirrhosis. //Cell Transplant. .-2006,- №15(1).- p.2333.
231. Powis G., Santone K.S., Melder D.S. et al. Cryopresarvation on rat and dog hepatocytes for studies of xenobiotic metabolism and activation // Drug Metabolism Disposition. 1987. - 15, - 1.-P. 143-156.
232. Privitera C.A., Greiff D., Strenga D.R, Oxidative phosphorilation bymitochon drial suspension after freezing and storage at low temperatures//J.Biol.Chem. 1958. - 233. - P.524-527.
233. Reimann P.M., Mason P.D. Plasmapheresis: techniques and-complications//Intensive Care Med. 1990. - 16. - P. 3-10.
234. Rouseu H.R., Lebow L.T., Le Page E., Dernetriou A.A. Plasma cytokine levels in patients with fulminant hepatic failure (FRF) treated with a bioartifi-cial liver (BAL). //Abstr. of the XXlth Congress of ESAO Barcelona, October 20-22, 1994.
235. Rubinsky В., Lee C.Y., Bastacky J. The process of freezing and the mechanism of damage during hepatic cryosurgery// Cryobiology. 1990. - 27, nl, -P.85.97.
236. Russel W.E., Gowan J.A., Bucher N.R.L. Partial characterization of a hepatocyte growth factor from rat platelets// J. С 11 Physiol. 1989. - 119.- P. 183- 192. Schiff L, SchiffE. Diseases of the liver//Philadelphia, - 1986.
237. Seglen P.G. Preparation of isolated rat liver cells// Methods on cells biol.- 1976.-13.-P. 29-83.
238. Sekiguchi S., Kusano M., Onichi T. et al. Cryogenic preservation of isolated hepatocytes in rat// Ciyobiology. 1978. -15. - P. 724-725.
239. Sommer B.G., Sutherland D.E.R. et al. Hepatocellular transplantation for experimental ischimic acute liver failure in dogs// J. Surg. Res. 1980. - 29, -4.-P. 319-325.
240. Stieber A.S., Makowka L.A., Strzl Т.Е. Orthotopic liver transplantation //Pittsburg. 1988.-p. 112.
241. Suemori A., Eto Т., Yarnata K., et al. Partial purification and characterization of hepatocyte stimulation factor from liver of rats treated with galactosamine//Biochem. Biophys. Res. Com. 1988. - 150. - P. 133139.
242. Suckow MA, Zollman A, Cornelissen I, Casad M, Roahrig J, Castellino FJ, Rosen ED.Tissue distribution of fetal liver cells following in uterotransplantation in mice //Exp Biol Med (Maywood). -2005 Dec.-№230(11) .-860-4.
243. Schwartz R.H. A cell culture model forT lymphocyte clonal anergy.Sci 1990;248:1349-56.
244. Toshchakov V. Yu., Onishchenco N.A., Danilov M.A. el al. Functional state of isolated hepatocytes after long term cryopreservation145 ' .rat. //Constituent Congress International Society for Pathophysiology. Moscow.-1991.-p.341.
245. Trotsky J. Implantation of human fetal cells cultures the third gen era-tion of cellular therapy// Data Medica. - 1993.- 1. P.56-62.
246. Trotsky J. Cellular therapy new dimensions in medicine. Introduction and Concepts//.Proceedings, the 1st Congress of Biological Medicine, Tel-Aviv, 1994, Israel, P. 54-57.
247. Tse W., Pendleton J., Beyer W. et al. Suppression of allogeneic T-cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation. Transplantation 2003; 75: 389-97.
248. Vroemen J.P.A.M., Buurman W.A. et al. Hepatocyte transplantation for enzyme deficiency disease in congenic rats//Transplantation. 1986. - 42, - 2. -P. 130-135.
249. Watts J.M., Douglas M.C., Dudley H.A. et al. Heterologous liver perrusion in acute hepatic failure// Brit. Med. J. 1967. - 11. - P. 341-345.
250. Wiederkehr J,C, Kondos G.T., Pollak R. Hepatocyte transplantation for the low-density lipoprotein receptor-deficient state //Jbid 1990. - 50(3). - p. 466471.
251. Woods K., Parbnoo S. An explanation for the reduction in bilirubin livers in congenitally jaundiced Gunn rats after transplantation of isolated hepato-cytes//Europ. Surg. Res. 1981. - 13, - 4. -P. 278-284.
252. Wong H., Chang T.M.S. Bioartificial liver: implanted artificial cells microencapsulated living hepatocytes increases survival of liver failure cells// Int. J.Artif. Organs. 1986. - 9. - P. 335-336.
253. Weber A.Immortalization of hepatic progenitor cells//.Pathol Biol (Paris).-2004 Mar.- №52(2).- p.93-6.
254. Yamashita M., Adachi Y., Kambe A., Nanno Т., Nagose S. and Yammamoto T. Serum binding and biliary excretion of bilirubin
255. After bilirubin loading in analbuminemic rats and heterozygous Gunn rats// J. Lab. Clin. Invest.-1988.-112.-P. 443-449.
256. Zavazava N. Kabelitz D. Alloreacmaty and ap9ptosis in graft rejection and transplantation tolerance. J. Leukoc. Biol. 2000; 68: 167-74.
257. Zieve L. and Nagarama H. Methauethil and derivatives in hepatic coma//Lab. Clin. Med. 1988. - 111. -P. 595-597.
258. Zivny P., Pekarek J., Cech K, Simek J. Course of liver regeneration after partial hepatectomy inrats treated with dialysates of intact organs// Physiol. Bohemosl. 1989. - 38, -5. - P. 457-464.
259. Zhigiang V., Weisong V., Wenbin Z. Human hepatic regenerative stimulator substance: partial purification and bioiogial characterization of hepatic stimulator substance from human fetal.