Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита

Кочетова, Юлия Игоревна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Кочетова, Юлия Игоревна Москва 2005 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита

На ^гцтвах^кописи

КОЧЕТОВА ЮЛИЯ ИГОРЕВНА

Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2005

Работа выполнена в ГУ научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор медицинских наук М.А. Мокроносова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор И.И. Балаболкин доктор медицинских наук, профессор М.П. Костинов

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: ГНЦ - Институт иммунологии Федерального

Защита состоится 26 мая 2005 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ГУ научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: 105064 г. Москва, Малый Казенный пер., 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Автореферат разослан 25 апреля 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного

медико-биологического агентства

совета, кандидат биологических наук

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

Аллергический ринит (АР) - хроническое заболевание слизистой оболочки полости носа, обусловленное сенсибилизацией к ингаляционным аллергенам, при котором воспалительньш процесс верхних дыхательных путей сохраняется в течение многих лет (Адо А.Д., 1976; Ильина Н.И., 1999; Berger W.E., 2003; Corrigan С, 2001; Sibbald В., 1991; Storms W.W., 2003).

Дифференциальная диагностика АР часто бывает затруднительной. Во-первых, АР часто осложняется инфекционными заболеваниями верхних дыхательных путей, а во-вторых, необходимо отличать АР от многих сходных по клинической симптоматике заболеваний, таких как хронический инфекционный, вазомоторный, гипертрофический, эозинофильный неаллергический риниты, ринит беременных, полипоз, муковисцидоз и др. (Гущин И.С., 2002; Knipping S. et al., 2002; Mygind N., 1996; Reiss M. et al., 2002). Кроме того, иногда у пациента может быть сочетанная патология, которую требуется разграничить (Пыцкий В.И., 1999; Cauwenberg P., 2001; Johansson S., 2001; Passali D. et al., 2003). В этой связи разработка критериев диагностики АР весьма актуальна.

Существуют объективные маркеры аллергического воспаления, обнаруживаемые как в сыворотке крови, так и в назальном секрете, уровень которых определяет степень поражения дыхательных путей. К таковым относят эозинофи-лы, эозинофильный катионный протеин, триптазу, лейкотриены и некоторые другие медиаторы воспаления (Гущин И.С., 1998; Лусс Л.В., 1993; HowarthP.H.,2000).

Свободный гемоглобин ранее не рассматривался как маркер АР, но с давних пор служил показателем внутри- и внесосудистого гемолиза, а также мик-роангиопатии, в основе которых лежит иммунологический конфликт. Например, при пароксизмальной гемаглобинурии, аутоиммунной гемолитической анемии, стрептококковой инфекции, хроническом парадонтозе, ожогах, эклампсии беременных, иммуном васкулите Шенлейна - Геноха. В то же время, мик-роангиопатия патогномонична и для АР. Хорошо известно, что больные АР жалуются на частые носовые кровотечения. Но дело не в явных кровотечениях

из носа, а в микроэпистаксисе, постоянной незаметной микрогеморрагии, которая не окрашивает носовые выделения и свидетельствует о патологическом увеличении проницаемости капилляров, через стенку которых вследствие отека и гемостаза под действием медиаторов воспаления и иммунных комплексов просачиваются белки плазмы и эритроциты (Арефьева Н.И., 1990; Park Y.-J., 2001).

Ряд зарубежных исследователей в недавних работах попытались выяснить диагностическую ценность определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете при ринитах различного генеза (Park Y.-J. et al, 2001). Однако концептуально и методически эти попытки оказались недостаточно адекватными, так как были выбраны неоптимальный способ получения назального секрета и неподходящий метод (окисления бензидина) определения свободного гемоглобина, и получены противоречивые результаты.

Иммунометрический метод, разработанный с целью выявления свободного гемоглобина в назальном секрете, ранее не использовали. В этой связи исследование уровня свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР высокоспецифичным методом представляет несомненный интерес.

Цель исследования

Оценить диагностическое значение показателя концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете больных АР.

Задачи исследования

1. Разработать метод иммунометрического определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете в реакции коагтлютинации взвеси фиксированных формальдегидом клеток Staphylococcus aureus, нагруженных через белок А аффинноочищенными кроличьими антителами к гемоглобину человека.

2. Определить содержание свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР при помощи модифицированного иммунометрического метода.

3. Проанализировать зависимость между концентрацией свободного гемоглобина и количеством эритроцитарных фрагментов в назальном секрете больных АР.

4. Определить взаимоотношения между концентрацией свободного гемоглобина в назальном секрете и некоторыми маркерами аллергического и инфекционного воспаления.

5. Исследовать динамику клинических симптомов, содержания эозинофилов и концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР в ходе проведения назального провокационного теста и терапии водным назальным спреем флютиказона пропионата и препаратом Аффинолейкин .

Научная новизна

Впервые обнаружено, что присутствие свободного гемоглобина в назальном секрете может служить диагностическим признаком АР.

Показано, что у больных АР концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете не коррелирует с содержанием фрагментов эритроцитарных мембран.

Практическая значимость

1. На базе лаборатории клинической аллергологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН показана возможность практического осуществления нового метода дифференциальной диагностики АР, который включает получение назального секрета в ответ на механическое раздражение слизистой оболочки полости носа и иммунометрическое определение в нем свободного гемоглобина.

2. Опубликовано пособие для врачей «Назальный провокационный тест в диагностике аллергических заболеваний верхних дыхательных путей». - Москва. -2002 г.-12 с.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Появление свободного гемоглобина в назальном секрете в концентрации 12 мкг/мл и выше является диагностическим симптомом АР и не зависит от содержания целых эритроцитов и их фрагментов, высвободившихся в результате эпистаксиса.

2. Концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете повышается после специфической стимуляции аллергеном при проведении назального прово-

кационного теста и снижается в результате терапии водным назальным спреем флютиказона пропионата и препаратомАффинолейкин®.

Апробация материалов диссертации и публикации

Материалы диссертации доложены на ежегодной конференции молодых ученых ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (2004); на XXI и XXIII конгрессах ЕААС1 (г. Неаполь, Италия 2002, г. Амстердам, Нидерланды 2004); на VI и VIII Всероссийских научных конференциях с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 2002; 2004); на Всероссийской конференции с международным участием «Проблемы реабилитации в оториноларингологии» (г. Самара, 2003); на юбилейной конференции врачей Юга России с международным участием «Поллинозы» (г. Сочи, 2003); на III съезде иммунологов России (г. Екатеринбург, 2004); на V Европейском конгрессе оториноларингологии и хирургии области головы и шеи (Родос, Греция, 2004).

Основные положения диссертации изложены в 14 печатных работах.

Апробация диссертации состоялась 6 апреля 2005 г. на заседании отдела аллергологии и неинфекционной иммунологии ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 123 страницах машинописного текста, иллюстрированы 13 таблицами и 29 рисунками.

Диссертация состоит из введения, двух глав обзора литературы, описания материалов и методов работы, трех глав собственных исследований, заключения и выводов. Список использованной литературы включает 165 источников, из них 37 на русском языке.

Содержание работы

Материалы исследования

На базе лаборатории клинической аллергологии ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН было обследовано 203 пациента в возрасте от 4 до 43 лет: 90 больных интермиттирующим аллергическим ринитом (ИАР) и 113 больных персистирующим аллергическим ринитом (ПАР). Верификацию диагноза и оценку степени тяжести АР проводили согласно общепринятым стандартам диагностики: клинической картины заболевания, анамнеза, данных лабораторного и аллергологического обследования.

В группу сравнения вошли 87 больных хроническим инфекционным ринитом (ХИР) (раздел J31 по Международной классификации болезней X пересмотра) в стадии обострения заболевания. При обследовании пациентов с ХИР признаков аллергии выявлено не было. Группу контроля составили 72 практически здоровых пациента (включая 5 больных с носовыми кровотечениями, вызванными травмами). Длительность заболевания среди пациентов исследуемых групп составляла от 1 года до 29 лет.

Материалами для исследования служили образцы сыворотки крови, образцы назального секрета. В работе использовали водно-солевые экстракты бытовых, эпидермальных и пыльцевых аллергенов производства ЗАО «БИОМЕД» им. И.И. Мечникова (г. Москва); ФГУП «Аллерген» (г. Ставрополь).

Методы исследования

Диагностику и оценку степени тяжести АР проводили на основании анализа клинической картины заболевания, аллергологического анамнеза и данных лабораторного обследования пациентов: постановки скарификационных кожных проб с аэроаллергенами, определения уровней общего IgE и IgE-AT к аэроаллергенам в сыворотке крови, содержания эозинофилов в клиническом анализе периферической крови и в назальном секрете, проведения назального провокационного теста ЩПТ) с причинным аллергеном.

Сбор данных анамнеза проводили в ходе беседы с пациентами, используя специальные анкеты. Для постановки скарификационных кожных проб с аэроаллергенами применяли стандартную методику.

Количественное определение уровней IgE-AT к аэроаллергенам в сыворотках крови проводили с использованием кит-набора «PolyCheck®» (Milenia Biotec GmbH, Германия) согласно инструкции по применению.

Цитологический анализ назального секрета выполняли с помощью световой микроскопии окрашенных мазков содержимого полости носа.

НПТ с экстрактами бытовых, эпидермальных и пыльцевых аллергенов проводили согласно разработанной нами методике. Для учета результатов тестирования использовали разработанную нами шкалу оценки клинических симптомов и цитологический анализ назального секрета.

Уровень свободного гемоглобина в назальном секрете определяли с использованием модификации количественной реакции окисления бензидина (Мс Farlane W.D., Мс Kenzie Hamilton R.C., 1932). Калибровочную кривую строили по разведениям лиофилизированного кристаллического раствора гемоглобина человека. Концентрацию свободного гемоглобина рассчитывали с учетом объема назального секрета.

Определение внеклеточных пероксидаз в назальном секрете проводили при добавлении 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (SIGMA). Реакцию останавливали добавлением серной кислоты, оптическую плотность раствора измеряли на спектрофотометре Stap Fax 2200 при длине волны 450 нм. Для построения калибровочной кривой использовали разведения пероксидазы хрена (Bio-Chemica, активность 550 ЕД/мг), отработанные опытным путем.

Уровни IL-4 и IL-8 в назальном секрете и сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа с использованием стандартных коммерческим наборов реактивов «ИФА - IL-4» и «ИФА - IL-8» (ООО Цитокин», г. Санкт-Петербург, Россия).

Для определения концентрации альбумина в назальном секрете применяли метод, основанный на взаимодействии альбумина с бромокрезоловым зеленым. Для определения общего протеина - модификацию биуретовой реакции. Для постановки методов использовали стандартные коммерческие наборы реактивов (Bio-Analitics, США).

В качестве базисной терапии АР применяли водный назальный спрей флютиказона пропионат в дозировке 200 мкг (по 2 впрыскивания в каждый

носовой ход) один раз в сутки в течение двух недель. Для дополнительного лечения - Аффинолейкин®1, иммунокомпенсирующий препарат, содержащий ан-тигенспецифичные белки Т-клеточного происхождения. Аффинолейкин® вводили, согласно инструкции по применению, подкожно, по 2,0 ЕД 2 раза в неделю, предварительно растворив содержимое ампулы в 1 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Курс лечения составил 5 недель.

Статистическую обработку количественных данных проводили с помощью статистических формул программы Microsoft® Excel 2002 (10.2705.2635) с использованием параметрических и непараметрических статистических величин.

Результаты исследования и их обсуждение

Первой задачей нашего исследования являлось выявление свободного гемоглобина в полости носа у больных АР и ХИР. Для ее выполнения необходимо было отработать методику забора назального секрета, исключающую травмирование воспаленной слизистой оболочки полости носа пациентов, чтобы не спровоцировать повышение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете.

Суть метода заключалась в последовательно проводимых манипуляциях.

Этап 1. Для приготовления турунд было использовано полиакрилонит-рильное волокно «нитрон», из которого скатывали шарики массой около 100 мг. Турунды на сутки погружали в 1% раствор додецилсульфата натрия, отмывали дистиллированной водой и на 2 часа помещали в сухожаровой шкаф для высушивания и стерилизации. После такой обработки волокно приобретало гидрофильность и способностью адсорбировать свободный гемоглобин.

1 - Аффинолейкин® - комплекс низкомолекулярных белков, выделенных из мембран лейкоцитов человека и лиофилюированных с глицином. Аморфная масса белого цвета. Количество препарата, приготовленного из 500 млн лейкоцитов донорской крови, обладает 1 ЕД активности. Препарат изогенен и вирусологически безопасен. Разработан совместно ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Московским НИИ глазных болезней им. Гельмгольца и Пермским НПО «Биомед». Производится Пермским НПО «Биомед» -филиалом ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ (регистрационный №98/366/1; сертификат производства №000740.2000-73024; ВФС 42-3187-98) и отнесён к категории «Жизненно важных лекарственных средств». Серии препарата, предназначенные для терапии аллергического ринита, были совместно проконтролированы ОБТК предприятия - изготовителя и ГИСК им. АЛ. Тарасевича.

Аффинолейкин применяли для терапии аллергического ринита в рамках НИР ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН «Растворимые антигенспецифичные Т-клеточные им-мунопротеины при аллергопатологии», шифр темы 028, гос. регистрация № 01.200.202428).

Этап 2. Турунду помещали на 15 минут в средний носовой ход каждой половины полости носа пациента.

Этап 3. Извлеченную из полости носа пациента турунду переносили в центрифужную пробирку, содержащую 1 мл 2,7% раствора динатриевой соли эти-лендиаминотетрауксусной кислоты (ЭДТА), и прикрепляли с помощью пробки к верхней части внутри пробирки.

Этап 4. Пробирки центрифугировали при 1000g в течение 15 минут для осаждения целых клеточных элементов. Центрифугирование в таком режиме позволяло сохранить эритроциты неразрушенными, препятствуя выходу из них гемоглобина, и отделить супернатант от клеточных элементов. Объем полученного назального секрета измеряли относительно прибавки к раствору динатриевой соли ЭДТА по шкале пробирки.

Измерение уровней общего протеина и альбумина в назальном секрете проводили с целью стандартизации назального секрета. При учете разбавления и степени ринореи разброс концентраций альбумина был небольшим, от 3,3 мг/мл до 6,1 мг/мл. Показатели содержания альбумина при АР, сопровождавшимся выраженной ринореей, практически не отличались от таковых при ХИР и у здоровых лиц (р>0,1). Аналогичные данные были получены и для общего протеина, концентрация которого колебалась от 6,4 мг/мл до 15,1 мг/мл и, в среднем, составила (10,6±0,4) мг/мл у больных АР, (8,7±0,5) мг/мл у пациентов с ХИР и (9,7±0,6) мг/мл у здоровых лиц (р>0,1). Между концентрацией свободного гемоглобина и содержанием альбумина и общего протеина не было выявлено никакой взаимосвязи (n=0,24 и n=0,07, соответственно; р<0,1). В связи с этим в последующем мы отказались от отнесения концентрации свободного гемоглобина к содержанию данных белков в исследуемом материале, как это обычно делают для стандартизации показателей.

Разработку метода определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете проводили в лаборатории мембранных процессов ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН (зав. лабораторией - А.Н. Мац). Для этого мы модифицировали иммунометрический метод, разработанный в Пермском НПО «Биомед» сотрудниками Л.И. Райхера, используя реакцию коагглютинации взвеси фиксированных формальдегидом клеток S. aureus, нагруженных через белок А аффинноочищенными кроличьими антителами к ге-

моглобину человека (Пагнуева Л.Ю., Варфоломеева Е.В., Сперанская В.Н. и т.д., 2003).

Принцип метода заключается в следующем. Вначале путем истощения взвесью фиксированных формальдегидом клеток S. aureus Cowan I, нагруженных ферромагнитными частицами, из надосадочной жидкости удаляли все компоненты, способные связываться со стафилококком (антитела, муцин, транс-феррин, гаптоглобин и т.п.). Затем из надосадочной жидкости готовили серию двукратных разведений и вносили в них взвесь стафилококков, нагруженных антителами к гемоглобину. После инкубации определяли конечное разведение надосадочной жидкости, в котором наблюдалась четкая агглютинация стафилококка, сопоставимая с агглютинацией, вызываемой стандартным раствором гемоглобина человека, используемым в качестве положительного контроля. Учитывая разведение надосадочной жидкости, рассчитывали концентрацию гемоглобина в исходном образце назального секрета. Концентрация свободного гемоглобина в отдельных образцах назального секрета колебалась от <1 мкг/мл до 50 мкг/мл.

Сравнительный анализ концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете исследуемых групп пациентов представлен на рисунке 1 и в таблице 1.

12,8

ПАР(1)

НАР (2) ХИР(Э) Здоровые (4)

Pi-2-Н.Д. (<0,1); pi-3<0,01; рм<0,01; ри<0,01; рм0,01; рм<0,01

Рисунок 1. Концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете обследованных пациентов.

Очевидно, что все средние величины содержания свободного гемоглобина у пациентов с ПАР и ИАР достоверно выше - (12,8±0,6) мкг/мл и (13,2±0,7) мкг/мл, соответственно, чем у больных ХИР - (6,5±0,7) мкг/мл и здоровых лиц (включая 5 больных с носовыми кровотечениями, вызванными травмами) - (3,3±0,6) мкг/мл; р<0,01). У здоровых лиц нормальные значения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете колебались от О до 6 мкг/мл. Поэтому концентрацию свободного гемоглобина от 6 до 12 мкг/мл мы интерпретировали как признак воспаления назальной полости, а все значения выше 12 мкг/мл - как несомненный признак АР.

Таблица 1.

Концентрация свободного гемоглобина (сГб) в назальном секрете обследованных пациентов.

№ Группы пациентов Общее число («0 М±ш (мкг/мл) Достоверность различий Частота сГб ¿12 мкг/мл (%)

1. Персистирукмций аллергический ринит 113 12,8 ±0,6 Р1-3 <0,001 рм <0,001 Ры<0,001 Р24 <0,001 Рм<0,01 58,6

2. Интермитгирующий аллергический ринит 90 13,2 ±0,7 65,6

3. Хронический инфекционный ринит 87 6,5 ±0,7 20,7

4. Отсутствие рииопатологии 72 3,3 ±0,6 4,2

На рисунке 2 и в таблице 1 представлены данные по частоте выявления концентрации свободного гемоглобина выше 12 мкг/мл у всех обследованных пациентов. Как видно, свободный гемоглобин в высоких концентрациях выявляли у больных АР в 58,6% - 65,6% случаев (при ПАР и ИАР, соответственно) против 20,7% пациентов с ХИР и 4,2% здоровых лиц (р<0,01).

Высокое содержание свободного гемоглобина в назальном секрете, которое встречалось почти в 3 раза чаще при АР, чем при ХИР, может служить довольно просто выявляемым признаком аллергического воспаления, а используемый нами способ получения назального секрета и иммунометрического определения свободного гемоглобина - методом дифференциальной диагностики АР.

ПАР(1) ИАР (2) ХИР(З) Здоровые (4)

Р1.2-НД (<0,1); Р1-э<0,01; рм<0,01; р2-з<0,01; рм <0,01; р« <0,01

Рисунок 2. Частота выявления свободного гемоглобина в назальном секрете обследованных пациентов в концентрации выше 12 мкг/мл.

Данные оценки диагностической эффективности иммунометрического определения свободного гемоглобина представлены в таблице 2.

Согласно полученным результатам, были вычислены характеристики нового метода диагностики АР (Двойрин В.В., Клименте А.А., 1985):

- чувствительность метода - способность выявлять аллергический генез ринита среди больных именно с этой патологией:

- специфичность (избирательность) метода - способность идентифицировать риниты инфекционного генеза:

- вероятность правильного диагноза у больных

Это - приемлемые показатели для дифференциально-диагностического теста. Лишь показатель чувствительности составляет 62%. Однако, как нам удалось выяснить при постановке НПТ, увеличение концентрации свободного ге-

моглобина после воздействия специфического аллергена, может служить дополнительным симптомом АР, что существенно повышает чувствительность дифференциальной диагностики.

Таблица 2.

Оценка диагностической эффективности определения свободного гемоглобина в назальном секрете у больных АР и ХИР.

По концентрации сГб* >12 мкг/мл ринит диагностирован как (число случаев) По данным клинического и лабораторного обследования ринит диагностирован как Всего

Аллергический Хронический Инфекционный

Аллергический 125 а Ь 18 143

Хронический Инфекционный 78 с d 69 147

Итого 203 87 290

* свободный гемоглобин

а - число случаев АР, в которых содержание свободного гемоглобина в назальном секрете было >12 мкг/мл;

Ь - число случаев ХИР, в которых содержание свободного гемоглобина в назальном секрете было £12 мкг/мл;

с - число случаев АР, в которых содержание свободного гемоглобина в назальном секрете было < 12 мкг/мл;

d - число случаев ХИР, в которых содержание свободного гемоглобина в назальном секрете было <12 мкг/мл;

Концентрацию эритроцитов и фрагментов эритроцитарных мембран в назальном секрете определяли модифицированным нами иммунометрическим методом в реакции коагглютинации взвеси фиксированных формальдегидом клеток S. aureus, нагруженных через белок А аффинноочищенными кроличьими антителами к мембранам эритроцитов человека (Пагнуева Л.Ю., Варфоломее-ва Е.В., Сперанская В.Н. и т.д., 2003).

В назальном секрете 22 пациентов с АР проводили параллельное определение содержания свободного гемоглобина, эритроцитов и фрагментов эритро-

цитарных мембран. Свободный гемоглобин был выявлен в разной концентрации (от 6,3 мкг/мл до 25 мкг/мл). В 7 из 22 случаев (31,8%) были обнаружены эритроциты и их фрагменты. Количество эритроцитов и их фрагментов составило от 6,3*107 до 12,5*107 клеток в мл.

Как показано на рисунке 3, связь между концентрацией свободного гемоглобина и содержанием эритроцитарных фрагментов в назальном секрете пациентов с АР оказалась незначимой (г= -0,09; коэффициент корреляции рангов Спирмена р=0,24; р<0,1).

□ Количество эритроцитарных мембран (• Ю7 клеток в мл) ■ Свободный гемоглобин (мкг/мл)

Рисунок 3. Содержание свободного гемоглобина и концентрация эритроцитов и фрагментов эритроцитарных мембран в назальном секрете пациентов с АР.

В назальном секрете 56 пациентов с АР мы определяли содержание свободного гемоглобина двумя методами: методом окисления бензидина (совместно с сотрудниками иммунологической лаборатории ГУ «Научно-клинического центра оториноларингологии Минздрава России») и вышеописанным иммуномет-рическим методом. Корреляционной зависимости между результатами двух методов обнаружено не было.

В тех же образцах назального секрета пациентов с АР было также определено содержание внеклеточных пероксидаз по цветной реакции при добавлении -тетраметилбензидина и перекиси водорода. Между концентрацией вне-

клеточных пероксидаз и содержанием свободного гемоглобина, определенным методом окисления бензидина, в назальном секрете больных АР была выявлена корреляционная связь. В то же время, взаимосвязи между концентрацией внеклеточных пероксидаз и содержанием свободного гемоглобина, выявленным иммунометрическим методом, найдено не было.

Определение свободного гемоглобина в назальном секрете в количественной реакции окисления бензидина или его производных часто дает ложнополо-жительные и ложноотрицательные результаты. Концентрация маркера может быть завышена из-за присутствия в назальном секрете миелопероксидаз грану-лоцитарного происхождения и бактериальных пероксидаз при инфекционном рините, или занижена в силу присутствия эндогенного антиоксиданта, мочевой кислоты, или поступающей с пищей аскорбиновой кислоты и, главным образом, из-за того, что молекулы глобина, утратившие ферропротопорфирин, не участвуют в реакции с бензидином. Кроме того, использование бензидино-вой реакции не позволяет определить вид обнаруженного гемоглобина, так как присутствие в назальном секрете свободного гемоглобина и гемоглобина, содержащегося в эритроцитах, никак не дифференцируется.

Проводимые ранее исследования по определению концентраций различных цитокинов показали, что наиболее значимыми при хроническом воспалении слизистой оболочки полости носа оказались IL-5, IL-4, IL-8 и IL-18 (Venge P., 1994; Baraniuk J.N., 1998; Repka-Ramirez S. et al., 2002; Scavuzzo M.C. et al., 2003; Cao Z. et al., 2004; Benson M. et al., 2004). В связи с этим мы определяли концентрацию IL-4 и IL-8 в назальном секрете и сыворотке крови 43 обследованных пациентов и здоровых лиц.

Значения концентраций IL-4 и в сыворотке крови, и в назальном секрете больных АР, ХИР и здоровых лиц существенно не отличались (n= -0,36; n= -0,06; n= -0,21; соответственно; р<0,1).

Содержание IL-8 в сыворотке крови больных ХИР было существенно выше, чем у пациентов АР и здоровых лиц, и составило (358,4± 12,3) пг/мл против (102,4+6,3) пг/мл и (104,7±4,1) пг/мл, соответственно (р<0,01). Достоверные различия были получены также и при определении содержания IL-8 в назальном секрете обследованных пациентов (рисунок 4). У здоровых лиц его концентрация составила (33,6±2,1) пг/мл, у больных АР - (95,9±3,3) пг/мл (р<0,01),

а у пациентов с ХИР - (201,8±5,6) пг/мл (р<0,01). Таким образом, повышение содержания 1Ъ-8, как в сыворотке крови, так и в назальном экссудате, может свидетельствовать об активации гранулоцитов при остром инфекционном воспалении.

Корреляционной зависимости между содержанием свободного гемоглобина и концентрациями ГЪ-4 и 1Ь-8 в назальном секрете обследованных пациентов выявлено не было (г= -0,39; г= -0,07; соответственно; р<0,1).

Рисунок 4. Содержание 1Ъ-8 в назальном секрете пациентов с АР, ХИР и здоровых лиц.

С целью оценки патогномоничности появления свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР мы проводили определение его концентрации при воспроизведении локального острого аллергического воспаления путем проведения HПТ. Повышение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете происходило у половины больных АР.

Заслуживает внимания тот факт, что повышение концентрации свободного гемоглобина происходило чаще в назальном секрете пациентов с ПАР, чем у больных ИАР. Причем различия по частоте увеличения концентрации свободного гемоглобина между больными ПАР и ИАР были достоверны (критерий Пирсона 6,1; р<0,02).

Таким образом, динамика значений концентрации свободного гемоглобина у больных ПАР и ИАР оказалась различной. Если у пациентов с ПАР повыше-

ние концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете при воздействии специфического аллергена наблюдали у 66,7% больных, то у пациентов с ИАР (в отсутствие цветения растений) острая аллергическая реакция в ходе проведения НПТ вызывала повышение содержания свободного гемоглобина лишь в 14,3% случаев. Вероятно, свободный гемоглобин появляется в назальном декрете при провокации причинным аллергеном преимущественно у пациентов с хроническим персистирующим аллергическим воспалением слизистой оболочки полости носа.

Нашей следующей задачей являлось определение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете больных АР для оценки эффективности лечения водным назальным спреем флютиказона пропионата и препаратом Аффинолейкин®.

Больные с диагнозом ПАР были разделены на 3 группы. В первую группу вошли 15 пациентов, получавших водный назальный спрей флютиказона про-пионат, во вторую — 14 человек, получавших Аффинолейкин® и 15 больных, не получавших никакой терапии, составили группу сравнения.

В ходе исследования была выявлена прямая корреляционная зависимость между снижением количества эозинофилов в назальном секрете и уменьшением тяжести течения ПАР (р<0,05).

Эффективность лечения ПАР мы оценивали также по динамике содержания свободного гемоглобина в назальном секрете больных. Концентрация этого показателя снизилась в среднем в 1,7 раза, с (19,2±1,9) мкг/мл до (11,1± 1,5) мкг/мл, у пациентов, получавших назальный спрей флютиказона пропионат (р<0,01). Снижение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете наблюдали у 11 (73,3%) пациентов первой группы исследования, у 4 (26,7%) пациентов уровень свободного гемоглобина не изменился или стал выше. Снижение содержания свободного гемоглобина после курса терапии препаратом Аффинолейкин® было отмечено у 11 пациентов (78,6%), тогда как у 3 больных (21,4%), этот показатель остался прежним. Средняя концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР составила (19,6± 1,7) мкг/мл до лечения препаратом Аффинолейкин® и (10,3±1,4) мкг/мл - после терапии (р<0,01). В группе сравнения содержание свободного гемоглобина в назальном секрете оставалось неизменным (р<0,01).

Однако зависимость между снижением концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете и уменьшением тяжести течения ПАР была слабой (г=0,3). Сравнительный анализ динамики концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете больных ПАР при двух видах терапии представлен на рисунке 5.

ю о

0 _

я & л 2

X —

о в

1 - пациенты, получавшие назальный спрей флютиказона пропионат;

2 - пациенты, получавшие Аффинолейкин , 3 - пациенты, не получавшие лечение.

Рисунок 5. Динамика концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете у пациентов, получавших курс лечения назальным спреем флютиказона пропионата и препаратомАффинолейкин®.

Фармакологическое действие двух применяемых препаратов принципиально различно. Известно, что топические кортикостероиды обладают универсальным противовоспалительным иммуносупрессивным эффектом при хроническом аллергическом воспалении, тогда как Аффинолейкин®, наоборот, восстановлением изменений клеточного иммунитета без иммуносупрессии. Вероятно, наблюдаемое снижение концентрации свободного гемоглобина в назаль-

■Лш

а я I

! II

ном секрете больных ПАР - это конечное проявление действия двух различных иммунных механизмов, расшифровать которые удастся в будущих исследованиях.

Таким образом, нами выявлен феномен высвобождения свободного гемоглобина в назальном секрете больных АР. Разработанный метод определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете может быть рекомендован в целях дифференциальной диагностики и прогноза АР.

Выводы

1. Разработанный иммунометрический метод позволяет выявить в назальном секрете больных ринитами наличие свободного гемоглобина без примеси эритроцитов в концентрации от <1 до 50 мкг/мл.

2. Содержание свободного гемоглобина, выявленного разработанным методом, не коррелировало с концентрацией внеклеточных пероксидаз в назальном секрете (п=0,23; р<0,1), в отличие от метода окисления бензидина.

3. Концентрация свободного гемоглобина, равная или превышающая 12 мкг/мл, встречается в назальном секрете больных ПАР и ИАР в 3 раза чаще, чем при ХИР (р<0,01).

4. Повышенная концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете при АР не зависит от присутствия целых эритроцитов и их фрагментов, не коррелирует с содержанием эозинофилов, 1Ь-4, 1Ь-8, альбумина и общего белка, однако связана с тяжестью клинического течения АР.

5. Увеличение содержания свободного гемоглобина в назальном секрете при проведении НПТ с причинным аллергеном происходит в 4 раза чаще у больных ПАР, чем у пациентов с ИАР (66,7% и 14,3%, соответственно).

6. Снижение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете отражает лечебный эффект применения водного назального спрея флютиказона про-пионата и препарата Аффинолейкин® у 73,3% и 78,6% больных АР, соответственно.

7. Разработанный метод определения свободного гемоглобина в назальном секрете расширяет возможности дифференциальной диагностики АР и оценки эффективности его лечения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кочетова Ю.И., Мокроносова М.А., Ляпорова Т.В. Изменения в цитологическом анализе носового секрета при проведении назального провокационного теста. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - №11. - С. 12-14.

2. Кочетова Ю.И., Мокроносова М.А. Методический подход к стандартизации оценки терапевтического эффекта от лекарственных препаратов при лечении больных аллергическим круглогодичным ринитом. // Сборник трудов VI Всероссийской научной конференции «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии». - Санкт-Петербург, 2002. - С. 176-177.

3. Kochetova Ju., Mokronosova M. Dynamics of cytological parameters in the course of nasal provocation test. // EAACI. XXI Congress. Syllabus. -Naples, Italy, 2002. -P. 242.

4. Тарасова Г.Д., Мокроносова М.А., Кочетова Ю.И., Фошина Е.П., Сергеев А.В. Назальный провокационный тест в диагностике аллергических заболеваний верхних дыхательных путей. Пособие для врачей. // М., 2002. - 12 с.

5. Кочетова Ю.И., Тарасова Г.Д., Мокроносова М.А. Система оценки тяжести течения аллергического ринита. // Российская оториноларингология. - 2003. -№3(6).-С. 178-180.

6. Мокроносова М.А., Сергеев А.В., Кочетова Ю.И. Определение IgE-антител к различным аллергенам в крови детей от родителей, болеющих поллинозом. // Медицинская иммунология. - 2003. - Том 5. - №1-2. - С. 113-116.

7. Мокроносова М.А., Тарасова Г.Д., Кочетова Ю.И., Давудов Х.Ш., Смольникова Е.В., Зайцев В.М. Дифференциальная диагностика аллергического и инфекционного ринитов: уровень внеклеточных пероксидаз в назальном секрете. // Российская оториноларингология. - 2003. - №3 (10). - С. 68-71.

8. Mokronosova M., Sergeyev A., Kochetova Ju. Influence ofpollen grains' exposition upon eosinophirs count in nasal secret in patients with hay fever. // Успехи современного естествознания. - 2003. - №2. -С. 73.

9. Кочетова Ю.И., Анташев А.В., Смольникова Е.В., Мокроносова М.А. Определение внеклеточных пероксидаз в назальном секрете больных аллергическим и инфекционным ринитами. // Медицинская иммунология. - 2004. - Том 6. -№1-2.-С. 127-130.

10.Мокроносова М.А., Кочетова Ю.И., Мац А.Н. Уровень свободного гемоглобина в назальном секрете в диагностике аллергического ринита. // Аллергология. -2004.-№4.-С. 24-27.

11.Kochetova Ju., Antashev A., Mokronosova M. Extracellular peroxidases in nasal secret in patients with allergic and infectious rhinitis. // EAACI. XXIII Congress. Syllabus. - Amsterdam, Niderlands, 2004. - P. 74.

12.Mokronosova M., Tarasova G., Kochetova Ju. Free hemoglobin in nasal secret in patients with allergic and infectious rhinitis. // 5-th European Congress of Otorhi-nolaryngology, Head and Neck Surgery. Syllabus. - Rodos, Greece, 2004. - P . 103.

13.Кочетова Ю.И., Мокроносова М.А. Уровень свободного гемоглобина в назальном секрете как диагностический критерий аллергического ринита. // Сборник трудов VI Всероссийской научной конференции «Молекулярные основы имму-норегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии». - Санкт-Петербург, 2004. -С. 269-270.

14.Кочетова Ю.И., Мац А.Н., Мокроносова М.А. Определение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете у больных аллергическим и инфекционным ринитами. // Российский аллергологический журнал. - 2004. - №3. -С. 26-29.

Принято к исполнению 21/04/2005 Исполнено 22/04/2005

Заказ № 778 Тираж 100 экз

0 0 0 «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 www autoreferat ru

г "

Г fr5 \

"£v £ » ■ fi ? Í

19 m 2005

Оглавление диссертации Кочетова, Юлия Игоревна :: 2005 :: Москва

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Аллергический ринит: классификация, патогенез, клиническое течение, дифференциальная диагностика

2.1.1. Классификация и клиническое течение аллергического ринита

2.1.2. Эпидемиология аллергического ринита

2.1.3. Патогенез аллергического ринита

2.1.4. Проблемы дифференциальной диагностики аллергического ринита

2.2. Диагностические маркеры в назальном секрете при аллергическом рините

2.2.1. Назальный секрет и способы его забора

2.2.2. Цитологический анализ назального секрета

2.2.3. Цитокины в назальном секрете

2.2.4. Маркеры аллергического воспаления в назальном секрете

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Материалы исследования

3.1.1. Характеристика обследованных пациентов

3.1.2. Биологические материалы

3.2. Методы исследования

3.2.1. Диагностика аллергического ринита с помощью анкеты «The Score for Allergic Rhinitis»

3.2.2. Оценка тяжести аллергического ринита

3.2.3. Скарификационные кожные пробы

3.2.4. Определение IgE-антител к аэроаллергенам в сыворотке крови

3.2.5. Цитологический анализ назального секрета

3.2.6. Назальный провокационный тест

3.2.7. Определение концентраций альбумина и общего протеина в назальном секрете

3.2.8. Реакция окисления бензидина для определения свободного гемоглобина в назальном секрете

3.2.9. Определение внеклеточных пероксидаз в назальном секрете

3.2.10. Определение содержания IL-4 и ILв назальном секрете и сыворотке крови

3.2.11. Терапия АР назальным спреем флутиказона пропионата

3.2.12. Терапия АР препаратом Аффинолейкин®

3.2.13. Статистические методы исследования

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Клинико-иммунологическая характеристика обследованных пациентов

4.1.1. Распределение больных по группам

4.1.2. Динамика содержания эозинофилов в назальном секрете больных аллергическим ринитом до и после назального провокационного теста

4.2. Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического воспаления

4.2.1. Разработка и стандартизация нового получения назального секрета

4.2.2. Определение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете иммунометрическим методом

4.2.3. Свободный гемоглобин в назальном секрете больных различными формами ринитов

4.2.4. Выявление эритроцитов и фрагментов эритроцитарных мембран в назальном секрете

4.2.5. Определение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете методом окисления бензидина

4.2.6. Содержание свободного гемоглобина, IL-4 и ILв назальном секрете больных аллергическим ринитом

4.2.7. Содержание свободного гемоглобина в назальном секрете больных аллергическим ринитом как маркер микроэпистаксиса при проведении назального провокационного теста

4.3. Концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете как показатель эффективности терапии больных аллергическим ринитом

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

6. ВЫВОДЫ

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Кочетова, Юлия Игоревна, автореферат

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ Аллергический ринит (АР) — хроническое заболевание слизистой оболочки полости носа, обусловленное сенсибилизацией к ингаляционным аллергенам, при* котором воспалительный процесс верхних дыхательных путей сохраняется в течение многих лет (2, 66, 149).

Заболеваемость АР в последние десятилетия возрастает, особенно в развитых странах. Исследования показывают, что в начале ХХ-го столетия распространенность АР в Европе составляла 0,82%, к 60-м годам -уже 4,8%, а к 90-м годам - от 9,6% до 14,2%. В настоящее время этот показатель колеблется в разных странах от 1 до 26,3% (17, 127).

Дифференциальная диагностика АР часто бывает затруднительной. Это связано с тем, что, во-первых, АР часто осложняется инфекционными заболеваниями верхних дыхательных путей. Во-вторых, необходимо отличать АР от многих сходных по клинической симптоматике заболеваний, таких как хронический инфекционный, вазомоторный, гипертрофический, эозинофильный неаллергический, медикаментозный, идиопа-тический риниты, ринит беременных, полипоз, муковисцидоз и др. Кроме того, иногда у пациента может быть сочетанная патология, которую требуется разграничить (11, 28, 63, 94). В этой связи разработка критериев диагностики АР весьма актуальна.

Существуют объективные маркеры аллергического воспаления, обнаруживаемые как в сыворотке крови, так и в назальном секрете и мокроте, уровень которых определяет степень поражения дыхательных путей. К таковым относят эозинофилию, повышение уровня эозинофиль-ного катионного протеина, триптазы, лейкотриенов и некоторых других медиаторов воспаления (10, 13, 20, 87).

О нарушениях микроциркуляции слизистой оболочки полости носа свидетельствуют частые носовые кровотечения у больных АР. Помимо явных кровоизлияний в назальном секрете могут появляться компоненты крови: клетки и плазма. В случае же микроэпистаксиса наблюдают диапедез белков плазмы и гемоглобина через стенку капилляров. Предполагают, что хронический воспалительный процесс в микроциркуля-торном русле, обусловленный деструктивным влиянием иммунных комплексов, приводит к формированию лимфостаза и капилляростаза (7, 131).

В доступной литературе есть сведения об определении концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете больных ринитами (131). Вследствие того, что использованный авторами бензидиновый тест определения свободного гемоглобина имеет низкую специфичность из-за высокой пероксидазной активности назального секрета, были получены результаты, которые нельзя трактовать однозначно.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Оценить диагностическое значение показателя концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете больных АР.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Разработать метод иммунометрического определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете в реакции коагглюти-нации взвеси фиксированных формальдегидом клеток Staphylococcus aureus, нагруженных через белок А аффинноочищенными кроличьими антителами к гемоглобину человека.

2. Определить содержание свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР при помощи модифицированного иммуномет-рического метода.

5. Исследовать динамику клинических симптомов, содержания эози-нофилов и концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете пациентов с АР в ходе проведения назального провокационного теста и терапии водным назальным спреем флютиказона про-пионата и препаратом Аффинолейкин®.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ Впервые обнаружено, что присутствие свободного гемоглобина в назальном секрете может служить диагностическим признаком АР.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ 1. На базе лаборатории клинической аллергологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН показана возможность практического осуществления нового метода дифференциальной диагностики АР, который включает получение назального секрета в ответ на механическое раздражение слизистой оболочки полости носа и иммуно-метрическое определение в нем свободного гемоглобина.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

2. Концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете повышается после специфической стимуляции аллергеном при проведении назального провокационного теста и снижается в результате терапии водным назальным спреем флютиказона пропионата и препаратом Аффинолейкин®.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертационного исследования на тему "Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита"

6. выводы

Разработанный иммунометрический метод позволяет выявить в назальном секрете больных ринитами наличие свободного гемоглобина без примеси эритроцитов в концентрации от <1 до 50 мкг/мл. Содержание свободного гемоглобина, выявленного разработанным методом не коррелировало с концентрацией внеклеточных пероксидаз в назальном секрете (г=0,23; р<0,1), в отличие от метода окисления бензидина.

Концентрация свободного гемоглобина, равная или превышающая 12 мкг/мл, встречается в назальном секрете больных ПАР и ИАР в 3 раза чаще, чем при ХИР (р<0,01).

Повышенная концентрация свободного гемоглобина в назальном секрете при АР не зависит от присутствия целых эритроцитов и их фрагментов, не коррелирует с содержанием эозинофилов, IL-4, IL-8, альбумина и общего белка, однако связана с тяжестью клинического течения АР.

Увеличение содержания свободного гемоглобина в назальном секрете при проведении НПТ с причинным аллергеном происходит в 4 раза чаще у больных ПАР, чем у пациентов с ИАР (66,7% и 14,3%, соответственно).

Снижение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете отражает лечебный эффект применения водного назального спрея флютиказона пропионата и препарата Аффинолейкин® у 73,3% и 78,6% больных АР, соответственно.

Разработанный метод определения свободного гемоглобина в назальном секрете расширяет возможности дифференциальной диагностики АР и оценки эффективности его лечения.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Кочетова, Юлия Игоревна

1. Адо А.Д. Общая аллергология. // М.: Медицина, 1978. 568 с.

2. Адо АД. Частная аллергология. // М.: Медицина, 1976. 512 с.

3. Адо А.Д. Применение аллергенов неинфекционного происхождения для специфической диагностики и десенсибилизации больных аллергическими заболеваниями. // Методическое письмо. М.: МЗ СССР, 1969.-26 с.

4. Адо В.А., Астафьева Н.Г. Поллинозы: повышенная чувствительность к пыльце растений. // М. Знание,, 1991. 224 с.

5. Азнабаева Л.Ф. Провоспалительные цитокины в иммунопатогенезе и лечении хронических гнойных риносинуситов. // Автореф. дисс. . .докт. мед. наук СПб, 2002. - 24 с.

6. Аллергические болезни у детей. Под ред. Студеникина М.Я., Бала-болкина И.И. // Руководство для врачей. М.: Медицина, 1998. -347 с.

7. Арефьева Н.И. Патогенез, клиника и лечение различных форм ринита и риносинуита с рецидивирующим течением. // Автореф. дисс. . .докт. мед. наук М., 1990. - 24 с.

8. Балаболкин И.И., Ефимова А.А. Влияние экологических факторов на распространение и течение аллергических болезней у детей. // Иммунология. 1991. - №4. - С.34-37.

9. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. // JL: Медицина, 1973.- С. 18-37, 32-61.

10. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. // М., 1998. 173 с.

11. Гущин И.С., Ильина Н.И., Польнер С.А. Аллергический ринит. // Пособие для врачей. М., 2002. - 72 с.

12. Двойрин В.В., Клименков А.А. Методика контролируемых клинических испытаний. // М.: Мир, 1985. С.114-120.

13. Диагностика и лечение аллергического ринита, и его влияние на астму. // Руководство для врачей. Материалы отчета ARIA EAACI в сотрудничестве с ВОЗ. М., 2001. - 24 с.

14. Дианова Д.Г. Иммунодиагностика и иммунокоррекция вторичных иммунодефицитов при вирусных заболеваниях глаз. // Автореф. дисс. .канд. мед. наук Пермь, 2001. - 23 с.

15. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. // Одесса, 1999.-482с.

16. Задионченко Е.В., Надгериева О.В., Мокроносова М.А. и др. Имму-нотерапевтическая эффективность Аффинолейкина при атопиче-ском дерматите. // Биопрепараты. 2004. - №4(16). - С.25-31.

17. Ильина Н.И. Эпидемиология аллергического ринита. // Российская ринология. 1999. - №1. - С.23-25.

18. Ильина Н.И. Аллергопатология в разных регионах России по результатам клинико-эпидемиологических исследований. // Автореф. дисс. .докт. мед. наук. М., 1996. - 28 с.

19. Клиническая оценка лабораторных тестов. Под ред. Тица Н.У. // М.: Медицина, 1986.-С. 130.

20. Jlycc JI.B. Аллергия и псевдоаллергия в клинике. // Автореф. дисс. .докт. мед. наук. -М., 1993.-29 с.

21. Малер Г., Кордес Ю. Основы биологической химии. // М., 1970 г. -567 с.

22. Мац А.Н. Природа «трансфер-факторной» активности препарата Аффинолейкин. // Биопрепараты. 2004. - №4(16). - С.7-13.

23. Мац А.Н. «Трансфер-фактор» это N-концевая часть «протомера» растворимого Т-клеточного антигенсвязывающего белка. // Аллергология и иммунология. - 2004. - №6(2). - С. 140-143.

24. Мац А.Н., Перепечкина Н.П., Райхер Л.И и т.д. Аффинолейкин -биофармацевтический препарат для инструктивной противоинфек-ционной иммунотерапии при недостаточности клеточного иммунитета // Микробиология. 1998. - №2. - С.78-83.

25. Пагнуева Л.Ю., Варфоломеева Е.В., Сперанская В.Н. и т.д. Экспресс-метод определения скрытой крови. // В сб.: Акт. вопросы вак-цинно-сывороточного дела в XXI веке. Пермь, 2003. - С. 176-179.

26. Паттерсон Р., Грэммер Л.К., Гринбергер П.А. Аллергические болезни, диагностика и лечение. // М.: Медицина, 2000. 768 с.

27. Предтеченский В.Е. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. // М.: Медицина, 1964. 637 с.

28. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова А.В. Аллергические заболевания. // М.,1999. 470 с.

29. Ройт А., Бростофф Д., Мейл Д. Иммунология. // М.: Мир, 2000. -640 с.

30. Руководство по медицине. Диагностика и терапия, т. 2. Под ред. Беркоу Р., Флетчера Э. // М.: Медицина, 1997. С.126.

31. Тарасова Г.Д., Мокроносова М.А., Кочетова Ю.И. и т.д. Назальный провокационный тест в диагностике аллергических заболеваний верхних дыхательных путей. // Пособие для врачей. — М., 2002. -12 с.

32. Фошина Е.П. Особенности общего и мукозального иммунитета у больных с различными нозологическими формами ринита. // Автореф. дисс. .канд. мед. наук. -М., 2000. 100 с.

33. Фрадкин В.А. Диагностические и лечебные аллергены. // М.: Медицина, 1987. 160с.

34. Фримель Г. Иммунологические методы. // М.: Медицина, 1987. 472 с.

35. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. //М., 1995. С. 178-205.

36. Хмельницкая Н.М., Рязанцев С.В., Клячко JI.JI. и т.д. Методы изучения и исследования экзокринных секретов для изучения некоторых параметров местного иммунитета. // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - №12. - С.43-44.

37. Ярилин А.А. Основы иммунологии. // М.:Медицина, 1999.- 720 с.

38. Aberg N., Sundel J., Eriksson В. et al. Prevalence of allergic diseases in schoolchildren in relation to family history, upper respiratory tract infections, and residential characteristics. // Allergy. 1996. - Vol.51. -P.232-237.

39. Annesi-Maesano I., Didier A., Klossek M. The Score for Allergic Rhinitis: a simple and valid assessment method in population studies. // Allergy. 2002. - Vol.57(2). - P. 107-114.

40. Asher I., Anderson H., Beashey R. et al. International Servey of Asthma and Allergies in Childhood (ISAAC): rationale and methods. // Eur Res-pir J. 1995. - Vol.8. - P.483-491.

41. Bachert C., Kempen M., Cauwenberg P. Regulation of proinflammatory cytokines in seasonal allergic rhinitis. // Int Arch Allergy Immunol. -1999: Vol.118. - P.375-379.

42. Bachert C., Wagenmann M., Hauser U. Proinflammatory cytokines: measurement in nasal secretions and induction of adhesion receptor expression. // Int Arch Allergy Immunol. 1995. - Vol. 107(1-3). - P. 106108.

43. Balfor-Linn I. Quantitative evaluation of nasal mucosa proteins. // Clin Exp Allergy. 1999. - Vol.29 (5). - P.719-720.

44. Balfour-Lynn I.M., Valman H.B., Wellings R. et al. Tumour necrosis factor-alpha and leukotriene E4 production in wheezy infants. // Clin Exp Allergy. 1994. - Vol.24. - P. 121-126.

45. Barnes K.C. Evidence for common genetic elements in allergic disease. // J Allergy Clin Immunol. 2000. - Vol.106. - P. 192-200.

46. Baroody F.M., Ford S., Proud D. et al. Relationship between histamine and physiological changes during the early response to nasal antigen provocation. // Appl Physiol. 1999. - Vol.86. - P.659-668.

47. Beck L.A., Leung D.Y. Allergen sensitization through the skin induces systemic allergic responses. // J Allergy Clin Immunol. 2000. -Vol.106.-P.258-263.

48. Bellanti J.A. Cytokines and allergic diseases: clinical aspects. // Allergy Asthma Proc. 1998. - Vol. 19(6). - P.337-341.

49. Bentley A.M., Jacobson M.R., Cumber V. et al. Immunohistology of the nasal mucosa in seasonal allergic rhinitis: increases in activated eosinophils and epithelial mast cells. // J Allergy Clin Immunol. 1992. -Vol.89.-P.877-883.

50. Bernardini R., Novembre E., Mugnaini L. et al. Eosinophil cationic protein and tryptase in the nasal lavage fluid of children with grass-pollen rhinitis: levocabastine effect. // Allergy Asthma Proc. 1998. -Vol. 19(2). - P.75-80.

51. Biedlingmaier J.F., Trifillis A. Comparison of CT scan and electron microscopic findings on endoscopically harvested middle turbinates. // Otolaryngol Head Neck Surg. 1998. - Vol.118. - P. 165-173.

52. Bisgaard H., Olsson P., Bende M. Leukotriene D4 increases nasal blood flow in humans. // Prostaglandins. 1984. - Vol.27. - P.549-604.

53. Bisgaard H., Olsson P., Bende M. Effect of leukotriene D4 on nasal mucosal blood flow, nasal airway resistance and nasal sectretion in humans. // Clin Allergy. 1986. - Vol.16. - P.289-297.

54. Bjork J., Smedegard G., Svensjo E. et al. the use of the hamster cheek pouch for intravital microscopy studies of microvascular events. // Prog Appl Microcirc. 1984. - Vol.6. - P.41-53.

55. Blaiss M.S. Cognitive, social, and economic costs of allergic rhinitis. // Allergy Asthma Proc. 2000. - Vol.21. - P.7-13.

56. Bochenska-Marchiniak M., Kupczyk M., Gorski P. et al. The effect of recombinant IL-8 on eosinophils" and neutrophils" migration in vivo and in vitro. // Allergy. 2003. - Vol.58 (8). - P.795-801.

57. Bousquet J., Vignola A.M., Campbell A.M. et al. Pathophysiology of allergic rhinitis. // Int Arch Allergy Immunol. 1996. - Vol.110. -P.207-218.

58. Browning S.T. Measurement of albuminum in nasal lavage using the technique of chemiluminescent immunoassay. // Acta Otolaryngol. -1999. Vol. 119 (4). - P.492-496.

59. Cauwenberg P., Bachert C., Passalacqua G. et al. Consensus statement on the treatment of allergic rhinitis. // Allergy. 2000. - Vol.55(2). -P.116-134.

60. Cauwenberg P., Cipriandi G., Vermeiren J.S. et al. Epidemiology of allergic rhinitis. // The USB Institute of allergy. 2001. - p.27.

61. Conti F., Orlandini A. Treatment of allergic manifestation with transfer factor. // Selected papers from la medicinabiologica. 2004. - Vol.1. -P.29-33.

62. Corren J. The relationship between allergic rhinitis and bronchial asthma. // Curr Opin Pulm Med. 1999. - Vol.5. - P.35-37.

63. Corrigan C., Klimek L., Hormann K. et al. Rhinitis. // The USB Institute ofallergy.-2001.-P.64.

64. Demoly P., Crampette L., Mondain M. et al. Myeloperoxidaze and inter-leukin-8 levels in chronic sinusitis.// Clin Exp Allergy. 1997. -Vol.27(6). - P.672-675.

65. Denburg J.A. Bone marrow in atopy and asthma: hematopoietic mechanisms in allergic inflammation. // Immunol Today. 1999. - Vol.20. -P.lll-113.

66. Devine D.A. Antimicrobial peptides in defence of the oral and respiratory tracts. // Mol Immunol. 2003. - Vol.40. - P.431-443.

67. Doumas B.T., Watson W.A., Biggs H.G. Albumin standards and the measurement of serum albumin with bromcresol green. // Clin Chem Acta. 1971. - Vol.31(1). - P.87-96.

68. Durham S.R. Mechanisms of mucosal inflammation in the nose and lungs. // Clin Exp Allergy. 1998. - Vol.28(2). - P. 11-16.

69. Fireman R. Immunology of allergic disorders. // Atlas of Allergies. -London, 1996.-P. 1-26.

70. Fokkens W. Antigen-presenting cells in nasal allergy. 11 Allergy. 1999.- Vol.54(l 1). P. 1130-11'41.

71. Fokkens W.J, Vinke J.G., KleinJan A. Local IgE production in the nasal mucosa: a review. // Am J Rhinol. 2000. - Vol.14 (5). - P.299-303.

72. Frischer Т., Baraldi E. Upper airway sampling. // Am J Respir Crit Care.- 2000. Vol.l 62(2). - P.28-30.

73. Frischer Т., Halmerbauer G., Gartner C. et al. Eosinophil-derived proteins in nasal lavage fluid of neonates of allergic patients and the development of respiratory symptoms during the first 6 months of life. // Allergy. 2000. - Vol.55(8). - P.773-777.

74. Garrelds I., De Graaf Veld Т., Nahori M. et al. Interleukin-5 and eosinophil cationic protein in nasal lavages of rhinitis patients. // Eur J Pharmacol. 1995. - Vol.275(3). - P.295-300.

75. Godthelp Т., Fokkens W.J, KleinJan A. Antigen-presenting cells in the nasal mucosa with allergic rhinitis during allergen provocation. // Clin Exp Allergy. 1996. Vol.26(6). - P.677-688.

76. Halmerbauer G., Gartner C., Koller D. et al. Eosinophil cationic protein and eosinophil protein X in the nasal lavage of children during the first four weeks of life. // Allergy. 2000. - Vol.55(12). - P. 1121-1126.

77. Hamid Q.A., Cameron L.A. Recruitment of T cells to the lung in response to antigen challenge. // J Allergy Clin Immunol. 2000. -Vol.106.-P.227-234.

78. Hayden M.L., Rose G., Diduch K.C. Benzyl benzoate moist powder investigation of acaricide activity in culture and reduction of allergen in carpets. // J Allergy Clin Immunol. 1992. - Vol.89. - P.536-540.

79. Heikkinen Т., Shenoy M., Goldblum R.M. et al. Quantification of cytokines and inflammatory mediators in samples of nasopharyngeal secretions with unknown dilution. // Pediatr Res. 1999. - Vol.45(2). -P.230-234.

80. Helm R.M., Burks A.W. Mechanisms of food allergy. // Curr Opin Immunol. 2000. - Vol.12. - P.647-653.

81. Holgate S.T. Genetic and environmental interaction in allergy and asthma. // J Allergy Clin Immunol. 1999. - Vol.104. - P.l 139-1146.

82. Howarth P.H., Salagean M., Dokic D. Allergic rhinitis: not purely a his-tamine-related disease. // Allergy. 2000. - Suppl.64. - P.7-16.

83. Igarashi Y., Goldrich M., Kaliner M. et al. Quantitation of inflammatory cells in the nasal mucosa of patients with allergic rhinitis and normal subjects. // J Allergy Clin Immunol. 1995. - Vol.95(3). - P.716-725.

84. Jacobi H. IL-8 and the activation of eosinophils and neutrophils following nasal allergen challenge. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1998. -Vol.116(1). -P.53-59.

85. Jacobi H., Skov P.S., Kampen G. et al. Histamine and tryptase in nasal lavage fluid following challenge with methaholine and allergen. // Clin Exp Allergy. 1998. - Vol.28. - P.83-91.

86. Jankowski R., Persoons M., Foliguet B. et al. Eosinophil count in nasal secretions with and without nasal symptoms. // Rhinology. 2000: -Vol.38(1). - P.23-32.

87. Jean R., Delakourt C., Rufin P. et al. Nasal cytology in rhinitis children: comparison between brushing and blowing the nose. // Allergy. 1997. -Vol.51(12). - P.932-934.

88. Jeney E.V., Raphael G.D., Meredith S.D. et al. Abnormal nasal glandular secretion in recurrent sinusitis. // J Allergy Clin Immunol. 1990. -Vol.86.-P.10-18.

89. Johansson S., Hourihane J., Bousquet J. A revised nomenclature for allergy. //Allergy. -2001. Vol.56(9). -P.813-824.

90. Jirapongsananuruk O., Vichyanond P. Nasal cytology in the diagnosis of allergic rhinitis in children. // Ann Allergy Asthma Immunol. 1998. -Vol.80(2). - P. 165-170.

91. Juniper E.F. Rhinitis management: the patient's perspective. // Clin Exp Allergy. 1998. - Vol.28(16). - P.34-38.

92. Juniper E.F., Guyatt G.H., Dolvich J. Assessment of quality of life in adolescents with allergic rhinoconjunctivitis: development and testing of a questionnaire for clinical trials. // J Allergy Clin Immunol. 1994.- Vol.93.-P.413-423.

93. Kaiser L., Fritz R.S., Straus S.E. et al. Symptom pathogenesis during acute influenza: IL-6 and other cytokine responses. // J Med' Virol. -2001. Vol.64 (3). - P.262-268.

94. Kingsley G.R. Photometric measurements in clinical biochemistry. // Am J Med Technol. 1950. - 1942. - Vol.l6(5). - P.247-253.

95. Kipelainen M.5 Terho E., Helenius H. et al. Validation of a new ques-tionaire on asthma, allergic rhinitis and conjunctivitis in young adults. // Allergy. 2001. - Vol.56(5). - P.337-384.

96. Klimek L. Rasp G. Norm values for eosinophil cationic protein in nasal secretions: influence of specimen collection. // Clin Exp Allergy. — 1999.- Vol.29(3). P.367-374.

97. Kuna P., Lazarovich M., Kaplan A.P. Chemokines in seasonal allergic rhinitis. // J Allergy Clin Immunol. 1996. - Vol.97. -P. 104-112.

98. Lars A.H. Transfer factor a new form for immunotherapy // Acta Med Scand. - 1975. - Vol.198. - P.l-3.

99. Lawrence H.S. Transfer factor in cellular immunity // The Harvey Lectures. 1974. - Vol.68. - P.239-350.

100. Lee H.S., Majima Y., Sakakura Y. et al. Quantitative cytology of nasal secretions under various conditions. // Laryngoscope. 1993. — Vol.103(5). -P.533-537.

101. Lim M.S., Tailor R.M., Naclerio R.M. The histology of allergic rhinitis and its comparison to cellular changes in nasal lavage. // Am J Respir Crit Care Med. 1995. - Vol.l51(l). -P.136-144.

102. Linden M., Greiff L., Andersson M. et al. Nasal cytokines in common cold and allergic rhinitis. // Clin Exp Allergy. 1995. - Vol.25(2). -P.166-172.

103. Lonnkvist K., Moshfegh A., Pedroletti C. et al. Increased eosinophil trasmigration after nasal allergen challenge in children with allergic asthma and rhinitis. // Allergy. 2002. - Vol.57. - P. 1200-1204.

104. Lu X. Treatment on allergic rhinitis with spleen transfer factor. // Current Researches in Transfer Factor. Zou Zhao Fen, Huo Bao Lai (eds). China Sciece & Technology Press, Beijing. 1993. - P.239-243.

105. Lu X., Yu X., Gao F. et al. Treatment with OBS-TF in allergic rhinitis. // Current Researches in Transfer Factor. Zou Zhao Fen, Huo Bao Lai (eds). China Sciece & Technology Press, Beijing. 1993. - P.232-238.

106. Luana R.C., Wiiliams M.C. Tetramethylbenzidine a substitute for benzidine in hemoglobine analysis. // J Lab Clin Med. - 1979. - Vol.94. -P.266-276.

107. Marccuci F., Sensi L.G., Migali E. et al. Eosinophil cationic protein and specific IgE in serum and nasal mucosa of patients with grass-pollen allergic rhinitis and asthma. // Allergy. 2001, Mar. - Vol.56(3). - P.231-236.

108. Martinez F.D. Role of viral infections in the inception of asthma and allergies during childhood: could they be protective? // Thorax. 1994. -Vol.49.-P.l 189-1191.

109. Matricardi P.M., Rosmini F., Riondino S. et al. Exposure to foodborne and orofecal microbes versus airborne viruses in relation to atopy and allergic asthma: epidemiological study. // BMJ. 2000. - Vol.320. -P.412-417.

110. Masuyama K., Till S., Jacobson M. et al. Nasal eosinophilia and IL-5 mRNA expression in seasonal allergic rhinitis induced by natural allergen exposure: effect of topical corticosteroids. // J Allergy Clin Immunol. 1998. - Vol. 102(4). -P.610-617.

111. Mc Farlane W.D., Mc Kenzie Hamilton R.C. On the factors influencing the blood benzidine reaction as applied to the micro - determination of hemoglobin. // Biochem Journal. - 1932. - Vol.26. - P.1050-1060.

112. Meyer P., Persson C.G., Andersson M. et al. Alpha-2-macroglobulin and eosinophil cationic protein in the allergic rhinitis. // Eur Respir J. -1999.-Vol.13.-P.633-637.

113. Miller D., Miller A. Effects of washing and drying on mite in blankets. // J Allergy Clin Immunol. 1993. - Vol.91. -P.251-254.

114. Mills E. Criteria for the classification of Henoch-Schonlein Purpura. // Arthritis Reum. 1990. - Vol.33. - P.l 114-1121.

115. Montefort S., Holgate S.T., Howarth P.H. Leucocyte-endothelial adhesion molecules and their role in bronchial asthma and allergic rhinitis. // Eur Respir J. 1993. - Vol.6. - P.l044-1054.

116. Morinaka S., Nakamura H. Inflammatory cells in nasal mucosa and polyps. // Auris Nasus Laryngx. 2000. - Vol.27(l). - P.59-64.

117. Mudde G., Reischl I., Corvaia N. Antigen presentation in allergic sensitization. // Immunol Cell Biol. 1996. - Vol.74 (2). - P.167-173.

118. Mygind N. Nasal allergy. // London: Blackwell Scientific. 1979. -Vol.3. -P.38.

119. Mygind N., Dahl R. Epidemiology of allergic rhinitis. // Pediatr Allergy Immunol. 1996. - Vol.7(9). - P.57-62.

120. Naclerio R.M., Togias A.G. The nasal allergic reaction: observations on the role of histamine. // Clin Exp Allergy. 1991. - Vol.21(12). -P.13-19.

121. Naito K., Takeda N., Yokoyama N. et al. The distribution of eosinophil cationic protein positive eosinophils in the nasal mucosa of the nasal allergy patients. // Auris Nasus Larynx. 1993. - Vol.20(3). - P.197-204.

122. Okuda M., Miura I., Juji F. et al. A novel method of counting eosinophils in nasal secretion of allergic rhinitis by hemocytometric method. // Int Arch Allergy Immunol. 1994. - Vol.l04(l). - P.6-8.

123. Park Y.-J., Repka-Ramirez M., Naranch K. et al. Nasal lavage concentrations of free hemoglobin as a marker of mikroepistaxis during nasal provocation testing. // Allergy. 2001. - Vol.57. - P.377-384.

124. Pelikan Z. Late nasal response to allergen challenge, cytologic changes in the nasal secretions and histologic changes in the nasal mucosa. // Adv Exp Med Biol. 1995. - Vol.371. - P.855-860.

125. Piacentini G.L., Kaulbach H., Scott T. et al. Evaluation of nasal cytology: a comparison between methods. // Allergy. — 1998. Vol.53(3). — P.326-328.

126. Prat J., Xaubet A., Mullol J. et al. Cell content and albumin concentration in nasal lavage from patients with rhinitis. // Ann Allergy. 1993. -Vol.70(2). - P.175-178.

127. Prete G.F., Carli M., D'Euos M.M. et al. Allergen exposure induces the activation of allergen-specific Th2-cells in the airway mucosa of patients with allergic respiratory disorders. // Eur J Immunol. 1993. -Vol.23.-P.1445-1449.

128. Rasp G., Hochstrasser K. Tryptase in nasal fluid is a useful marker of allergic rhinitis. // Allergy. 1993. - Vol.48(2). - P.72-74.

129. Rasp G., Thomas P., Bujia J. Eosinophil inflammation of the nasal mucosa in allergic and non-allergic rhinitis measured by eosinophil cationic protein levels in native nasal fluid and serum. // Clin Exp Allergy. -1994. Vol.24(12). - P. 1151-1156.

130. Raulf-Heimsoth M., Witrtz S., Papenfuss C. et al. Nasal lavage mediator profile and cellular composition of nasal brushing material during latex challenge tests. // Clin Exp Allergy. 2000. - Vol.30(l). - P.l 10-121.

131. Rebula P., Tedesco F., Radillo O. et al. Inhibition of in vitro adherence of antibody-coated red cells to monocytes by the dialyzable leukocyte extract. // Transfusion. 1991. - Vol.31 (3). - P.218-221.

132. Ritz S.A., Gajewska B.U., Stampfli M.R. et al. Determinants of the im-muninflammatory response in allergic airway inflammation: Overview of antigen presentation and cellular activation. // J Allergy Clin Immunol1. 2000. - Vol. 106. - P.206-212.

133. Roca-Ferrer J., Mullol J., Xaubet A. et al. Proinflammatory cytokines and eosinophil cationic protein on glandular secretion from human nasal mucosa: regulation by corticosteroids. // J Allergy Clin Immunol. -2001. Vol.108(1). -P.87-93.

134. Romagnani S.T., Parronchi P., Maggi E. The «Th2 Hipothesis» in allergy. // Proceedings of the XVI-th International Congress of Allergology and Clinical Immunology (ICACI). 1997. - Vol.4. - P. 12-16.

135. Romero J.N., Skadding G. Eosinophilia in nasal secretions compared to skin prick test and nasal challenge test in the diagnosis of nasal allergy. // Rhinology. 1992. - Vol.30 (3). -P.169-175.

136. Schleimer R., Bochner B. Serum levels of eosinophil cationic protein in allergic disearses and natural allergen exposure. // J Allergy Clin Immunol. 1996. - Vol.97. - РЛ350-1353.

137. Sears M.R., Herbison G.P., Holdaway M.D: et al. The relative risk of sensitivity to grass pollen, house dust mite and cat dander in the development of childhood asthma. // Clin Exp Allergy. 1989. - Vol.19. -P.419-424.

138. Settipane R.J., Settipane G.A. IgE and the allergy-asthma connection in the 23-year follow-up of Brown University students. // Allergy Asthma Proc. 2000. - Vol.21. - P.221-225.

139. Shaw R.J., Fitzharris P., Cromwell L. et al. Allergen-induced release of sulphidopeptide leukotriens (SRS-A) and LTB4 in allergic rhinitis. // Allergy. 1985. - Vol.5. -P.942-950.

140. Shinogi J., Majima Y., Takeuchi K. et al. Quantitative cytology of nasal secretions with perennial allergic rhinitis in children: comparison of infected and noninfected conditions. // Laryngoscope. 1998. -Vol. 108(5).-P.703-705.

141. Sibbald В., Rink E. Epidemiology of seasonal and perennial rhinitis: clinical presentation and medical history. // Thorax. 1991. - Vol.46. - P.859-901.

142. Simons F.E. Learning impairment and allergic rhinitis. // Allergy Asthma Proc.-1996. Vol. 17. - P. 185-189.

143. Spector S.L. Overview of comorbid associations of allergic rhinitis. // J Allergy Clin Immunol. 1997. - Vol.99. -P.773-780.

144. Strannegard I.L., Hanson L.A., Lindholm L. et al. Transfer factor in severe atopic disease // The Lancet. 1975. - Vol.11. - P.702.

145. Sulakvelidze I., Conway M., Evans S. et al. Clinical and nasal irrigation fluid findings in perennial allergic rhinitis. // Am J Rhinol. 1997. -Vol.11(6).-P.435-441.

146. Susittaival P., Husman T. Tuohilampi questionaire for population studies of hypersensitivity diseases of resperatory organs, skin and eyes. // Kuopio: Orion. - 1996. - p.26.

147. Svensson C., Andersson M., Greiff L. et al. Eudative hyperresponsive-ness of the airway microcirculation in seasonal allergic rhinitis. // Clin Exp Allergy. 1995. - Vol.5. - P.942-950.

148. Takafuji S, Nakagawa T. Air pollution and allergy. // J Investig Allergol Clin Immunol. 2000. - Vol.10. - P.5-10.

149. TeradaN., Hamano N., Kim WJ. et al. The kinetics of allergen-induced eotaxin level in nasal lavage fluid: its key role in eosinophils recruitment in nasal mucosa. // Am J Respir Crit Care Med. 2001. - Vol. 164(4). -P.575-579.

150. Togias A.G. Systemic immunologic and inflammatory aspects of allergic rhinitis. // J Allergy Clin Immunol. 2000. - Vol.106. - P.247-250.

151. Ueda Т., Takeno S., Furukido K. et al. Leukotriene receptor antagonist Pranlykast suppress eosinophil infiltration and cytokine production in human nasal mucosa of perennial allergic rhinitis. // Ann Otol Rhinol Laryngol. 2003. - Vol.112. - P.955-961.

152. Wang D., Clement P., Smitz J. et al. Monitoring nasal allergic inflammation by measuring the concentration of eosinophil cationic protein and eosinophils in nasal secretions. // Allergy. 1995. - Vol.50(2). - P. 147151.

153. Wang D., Yeoh K. The significance and technical aspects of quantitative measurements of inflammatory mediators in allergic rhinitis. // Asian Рас J Allergy Immunol. 1999. - Vol.l7(3). -P.219-228.

154. Wilson S.J., Lau L., Howarth P.H. Inflammatory mediators in naturally occurring rhinitis. // Clin Exp Allergy. 1998. - Vol.28. - P.220-227.

155. Woodfolk J.A., Hayden M.L., Miller J.D. et al. Chemical treatment of carpets to reduce allergens. A detailed study of tannic acid on indoor allergens. // J Allergy Clin Immunol. 1994. - Vol.94. - P. 19-23.