Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Свободнорадикальные механизмы пестицидной интоксикации в эколого-гигиенических исследованиях

РГ6 од

- 8 СЕН 1997

На правах рукописи

КЕСЕЛЬМАН Михаил Лазаревич

СВОБОДНОРАДИКАЛЬИЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ В ЭКОЛОГО-ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ

14.00.07 - Гигиена

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА-1997

Работа выполнена в Московском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте гигиены им. Ф. Ф. Эрисмаиа и Азовском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства.

Научные консультанты:

Доктор медицинских наук, академик РАМН и РАЕН, профессор А.И. Потапов.

Доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор В.Н. Ракитский. Доктор биологических наук С.И. Гвозденко.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Т. В. Юдина. Доктор медицинских наук, профессор A.A. Королев. Доктор медицинских наук Р.Д. Смирнова.

Ведущая организация: Институт питания Академии медицинских наук.

Защита состоится "25 " 1997 r. в /У ча.

сов на заседают Диссертационного Совета Д.084.05.01 при Московском ордена Трудового Красного Знамени НИИ гигиены им. Ф.Ф.Эрисманапо адресу: 141000, Московская область, г. Мытищи, ул. Семашко, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского НИИ гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана

Автореферат разослан "¿У " # в ^ с _1997 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук,

профессор А.А.Комарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследован»».

Водная система и здоровье населения - объект постоянного токсиколого-гигиенического скрининга. В последние годы отмечено ухудшение санитарного состояния водных объектов во многих регионах Российской Федерации. Высокие концентрации загрязняющих веществ приводят к антропогенному загрязнению водоемов, что обуславливает опасность водопользования и служит причиной заболеваемости населения (Государственный доклад "О состоянии окружающей среды Российской Федерации в 1993 г."). Сложность гигиенической характеристики состояния среды связана с воздействием комплекса небла! оприятных факторов, ведущим из которых является химический (Потапов А.И., 1993; Потапов А.И., Ястребов Г.Г., 1996; Беляев В.Д., 1993; Ракитс-кий В.Н., 1996).

Одним из существенных химических факторов, загрязняющих окружающую среду, являются пестициды (Курляндс-кий Б.А., 1996). Пестициды, поступая в организм человека с вдыхаемым воздухом, водой и продуктами питания, меняют ход обменных процессов в организме, вызывая патологические изменения функций. Тем не менее, получение стабильных урожаев сельскохозяйственных культур в настоящее время и ближайшей перспективе будет связано с применением наиболее эффективных средств - пестицидов и неизбежным их попаданием в водоемы.

Опасность поступления пестицидов в водоемы обусловлена нарушением практически всех структур и функций экосистем, включая изменение биохимических процессов и физиологических реакций гидробионтов на клеточном, организ-меином и лопуляциошгом уровнях.

Хлорорганичеекие и фосфорорганические пестициды широко применяются в сельском хозяйствен большая их часть относится к высокотоксичным ядам для теплокровных и гид-

робионтов. Новые, имеющие все более широкое применение синтетические пестициды -ииретроиды экстремально токсичны для водных сообществ и средне- и высокотоксичны для теплокровных.

При использовании рыбы в качестве объекта питания, остаточные количества пестицидов могут попадать в организм человека, создавая реальную угрозу его здоровью.

В згой связи является актуальным изучение ранних проявлений влияния пестицидов на организм в концентрациях и дозах малой интенсивности, а поиск селективных, доступных методов диагностики химической интоксикации является приоритетным направлением гигиены (Потапов А.И., Ястребов Г.Г., 1996 г.). В то же время эта задача является актуальной с экологических позиций.

Как указывал В.И.Лукьяненко (1989), методические возможности изучения токсичности различных групп веществ на рыбах за последние два десятилетия существенно расширились. Ведется интенсивный поиск наиболее чувствительных объектов и показателей, разрабатываются новые методы анализа, предлагаются различные способы оценки качества водной среды по изменениям различных физических систем и биохимического статуса рыб.

Следует подчеркнуть, что при длительном действии малых доз токсикантов развивается хронический токсический стресс, в механизмах которого на первый план выдвигаются общие (неспецифические) ответные реакции, а специфические изменения часто выполняют роль пускового механизма (Голиков С.Н. и др.,1986; Ракитский В.Н., 1996).

По современным представлениям, в реакции организма на токсическое действие ксенобиотиков, одно из важнейших мест занимает аутоокислительное поражение, включающее образование активных форм кислорода (АФК), интенсификацию перекисного окисления липидов (ПОЛ), деструкцию мембран, повреждение ДНК и т.д. (Parke D.V., 1987).

В связи с этим актуальным является исследование роли свободнорадикальных процессов и функционального состояния мембран при пестищщной интоксикации. 4

Более подробно эти вопросы изучены при действии химических веществ и пестицидов на теплокровных (Голиков С.Н. и др., 1986; Леоненко О.Б., Каган Ю.С., 1994). Вместе с тем, отсутствуют работы о влиянии пестицидов на свободнорадикальные процессы в ихтиофауне, что не позволяет судить об общих закономерностях и механизмах формирования ответной реакции организмов на токсическое действие пестицидов в экосистемах. Отсутствует научно обоснованный комплекс критериально-диагностических показателей для эколого-токсикологическод оценки пестшщцной интоксикации.

Единичные работы посвящены разработке экспресс-методов, прогнозирующих параметры токсичности и опасности пестицидов для теплокровных на основании экспериментов на гидробнонтах.

Все вышесказанное обосновывает актуальность изучения свободнорадикальных механизмов пестицидпой интоксикации при воздействии высокобнологпчески активных пестицидов, а нерешенные вопросы являлись задачами, объединенными общей целью исследования.

Цель исследовашш.

Установление закономерностей токсического действия трех классов пестицидов на структурно-функциональное состояние бпомембран и разработка концепции о роли свободнорадикальных процессов в механизме пестищщной интоксикации для оптимизации эколого-гигненических исследований, направленных на охрану здоровья человека и сохранение качества водных экосистем.

Для достижения поставленной цели были обоснованы и решены следующие задачи:

1. Установить токсикометрические параметры и дозоэффек-тивные зависимости воздействия пестицидов для ихтиофауны.

2. Исследовать интенсивность свободнорадикальных процессов и структурно-функциональное состояние биомембран

в различных тканях рыб при действии хлор-, фосфорор-ганических и пнретроидиых пестицидов.

3. Изучить влияние пестицидов на активность антиоксидан-тных ферментов в крови рыб.

4. Выявить взаимосвязь токснколого-гигиеннческих и эко-лого-рыбохозяйственных критериев оценки пестицидной интоксикации.

5. Обосновать комплекс информативных критериально-диагностических показателей для эколого-токонкологической оценки пестицидной интоксикации и апробировать его в натурных условиях.

Научная новизна и теоретическая значимость.

Впервые проведен сравнительный комплексный анализ воздействия пестицидов разных классов на свободнорадикаль-ные процессы и схруктурно-функциональное состояние мембран у рыб и теплокровных животных в целях эколого-шгие-нического нормирования.

Установлен один из важных механизмов токсического действия исследуемых групп пестицидов на ихтиофауну - ауто-окислительное поражение, включающее образование активных форм кислорода, интенсификацию перекисного окисления липидов, лабилизацшо и деструкцию биомембран.

Результаты проведенных комплексных исследований позволяют сформулировать целостное представление о роли сво-боднорадикальных процессов в развитии ответной реакции организма теплокровных и ихтиофауны на действие пестицидов.

Выявлены количественные корреляционно-регрессионные зависимости между токсиколого-гигиеническими и зко-лого-рыбохозяйственными показателями токсичности и опасности, включая критериальный комплекс оценки свободно-радикальной патологии при пестицидной интоксикации, что явилось научной основой для разработки соответствующих моделей прогноза.

Разработаны теоретические основы для своевременной эколого-токсикологической диагностики хлор-, фосфорорга-нической и пиретроидной интоксикации, что позволяет оценивать химическое поражение на разных стадиях патологического процесса.

Практическая значимость работы.

Практическая значимость работы заключается в разработке и апробации в натурных условиях комплекса чувствительных и информативных критериально-диагностических показателей оценки развития патологического процесса при пестпцидной интоксикации. Полученные результаты исследований были использованы для разработки рыбохозяйственных и гигиенических нормативов пестицидов в воде водоемов.

Определены 60 ПДК и 21 ОБУВ пестицидов для рыбохо-зяйственных водоемов "Перечень предельно допустимых концентраций и ориентировочно безопасных уровней воздействия вредных веществ для воды рыбохозяйственных водоемов" (1995). Обоснованы предельно допустимые концентрации в воде водоемов хозяйственно-питьевого назначения пестицидов Хармони, Титуса, Лондакса (утверждены 12.11.91 г. приказ N 6039-91 Минздрава СССР).

Материал был использован при подготовке - Санитарных правил "Хранение, транспортирование и применение пестицидов в народном хозяйстве" (на утверждении). - Методических указаний "Гигиенический мониторинг состояния водоисточников в условиях регистрационных испытаний пестицидов при их применении в сельском хозяйстве" (МУ 2.1.5.00097; на утверждении). - "Методических рекомендаций по применению информативных биохимических методов диагностики пестицидной интоксикации" (1996). - "Методических рекомендаций по применению расчетного метода обоснования ориентировочных безопасных уровней воздействия (ОБУВ) пестицидов для воды рыбохозяйственных водоемов" (1996).

Включены в "Положение о регистрационных испытаниях и регистрации пестицидов в Российской Федерации" науч-

но обоснованные требования по обеспечению безопасности водоемов хозяйственно-питьевого н рыбохозяйственного назначения.

По методическим приемам, используемым в диссертации, получено 1 изобретение (авторское свидетельство N1693548 "Способ определения пестицидной интоксикации рыб").

Результаты диссертационной работы внедрены на кафедре биохимии и микробиологии Ростовского Госуниверситета.

Внедрения подтверждены актами и справками.

Результаты работы доложены и обсуждены на:

Научно-техническом совете Главрыбвода Минрыбхоза СССР и Государственного Комитета Российской Федерации по рыболовству в 1985-1996 г.г. ежегодно. Научно-консуль-татнвном Совете по рыбохозяйственной токсикологии Межведомственной Ихтиологической комиссии в Дубне (1991) и в п. Борок (1994). Симпозиуме Европейской Ассоциации Защиты Растений по проблеме международной гармонизации регистрации средств защиты растений. Голицыно, Россия (1994). Симпозиуме "Методы ихтиологических исследований", Ленинград (1987). Втором симпозиуме по экологической биохимии рыб. Ростов-Великий (1990). Второй Всесоюзной конференции по рыбохозяйственной токсикологии. Санкт-Петербург (1991). Международной научной конференции "Проблемы рационального использования биоресурсов водохранилищ". Киев (1995). Пятом Международном конгрессе по белковому протеину "ЬеаГР1Ю-96". Ростов-на-Дону (1996). Втором Международном конгрессе "Вода-экология и технология". Москва (1996). Второй Международной конференции " Гипоксия в медицине". Москва (1996). Ученых Советах Азовского НИИ рыбного хозяйстве в 1985-1996 г.г. ежегодно. Научно-практических конференциях в США (1991), Великобритании (1994), Германии (1994).

Апробация диссертации проведена на Межотдельческой конференции Московского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (11.07.97 г.).

Публикации.

Материалы диссертации нашли свое отражение в 39 публикациях, из них -1 монография.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Общие закономерности и механизмы развития свободно-радшсальной патологии и изменений структурно-функционального состояния биомембран при действии пестицидов различных химических классов.

2. Корреляционно-регрессионная зависимость между токси-колого-гигиеническими и эколого-рыбохозяйственными показателями токсичности и опасности, включая общие механизмы развития свободнорадикальной патологии.

3. Комплекс чувствительных н информативных критериально-диагностических показателей оценки различных стадий развития патологического процесса, использованный для методического обеспечения исследований по регламентации пестицидов в воде водоемов.

Структура диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения; обзора литературы; главы, посвященной обоснованию направлений и этапов работы и выбора методов исследований; 6-ти глав собственных исследований; обсуждения результатов; выводов и списка литературы. Текст изложен наЗЗЗстраницах машино-. писи; иллюстрирован .^таблицами, М. рисунками, ? схемами, указатель литературы содержит ¿^источников, из них.'.^отечественных и .'ЛУиностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕМ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в рамках отдела токсикологии МНИИГим. Ф.Ф.Эрисмана, отдела рыбохозяйственной токсикологии АзНИИРХ, кафедры биохимии и микробиологии и Биологического НИИ Ростовского Госуниверситета (с личным вкладом не менее 80%) и обобщает результаты многолетних (1984-1996 г.г.) исследований в соответствии с программой Госсанэпиднадзора России N 02/12 "Разработка научных основ гигиенической регламентации применения пестицидов в народном хозяйстве", планами Госкомитета по науке и технике по проблеме "Разработать научные основы изучения качества водной среды и охраны внутренних водоемов от загрязнения" и научно-исследовательских работ Государственного Комитета Российской Федерации по рыболовству согласно Государственной программы "Научно-техническое обеспечение развития рыбного хозяйства России в 1993-1995 г.г. и на период до 2000 года по теме "Разработать научные основы экологического мониторинга и охраны водных экосистем рыбохозяйственных водоемов".

Эксперименты выполнены на рыбах, относящихся по чувствительности к трем основным группам (Строганов Н.С., 1971:

а) высокочувствительные - судак /Lucioperca lueioperca L.

б) среднечувствительные - лещ / Abramis brama L./

в) слабочувствительные - карп i Cuprinus carpió L./

Тератогенное, действие исследовали на икре и предличин-

ках осетровых рыб (Acipenseridae).

Объектами исследования являлись также химически чистые соединения и препаративные формы 20 пестицидов трех основных классов (хлор-, фосфорорганическпе и пиретронд-ные) отечественного и иностранного производства.

В работе использовались отдельные фрагменты совместных исследований с сотрудниками кафедры биохимии и микробиологии Ростовского Госуниверситета (д.б.н. Внуков В.В., к.б.н. Мшпотина Н.П.), НИИ механики и прикладной математики РГУ (к.ф-м.н. Селютин В.В.), отдела рыбохозяйствен-

ной токсикологии АзНИИРХ (д.б.н. Гвозденко С.И., с.н.с. Кузнецова Л.Я., Смыр Т.М., н.с. Левина И.Л.).

Всего было использовано 30 показателей, проведено 41023 анализа.

Компьютерная статистическая обработка материала осуществлялась на IBM PC AT с использованием пакета прикладных статистических программ ("STATGRAPHICS", "ARM" и др.). Объем и направления исследований представлены в таблице 1.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследованиями 20 пестицидов трех основных классов (хлор-, фосфорорганических и пнретроидных) определены токсикометрические параметры с установлением летальных концентраций на основе выживаемости разных видов рыб (табл. 2). Результаты изучения дозоэффективных зависимостей свидетельствовали о том, что большинство пестицидов относится к высокотоксичным (кельтан, суффикс, актеллик, маврик, суми-альфа, циперкил, карате, бульдок, фастак и де-цис) и среднетоксичным (тиодан, валексон, базудин и суми-цидин) соединениям по уровню летальных концентраций. Величины последних более, чем в 15% случаев превышаются соответствующими уровнями ПДК в воде хозяйственно-питьевого назначения, что обуславливает потенциальную опасность пестицидов для водных экосистем и санитарного состояния водоемов.

Установлено повышение токсичности хлорорганпческих пестицидов для лещей в ряду: 2,4-ДМА < ГХЦГ < рамрод < ПХП < тиодан < суффикс < кельтан. Карпы менее чувствительны к воздействию суффикса, кельтана и ГХЦГ по сравнению с лещами.

Фосфорорганические пестициды по степени токсичности для лещей распределились следующим образом: рицид П < метафос < валексон< базудин < актеллик.

Таблица 1

Направления и объем исследовании

NN Направления п/п исследований

Показатели

Объем исследований (кол-во анализов)

Экспериментальные

Натурные

Определение концентраций пестицидов в рыбе

Изучение токсического воздействия пестицидов на гидробионты

а) токсикометрия (лещ, карп, судак)

гжх

1.Параметры токсикометрии

3.

2. Поведение, реакции на внешние раздражители, частота дыхания, состояние жаберного аппарата

б) тератогенез (икра и предличинки осетровых рыб) Патоморфологические Биохимические и биофизические исследования на рыбах

Супероксиддисмутаза (СОД) Каталаза Общий белок Диск - электрофорез Флуоресценция

Суммарная пероксидаз-ная активность(СПА)

а) цельная кровь

б) плазма

в) сыворотка

3820

7640

ЗОЮ

560 560 165 120 112

1610

360

3360

6720

912

1

2

Окончание таблицы 1

NN Направления п/п исследований

Показатели

Объем исследований (кол-во анализов)

Экотериме» талшые

Натурные

г) гемолизаты эритроцитов

д) суспензия мембран эритроцитов

Внеэритроцитарный гемоглобин (ВЭГ) 1610 Хемилюминесценция (ХЛ) 1824 Церулоплазмин 420 Глюкозо-6-фосфатдс-гндрогеназа (Г6ФД) 360 Кинетика окисления гемоглобина 260 Устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу 260

Шиффовые основания (ШО) 450

Диеновые хонъюгаты и диенкетоны 450

Микровязкость мембран 450 Микровязкость зон бе-лок-липндных контактов 450

Полярность окружения пирена 450

Ацетилхолинэстераза (АХЭ) 160

Малоновый диальдегид (МДА) . 720

Малоновый диальдегид 390

Аминокислотный состав водонераствори-мых белков 1' 2

4 Математическое моде- Корреляционно-регрес-

лирование сионный анализ 1280

е) гомогеиаты мозга

ж) гомогенаты печени

912 1120

165 165

66

Таблица 2

Токснкометрическпс параметры исследуемых пестицидов (мг/л)

Наименование • препарата Объект исследований лк50 пдк гигиенические

Хлорорганические пестициды

Кельтан лещ карп 0.0067 0.05 0.02*

Суффикс лещ карп судак 0.064 0.359 0.051 1.0*

гхцг лещ карп 4.38 6.86 0.02

Г1ХП лещ 1.16 -

2,4 - ДМА лещ 25.88 0.002

Рамрод лещ 2.54 0.05

Тиодан лещ 0.236 -

Ф о сфорорганические пестициды

Валексон лещ карп 0.419 0.699 0.002

Актелик лещ карп судак 0.047 0.066 0.05 0.01

Рицид лещ карп 22.72 43.40 0.003

Базудии лещ 0.366 0.004

Метафос лещ 13.03 0.002

Пиретроидные пестициды

Маврлк лещ 0.0026 0.002

Сумн-альфа лещ 0.0029 0.003

Циперкил лещ 0.052 0.006

Карате лещ 0.0025 0.01 *

Бульдок карп 0.016 -

Фастак карп 0.0049 0.002

Сумнцидин карп 0.222 0.015

Децис карп 0.018 0.006

* - превышение гигиенических ПДК по сравнению с ЛК50рыб

Токсикометрические параметры пиретроидов для лещей свидетельствовали о том, что токсичность маврика, суми-аль-фа и карате примерно одинакова. Вместе с тем, циперкил оказался для лещей на порядок менее токсичен.

По степени ост рой токсичности для карпов исследуемые пиретроиды расположились в ряду следующим образом: су-мицидин < децис < бульдок < фастак.

Анализ токспкометрических данных позволил установить количественные уровни величин, близких к пороговым, для определения системы оценки пестицидной интоксикации и роли свободнорадикальных процессов в механизмах ее развития. Исследования пестицидной интоксикации на уровне токсического действия на организм факторов малой интенсивности приобретают высокий диагностический потенциал, а поиск информативных (приоритетных) методов ее оценки является важной проблемой гигиены.

СВОБОДНО?АДИКАЛЬНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ХЛОР-

И ФОСФОРОРГАНИЧЕСКОЙ ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

В результате многолетних натурно-экспериментальных исследований установлены основные закономерности и разработана модель интоксикации ихтиофауны при воздействии хлор- и фосфорорганических пестицидов, основные положения которой приводятся на схеме 1.

Токсический эффект ХОС- и ФОС пестицидов на ихтиофауну реализуется на основе общих неспецифических механизмов, к которым относятся:

- активация свободнорадикальных процессов в сыворотке крови и усиление уровня ПОЛ в печени рыб. Усиление свободнорадикальных процессов в сыворотке крови рыб подтверждено в наших экспериментах результатами ХЛ-анализа при воздействии ХОП - 2,4-ДМА, ГХЦГ, суффикса, кельтана и при действии ФОП - метафоса, рицида П, валексона (рис. 1). Следует отметить, чт о применение высокочувствительного метода Н202 и люминол-Н202-индуцированной ХЛ позволяет оценить интенсивность генерации важнейших АФК -супероксида (02) и гидроксильного радикала (ОН), обладающего наибольшим цитотоксическим потенциалом (Владимиров Ю.А. и др., ¡991). Именно эти виды АФК наиболее эффективно стимулируют ПОЛ в липидной фазе биомембран (Ка-ганВ.Е. и др., 1985; Владимиров Ю.А. и др., 1991). Как показано нами, действие рамрода и метафоса приводит к накоплению вторичного молекулярного продукта ПОЛ - малонового диальдегида /МДА/ в гомогенатах печени леща (рис. 1);

- повышение активности церулоплазмина в сыворотке крови рыб под действием рамрода, указывающее на развитие острой фазы при пестицидной интоксикации (Ларский Э.Г., 1990).

- нарушение стабильности эритроцитарных мембран, результатом которого явилось увеличение уровня ВЭГ в сыворотке крови, отражающее степень гемолиза эритроцитов, а также СП А, изменение которой тесно связано с содержанием

Повреждение биомембран

Нарушение стабильности мембран эритроцитов

Гипер

Выход гемоглобина в сыворотку крови

Снижение устойчи- фермен-вости к тация гемолизу

-^-

Вторичное усиление ПОЛ

4, Снижение количества эритроцитов

Пестициды (ХОС, ФОС) Усиление СРП Активация ПОЛ

Нарушение функции

Г" 1

Эритроциты

Мозг

Структур-

I

Ингиби-

Нарушение О,- транспортной функции крови

Гипоксия

I

Дезорганизация структуры и функции клетки

Повреждение макромолекул

Окислительная Фрагментация модификация и олигомериза-белков ция белков

ио-кон- рование у

формаци- АТФ-аз Ишибиро-

онные - ваниеАХЭ

изменения НЬ

Изменение аминокислотного состава

Гиперхоли-нерги-ческий сдвиг

Накопление дефектных молекул с антигенными свойствами

Иммунные реакции, воспаление, генерация АФК

Схема 1. Общие механизмы хлор- и фосфороргаиической пестицидной интоксикации

Рис. 1. Изменение светосуммы люминол - Н,02 индуцированной хемилюминеецекции (ХЛ) в сыворотке крови и уровня малонового диальдсгида (МДА) в печени рыб под влиянием ХОП и ФОП

железа, тема, гемина, гемоглобина и миелопероксидазы (рис, 2). При воздействии ПХП и базудина показано снижение устойчивости эритроцитов к кислотному гемолизу, что проявлялось в повышении содержания фракций низко- и понижен-поустойчивых эритроцитов и снижении содержания фракций средне- и повышенноустойчивых (рис. 3). Это свидетельствует об изменении структуры популяции эритроцитов с преобладанием клеток с мембраной пониженной устойчивости.

- одним из направлений исследования по характеристике мембранотокснческого действия пестицидов явилось определение функционального состояния молекулы гемоглобина. Для этой цели регистрировали кинетику окисления гемоглобина в метгемоглобин, которая отражает степень повреждения нативной структуры молекулы дыхательного пигмента. Установлено, что хлор органическая интоксикация может сопровождаться как увеличением, так и снижением времени окисления гемоглобина. Воздействие фосфорорганических пестицидов характеризуется увеличением времени нитритного окисления гемоглобина (рис. 3). Конформационно-структурные изменения в молекуле гемоглобина при действии пестицидов могут привести к гемнческой гипоксии, при которой стр адает кислородтранспортная функция эритроцитов (Середенко М.М., 1987);

- дестабилизация мембран эритроцитов сопровождалась изменением функционирования мембранных ферментов. В условиях пестицидной интоксикации при действии ГХЦГ и базудина на лещей и карпов выявлено снижение активности Н;Г, К+-АТФ-азы и М^'2+-АТФ-ат?ы, поддерживающих ионный гомеостаз и функциональную активность красных кровяных клеток. Одним из проявлений дестабилизации биомембран является гиперферментемия, связанная с появлением в сыворотке крови ферментов, имеющих внутриклеточную локализацию. Установлено повышение активности глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в сыворотке крови рыб при действии 2,4-ДМА;

- однотипные изменения структуры белков сыворотки крови и водонерастворимых белков печени рыб. Активация

Ы

о

Метафх

СПА

(2010080 § «о

а.

§ 40

я:

5 20 о -20 -40

48 часов у 24 часа

4 6

вэг

Кельтан

48 ч

□ 24 часа Н48 часов

1 3 4 5 6 7

Рис. 2. Изменение уровня суммарной пероксидазной активности (СПА) и внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) в сыворотке крови леще» при действии ХОП и ФОП

Устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу

Кинетика полуокисления гемоглобина 10,5НЬ

Рис. 3. Изменение устойчивости эритроцитов к кислотному гемолизу и кинетики полуокисления гемоглобина лещей при действии ХОП и ФОП

СРП при действии пестицидов приводит к повреждению макромолекул и, прежде всего, белков. АФК и продукты ПОЛ, накапливающиеся при пестицидной интоксикации, способствуют окислительной модификации белков. Повреждающее действие липоперекисей на белки проявляется в окислении 8Н-групп (Владимиров Ю.А. и др., 1991). Бифункциональные продукты ПОЛ типа МДА образуют поперечные сшивки в полипептидных цепях, взаимодействуя с аминогруппой лизина (Каган В.Е. и др., 1985).

Установлено снижение интенсивности натизной флуоресценции белков сыворотки крови при воздействии валексона и кельтана, что может свидетельствовать о комплексировании белков, либо об изменении числа фракций, обогащенных циклическими аминокислотами в результате изменения биосинтеза белков в печени. Проведенный анализ аминокислотного состава белков печени при действии актеллика и ГХЦГ выявил снижение содержания гидрофобных аминокислот, в том числе значительное уменьшение уровня циклических. Данные литературы свидетельствуют о возможности окисления таких аминокислот в белках, как цистеин, триптофан, метионин, тирозин (Владимиров Ю.А., Арчаков А.Н., 1972).

Действие кельтана приводит к изменению фракционного состава белков сыворотки крови, показанное методом диск-электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия. Установлено, что в условиях пестицидной интоксикации происходит как увеличение числа низкомолекулярных фракций, так и появление белковых фракций с большей молекулярной массой. Можно полагать, что фрагментация белков сыворотки крови может быть связана с активацией протеолиза или повреждением мембран лизосом и выходом пептид-гвдролаз широкого спектра действия, которые начинают атаковать эндогенные субстраты. Олигомеризация белков сыворотки крови при действии кельтана может быть следствием поперечного сшивания полипептидных связей с помощью вторичных продуктов ПОЛ типа МДА. Появление белковых фракций с большей молекулярной массой может быть обусловлено полимеризацией белков путем ковалентного связывания с

помощью свободнорадикальных продуктов. Окислительная модификация белков, наряду с фрагментацией и олигомери-зацией способствует появлению дефектных молекул с антигенными свойствами, что сопровождается запуском аутоиммунных реакций и развитием патологического процесса.

Действие ФОП характеризуется наличием пускового специфического механизма - ннгибировашга АХЭ мозга, что подтверждено результатами исследования воздействия метафоса на рыб.

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что токсический эффект хлор- и фосфорорганических пестицидов реализуется с помощью общих неспецифических механизмов, к которым относятся усиление генерации АФК, активация ПОЛ, нарушение стабильности и функциональной активности мембран эритроцитов.

Нарушение стабильности мембран эритроцитов, сопровождающееся выходом в сыворотку крови мощных проокси-дантов, активирующих ПОЛ, являются важными механизмами усиления свободнорадикального повреждения биополимеров, клеток и тканей. Все это позволяет рассматривать хлор-и фосфорорганическую интоксикацию как свободнорадикаль-ную патологию.

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ И СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН В МЕХАНИЗМЕ ДЕЙСТВИЯ ПИРЕТРОИДОВ

На основании анализа собственных материалов и данных литературы нами предложена модель токсического действия пиретроидов на ихтиофауну, основные положения которой отражены на схеме 2.

- пиретроидная интоксикация сопровождается выраженной в различной степени интоксикацией ПОЛ, о чем свидетельствует накопление первичных (диеновые конъюгаты), вторичных (МДА) и конечных (Шиффовые основания) молеку-

ы ■к

Активация церулоплазмина Развитие реакции острой фазы

ПИРЕТРОИДЫ Генерация АФК

_ Ингибирование или дисфункция антиоксидантных ферментов

Г

Мозг

—т~

Печень

V

Активация ПОЛ

Мембраны эритроцитов Повреждение биомембран

Ф

I- Нарушение физического состояния мембран эритроцитов

Изменение микровязкос- Изменение микровязкости зон

ти липидного бислоя белок-липидных контактов

Плазма крови

Изменение степени погружения белков в липидный бислой

Нарушение вязко-эластичных свойств

Нарушение микроциркуляции

Нарушение липид-липидных, белок-липидных взаимодействий

Внутрикапиллярный

гемолиз Т1 ф

Вторичное усиление ПОЛ

Нарушение работы мембранных ферментов, рецепторов, каналов ионной проводимости

Нарушение функции эритроцитов

Гипоксия

Схема 2. Общие механизмы пиретроидной пестицидной интоксикации

лярных продуктов в плазме крови, мембранах эритроцитов, мозгу и печени рыб (рис. 4);

- снижение активости ферментов-синергистов - СОД ика-талазы (рис. 4), которые являются первичными звеньями ан-тиоксидантной ферментной системы организма, регулируя свободнорадикальное окисление на стадии активации кислорода и зарождения цели;

- высокий уровень интенсификации ПОЛ в крови и мозгу рыб сопровождается существенной активацией оксидазной активности -церулоплазмина ь плазме крови рыб (рис. 4);

- нарушение структурных свойств мембран эритроцитов рыб характеризуется изменением таких параметров, как относительная микровязкость липидного бислоя, микровязкость зон белок-липидных контактов и степени погружения белков в лнпидный бислой.

Полученные результаты свидетельствуют о повышении относительной микровязкости липидного бислоя мембран эритроцитов рыб при действии фастака, дециса, маврика, тогда как при экспозициях с бульдоком и сумицидином наблюдается снижение данного параметра (рис. 5). Известно, что важнейшими регуляторами микровязкости или текучести ли-пидной фазы биомембран являются степень насыщенности жирнокислотных цепей фосфолипидов, содержание холестерина, белка и состав мембранных липидов (Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980; Крепе Е.М. и др., 1987).

Повышение относительной микровязкости липидного бислоя мембран эритроцитов при пиретроидной интоксикации согласуется с интенсификацией ПОЛ, которая наиболее выражена при действии фастака, маврика, дециса. Усиление ПОЛ в липидном бислое мембран снижает степень ненасыщенности фосфолипидов, приводя к повышению микровязкости. Снижение текучести эритроцитарных мембран способствует нарастанию регидности клетки, что может явиться причиной задержки эритроцитов в микрососудистом русле и внут-рикапиллярного гемолиза. Это, в свою очередь, приводит к выходу в плазму крови гемоглобина и продуктов его деструкции, являющихся катализаторами свободнорадикальных процессов и вторичному усилению ПОЛ.

Ы)

с*

8

о

Продукты перекисного окисления липидов

% 200 150 100 50 0 -50

ФАСТАК МЕМБРАН АЭРИТРОЦИТОВ ПЛАЗМА

МОЗГ

СУМИЦИДИН

МЕМБРАНА ЭРИТГОЦИТОЕ

Диеновые Шиффовыс коньюгаты основания

МДА

Диеновые Шиффовые коньюгаты основания

3

МДА

4

МДА

24 часа ■43 43001 96 часо!

: % 80 60 40 20 0 -20 -40 -60 -80 -100

ПЛАЗМА

Активность антиоксидантных ферментов

ФАСТАК СУМИЦИДИН

ЭРИТРОЦИТЫ ЭРИТРОЦИТЫ

СОД

Катал аза

1

Церулоплазмин

/.у/"У

ш

Iш

т...., ШШ.

СОД

Каталаза

24 часа 48 часся 96 часо!

Рис. 4. Изменение содержания продуктов перекисного окисления липидов в мозге п крови и активности антиоксидантных ферментов в крови рыб при действии пиретроидов

4

ФЛСТАК

Микровязкость мембран эритроцитов

БУЛЬДОК СУМИЦИДИН ДЕЦИС

Рэ/Рм(286)

' 24 часа 1 48 часов ' 96 часов

РэЛ?м(334) Рэ/м(286)

4 5 6

Рэ/Рм(334) Рэ/Рм(286)

°У<>\5Ъ

£

100 .. 50 -0 -50 -100

Степень погружения белков в лкпидныи слой

БУЛЬДОК

24 часа 48 часов ° 96 часов

ДЕЦИС

1

ФАСТАК

««1

СУМИЦИДИН

-а Рис. 5. Изменение микровязкости мембран эритроцитов и степени погружения белков в липидныи бислой мембран эритроцитов рыб при ниретроидной интоксикации

Снижение относительной микровязкости лиивдного бис-лоя при действии бульдока и сумицидина согласуется с незначительным изменением интенсивности ПОЛ и повышением активности антиоксидантных ферментов. Такие изменения могут носить компенсаторный характер.

Пиретроиды вызывают изменение степени погружения белков в липидный бислой мембран эритроцитов. При действии маврика, бульдока и дециса наблюдается снижение данного параметра, а фастак и сумицидин приводят к повышению степени погружения мембранных белков в лишщный матрикс. Это отражает разнообразное влияние продуктов ПОЛ, образующихся в аннулярных липидах, на мембранные белки. Продукты ПОЛ могут способствовать как жесткой фиксации белков в липвдном бислое за счет поперечных межмолекулярных сшивок, так и солюбилизации, сопровождающейся выходом мембранных белков в цитозоль.

Таким образом, можно заключить, что токсическое действие пиретроидов реализуется через активацию ПОЛ, инги-бирование антиоксидантных механизмов и нарушение структурной организации мембран эритроцитов. Это, в свою очередь, приводит к расстройствам микроциркуляции, внутри-капиллярному гемолизу, нарушению функции красных кровяных клеток и гипоксии, которая путем дополнительного усиления ПОЛ замыкает порочный круг патологических сдвигов, вызванных действием пиретроидов.

Формирование ответных реакций ихтиофауны на действие трех классов пестицидов реализуется на основе общих молекулярных механизмов токсичности. Однако, в основе токсического эффекта, вызываемого пиретроидами, лидирующим, по-видимому, является их мембранотропное действие. Если ХОС и ФОС являются по данным литературы (Сокяоуг А., е1 а!., 1989; Иитап 1.1., е1 а1., 1990) и нашим иследованиям прямыми индукторами свободнорадикальных процессов, то пиретроиды, оказывая существенное влияние на структурно-функциональное состояние мембран, по-видимому, действуют на СРП опосредованно. Доказательством этого является установленное нами значительное увеличение интенсивности

XJI при действии ХОС и ФОС (медианное превышение индекса активности составляет более 200%). При воздействии пиретроидов интенсивность XJI изменяется незначительно. Эти данные согласуются с материалами, полученными при исследовании влияния пиретроидов па теплокровных животных (Леоненко О.Б., Каган Ю.С., 1994). Мембранотропными свойствами пиретроидов, очевидно, можно объяснить более выраженную их нейротоксичность, по сравнению с ХОС и ФОС (Bradbury S.P., Coats J.R., 1989).

РАЗРАБОТКА ЭКОЛОГО-РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

КРИТЕРИЕВ ДИАГНОСТИКИ ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Разработанная научная концепция пестицидной интоксикации послужила теоретической основой для обоснования комплекса информативных критериально-диагностических показателей для эколого-токсикологической оценки пестицидов, состоящей из двух групп критериев:

- первая группа характеризует инициирующие пусковые механизмы токсического стресса.

К первой группе критериев следует отнести - определение светосуммы Н202 - и лгоминол-Н202 - индуцированной ХЛ сыворотки крови рыб, определение уровня первичных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов - в плазме крови и мембранах эритроцитов, определение активности ферментов супе-роксиддисмутазы, каталазы, оксидазной активности церулоп-лазмина;

- вторая группа критериев характеризует последующие стадии развития интоксикации и включает определение СПА, ВЭГ, активности Г6ФД, Na+, К+ - АТФ-азы, Mg2+ - АТФ-азы и определение структурных параметров мембран эритроцитов.

Наиболее эффективным и приоритетным тестом ХОС-интоксикацни является светосумма индуцированной ХЛ. Медианное значение превышения индекса активности составляет более 200%.

Показатели стабильности мембран эритроцитов - ВЭГ и СПА -являются информативными при оценке степени и глубины ХОС- и ФОС интоксикации (превышения индекса активности 40% и 47%, соответственно). Установлена прямая корреляционная зависимость (г = 0.62) между степенью токсичности пестицидов и содержанием ВЭГ в сыворотке крови лещей.

Определение активности антиоксидантных ферментов, а также относительной микровязкости эритроцитарных мембран являются чувствительными критериями пиретроидной интоксикации. Медианное значение снижения индекса активности СОД составляет 40%; на 59% увеличивается индекс активности каталазы; изменение индекса относительной микровязкости эритроцитарных мембран составило около 30%.

Апробация комплекса критериально-диагностических показателей пестицидной интоксикации проводилась в натурных условиях на акватории Таганрогского залива Азовского моря на базе р/к "Первомайский".

Исследованиями ряда лет на нескольких поколениях судака была подтверждена перспективность апробируемых биохимических критериев при определении уровня хронической интоксикации организма хищных рыб хлорорганическими пестицидами (табл. 3).

Следствием кумуляции хлорорганического пестицида ДДЕ в тканях явилось стойкое увеличение уровня ХЛ и ВЭГ в сыворотке крови судаков старших возрастных групп по сравнению с двухлетками.

Разработанный и апробированный нами комплекс критериально-диагностических показателей, характеризующий один из важнейших механизмов токсического действия пестицидов -аутоокислительное поражение, явился основой для обоснования пороговых и недействующих концентраций пестицидов основных химических классов, разработки 60 ПДК для рыбохозяйственных водоемов и подготовки соответствующей методической литературы.

Таблица 3

Критериально-диагностические показатели ХОС-интокснкации в сыворотке крови судака разного возраста (п=35 для каждой возрастной группы)

Диагностический критерий Содержание ДДЕ в головном мозге ХЛ, имп./ЮО сек. ВЭГ, мг %

Судак

2 года 0.57110.045 109.6113.1 10.7811.58

3 года 1.23±0.09* 286.0148.0* 37.8516.88*

4 года 1.27±0.11* 1264.01154.0* 40.8816.70*

7 - 9 лет 2.07±0.17* 1593.01199.4* 26.3212.99*

Примечание: * - статистически достоверные изменения по отношению к 2-леткам

ВЗАИМОСВЯЗЬ ГИГИЕНИЧЕСКИХ И ЭКОЛОГО-РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КРИТЕРИЕВ ОЦЕНКИ ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Разработка методов оценки токсического действия пестицидов на ихтиофауну и установление параметров их токсичности в условиях математического моделирования позволили установить количественные зависимости между токси-колого-гигиеническими и эколого-рыбохозяйственными показателями токсичности и опасности пестицидов.

Исходным материалом служили показатели острой токсичности рыб и крыс. Для первых - достаточно надежно определяемая концентрация ЬС50, для крыс - среднелетальная доза ЬО50. При построении эмпирической модели использовали 17 пар показателен, причем, в качестве гест-объектов ихтиофауны использовались как менее чувствительные - карпы, так и более восприимчивые к токсическому воздействию - лещи. Несмотря на разнообразие пестицидов и применяемых тест-объекгов установлена корреляционная взаимосвязь (коэф.кор-

рслящш 0.53) токсиколого-гигиенических и эколого-рыбохо-зяйственных критериев оценки токсичности пестицидов.

В прогностических целях могут быть использованы два равноценных уравнения:

У(= -0.47 + 1.33Хг (стандартная ошибка БЕ=1.1)

Уг = 1.94 + 0.21ХГ (стандартная ошибка 8 Е=0.43), где Уг = ЬС50.104 рыб, Уг = 1ЛЭ50 крыс

Хг = ^ ЬБ50 крыс, Хг = 1« ЬС50.1 04 рыб.

Учитывая трудоемкость и высокую стоимость гигиенических исследований по установлению эффекта тератогенного действия пестицидов на организм теплокровных животных и значительно меньшие затраты при выявлении этого эффекта на гидробнонтах нами определена количественная зависимость между этими показателями для прогнозирования тератогенного эффекта.

В результате обнаружена значимая вероятность связи между эффектами тератогенности пестицидов для теплокровных животных и водных организмов. Коэффициент сопряженности составляет 1.2, а коэффициент корреляции - 0.64, что свидетельствует о значимости связи на уровне, близком к 90%.

Таким образом, выявление тератогенного эффекта на гидробнонтах может быть с высокой степенью вероятности экстраполировано на теплокровных.

Установление количественных зависимостей критериев, отражающих развитие свободнорадикальной патологии у ихтиофауны и крыс исследовано для актеллика, маврика, деци-са и фастака.

Критерием реакции организма на токсическое воздействие пестицидов был избран индекс - отношение уровня накопления малонового диальдегида в тканях и интенсивности хемилюминесцснции в сыворотке крови в опыте к контролю.

Использование методов регрессионного статистического анализа позволило выявить статистическую связь на значимом уровне (коэф.корреляцшг 0.765) для критериев, отражающих интенсивность свободнорадикальных процессов при воздействии пестицидов на ихтиофауну и теплокровных. 32

Полученные аналитические выражения, которые могут использоваться в расчетах, представлены ниже:

1г = 0.33+0.7 Ц. (стандартная ошибка 8Е=0.22)

1Г = 0.18+0.8 31г (стандартная ошибка 8Е=0.24),

где 1г, 1Г- индексы изменения активности свободнорадн-

кальных процессов для крыс и рыб, соответственно.

Учитывая, что усиление ПОЛ при действии пестицидов можно рассматривать как признак общей неспецифической реакции на токсическое воздействие (Мхитарян В.Г. и др., 1982), установление взаимосвязей между свободнорадикаль-ными процессами в тканях рыб и теплокровных позволило подтвердить общность механизмов пестицидной интоксикации и определило возможность использовать установленные нами критерии в качестве модели прогнозирования параметров токсичности и опасности при воздействии пестицидов на теплокровных на основе ихтиофауны.

Следовательно, результаты математического моделирования позволили установить взаимосвязь гигиенических и эколого-рыбохозяйственных параметров токсичности и опасности пестицидов и разработать на этой основе соответствующие прогностические модели.

Это позволяет использовать ихтиофауну в качестве адекватной экспресс-модели для прогнозирования степени токсичности и опасности пестицидов для теплокровных, включая общие механизмы свободнорадикальной патологии.

Таким образом, в результате многолетних лабораторных и натурных исследований установлены общие закономерности и механизмы развития свободнорадикальной патологии при действии пестицидов различных химических классов. Разработан и апробирован комплекс чувствительных и информативных критериально-диагностических показателей оценки развития патологического процесса при пестицидной интоксикации. Выявлены корреляционно-регрессионные зависимости между токсиколого-гигиеническими и эколого-рыбо-хозяйственнымн показателями токсичности и опасности,

включая свободнорадикальные критерии оценки, что повышает надежность научною обоснования гигиенической и эко-лого-рыбохозяйственной регламентации пестицидов в водных экосистемах.

ВЫВОДЫ

1. Результаты изучения дозоэффективных зависимостей воздействия пестицидов основных химических классов на ихтиофауну свидетельствуют о том, что большинство из них относится к высокотоксичным (кельтан, суффикс, актеллик, маврик, суми-альфа, цииеркил, карате, бульдок, фастак, де-цис) и среднетоксичным (тиодан, валексон, базудин, сумици-дин) соединениям по уровню летальных концентраций. Величины последних более, чем в 15% случаев превышаются соответствующими уровнями ПДК в воде хозяйственно-питьевого назначения, что обуславливает потенциальную опасность пестицидов для водных экосистем, санитарного состояния водоемов и здоровья населения.

2. В результате многолетних натурно-экспериментальных исследований установлены общие закономерности и механизмы токсического действия пестицидов различных классов (активация свободнорадикальных процессов, регулируемых системой антиоксидантной защиты, нарушение стабильности и структурно-функциональных параметров бномембран, приводящие к дезорганизации структуры и функции клеток), позволяющие дифференцировать различные стадии развития патологического процесса.

3. Доказана взаимосвязь токсичности пестицидов с изменением ряда приоритетных показателей: ХЛ (медианное значение превышения индекса активности - более 200%), СПА -47%, СОД - 40%, каталаза -59%, микровязкость эритроцитар-ных мембран - 30%. Установлена прямая корреляционная зависимость (г=0.62) между степенью токсичности ХОС и содержанием ВЭГ в сыворотке крови.

4. Разработан и апробирован в натурных условиях комплекс критериально-диагностических показателей оценки раз-

личных стадий развития патологического процесса, состоящий из двух групп критериев:

- первая группа характеризует инициирующие пусковые механизмы токсического стресса. Ведущими критериями являются светосумма хемилюминесценции и активность анти-оксидантных ферментов;

- вторая группа характеризует последующие стадии развития интоксикации. Ведущими критериями являются уровень суммарной пероксидазной активности и относительная микровязкость липидногс бислоя мембран.

5. На основе предложенног о комплекса чувствительных критериев интоксикации научно обоснованы пороговые и недействующие концентрации пестицидов основных химических классов и разработаны 60 ПДК для рыбохозяйственных водоемов.

6. Установлена корреляционная зависимость между токси-колого-гигиеническими и эколого-рыбохозяйственными показателями токсичности (ЛД5,, ЛК50 - г=0.53) н опасности (NOEL по тератогенному действию - г=0.64, патогенетические критерии свободнораднкальной патологии- накопление малонового диальдегида и интенсивность хемилюминесценции, г=0.765) п разработаны соответствующие прогностические модели.

7. Установленные общие закономерности токсикодина-мики пестицидов для теплокровных и ихтиофауны явились научной основой для внедрения в практику здравоохранения и рыбоохраны комплекса научно-методических и нормативных документов (Санитарные правила, Положение о регистрационных испытаниях и регистрации пестицидов в Российской Федерации, Методические указания и рекомендации, 63 ПДК и 21 ОБУВ в воде водоемов рыбохозяйственного и хозяйственно-питьевого назначения и др.), направленных на предупреждение неблагоприятного воздействия пестицидов на здоровье человека и качество водных экосистем.

Список работ, опубликованных но теме диссертации

I. Монография:

"Свободнораднкальные процессы в механизме действия и диагностике пестицндной интоксикации ихтиофауны'7/Ростов-на-

Дону, изд-во "Гефест", 1997. - 120С. (в соавторстве с Н.П.Милютиной, Л.Я.Кузнецовой, В.Н.Ракитским).

II. Статьи:

1. Характеристика белков сыворотки крови промысловых рыб в условиях воздействия хлор- и фосфорорганических пестицидов / /Мат-лы региональной науч.конф.молодых уч. Сев.Кавказа "Метаболизм животных и растений при экстремальных состояниях" -Ростов-на-Дону, 1985.-С.47 (с соавт.).

2. Рыбохозяйственная оценка и обоснование предельно допустимой концентрации дециса для пресноводных рыбохозяйственных водоемов //Материалы XXV Пленума Госхимкомиссин, - М., 1985. - С.202-203 (с соавт.).

3. Токсический эффект воздействия малых концентраций хлор- и фосфорорганических пестицидов на метаболизм белков сыворотки крови промысловых рыб //Сб. Тез. докл. обл. науч. конф. по итогам работы АзНИИРХвХ1 пятилетке. - Ростов-на-Дону, 4-8 февраля 1986. -С.50-51 (с соавт.).

4. Мембранотоксическое действие некоторыххлорпроюводных пестицидов в опытах на промысловых рыбах //Тез.докл.1 Всесоюзного съезда токсикологов, 15-17 окг. 1986. - Ростов н/Д, -С. 187188 (с соавт.).

5.Состояние пресноводных и солоноватоводных гидробионтов в условиях моделирования острой и хроничееккой пеетицидной интоксикации //В сб.Мат-лы Всесоюз. совещ. "Охрана природной среды морей и устьев рек", Владивост ок. 22-27 сентября 1986 г. Тез. докл., т.2, С.7-8 (с соавт.).

6. Перспективность хемилюминесцентното анализа при пеетицидной интоксикации рыб //Соврем.состояние и перспективы рац. использ, и охраны рыб. хозяйства в бассейне Азовского моря // Тез.докл.Всесоюз.конф.. ч.1,- Режим, биоресурсы водоемов и их охрана. Ростов-на-Дону, ноябрь 1987.- М., 1987.- С.68-69 (с соавт.)

7. К вопросу о диагностике хлорорганической интоксикации массовых организмов пресноводных водоемов //Тез. докл. Всесоюз. конф., ч. 1. Режим, биоресурсы водоемов и их охрана. Ростов-на-Дону. ноябрь 1987. - М., 1987. - С.67-68 (с соавт.).

36 •

8. Мембранотоксичеекий эффект воздействия пестицидов на промысловую ихтиофауну // Тез.доклд. к XXVII съезду Госхимко-миссии. -М.. 1987.-С.229-230 (с соавт.).

9. Разработка диагностических критериев в условиях моделирования хлор- и фосфорсрганической пестицидной интоксикации ихтиофауны//Методы лхтиотоксикологических исследова-шш.Тез.док.1 Всесоюзного симпозиума по методам нхтиотоксикологических исследований, -Ленинград, окт-рь, 1987. -С.53-54. (с соавт.).

10. Взаимосвязь накопления пестицидов в ихтиофауне с изменением биохимических показателей, отражающих состояние мембран Тез.докл.1 Всесоюз.конф. по рыбохоз.токсикологии, Юрмала, декабрь 1988, 4.1, Рига. - 1988. - С. 188-191.

11. Материалы исследования мембранотоксического воздействия пестицидов на ихтиофауну //Тез.докл.к ХХУП Пленуму Госхим-комиссии "Итоги госуд.испытаний пест., биопрепаратов и регуляторов роста растений в 1987 году" июнь 1988. Каунас, 1988.

- М„ С.235-236.

12. Оценка хронической интоксикации ихтиофауны Азовского моря хлорорганическими пестицидами но физиолого-биохимическо-му состоянию организма //Тез.докл.к XXYII Пленуму Госхим-комиссин ''Итоги госуд.испытаний пест., биопрепаратов и регуляторов роста растений в 1987 году" июнь 1988, Каунас, 1988.

- М., С.237-238 (с соавт.).

13. Исследование состояния бномембран Каспийских осетровых для разработки диагностических критериев миодистрофии //Тез.-науч.докт." Осетровое хоз-во водоемов СССР", ноябрь 1989, Астрахань, 1989. - С.3-4 (с соавт.).

14. Оценка хронической интоксикации самок судака Азовского моря хлорорганическими пестицидами по физиолого-биохими-ческому состоянию организма //Тез.док.к XXIX Пленуму Гос-химкомиссии 1989. - Нальчик. - М. - 1989. - С.217-218 (с соавт).

15. Лшшдный спектр эритроцитарных мембран в условиях пести-циднойинтоксикации ихтиофауны //Второй симпозиум по экологической биохимии рыб. Тезисы докл.Ростов Великий, декабрь, 1990, - Ярославль, 1990. - С. 112-114 (с соавт.).

16. Экспериментальная пиретрондная интоксикация ихтиофауны и разработка критериев её диагностики //Вторая Всесоюз.кон-ф.порыбохоз.токсикологии. Тез.докл. Санкт-Петербург, ноябрь 1991, т. 1.-Санкт-Петербург. 1991,-С.260-261 (с соавт.).

17. Оценка токсикологического состояния популяции Азовского судака // Вторая Всесоюз. конф. по рыбохоз. токсикологии. Тез. докл. Санкт-Петербург, ноябрь 1991, т. 1. - Санкт-Петербург. -1991. -С. 110-112 (с соавт.).

18. Effect of "Gaupsin" bacpreparation on sturgeons // International Sympozium on sturgeons. Abstract Bulletin. September-11, Moscow-Kostroma-Moscow. Russia, Moscow, VNIRO, 1993, 62-63,(с соавт.).

19. Evaluation of the safety of "Ambiol" and "Fumaran" pesticides // International Sympozium on sturgeons.Abstract Bulletin. September -11, Moscow-Kostroma-Moscow. Russia, Moscow, VNIRO, 1993, C.62-63,(c соавт.).

20. Методические рекомендации по применению расчетного метода обоснования ориентировочных безопасных уровней воздействия (ОБУВ) для воды рыбохозяйственных водоемов //ВНИРО, -Москва, 1994. - 10 С. (с соавт.).

21. Оценка допустимого уровня пестицидного загрязнения рыбохозяйственных водоемов на основе токснкометрических закономерностей //Проблемы рационального использования биоресурсов водохранилищ. Материалы междун. науч. конф. 6-8 сентября 1995 г., -Киев. - 1995. - С. 189-190 (с соавт.).

22. The effect of pesticide pollution on proteins of higher water plants. // Green Vegetation Fractionation Proceedings of the Fifth International Congress of Leaf Protein Research. "Leaf Pro-96", Volume 3. Russia, Rostov-on-Don, 17-21 June 1996, C. 174-176 (c соавт.).

23. Estimation of ecological safety of phytoverm based on results of embryotoxicological studies // International Ecological Congress. Proceeding and abstracts.Section: Science and Invironment. September 22-28, 1996, Voronezh, Russia, 121-122 (с соавт.).

24. The use of the mathematical methods in assessing the admissible level of pesticides pollutions in waterbodies with commercial fisheries //International Ecological Congress. Proceeding and abstracts. Scction: Science and Invironment. September 22-28.1996, Voronezh, Russia, C.85 (с соавт.).

25. Оценка мутагенного и тератогенного потенциала новых пестицидов для водных биоценозов //"Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре". Международный симпозиум. Тезисы докл. Октябрь, 21-24, 1996 г.Адлер, Россия, - Краснодар, 1996, - С.42 (с соавт.).

26. Оценка допустимого уровня пестицидного загрязнения рыбо-хозяйстветшых водоемов на основе токсикометрических закономерностей// "Вода :экологня и технология "Второй международный конгрессЭКВАТЭК-96". Тезисы докладов. Москва, 1721 сентября 1996 года, -С.31-32. (с соавт.).

27. Гипоксия как лимитирующий показатель при гигиенической регламентации влияния пестицидов на эмбриогенез осетровых рыб //Вторая Международная конференция "Гипоксия в медицине", 19-26 июня, 1996. - Москва, Россия, -С.27 (с соавт.).

28. Исследование состояния бпомембран для диагностики пести-цидной интоксикации ихтиофауны //Основные проблемы рыбного хозяйства и охраны рыбохозяйственных водоемов Азовского бассейна.Сб.научн. трудов, в.2. Ростов-на-Дону. - 1997. -С.81-88 (с соавт.).

29. Методические рекомендации по применению информативных биохимических методов диагностики пестицидной интоксикации // АзНИИРХ, - Ростов н/Д, 1996. - С. 18 (с соавт.).

30. Изучение токсичности и мутагенности химических соединений на эмбрионы осетровых рыб//Международное совещание по проблемам гидробиологии континентальных вод и их малако-фауна. -Санкт-Петербург, Россия, 18-21 ноября 1996. - С.69 (с соавт.).

31. Использование элодеи в экспресс-методах определения гербицид-ного загрязнения водохранилищ// Междунар.совещение. Проблемы гидробиологии континентальных вод и нх малакофауна'. -С.Петербург, Россия, 18-21 нояб. 1996. - С.70 (с соавт.).

32. The impact of toxic preparations on early ontogenesis of sturgeon // Piacenza, Italia, 8-11 July 1997, International Symposium on Sturgeons, Abstract Bulletin (с соавт.).

33. Сравнительная оценка влияния пестицидов на разные виды осетровых рыб//''Задачи и проблемы рыбного хозяйства на внутренних водоемах Сибири" Томский университет, ¡996., в печати (с соавт.).

34. Модельные подходы и исследование токсикометрических закономерностей //Сборник научных трудов АзНИИРХ. "Вопросы экологии и рыбного хозяйства Азово-Черноморского бассейна" - Ростов н/Д, 1997., в печати (с соавт.).

35. Влияние пестицидного загрязнения на протеины высшей водной растительности //Сборник научных трудов АзНИИРХ. "Вопросы экологии и рыбного хозяйства Азово-Черноморского бассейна" - Ростов н/Д, 1997., в печати (с соавт.).

36. Устойчивость осетровых рыб на разных стадиях развития к воздействию пестицидов в зависимости от температуры воды // Первый Всероссийский Конгресс ихтиологов. КаспНИИРХ, Астрахань, сентябрь 1997., в печати (с соавт.).

37. Свободнораднкальные процессы, активность антиоксидантных механизмов и структурно-функциональное состояние мембран в тканях ихтиофауны при воздействии пиретроидных пестицидов //Первый Всероссийский Конгресс ихтиологов. КаспНИИРХ, Астрахань, сентябрь 1997., в печати (с соавт.).

38. Сравнительная оценка гигиенических и эколого-рыбохозяй-ственных критериев токсичности и опасности пестицидов // Сб.научно-ирактнчсских работ, посвященных 75-летию Госса-нэпидслужбы России. "Региональные проблемы охраны окружающей среды и здоровья населения" - Ростов-на-Дону, сентябрь 1997., в печати (с соавт.).

Отпечатано в типографии "Терра'. 344049 Росгов-иа-Дону, ул.Пушкинская 175А.