Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Свободнорадикальное окисление и его регуляция психотропными предприятиями в условиях хронического стресса (клинико-экспериментальное исследование)

На правах рукописи

КУТЛУБАЕВ Мансур Амирович

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ ПСИХОТРОПНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.16. - патологическая физиология 14.00.13. - нервные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ООЗ 16СЗио<э Омск - 2007

003160033

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители. доктор медицинских наук, профессор

Фархутдинов Рафагат Равильевич

доктор медицинских наук Ахмадеева Лейла Ринатовна

Официальные оппоненты- доктор медицинских наук, профессор

Долгих Владимир Терентьевич

Омская государственная медицинская академия

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « 30 » октября 2007 года в 10 00 часов на заседании диссертационного совета Д 208 065 04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (644043, г Омск, ул Ленина, 12, тел (3812) 23-32-89)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омской государственной медицинской академии

Автореферат разослан <yv6 » Я 2007 г

Ученый секретарь

доктор медицинских наук, профессор Мирютова Наталья Фёдоровна Томский НИИ курортологии и физиотерапии

диссертационного совета

ЕА Потрохова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Стресс является неспецифическим компонентом течения любой формы церебральной патологии, а также причиной таких заболеваний нервно-психической сферы как неврозы, депрессии, головные боли и многих других (Александровский Ю А, 2000; Пгаеннико-ва М Г, 2000, Вейн А М, 2003, Leistad R В , 2007)

Одним из важнейших проявлений физиологической реакции организма на стресс является активация свободнорадикального окисления (СРО) (СудаковКВ, 1997, Зозуля ЮА, 2000, Пшенникова МГ, 2000) Длительные стрессорные нагрузки приводят к чрезмерному усилению радика-лообразования и ослаблению антиоксидантной защиты организма В результате меняются такие физико-химические свойства клеточных мембран, как структура, состав, проницаемость, что отражается на обмене веществ и функциональном состоянии организма в целом Также происходит нарушение барьерной функции биомембран, что и приводит к формированию патологического процесса (Halliwell В, 1996, Владимиров Ю А, 2000, Зозуля Ю А, 2000, Коровина Н А, 2003) В силу своих физиологических и биохимических особенностей наиболее страдает от чрезмерной активации процессов СРО ткань головного мозга (ЗавалишинИ А ,1996, Ferreira А L, 1997, Болдырев А А., 1999)

Последнее время многие исследователи уделяют большое внимание такому стрессогенному заболеванию нервной системы как головная боль напряжения (ГБН) Данная форма первичных цефалгий расценивается многими авторами как проявление повышенной тревожности, выраженных депрессивных расстройств, возникающее в ответ на воздействие острого или хронического дистресса. Страдают различными формами ГБН по различным данным от 30 до 78% населения Для оценки состояния больных с этим заболеванием на данный момент разработано небольшое количество диагностических тестов (например, ЭМГ перикраниальной мускулатуры) имеющих ограниченное применение (Вейн А М, 2001, Jensen R., 2003). Одним из маркеров тяжести патологического процесса при стрессогенных заболеваниях, включая ГБН, могут служить показатели интенсивности СРО, однако, правомочность их использования в данном качестве до конца не ясна

Для коррекции стрессогенных нарушений нервной системы, в том числе ГБН, используется целый ряд фармакологических средств, среди которых ведущие позиции занимают психотропные препараты Они, будучи средствами патогенетической терапии, могут оказывать выраженное влияние на СРО в организме при стрессе Это связано с тем, что психотропные препараты вызывают значительные изменения нейромедиатор-ного обмена, рецепторного аппарата и собственного липидного бислоя

клеточных мембран (Александровский Ю А, 1991) Некоторые из психотропных препаратов могут обладать и собственной антирадикальной активностью Известно, что некоторые антиоксиданты, например, мексидол, обладают анксиолитическим, противосудорожным действием, за счет мембранотропной активности (Дюмаев К М, 1995)

В связи с этим значительный интерес представляет комплексное изучение состояния СРО при стрессе в головном мозге и крови экспериментальных животных, а также определение влияния психотропных препаратов, широко используемых в клинической практике, на эти процессы

Цель: исследовать состояния СРО в коре головного мозга и крови лабораторных животных при хроническом стрессе и введении психотропных препаратов, а также в крови пациентов с хронической ГБН до и после психофармакотерапии, оценить влияние психотропных препаратов на процессы СРО in vitro в различных модельных системах для уточнения механизма их антиокислительного действия

Задачи исследования:

1 Изучить состояние СРО в коре головного мозга и сыворотке крови лабораторных животных подвергавшихся хроническому стрессовому воздействию (принудительное плавание) Проанализировать связь изменений в поведении животных и СРО в коре головного мозга

2 Исследовать влияние психотропных препаратов (феназепам, гидро-ксизин, флупентиксол, настой валерианы) на СРО в коре головного мозга и крови лабораторных животных и их поведение в условиях хронического стресса

3 Выяснить влияние психотропных препаратов (феназепам, гидрокси-зин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальпроат натрия, тиокта-цид) на СРО в модельных системах in vitro

4 Оценить состояние СРО в крови и юшнико-психофизиологические параметры пациентов с хронической ГБН до и после психофармакотерапии, выявить взаимосвязь между показателями СРО и клиническими данными

Научная новизна. Выявлена связь между нарушениями СРО в коре головного мозга и поведенческими реакциями экспериментальных животных при хроническом стрессе Продемонстрирована способность психотропных препаратов (флупентиксол, феназепам, гидроксизин, валериана), регулировать СРО в коре головного мозга крыс в условиях хронического стресса Показана сопряженность антиоксидантного эффекта препаратов с их психофармакологической активностью Изучено влияние ряда психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, флупентиксол, настой валерианы) на СРО в модельных системах in vitro Уточнены механизмы действия на процессы СРО названных психотропных препаратов, в частности на генерацию активных форм кислорода

(АФК), перекисное окисление лшэдцов (ПОЛ) Выявлены ш vitro выраженные аншоксидантные свойства у пропофола и менее выраженные у гидроксизина, феназепама, вальпроевой кислоты, валерианы С помощью метода регистрации хемилюминесценции (ХЛ) оценено состояние СРО крови пациентов с хронической ГБН до и после лечения Проведен корреляционный анализ кли-нико-психофизиологических характеристик и интенсивности ХЛ крови больных ГБН Выявлена взаимосвязь между показателями ХЛ плазмы крови и некоторыми параметрами тревоги и депрессии

Практическая ценность исследования. Уточнены механизмы действия психотропных препаратов на СРО ш vitro и in vivo, что позволило прогнозировать их влияние на процесс радикалообразования и возможности его регуляции Результаты изучения ХЛ крови пациентов с ГБН до и после лечения дали возможность рекомендовать данный метод для оценки тяжести данного заболевания и контроля эффективности его лечения

Положения, выносимые на защиту:

1 В условиях хронического стресса в коре головного мозга и крови животных активируются процессы СРО, что проявляется в усилении интенсивности их ХЛ Степень активации СРО в коре головного мозга коррелирует со степенью нарушений поведенческих реакций животных

2 Психотропные препараты нормализуют СРО в коре головного мозга и крови, а также поведенческие реакции стрессированных животных

3 В модельных системах, в которых генерировались АФК и протекали процессы ПОЛ, сопровождающиеся ХЛ, психотропные препараты (феназепам, гидроксизин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальп-роат натрия) проявляли антиоксидантные свойства различной степени выраженности, тиоктацид - проявлял прооксидантые свойства

4 У пациентов с ГБН интенсивность ХЛ плазмы крови, а также индуцированная ХЛ цельной крови - достоверно выше, чем в контрольной группе здоровых людей После лечения психотропными препаратами интенсивность ХЛ крови пациентов с ГБН достоверно снижается и не отличается от показателей здоровых людей.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на VI научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 2004), 79-й всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2005), ХП Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005), 70-й юбилейной итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2005), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием,

посвященной 100-летию профессора В А Самцова «Типовые патологические процессы» (Уфа, 2005), 4-й национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005), 10-зимней научной школе CIMO «Nutation and health - behavioral, medical, environmental factors» (Финляндия, Тампере, 2006)

Диссертация обсуждена на совместном заседании научно-технического совета центральной научно-исследовательской лаборатории, кафедр фармакологии №2 и неврологии с курами нейрохирургии и медицинской генетики Башкирского государственного медицинского университета (Протокол № 2 от 19 04 2006)

Реализация и внедрение результатов исследования. Результаты диссертации внедрены в учебный процесс кафедр физиологии, фармакологии БГМУ, в лечебную работу отделения неврологии РКБ им Г Г Кувато-ва(г Уфа)

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 17 научных работ, из них 2 статьи в журналах по Перечню ВАК, 1 информационно-методическое письмо

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами, 38 рисунками Состоит из следующих разделов «Оглавление», «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы исследования», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение», «Выводы», «Практические рекомендации», «Список литературы», который включает ссылки на 101 работу отечественных авторов и 100 зарубежных авторов

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе в соответствии с поставленной целью и задачами были выделены следующие основные этапы исследования, которые представлены в таблице 1

Первым этапом работы было исследование состояния СРО в коре головного мозга и сыворотке крови, а также поведенческих реакций у экспериментальных животных в условиях хронического стресса и интактных особей

Далее изучали влияние четырех психотропных препаратов (валериана, гидроксизин, феназепам, флупентиксол) на поведенческие реакции и процессы СРО в коре головном мозге и сыворотке крови экспериментальных животных в условиях хронического стресса

Опыты проводились на 60 нелинейных крысах-самцах массой 200250 г (6 групп по 10 животных) Животных содержали в пластмассовых клетках при температуре 18-20°С в условиях свободного доступа к воде и пище В качестве подстилки использовались древесные опилки Освещение было естественным

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОВЕДЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Этапы и задачи исследования Объект и объем исследования

Экспериментальная часть

1 Исследование особенностей СРО в коре головного мозга и крови, а также поведения животных в условиях хронического стресса вызванного по методике повторной плавательной нагрузки Исследование Бе^-зависимой ХЛ го-могенага коры головного мозга и сыворотки крови белых крыс (всего 20 животных), определение содержания ТБК-активных продуктов, регистрация поведенческих реакций в тесте «открытое поле»

2 Изучение влияния психотропных препаратов (флупенгиксол, феназепам, щцроксизин, валериана) на СРО в коре головного мозга и крови, а также поведение животных в условиях хронического стресса Исследование Ре2+-зависимой ХЛ го-могената коры головного мозга и сыворотки крови крыс (всего 40 животных), получавших психотропные препараты и подвергавшиеся хроническому стрессу, регистрация поведенческих реакций в тесте «открытое поле»

3 Изучение влияния психотропных препараторов (феназепам, гвдроксизин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальпроат натрия, тиокгавдд) на СРО in vitro Исследование Ре^-щщуцированной ХЛ Модельные системы-генерирующие АФК, системы в которых протекают реакции ПОЛ (всего 3 объекта и 7 препаратов)

Клиническая часть

4 Оценка клинико-психофизиологи-ческих параметров и интенсивности ХЛ крови пациентов с хронической ГБН и здоровых людей Клиническое и психологическое обследование 33 пациентов с хронической ГБН и 31 здорового человека. Исследование Ре2+-зависимой ХЛ плазмы крови, люми-нол-зависимой спонтанной и индуцированной ХЛ цельной крови в обеих группах

5 Оценка состояния СРО после стандартного курса психофармакотерапии пациентов с ГБН Клиническое и психологическое обследование 31 пациента, прошедшего курс лечения психотропными препаратами Исследование Ре2+-зависимой ХЛ плазмы крови, люминол-зависимой спонтанной и индуцированной ХЛ цельной крови в обеих группах.

6 Статистическая обработка результатов клинико-экспериментального исследования Стандартный пакет компьютерных программ

Крысы были разделены на 6 групп Первая служила контролем, остальные в течение трех недель ежедневно подвергались стрессорной нагрузке на фоне введения изотонического раствора КаС! внутримышечно или воды внутрижелудочно, либо на фоне воздействия психотропных препаратов Использовались следующие препараты феназепам (внутримышечно 0,000025 г/кг веса), атаракс (гидроксизина гидрохлорид) (внутримышечно 0,001 г/кг), валериана лекарственная (внутрижелудочно 2%-ный настой, в дозе 0,1 г/кг), флюанксол-депо (цис(2)-флюпентиксола деканоат) (внутримышечно один раз в две недели в дозе 0,002 г/кг) В качестве стрессора использовалось принудительное плавание ежедневно по 25 мин при температуре воды 25°С (Вищш А е! а1, 1996)

Степень выраженности стресса оценивалась по нарушению индивидуального поведения животных в тесте открытого поля Рассчитывались интегральные критерии коэффициент подвижности (КП), ориентировочно-исследовательская активность (ОИА), эмоциональная тревожность (ЭТ) (Атрошенко О Н, 1999)

В конце эксперимента животных декапитировали с соблюдением правил эвтаназии, согласно Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным

Для исследования процессов СРО использовали метод регистрации ХЛ возникающей при взаимодействии свободных радикалов Свечение измеряли на приборе ХЛМ-003, стабильность работы которого проверяли по излучению вторичного эталона СФХМ - 1 с интенсивностью свечения 5,1х105 квантов/сек Эта величина принята за 1 условную единицу Показатели ХЛ регистрировались в течение 5 минут Интегральными показателем ХЛ являлась светосумма свечения (Фархутдинов Р Р , 2005)

На льду извлекали мозг, отделяли кору, забирали кровь Для приготовления гомогената коры мозга навеску ткани отмывали охлажденным фосфатным буфером в соотношении 1 5 (вес объем), гомогенизировали в механическом гомогенизаторе 5 минут при температуре +4° С Полученный гомогенат фильтровали через капроновый фильтр, определяли содержание белка микробиуретовой пробой (Пушкина НН, 1983) К 0,5 мл гомогената, пропущенного через капроновый фильтр, добавляли 19,5 мл солевого буфера и исследовали на хемилюминомере Кровь собирали в центрифужную пробирку Форменные элементы крови осаждали центрифугированием при 3000 об 15 минут, 0,5 мл сыворотки прибавляли к 19,5 мл фосфатного буфера и также исследовали на хемилюминомере Свечение в исследуемых образцах инициировали введением 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа (Фархутдинов Р Р , 2005)

Дополнительно для изучения процессов липопероксидации в гомоге-нате коры головного мозга и сыворотке крови определялось содержание

ТБК-активных продуктов по цветной реакции с 2-тиобарбитуратовой кислотой в присутствии трихлоруксусной кислоты методом спектрофотомет-рии при длине волны 532 нм В качестве контроля использовали дистиллированную воду (Стальная И Д, Гаришвили Т Г, 1977)

Третьим этапом работы бьшо исследование влияния различных психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, настой валерианы, мида-золам, пропофол, вальпроат натрия и тиоктовая кислота) на процессы генерации АФК и ПОЛ в трех модельных системах

Концентрацию препарата в пробе рассчитывали соответственно средней терапевтической дозе, создаваемой в организме, и варьировали для определения дозозависимого эффекта на процессы СРО

В качестве первой модели использовали 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата и люминола Состав буфера 2,72 г КН2Р04, 7,82 г KCL, 1,5 г цитрата натрия СбН807Каз*5,5Ы20 на 1 литр дистиллированной воды Величину pH полученного раствора доводили до 7,45 ед титрованием насыщенным раствором КОН и добавляли 0,2 мл маточного раствора люминола (10'5 М) Образование АФК инициировали введением 1мл 50 мМ раствора сернокислого железа

Для оценки действия препаратов на ПОЛ их добавляли к липидам, полученным из куриного желтка, содержащего липопротеиновые комплексы, сходные с липидами крови (Клебанов ГИ, 1993) Желток смешивали с фосфатным буфером в соотношении 1 5, гомогенизировали, доводили содержание бежа до 1 мг на мл дальнейшим разведением (в среднем 25 мл полученного гомогената на 1л буфера) Отбирали 20 мл, ХЛ инициировали добавлением 1мл 50 мМ раствора сернокислого железа при постоянном перемешивании, что приводило к окислению ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов, развивалась ХЛ, по интенсивности которой судили о процессах ПОЛ

Дополнительно исследовали влияние препаратов на ХЛ гомогенатов головного мозга крыс (1 г гомогената ткани на 5 мл фосфатного буфера) К 20 мл раствора добавляли 1 мл 50 мМ раствора FeS04, что приводило к окислению ненасыщенных жирных кислот и развитию свечения

В клинической части исследования приняли участие 33 пациента из г Уфы и Республики Башкортостан с ГБН и 31 здоровый человек Пациенты были отобраны на базе стационарного неврологического отделения и поликлиники Республиканской клинической больницы им Г Г Куватова с 2003 по 2005 гг Диагноз хронической ГБН устанавливался в соответствии с диагностическими критериями 2 редакции Международной классификации головной боли (The International Classification of Headache Disorders 2-nd Edition, 2003) Параметры, содержащиеся в первичной документации,

заносились в базу данных, созданную в СУБД Microsoft Access, которая включала более 70 клинических, психологических и нейрофизиологических показателей. Критериями включения в группу контроля являлись 1) отсутствие жалоб на состояние здоровья и нарушения сна, 2) возраст от 20 до 50 лет, 3) отсутствие клинических признаков соматических, неврологических и психических заболеваний, 4) отсутствие ночной работы, 5) отсутствие систематического приема лекарственных препаратов (в т ч анальгетиков) или психоактивных веществ, 6) формальное согласие испытуемого на участие в исследовании

Исследовали железоиндуцированную ХЛ плазмы и спонтанную и индуцированную зимозаном ХЛ цельной крови

Исследование ХЛ крови проводилось два раза перед лечением (после постановки клинического диагноза), и после курса стандартной психофармакотерапии через 3 месяца

Исследовались уровень депрессии с помощью шкалы Гамильтона, Бека (Смулевич А Б , 2003), тревоги с помощью опросника Ч Спилбергера, адаптированного Ю Л Ханиным, позволяющего дифференцированно измерять тревожность и как личностное свойство (уровень личностной тревожности), и как состояние (уровень ситуативной тревожности) (Ханин ЮЛ 1976)

Все полученные данные обработали на ЭВМ с помощью специального пакета программ вариационной статистики "Statistica" Использовался критерий Фишера-Стьюдента Однофакторный дисперсионный анализ проводили для сравнения антиокислительного эффекта различных доз препаратов в модельных системах За вероятность различий принимались значения Р<0,05 (Лапач С H и др 2000)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАННОЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Свободнорадикалыюе окисление в коре головного мозга и поведение крыс при хроническом стрессе и введении психотропных препаратов.

Стресс характеризуется комплексным воздействием на нейрогумо-ральные механизмы организма и сопровождается выраженными изменениями поведения человека и животных Одним из универсальных механизмов реакции организма на стресс является активация СРО Были исследованы поведенческие реакции и состояние СРО у животных на фоне хронического стресса и введения психотропных препаратов

Для оценки состояния СРО в коре головного мозга была исследована ХЛ Определялось содержание конечных продуктов ПОЛ - ТБК-активных продуктов

На рис. 1 (слева) представлена запись ХЛ гомогената коры головного мозга экспериментального животного в норме и в условиях хронического стресса. Справа - типичная запись ХЛ головного мозга животных при стрессе и введении психотропных.

Рис. 1. Типичная запись ХЛ головного мозга интактного животного(1) и при хроническом стрессе (2). Параметры хемилюминограммы: спонтанное свечение (а),

быстрая вспышка (б), латентный период (в-г), медленная вспышка (д) (слева). Типичная запись ХЛ головного мозга животного при стрессе (1), введении валерианы (2), гидроксизина (3), феназепама (4), флунентиксола (5) (справа).

В результате хронического стресса в коре головного мозга животных произошло повышение интенсивности ХЛ в среднем в 2 раза относительно контроля (табл.2.), и незначительно (в 1,1 раза) - сыворотки крови.

Содержание ТБК-активных продуктов было повышено в коре головного мозга стрессированных животных в 1,3 раза, в значительно меньшей степени (в 1,1 раза) - в сыворотке крови.

У крыс получавших на фоне стрессового воздействия настой валерианы лекарственной, интенсивность ХЛ гомогената коры головного мозга повысилась только в 1,5 раза, по сравнению с контролем. Уровень ХЛ гомогената головного мозга крыс получавших гидроксизин и феназепам был выше показателей интактных животных лишь в 1,14 и 1,16 раза соответственно. Такая же тенденция наблюдалась в отношении содержания ТБК-активных продуктов.

Флупентиксол также предотвратил повышение интенсивности ХЛ гомогената головного мозга (табл. 2.) и сыворотки. Причем в данном случае достоверных отличий от контроля не было. Содержание ТБК-активных продуктов в мозге и сыворотке крови соответствовало показателям контрольных животных.

ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА И НЕКОТОРЫХ ПСИХОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ В КОРЕ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ИНДИВИДУАЛЬНОЕ ПОВЕДЕНИЕ КРЫС

Условия опыта Светосумма ХЛ гомогената коры головного мозга,0/» Светосумма ХЛ сыворотки крови, % КП, % ОИА, % ЭТ, %

Контроль 100±2,6 100±4,3 100±7,2 100±8,7 100±5,9

Стресс 198±2,9* 110±2,2* 176,4±16,4* 80,5±1,77* 154±15,3*

Стресс+ Валериана 156±3,8* 104±5,4 130,3±11,3* 84,19±3,9* 141±12,5*

Стресс+ Гидрокси- 11442,6* 102±4,6 98,8±8,8 95,9±2,1 118±10,1

зин

Стресс+ Феназепам 116±4,5* 105±5,7 92,1±9,9* 93,3±1,85* 110±12,9

Стресс+ Флупен- 104±2,5 102±3,2 82,1±7,2* 91,2±1,99* 98±8,35

тиксол

Примечание Приведены средние значения, в % от контроля, * - р<0,05 по сравнению с показателями контрольной группы

Корреляционный анализ выявил наличие достоверной связи (Р<0,05) между показателями ХЛ и содержания ТБК-активных продуктов в головном мозге и сыворотке крови, г=0,6 и г=0,47 соответственно.

Хронический стресс приводил к развитию стойких изменений в индивидуальном поведении животных, соответствующих тревожно-депрессивному синдрому ОИА снизилась в 1, 25 раза, ЭТ и КП повысились соответственно в 1,5 и 1, 7 раза, относительно контроля

Поведение животных, которые получали валериану, изменилось меньше и соответствовало более легкой степени тревожно-депрессивного синдрома Применение гидроксизина предотвратило развитие подобных изменений в поведении животных Интегральные показатели достоверно не отличались от таковых контрольной группы Феназепам незначительно

снизил КП и ОИА, а также ЭТ животных Аналогичные, но более выраженные изменения произошли в поведении животных получавших флу-пентиксол (табл 2 )

Имелась достоверная корреляционная связь (Р<0,05) между показателями ХЛ гомогената коры головного мозга и показателями КП (г=0,43) и ЭТ (г=0,56) в группе животных подвергавшихся стрессу и не получавших препараты

Таким образом, стресс вызвал усиление СРО в коре головного мозга и повышение ЭТ, КП и подавление ОИА животных, что можно интерпретировать как проявление «застойного» эмоционального возбуждения в ЦНС Интенсивность СРО в коре головного мозга коррелировала с показателями поведенческих реакций, что может свидетельствовать о сопряженности процессов радикалообразования и функциональной активности головного мозга Психотропные препараты снижали интенсивность СРО в головном мозге и нормализовали поведение животных При чем более выраженный эффект наблюдался у более мощных препаратов - флупентиксола, феназе-пама, гидроксизина, менее выраженный - у валерианы

Влияние психотропных препаратов на свободнорадикальное окисление в модельных системах in vitro.

Для уточнения механизма антиокислительного действия психотропных препаратов было проведено исследование влияния ряда препаратов на СРО в модельных системах, имитирующих процессы генерации АФК, ПОЛ, а также СРО в нервной ткани

Влияние психотропных препаратов на величину светосуммы ХЛ в трех модельных системах ш vitro представлено в таблице 3

В модельной системе, в которой генерировались АФК, феназепам и мидазолам снизили значение светосуммы примерно в 1,3 раза, гидрокси-зин и вальпроевая кислота примерно - 1,85 раза, пропофол - 2 раза, настой валерианы лекарственной - 1,3 раз

В модели желточных липосом, где протекали процессы ПОЛ, феназепам угнетал ХЛ в 1,2 раза, гидроксизин- 1,3 раза, вальпроевая кислота -1,2 раза, пропофола - 5,4 раза, валерианы - 1,4 раза

При добавлении в гомогенат головного мозга феназепама интенсивность ХЛ снижалась в 1,35 раза, гидроксизин- 1,85 раза, пропофол - 8,4 раза, валериана - 1,3 раза

На основании полученных данных можно сделать вывод, что пропофол достоверно проявляет антиоксидантные свойства, умеренно снижая ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, и значительно в модельных системах связанных с ПОЛ Феназепам, гидроксизин, вальпроевая кислота и настой валерианы в меньшей степени влияли как на генерацию АФК, так и на ПОЛ Мидазолам достоверно снижал ХЛ только в модельной системе, генерирующей АФК

ВЛИЯНИЕ ПСИХОТРОПНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМАХ IN VITRO

Концентрация препарата в модельной системе мг/мл Светосумма ХЛ в % от контроля

Препарат система активных форм кислорода, % модельная система липосом, % гомогенат мозга крысы, %

Контроль 100±1,5 100±1,3 100±1,7

Феназепам 0,0005 75±2,1 * 81,5±2,4* 73,8±2,1*

Мидазолам 0,0025 78±3,1* 99±3,2 98±0,9

Гидроксизин 0,025 54±1 2* 76,5±1,4* 54±1,3*

Вальпрое-вая кислота 0,0015 54±0,6* 84,3±0,8* 91,5±1,б*

Тиоктацид 0,006 429±9,4* 137±3,4* 111±3,3*

Пропофол 0,00125 48±1,5* 18,5±2,1* 12±1,9*

Валериана 2,0 48±2,1* 54±2 6* 35,6±2,1*

Примечание: Приведены показатели светосуммы ХЛ в % от контроля (средние значения 10 измерений) * - р < 0,05 по сравнению с контролем

Для оценки значимости влияния дозы исследованного препарата на интенсивность ХЛ модельной системы проведен однофакторный дисперсионный анализ, результаты которого свидетельствовали о достоверных различиях между антиокислительными эффектами различных доз изученных препаратов

Таким образом, проведенное нами исследование в модельных системах, в которых протекают процессы генерации АФК и ПОЛ, показало, что все исследованные нами препараты вне зависимости от химической структуры и фармакологических свойств оказывают определенное влияние на процессы СРО

Интенсивность хемшноминесценции крови при головной боли напряжения до и после лечения психотропными препаратами.

В исследуемой группе, так и в группе контроля большинство составили женщины (что характерно для эпидемиологии ГБН) Из 33 больных 19 были городскими жителями, остальные - жители сел Длительность заболевания в среднем составляла 10,09±1,47 лет Число дней с головной болью в месяц в среднем составляло 21,65±0,9, в год - 254,18±21,56 У 18 из 33 пациентов было выявлено напряжение перикраниальной мускулатуры, у 9 - наличие триггерных точек в области головы и шеи Интенсивность головной боли по ВАШ в среднем составляла 61,31±2,17 балла

Показатели ХЛ плазмы и цельной крови пациентов с ГБН до и после лечения и здоровых лиц представлены в табл 4

Как видно из табл 4 ХЛ плазмы крови у пациентов с ГБН была повышена в 1,7 раза относительно контроля, спонтанная люминол-зависимая ХЛ цельной крови достоверно не отличалась от показателей здоровых людей, а индуцированная зимозаном люминол-зависимая ХЛ цельной крови была повышена в 1,9 раза относительно контроля

Таблица 4

ПОКАЗАТЕЛИ СВЕТОСУММЫ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ КРОВИ ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ГОЛОВНОЙ БОЛЬЮ НАПРЯЖЕНИЯ ДО И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ И ЗДОРОВЫХ ЛИЦ

Показатели Контроль ГБН (до лечения) ГБН (после лечения)

ХЛ плазмы крови, отн ед 7,29±0,26 12,26±0,4* 7,8±0,26

Спонтанная ХЛ

цельной крови, 6,23±0,53 7,13±0,3 7,62±0,59

отн ед

Индуцированная ХЛ цельной кро- 140±8,9 286±13,1* 154,2±8,34

ви, отн ед

* - р<0,05 по сравнению с контролем

Тестирование по опроснику Ч Спилбергера выявило у пациентов с хронической ГБН высокий уровень личностной тревожности (50, 3±1, 82) и реактивной тревожности (47,5 93±1, 62) По шкале Бека у пациентов была выявлена депрессия умеренно-сильной степени (24,3±0,69), результаты, полученные по шкале Гамильтона (18,84±0, 58) подтвердили эти данные

Корреляционный анализ выявил наличие достоверной (Р<0,05) связи между показателями ХЛ плазмы крови пациентов с ГБН и показателям уровня депрессии по шкале Бека (г=0,53) Также была выявлена достоверная связь между показателями реактивной тревожности и показателями ХЛ плазмы крови (1=0,41).

После курса стандартного лечения психотропными препаратами была проанализирована кровь 31 из 33 пациентов Полученные данные продемонстрировали снижение интенсивности повышенных показателей ХЛ крови Железоиндуцированная ХЛ плазмы крови пациентов с хронической ГБН после лечения снизилась в среднем до 7,8 отн ед (от 4,7 до 11,6 отн ед) Данный показатель достоверно не отличался от такового в контрольной группы Интенсивность люминол-зависимой спонтанной ХЛ

цельной крови пациентов с хронической ГБН достоверно не отличалась от показателей ХЛ до лечения и от показателей XJI контрольной группы Дюминол-зависимая индуцированная зимозаном XJI цельной крови пациентов с хронической ГБН после лечения понизилась до 154,2 отн ед (от 86,2 до 243,4 отн ед) и достоверно не отличалась от показателей контрольной группы

Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что показатели XJI плазмы крови коррелируют с показателями тревоги и депрессии и меняются в ходе лечения, в связи, с чем могут использоваться в качестве маркера тяжести ГБН и эффективности его лечения

Подводя итоги проведенного исследования можно сделать следующее заключение При хроническом стрессе у животных происходят выраженные нарушения СРО в головном мозге, которые отражаются в повышении интенсивности XJI его гомогената и накоплении ТБК-активных продуктов Показатели интенсивности СРО в коре головного мозга коррелировали с показателями крови, что подтверждает правомочность использования данных крови для суждения о состоянии СРО в головном мозге С другой стороны показатели интенсивности СРО в головном мозге животных в условиях хронического стресса коррелировали с показателями поведенческих реакций, что может свидетельствовать об определенной роли процессов СРО в патогенетических механизмах стрессогенных расстройств поведения

Применение психотропных препаратов предотвращает чрезмерную активацию СРО в коре головного мозга экспериментальных животных, тем самым, проявляя выраженный антиоксидантный эффект Причем данный эффект был более выражен у нейролептика - флупентиксола и транквилизаторов - феназепама и гидроксизина, меньше - у седативного фитопрепарата - настоя валерианы лекарственной

Наличие собственных антиоксидантных свойств у некоторых психотропных препаратов подтверждено в экспериментах ш vitro в модельных системах Предполагается, что высокая антиокислительная активность пропофола связана с наличием в его структуре фенольного кольца, с системой двойных сопряженных связей Благодаря чему оно обладает способностью отдавать электрон свободным радикалам, восстанавливая их до стабильных продуктов Что касается производных бензодиазепина, феназепама и мидазолама и производного дифенилметана гидроксизина, все они содержат в структуре ароматические и гетероароматические циклы, чем можно объяснить их электронно-донорные способности, необходимые для нейтрализации свободных радикалов Депакин проявляет антиокси-дантные свойства вероятно за счет наличия карбоксильной группы в его активном компоненте - вальпроевой кислоте Антиокислительные свойства настоя валерианы лекарственной возможно связаны с содержанием в

ней флаваноидов Прооксидантные свойства тиоктацида, можно объяснить тем, что дигидролипоевая кислота (восстановленная форма а-липоевой (тиоктовой) кислоты) восстанавливая Fe3+ до Fe2+ активизирует реакцию Фентона, с образованием ОН и ОН" Необходимо отметить, что эти данные не отрицают наличия антиоксидантных свойств у а-липоевой кислоты, a только говорят об особом (возможно двухфазном) механизме ее антиокси-дантного действия

Значительно более выраженные антиокислительные свойства in vivo в условиях стресса указывают на то, что препараты скорее всего реализуют свои антирадикальные свойства больше косвенно, через регуляцию стресс-реакции, нежели напрямую, за счет нейтрализации свободных радикалов

ВЫВОДЫ

1 У лабораторных животных в условиях хронического стресса происходит активация СРО в коре головного мозга и крови, которая выражается, в том числе в усилении интенсивности XJI Между изменением интенсивности XJI гомогената коры головного мозга и крови, животных при стрессе существует достоверная корреляционная связь

2 Между уровнем СРО в коре головного мозга и степенью изменения поведенческих реакций животных в условиях хронического стресса имеется достоверная корреляционная связь

3 Введение различных психотропных препаратов (феназепам, гид-роксизин, флюанксол, настой валерианы) лабораторным животным в условиях хронического стресса нивелирует степень нарушений поведенческих реакций, а также СРО в коре головного мозга и крови

4 Среди психотропных препаратов наиболее выраженные антиокислительные свойства в модельной системе генерирующей АФК проявили пропофол, а также гидроксизин, вальпроат натрия и настой валерианы Антиокислительная активность феназепама, мидазолама оказалась слабее Тиоктацид вызвал усиление СРО в модельной системе АФК

5 Наибольшую антиокислигельную активность в модельных системах, в которых протекали реакции ПОЛ, проявил пропофол Валериана, гидроксизин, феназепам и вальпроат натрия влияли на интенсивность процессов ПОЛ в меньшей степени Мидазолам не изменял интенсивность реакций ПОЛ в модельных системах Тиоктацид проявил выраженные прооксидантные свойства

6 У пациентов с хронической ГБН происходит повышение интенсивности ХЛ в цельной крови и плазме, по сравнению со здоровыми людьми После курса стандартного лечения психотропными препаратами показатели ХЛ крови нормализуются наряду с клиническим улучшением

состояния Существует корреляционная связь между показателями XJI крови и данными клинического обследования и психологических тестов на тревогу и депрессию

7 Применение хемилюминесцентных методов позволяет оценивать анти - и прооксидантные свойства различных веществ ш vitro и in vivo, расширяет представления об их фармакологических свойствах Метод регистрации XJI может применяться у пациентов с хронической ГБН для оценки состояния СРО и для контроля эффективности психофармакотерапии

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Метод регистрации XJI рекомендуется для оценки влияния психотропных препаратов на процессы СРО ш vitro и ш vivo

2 При назначении психотропных препаратов необходимо учитывать их влияние на процессы СРО в организме пациента

3 Интенсивность ХЛ плазмы крови пациентов с хронической ГБН коррелирует с данными психологических тестов и может, рекомендоваться для оценки состояния СРО при данном заболевании, как маркера тяжести патологического процесса и эффективности психофармакотерапии

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Кутлубаев МА Антиокислительные свойства некоторых транквилизаторов в модельных системах/ М А Кутлубаев// Сборник статей по результатам Международной 63-ей итоговой студенческой конференции им Н И Пирогова - Томск - 2004 - с 252-253

2 Кутлубаев М А Сравнительная оценка антиокислительных свойств пропофола и мидозалама в модельных системах/ М А Кутлубаев// Материалы Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2004» - Уфа - 2004 - с 185-186

3 Кутлубаев М А Влияние некоторых транквилизаторов на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах /МЛ Кутлубаев, А Ф Муфазалов//Здравоохранение Башкортостана - 2004 -Специальный выпуск №4 Актуальные вопросы патологии Межрегиональная конференция, посвященная 70-летию кафедры патологической анатомии и патофизиологам БГМУ, с 125-126

4 Кутлубаев МА Сравнительный анализ влияния феназепама на свободнорадикальное окисление m vitro и ш vivo/ М А Кутлубаев// Материалы VI научно-практической конференции с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения» - СПб. - 2004 - с 245

5 Воеводин В А Качество жизни больных с различными головными болями / М А Кутлубаев, В А Воеводин, Э Н Закирова, Л Р Ахмадеева // Успехи современного естествознания, 2004, №12, с 39-41

6 Кутлубаев М А Комплексная оценка антиокислительных свойств валерианы лекарственной/ М А Кутлубаев, Р Р Фархутдинов, Л Р Ахмадеева // Университетская наука Взгляд в будущее Сборник тезисов юбилейной научной конференции КГМУ и Центрально-черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ В 2 томах - Курск КГМУ, 2005-Т2-с 496

7 Кутлубаев М А Свободнорадикальное окисление в головном мозге крыс в условиях хронического стресса/ МА Кутлубаев// Вестник РГМУ Периодический медицинский журнал - М РГМУ - 2005, №3(42) -с 222

8 Кутлубаев М А Влияние транквилизаторов на свободнорадикальное окисление в головном мозге при хроническом экспериментальном стрессе/ М А Кутлубаев, Р Р Фархутдинов, Л Р Ахмадеева // Человек и лекарство Тезисы докл XII Российского национального конгресса - 2005 г - М, 2005 с 434

9 Кутлубаев МА Состояние свободнорадикального окисления в крови у пациентов с головной болью напряжения/ М А Кутлубаев, В.А Воеводин, Э Н Закирова // Сборник тезисов 79-ой всероссийской студенческой научной конференции посвященной 1000-летию Казани - Казань -2005 - с 253

10 Кутлубаев М А Характеристика свободнорадиКального окисления при головной боли напряжения/ М А Кутлубаев, В А Воеводин, Э Н Закирова// 70-ая юбилейной итоговая Республиканская научная конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» материалы конференции - Уфа -2005 - с 238

11 Воеводин В А Исследование уровней тревожности и депрессии у больных с первичными цефалгиями/ В А Воеводин, Э Н Закирова, М А Кутлубаев, В Ф Туник // 70-ая юбилейной итоговая Республиканская научная конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» материалы конференции -Уфа -2005-с 238

12 Кутлубаев М А Окислительный метаболизм фагоцитов крови при головной боли напряжения/ М А Кутлубаев, В А Воеводин, Э Н Закирова// Сборник статей по результатам Международной 64-ей итоговой студенческой конференции им Н.И Пирогова - Томск - 2005 - с 358

13 М А Кутлубаев Хемшпоминесценция крови у больных с головной болью напряжения/ МА Кутлубаев, РР Фархутдинов, JIP Ахмадеева, А Ф Муфазалов// Сборник трудов «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» - Смоленск - 2005 - с 277-279

14 Кутлубаев МА Поведение и свободнорадикальное окисление в головном мозге крыс при хроническом стрессе и введении транквилизаторов/ М А Кутлубаев, Р Р Фархутдинов, JIР Ахмадеева, А Ф Муфазалов // Здравоохранение Башкортостана - 2005 - Специальный выпуск №7 -«Типовые патологические процессы» Межрегиональная научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 100-летию основателя кафедры патофизиологии БГМУ заслуженного деятеля науки БАССР, д м н , профессора В А Самцова - Уфа - с 106-107

15 Кутлубаев М А Влияние некоторых психотропных препаратов на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах/ М А Кутлубаев, Р Р Фархутдинов, А Ф Муфазалов, JI Р Ахмадеева// Журнал неврологии и психиатрии им С С Корсакова - 2005 - Т 105, №8 - с 54-56

16 Кутлубаев М А Свободнорадикальное окисление в головном мозге крыс при хронической стрессорной нагрузке и его фармакологическая регуляция/ М А Кутлубаев, Р Р Фархутдинов, Л Р Ахмадеева, А Ф Муфазалов// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2005 -Т 104, №10 - с 414-417

17 Воеводин В А Мигрень (патогенез, клиника, лечение)/ В А Воеводин, Э Н Закирова, Л Р Ахмадеева, М А Кутлубаев/ Уфа, 2006 г, 56 с

КУТЛУБАЕВ Мансур Амирович

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ ПСИХОТРОПНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ

В УСЛОВИЯХ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЫЮЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Сдано в набор 24 09 2007 г Подписано в печать 25 09 2007 г Формат бОх84/^ Бумага офсетная Печ листов 1,5 Уел печ л 1,39 Заказ № 384 Тираж 100

Отпечатано в типографии ПЛ № 1 450001, г Уфа, бульвар X Давлетшиной, 3

Актуальность проблемы

Стресс является неспецифическим компонентом течения любой формы церебральной патологии, а также причиной таких заболеваний нервно-психической сферы как неврозы, депрессии, вегетативные дистонии, головные боли и многие другие (Александровский Ю.А., 2000; Пшенникова

М.Г., 2000; Вейн A.M., 2003, Leistad R.B., 2007).

Одним из важнейших проявлений физиологической реакции организма на стресс является активация свободнорадикального окисления (СРО) (Судаков К.В., 1997, Зозуля Ю.А., 2000, Пшенникова М.Г., 2000). Длительные стрессорные нагрузки приводят к чрезмерному усилению радикалообразования и ослаблению антиоксидантной защиты. В результате меняются такие физико-химические свойства клеточных мембран, как структура, состав, проницаемость, что отражается на обмене веществ, и функциональном состоянии организма в целом. Также происходит нарушение барьерной функции биомембран; что и приводит к формированию патологического процесса (Владимиров Ю.А., 1972; Барабой В .А., 1992; Зенков Н.К., 1993; Halliwell В., 1996; Зозуля Ю.А. 2000).

В силу своих физиологических и биохимических особенностей наиболее страдает от чрезмерной активации процессов СРО нервная ткань (Завалишин И.А. ,1996; Ferreira A.L., 1997; Болдырев A.A., 1999).

Последнее время многие исследователи уделяют большое внимание такому стрессогенному заболеванию нервной системы как головная боль напряжения (ГБН). Данная форма первичных цефалгий расценивается многими, авторами как проявление повышенной тревожности, выраженных депрессивных расстройств, возникающее в ответ на воздействие острого или хронического дистресса. Страдают различными формами ГБН по различным оценкам от 30 до 78 % населения. Для оценки состояния больных с этим заболеванием на данный момент разработано небольшое количество диагностических тестов (например, ЭМГ перикраниальной мускулатуры) имеющих ограниченное применение (Вейн A.M., 2001; Jensen R., 2003). Одним из маркеров тяжести патологического процесса при стрессогенных заболеваниях, включая ГБН, могут служить показатели интенсивности СРО, однако правомочность их использование в данном качестве до конца не ясна.

Для коррекции стрессогенных нарушений нервной системы, в том числе ГБН, используется целый ряд фармакологических средств, среди которых ведущие позиции занимают психотропные препараты. Они, будучи средствами патогенетической терапии, могут оказывать выраженное влияние на GPO в организме. Это связано с тем, что психотропные препараты вызывают значительные изменения нейромедиаторного обмена, рецепторного аппарата и собственного липидного бислоя клеточных мембран (Александровский Ю.А., 1991). Некоторые из психотропных препаратов могут обладать и собственной- антирадикальной активностью. С другой^ стороны известно, что многие антиоксиданты, например, мексидол, обладают анксиолитической, противосудорожной активностью, за счет мембранотропного действия (Дюмаев K.M., 1995).

Информативным методом изучения СРО в биологических. объектах является регистрация хемилюминисценции (XJI) - свечения возникающего при взаимодействии радикалов (Фархутдинов P.P. 1995, Пикуза О.И., 1996, Roda А., 2000). Этот метод, обладает высокой чувствительностью, с его помощью можно определять коротко живущие нестабильные радикалы, которые другими способами не регистрируются. Это единственный способ исследования СРО, который не нуждается в специальных лабораторных условиях и длительной подготовки материала к анализу, отвечает требованиям экспресс-метода. Метод регистрации XJI может быть использован как в клинике (оценка XJI крови, мочи и т.п.), так и в экспериментальной работе (оценка XJI гомогенатов тканей).

Изучая влияние препаратов на XJI модельных систем, имитирующих наиболее часто встречающиеся в организме процессы СРО (генерацию активных форм кислорода (АФК) и перекисное окисление липидов (ПОЛ)), можно судить о про- или антиоксидантной активности исследуемых веществ. С помощью метода регистрации XJI можно уточнить механизмы действия и провести сравнительный анализ антиоксидантной активности различных веществ (Фархутдинов P.P., 1995). В связи с этим значительный интерес представляет комплексное изучение состояния СРО при стрессе в головном мозге и крови экспериментальных животных, а также определение влияния психотропных препаратов, широко используемых в клинической практике, на эти процессы.

Цель исследования.

Исследовать состояния СРО в коре головного мозга и крови лабораторных животных при хроническом стрессе и введении психотропных препаратов, а также в крови пациентов с хронической ГБН до и после1 психофармакотерапии, оценить влияние психотропных препаратов на . процессы СРО in vitro в различных модельных системах для уточнения, механизма их антиокислительного действия.

Задачи исследования.

1. Изучить состояние СРО в коре головного мозга и крови лабораторных животных подвергавшихся хроническому стрессовому воздействию (принудительное плавание). Проанализировать связь изменений в поведении животных и СРО в головном мозге.

2. Исследовать влияние психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, флюанксол, настой валерианы) на СРО в коре головного мозга и крови лабораторных животных и их поведение в условиях хронического стресса.

3. Выяснить влияние психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальпроат натрия, тиоктацид) на СРО в модельных системах in vitro.

4. Оценить состояние СРО в крови и клинико-психофизиологические параметры пациентов с хронической ГБН до и после психофармакотерапии, выявить взаимосвязь между показателями СРО и клиническими данными.

Научная новизна

Выявлена связь между нарушениями СРО в коре головного мозга и поведенческими реакциями экспериментальных животных при хроническом стрессе. Продемонстрирована способность психотропных препаратов (флупентиксол, феназепам, гидроксизин, валериана), регулировать СРО в головном мозге крыс в условиях хронического стресса. Показана сопряженность антиоксидантного эффекта препаратов с психофармакологической активностью. Изучено влияние ряда психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, флупентиксол, настой валерианы) на СРО в модельных системах in vitro. Уточнены механизмы действия на процессы СРО названных психотропных препаратов, в частности на генерацию АФК, ПОЛ. Выявлены in vitro выраженные антиоксидантные свойства у пропофола и менее выраженные у гидроксизина, феназепама, вальпроевой кислоты, валерианы. Оценено состояние СРО крови пациентов с хронической ГБН с помощью метода регистрации XJ1. Проведен корреляционный анализ клинических и психофизиологических характеристик больных ГБН и состояния СРО в крови. Выявлена взаимосвязь между показателями XJI плазмы крови и некоторыми параметрами тревоги и депрессии.

Практическая ценность исследования

Уточнены механизмы действия психотропных препаратов на СРО in vitro и in vivo, что позволило прогнозировать их влияние на процесс радикалообразования и возможности его регуляции. Результаты изучения XJ1 в крови пациентов с ГБН до и после лечения дали возможность рекомендовать данный метод для оценки тяжести данного заболевания и контроля эффективности его лечения.

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях хронического стресса в коре головном мозге и крови животных активируются процессы СРО, что проявляется в усилении интенсивности XJI тканей. Степень активации СРО в коре головном мозге коррелирует со степенью нарушений поведенческих реакций животных.

2. Психотропные препараты нормализуют СРО в головном мозге и крови, а также поведенческие реакции стрессированных животных.

3. В модельных системах, в которых генерировались АФК и протекали процессы ПОЛ, сопровождающиеся XJI, психотропные препараты (феназепам, гидроксизин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальпроат натрия) проявляли антиоксидантные свойства различной степени выраженности, тиоктацид - проявлял прооксидантные свойства

4. У пациентов с ГБН интенсивность XJI сыворотки крови, а также индуцированная XJI цельной крови - достоверно выше, чем в контрольной группе здоровых людей. После лечения психотропными препаратами интенсивность XJI крови пациентов с ГБН достоверно снижается и не отличается от контроля.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертации доложены на VI научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург 2004), 79-ой всероссийской студенческой научной конференции (Казань 2005), XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005), 70-ой юбилейной итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2005), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященная 100-летию профессора В.А. Самцова «Типовые патологические процессы» (Уфа, 2005), 4-ой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005), 10-зимней научной школе CIMO «Nutrition and health — behavioral, medical, environmental factors» (Финляндия, Тампере, 2006).

Диссертация обсуждена на совместном заседании научно-технического совета Центральной научно-исследовательской лаборатории и кафедр фармакологии №2, неврологии с курами нейрохирургии и медицинской генетики Башкирского государственного медицинского университета (Протокол № 2 от 19.04.2006).

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано 17 научных работ, в том числе 1 информационно-методическое письмо.

Объем и структура диссертации

ВЫВОДЫ

1. У лабораторных животных в условиях хронического стресса происходит активация СРО в коре головного мозга и крови, которая выражается, в том числе в усилении интенсивности ХЛ. Между изменением интенсивности ХЛ гомогената коры головного мозга и сыворотки крови животных при стрессе существует достоверная корреляционная связь.

2. Между уровнем СРО в головном мозге и степенью изменения поведенческих реакций иметься достоверная корреляционная связь.

3. Введение различных психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, флюанксол, настой валерианы) лабораторным животным в условиях хронического стресса нивелирует степень нарушений поведенческих реакций, а также СРО в головном мозге и крови.

4. Среди психотропных препаратов наиболее выраженные' антиокислительные свойства в модельной системе генерирующей АФК проявили пропофол, а также гидроксизин, вальпроат натрия и настой валерианы. Антиокислительная активность феназепама, мидазолама оказалась слабее. Тиоктацид вызвал усиление СРО в модельной системе АФК.

5. Наибольшую антиокислительную активность в модельных системах, в которых протекали реакции ПОЛ, проявил пропофол. Валериана, атаракс, феназепам и вальпроат натрия влияли на интенсивность процессов ПОЛ в меньшей степени. Мидазолам не изменял интенсивность реакций * ПОЛ. в модельных системах. Тиоктацид проявил выраженные прооксидантные свойства.

6. У пациентов с хронической ГБН происходит повышение интенсивности ХЛ в цельной крови и плазме, по сравнению со здоровыми людьми. После курса стандартного лечения психотропными препаратами показатели ХЛ крови нормализуются наряду с клиническим улучшением состояния. Существует корреляционная связь между показателями XJI крови и данными клинического обследования и психологических тестов на тревогу и депрессию.

7. Применение хемилюминесцентных методов позволяет оценивать анти -и прооксидантные свойства различных веществ in vitro и in vivo, расширяет представления об их фармакологических свойствах. Метод регистрации ХЛ может применяться у пациентов с хронической ГБН для оценки состояния СРО и для контроля эффективности психофармакотерапии. 1

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Метод регистрации ХЛ рекомендуется для оценки влияния психотропных препаратов на процессы СРО in vitro и in vivo.

2. При назначении психотропных препаратов необходимо учитывать их влияние на процессы СРО в организме пациента.

3. Интенсивность ХЛ плазмы крови пациентов с ГБН коррелирует с данными психологических тестов и может, рекомендоваться для оценки состояния СРО при хронической ГБН, как маркера тяжести патологического процесса и эффективности психофармакотерапии.