Автореферат и диссертация по медицине (14.03.01) на тему:СТРОЕНИЕ БРЫЖЕЕЧНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ КРЫС В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА (экспериментально-морфологическое исследование)

На правах рукописи

СЫСОЕВА Наталья Николаевна

СТРОЕНИЕ БРЫЖЕЕЧНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ КРЫС В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА (экспериментально-морфологическое исследование)

14.03.01 — анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 НОЯ 2012

Санкт-Петербург 2012

005054789

005054789

Работа выполнена на кафедре анатомии человека Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Карелина Наталья Рафаиловна Официальные оппоненты:

Баласанян Виктория Григорьевна доктор медицинских наук, профессор. Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра детской гинекологии и женской репродуктологин факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки, профессор

Алексина Людмила Арсентьевна доктор медицинских наук, профессор. Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра анатомии человека им. М.Г. Привеса, заведующий

Ведущая организация: Федеральное государственное казенное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Защита состоится «27» ноября 2012 г. в 14 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д 208.087.01 при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Кантемировская ул., 16

Автореферат разослан «Л/У у, ■ /О/С/ЯМ^ЪП г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Карелина Наталья Рафаиловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время накоплен большой фактический материал о влиянии различных физических и химических факторов на изменения в органах лимфоидной [иммунной] системы в различные периоды онтогенеза у человека и млекопитающих животных (Долгова М.А., 1974, 1988; Долгова М.А. и соавт., 1982, 1985; Петрова Т.Б., 1984; Савицкая Т.Н., 1985; Вихрук Т.И. и соавт., 1996, 2000; Кульбах О.С., 1996; Смирнова О.Ю., 2002; Залавина C.B., 2009; Гасанов А.Б., 2010 и мн. др.). В тоже время в последнее время внимание исследователей привлекает влияние на иммунный статус организма такого химического агента как этанол (Локтин Е.М., 2009; Грушин В.А., 2011; Ewald S. et al., 1987, 1988, 1991 1993; Wong C.M. et al., 1992; Chiapelli F. et al., 1992; Budec M. et al., 1992, 2005 и мн. др.). Тем не менее, морфологические основы изменений в органах иммунной системы при экспериментальном воздействии в различные периоды онтогенеза описаны лишь в сравнительно небольшом количестве работ (Надыров H.A., 1991; Изранов В.А., 1994; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011,2012).

В работах последних лет показано, что краниальные брыжеечные лимфатические узлы (КБЛУ) у новорождённых крыс существенно различаются между собой количественными и морфометрическими характеристиками, а также степенью зрелости их паренхимы, что связано прежде всего с их топографией (Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011, 2012). Вместе с тем большинство исследователей при изучении этой группы лимфоузлов у крыс опираются на данные Т.Н. Савицкой (1985), которая детально изучила их развитие на различных этапах онтогенеза, но без учета вышеописанных особенностей. Это обстоятельство в свою очередь может значительно искажать полученные экспериментальные данные. В настоящее время отсутствуют литературные данные, касающиеся становления структурно-функциональных зон краниальных брыжеечных лимфатических узлов у крыс в подсосном периоде, что может приводить к ошибкам в интерпретации результатов экспериментально-морфологических

исследований на этих животных.

Структурные нарушения в строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс вследствие пренатальной этаноловой интоксикации в настоящее время изучены только у новорождённых животных (Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011, 2012; Круглов и соавт., 2012). Полученные ранее данные, дают ■ возможность предположить, что переход на энтеральное питание не будет сопровождаться адекватной перестройкой этой группы лимфатических узлов, в связи с чем становление их дефинитивной организации будет нарушено.

Учитывая широкую распространенность алкоголизма, в том числе и среди женщин детородного возраста нельзя исключить поступление этанола и его метаболитов в организм ребёнка и после рождения с молоком матери. Это в первую очередь связано с тем, что женщинам, регулярно и длительно

употребляющим этанолсодержащие напитки трудно, а подчас и невозможно отказаться от их приёма (Овчинников C.B., 2008).

Таким образом, крайне важно знать о топографо-анатомических особенностях строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов в раннем постнатальном периоде крыс как в норме, так и после воздействия этанола.

Цель исследования - изучить особенности строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс, развивавшихся в условиях нормы, а также при воздействии этанола в пренаталыюм и постнатальном (подсосном) периодах онтогенеза.

Задачи исследования:

1. Изучить динамику изменений количества, площади и формы краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

2. Выявить особенности изменений клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

3. Определить с применением иммуногистохимического метода исследования становление Т- и В-зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах в зависимости от их топографии, в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

4. Выявить на основе полученных данных корреляционные связи между количеством, площадью и клеточным составом краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что у крыс в подсосном периоде происходит увеличение количества краниальных брыжеечных лимфатических узлов с 9,3±0,3 (у новорождённых) до 12,3±0,4 (на 21 сутки жизни) за счёт лимфоузлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, и, в большей степени, илеоцекальных. Впервые установлено, что увеличение общего количества краниальных брыжеечных лимфатических узлов при воздействии этанола происходит за счёт узлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий.

Впервые выявлены топографические особенности становления клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов. Показано, что наиболее зрелые узлы расположены по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, а на 21 сутки жизни топографические различия в клеточном составе краниальных брыжеечных лимфатических узлов отсутствуют. Установлено, что этанол замедляет темпы

становления клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов и усиливает его локальные различия.

Впервые установлено, что формирование типичных Т- и В-зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах происходит после выселения СБЗ+ клеток из первичных узелков и имеет топографические особенности. Показано, что при воздействии этанола замедляется становление Т- и В-доменов в краниальных брыжеечных лимфатических узлах и снижается плотность размещения СБЗ+ клеток.

Впервые установлено, что в подсосном периоде происходит увеличение факторной нагрузки за счёт лимфоидных и ретикулярных клеток. Между количеством и площадью краниальных брыжеечных лимфатических узлов с одной стороны и их клеточным составом с другой, сильные корреляционные связи выявляются редко.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные данные существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс, развивавшихся в условиях нормы и после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации.

Сведения, полученные о влиянии этанола на краниальные брыжеечные лимфатические узлы развивающегося организма, имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других вторичных иммунных органов в онтогенезе.

Полученные данные об особенностях строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов организма, развивавшегося в условиях нормы, а также после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации, представляют интерес для иммуноморфологов, педиатров и акушеров.

Внедрение результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы, в том числе 2 в журнале, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека и кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. В подсосном периоде у крыс происходят изменения в количестве, площади, форме и клеточном составе краниальных брыжеечных лимфатических узлов, которые имеют топографические особенности. С возрастом увеличивается факторная нагрузка за счёт лимфоидпых и ретикулярных клеток.

2. Этанол вызывает нарушения в динамике изменений количества, площади, формы и клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических

узлов, степень выраженности которых зависит от их топографической принадлежности.

3. Формирование Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах имеет топографические особенности и происходит после выселения CD3+ клеток из первичных узелков. Воздействие этанола замедляет этот процесс и вызывает снижение плотности размещения CD3+ клеток.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Joint Meeting of Anatomical Societies (Bursa, Turkey, 2011 г.); 5 Всероссийском конгрессе «Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты» (Санкт-Петербург, 2011 г.); XI конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Самара 2012).

Личный вклад соискателя в разработку проблемы. Работа выполнена в рамках комплексной темы НИР кафедры анатомии человека СПбГПМА (№ гос. регистрации 01200506433). Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах компьютерного текста и состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материал и методы исследования», «Результаты исследования», «Обсуждение результатов исследования», выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Список литературы содержит 170 источников, в том числе 117 отечественных и 53 инострашшх. Работа иллюстрирована 21 микрофотографиями,

153 диаграммами и снабжена 27 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования.

Исследование краниальных брыжеечных узлов выполнено на 196 крысах в периоде молочного кормления (в возрасте от 1 до 21 суток постнатальной жизни (Западнюк И.П. и соавт., 1974) (табл. 1). Животные были разделены на две группы: I (контрольную) группу составили животные, родившиеся от самок, ежедневный рацион которых на всём протяжении эксперимента составляли сухой комбикорм и питьевая вода; во II (экспериментальную) группу вошло потомство самок, получавших во время беременности и после её окончания, на протяжении всего периода наблюдений, сухой комбикорм и 15% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости. Самок крыс получали в виварии СПбГПМА и содержали в пластмассовых клетках размером 50 смхЗО смхЗО см, в сухом, отапливаемом помещении с достаточным естественным и искусственным освещением, при температуре +20° - +22°С. Питание крыс проводилось сухим комбикормом.

Таблица 1

Распределение материала по количеству и возрастным группам

Возраст животных Контрольная группа Экспериментальная группа

Новорождённые 25 28

7 суток 22 25

14 суток 26 23

21 сутки 24 23

Итого 97 99

ВСЕГО 196

Для получения достоверных результатов всех животных выводили из опыта в весенний период с марта по июнь. Исследования проводились с соблюдением приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 года и приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР от 13.11.1984 года "О правилах проведения работ с использованием экспериментальных животных". Животных декапитировали под наркозом (пары хлороформа).

Для оценки показателей возрастной морфологии площади КБЛУ на срезах рассчитывали абсолютный прирост (АП), энергию роста (ЭР) и темп прироста (ТП) (Андронеску А., 1970; Агеева В.А., 2007).

АП определяли как разность между абсолютными значениями показателя в данный и предыдущий периоды:

AII = N2-NI,

где N2 - абсолютное значение показателя в данный период; N! - абсолютное значение показателя предыдущего периода.

ЭР рассчитывали как отношение АП к истекшему промежутку времени: ЭР = An/tz-tj,

где ЭР - энергия роста; АП - абсолютный прирост; t2 и t, - время (сут) истекшее между данным и предыдущим уровнем сравниваемых величин (7 суток).

ТП вычисляли как отношение между АП данного периода и абсолютным уровнем показателя предыдущего периода:

ТП = АП2/М1Х100%, где ТП - темп прироста; АП2 - абсолютный прирост в данный период; Ni -абсолютный показатель предшествующего периода.

Для изучения краниальных брыжеечных лимфатических узлов под бинокулярной лупой МБС-2 выделяли комплекс, состоящий из брыжейки тонкой кишки, брыжеечных сосудов и нервов, а также жировой и лимфоидной ткани, расположенной в корне брыжейки тонкой и толстой кишок и производных брюшины. В целях исключения антигенной стимуляции КБЛУ исследование их морфометрических параметров и клеточного состава у новорождённых крыс проводилось на комплексах лишь тех животных, которые

на время взятия материала были голодным^, что определялось по отсутствию пищи в желудочно-кишечном тракте. Если в желудке крысят обнаруживалось пищевое содержимое, то комплексы, выделенные от таких животных, использовались только для определения принадлежности лимфатических узлов к той или иной топографической группе, подсчета их количества и определения формы.

Краниальные брыжеечные лимфатические узлы у новорождённых крыс расположены в брыжейке тонкой кишки по ходу краниальной брыжеечной артерии. Топографически КБЛУ были разделены на три группы. Первая топографическая группа объединяет узлы, расположенные в начальном отрезке краниальной брыжеечной артерии и её ветвей, до места отхождения от неё подвздошно-ободочной артерии. Вторая топографическая группа узлов локализуется в брыжейке тонкой кишки, по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий. Третья топографическая группа включает в себя узлы, расположенные в' области илеоцекального угла на нижне-медиальной поверхности слепой кишки или в подвздошно-слепокишечной связке, на некотором расстоянии от илеоцекального угла (Свирин С.В., 2010; Пугач П.В., 2010,2012).

Выделенный комплекс размещали на плотной бумаге и фиксировали в 10% растворе формалина, приготовленного на фосфатном буфере, в течение 24 часов. После этого материал обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. Затем на микротоме «Асси-Сщ» изготовлялись серийные гистологические срезы толщиной 2-3 мкм. Для объективной морфологической оценки полученных срезов, выделенные

комплексы резали в трёх плоскостях.

В работе использован комплекс методов морфологического исследования. Форму лимфатических узлов определяли в соответствии с рекомендациями Ю.И. Бородина и др. (1992). За узлы округлой формы принимали узлы, продольный размер которых был не менее, чем в 2 раза меньше его поперечника и толщины. В узлах овальной формы продольный размер был в 2 - 3 раза больше его поперечника и толщины. Узлы, в которых определялась подковообразная изогнутость, относили к бобовидным. К узлам лентовидной формы относили узлы, продольный размер которых в 3 и более раз превышал его поперечник. Узлы, имеющие широкую центральную часть и суживающиеся к полюсам, определяли как веретеновидные.

Для изучения структуры узлов использовались следующие методы исследования. Для определения топографической принадлежности и формы узлов, а также морфометрии, срезы окрашивали гематоксилином-эозином; подсчёт клеточных элементов производился на препаратах, окрашенных азур-2-эозином; маркеры зрелых тимоцитов выявлялись иммуногистохимическим окрашиванием срезов мышиными анти-крысиными антителами к СБЗ с последующей доокраской гематоксилином. '

Структуру КБЛУ изучали при помощи светового микроскопа «МИКРОМЕД-№3» со съёмной камерой. Определяли топографию КБЛУ относительно краниальной брыжеечной артерии и её ветвей, их количество и

форму. Для подсчёта площади лимфоузлов использовали программу «Image». Корково-мозговой индекс вычисляли как отношение площади коркового вещества к площади мозгового. Все морфометрические параметры измерялись на срединных продольных срезах, проходящих через плоскость ворот узла. Размеры структурно-функциональных зон КБЛУ определяли в 10 полях зрения у 10 животных. Каждый параметр измерялся не менее 50 раз. Клеточный состав тимуса определялся при окуляре 10 и объективе 100 на единице площади 15000 мкм2. Необходимость подсчёта клеток на заведомо определённой площади обусловлена изменением насыщенности полей зрения клетками при одинаковой толщине срезов. Подсчёт же заранее определённого числа клеток, привёл бы к ошибкам при анализе содержания различных популяций клеток в тимусе (Долгова М.А., 1974). Подсчёт клеток узлов в случаях отсутствия корково-мозговой дифференцировки проводился во всей паренхиме; в зависимости от степени выраженности структурно-функциональных зон, число клеток определялось в первичных узелках, диффузной части и мозговых тяжах при окуляре 10 и объективе 100.

Полученный цифровой материал обрабатывался с использованием статистического пакета Microsoft Excel. Полученные результаты представлены в таблицах и диаграммах. Факторный анализ полученных данных произведён при использовании прикладной программы SPSS 16,0 for Windows. Математико-статистическое описание объектов исследования осуществлялось с помощью традициошшх и давно утвердившихся в медицинских исследованиях методов (Лакин Г.Ф., 1990; Воронов И.А., 2008).

Результаты исследования и их обсуждение.

В результате проведённого исследования установлено, что в раннем постнатальном периоде онтогенеза крыс изменяются количество, площадь на срезах, форма и клеточный состав краниальных брыжеечных лимфатических узлов. В зависимости от локализации КБЛУ эти изменения происходят с разной интенсивностью. При воздействии этанола определяются нарушения в развитии КБЛУ, выраженность которых зависит от топографии.

На протяжении подсосного периода у животных, развивавшихся в физиологических условиях, увеличивается общее количество КБЛУ с 9,3±0,3 (у новорождённых) до 12,3±0,4 (на 21 сутки жизни). Это происходит в результате разделения паренхимы узла глубоко проникающими в неё капсульными трабекулами, обособлением лимфоидной ткани от первичного узла и формированием собственной капсулы для каждого из вновь образованных узлов. Этот процесс идёт асинхронно, в зависимости от топографической принадлежности лимфоузла. Раньше всего, в течение первой недели постнаталыюй жизни, разделение начинается в КБЛУ илеоцекальной области, затем на второй неделе в узлах, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошпо-ободочной артерий (табл.2).

Таблица 2

Динамика изменений количества краниальных брыжеечных лимфатических узлов у крыс

Возраст животного Группа животн ых Общее количество КБЛУ Топогра( шческая группа КБЛУ

I II Ш

Новорожденные Контроль 9,3±0,3 6,5±0,2 1,4±0,1 1,5+0,2

Опыт 7,9+0,2^ 5,2±0,3(*' 2,6±0,3С*'

7 суток Контроль 10,3±0,5(**' 6,3±0,2 1,3±0,2 2,6±0,2(**'

Опыт 8,5+0,3l*w**J 5,l±0,2l*J 3 з+0,2(*',(**'

14 суток Контроль 11,1+0,3 6,1 ±0,2 1,5+0,1 3,4+0,1 **

Опыт Ю^ОД'*"**1 6',3±0,2l*J' З.в+ОД1*"**'

21 сутки Контроль 12,3+0,4(**' 6,2±0,2 2,3±0,3(**J 3,6±0,2

Опыт ll^iti)^*"**' 6,2±0,3 4,5±0,21*' 0,8±0,1<*"**>

* - различия с контролем статистически достоверны (0,0005<р<0,05)

** - различия с предыдущей группой животных статистически достоверны (0,0005<р<0,05)

В литературе высказаны две противоположные точки зрения на изменение количества лимфоузлов в онтогенезе человека и животных. Согласно первой, число узлов имеет тенденцию к уменьшению. В пренатальном и раннем постнатальном периодах, это осуществляется в результате слияния узлов или их зачатков (Мельникова A.M., 1969; Шуркус В.Э. и соавт., 2002). В последующих возрастных периодах уменьшение количества узлов связано, главным образом, с замещением их паренхимы соединительной тканью (Махмудов З.А., 1980; Сапин М. Р. и Борзяк Э. И., 1982).

По данным других исследователей, число лимфатических узлов в различные периоды онтогенеза увеличивается. Так, Л.С. Беспалова (1967), подробно описала процесс раздробления лимфоузлов-конгломератов. По её мнению, дробление общих регионарных лимфатических узлов можно наблюдать не только на ранних стадиях эмбриогенеза, но и в постнатальном онтогенезе, вплоть до периода полового созревания. Разделение узлов начинается с формирования в них функционально и морфологически изолированных синусов. На втором этапе происходит разделение паренхимы узла на доли. И, наконец, на третьем этапе - оформление долей в самостоятельные узлы. Кроме этого, у животных дробление общих регионарных узлов-конгломератов имеет некоторые особенности. От лимфоузла, который представляет собой компактное образование, обособляется только сравнительно небольшой участок.

Д.С. Цывьян-Шалагинова (1961, 2003) не исключает возможности образования новых лимфатических узлов в постнатальном онтогенезе, как компенсаторную реакцию при изменешш условий лимфотока. По мнению автора, в построении новых лимфоузлов основную роль играют «оседлые лимфоидные и ретикулярные элементы, расположенные в жировой клетчатке в окружности лимфатических сосудов и узлов и в рыхлой соединительной ткани, окружающей кровеносные капилляры, а также (по-видимому) лимфоидные элементы, выселяющиеся из тока крови и лимфы. Из этих клеточных форм образуются периваскулярные инфильтраты, в дальнейшем преобразующиеся в незрелые, а потом вполне сконструированные лимфатические узлы».

В.Э. Шуркус и соавт. (2002) описали развитие висцеральных лимфатических узлов брюшной полости и их предшествующий генез. Развитие лимфатических узлов сопряжено с развитием лимфатического русла. Формированию закладок лимфатических узлов предшествуют предлимфатическая стадия развития лимфопроводящих путей, организация первичных лимфатических структур и появление лимфатических сплетений. Авторами показано, что формирование первичных лимфатических структур происходит из мезенхимных клеток на базе разрушенных презумптивных вен в результате поворотов кишечной трубки и, как следствие, изменений условий кровотока.

В то же время необходимо учитывать, что количество брыжеечных лимфатических узлов у крыс во много раз меньше, чем у человека (Иосифов И.М., 1944; Жданов Д.А., 1945; Спиров М.С., 1959, 1963; Красовский Г.Т., 1962; Рахимов Я.А., 1968; Сапин М. Р. и Борзяк Э. И., 1982; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011, 2012). Это, в свою очередь, увеличивает достоверность полученных данных об изменении числа КБЛУ в постнатальном онтогенезе крысы. Тем не менее, изучая становление дефинитивной организации брыжеечных лимфатических узлов крыс, Т.Н. Савицкой (1985) не удалось зафиксировать этот факт.

У животных при воздействии этанола, общее количество КБЛУ достоверно меньше, чем в контроле на протяжении всего периода наблюдений. Однако, по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий число узлов в 100% случаев больше, а в области илеоцекального угла они отсутствуют вплоть до третьей недели жизни (табл.2). Такие топографические особенности количества КБЛУ у экспериментальных животных, по нашему мнению, можно объяснить следующим. Во-первых, более рашгам началом разделения узлов (ещё в пренатальном периоде); во-вторых, отсутствием закладки лимфоузлов в илеоцекальной области; в-третьих, каудальным смещением отделившихся узлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий.

Лимфатические узлы обладают большим полиморфизмом (Беспалова Л.С., 1967; Сапин М.Р. и соавт., 1978; Сапин М.Р. и Борзяк Э.И., 1982; Бородин Ю.И. и соавт., 1992). В проведённом исследовании установлено, что с возрастом происходит преобразование форм КБЛУ у крыс. У контрольных новорождённых крыс встречаются округлые, овальные,

веретеновидные, бобовидные и лентовидные формы узлов. При этом, лентовидные узлы встречаются только по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, а в области илеоцекального угла регистрируются узлы, имеющие исключительно округлую форму. Подобное разнообразие форм лимфатических узлов объясняется сложным и асинхронным развитием лимфатических узлов в пренатальном онтогенезе (Мельникова А.М., 1969; Шуркус В.Э. и соавт., 2002).

У крыс на 7 сутки жизни КБЛУ, расположенные проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, представлены только овальной и бобовидной формами, в следующей топографической группе (по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий) - бобовидной и лентовидной, а в области илеоцекального угла они имеют округлую и бобовидную формы. К концу второй недели постнатального развития преимущественная форма КБЛУ бобовидная, однако, в илеоцекальной области регистрируются овальные узлы. По всей видимости, это является результатом разделения бобовидных узлов. На 21 сутки жизни изменяется форма узлов, расположенных только в илеоцекальной области, среди которых появляются бобовидные.

При воздействии этанола особенности форм лимфоузлов крыс заключаются в следующем. У новорождённых крыс, среди узлов, расположенных проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии наблюдается появление узлов треугольной формы. Такую форму, вероятно, обусловливает неравномерный рост овального узла, что является следствием формообразующих процессов, которые' наблюдаются в пренатальном периоде развития брыжеечных лимфоузлов (Смирнова 0.10. и Денисова Г.Н., 2012). Для КБЛУ, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий характерно отсутствие лимфоузлов бобовидной формы. Формы узлов разных топографических групп существенно не изменяются на протяжении следующих двух недель. На 21 сутки жизни КБЛУ имеют, в целом, те же формы, что и узлы у

контрольных животных.

Увеличение площади лимфатических узлов является адаптивным процессом и отмечен многими исследователями (Махмудов З.А., 1980; Савицкая Т.Н., 1985; Санин М.Р. и Борзяк Э.И., 1982; Бородин Ю.И. и соавт., 1992). Изменение суммарной площади КБЛУ на срезах, по нашим данным, имеет ряд топографических особенностей. У контрольных животных, максимальные темпы прироста этого параметра отмечаются на 14 сутки жизни во всех топографических группах. В то же время, наиболее интенсивно происходит увеличение площади КБЛУ, расположенных в области илеоцекального угла, а наименьшие темпы прироста - у узлов, локализующихся проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии (табл. 3, 4). Этот факт, вероятно, связан с увеличением, как количества КБЛУ в илеоцекальной области, так и значительно возросшей функциональной нагрузкой на эти узлы.

Таблица 3

Динамика изменений площади на срезах краниальных брыжеечных лимфатических узлов у крыс, мм2

Возраст животного Группа животных Площадь КБЛУ на срезах, мм2

Суммарная •Топографическая группа КБЛУ

I П III

Новорожденные Контроль 1,197 ±0,092 0,568 ±0,015 0,402 ±0,024 0,224 ±0,011

Опыт 0,981'*' ±0,050 0,591(*' ±0,012 0,391 ±0,012 -

7 суток Контроль 2,031е**' ±0,089 0,856{**' ±0,054 0,6391**' ±0,034 0,528 ±0,096(**'

Опыт 1,583 ±0,084(*м**' 0,881 ±0,032(**' 0,685 ±0,036(*''(**' -

14 суток Контроль 4,164(**' ±0,156 1,573(**' ±0,087 1,361(**' ±0,072 1,274 ±0,063(**'

Опыт 3,369 ±0,109(*',(**' 1,302 ±0,027(*),(**' 2,055 ±0,063(*''(**> -

21 сутки Контроль 6,345(**' ±0,298 2,249 ±0,128(**' 1,906(**' ±0,101 2,184 ±0,182(**'

Опыт 5,926 ±0,202(*'1**' 1,900 ±0,095*)'(**) 3,468 ±0 177*),(**) 0,569 ±0,031*"**'

* - различия с контролем статистически достоверны (0,0005<р<0,05)

** - различия с предыдущей группой животных статистически достоверны (0,0005<р<0,05)

Таблица 4

Динамика изменений темпов прироста площади на срезах краниальных брыжеечных лимфатических узлов у крыс, %

Возраст животного Группа животных Темпы прироста площади КБЛУ, %

Суммарная • Топографическая группа КБЛУ

I II Ш

7 суток Контроль 70 51 59 127

Опыт 61 49 75 -

14 суток Контроль 105 74 99 141

Опыт 113 62 200 -

21 сутки Контроль 52 43 40 71

Опыт 76 46 69 -

При воздействии этанола в КБЛУ отмечается динамика изменения суммарной площади, сходная с контрольными показателями. Однако темпы прироста площади выше, что особенно заметно в группе узлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной

артерий. Так, если темпы прироста площади узлов этой топографической группы у контрольных животных на 7 сутки жизни составляют 59%, то у экспериментальных - 75%, на 14 сутки - 99% и 200% соответственно, а на 21 сутки - 40% и 69 % (табл. 3, 4). Такие изменения динамики площади КБЛУ носят, по всей вероятности, неспецифический характер; так сходные изменения в площади лимфатических узлов отмечаются и при других экспериментальных воздействиях (Капитонова М.Ю. и Краюшкина Н.Г., 2012). Известно, что этанол способен подавлять функции иммунных органов (Надыров Э.А., 1991; Оготоева С.Н. и соавт., 2009; Johnson S. et al„ 1981; Calvani M. et al„ 1985; Ewald DJ. and Frost W.W., 1987; McGill J. et. al., 2009). Выявленные нами особенности изменения площади и темпов её прироста КБЛУ связаны, как с увеличением их количества, так и, в бблыпей степени, являются компенсаторной реакцией, направленной на уменьшение выраженности нарушений в лимфоузлах, возникающих при воздействии этанола.

Как показало проведённое исследование, формирование структурно-функциональных зон и становление клеточного состава зависят от формы и топографии КБЛУ. У новорождённых крыс, развивавшихся в физиологических условиях, встречаются узлы с гомогенной паренхимой, начинающейся корково-мозговой дифференцировкой (КМД), а также с первичными узелками (ПУ). Лимфоузлы без признаков КМД имеют, как правило, округлую или овальную формы. В бобовидных и веретеновидных КБЛУ отмечается тенденция к разделению их паренхимы на корковое и мозговое вещество. ПУ встречаются в лентовидных и бобовидных узлах. Таким образом, наиболее зрелые узлы обнаруживаются по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошпо-ободочной артерий.

Для узлов без КМД свойственно высокое содержание ретикулярных клеток (до 85,48% в узлах илеоцекальной области), отсутствие макрофагов и гранулоцитов. Такой клеточный состав характерен для зачатков лимфоузлов крыс 16-17 суток внутриутробного развития (Савицкая Т.Н., 1985).

В узлах с КМД увеличивается количество малых лимфоцитов, особенно в формирующемся корковом веществе (KB) (до 46,58%), а также появляются макрофаги, нейтрофильные и базофильные гранулоциты. У человека первые макрофаги в брыжеечных лимфоузлах регистрируются в период с 17 по 35 неделю внутриутробной жизни (Юрина С.А., 1971), а у крысы - на 1 сутки постнатального развития (Савицкая Т.Н., 1985). Нейтрофильные и базофильные гранулоциты, являющиеся регуляторами иммуногенеза (Долгова М.А., 1974), появляются у крыс, по данным Т.Н. Савицкой (1985) на 20 сутки пренатального онтогенеза.

Для КБЛУ с ПУ характерно преобладание малых лимфоцитов во всех структурно-функциональных зонах. Гранулоциты всех видов отсутствуют только в глубокой части коры, а в мозговых тяжах присутствуют и плазматические клетки. Наличие эозинофилов и плазмоцитов в таких узлах, также свидетельствует о более зрелом клеточном составе, как в структурном, так и функциональном отношении (Юрина С.А., 1971; Долгова М.А., 1974; Кругликов Г.Г. и соавт., 2012).

После пренатального воздействия этанола у новорождённых крыс регистрируются только КБЛУ с начинающейся КМД. Такая однородность по степени зрелости КБЛУ может быть обусловлена как задержкой их закладок, так и являться следствием плацентарной недостаточности, при которой происходит их ускоренная дифференцировка (Гуляева Н.И. и Мелехин C.B., 2012). При этом, в клеточном составе снижено количество клеток лимфоидного ряда, но присутствуют эозгаюфильные гранулоциты (до 4,79%). Содержание нейтрофильных и базофильных гранулоцитов уменьшено, что свидетельствует об усилении дезинтоксикационной функции КБЛУ при одновременном подавлении неспецифических защитных реакций (Долгова М.А., 1974). Аналогичные изменения в КБЛУ новорождённых крыс, вследствие пренатальной алкогольной интоксиикации описаны и другими исследователями (Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011. 2012). В то же время, при интерпретации данных, касающихся клеточного состава КБЛУ, необходимо учитывать и общее влияние этанола как токсического агента на развивающийся организм и, в частности, на тимус, который, как известно, непосредственно участвует в становлении вторичных иммунных органов (Бернет Ф., 1964; Сапин, М.Р. и Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; Пугач П.В., 2011; 2012; Расулов К.К. и соавт., 2012; Тухтаев К.Р. и соавт., 2012; Lio C.W. and Hsieh C.S., 2011).

На 7 сутки жизни у контрольных животных КБЛУ с гомогенной паренхимой обнаруживаются только в илеоцекальной области. В них сохраняется преобладание ретикулярных клеток (73,63%), что можно объяснить образованием нового узла, в результате разделения более зрелого и перераспределением в нём клеточных элементов.

У крыс этой возрастной группы в части бобовидных узлов, расположенных проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, появляются первичные узелки с характерным для таких КБЛУ клеточным составом. В узлах овальной и бобовидной форм, с начинающейся КМД, возрастает количество клеток лимфоидного ряда, а также усиливается митотическая активность. При воздействии этанола у крыс на 7 сутки жизни в узлах этой топографической группы отсутствуют ПУ; в КБЛУ с начинающейся КМД снижено количество лимфоидных и митотически делящихся клеток, выражена макрофагальная и эозинофильная реакции.

КБЛУ, расположенные по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, по степени зрелости паренхимы представлены такими же узлами, как и в предыдущей топографической группе. Вместе с тем, их отличает большее количество лимфоцитов, а также иное абсолютное и относительное содержание остальных клеточных элементов, свойственное для более зрелых узлов. В отличие от контрольных, у экспериментальных животных КБЛУ с ПУ отсутствуют в данной топографической группе. Тем не менее, тенденция к более зрелому клеточному составу, по сравнению с узлами, расположенными проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, сохраняется.

У контрольных животных на 14 сутки жизни КБЛУ всех форм и топографических групп характеризуются наличием ПУ, при этом их

наибольшее количество (5,2±0,5) отмечается в узлах, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий. Для клеточного состава ПУ свойственно уменьшение числа малых лимфоцитов, увеличение количества средних и больших лимфоцитов, а также митотически делящихся клеток, что свидетельствует о начинающемся процессе формирования герминативных центров. К локальным особенностям КБЛУ у животных в этот возрастной период следует отнести более активное формирование ГЦ в узлах, локализующихся проксимально от начала

подвздошно-ободочной артерии.

При воздействии этанола у крыс на 14 сутки жизни основные структурные компоненты КБЛУ сформированы, за исключением овальных узлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий. При этом, КБЛУ овальной и округлой форм, локализующиеся проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, характеризуются отсутствием ПУ и выраженным лимфоцитарным истощением. Это, в свою очередь, выражается в однотипном клеточном составе всех зон узла Такую же структурную перестройку в брыжеечных лимфатических узлах наблюдали М.В. Абрамова и П.Г. Магамедова (2012) после воздействия излучения '"Се. Кроме того, в этих узлах резко выражена эозинофильная и макрофагальная реакции. Тем не менее, только в этой топографической группе встречаются бобовидные КБЛУ с ПУ. Такой полиморфизм, вероятно, связан со становлением регионарной специфичности лимфоузлов, обусловленной поступлением в них лимфы от разных органов верхнего этажа брюшной полости (Харченко В.Г., 2005). Известно, что лимфоотток от органов брюшной полости отличается значительной вариабельностью (Сапин М.Р. и Борзяк Э.И., 1982, Мисник В.П. и соавт., 2001; Шуркус В.Э. и соавт., 2002). Большая часть этанола, поступившего в организм, всасывается в желудке. Видимо, резкое снижение количества лимфоидных клеток связано с непосредственным токсическим действием метаболитов этанола, а в эти КБЛУ осуществляется лимфоотток от желудка.

К концу третьей недели постнаталыюй жизни клеточный состав всех форм лимфоузлов у контрольных животных не имеет топографических особенностей. Во всех КБЛУ сформированы ГЦ. Абсолютное и относительное количество клеточных элементов соответствует дефинитивному

(Савицкая Т.Н., 1985).

При воздействии этанола у крыс в этом возрасте сохраняются локальные особенности КБЛУ. По сравнению с двухнедельными животными возрастает число лимфоидных клеток во всех узлах, расположенных проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии. В КБЛУ, локализующихся по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, не только появляются ПУ, но и начинаются процессы оформления ГЦ, что выявляется при иммуногистохимическом исследовании. Тем не менее, сужение межузелковых зон, сниженное число лимфоидных элементов в ПУ, уменьшение площади глубокой части коры, а также отличный от контрольных животных клеточный состав мозговых тяжей, свидетельствует о дисбалансе

процессов пролиферации, дифференцировки и миграции клеток. Сходные, но более резкие нарушения описаны В.А. Израновым (1994) в лимфатических узлах взрослых крыс, локализующихся в брюшной полости в условиях хронической алкоголизации. В илеоцекалыюй области появляются КБЛУ, в которых наблюдаются процессы КМД. В тоже время во всех узлах сохраняется повышенное количество макрофагов и различных видов гранулоцитов, особенно - эозинофильных.

Кроме того, рассматривая изменения, в клеточном составе лимфатических узлов необходимо учитывать и то, что этанол является мощным стрессорным агентом. Влияние стресса на развитие лимфоидных органов в различные периоды онтогенеза существенно изменяет структуру, а, следовательно, и их функции (Кульбах О.С., 1996, Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; Морозова З.Ч. и соавт., 2012; Смирнова О.Ю. и Денисова Г.Н., 2012; Улла М. и соавт., 2012; Selye H.A.,1936).

Общеизвестно, что паренхима лимфатических узлов делится на корковое и мозговое вещество. В свою очередь, в КВ различают узелковую и диффузную части, а последняя подразделяется на межузелковую и глубокую часта. Эти зоны различаются, как по своему структурному, так функциональному компонентам. В лимфоузлах выделяют В- (герминативные центры и мозговые тяжи) и Т- (межузелковая и глубокая части коры) домены. Благодаря применению иммуногистохимического метода исследования, нами на основе изучения распределения плотности размещения CD3+ клеток, удалось проследить этапы становления Т- и В-зон в норме и при воздействии этанола.

CD3+ клетки несут поверхностный маркёр, специфичный для всех клеток субпопуляции Т-лимфоцитов (Цыплаков Д.Э. и Петров C.B., 1998; Wurch A. et al. 1999). В КБЛУ без КМД CD3+ клетки равномерно распределены по всей паренхиме узла, при этом плотность распределения этих клеток варьирует в зависимости от числа лимфоидных клеток в этих узлах.

В КБЛУ с начинающейся КМД, CD3+ клетки концентрируются, главным образом, в периферических отделах узлов. Помимо этого, в таких узлах могут наблюдаться их локальные скопления, что свидетельствует о начале формирования ПУ.

В лимфоузлах с ПУ наибольшая концентрация CD3+ клеток отмечается именно в этой структурно-функциональной зоне. По мере формирования в лимфоидных узелках ГЦ, происходит выселение этих клеток с последующей их локализацией в Т- зонах КБЛУ.

Как показал факторный анализ, у крыс, развивавшихся как в физиологических условиях, так и при воздействии этанола, общим является возрастание факторной нагрузки за счет числа лимфоидных и ретикулярных клеток. В то же время, необходимо отметить топографические и возрастные особенности. Так, у новорождённых крыс в КБЛУ, располагающихся проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, образуются сильные корреляционные связи между количеством лимфоидных и ретикулярных клеток. На 7 сутки постнатальной жизни увеличивается факторная нагрузка за

счёт числа ретикулярных клеток, появляется корреляционная зависимость с митотически делящимися клетками. На 14 сутки факторная нагрузка за счёт числа лимфоидных, ретикулярных и делящихся клеток уменьшается. На 21 сутки жизни определяются сильные корреляционные связи между числом лимфоидных и ретикулярных клеток. Аналогичная динамика отмечается в этой группе узлов и при воздействии этанола. Однако факторная нагрузка меньше, но в неё входит количество митотически делящихся клеток, за исключением второй недели жизни, при включении предиктора количества КБЛУ.

В КБЛУ, расположенных ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, у новорождённых животных сильные корреляционные связи наблюдаются только между количеством ретикулярных клеток узлов разной степени дифференцировки. На первой неделе жизни появляется корреляционная зависимость между количеством ретикулярных, делящихся и в меньшей степени лимфоидных клеток, а также числом КБЛУ. На второй неделе содержание митотически делящихся клеток в факторную нагрузку не включается, но в неё входит предиктор площади лимфоузлов. На третьей неделе при сохранении сильных корреляционных связей между числом ретикулярных и лимфоидных клеток, в факторную нагрузку попадает предиктор количества узлов. При воздействии этанола в КБЛУ животных корреляционная зависимость между числом лимфоидных и ретикулярных клеток обнаруживается только у новорождённых и крыс на 21 день жизни. В остальные возрастные периоды факторную нагрузку с сильными корреляционными связями составляют лимфоидные и делящиеся клетки.

Для КБЛУ, расположенных у крыс в илеоцекальной области, характерно постепенное увеличение факторной нагрузки и усиление корреляционных связей между числом ретикулярных и лимфоидных клеток в узлах разной степени зрелости. Поскольку при воздействии этанола КБЛУ этой топографической группы встречаются только на 21 сутки жизни, то динамику корреляционных связей между числом клеток проследить невозможно. К концу третьей недели жизни в КБЛУ таких животных наблюдаются сильные корреляционные связи между количеством узлов и числом лимфоидных и ретикулярных клеток в них.

Таким образом, результаты факторного анализа подтверждают факт о тесном структурно-функциональном взаимодействии лимфоидных и ретикулярных клеток как в норме, так и при воздействии этанола (Юрина С.А., 1971; Глузман Д. Ф. и др., 1982; ОЫат О. еС ОЫагп У., 2008).

ВЫВОДЫ

1. В раннем постнатальном периоде онтогенеза крыс изменяются количество, площадь на срезах, форма и клеточный состав краниальных брыжеечных лимфатических узлов. В зависимости от локализации краниальных брыжеечных лимфатических узлов эти изменения происходят с разной интенсивностью. При воздействии этанола определяются нарушения в развитии краниальных брыжеечных лимфатических узлов, выраженность которых зависит от их топографии.

2. У интактных крыс в подсосном периоде увеличивается общее количество краниальных брыжеечных лимфатических узлов с 9,3±0,3 (у новорождённых) до 12,3±0,4 (на 21 сутки жизни). Наибольшие темпы прироста площади краниальных брыжеечных лимфатических узлов на срезах отмечаются на 14 сутки жизни, независимо от их топографии. Наиболее интенсивно происходит увеличение площади на срезах краниальных брыжеечных лимфатических узлов, расположенных в области илеоцекального угла, а наименьшие темпы прироста характерны для узлов, локализующихся проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии. К концу подсосного периода уменьшается полиморфизм краниальных брыжеечных лимфатических узлов, имеющих только бобовидную, лентовидную и овальную формы.

3. У крыс при воздействии этанола, уменьшается общее количество краниальных брыжеечных лимфатических узлов. При этом, по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий число узлов в 100% случаев больше, а в области илеоцекального угла они отсутствуют до третьей недели жизни. При воздействии этанола площадь краниальных брыжеечных лимфатических узлов на срезах меньше, чем в контроле, а темпы её прироста выше, особенно в узлах, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий. У новорождённых крыс, среди узлов, расположенных проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, наблюдается появление узлов треугольной формы. На 21 сутки жизни краниальные брыжеечные лимфатические узлы представлены такими же формами, что и у контрольных животных.

4. Наиболее интенсивное становление клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов происходит в илеоцекальных узлах, а самые зрелые узлы расположены по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий.

5. При воздействии этанола в краниальных брыжеечных лимфатических узлах происходит характерное снижение количества лимфоидных элементов и митотической активности, увеличение доли ретикулярных клеток, появление макрофагальной, эозинофильной и нейтрофильной реакций.

6. Процесс становления Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах состоит из 4 последовательных стадий: 1 стадия -заселение паренхимы СОЗ+ клетками и равномерное их распределение по всей паренхиме узлов без корково-мозговой дифференцировки; 2 стадия -накопление СЭЗ+ в периферических отделах узлов; 3 стадия - концентрация СБЗ+ клеток в первичных узелках; 4 стадия - выселение СОЗ+ из первичных узелков в диффузную часть коркового вещества и формирование герминативных центров. При воздействии этанола происходит замедление темпов формирования герминативных центров и снижение плотности содержания СОЗ+ клеток на всех стадиях их формирования.

7. У крыс в подсосном периоде, развивавшихся как в физиологических условиях, так и при воздействии этанола, возрастает факторная нагрузка за счет числа лимфоидных и ретикулярных клеток, независимо от их топографии. Между количеством и площадью краниальных брыжеечных лимфатических

узлов с одной стороны и НХ клеточным составом с другой, сильные корреляционные связи выявляются редко.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс в подсосном периоде в норме, необходимо использовать для изучения других лимфоидных органов и систем организма.

2. Стадии становления Т- и В- зон и их топографические особенности в краниальных брыжеечных лимфатических узлах крыс в подсосном периоде необходимо учитывать при проведении исследований с использованием иммуногистохимических методов на этих экспериментальных животных в

возрастном аспекте.

3. Экспериментальные данные о влиянии этанола на развитие краниальных брыжеечных лимфатических узлов необходимо учитывать и возможно экстраполировать в клиническую практику.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Брыжеечные лимфатические узлы новорожденных крыс, развивавшихся в условиях пренатальной алкогольной интоксикации /П.В. Пугач, C.B. Круглов, Н.Р. Карелина, H.H. Лукина (N.N. Sisoeva) // Ученые записки Санкт-Петербургского государственного медицинского университета. 2011.

Т.18. №2. С. 124-125. 2 Thymus of newborn rats after prenatal alcoholisation // Anatomy. 2011. Vol. 5. supplement. P. S86-S87. / P.V. Pugach, S.Y. Kruglov, N.R. Karelina,

N.N. Lukina (N.N. Sisoeva).

3. Особенности строения брыжеечных лимфатических узлов новорожденных крыс, развивавшихся в условиях пренатальной этаноловой интоксикации / П.В. Пугач, C.B. Круглов, Н.Р. Карелина, H.H. Лукина (H.H. Сысоева)// Морфология. 2012. Т. 141. № 3. С. 86.

Лицензия N 020383 от 14 апреля 1998 г.

Подписано в печать 23.10.2012. Ф-т 60x84'/lf. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. _Объем 1,0 п. л. Тираж 100 экз. Зак. N 76_

Отпечатано s ЦМТ СПбГПМУ. 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., д. 2.

В настоящее время накоплен большой фактический материал о влиянии различных физических и химических факторов на изменения в органах лимфоидной [иммунной] системы в различные периоды онтогенеза у человека и млекопитающих животных (Долгова М.А., 1974, 1988; Долгова М.А. и соавт., 1982, 1985; Петрова Т.Б., 1984; Савицкая Т.Н., 1985; Вихрук Т.И. и соавт., 1996, 2000; Кульбах О.С., 1996; Смирнова О.Ю., 2002; Залавина C.B., 2009; Гасанов А.Б., 2010 и мн. др.). В тоже время в последнее время внимание исследователей привлекает влияние на иммунный статус организма такого химического агента как этанол (Локтин Е.М., 2009; Грушин В.А., 2011; Ewald S. et al., 1987, 1988, 1991 1993; Wong C.M. et al., 1992; Chiapelli F. et al., 1992; Budec M. et al., 1992, 2005 и мн. др.). Тем не менее, морфологические основы изменений в органах иммунной системы при экспериментальном воздействии в различные периоды онтогенеза описаны лишь в сравнительно небольшом количестве работ (Надыров H.A., 1991; Изранов В.А., 1994; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011,2012).

В работах последних лет показано, что краниальные брыжеечные лимфатические узлы (КБЛУ) у новорождённых крыс существенно различаются между собой количественными и морфометрическими характеристиками, а также степенью зрелости их паренхимы, что связано прежде всего с их топографией (Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011, 2012). Вместе с тем большинство исследователей при изучении этой группы лимфоузлов у крыс опираются на данные Т.Н. Савицкой (1985), которая детально изучила их развитие на различных этапах онтогенеза, но без учета вышеописанных особенностей. Это обстоятельство в свою очередь может значительно искажать полученные экспериментальные данные. В настоящее время отсутствуют литературные данные, касающиеся становления структурно-функциональных зон краниальных брыжеечных лимфатических узлов у крыс в подсосном периоде, что может приводить к ошибкам в интерпретации результатов экспериментально-морфологических исследований на этих животных.

Структурные нарушения в строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс вследствие пренатальной этаноловой интоксикации в настоящее время изучены только у новорождённых животных (Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин C.B., 2010; Пугач П.В., 2011, 2012; Круглов и соавт., 2012). Полученные ранее данные, дают возможность предположить, что переход на энтеральное питание не будет сопровождаться адекватной перестройкой этой группы лимфатических узлов, в связи с чем становление их дефинитивной организации будет нарушено.

Учитывая широкую распространенность алкоголизма, в том числе и среди женщин детородного возраста нельзя исключить поступление этанола и его метаболитов в организм ребёнка и после рождения с молоком матери. Это в первую очередь связано с тем, что женщинам, регулярно и длительно употребляющим этанолсодержащие напитки трудно, а подчас и невозможно отказаться от их приёма (Овчинников C.B., 2008).

Таким образом, крайне важно знать о топографо-анатомических особенностях строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов в раннем постнатальном периоде крыс как в норме, так и после воздействия этанола.

Цель исследования - изучить особенности строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс, развивавшихся в условиях нормы, а также при воздействии этанола в пренатальном и постнатальном (подсосном) периодах онтогенеза.

Задачи исследования:

1. Изучить динамику изменений количества, площади и формы краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

2. Выявить особенности изменений клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

3. Определить с применением иммуногистохимического метода исследования становление Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах в зависимости от их топографии, в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

4. Выявить на основе полученных данных корреляционные связи между количеством, площадью и клеточным составом краниальных брыжеечных лимфатических узлов в зависимости от их топографии в раннем постнатальном периоде онтогенеза у крыс, развивавшихся в физиологических условиях и при воздействии этанола.

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что у крыс в подсосном периоде происходит увеличение количества краниальных брыжеечных лимфатических узлов с 9,3±0,3 (у новорождённых) до 12,3±0,4 (на 21 сутки жизни) за счёт лимфоузлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, и, в большей степени, илеоцекальных. Впервые установлено, что увеличение общего количества краниальных брыжеечных лимфатических узлов при воздействии этанола происходит за счёт узлов, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий.

Впервые выявлены топографические особенности становления клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов. Показано, что наиболее зрелые узлы расположены по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий, а на 21 сутки жизни топографические различия в клеточном составе краниальных брыжеечных лимфатических узлов отсутствуют. Установлено, что этанол замедляет темпы становления клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов и усиливает его локальные различия.

Впервые установлено, что формирование типичных Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах происходит после выселения СБЗ+ клеток из первичных узелков и имеет топографические особенности. Показано, что при воздействии этанола замедляется становление Т- и В- доменов в краниальных брыжеечных лимфатических узлах и снижается плотность размещения СЭЗ+ клеток.

Впервые установлено, что в подсосном периоде происходит увеличение факторной нагрузки за счёт лимфоидных и ретикулярных клеток. Между количеством и площадью краниальных брыжеечных лимфатических узлов с одной стороны и их клеточным составом с другой, сильные корреляционные связи выявляются редко.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные данные существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс, развивавшихся в условиях нормы и после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации.

Сведения, полученные о влиянии этанола на краниальные брыжеечные лимфатические узлы развивающегося организма, имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других вторичных иммунных органов в онтогенезе.

Полученные данные об особенностях строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов организма, развивавшегося в условиях нормы, а также после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации, представляют интерес для иммуноморфологов, педиатров и акушеров.

Внедрение результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы, в том числе 2 в журнале, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека и кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. В подсосном периоде у крыс происходят изменения в количестве, площади, форме и клеточном составе краниальных брыжеечных лимфатических узлов, которые имеют топографические особенности. С возрастом увеличивается факторная нагрузка за счёт лимфоидных и ретикулярных клеток.

2. Этанол вызывает нарушения в динамике изменений количества, площади, формы и клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов, степень выраженности которых зависит от их топографической принадлежности.

3. Формирование Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах имеет топографические особенности и происходит после выселения СЭЗ+ клеток из первичных узелков. Воздействие этанола замедляет этот процесс и вызывает снижение плотности размещения СБЗ+ клеток.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Joint Meeting of Anatomical Societies (Bursa, Turkey, 2011 г.); 5 Всероссийском конгрессе «Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты» (Санкт-Петербург, 2011 г.);Х1 конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Самара 2012).

Личный вклад соискателя в разработку проблемы. Работа выполнена в рамках комплексной темы НИР кафедры анатомии человека СПбГПМА (№ гос. регистрации 01200506433). Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм.

выводы

1. В раннем поетнатальном периоде онтогенеза крыс изменяются количество, площадь на срезах, форма и клеточный состав краниальных брыжеечных лимфатических узлов. В зависимости от локализации краниальных брыжеечных лимфатических узлов эти изменения происходят с разной интенсивностью. При воздействии этанола определяются нарушения в развитии краниальных брыжеечных лимфатических узлов, выраженность которых зависит от их топографии.

2. У интактных крыс в подсосном периоде увеличивается общее количество краниальных брыжеечных лимфатических узлов с 9,3±0,3 (у новорождённых) до 12,3±0,4 (на 21 сутки жизни). Наибольшие темпы прироста площади краниальных брыжеечных лимфатических узлов на срезах отмечаются на 14 сутки жизни, независимо от их топографии. Наиболее интенсивно происходит увеличение площади на срезах краниальных брыжеечных лимфатических узлов, расположенных в области илеоцекального угла, а наименьшие темпы прироста характерны для узлов, локализующихся проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии. К концу подсосного периода уменьшается полиморфизм краниальных брыжеечных лимфатических узлов, имеющих только бобовидную, лентовидную и овальную формы.

3. У крыс при воздействии этанола, уменьшается общее количество краниальных брыжеечных лимфатических узлов. При этом, по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий число узлов в 100% случаев больше, а в области илеоцекального угла они отсутствуют до третьей недели жизни. При воздействии этанола площадь краниальных брыжеечных лимфатических узлов на срезах меньше, чем в контроле, а темпы её прироста выше, особенно в узлах, расположенных по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий. У новорождённых крыс, среди узлов, расположенных проксимально от начала подвздошно-ободочной артерии, наблюдается появление узлов треугольной формы. На 21 сутки жизни краниальные брыжеечные лимфатические узлы представлены такими же формами, что и у контрольных животных.

4. Наиболее интенсивное становление клеточного состава краниальных брыжеечных лимфатических узлов происходит в илеоцекальных узлах, а самые зрелые узлы расположены по ходу продолжения краниальной брыжеечной и подвздошно-ободочной артерий.

5. При воздействии этанола в краниальных брыжеечных лимфатических узлах происходит характерное снижение количества лимфоидных элементов и митотической активности, увеличение доли ретикулярных клеток, появление макрофагальной, эозинофильной и нейтрофильной реакций.

6. Процесс становления Т- и В- зон в краниальных брыжеечных лимфатических узлах состоит из 4 последовательных стадий: 1 стадия -заселение паренхимы СЭЗ+ клетками и равномерное их распределение по всей паренхиме узлов без корково-мозговой дифференцировки; 2 стадия -накопление СБЗ+ в периферических отделах узлов; 3 стадия - концентрация СБЗ+ клеток в первичных узелках; 4 стадия - выселение СБЗ+ из первичных узелков в диффузную часть коркового вещества и формирование герминативных центров. При воздействии этанола происходит замедление темпов формирования герминативных центров и снижение плотности содержания СБЗ+ клеток на всех стадиях их формирования.

7. У крыс в подсосном периоде, развивавшихся как в физиологических условиях, так и при воздействии этанола, возрастает факторная нагрузка за счет числа лимфоидных и ретикулярных клеток, независимо от их топографии. Между количеством и площадью краниальных брыжеечных лимфатических узлов с одной стороны и их клеточным составом с другой, сильные корреляционные связи выявляются редко.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о строении краниальных брыжеечных лимфатических узлов крыс в подсосном периоде в норме, необходимо использовать для изучения других лимфоидных органов и систем организма.

2. Стадии становления Т- и В- зон и их топографические особенности в краниальных брыжеечных лимфатических узлах крыс в подсосном периоде необходимо учитывать при проведении исследований с использованием иммуногистохимических методов на этих экспериментальных животных в возрастном аспекте.

3. Экспериментальные данные о влиянии этанола на развитие краниальных брыжеечных лимфатических узлов рекомендуется учитывать в клинической практике при лечении детей с фетальным алкогольным синдромом.