Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Сравнительный анализ действия кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей при местном курсовом лечении модели термического ожога и отдалённые последствия их влияния при более длительном применении

На правах рукописи

Сахаутдинова Рената Рашидовна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ДЕЙСТВИЯ КРЕМНИЙ ТИТАН-И ЦИНКСОДЕРЖАЩИХ ГЛИЦЕРОГИДРОГЕЛЕЙ ПРИ МЕСТНОМ КУРСОВОМ ЛЕЧЕНИИ МОДЕЛИ ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА И ОТДАЛЁННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИХ ВЛИЯНИЯ ПРИ БОЛЕЕ ДЛИТЕЛЬНОМ ПРИМЕНЕНИИ

14.03.06-Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2015

Работа выполнена на кафедре фармакологии и клинической фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждении высшего профессионального образования «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Ларионов Леонид Петрович Официальные оппоненты:

Залялютдинова Луиза Наильевна доктор медицинских наук, профессор, Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии, профессор

Базанов Геннадий Александрович доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия», Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии и клинической фармакологии, профессор

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится « 2015г. в_часов на

заседании Диссертационного Совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и на сайте www.chelsma.ru.

Автореферат разослан «.

2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю.С. Шишкова

российская ГОСУДАРСГШ-ННАЯ БИБЛИОТЕКА 20 1!.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования и степень её разработанности

При наличии большого количества препаратов местного действия в большинстве случаев применяют мягкие лекарственные формы. Использование лекарственных форм для местного применения обеспечивает высокую концентрацию веществ в месте нанесения препарата, позволяет в одном препарате комбинировать несколько активных веществ с разным механизмом действия и направленностью лечебного эффекта (Фармация. 1970. № 4. С. 73-74; Фармация. 2003. № 2. С. 43-45). Мази для лечения ран чаще представляют собой многокомпонентные составы, созданные на гидрофильных основах. Они оказывают местное действие и наносятся на верхний слой эпидермиса кожи для лучшего обеспечения контакта с кожной поверхностью, тем самым способствуя более быстрому, а, значит, более эффективному всасыванию активных веществ. При создании и применении мягких лекарственных форм необходимо учитывать физиологические особенности кожи и слизистых оболочек (Кожа (строение, функция, общая патология и терапия) / под ред. А. М. Чернуха, Е. П. Фролова. М.: Медицина, 1982. 333 с; Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств : сборник научных трудов. Пермь. С. 356-359). В соответствии с биофармацевтической концепцией фармакологический эффект мазей в значительной степени зависит: от физико-химических свойств лекарственных и вспомогательных веществ; их концентрации, агрегатного состояния, дисперсности, технологии изготовления, состояния кожи и слизистых оболочек, их целостности.

Основы для мягких лекарственных форм придают определённый объём, консистенцию, обеспечивают определённую концентрацию лекарственных веществ. От выбора основы зависит скорость высвобождения лекарственных веществ из лекарственной формы и их проникновение в глубоколежащие ткани, фармакологический эффект мази. Основы для мягких лекарственных форм должны иметь мягкую консистенцию, физико-химическую стабильность, биологическую безвредность, нейтральную реакцию, антимикробную стабильность, лёгкость удаления с места нанесения (Краснкж, И. И. Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм. М„ 2007. 592 е.). Несмотря на многообразие существующих основ для мягких лекарственных форм, которые сами по себе обладают определёнными преимуществами и недостатками, идеальной основы, отвечающей всем требованиям, пока не существует.

В этом ракурсе большой интерес представляет изучение кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей, синтезированных в Институте органического синтеза имени Постовского уральского отделения РАН (ИОС УрО РАН), которые характеризуются пролонгированным увлажняющим действием на кожу и хорошим всасыванием, что позволяет использовать их как самостоятельно, так и в качестве основ для мягких лекарственных форм.

Входящие в них активные вещества имеют свои характеристические особенности. Так, кремний является структурным компонентом в составе мукополисахаридов и их белковых комплексов, образующих остов соединительной ткани и определяющих её механическую прочность, эластичность и упругость (Клиническая фармакология и терапия. 2009. № 6. С. 257-259; Известия Академии наук. Серия химическая. 2012. № 11. С. 2146-2154); титан необходим для построения и регенерации эпителиальной и костной тканей, стимулирует ферментативную активность крови; Цинк участвует в важнейших процессах организма: поддерживает деятельность лейкоцитов, антител, гормонов (Immunopharmacol Immunotoxicol. 1992. Vol. 14. P. 813-840). Однако в литературе сведений о современных основах, к которым относятся к глицерогидрогели, с точки зрения сравнительной оценки их действия на организм, в настоящее время нет. Для восполнения данного недостатка считаем, что проведение исследований по изучению сравнительного анализа новых основ для создания мягких лекарственных форм является актуальным.

Цель исследования

Выявить особенности действия в сравнительном аспекте кремний-, титан- и цинксодержащих основ для создания мягких лекарственных форм и оценить их влияние на фармако-физиологические показатели экспериментальных животных при местном лечении модели термического ожога.

Задачи:

1. Определить в сравнительном аспекте острую и хроническую токсичность изучаемых глицерогидрогелей как основ для мягких лекарственных форм.

2. Изучить указанные основы для возможного создания мягких лекарственных форм для местного и наружного курсового применения на белых крысах и оценить их отдалённые последствия действия при более длительном применении.

3. Исследовать транскутанную активность основ для мягких лекарственных форм: кремнийсодержащий глицерогидрогель (KIT), кремнийтитансодержащий глицерогидрогель (КТГГ), модифицированный кремнийтитансодержащий глицерогидрогель (МКТГГ), кремнийцинксодержащий глицерогидрогель (КЦГГ).

4. Изучить в сравнительном аспекте процессы репарации в коже крыс при местном курсовом применении основ для мягких лекарственных форм на фоне модели термического ожога.

5. Определить иммунотропное действие кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля при заживлении раны, осложнённой иммуносупрессией, путём сравнительной оценки процессов репарации в коже крыс, с использованием морфометрического исследования и подтверждением посредством метода иммуногистохимии (ИГХ).

Методология и методы исследования

Основным методологическим принципом работы - комплексная оценка действия различных основ для мягких лекарственных форм на организм лабораторных животных. Общее количество животных, использованных в работе, 346. В процессе исследования использовали разные методические подходы: методика «открытого поля», методика «горячей пластинки», методика оценки транскутанной активности; создание модели термического ожога и раны, осложнённой иммуносупрессией. На заключительном этапе проводили морфологические, морфометрические и ИГХ исследования.

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора

Статистическую обработку результатов проводили на базе пакета стандартных программ Windows (Excel) и Statistica 6.0. Достоверными считались различия показателей при р<0,05. Результаты представлены в виде среднего арифметического ± стандартная ошибка среднего (М±ш). Для оценки достоверности различий параметрических показателей применяли t-критерий Стьюдента, непараметрических -u-критерий Манна-Уитни, критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали меньшим или равным 0,05.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены: на IV съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (г.Казань, 2012), Всероссийской научной конференции с Международным участием Биоуфа-2013 «Биотехнология от науки к практике» (г. Уфа, 2013); Евразийском конгрессе «Медицина, фармация и общественное здоровье» (г. Екатеринбург, 2013); Всероссийской научно-практической конференции «Медико-профилактические мероприятия и управления химическими рисками» (г. Екатеринбург, 2014).

Основные цели, задачи, положения, выносимые на защиту, и выводы сформулированы автором совместно с руководителем Ларионовым Л.П.; разработка дизайна исследований, научно-информационный поиск, выполнение большей части лабораторных и экспериментальных исследований выполнено лично автором. Исследование транскутанной активности осуществлялось совместно с коллективом ИОС УрО РАН (Т.Г. Хонина, И.Н. Штанько, М.В. Иваненко). Сравнительная оценка иммунотропных свойств была проведена совместно с м.н.с. лаборатории органических материалов ИОС УрО РАН Штанько И.Н. Гистологические и ИГХ исследования проводились на базе ЦНИЛ ГБОУ ВПО УГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Положения, выносимые на защиту

1. Выявлено отсутствие острой и хронической токсичности изучаемых глицерогидрогелей как основ для мягких лекарственных форм, что подтверждает безопасность их применения при разных путях введения.

2. В процессе изучения основ для мягких лекарственных форм на модели термического ожога выявлены особенности в поведенческих реакциях и

основных показателях периферической крови как при местном курсовом, так и при более длительном их применении.

3. Определена транскутанная активность изучаемых глицерогидрогелей

4. Определены особенности течения процессов репарации в коже крыс при местном курсовом лечении модели термического ожога II -Illa степени глицерогидрогелями.

5. Выявлен иммунотропный эффект кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля на модели раны, осложнённой иммуносупрессией, путём проведения морфологических, морфометрических и иммуногистохимических исследований.

Научная новизна

В процессе экспериментальных исследований впервые был проведён сравнительный анализ действия основ для мягких лекарственных форм: КГГ, КТГГ, МКТГГ, КЦГГ, которые были применены для местного лечения модели термической ожоговой раны. При однократном и длительном применении кремний-, титан- и цинксодержащих основ на 3-х видах животных (белых мышах, крысах популяции линии Wistar, кроликах породы Шиншилла) при различных путях введения доказана безопасность их применения. Проведён сравнительный анализ действия КЦГГ и глицеролата цинка на поведенческие реакции мышей при термическом раздражении. Установлено, что КЦГГ способен проникать в биологические ткани и оказывать обезболивающее действие. Показана в сравнительном аспекте транскутанная активность основ. Высокий показатель транскутанной активности выявлен в эксперименте с КГГ (2,05%); низкий показатель активности- у КЦГГ (0,12%), что свидетельствует о высокой проникающей способности геля в ткани. Выявлены особенности поведенческих реакций до и после создания модели термического ожога у групп особей без лечения и на фоне основ при их нанесении на термические раны. Установлено, что в группе крыс с термическим ожогом без лечения ориентировочно-исследовательские реакции остаются угнетёнными по сравнению с группами с местной аппликацией изучаемыми глицерогидрогелями. Получены данные об особенностях изменения основных показателей общего анализа и биохимических показателей крови при курсовом и пролонгированном лечении. Выявлен положительный эффект лечения глицерогидрогелями. Доказано, что процессы репарации в коже крыс протекают активно при применении КЦГГ и КТГГ геля по уровню эпителизации, васкуляризации и выраженности воспалительной реакции при курсовом лечении изучаемыми основами. Выявлено иммунотропное действие КЦГГ на модели раны, осложнённой иммуносупрессией, по морфологическим и морфометрическим критериям. Установлено, что при лечении данной основой раны, осложнённой иммуносупрессией, достоверно увеличился уровень лимфоцитов (38,50±1,04%) и макрофагов (13,00±1,89%) на 8 день эксперимента по сравнению с группой контроля (рана, осложнённая иммуносупрессией, без лечения), что подтверждено методом ИГХ.

Теоретическая и практическая значимость работы

На основании полученных результатов сравнительного анализа проведённых доклинических исследований будет предложена наиболее оптимальная возможность использования основ для создания мягких лекарственных форм при местном лечении ожогов Н-Ша степени тяжести.

Внедрение результатов исследования в практику

Основные положения диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре фармакологии и клинической фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО УГМУ Минздрава России); разделы диссертации внедрены в ИОС УрО РАН; клинику «доктор Айболит»; ООО «Биоконсалтинг».

Публикации

Опубликовано 20 работ, из них по теме диссертации опубликовано - 13 (объёмом 2,9 печатных листов), в том числе 5 научных публикаций (4 статьи, 1 тезисы) в журналах, включённых в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования результатов диссертаций, 6-в материалах всероссийских и международных конференций, 2 публикации в журналах, включённых в систему РИНЦ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц и 33 рисунка. Состоит из введения, обзора литературы, главы описания методов исследования, собственных исследований, заключения, выводов, списка используемой литературы. Библиографический список содержит 168 источников, из них 120 на русском и 48 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В работе были использованы кремнийсодержащий глицерогидрогель (КГГ), кремнийтитансодержащий глицерогидрогель (КТГГ), модифицированный кремнийтитансодержащий глицерогидрогель (МКТГГ), кремнийцинксодержащий глицерогидрогель.

Общий объём экспериментальной работы выполнен на теплокровных животных: 100 беспородных белых мышах средней массой 18-40 г и 220 крысах популяции линии \Vistar (массой 180-350 г), 16-ти кроликах породы Шиншилла (массой 2500-3600 г) обоего пола; холоднокровных- 10-ти лягушках (массой 30-40 г). Все животные содержались в стандартных условиях вивария и получали рацион в соответствии с приказом от 23 августа 2010г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». Лабораторные крысы, мыши, кролики в виварии находились в условиях естественного освещения; лягушки находились в условиях аквариума.

Согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармацевтических веществ (М. 2005 г.) острую и хроническую токсичность изучали на 2-х видах лабораторных животных (крысы, мыши) путём введения внутрибрюшинно и внутрижелудочно изучаемых глицерогидрогелей в виде 50% суспензии. Хроническую токсичность определяли путём оценки местного раздражающего действия основ, конъюнктивальной пробы, кожно-резорбтивного действия и гистологического исследования (КЦГГ). Поведенческую активность лабораторных животных до и после создания модели термического ожога изучали в методике «открытого поля». На 19 и 55 день лечения ожоговой раны глицерогидрогелями оценивали основные лабораторные показатели общего (Mythicl8) и биохимического анализа (INTEGRA 400) крови.

Для оценки процессов репарации в коже крыс проводили морфологические и морфометрические исследования. Морфометрическое исследование осуществляли с оценкой степени васкуляризации дермы в зоне аппликации с применением сетки Автандилова в группах сравнения; активность воспалительной реакции оценивали полуколичественно по содержанию нейтрофильных гранулоцитов в клеточном составе грануляционной ткани. Для выявления местноанестезирующего действия КЦГГ применяли методику исследования болевой чувствительности-актотермоальгезиметрию. Кроме того, исследовали транскутанную активность изучаемых основ. Для оценки иммунотропного эффекта КЦГГ создавали модель механической раны, осложнённой иммуносупрессией, что подтверждено морфологическими, морфометрическими и ИГХ исследованиями.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Доклиническая оценка токсичности, безопасности в применении основ для мягких лекарственных форм Оценка острой токсичности основ. Исследование проведено на беспородных белых мышах (массой 18-24г) и белых беспородных крысах популяции линии Wistar обоего пола. Основы для мягких лекарственных форм вводили внутрижелудочно через зонд, а также внутрибрюшинно через инъекционную прикладывающую иглу к шприцу в виде 50% суспензии. Объём суспензии для мышей составил 0,5 мл/10 г, для крыс-2мл/100 г с учётом массы тела (180-210г). На каждую основу для мягких лекарственных форм было определено по 20 животных обоего пола. Полученные результаты исследования свидетельствуют об отсутствии острой токсичности испытуемых основ для мягких лекарственных форм.

Оценка хронической токсичности основ. Исследование проводили в течении 30 дней на белых крысах популяции линии Wistar обоего пола с массой 190-240г и кроликах породы Шиншилла обоего пола с массой 2500-3600 г.

Оценка местного раздражающего действия изучаемых освов на кожу и слизистые. Эксперимент проводили на 16-ти кроликах, по 4 особи в каждой группе, обоего пола. На участки кожи с выстриженной шерстью 4*4см справа наносили испытуемые основы для мягких лекарственных форм по 100 мг в течение 30 дней. На подобные участки слева, служащие контролем, наносили детский крем. За весь период эксперимента на фоне применения основ проявлений эритемы и отёка со стороны кожи не наблюдали. При внесении испытуемых основ за веко правого глаза в дозе 5 мг (за веко левого глаза, который служил контролем, вносили по капле воды для инъекций). Результаты исследований показали, что при внесении КГГ, КТГТ эритемы и отёка не наблюдалось, при внесении МКТГ и КЦГГ отмечали гиперемию со стороны конъюнктивы век и глазного яблока, которая прошла к концу 25-30 минуты. В результате исследований выявлено, что испытуемые основы не оказывают раздражающего действия на кожу. Гиперемия со стороны конъюнктивы век и глазного яблока на фоне внесения КЦГТ и МКТГГ может быть обусловлена повышением микроциркуляции в капиллярах.

Исследование сенсибилизирующих свойств. Как известно при местном нанесении КГГ, КТГГ, МКТГ реакции сенсибилизации не проявляются (Хонина, Т. Г. Фармакологически активные полиолаты кремния и титана и гидрогели на их основе: синтез, свойства, применение : автореф. дис.... д-ра хим. наук. Казань, 2012.48 е.). Для оценки сенсибилизирующих свойств КЦГГ эксперимент проводили на 8-ми кроликах породы Шиншилла, применяя эпикутанный метод и конъюнктивальную пробу. На участок кожи с выстриженной шерстью на спине размером 4*4 см ежедневно в течение 20-ти дней наносили КЦГГ опытной группе. Через 24 ч после 20-ой аппликации всем животным была проведена конъюнктивальная проба. Под верхнее веко правого глаза (левый глаз-контроль, под его верхнее йеко введена I капля дистиллированной воды) вводили по одной капле основы, смешанной с дистиллированной водой в соотношении 1:10. Результат оценивали три раза через 15 мин., 24 часа и 44 часа после проведения пробы. Анализ полученных данных показал отсутствие сенсибилизирующих свойств изучаемого гл ицерогидрогеля.

Кожно-резорбтивное действие. В качестве подопытных животных использовали белых крыс с исходной массой 180-200 г. Количество животных 50 - по 10 особей в группе (4 опытных, одна контрольная). Участок-аппликации составлял 2/3 хвоста, что соответствовало 5% кожи лабораторного животного. На время экспозиции, для исключения слизывания вещества с кожи, лабораторных животных помещали в индивидуальные садки. Затем наносили изучаемые основы в нативном виде, равномерно распределяя их по поверхности хвоста. Время экспозиции составляло 4 часа. После окончания экспозиции остатки вещества удаляли тёплой водой. Опыты с повторными аппликациями проводили на протяжении 7 дней. Функциональные нарушения кожи оценивали появлением различной степени выраженности эритемы, отёка, трещин, изъязвлений, изменением температуры. По окончании эксперимента

были сделаны выводы об отсутствии токсического действия исследуемых веществ при аппликации их на кожу.

Влияние глицерогндрогелей на этологическне показатели крыс на фоне термического ожога

В эксперименте использовали методику «открытое поле», позволяющую оценить время реакции избегания с центрального круга, горизонтальную двигательную активность, вертикальную активность, исследовательскую реакцию и груминг. Время эксперимента -3 минуты без учёта времени ухода животного с центрального круга. Эксперимент проводили на 50 белых крысах-самцах популяции линии \Vistar, разделённых на 5 групп (4 опытных, 1 контрольная) по 10 животных в каждой с массой 220-320 г. Крысам опытных и контрольной групп под эфирным наркозом наносили на предварительно обработанную от шерсти кожу термический ожог П-Ша степени с помощью, нагретой до 100-98°С металлической пластины, площадью 20*60мм. Исследуемые гели наносили один раз в сутки в одно и то же время, равномерно распределяя по всей ожоговой поверхности. Крысам 1-ой группы наносили КГГ, 2-ой - КТГГ, 3-ей - МКТГГ, 4-ой - КЦГГ, 5-ая (контрольная) -ожог без лечения. Для оценки качества жизни у опытных и контрольных групп крыс регистрировали ориентировочно-исследовательские реакции до ожога и на 4-е сутки после него. Для оценки общей психо-этологической активности мы суммировали измерения 4-х показателей (горизонтальная активность, вертикальная активность, обследование «нор», груминг) и оценивали их за 30, 60 и 90 минут до создания термического ожога и на 4-й день лечения основами. Для более адекватного анализа результаты исследования перевели в единую единицу - проценты. Средние исходные измерения начала эксперимента взяли за 100%.

При анализ* изменений исходных данных лабораторных животных до создания термического ожога и на 4 день эксперимента отметили тенденцию к снижению общей активности во всех 4-х группах, что, возможно, связано со стрессовым эффектом после создания ожоговой травмы. Низкий процент активности при исходной посадке крыс после создания ожога отмечали в группе на фоне МКТГГ (48%) и в контрольной группе (51%). Высокий показатель (60%) зарегистрировали на фоне КГГ и КТГТ. В группе с аппликацией КЦГГ показатель общей активности составил 53%. Показатель активности к 90 минуте эксперимента в группе с ЮТ и КТГГ увеличился в 2,5 раза в сравнении с исходными данными, в группе на фоне МКТГ- в 2,7 раз, с КЦГГ- в 2,6 раз. В контрольной группе отмечали угнетение активности в 2,5 раза по сравнению с группами, которым наносили основы.

На основе проведённых исследований выявили, что на 4-ые сутки эксперимента в контрольной группе (ожог без лечения) реакции экспериментальных животных остаются более угнетёнными, чем в группах сравнения. Наиболее благоприятные реакции общей активности выявлены на фоне аппликации КЦГГ, КТГГ и МКТГГ.

Влияние глицерогидрогелей на основные гематологические показатели у крыс с термическим ожогом при местном пролонгированном лечении

Эксперимент проводили на белых крысах-самцах популяции линии \У151аг, разделённых на 5 групп (4 опытных, 1 контрольная) по 10 животных в каждой с массой 220-320 г. После завершения курса лечения ожоговой раны (19 суток) у 5 животных из каждой группы под эфирным рауш-наркозом брали кровь из полостей сердца. Оставшимся крысам продолжали нанесение гелей в течение 35 дней для выявления возможного как местного, так и общего отрицательного действия на организм экспериментальных особей. По истечению 55 дней применения изучаемых основ провели забор крови вышеуказанным методом.

Результаты анализа данных после проведения забора крови на 19-й день лечения, представлены в таблице 1. Показатели содержания эритроцитов 1, 2 и 4 групп животных имели тенденцию к снижению по сравнению с группой 3 и контрольной. Гематокрит во всех группах сопоставим с контролем.

Таблица 1 - Основные гематологические показатели у крыс при термическом ожоге на фоне лечения и без него на 19-е сутки (М±т)

Показатели ОАК (п=10) 1 -я опытная КГГ 2-я опытная КТПГ 3-я опытная МКТГГ 4-я опытная КЦГГ Контроль (ожог без лечения)

Лейкоциты (109/л) 10,40±0,30 10,20±0,50 10,10±0,50 9,60±0,20 10,20±1,00

Эритроциты (10,2/л) 7,60±0,50 7,50±0,20 8,30±0,60 7,10±0,30 8,00±0,80

Гемоглобин (г/Л) 139,40±2,50 142,00±2,70 143,60±1,30 141,20±2,90 144,00±2,30

Гематокрит (%) 43,70±1,20 42,10±1,20 40,30±0,90 40,10±0,90 41,00±0,90

Ср. объем эр. (Я) 52,50±0,70 65,10±0,50* 64,20±1,30* 61,00±1,20* 52,10±1,20

Ср. содерж. гем. в эр. 0^) 19,90±0,90* 18,20±0,70 18,20±0,50 17,20±0,70* 17,10±0,50

Ср.концентр. гем. в эр.((>/1) 35,10±1,20 32,10±0,40 35,40±0,60 32,10±1,00* 34,20±2,Ю

Аиизоцитоз (%) 15,10±2,10* 17,30±0,30 17,40±1,20 15,50±0,70* 17,00±0,40

Лимфоциты (%) 80,70±1,60 78,50±2,60 76,50±1,10» 79,90±2,00 80,20±2,50

Моноциты (%) 8,90*0,80 8,90±0,50 9,40±0,70 9,90±0,90 8,80±1,Ю

Гранулоциты (%) 9,10±0,70 12,50±2,30 14,00±0,90* 10,10±1,20 10,90±1,80

Тромбоциты (103/мм) 616,00±43,00 640,20*27,00 650,40±30,00 575,00±21,40* 638,00±25,00

Примечание: *- р <0,05 при сравнении с контрольной группой (ожог без лечения)

По среднему объёму эритроцитов проявилось закономерное увеличение показателей в группах 2, 3 и 4, что можно связать, по-видимому, с гипотоническим нарушением водно-электролитного баланса. Среднее содержание гемоглобина в указанном форменном элементе крови в первых трёх группах имело тенденцию к повышению.

При анализе показателей белой крови выявили особенность влияния изучаемых основ на показатели процентного содержания гранулоцитов группы 2 и 3, что, по-видимому, связано с их более высоким проявлением противовоспалительного действия.

Анализируя результаты отдалённых последствий (55 день), выявили, что в основном все регистрируемые показатели периферической крови восстановились как у контрольной, так и у опытных групп крыс.

Полученные данные свидетельствуют не только о положительном эффекте основ при местном лечении термического ожога, но и о благоприятном их влиянии на гематологические показатели периферической крови при длительном их применении.

Влияние глицерогидрогелей на биохимические показатели сыворотки крови крыс при термическом ожоге

В данном разделе эксперимента исследовали показатели биохимического анализа крыс при термическом ожоге в контрольной и опытных группах на фоне лечения выбранными основами. Как ранее было описано, на 19-ые сутки после ожога у 50% крыс опытных и контрольной групп под эфирным наркозом был осуществлён отбор крови из полостей сердца животных с последующей эвтаназией. У 50% оставшихся животных забор крови осуществляли на 55-й день после продолжения нанесения основ.

Для того, чтобы проанализировать материал, представленный в таблицах, мы перевели его в единую единицу измерения - проценты. Из представленных данных таблицы 2 видно, что на 19-й день лечения у 1-й, 2-й, 3-ей и 4-й опытных групп отмечали тенденцию снижения показателя активности АсАТ в среднем на 15% в сравнении с контролем.

Таблица 2 - Основные биохимические показатели у крыс при термическом ожоге на фоне лечения и без него на 19-е сутки (М±ш)

Биохимические показатели (п=10) 1-я Опытная КГГ 2-я Опытная КТГГ 3-я Опытная МКТГГ 4-я Опытная КЦГГ Контроль (ожог без лечения)

АлАТ, (Ед/л) 110,50±8,30 100,80±9,70 103,50±2,10 112,30±7,10 107,90±9,10

АсАТ, (Ед/л) 216,70±1,20 201,00±7,30 214,40±2,50 215,30±5,10 251,70±10,50

Глюкоза (ммоль/л) 5,10±0,20* 6,80±0,50* 5,90±1,10 6,00=Ы,Э0 6,30±0,20

Креатинин (мкМоль/л) 31,60±2,70 30,50±1,80 32,50±1,90 30,10±0,10 30,60±0,90

Мочевина (мМоль/л) 6,70±1,30* 5,70±0,10 7,70±1,40 7,05±0,10 7,70±0,20

Примечание: *- р <0,05 при сравнении с контрольной группой (ожог без лечения).

Уровень мочевины снизился у 1-й группы на 13%, во 2-й группе также имел тенденцию к снижению.

Анализируя данные, полученные при длительном нанесении гелей, выявили тенденцию к повышению уровня АлАТ в 1-й и 4-й опытных групп по сравнению с группой контроля в среднем на 16%. Эти результаты практически соответствуют пределам нормальных показателей. Показатели мочевины 1-й, 2-й, 4-й групп имели некоторую тенденцию к повышению, но они не достоверны.

Исследование транскутанной активности глицерогидрогелей через кожу лягушек в сравнительном аспекте

Метод заключается в измерении степени диффузии исследуемого препарата через естественные мембраны из интактной кожи. Эксперимент проводили на изолированной мембране кожи лягушек (10 особей). На кожу накладывали мазь по 5 г, содержащую 10% ципрофлоксацин, и изучаемую основу (КГГ, ТГГ, МКТГГ, КТГГ, КЦГГ). Степень абсорбции измеряли при длине волны 272 нм на УФ-спектрометре и высчитывали % ципрофлоксацина, прошедшего через кожу в воду, а также % его в мази.

Высокий уровень транскутанной активности выявлен в группе с КГГ (таблица 3). КТГГ и МКТГГ также проявили себя как активные проводники. Самый низкий показатель транскутанной активности у КЦГГ. Особо следует отметить, что КЦГТ при наименьшей транскутанной активности обладает высокой пенетрирующей активностью в кожу, об этом свидетельствует наименьшее остаточное количество ципрофлоксацина в мази.

Таблица 3 - Исследование транскутанной активности (а)/'я vitro различных активных мазевых основ на примере ципрофлоксацина

№ Основа а, % (3 часа) а, % (6 часов) а, % (9 часов) Относит, степень через 9 часов* Юшшр. в мази. %•*

1 ТГГ 0,11 ±0,04 0,24±0,07 0,37±0,13 1,00 4,61±0,55

2 Т~ КГГ 0,22±0,07 0,51 ±0,15 0,76±0,26 2,05 4,39±0,53

КТГГ 0,13±0,04 0,32±0,09 0,56±0,19 1,50 4,79±0,57

4 МКТГГ 0,09±0,03 0,27±0,08 0,54±0,19 1,45 5,33±0,64

5 КЦГГ 0,012±0,004 0,030±0,009 0,043±0,015 0,12 1,979±0,237

Примечание: "Относительная степень транскутанной проницаемости была вычислена по отношению к транскутанной проницаемости ТГГ. **шиИпр - массовая доля ципрофлоксацина, оставшегося в мази после эксперимента.

Изучение влияния исследуемых основ для мягких лекарственных форм при накожной аппликации на процессы репарации в коже крыс на 19-й день после создания модели термического ожога

Эксперимент проводили на белых крысах-самцах популяции линии \Vistar массой 220-320г, разделённых на 6 групп (5 опытных и одна контрольная) по 10 животных в каждой. Крысам опытных и контрольной групп на предварительно обработанной от шерсти коже поверхности бедра под эфирным наркозом создавали термический ожог. Исследуемые глицерогидрогели в дозе 2000 мг/кг наносили один раз в сутки в одно и то же время, равномерно распределяя по всей ожоговой поверхности. Крысам 1-ой группы наносили КТГГ, 2-ой - КГГ, 3-ей - МКТГГ, в 4-ой - ТГТ, 5-ой - КЦГГ, 6-й - (контрольной) группе создавали термический ожог без лечения. После завершения курса лечения (19 суток) 5 животных из каждой группы выводили из эксперимента, с задней поверхности бедра забирали кожные лоскуты для оценки процессов репарации в зоне термического ожога.

Наиболее выраженный заживляющий эффект отмечали в группе с аппликацией КЦГГ. Полная эпителизация раны определялась в 75% случаев, а в25% случаев- краевая эпителизация.

При оценке воспалительной реакции в зоне ожога на 19 день лечения основами в группах сравнения более выраженная воспалительная реакция сохранялась в группе 3 (МКТГГ) и была сопоставима с контрольной группой (заживление без лечения), тогда как в группе 2 (КГГ) и 5 (КЦГГ) воспалительная реакция была минимальной.

После оценки уровня васкуляризации, как видно из таблицы 4, установлено, что в группе 5 (КЦГТ) уровень васкуляризации грануляционной ткани выше, чем в опытных группах сравнения. Низкий показатель васкуляризации определялся в группе 1 (КТГГ).

Таблица 4 - Относительная плотность сосудов в грануляционной ткани, (М±т)

Исследуемая группа (п=5) Плотность сосудов на гистологическом срезе, %

Группа 1(КТТТ) Э2,20±2,30*

Группа 2 (КГГ) 42,50±2,60

Группа 3 (МКТГ) 41,60±1,50

Группа 4 (ТГГ) 41,00±1,20

Группа 5 (КЦГГ) 45,00±2,00*

Группа 6 (Контроль-ожог без лечения) 42,40±Э,20

Примечание: *- различия статистически значимы в сравнении с исходными показателями, р<0,05.

При сравнительной оценке процессов репарации в коже экспериментальных животных наилучший ранозаживляющий эффект проявился на фоне лечении КЦГГ и ТГГ. Низкий уровень заживления проявился на фоне местного применения МКТГГ.

Оценка иммунотропного действия кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля

Для оценки иммунотропного эффекта КЦГГ на первом этапе эксперимента проводили морфологические исследования с оценкой процессов репарации в коже у крыс в группах сравнения по критериям: уровень эпителизации, уровень васкуляризации, выраженность воспалительной реакции. Вторым этапом использовали морфометрический метод - подсчёт клеточного состава в грануляционной ткани с подтверждением ИГХ.

Сравнительная оценка процессов репарации в коже при местном лечении КЦГГ-гелем и композицией (галавит+КГГ) механической полнокожной раны, осложнённой иммуносупрессией

Эксперимент проводили на белых крысах-самцах популяции линии \Vistar массой 180-220г, разделённых на 4 группы по 10 животных в каждой. Крысам опытных групп за сутки до создания модели раны, осложнённой иммуносупрессией, вводили гидрокортизон в дозе 40 мг\кг. На следующий день под эфирным рауш-наркозом на предварительно обработанной от шерсти коже поверхности спины создавали полнокожные раны диаметром 8 мм (Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, №. 4. С. 14-20). Группа 1 - острая рана без лечения, группа 2 - рана, осложнённая иммуносупрессией, без лечения; группа 3 - рана, осложнённая иммуносупрессией и с нанесением КЦГГ-геля; группа 4 - рана, осложнённая иммуносупрессией, и с нанесением композиции. Всем группам, кроме группы 1, ежедневно вводили гидрокортизон. Гели наносили ежедневно стеклянной палочкой в дозе 50мг\кг. На 3-й и 8-й день эксперимента по 5 крыс из каждой группы выводили из эксперимента под рауш-наркозом. Для гистологических и ИГХ исследований брали кожные лоскуты размером 2*2 см, фиксировали в 10% растворе формалина, проводили по спиртам возрастающей концентрации и заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методу ван-Гизон и по Вейгерту. Для идентификации макрофагов в зоне раны использовали первичное антитело СО 68 (АЬ-3 (КР1) ТЪегтозаегШАс) в разведении 1:6000.

При гистологическом исследовании выявлено, что во всех группах на 3-й день эксперимента краевая эпителизация отмечалась у 20% крыс, в 80% случаев эпителизация отсутствовала. В 20% случаев определялось формирование нежной грануляционной ткани, в которой встречались единичные лимфоциты и макрофаги.

На 8 день эксперимента наилучший эффект отмечался в группе 3. В 70% случаев отмечалась краевая эпителизация. Полная эпителизация наблюдалась в 30% случаев. Выявили снижение воспалительной инфильтрации СЯН, формировался слой грануляционной ткани. В нрвообразованном эпителии встречались единичные лимфоциты и макрофаги. В группе 4 краевая эпителизация раны выявлена в 75% случаев, полная эпителизация отмечалась в 25 % случаев. При оценке уровня васкуляризации с помощью сетки

Автакдилова на 8 день эксперимента установили, что в группе 3 при лечении КЦГТ количество обнаруживаемых сосудов в дерме выше, чем в группах сравнения. Наименьший показатель васкуляризации отмечался в группе 2. Результаты представлены в таблице 5.

Таблица 5-Относительная плотность сосудов в грануляционной ткани на 8 день эксперимента (М±т)

Исследуемая группа (п=5) Плотность сосудов на гистологическом срезе, %

Острая рана 20,20±2,00

Рана, осложненная иммуносупрессией, без лечения 17,80±3,00

Рана, осложненная иммуносупрессией, + КЦГТ - гель 24,80±2,00*

Рана, осложнённая иммуносупрессией, + композиция 24,00±1,50»

Примечание: *- различия статистически значимы в сравнении с исходными показателями, р<0,05.

Оценка иммунотропного действия КЦГТ на 3-й и 8-й день лечения раны, осложнённой иммуносупрессией

По литературным данным, цинк оказывает влияние на клеточное звено иммунитета(гтс in humanbiology. - NewYork :Springer-Verlag, 1989. Р. 221223). Следующим этапом после гистологического исследования с целью первичной оценки возможного иммунотропного действия основы (КЦГТ) определяли процентное соотношение клеточного состава в грануляционной ткани в группах сравнения, подсчёт производили на 100 клеток.

Как видно из таблицы 6, на 3 день эксперимента во всех группах сравнения в клеточном составе преобладали СЯН. На 8 день эксперимента во всех группах в клеточном составе грануляционной ткани количество лимфоцитов и макрофагов увеличилось, а уровень СЯН снизился.

Таблица 6 - Процентное соотношение клеточного состава грануляционной ткани (М±т)

Группа (п=5) СЯН, % Лимфоциты, % Макрофаги, % Фибробласты % Эозинофилы, %

3-й день эксперимента

Группа 1 34,80±1,03 32,20±1,37 8,80±1,74 21,60±2,33 3,80±3,10

Группа 2 35,40±2,70 28,60±2,50 8,00±1,53 22,00±1,94 2,60±0,40

Группа 3 33,60±1,30 34,20±1,16 10,80±0,87 24,00±0,24 2,60±0,24

Группа 4 32,00±0,48 33,20±2,68* 10,40±2,27* 21,60±0,19 1,20±0,19

8-й день эксперимента

Группа 1 21,25±2,12 35,00±1,08 10,00±2,40 25,50±1,89 1,25±1,60

Группа 2 30,60±1,26 29,00±1,44 11,80±1,42 25,80±0,49 1,20±0,40

Группа 3 16,00±1,95* 38,50±1,04 13,00±1,80* 31,00±0,28 1,00±1,00

Группа 4 18,50±3,15* 37,25±3,77 14,50±3,19* 29,25±3,82 1,20±0,95

Примечание: *- различия статистически значимы в сравнении с исходными показателями, p<0,0f

Однако в группе 2 уровень СЯН оставался высоким. Следует отметить, что наибольшее снижение уровня СЯН, отмечали в группе 3 на фоне лечения КЦГГ, что можно связать с антибактериальным эффектом основы; при этом имелось достоверное повышение уровня макрофагов, что подтверждено ИГХ, а также фибробластов и лимфоцитов по сравнению с группой 1 и 2. Результаты анализа клеточного состава грануляционной ткани позволили предположить, что КЦГГ оказывает стимулирующее влияние на клетки местной иммунной системы кожи - макрофаги и лимфоциты. В ходе эксперимента полученные данные были подтверждены ИГХ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В представленной работе в качестве основ для мягких лекарственных форм были выбраны кремнийсодержащий, кремнийтитансодержаший, кремнийцинксодержащий и модифицированный кремнийтитансодержащий глицерогидрогели. Эти основы по сравнению с другими обладают рядом положительных свойств. При изучении данных основ выявлена безопасность их применения. Установлен положительный эффект на фоне лечения глицерогидрогелями при местном курсовом лечении в зоне термического ожога Проведенные лабораторные исследования показали положительную динамику заживления на фоне лечения изучаемыми основами, как при курсовом применении, так и при более длительном применении, что нами подтверждено при использовании этологического теста «открытое поле». На основании проведённых исследований выявлено местно-анестезирующее действие

кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля, что является важным свойством для основы для мягких лекарственных форм. При изучении глицерогидрогелей высокий уровень транскутанной активности выявлен у кремнийсодержащего глицерогидрогеля по сравнению с другими изучаемыми основами, низкий - у кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля. Эффективность процессов репарации в коже крыс подтверждена морфологически и морфометрически на 19-й день лечения основами путём оценки уровней эпителизации, васкуляризации и выраженности воспалительной реакции.

Проведены исследования по оценке влияния кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля на заживление раны, осложнённой иммуносупрессией, в сравнении с веществом, обладающим доказанной иммунотропной и противовоспалительной активностью. На основании полученных результатов выявлено, что кремнийцинксодержащий глицерогидрогель обладает иммунотропной активностью посредством воздействия на уровень макрофагов. Эти результаты подтверждены методом иммуногистохимии.

Проведенный комплекс исследований позволяет перейти к следующему этапу исследований - первой фазе апробации в условиях клиники для дальнейшего продвижения специфических клинических испытаний и формированию новых фармацевтических композиций, используя данные глицерогидрогели, которые в дальнейшем могут применяться для лечения ожоговой рамы.

ВЫВОДЫ

1.В ходе экспериментальных исследований при однократном и длительном применении при различных путях введения образцов исследуемых глицерогидрогелей как основ для мягких лекарственных форм, установлена безопасность их применения для экспериментальных животных.

2. При сравнительной оценке общего и биохимического анализа периферической крови на 19-й день местного курсового и пролонгированного лечения выявлено заживление термических ожоговых ран в наиболее короткие сроки (на 2-3 дня) при применении кремнийцинксодержащего, кремнийтитансодержащего и кремнийсодержащего, по сравнению с модифицированным кремнийтитансодержащим глицерогидрогелем, что дополнительно подтверждено косвенными тестами ориентировочно-исследовательских реакций в «открытом поле».

З.Оценивая транскутанную активность глицерогидрогелей на примере маркёра ципрофлоксацина через кожу лягушки, установили более высокий уровень проникновения его на фоне кремнийсодержащего глицерогидрогеля (2,05%). Особо следует отметить, что кремнийцинксодержащий глицерогидрогель при наименьшей транскутанной активности (0,12%), в сравнении с титансодержа-щим, кремнийтитансодержащим и модифицированным кремнийтитансодержащим глицерогидрогелями, обладает высокой пенетрирующей активностью в кожу, об этом свидетельствует наименьшее остаточное количество ципрофлоксацина в мази (1,979±0,237%). Высокая пенетрирующая активность оказывает положительное влияние на местное заживление раны.

4.При сравнительной оценке процессов репарации в коже крыс на 19-й день лечения модели термического ожога установлено, что при аппликации кремнийцинксодержащим и кремнийтитансодержащим глицерогидрогелями полную эпителизацию раны выявляли в 60 и 75% случаев, в сравнении с кремний-содержащим, модифицированным кремнийтитансодержащим и титан содержащим глицерогидрогелями. Наблюдали снижение выраженности воспалительной реакции сегментоядерными нейтрофилами, и высокий уровень васкуляризации при аппликации кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля (45±2,00%), что доказывает положительный их эффект при местном курсовом лечении.

5. При изучении кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля выявлен иммунотропный эффект, что подтверждается морфологическими исследованиями по оценке краевой эпителизации раны на 8 день эксперимента в 70% случаев и высоким уровнем васкуляризации (24,80±2,00%). При проведении морфометрического анализа установили увеличение уровня макрофагов (13,00±1,80%) и лимфоцитов (38,50±1,04%) в грануляционной ткани на фоне местного лечения раны, осложнённой иммуносупрессией, что доказывает стимулирующее влияние кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля на клетки иммунной системы кожи.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

На основании представленных результатов можно рекомендовать разработанные и изученные основы д ля мягких лекарственных форм при создании новых фармацевтических композиций на их основе, а также для апробации в клинической практике при местном лечении ожогов и ран, осложнённых иммуносупрессией, после получения разрешения в Этическом комитете.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I .Сахаутдинова, P.P. Сравнительный аспект влияния основ для мягких лекарственных форм на поведение животных в тесте «открытое поле»/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов//Фармация и общественное здоровье : материалы V Международной конференции. - Екатеринбург, 2012.-С. 53-57.

2.Сахаутдинова, Р.Р.Сравнительная оценка влияния гидрогелей как основ для мягких лекарственных форм на показатели периферической крови при термическом ожоге в эксперименте/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов// «Инновации современной фармакологии»: материалы IV съезда фармакологов России: тезисы. -Москва, 2012.-С. 114-115.

3. Иваненко, М.В.Синтез фармакологически активных гидрогелей на основе комбинированных полиолатов кремния и титана / М. В. Иваненко, Т. Г. Хонина, О. Н. Чупахин, Л. П. Ларионов, Р. Р. Сахаутдинова, А. П. Сафронов // Известия Академии Наук, Серия химическая. - Москва, 2012. - № 11.-С. 2146-2154.

4.Сахаутдинова, P.P. Влияние кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей на биохимические и гематологические показатели периферической крови экспериментальных животных при местном курсовом лечении термических ожогов и их отдаленные последствия/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов// «Здоровье и образование в XXI веке» : материалы XV Международной конференции. -Москва, 2013.-Т.15. № [1-4]. -С.398-401.

5.Сахаутдинова, Р.Р. Влияние кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей на биохимические показатели периферической крови экспериментальных животных при местном курсовом лечении термических ожогов и отдаленные последствия при более длительном их применении/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов// Вестник Башкирского университета.-2013.-Т. 18. №3.-С. 750-752.

6.Сахаутдинова, P.P. Влияние кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей на поведенческие реакции экспериментальных животных при местном лечении термических ожогов/ P.P. Сахаутдинова,

JI.IL Ларионов, И.Н. Штанько // Вестник уральской медицинской академической науки.-2013.-№4(46).-С. 100-102.

7. Сахаутдинова, P.P. Влияние кремний-, титан- и цинксодержащих глицерогидрогелей на периферическую кровь экспериментальных животных при местном курсовом лечении термических ожогов и при их более длительном применении/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов // Вестник уральской медицинской академической науки.-2013.-№4 (46).-С. 97-99.

8. Иваненко, М.В.Модифицированный кремнийтитансодержащий глицерогидрогель - новое перспективное средство для местного применения / М. В. Иваненко, Т. Г. Хонина, Л. П. Ларионов, Р. Р. Сахаутдинова // Фармация и общественное здоровье : материалы Евразийского конгресса. - Екатеринбург, 2013.-С. 332-335.

9. Сахаутдинова, P.P. Влияние кремний-, титан и цинксодержащих глицерогидрогелей на поведенческие реакции экспериментальных животных при местном курсовом лечении термических ожогов и отдаленные их последствия/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов//. Фармация и общественное здоровье: материалы Евразийского конгресса.- Екатеринбург, 2013.-С.369-372.

10. Сахаутдинова, P.P. Сравнительный аспект влияния кремнийсодержащих основ для мягких лекарственных форм на поведение животных в тесте «открытое поле»/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов, С.Е. Есева, Т.Н. Сапегина, С.А. Хакимова // Вестник уральской государственной медицинской академии.-2013,-С. 801-802.

11. Сахаутдинова, P.P. Новый подход к оценке времени реакции белых мышей при термическом раздражении на фоне кремнийцинксодержащего глицерогидрогеля и глицеролата цинка/ P.P. Сахаутдинова//«Здоровье и образование в XXI веке».-2014.-Т. 16. №1.-С.76-79.

12. Сахаутдинова, P.P. Сравнительная оценка влияния кремний- и цинксодержащих глицерогидрогелей на некоторые биохимические показатели периферической крови и на гистоморфологические структуры кожи крыс при местном курсовом лечении термических ожогов/ P.P. Сахаутдинова, Л.П. Ларионов, Е.В. Филиппова// Фармация и общественное здоровье: материалы ежегодной конференции. -Екатеринбург, 2014.-С. 159-163.

13. Штанько, И.Н.Новые иммунотропные средства для местного применения на основе кремний- и цинксодержащих глицерогидрогелей / И. Н. Штанько, Т. Г. Хонина, Л. П. Ларионов, Р. Р. Сахаутдинова, И. А. Тузанкина // Цитокины и воспаление : материалы научной конференции: тезисы. - Санкт-Петербург, 2014. -Т. 13. № 1. - С. 133-134.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАТ-аланинаминотрансфераза

АсАТ-аспартатаминотрансфераза

ИГХ - иммуногистохимия

КГГ-кремнийсодержащий глицерогидрогель

К111 -кремнийтитансодержащий глицерогидрогель

КЦ11 -кремнийцинксодержащий глицерогидрогель

МКТГГ-модифицированный кремнийтитансодержащий глицерогидрогель

СЯН-сегментоядерные нейтрофилы

ТГГ-титансодержащий глицерогидрогель

На правах рукописи

Сахаугдинова Рената Рашидовна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ДЕЙСТВИЯ КРЕМНИЙ -, ТИТАН -И ЦИНКСОДЕРЖАЩИХ ГЛИЦЕРОГИДРОГЕЛЕЙ ПРИ МЕСТНОМ КУРСОВОМ ЛЕЧЕНИИ МОДЕЛИ ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА И ОТДАЛЁННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИХ ВЛИЯНИЯ ПРИ БОЛЕЕ ДЛИТЕЛЬНОМ ПРИМЕНЕНИИ

14.03.06-Фармакология, клиническая фармакология ^

Автореферат диссертации на соискание ученой степени £

кандидата медицинских наук ■

С

с

Подписано в печать 27.03.2015 г. Формат 60*90/16. Тираж 100 экз. Усл. печ. Л. 1,0. Заказ № 230. Отпечатано ГБОУ ВПО УГМУ Минздрава России 620109, г. Екатеринбург, Репина 3.

i

\ > /

0016785

2010016785