Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НА ДВУХ МОДЕЛЯХ КЛИНИЧЕСКОЙ СМЕРТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ



Нагаева Лена Валериевна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НА ДВУХ МОДЕЛЯХ КЛИНИЧЕСКОЙ СМЕРТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

-ЗНОЯ 2011

Тюмень - 2011

4858769

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

Д.м.н., профессор Еникеев Дамир Ахметович

Официальные оппоненты:

Д.м.н., профессор Сторожок Сергей Анатольевич, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тюменская медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

д.м.н., профессор Мещанинов Виктор Николаевич, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « /¿7» _ноября_ 2011 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.101.01 при Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ТюмГМА Мин-здравсоцразвития России

Автореферат разослан «_16_» _октября_ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

О.И. Фролова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Экстремальные и терминальные состояния, включающие различные виды шока, занимают ведущее место в структуре смертности и летальности. Недостаточная изученность патогенетических механизмов оставляет проблему постагрессивных состояний на лидирующих позициях в современной биологии и медицине.

В раннем постреанимационном периоде наблюдается выраженная иммуноде-прессия, инволюция лимфоидных органов с характерными признаками стресс-реакций, обусловленные тяжелой гипоксией (Неговский В.А., 1986; Золотокрылина Е.С., 2000; Тумановский Ю.М., 2007; Суслов А.П. с соавт., 2008; Zanotti-Cavazzoni S.L. et al.,2009). В восстановительном периоде у животных иммунологическая реактивность организма значительно угнетена и даже в отдаленные сроки после оживления не приходит к исходному уровню (Ананьева С.К., 1973; Золотокрылина Е.С., 2000; Соколов В.А., Федоров Т.А., 2006; М. Nakamura et al., 2010; Unterwalder N. et al., 2010).

Устойчивость организма к различным экстремальным воздействиям во многом определяется уровнем его неспецифической резистентности (Ерофеев В.В. с соавт., 1991, 1999; Полушин Ю.С. с соавт., 2001; Jakubowski А., 2009; S. von Gunten, et al., 2009). Многочисленные исследования показали, что постреанимационная патология сопровождается сложной структурно-функциональной перестройкой клеточных элементов фагоцитарной системы, что может играть весьма значимую роль в исходе постагрессивных состояний (Лебедев В.Ф. с соавт., 2001, Левит Д.А., Лейдерман И.Н., 2006).

Изменения как специфической, так и неспецифической иммунной реактивности активно изучались в 60-90-е годы прошлого столетия, когда проводились опыты по умиранию - оживлению в основном на собаках и активно изучались изменения в ранние сроки после реанимации. Однако, начиная с 90-х годов, вначале в зарубежных источниках, а затем и в отечественной литературе стали появляться публикации, характеризующие молекулы межклеточного взаимодействия - цитокины, их влияние на течение физиологических и патологических процессов. Поэтому стал актуальным вопрос изучения влияния цитокинов на механизмы неспецифической ре-

з

С'

зистентности, и в частности, фагоцитоза.

Анализ литературных данных показывает, что изменения клеточных и гуморальных реакций при постреанимационных состояниях различной этиологии во многом сходны, что позволяет предположить наличие единых патогенетических механизмов нарушения неспецифической резистентности. С этой точки зрения, безусловно, интересным представляется установление взаимосвязи и взаимообусловленности изменений факторов неспецифической защиты на протяжении длительного постреанимационного периода при различных моделях умирания. Подобный подход может способствовать прогнозированию тяжести и исходов постагрессивных состояний, коррекции возникающих нарушений.

Цель работы: комплексная патофизиологическая оценка динамики показателей неспецифической иммунологической резистентности в постреанимационном периоде и установление наиболее общих закономерностей их развития на двух моделях клинической смерти.

Задачи исследования.

1. Изучить особенности умирания, течения постреанимационного периода, неврологического статуса и вегетативного баланса крыс после умирания от острой кровопотери и пережатия сосудисто-нервного пучка в сравнительном аспекте.

2. Исследовать динамику содержания фагоцитирующих клеток при различных моделях умирания.

3. Провести сравнительный анализ изменений неспецифических факторов защиты - фагоцитоза, комплемента, лизоцима, в постреанимационном периоде на двух моделях клинической смерти.

4. Оценить состояние цитокинового баланса в постреанимациопном периоде в сравнительном аспекте при различных терминальных состояниях.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Нарушения функций нервной системы и вегетативный дисбаланс в постреанимационном периоде после клинической смерти выявляются на протяжении

всего срока наблюдения. При клинической смерти от острой кровопотери рас-

стройства более значительны по сравнению с моделью пережатия сосудисто-нервного пучка.

2. В ранние сроки постреанимационного периода выявляется нейтрофильный лейкоцитоз, повышение комплементарной активности сыворотки крови в совокупности с прогрессирующим снижением начиная с 3-х - 5-х суток фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа.

3. В серии опытов с острой кровопотерей расстройства фагоцитоза в постреанимационном периоде сочетаются с угнетением лизоцимной активности сыворотки крови, начиная с 5-х суток восстановительного периода. При пережатии сосудисто-нервного пучка снижение лизоцимной активности выявляется в поздние сроки (на 28-е и 35-е сутки).

4. Дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов неблагоприятно сказывается на восстановлении активности фагоцитарных реакций в постреанимационном периоде при обеих моделях умирания.

Научная новизна работы. Впервые в опытах на животных проведено комплексное и сравнительное исследование функциональных показателей клеток белой крови на двух моделях умирания в динамике длительного постреанимационного периода (5 недель).

Прослежены факты, отражающие характер и степень выраженности изменений неспецифической защиты в зависимости от особенности умирания.

Принципиально новыми являются данные о наличии взаимосвязи и взаимообусловленности нарушений лизоцимной, комплементарной активности крови на протяжении 5 недель после оживления. Впервые на основании сравнительной оценки изменений уровня цитокинов в динамике длительного постреанимационного периода при двух моделях умирания установлен факт взаимосвязи дефекта фагоцитоза с выраженностью цитокинового дисбаланса организма.

Теоретическая значимость и практическая ценность исследования. Проведенное исследование способствовало установлению ряда новых фактов, расширяющих представления о патогенезе экстремальных состояний и роли изменений различных факторов неспецифической резистентности в этом процессе. Использование в работе комплексного подхода к изучению в динамике длительного постреанимационного периода на двух моделях умирания фагоцитарной активности клеток бе-

5

лой крови, комплемента, лизоцима и цитокинов позволило установить патогенетические механизмы нарушений неспецифической защиты, а также определить возможные пути взаимосвязи и взаимообусловленности этих изменений.

На основании сравнительного анализа изменений факторов неспецифической защиты был установлен вклад лизоцима и комплемента в нарушение фагоцитоза на протяжении 35 суток после оживления. Обнаруженный цитокиновый дисбаланс влияет как на течение постреанимационного периода, так и на участие клеток белой крови в реакциях фагоцитоза.

Результаты исследования могут использоваться в дальнейшей научной разработке проблемы экстремальных и терминальных состояний, в лабораторной и клинической практике для прогнозирования исходов постагрессивных состояний и оценки эффективности проводимых лечебных мероприятий.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования включены в учебный процесс при изучении экстремальных состояний на кафедре патологической физиологии, биологической химии, микробиологии, вирусологии и иммунологии, анестезиологии и реаниматологии и военной и экстремальной медицины Башкирского Государственного медицинского университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 научных работ.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на Санкт-Петербургской межгородской конференции молодых ученых и студентов по актуальным проблемам патофизиологии (2006), научно-практической конференции молодых ученых Башгосмедуниверситета (2008, г.Уфа), на Российском симпозиуме с международным участием по патофизиологии и клинике экстремальных и терминальных состояний (2009, г.Уфа), на всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (2010, г. Казань).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, включает 21 таблицу, 6 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, собственных данных, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, включающего 154 отечественных и 169 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Общие вопросы постановки экспериментов.

Моделирование клинической смерти.

Эксперимент выполнен на 510 беспородных крысах. Использовались две модели

умирания. В первой группе исследований была использована модель клинической

смерти от острой одномоментной кровопотери на фоне введения 0,5 мл кетамина и

б

дополнительной дачи эфирного наркоза. Время появления клинической смерти регистрировалось по последнему вдоху. К реанимационным мероприятиям, в основе которых лежал комплексный метод оживления по В.А. Неговскому, приступали через 5 мин. Кровь при оживлении нагнеталась внутриартериально, искусственное дыхание проводилось с помощью аппарата искусственной вентиляции легких. После восстановления самостоятельного дыхания удаляли канюлю и, перевязав сосуд, зашивали рану.

Во второй группе исследований была применена острая остановка кровообращения, которая осуществлялась путем полного пережатия сосудистого пучка сердца интраторакально, без вскрытия грудной клетки (Корпачев В.Г с соавт., 1982). Для этого использовали 250 крыс. Все эксперименты были проведены под общим эфирным наркозом. После 6±1,2 минут с момента пережатия начинали реанимационные мероприятия в виде наружного массажа сердца и искусственной вентиляции с помощью аппарата, создающего активный вдох и пассивный выдох из расчета 1-1,5 мл воздуха на 100 г массы тела. В период оживления фиксировалось появление сердечной деятельности, первого вдоха и самостоятельного дыхания, восстановление ро-говичного рефлекса.

Контрольная группа крыс в первой группе подвергалась эфирному и кетамино-вому, а во второй - эфирному наркозу без моделирования клинической смерти.

Балльная оценка неврологического статуса. Наблюдение за динамикой общего состояния животных проводилось в течение 5 недель после эксперимента. Для количественной оценки неврологического статуса крыс использовалась балльная оценка восстановления (Лысенков С.П. с соавт., 1982 в модификации Идрисовой Л.Т. с соавт., 1999), исследовалась ориентировочно-исследовательская активность и эмоционально-психические реакции (тест «открытое поле»).

Для оценки состояния вегетативного гомеостаза, взаимодействия симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы, автономного и центрального контуров управления ритмом сердца нами была применена вариационная пульсометрия - наиболее распространенный метод математического анализа сердечного ритма (Жемайтите Д. И., 1982, Баевский Р. М„ 1984).

Определение цитокинов. Определение цитокинов проводилось с применением стандартных диагностических наборов иммуноферментного анализа фирмы «Био-химмед». Исследовалось содержание в крови: альфа-фактора некроза опухоли (а-ФНО), рецепторного антагониста к интерлейкину 1 (ИЛ-1РА), интерлейкина-1 бета (ИЛ-ip), интерлейкина-4 (ИЛ-4), интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-8 (ИЛ-8), интерлейкина-2 (ИЛ-2).

Определение количества лейкоцитов и показателей фагоцитоза. Общее количество лейкоцитов определяли путем прямого подсчета клеток в камере Горяева. Лейкоцитарный состав крови исследовали общепринятыми микроскопическими методами (Никитин В.Н., 1949; Бокуняева Н.И., 1975). Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) вычисляли по формуле Кальф-Калифа.

Определение некоторых показателей неспецифической резистентности. Для количественной оценки лизоцимной активности использовалась четырехслойная методика «лакун» (Бухарин О.В., с соавт., 1985). Гемолитическую активность комплемента СН50 изучали методом иммунного гемолиза (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998). Для определения показателей фагоцитоза, характеризующих поглотительную функцию нейтрофилов и макрофагов, использовали метод Д.К. Новикова и В.И. Новикова (1989). В последующем, после приготовления мазка, рассчитывали фагоцитарное число и фагоцитарный индекс.

Статистическую обработку данных проводили с помощью компьютерной программы «БТАИБИКА 8».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Были получены следующие результаты. Успешная реанимация была достигнута у 73,4% животных, перенесших клиническую смерть от острой кровопотери. Общая летальность в течение всего эксперимента составила 30,6% (87 крыс). В первые 6 часов наблюдения погибло 26 крыс (29,9%), к концу первых суток еще 47 животных (54%). Летальность в поздние сроки постреанимационного периода составила 16,1%.

В первые часы после оживления животные находились в угнетенном состоянии, отсутствовали произвольные движения. Атония всех мышечных групп, отсутствие болевого рефлекса, нарушение терморегуляции определялись в течение первых 6 часов. К 12 часам постреанимационного периода брадикардия сменялась тахикардией, животные начинали принимать воду. Отчетливая положительная динамика отмечалась с конца первых суток эксперимента, когда неврологический дефицит уменьшался и составлял 56,14±2,94 балла.

К концу вторых суток восстанавливалась адекватная реакция на болевой раздражитель, животные начинали переворачиваться, пытались удержать позу, но явления атаксии сохранялись. По истечении 7 суток после реанимации поведение крыс практически не отличалось от нормы, в то же время сохранялись очаговые нарушения в виде выпадения отдельных рефлексов вплоть до 35-х суток наблюдения.

Во второй серии экспериментов, выполненных с использованием модели пере-

8

жатия сосудисто-нервного пучка, процент успешной реанимации был выше - 85,4. Общая летальность составила 24,6%. Клиническая смерть фиксировалась сразу после пережатия сосудисто-нервного пучка. Восстановление дыхания и сердечной деятельности происходило быстрее, чем у животных первой модели умирания.

У животных, перенесших клиническую смерть от пережатия сосудисто-нервного пучка, в первые часы после оживления неврологический дефицит проявлялся в виде атаксии, нарушения'тонуса мышц конечностей, учащения сердечной деятельности и ритма дыхания, а также индифферентностью к пище и воде, периодически отмечались клонические судороги. К концу первых суток неврологический статус оценивался в 45,84±1,83 балла, что было достоверно ниже, чем у животных предыдущей группы (р=0,02). Дальнейшее наблюдение показало, что к окончанию 3-х суток неврологический дефицит становился незначительным, а к концу 5-х суток практически исчезал - 6,22±1,02 балла, что достоверно отличалось от первой серии (р=0,006).

Ориентировочно-исследовательская деятельность крыс в группе с кровопотерей характеризовалась значительным угнетением всех ее составляющих. Животные длительное время находились в полной неподвижности, горизонтальная и вертикальная активности были минимальными. Во второй экспериментальной группе ориентировочно-исследовательская активность крыс в течение первых суток была однообразна и обеднена, а на 3-й сутки наблюдалось усиление ориентировочно-исследовательской деятельности животных. Активация поведения происходила за счет увеличения как горизонтального (числа перемещений), так и вертикального (стоек) компонентов. На 7-е сутки двигательная активность крыс в группе после смертельной кровопотери продолжала восстанавливаться, оставаясь ниже контрольных значений.

Во второй серии отмечалась высокая двигательная активность с повышенным уровнем эмоциональной напряженности - продолжительность и интенсивность гру-минга превышали показатели контроля в 3 раза (р=0,0008). К 14-м суткам после реанимации у крыс первой серии наблюдалась нормализация ориентировочно-исследовательской деятельности, а после пережатия сосудистого пучка сердца отмечалось повторное снижение ориентировочно-исследовательской деятельности. Начиная с 21-х суток и до конца периода наблюдения в обеих сериях на фоне приближения исследовательской активности к контрольной группе нормализации эмоционального статуса крыс не происходило, так как ориентировочно-исследовательские реакции часто сменялись грумингом, длительность которого в первой и второй сериях превышала контрольный уровень соответственно на 155%

9

(р=0,04) и 160% (р=0,006).

Исследование показателей вариационной пульсометрии у крыс в динамике постреанимационного периода после перенесенной клинической смерти позволило выявить дисбаланс показателей, характеризующих вегетативный статус животных. Полученные данные свидетельствовали о том, что в обеих сериях экспериментов уже к концу первых суток наблюдалось значительное снижение тонуса симпатической нервной системы с резким преобладанием тонуса парасимпатической нервной системы. Данное соотношение сохранялось во все сроки эксперимента, однако в группе крыс, реанимированных после клинической смерти от пережатия сосудисто-нервного пучка, эти изменения были выражены меньше, что свидетельствовало о более благоприятном течении постреанимационного периода у этой группы животных.

Исследование цитокинового профиля в постреанимационном периоде показало нарушение выработки как провоспалительных, так и противовоспалительных цито-кинов. В группе крыс после перенесенной смертельной кровопотери было выявлено, что уровень провоспалительных цитокинов был достоверно выше контроля на 1-е сутки (а-ФНО, ИЛ6, ИЛ8). Проанализировав полученные данные по содержанию цитокинов в сыворотке крови крыс в постреанимационном периоде после острой смертельной кровопотери, мы выявили, что уровень провоспалительных цитокинов был достоверно выше контроля на 1-е сутки (ФНО-а, ИЛ-6, ИЛ-8). Второй подъем содержания цитокина ФНО-а и ИЛ-6 происходил на 10-е сутки. Это, по-видимому, обусловлено развитием в постреанимационном периоде полиорганной недостаточности у экспериментальных животных. Изменения же показателей противовоспалительных цитокинов указывают на снижение выработки данных цитокинов, за исключением ИЛ-4. Выработка противовоспалительных цитокинов, за исключением ИЛ-4, была снижена во все сроки (рис. 1, 2).

В серии экспериментов с пережатием сосудисто-нервного пучка уровень провоспалительных цитокинов был выше контроля на 1-е сутки, затем в течение 10-14-х суток, а также к концу периода наблюдения. Противовоспалительные цитокины практически в течение всего периода наблюдения были снижены. В этой ситуации повышение содержания ИЛ-4 можно расценивать как положительный момент, поскольку известна способность ИЛ-4 подавлять освобождение провоспалительных цитокинов (Зильбер А.П., 2001, Engelman H.A. et al., 1992). Во многом благодаря этому отмечается фазная динамика их содержания (рис. 3,4).

Рис. 1. Динамика содержания провоспалительных цитокинов в плазме крови крыс в постреанимационном периоде после клинической смерти вследствие кровопотери, пг/мл

Контроль 1сут 3 сут 5 сут 7сут 10 сут И сут 21 сут 28 сут 35сут

■ ил-13 В ил-6 ®ил-8 0Фно-а

Примечание: ИЛ-1Р - интерлейкин-1 бета, ИЛ-6 -интерлейкин-6,

ИЛ-8 - интерлейкин-8, ФНО-а - фактор некроза опухоли-альфа

* р<0,05; »» р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем

Рис. 2. Динамика содержания противовоспалительных цитокинов в плазме крови крыс в постреанимационном периоде после клинической смерти вследствие кровопотери, пг/мл ИП-1РА ИЛ-2, ИП-4

О

контроль 1 сут 3 сут 5 сут 7 сут 10 сут И сут 21 сут 28 сут 35 сут Е=ЭИЛ-2 £»г2ЭИП-4 —-ИЛ-1РА

Примечание: ИЛ-1 РА - рецегтторный антагонист интерлейкина-1, ИЛ-2 - интерлейкин-2, ИЛ-4 - интерлейкин-4

* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем

Рис. 3. Динамика содержания провоспалительных цитокинов в плазме крови крыс в постреанимационном периоде после клинической смерти

Примечание: ИЛ-1Р - интерлейкин-1 бета, ИЛ-б -интерлейкин-6,

ИЛ-8 - интерлейкин-8, ФНО-а - фактор некроза опухоли-альфа

* р<0,05; ** Р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем

Рис. 4. Динамика содержания противоспалительных цитокинов в плазме крови крыс в постреанимационном периоде после клинической смерти вследствие пережатия сосудисто-нервного пучка, пг/мл ил-1 РА ил-2, ил-«

ИЛ-2 ЕЕЭЗ ИЛ-4 —»■ - ИЛ-1 РА

Примечание: ИЛ-1 РА - рецепторный антагонист интерлейкина-1, ИЛ-2 - интерлейкин-2, ИЛ-4 - интерлейкин^)

* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001-статистически значимые различия по сравнению с

контролем

При анализе показателей лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) в ходе эксперимента результаты были схожими в обеих моделях реанимации (рис. 5). Наиболее значительный рост ЛИИ отмечался в первые сутки постреанимационного периода (до 1534,6% р=0,00024 и 1296,6%, р=0,00016, первая и вторая модели соответственно в сравнении с исходными данными). В течение последующих 3-5-х суток происходило значительное снижение показателей до 504,3% р=0,00024 и 449,3% р=0,00016 - на третьи, 259,5% р=0,00024 и 2023,6% р=0,00029 - на пятые сутки постреанимационного периода. Далее наблюдалось повторное, но менее выраженное повышение показателей ЛИИ с максимальным значением на 10-е сутки постреанимационного периода (919,5%, р=0,00024 и 810,1%, р=0,00061 соответственно). В дальнейшем к 14-м суткам отмечалось некоторое снижение с последующим постепенным ростом показателей до конца эксперимента (465,4% р=0,00024 и 428,7% р=0,00024 соответственно на моделях клинической смерти от острой кровопотери и пережатия сосудисто-нервного пучка). При этом весь период наблюдения результаты были значительно выше контрольных значений.

—■—1 модель - ♦ - 2 модель Рис.5. Динамика изменений показателей лейкоцитарного индекса интоксикации в постреанимационном периоде на двух моделях клинической смерти (** р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем).

Если повышение абсолютного числа нейтрофилов было более выражено до 10-х суток, то повышение абсолютного числа моноцитов отмечалось к концу периода наблюдения.

В группе животных после перенесенной смертельной кровопотери показатели, характеризующие фагоцитарную активность, были резко угнетены во все сроки наблюдения. Так, со стороны фагоцитарного индекса было отмечено повышение на 1-е сутки, а в остальные сроки показатель был достоверно ниже уровня контроля. Фагоцитарное число было достоверно ниже все сроки наблюдения, причем наибольшая депрессия, более чем в 2 раза наблюдалась на 1-е, 7-е, 10-е и 28-е сутки постреанимационного периода(рис. 6).

Рис.6. Динамика изменений фагоцитарного числа (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ) в постреанимационном периоде после клинической смерти вследствие острой кровопотери (* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем).

В группе животных, перенесших клиническую смерть от пережатия сосудисто-нервного пучка, процент активных фагоцитов был выше контрольных значений на 1-е сутки постреанимационного периода, во все другие сроки отмечалось его снижение, в том числе и достоверное на 3-й, а также на 7-14-е сутки. Фагоцитарное число во все сроки наблюдения было ниже уровня контроля (рис.7).

а

Рис. 7. Динамика изменений фагоцитарного числа (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ) в постреанимационном периоде у крыс, перенесших клиническую смерть от пережатия сосудисто-нервного пучка (* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001-статистически значимые различия по сравнению с контролем).

В группе крыс после перенесенной клинической смерти от острой кровопо-тери показатели лизоцимной активности были высокими до 5-х суток после оживления включительно, на 7-е сутки отмечалась лишь тенденция к повышению. В последующие сроки постреанимационного периода лизоцимная активность была ниже по сравнению с группой интактных животных, причем достоверным снижение было на 10-, 28- и 35-е сутки постреанимационного периода.

В группе крыс после перенесенной клинической смерти от пережатия сосудисто-нервного пучка динамика изменений лизоцимной активности несколько отличалась, так как повышение лизоцимной активности длилось до 21-х суток включительно и было достоверным на 3-й, 5-, 7-, 14-е и 21-е сутки. В конце периода наблюдения лизоцимная активность так же, как и в группе после смертельной кровопотери, была снижена (табл.1).

Таблица 1. Динамика изменений лизоцимной активности крови в постреанимационном периоде после клинической смерти, Ме[25; 75] __

Сроки постреа- Лизоцимная активность крови, мг/мл

нимационного периода п 1-я модель п 2-я модель

Контроль 10 4,5 [4,5; 5,7] 9 4,5 [4,5; 5,47]

1-е сутки 12 6,7; [6,15; 7,25] р=0,001 1 0 6,7; [6,4; 7,0] р=1,000

3-е сутки И 6,6 [6,2; 7,1] р=0,001 9 6,6 [6,2; 7,0] р= 0,0003

5-е сутки 10 5,85 [5,2; 6,5] р=0,049 9 5,8 [5,3; 6,3] р=0,009

7-е сутки 10 5,7 [5,47; 5,95] р=0,070 9 5,7 [5,3; 6,0] р=0,009

10-е сутки 11 4,0 [3,5; 4,5] р=0,009 8 5,4 [3,5; 4,5] р= 0,388

14-е сутки 9 4,5 [4,2; 4,8] р=0,327 9 5,5 [4,35; 5,485] р=0,024

21-е сутки 9 5,4 [5,1; 5,7] р=0,1779 8 5,3 [5,0; 5,75] р=0,0433

28-е сутки 10 3,6 [3,1; 4,0] р=0,001 9 3,5 [3,0; 4,01 р=0,013

35-е сутки 9 3,5 [3,0; 4,5] р=0,0101 9 3,5 13,0; 4,0] р=0,0272

В группе крыс, перенесших смертельную кровопотерю, подъем комплементарной активности в постреанимационном периоде был более выраженным и достоверным до 5-х суток постреанимационного периода, а в последующие сроки повышения чередовались с достоверным снижением показателя к концу периода наблюдения, как и в предыдущей серии экспериментов.

В группе животных после перенесенной клинической смерти от пережатия сосудисто-нервного пучка достоверное повышение комплементарной активности наблюдалось лишь на 1-й неделе восстановительного периода, в дальнейшем изменения носили недостоверный характер, а к концу периода наблюдения показатель был достоверно ниже контрольных величин (рис. 8).

ьс Ш 4-О

1сут Зсуг 5 сут 7 сут 10 сут 14 сут 21 сут " 1 модель • 2 модель —А—контроль

28 сут 35 сут

Рис. 8. Динамика показателей комплементарной активности крови в постреа-нимациониом периоде на двух моделях клинической смерти, (ОЕК).

* р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001- статистически значимые различия по сравнению с контролем.

В постреанимационном периоде на протяжении пяти недель в двух моделях умирания отмечались нарушения функционирования неспецифических факторов защиты. Были выявлены расстройства фагоцитоза, обусловленные дисбалансом лизоцимной и комплементарной активности, а также нарушениями выработки цитокинов. Данная патология неспецифических факторов защиты ор-- ганизма привела к повышению индекса лейкоцитарной интоксикации. Патологические изменения неспецифических иммунных факторов протекали на фоне нарушений восстановления высшей нервной деятельности и вегетативного дисбаланса. Группа животных после перенесенной смертельной кровопотери восстанавливалась значительно хуже по сравнению с группой животных после клинической смерти вследствие пережатия сосудисто-нервного пучка.

При анализе корреляционных связей в постреанимационом периоде после острой смертельной кровопотери мы выявили наиболее выраженные связи в первые сутки постреанимационного периода. Неврологический статус имеет сильную прямую связь с показателями ИЛ-10, ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-2 и обратную с показателями ИЛ-1РА, ФИ, ФЧ. Средняя прямая связь обнаруживается с по-

17

казателями ИЛ-8, комплементарной активности, а обратная - с показателями лизоцимной активности. На 1-е сутки после оживления определяется сильная прямая корреляционная связь показателя первичного провоспалительного ци-токина ИЛ-1Р с неврологическим статусом, ФНО-а, ИЛ-6, ИЛ-2 и сильная обратная связь с показателями ИЛ-1РА, ФЧ и ФИ. Наблюдается средняя обратная корреляционная связь с показателями лизоцимной активности крови. Корреляционные связи противовоспалительного цитокина ИЛ-4 характеризуются средней прямой связью с показателями ИЛ-6 и обратной с показателем ФИ. ФИ характеризуется средней обратной корреляционной связью с ИЛ-1(3.

Эти связи указывают на то, что в первые сутки постреанимационного периода в зависимости от неврологического состояния происходит значительная активация провоспалительных и депрессия противовоспалительных цитокинов с одновременным снижением комплементарной активности сыворотки крови и эффективности фагоцитоза.

При анализе корреляционных связей в постреанимационном периоде после пережатия сосудисто-нервного пучка мы выявили несколько иную картину. На первые сутки после оживления наблюдается средняя прямая корреляционная связь ИЛ-1Р с комплементарной активностью крови и средняя обратная связь с ФИ. Корреляционные связи противовоспалительного цитокина ИЛ-4 характеризуются средней прямой связью с ИЛ-6, комплементарной активностью крови, ФИ.

При рассмотрении ФИ обнаруживается сильная прямая корреляционная связь с показателями ИЛ-1РА и обратная с показателями неврологического статуса, ФНО-а, лизоцимной активностью, средняя прямая связь с ФЧ, ИЛ-4, а обратная - с ИЛ-1Р, ИЛ-6. ФЧ имеет сильную прямую связь с ИЛ-4 и обратную с неврологическим статусом, ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНО-а.

Таким образом, выявлена прямая зависимость тяжести состояния от активности про- и противовоспалительных цитокинов при одновременном снижении комплементарной активности и фагоцитоза, которые максимально выражены на первые сутки.

СХЕМА

патогенез постреанимационных нарушений неспецифической резистентности

выводы

1. В динамике длительного постреанимационного периода при различных моделях умирания наблюдаются нарушения восстановления высшей нервной деятельности и выраженный вегетативный дисбаланс. На модели клинической смерти от острой кровопотери, по сравнению с моделью клинической смерти от пережатия сосудисто-нервного пучка, расстрой-, ства более значительные и выявляются на протяжении всего постреанимационного периода.

2. Клеточные реакции периферической крови в постреанимационном периоде характеризуются в ранних сроках после оживления нейтрофиль-ным лейкоцитозом, а в поздних стадиях - моноцитозом.

3. Нарушения фагоцитарной функции проявляются в виде снижения фагоцитарного индекса, при кровопотере начиная в 3-х суток после оживления, а при пережатии сосудисто-нервного пучка - с 5-х суток постреанимационного периода. Фагоцитарное число при обеих моделях клинической смерти было низким во все сроки наблюдения.

4. Угнетение лизоцимной активности сыворотки крови в группе мо смертельной кровопотерей начинается 10-х суток, а в группе с пережатием сосудисто-нервного пучка с 21-х суток постреанимационного периода. Значимо высокая комплементарная активность выявляется до 5-х суток после реанимации в обеих сериях. В последующие сроки активность комплемента незначительно отличается от контроля и достоверно снижается к 35-м суткам наблюдения.

5. Наблюдаемый дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов при обеих моделях умирания оказывает неблагоприятное влияние течение восстановительного периода, состояние неспецифических факторов защиты. Установлены взаимосвязи и взаимообусловленность нарушений лизоцимной, комплементарной активности крови на протяжении 5 недель после оживления. Установлен факт дефекта фагоцитоза с выраженностью цитокинового дисбаланса организма.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК РФ:

1. Соотношение показателей неспецифической резистентности, провоспа-лительных цитокинов и уровня эндотоксикоза после смертельной кровопотери. / Нургалеева Е.А., Еникеев Д.А., Нагаева Л.В., Александров М.А. // Медицинская наука и образование Урала, 2009, №4, С. 48-52.

2. Повреждение миокарда и уровень гликозаминогликанов при постреанимационной эндотоксемии / Нургалеева Е.А., Еникеев Д.А., Мустафин Т.Н., Фаршатова Е.Р., Куклин Д.С., Нагаева Л.В. // Медицинская наука и образование Урала, 2009, Т.10, №4 (ноябрь). - С. 48-53.

3. Влияние клинической смерти от острой кровопотери на состояние неспецифической резистентности и цитокиновой продукции вэксперименте / Еникеев Д.А., Нургалеева Е.А., Нагаева Л.В., Нургалеев Н.В., Александров М.А. // Вестник новых медицинских технологий, 2010, Т.ХУИ, №1, с.177-179.

4. Роль структурных и метаболических нарушений печени крыс в механизмах формирования эндотоксикоза после перенесенной смертельной кровопотери./ Нургалеева Е.А., Еникеев Д.А., Лаптев О.В., Нагаева Л.В. // Медицинская наука и образование Урала, 2011, №3, - С. 92-94.

Остальные печатные работы:

5. Процессы свободно-радикального окисления в тканях головного мозга и глаза крыс в динамике постреанимационного периода. / Еникеев Д.А., Нургалеева Е.А., Самшуллииа А.Ф., Нагаева Л.В. // Здравоохранение Башкортостана, 2005, спец. выпуск №7, (Матер, межрегион, науч.-практ. конф. с междун. участием, поев. 100 летию основателя кафедры патофизиологии Башкирского государственного медицинского университета, Засл. деятеля науки БАССР, д.м.н., профессора В.А. Самцова), с. 76-77.

6. Роль оксида азота в нарушении микроциркуляции сетчатки в постреанимационном периоде у крыс. / Еникеев Д.А., .Нургалеева Е.А., Самигуллина А.Ф., Нагаева Л.В.// Здравоохранение Башкортостана, 2005, спец. выпуск №7, (Матер, межрегион, науч.-практ. конф. с междун. участием, поев. 100 летию основателя кафедры патофизиологии Башкирского государственного медицинского университета, Засл. деятеля науки БАССР, д.м.н., профессора В.А. Самцова), с. 77-79.

7. Взаимосвязь содержания гликозаминогликанов в печени крыс с эндогенной интоксикацией в постреанимационном периоде / Еникеев Д.А., Нургалеева Е.А., Идрисова Л.Т., Самигуллина А.Ф., Байбурина Г.А., Нагаева Л.В., Шафи-ков А.Р./ Здравоохранение Башкортостана спец. выпуск № 2, 2006 («Проблем-

21

ные вопросы травматологии и ортопедии» - V съезд Ассоциации травматологов, ортопедов, протезистов Республики Башкортостан, поев. 40-летию кафедры травматологии и ортопедии Башкирского госмедуниверситета, с. 30-32.

8. Постреанимационные изменения в сурфактантной системе крыс. / Сазанов М.А., Самигуллина А.Ф., Нагаева JI.B., Насырова Г.М., Сорокин A.A., Нур-галеев Н.В. // Материалы 71-ой итоговой Республиканской научной конф. молодых ученых с международным участием. Уфа-2006, С. 26.

9. Клеточные реакции иммунной системы в постреанимационом периоде у животных, перенесших клиническую смерть. / Нургалеева Е.А., Нагаева JI.B., Нургалеев Н.В. // Материалы 71-ой итоговой Республиканской научной конф. молодых ученых с международным участием. Уфа-2006, С.54.

10. Характер постреанимационного периода у крыс на различных моделях клинической смерти. / Сазанов М.А., Нагаева Л.В., Сорокин A.A., Нургалеев Н.В. // «Актуальные проблемы патофизиологии» (Мат. 13 межгород, конф. молодых ученых, 23-24 апрель 2007 СПб). С. 112-114.

11. Сравнительная оценка показателей комплементарной активности сыворотки крови крыс в постреанимациошюм периоде при различных моделях умирания. / Сазанов М.А., Самигуллина А.Ф., Насырова Г.М., Сорокин A.A., Ени-кеев O.A., Нургалеев Н.В. // «Актуальные проблемы патофизиологии» (Мат. 13 межгород, конф. молодых ученых, 23-24 апрель 2007 СПб). С. 112-114.

12. Влияние различных моделей умирания на нейрофизиологические механизмы восстановления мозга крыс в постреанимационном периоде. / Еникесв Д.А., Нургалеева Е.А., Нагаева Л.В., Байбурина Г.А., Александров М.А., Фар-шатоваЕ.Р. //Медицинский вестник Башкортостана, 2008. -Т.З, №1. - С. 33-36.

13. Фагоцитарная активность и уровень провоспалительных цитокинов после перенесенной смертельной кровопотери и реанимации у крыс (статья) / Еникеев Д.А., Нургалеева Е.А., Нагаева Л.В., Лехмус В.И., Нургалеев H.B. II Медицинский вестник Башкортостана, 2008. - Т.З, №1., с. 83-86

14. Динамика показателей комплементарной активности сыворотки крови крыс в постреанимационном периоде после перенесенной клинической смерти. / Нагаева Л.В., Самигуллина А.Ф., Насырова Г.М., Еникеев O.A., Нургалеев Н.В. // Тезисы в сборнике по материалам конференции студентов и молодых ученых БГМУ. Уфа 2008 г. С. 56.

15. Цитокины и постишемичеекие нарушения микроциркуляции мозга / Еникеев Д.А., Нургалеева Е.А., Самигуллина А.Ф // Медицинский вестник Башкортостана, 2009. - Т.4, №2. - С.26-28.

16. Изменения показателей неспецифической резистентности у крыс после клинической смерти / Нагаева Л.В., Нургалеев Н.В., Александров М.А. // «Мо-

лодые ученые в медицине» (Материалы XV Всероссийской научно-практической конференции, 2010, Казань). С. 289.

17. Цитокиновый профиль в иммунных реакциях постреанимационного периода животных, перенесших клиническую смерть. /Нагаева Л.В., Нургалеев Н.В. // IX Всероссийская университетская научно-практическая конференция молодых ученых по медицине, Тула- 2010. (Приложение к журналу ВНМТ, Т. XVII, №2). С. 44.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГГАС - гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание ИВР - индекс вегетативного равновесия ИН- индекс напряжения регуляторных систем ИЛ - интерлейкин

ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации

ЛПС - липополисахариды

МОК - минутный объем крови

ОЕК - относительные единицы комплемента

ОЦК - объем циркулирующей крови

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СНС - симпатическая нервная система

ТРФ - ^-трансформирующий ростовой фактор

ФИ - фагоцитарный индекс

ФЧ - фагоцитарное число

ФНО-а - фактор некроза опухоли

ЦНС - центральная нервная система

у-ИФ - у-интерферон

Нагаева Лена Валериевна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕСПЕЦИФ1ШЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НА ДВУХ МОДЕЛЯХ КЛИНИЧЕСКОЙ СМЕРТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Подписано в печать 13.10.11 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Объем 0,9п.л Тираж 100 экз. Заказ 547. Гарнитура «Типе5Не\уКотап». Отпечатано в типографии ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИП ВЕРКО. . Уфа, Карла Маркса 12 корп. 4, т/ф: 27-27-600, 27-29-123

Актуальность. Экстремальные и терминальные состояния, включающие различные виды шока, занимают ведущее место в структуре смертности и летальности. Недостаточная изученность патогенетических механизмов оставляет проблему постагресивных состояний на лидирующих позициях в современной биологии и медицине.

Постреанимационный период сопровождается' нарушением функций центральной нервной и- эндокринной, систем, обмена веществ, изменением*-концентрации» катехоламинов, биологически активных веществ, ферментов;, накоплением в организме избыточного количества недоокисленных продуктов и т.д. (Неговский В.А., 1986; Золотокрылина Е.С., 2000; Тумановский Ю.М:, 2007; Суслов.А.П. с соавт., 2008; Zanotti-Gavazzoni S.L. et al.,2009)».

У более чем половины больных с тяжелой сочетанной травмой и мас-сивнош кровопотерей; начиная-с 3-5-х-суток-постреанимационного периода (Золотокрылина Е.С., 2000; Соколов. В.А., Федоров Т.А., 2006; М. Nakamura et al., 2010; Unterwalder N. et al., 2010) наблюдается развитие- гнойно-воспалительных процессов, а в дальнейшем происходит генерализация? инфекции и развитие сепсиса. Повышенная: чувствительность к инфекции,-данной категорий больных позволяет говорить о несостоятельности у них системы иммунитета (Ерофеев В.В: с соавт., 1991, 1999; Полушин Ю.С. с соавт., 2001; Jakubowski А.,.2009; S. von Gunten, et al'., 2009).

В раннем постреанимационом периоде наблюдается выраженная имму-нодепрессия, инволюция лимфоидных органов с характерными признаками стресс-реакций, обусловленные тяжелой гипоксией (Неговский,В!А. с соавт., 1987; Дерябин И.И., Насонкин О.С, 1987; Рябова F.A., 1994; Еникеев? Д.А., 1996, Зильбер А.П., 2001; Ura Hi et al., 1998). В восстановительном периоде у животных иммунологическая реактивность организма значительно1 угнетена и даже в отдаленные сроки после оживления не приходит к исходному уровню (Казарян< А.А., 1973; Ананьева С.К., 1975; Редькин Ю.В., Соколова Т.Ф., 1991).

Устойчивость организма к различным экстремальным воздействиям во многом определяется уровнем его неспецифической резистентности (Редькин Ю.В., Соколова Т.Ф., 1987; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Беловолова P.A., 1991; Altura В.М., 1980; Faist E.H. et al., 1990; Krakauer Т. et al., 2010). Многочисленные исследования показали, что постреанимационная патология сопровождается сложной структурно-функциональной перестройкой клеточных элементов фагоцитарной: системы, что может играть весьма значимую роль, в исходе постагрессивных состояний (Зубаирова Л.Д., 1984; Беляков И.М., 1990; Яковлев М.Ю. с соавт., 1991; Харин F.M., 1992; Allen R.C., Pruit BvA., 1982; Ward P;Hi et al., 1995):, Большой интерес представляют также сведения? об* изменении- при экстремальных состояниях гуморальных факторов, влияющих на состояние неспецифической резистентности организма (Ананьева С.К., 1984). При изучеиии различных аспектов патогенеза экстремальных состояний? пристальное: внимание исследователей; было обращено5 на поли-морфноядерные лейкоциты - наиболее мобильную и многочисленную клеточную популяцию, поддерживающую уровень естественной резистентности организма в норме и патологии (Шикунова Л.Г., 1980; Жуковский IO¿M., 1987; Карелин A.A. с соавт., 1988; Долгушин И.И. с соавт., 1989; Козинец Г.П. с соавт., 1992; Петров Р.В., 1997; Назаров И.П:, 2002; Deitch Е.А. et al., 1990; Mab., 1992; Barrozo-Aranda J. et al., 1994; Botha A.J. et al., 1995).

Изменения как специфической, так и неспецифической иммунной реактивности активно изучались в 60-90-е годы прошлого столетия, когда проводились опыты по умиранию и оживлению в основном на собаках, и активно изучались нарушения в ранние сроки после реанимации. Однако, начиная с 90-х годов, вначале в зарубежных источниках, а затем и в отечественной литературе стали появляться публикации, характеризующие молекулы межклеточного взаимодействия — цитокины, их влияние на; течение физиологических и патологических процессов: Поэтому стал актуальным вопрос изучения влияния цитокинов на механизмы неспецифической резистентности, и,, в частности, фагоцитоза.

Для создания современных эффективных схем профилактики и лечения постреанимационной болезни (Золотокрылина Е.С., 2000) необходимы дальнейшие исследования влияния биологически активных веществ, свойственных гипоксии. В» основе ответа организма на различные экстремальные воздействия лежат универсальные механизмы, одним из которых является типовой патологический процесс — воспаление. В этой связи представляет особый интерес изучение цитокинов, поскольку системная^ реакция, организма на воспаление обусловлена межклеточными взаимодействиями, регулируемыми» цитокинами (Черний В.И. с соавт., 1999; Черешнев*В.А., Гусев Е.Ю., 2001; Гуманенко Е.К. с соавт., 2007). Экстремальные воздействия вызывают стадийный системный-воспалительный ответ, чем определяются варианты течения и; исхода травматической болезни (Лебедев В.Ф: с соавт., 2001, Левит Д.А., Лейдерман И.Н., 2006).

Анализ литературных данных показывает, что изменения клеточных и гуморальных реакций при постреанимационных состояниях различной этиологии во 'многом' сходны, что позволяет предположить наличие единых пато-, генетических механизмов нарушения неспецифической резистентности. С этой точки зрения безусловно^ интересным представляется установление взаимосвязи и взаимообусловленности изменений» факторов неспецифической защиты на протяжении, длительного постреанимационного периода при различных моделях умирания. Подобный подход может способствовать прогнозированию тяжести и исходов постагрессивных состояний, коррекции возникающих нарушений.

Целью настоящего исследованиям является:, комплексная* патофизиологическая оценка динамики1 показателей неспецифической иммунологической резистентности в постреанимационном периоде и установление наиболее общих закономерностей их развития на двух моделях клинической смерти.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности умирания, течения постреанимационного периода, неврологического статуса и вегетативного баланса крыс после умирания от острой кровопотери и пережатия сосудисто - нервного пучка в сравнительном аспекте.

2. Исследовать динамику содержания фагоцитирующих клеток при различных моделях умирания.

3. Провести^ сравнительный анализ изменений неспецифических факторов защиты — фагоцитоза, комплемента, лизоцима, в постреанимационном периоде на двух моделях клинической смерти.

4. Оценить состояние цитокинового баланса в постреанимационном периоде в сравнительном аспекте при различных терминальных состояниях.

Научная новизна. Впервые в опытах на животных проведено комплексное и сравнительное исследование функциональных показателей)клеток белой крови на двух моделях умирания вт динамике длительного постреанимационного периода (5 недель).

Прослежены изменения показателей, отражающие характер и степень выраженности изменений неспецифической защиты в зависимости от особенности умирания.

Новыми являются данные о наличии взаимосвязи и взаимообусловленности- нарушений лизоцимной, комплементарной активности^ крови на протяжении 5 недель после оживления.

На основании сравнительной оценки изменений уровня цитокинов в динамике длительного постреанимационного периода при двух моделях умирания установлен факт взаимосвязи дефекта фагоцитоза с выраженностью цитокинового дисбаланса организма.

Теоретическая значимость и практическая ценность исследования:

Проведенное исследование способствовало установлению ряда нов-фактов, расширяющих представлениям патогенезе экстремальных тгтпстт= . ый и роли изменений различных факторов неспецифической резистентности-Г-1 в этом процессе; Использование в работе комплексного подхода к изучение--=z> в динамике длительного постреанимационного периода: на двух моделях ут> —ди-рания? фагоцитарной активности клеток белой крови, комплемента, лизоце ^лма' и цитокинов позволило установить патогенетические механизмы, нарушен, ~ .ий': неспецифической защиты, а также определить возможные пути взаимосв- уази: И взаимообусловленности этих изменений. ' '

На основании сравнительного анализа.изменений факторов неспецис < "Прической защиты был установлен вклад лизоцима и комплемента в нарушен--ие фагоцитоза1 на протяжении? 35 суток» после оживления; Обнаруженный Ц1—1-[гтокиновый дисбаланс влияет как на течение постреанимационного периода, —так и на участие клеток белой крови в реакциях фагоцитоза.

Результаты исследования могут использоваться в дальнейшей наум -—юй разработке- проблемы экстремальных и терминальных; состояний,- в лаб->ра-торной и« клинической^ практике для? прогнозирования« исходов! постагрес«^ -ЗУБНЫХ СОСТОЯНИЙ и оценки эффективности проводимых лечебных мероприя* Ii —3-1Й. Основные положения;.выносимые на^ защиту: 1. Нарушения функций нервной системы и вегетативный-дисбаланс постреанимационном периоде после, клинической? смерти выявляютсях на протяжении всего срока наблюдения. При клинической смерти от -<- ~>ст-рой кровопотери расстройства более значительны по сравнению с моделью пережатиясосудисто-нервногопучка. 21 В> ранние сроки? постреанимационного- периода выявляется, неу* - = -рп-фильный лейкоцитоз; повышение комплементарной активности: ст »i воротки крови в совокупности с прогрессирующим снижением фяг-<г-» ЦИтарного индекса1 и фагоцитарного числа, начиная с 3-х - 5-х суток. 3. В серии опытов с острой кровопотерей расстройства фагоцитоза —— постреанимационном периоде сочетаются с угнетением личопимнот^ — активности сыворотки крови, начиная с 5-х суток восстановительного периода. При пережатии сосудисто-нервного пучка снижение лизоцим-ной активности выявляется в поздние сроки (на 28-е и 35-е сутки).

4. Дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов неблагоприятно сказывается на восстановлении активности фагоцитарных реакций в постреанимационном периоде при обеих моделях умирания. Внедрение результатов исследования. Результаты исследования включены в учебный процесс при изучении экстремальных состояний' на кафедре патофизиологии, биохимии, военной и экстремальной* медицины, микробиологии ГОУ ВПО'Башкирского государственного медицинского университета, ООО «Медиалаб».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 научных работ. Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на Санкт-Петербургской МеЖГОрОДСКОЙ КОНфереНЦИИ МОЛОДЫХ учеНЫХ И СТудеНТОВ ПО' актуальным проблемам патофизиологии (2006), научно-практической конференции-молодых ученых Башгосмедуниверситета (2008, г.Уфа), на Российском симпозиуме с международным участием по патофизиологии и клинике экстремальных и терминальных состояний (2009, г.Уфа), на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (2010, г.Казань).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, включает 21 таблиц, 7 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, собственных данных, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, включающего 154 отечественных и 169 иностранных источников.

выводы

1. В динамике длительного постреанимационного периода при различных моделях умирания наблюдаются нарушения восстановления высшей нервной деятельности и выраженный вегетативный дисбаланс. На модели клинической смерти; от острой кровопотери, по сравнению с моделью- клинической смерти от пережатия сосудисто-нервного- пучка, расстройства более значительные и выявляются на протяжении всего* постреанимационного периода.,

2. Клеточные реакции1 периферической, крови в постреанимационном периоде характеризуются в ранних сроках после оживления нейтрофиль-ным лейкоцитозом, а в поздних стадиях - моноцитозом:

3. Нарушения)фагоцитарной; функции проявляются в виде снижения? фагоцитарного индекса, при кровоиотере начиная в 3-х суток после оживления, а, при-: пережатии« сосудисто-нервного пучка - с 5-х суток постреанимационного периода; Фагоцитарное число - при» обеих моделях клинической смерти было низким во все сроки наблюдения;

4.- Угнетение лизоцимной.активности сыворотки крови в группе мо смертельной. кровопотерей начинается 10-х суток, а.в группе с пережатиехм сосудисто-нервного пучка с 21-х суток постреанимационного периода. Значимо ^высокая комплементарная активность выявляется» до 5-х суток после реанимации в обеих сериях. В последующие сроки активность комплемента незначительно отличается от контроля и достоверно снижается к 35-м суткам наблюдения.

5. Наблюдаемый дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов при обеих моделях умирания: оказывает неблагоприятное, влияние течение восстановительного периода^ состояние неспецифических факторов» защиты; Установлены взаимосвязи и взаимообусловленность, нарушенийшизоцимнощ комплементарной; активности крови на протяжении 5 недель после оживления. Установлен факт дефекта фагоцитоза с выраженностью цитокинового дисбаланса организма.