Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Сравнительная характеристика фармакологической активности фенол-содержащих препаратов - олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

На правах рукописи

БУЗЛАМА АННА ВИТАЛЬЕВНА

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФЕНОЛ-СОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ -ОЛИПИФАТА, ДИНОФЕНА И CYPERUS ESCULENTUS L.

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск-2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко МЗ РФ».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Чернов Юрий Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Леонова Марина Васильевна

доктор медицинских наук, профессор

Филиппенко Николай Григорьевич

Ведущая организация:

Московская медицинская академия им. Н.И. Сеченова

Защита состоится « 24 » февраля 2005 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета К208.039.01 при ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет МЗ РФ» по адресу: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет МЗ РФ».

Автореферат разослан «

22

2005г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

1. ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы. Фенольные соединения обладают огромным структурным многообразием, которое обуславливает широкий спектр их фармакологической активности и соответственно наличие перспектив дальнейшего изучения существующих и создания новых препаратов на их основе (М.Н. Запрометов, 1993; Н. Tapiero et al., 2002). Тем не менее, в настоящее время число фармакологических препаратов, особенно содержащих химически чистые вещества фенольной структуры, не так велико, в большинстве препаратов эти соединения находятся в комплексе с другими веществами и их фармакологические эффекты являются суммарными.

Особое внимание привлекают антиоксидантные и адаптогенные свойства фенольных соединений, так как в настоящее время доказано, что патологический стресс наряду с дизрегуляционными нарушениями процессов свободно-радикального окисления являются неспецифическими звеньями патогенеза различного рода заболеваний (Т.В. Vanltallie, 2002; W. Droge, 2002). Кроме того, выделение именно антиоксидантных и адаптогенных свойств фе-нольных соединений из всего спектра их фармакологической активности связано с тем, что в последние годы сформировалась концепция о взаимозависимости стресса и нарушений в системе перекисное окисление липидов - анти-оксидантная защита организма (ПОЛ-АОЗ), а так же о наличии связи между антиоксидантным и адаптогенным действием лекарственных препаратов (В.А. Барабой и др., 1992). В связи с этим, изучение антиоксидантных и адап-тогенных свойств фенольных соединений является перспективным.

Одним из социально-значимых заболеваний, в патогенезе которого патологический стресс и нарушения в системе ПОЛ-АОЗ играют важную роль, является сахарный диабет (СД) (R.S. Surwit et al., 1993). Многочисленными исследованиями доказана вовлеченность данных патологических процессов в утяжеление течения СД и развитие его осложнений (С/Е. Lloyd et al., 1990). Результатами современных научных исследований доказана эффективность адаптогенов и антиоксидантов, в том числе фенольной структуры, при СД (Н. Kaneto et al., 1999; М.С. Sabu et al., 2002). Однако, в широкой клинической практике применение препаратов данных групп у больных СД весьма ограничено. Исходя из вышеизложенного, представляет интерес изучение антидиабетической активности фенольных соединений, обладающих адапто-генным и антиоксидантным действием.

Перспективным представляется сравнительное изучение фармакологической активности модифицированных, синтетических и природных фенол-содержащих препаратов - олипифата, динофена и Cyperus esculentus L. Ди-нофен является мономерным синтетическим фенольным соединением с потенциально высокой антиоксидантной активностью, Cyperus esculentus L. -растение семейства осоковых, содержащее в том числе фенольные соединения (групп лигнанов, биофлавоноидов, витамин Е), фенолгликозиды а так же ряд других соединений, что в целом позволяет предполагать наличие адапто-генных свойств. Олипифат содержит комплекс модифицированных высоко-

молекулярных фенольных соединений - гуминовых веществ, получаемых путем гидролиза из природного лигнина, выпускается для парентерального введения промышленным путем. Химический состав препарата позволяет предположить наличие антиоксидантного и адаптогенного действия. Таким образом, исходя из вышеизложенного, актуальным является изучение анти-оксидантных и адаптогенных свойств олипифата и проведение сравнительного анализа его эффективности с другими фенол-содержащими препаратами -синтетическим фенолом динофеном и фитопрепаратом Cyperus esculentus L., а так же оценка возможности применения данных препаратов в составе комплексной терапии сахарного диабета.

Цель работы: Изучение фармакологической активности олипифата и проведение сравнительного анализа его эффективности с динофеном и Суре-ras esculentus L.

В соответствии с целью поставлены следующие задачи исследования:

Задачи исследования:

1. Провести изучение токсикологических свойств олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

2. Изучить адаптогенную активность олипифата в сравнении с Cyperus escu-lentus L. и динофеном.

3. Изучить антиоксидантную активность олипифата в сравнении с динофе-ном и Cyperus esculentus L.

4. Изучить антидиабетическую активность олипифата в сравнении с Cyperus esculentus L.

5. Изучить возможные механизмы фармакологической активности олипифа-та, динофена и Cyperus esculentus L.

Научная новизна исследования: Впервые изучены антиоксидантные, адаптогенные и антидиабетические свойства олипифата и проведен сравнительный анализ его эффективности с динофеном и Cyperus esculentus L.

Практическая значимость работы: Результаты, полученные в ходе выполнения диссертационной работы, позволяют рекомендовать олипифат, динофен и Cyperus esculentus L. для проведения клинических испытаний в качестве адаптогенов, антиоксидантов и препаратов, применяемых в составе комплексной терапии сахарного диабета.

Практическое внедрение.

По материалам диссертационной работы получено 4 патента РФ на изобретение, 1 приоритетная справка:

1. Адаптоген-стресс корректор [текст]/Ю.Н. Чернов, B.C. Бузлама, И.Б. Ушаков, Ю.В. Водолазский, Д.В Золотарев, О.А. Мубаракшина, А.В. Бузлама, Е.Л. Карпова, С.К. Солдатов, С.Н. Радченко. Патент на изобретение РФ№ 2176516,2001.-8 с.

2. Антидиабетическое средство [текст]/Ю.Н.Чернов, B.C. Бузлама, О.А. Мубаракшина, Ю.В. Водолазский, Б.Л. Жаркой, А.В. Бузлама. Патент на изобретение РФ № 2197259,2003. - 8 с.

3. Антидиабетическое средство [текст]/Ю.Н.Чернов, B.C. Бузлама, О.А. Му-баракшина, Ю.В. Водолазский, Б.Л. Жаркой, Е.Л. Карпова, A.B. Бузлама. Патент на изобретение РФ № 2195300,2002. - 8 с.

4. Антиоксидант [текст]/В.С. Бузлама, А.В. Бузлама, Л.Д. Кудрявцев, Молоды-ка А.В., Привалов В.А., Гусев А.В., Ударов В.Е. Патент на изобретение РФ №2141316,1999.-14 с.

5. Способ профилактики и терапии сахарного диабета [текст]/А.М. Беркович, Ю.Н. Чернов, А.В. Бузлама, B.C. Бузлама. Приоритетная справка от 15.04.2003, № 2003110637. - 19 с.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены на Конференции «Теоретические и клинические проблемы медицины», Воронеж, 2000, Конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины»; 2001; V Международном съезде (Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения», Санкт-Петербург, 2001; Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 2002; Конференции молодых ученых ВГМА им. Н.Н. Бурденко «Перспективы развития теоретической и практической медицины», Воронеж, 2003; Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Новые технологии в биологии и медицине», Воронеж, 2004. Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ. Основные положения, выносимые на защиту.

- Фенол-содержащие препараты олипифат, динофен и Cyperus esculentus L. являются малотоксичными.

- Олипифат, динофен и Cyperus esculentus L. обладают адаптогенными свойствами.

- Олипифат, динофен и Cyperus esculentus L. проявляют антиоксидантные свойства.

- Олипифат и Cyperus esculentus L. обладают антидиабетическими свойствами на экспериментальных моделях сахарного диабета.

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на 137 страницах текста. Диссертационная работа включает в себя введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы и практические предложения, список литературы. Диссертация содержит 32 таблицы, 7 рисунков. Список литературы включает 252 работы, из них 150 отечественных, 102 зарубежных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Характеристика экспериментальных исследований.

Исследования проведены на 670 белых крысах линии Wistar массой тела 120-250 г,'460 белых мышах линии SHR массой тела 18-20 г.

Олипифат для проведения исследований был любезно предоставлен фирмой-производителем ООО «Лигфарм», г. Москва. При проведении исследований олипифат вводили в различных дозах - от 1,0 до 100,0 мг/кг массы тела. Дозы олипифата рассчитывали по действующему веществу (ДВ) -гуминовым веществам, исходя из их содержания в 1,0 мл - 17-25 мг ДВ/мл. Способ введения олипифата - внутримышечно. Динофен (2,6-дитрет-бутил-4-нонилфенол) производства ОАО «Воронежсинтезкаучук» применяли животным в дозе 5,0 мг/кг массы тела. Способ введения динофена - перорально, в смеси с кормом. Изучение фармакологических свойств растения Cyperus esculentus L. проводили с использованием 40,0% водно-этанольного экстракта клубней. Экстракт Cyperus esculentus L. применяли в дозе 10,0 мг/кг массы тела. Способ введения экстракта Cyperus esculentus L. - подкожно, предварительно сухой экстракт растворяли в стерильной дистиллированной воде.

Острый иммобилизационный стресс на белых крысах. Изучаемые препараты вводили после 12 часовой пищевой депривации в различные сроки до начала иммобилизации. После взвешивания животных помещали на иммоби-лизационные платформы в положении на спине и фиксировали. Длительность иммобилизации -18 часов (В.А. Волчегорский и др., 2000).

Принудительное плавание мышей с грузом Плавание осуществлялось в стеклянном сосуде вместимостью 30,0 л, заполненном отстоянной дистиллированной водой постоянной температуры (20,0±0,5°С). Груз представлял собой свинцовое кольцо, составляющее 5,0% от массы тела. По одному животному из каждой группы одновременно помещали в сосуд с водой и при помощи секундомера регистрировали продолжительность плавания каждого животного до момента утомления, сопровождающегося полным погружением животного в воду, после чего мышей извлекали из сосуда с водой. (В.А. Волчегорский и др., 2000).

Аллоксановый сахарный диабет. Аллоксан производства фирмы «Sigma» вводили однократно внутрибрюшинно, в дозах 130,0-150,0 мг/кг (3,0% раствор) после 24-часового голодания (Баранов В.Г., 1983).

Стрептозотоциновый сахарный диабет. Стрептозотоцин производства фирмы «Sigma» вводили внутрибрюшинно, в разовой дозе 30,0 мг/кг (1,0% раствор), трехкратно с интервалом 24 часа после 24-часового голодания (Баранов В.Г., 1983).

Тест толерантности к глюкозе (ГТТ). Перед проведением ГТТ животных подвергали пищевой депривации в течение 12 часов при свободном доступе к воде. Глюкозу вводили внутрибрюшинно, 40,0% р-р, в дозе 3,0 г/кг массы тела. Концентрацию глюкозы в крови измеряли натощак (0), через 30, 60 и 120 мин. после введения глюкозы (Я.М. Кабак, 1968).

Методы лабораторных исследований.

Определение содержания в крови форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) и уровня гемоглобина проводили по общепринятой методике -содержание эритроцитов и лейкоцитов определяли счетчиком крови "Ку-льтер-Каунтер", гемоглобина - гемоглобинцианидным методом (Д.И. Гольд-берг, Е.Д. Гольдберг, 1965). Влияние изучаемых препаратов на обмен веществ оценивали по следующим показателям: содержание глюкозы (мМ/л) определяли глюкозооксидазным методом с использованием наборов фирмы «LACHEMA», уровень общего белка (г/л) в сыворотке крови рефрактометрически (Ю.Б. Филипович и др., 1975); содержание холестерина (мМ/л) в сыворотке крови (М.И. Прохорова, Э.М. Туликова, 1965); активность AcAT и АлАТ в сыворотке крови по В.В. Меньшикову (В.В. Меньшиков, 1987). Влияние препаратов на систему ПОЛ-АОЗ оценивали по следующим показателям: антиокислительная активность плазмы крови - определяли методом люминолзависимой биохемилюминесценции (Г.В. Удинцев и др., 1968) на хемилюминометре БХЛ-06М (ФЭУ-80); содержание малонового диальдегида (МДА) в крови (И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977); активность глутати-онпероксидазы (ГПО) в крови (Г.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976); активность глутатионредуктазы (ГР) в крови (Т.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976); активность каталазы в крови (М.А. Королюк и др., 1988).

При проведении всех исследований животные в группах были подобраны по принципу парных аналогов по полу, возрасту и массе тела. Животные интактных, контрольных и опытных групп находились в равнозначных условиях содержания и кормления. Все полученные данные подвергали математической и статистической обработке, с определением достоверности различий между соответствующими показателями контрольных, опытных и интактных групп при помощи общепринятых методов математической статистики (Г.Ф. Лакин, 1990; С. Гланц, 1999) и прикладных программ «STATGRAPHICS», «QUATTRO PRO» на PC «Atlon 2000 ММХ».

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Физико-химические свойства олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

Олипифат - препарат, содержащий модифицированные фенольные соединения (гуминовые вещества), натрия пирофосфат 10-ти водный, натрий хлористый, воду очищенную, апирогенную. Гуминовые вещества, входящие с состав олипифата, получены путем гидролиза из природного лигнина (по-лифепана) и имеют молекулярную массу от 500 до 20 000 Дальтон (Да). Содержание гуминовых веществ 17-25 мг/мл. Жидкость темно-коричневого цвета со слабым специфическим запахом, без осадка и твердых инородных включений. При разбавлении в 10 раз прозрачен. Препарат является стерильным и применяется для внутримышечных инъекций.

Динофен - синтетическое мономерное фенольное соединение (2,6-дитрет-бутил-4-нонилфенол). Вязкая жидкость от светло-желтого до светло-коричневого цвета. Молекулярная масса - 332 Да. Хорошо растворим в органических растворителях: этаноле, хлороформе, диметилсульфоксиде. С водой до 50,0% концентрации образует устойчивую эмульсию.

Cypeгas ^отк^ш L. - сыть съедобная (чуфа, земляной миндаль) - многолетнее травянистое растение семейства осоковые - тип цветковые, класс односемядольные, подкласс чешуецветные, порядок осокоцветные. Чуфа образует прямостоячий, плотный куст, состоящий из множества укороченных вегетативных побегов с длинными линейными, килеватыми, жесткими листьями. Короткие корневищные побеги размещены в почве и образуют клубеньки овально-удлиненной формы (длина до 20-24 мм), вес сухих клубней составляет до 0,30-0,35 г. Растение содержит фенольные соединения (групп флавоноидов, лигнанов, а так же витамин Е), гликозиды (в том числе фенолг-ликозиды), эфирные масла, в основном терпеноидные, незаменимые жирные кислоты, пищевые волокна, витамины алкалоиды. Детальное изучение

фармакологических свойств Cypeгus esculentus L. проводили с использованием сухого 40,0% водно-этанольного экстракта клубней.

32. Токсикологическая характеристика олипифата, динофена и Cyperas esculentus L.

Острая токсичность олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

Изучение острой токсичности олипифата, динофена и экстракта С. es-отк^ш проведено на 360 мышах обоего пола с массой тела 20-25 г. Группы составляли по 120 мышей для каждого препарата, по 60 самцов и 60 самок.

Олипифат вводили однократно внутрибрюшинно в различных дозах из расчета по действующему веществу (ДВ).' Животным контрольных групп однократно внутрибрюшинно вводили соответствующие объемы стерильного физиологического раствора. Динофен вводили однократно внутрижелудочно через зонд в смеси с 1,0 мл вазелинового масла в различных дозах. Животным контрольных групп однократно внутрижелудочно через зонд вводили 1,0 мл вазелинового масла. Водный раствор сухого 40,0% водно-этанольного экстракта клубней С. esculentus вводили в различных дозах однократно внутрибрюшинно в объеме растворителя 0,4 мл. Животным контрольных групп однократно внутрибрюшинно вводили соответствующий объем стерильного физиологического раствора. Изучение острой токсичности препаратов проводили методом скользящих доз и оценивали по следующим параметрам: максимально переносимая доза (МПД), абсолютно смертельная доза (ЛД|оо)> доза, вызывающая гибель 50,0% животных (ЦЭ 50). Основные показатели острой токсичности олипифата, динофена и экстракта С. esculentus представлены в таблице 1.

Таким образом, олипифат относится к IV классу токсичности (малотоксичные вещества), С. esculentus - к VI классу токсичности (относительно безвредные вещества), динофен относятся к веществам IV класса опасности (малоопасные вещества).

Таблица 1.

Основные параметры острой токсичности олипифата, динофена и Cypeгus esculentus L.

Хроническая токсичность олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

Изучение хронической токсичности олипифата, динофена и экстракта С. esculentus проведено на 120 крысах самцах массой 100-120 г., по 40 животных в группе для каждого препарата.

Олипифат вводили ежедневно в течение 60 дней 1 раз в день внутримышечно в дозе 300,0 мгДВ/кг массы тела. Динофен вводили ежедневно внутрь в составе корма в суточной дозе 100,0 мг/кг и 20,0 мг/кг массы тела в течение 60 дней. Экстракт С. esculentus вводили ежедневно до кормления внутрь в 0,5 мл дистиллированной воды в дозах 100,0 мг/кг и 690,0 мг/кг в течение 60 дней. Оценивали общее клиническое состояние животных, поведенческие реакции, Изменение массы тела, по окончании опыта проводили изучение влияния препаратов на показатели общего и биохимического анализа крови.

В ходе наблюдений не было выявлено отрицательного влияния олипифата, динофена и экстракта С. esculentus во всех вышеуказанных дозах на организм животных, так как отсутствовали летальность, признаки изменения общего клинического состояния и поведения животных. Динамика массы тела на фоне длительного применения исследуемых препаратов не имела достоверных различий с контрольными группами. Установлено, что на фоне длительного применения исследуемых препаратов как гематологические, так и биохимические показатели крови во всех опытных группах существенно не отличались от контрольных и соответствовали средней видовой норме (таблица 2).

Таблица 2.

Влияние длительного применения олипифата, динофена и Cypeгus esculentus L. на основные гематологические и биохимические показатели крови крыс

Таким образом, длительное применение олипифата, динофена и экстракта С. евсЫеПш не оказывает токсического влияния на организм животных.

33. Изучение адаптогенных свойств олипифата, динофена и Cyperus esculentus L.

3.3.1. Сравнительная характеристика адаптогенной активности олипифата, динофена и Cyperus esculentus L. при остром иммобилизационном стрессе.

Оценку адаптогенных свойств олипифата, динофена и С. евеикПш проводили на модели острого иммобилизационного стресса на 60 крысах (6 групп по 10 в каждой) с массой тела 150-165 г. В качестве эталона адаптогенной активности был выбран экстракт элеутерококка. Интактную группу никаким воздействиям не подвергали. Животным контрольной группы перед проведением иммобилизации вводили стерильный физиологический раствор. Животным опытных групп вводили изучаемые препараты. Олипифат вводили в дозе 100,0 мг/кг массы тела из расчета по ДВ однократно внутримышечно за 6 часов до проведения иммобилизации. Динофен применяли ежедневно перо-рально в смеси с комбикормом из расчета 5 мг/кг массы тела в течение 30 дней до проведения опыта. Экстракты С. евеЫеПш и элеутерококка вводили однократно подкожно в дозе 10,0 мг/кг за 1 час до проведения иммобилизации.

Результаты проведенных исследований показали, что под влиянием всех изучаемых препаратов у животных опытных групп при иммобилизационном стрессе наблюдалось значительно меньшее снижение массы тела. Так, на фоне введения динофена и экстракта С. евеикПш снижение массы тела являлось на 23,8% и 25,0% меньшим по сравнению с контролем. Максимальным защитным действием обладал олипифат, предотвращение снижения массы тела составило 56,1% по отношению к контрольной группе (таблица 3).

Таблица 3.

Влияние олипифата, динофена и Сурегш евеШеПш Ь. на изменение массы

тела при остром иммобилизационном стрессе.

Масса тела Контроль Олипифат Динофен С. еБси!. Элеутерококк

До иммобилизации, г 154,1±6,3 138,7±6,4 152,1+6,2 163,6±4,2 161,9±4,9

После иммобилизации, г 142,2±4,8 132,7+4,3 143,3±4,9 154,3±5,3 152,2±6,7

Снижение массы, % 7,7 4,3 5,8 5,7 6,0

Изменение, % к контролю - 56,1 76,2 75,0 78,2

Разница с контролем, % - 43,9 23,8 25,0 21,8

На фоне введения олипифата, динофена и экстракта С. евеЫеПш наблюдалось уменьшение суммарной длины язв в 4,64, 1,87, и 2,74 раза соот-

ветственно. Наиболее выраженным влиянием на данный показатель обладали олипифат и экстракт С. esculentus, причем эффективность олипифата являлась сопоставимой с экстрактом элеутерококка, уступая последнему лишь на 0,3% (таблица 4).

Таблица 4.

Влияние олипифата, динофена и Cypeгus esculentus L. на язвообразование при остром иммобилизационном стрессе.

Показатель

Контроль

Олипифат

Динофен

С. еБси!.

Элеутерококк

Суммарная длина язв, мм % к контролю Разница с контролем, %

4,69±0,39

1,01±0,20

21,5 78,5

2,50±0,38 ***

53,4 46,6

1,71 ±0,3 8 ***

36,5 63,5

0,99±0Д2 ***

21,2 78,8

Примечание: *** - Р<0,001 -достоверность различий при сравнении показателей в опытных группах с контролем.

Гипертрофия надпочечников на фоне введения олипифата, динофена и экстракта С. esculentus являлась на 16,1%, 22,2% и 54,2% меньшей, по сравнению с контролем. Так, на фоне введения олипифата гипертрофия надпочечников составила 144,3% против 160,4% в контроле. Из всех изучаемых препаратов наибольшую эффективность проявил экстракт С. esculentus, его эффективность являлась на 1,8% меньшей по сравнению с элеутерококком, гипертрофия надпочечников у животных данной опытной группы составляла 106,2% (таблица 5).

Таблица 5.

Влияние олипифата, динофена и Cypeгus esculentus L. на изменение массы - надпочечников при остром иммобилизационном стрессе.

На фоне применения всех изучаемых препаратов у животных опытных групп наблюдалась инволюция иммунокомпетентных органов (тимуса и селезенки). Тем не менее, на фоне применения С. esculentus снижение относительной массы тимуса являлось на 30,0% меньшим, чем в контроле, что, кроме того, незначительно (на 0,1%) больше по сравнению с эффективностью

элеутерококка. Под влиянием динофена снижение относительной массы тимуса являлось на 10,0% меньшим, чем в контрольной группе. Влияние оли-пифата на данный показатель оказалось минимальным, защитный эффект составил 3,1% (таблица 6). В отношении предотвращения стрессогенной спле-ноконстрикции наибольшим положительным влиянием обладали динофен и С, esculentus, их применение обеспечило на 13,5% (на 0,5% меньше по сравнению с элеутерококком) и 3,1% меньшее снижение относительной массы селезенки при сравнении с показателями контрольной группы. Олипифат потенцировал снижение относительной массы селезенки, в данной группе животных масса селезенки на фоне иммобилизационного стресса уменьшилась на 15,7% по сравнению с аналогичным показателем в контроле (таблица 6).

Таким образом, результаты исследований, проведенных на модели острого иммобилизационного стресса, свидетельствуют, что олипифат, динофен и экстракт С. ^отк^ш обладают адаптогенными свойствами. При комплексной оценке различных показателей, установлено, что наибольшую адаптоген-ную активность проявляют олипифат (в отношении предотвращения стрессо-генного снижения массы тела и язвообразования) и С. esculentus (обладает максимальным влиянием на предотвращение гипертрофии надпочечников и инволюции тимуса). Эффективность динофена в качестве адаптогена является значительно меньшей, по сравнению с олипифатом и экстрактом С. esculentus.

Таблица 6.

Влияние олипифата, динофена и Cypeгus esculentus L. на изменение массы

Относительная масса органа Контроль Олипифат Динофен С. езси1. Элеутерококк

Изменение массы тимуса

Исходно, г/100 г 5,56±0,10 5,8±0,12 5,68±0,11 4,98±0,32 5,13±0,23

После иммобилизации, г/100 г 3,83±0,19 +++ 4,18±0,15 +++ 4,52±0,34 ++ 4,92±0,24 ** 5,07±0,25

Изменение, % к исходной 68,97 72,07 79,67 98,97 98,87

Разница с контролем, % - 3,1 10,7 -30,0 29,9

Изменение массы селезенки

Исходно, г/100 г 5,06±0,19 5,51±0,30 4,49±0,28 5,23 ±0,26 5,10±0,23

После иммобилизации, г/100 г 3,34±0,23 2,77±0,24 3,57±0,25 3,72±0,26 4,08±0Д9 *

Изменение, % к исходной 66,1 50,4 79,6 1 71,2 1 80,1 1

Разница с контролем, % - 15,7 13,5 1 5,1 ' | 14,0

Примечание- ++ - Р<0,01; -м- - Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показателей в контрольной и опытных группах с исходными показателями; * - Р<0,05, **-Р<0,01; ***- Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показателей в опытных группах с контролем.

3.3.2. Сравнительная характеристика адаптогенной активности олипифага и Сурегш еэеиТепШэ Ь. на модели принудительного плавания с грузом.

Исследование проведено на 50 самцах мышей массой тела 18-20 г, разделенных на 5 групп - интактную, контрольную и 3 опытных по 10 животных в каждой. Животным опытных групп вводили какой-либо из изучаемых препаратов - олипифат, экстракт С. esculentus, экстракт элеутерококка (выбран в качестве эталона сравнения). Олипифат вводили однократно внутримышечно в дозе 100,0 мг/кг массы тела из расчета по действующему веществу за 24 часа до проведения первой нагрузки. Экстракты С. esculentus и элеутерококка вводили однократно подкожно в дозе 10,0 мг/кг за 1 час до проведения первой нагрузки. Животным контрольной группы вводили однократно внутримышечно стерильный физиологический раствор. Интактную группу никаким воздействиям не подвергали. Проведено три нагрузки, последующие нагрузки проводились через 6 часов и 24 часа после первой.

Установлено, что при первой нагрузке выносливость животных опытных групп являлась на 28,5% (олипифат), 50,3% (С. esculentus) и 55,9% (элеутерококк) большей, чем у животных контрольной группы. Наибольшую эффективность проявили экстракты элеутерококка и С. esculentus (таблица 7).

Таблица 7.

Влияние олипифата и С. esculentus L. на выносливость мышей _при принудительном плавании с грузом._

Группы

Продолжительность плавания, сек

Степень изменения выносливости, % к контролю

Первое плавание

Контроль

228,0*8,9

100,0

Олипифат 100,0 мг/кг

292,9±10,9 ***

128,5

С. еБсиЬпШБ

342,6±15,9 ***

150,3

Элеутерококк

355,4±12,1 ***

155,9

Второе

плавание - через 6 часов после первого

Контроль

248,9±7,2

100,0

Олипифат 100,0 мг/кг

287,9^17,0 *

115,7

С. евсЫепйв Ь.

448,0±23,5 «♦♦

180,0

Элеутерококк

461,5±11,3 ***

185,4

Третье

плавание - через 24 часа после первого

Контроль

182,6±10,0

100,0

Олипифат 100,0 мг/кг

284,6±13,3 ***

155,9

С. евсЫегйш Ь.

329,б±6,9 ***

180,5

Элеутерококк

348,5±7,8 ***

190,9

Примечание. * - Р<0,05, **- Р<0,01; *** - РОДИ - достоверность различий при сравнении показателей в опытных группах с контролем.

При повторной нагрузке выносливость животных всех опытных групп так же являлась значительно большей (на 15,7%-85,4%) по сравнению с контролем. Выносливость животных на фоне применения олипифата являлась на 69,7% меньшей по отношению к экстракту элеутерококка. Заключительная нагрузка в опытных группах характеризовалась максимально высокой выносливостью при сравнении с соответствующими показателями в контрольной группе. Наибольшую эффективность так же проявили экстракты элеутерококка и С. esculentus, повышая время продолжительности плавания на 90,9% и 80,5% соответственно. Эффективность олипифата являлась достаточно выраженной (на 55,9% больше по сравнению с контролем), однако значительно меньшей, по сравнению с элеутерококком (на 35,0% меньше) и С. esculentus (на 24,6% меньше). Установлено так же, что выносливость животных на фоне применения экстрактов элеутерококка и С. esculentus являлась наибольшей при второй нагрузке и снижалась при третьей нагрузке по отношению к предыдущей. Выносливость животных на фоне влияния олипифата носила постоянный характер, практически не изменяясь при последующих нагрузках.

Таким образом, на модели принудительного плавания мышей с грузом подтверждено наличие адаптогенных свойств у олипифата и экстракта С. es-culentus. Олипифат по эффективности значительно уступает экстрактам элеутерококка и С. esculentus, тем не менее, его действие является достаточно выраженным и может характеризоваться как адаптогенное.

3.4. Изучение антиоксидантных свойств олнпифата, динофена и Cyperus esculentus L.

3.4.1. Сравнительная характеристика антирадикальных свойств олипифата, динофена и Cyperus esculentus L. in vitro на модели взаимодействия с а-дифенил-а- -пикрилгидразилом.

Антирадикальные свойства олипифата, динофена и С. esculentus изучали на модели взаимодействия с а-дифенил-СС-пикрилгидразилом (ДФПГ). Выраженность антирадикальных свойств изучаемых препаратов определяли методом хемилюминесценции по изменению оптической плотности опытных проб по отношению к контрольной, содержащей вместо раствора ДФПГ химически чистый хлороформ. В качестве эталона сравнения был выбран препарат ионол. В опытные пробы, содержащие ДФПГ, добавляли какой либо один из изучаемых препаратов - олипифат, динофен, ионол или Cyperus esculentus L. в виде растворов в эквимолярных количествах. Время реакции поэтапно увеличивали с 2 до 30 минут.

Установлено, что наибольшей скоростью реагирования с ДФПГ обладает динофен, который в течение первых двух минут обеспечивает снижение концентрации ДФПГ в 2,5 раза, превосходя ионол по эффективности в 1,7 раза. В течение 6 минут на фоне действия динофена концентрация ДФПГ снизилась на 72,6%, на фоне действия ионола - на 37,6%. Антирадикальная активность олипифата в течение первых двух минут несколько превосходила

ДФПГ, мкМ

02468 10 12 14 16 183930

Время, мин

—О—Оипифиг —СевсиЬЛа —й—Дяофен —»—Имел

Рис. 1. Сравнительная характеристика антирадикальных свойств олипифата, динофена и Сурегш евеикПш. ионол, однако являлась значительно меньшей, по сравнению с динофеном. С. евеШеПш обладает слабо выраженной антирадикальной активностью, так как скорость реагирования данного препарата с ДФПГ является низкой -через 30 минут в данной пробе прореагировало только 34,5% исходного количества ДФПГ (рисунок 1).

Таким образом, на модели взаимодействия со стабильным свободным радикалом ДФПГ, установлено, что олипифат, динофен и С. евеШеПш обладают антирадикальными свойствами. Динофен обладает более высокой скоростью взаимодействия с ДФПГ, чем ионол, превосходя по антирадикалыюй активности олипифат и С. евеШеПш.

3.4.2. Сравнительная характеристика влияния олипифата, дннофена и Cyperus esculentus L. на интенсивность ПОЛ и систему АОЗ здоровых крыс.

Исследования проведены на 50 крысах самцах массой 160 - 200 г., разделенных на 5 групп по 10 животных в каждой. Животным опытных групп вводили какой-либо из изучаемых препаратов. В качестве препарата-эталона с выраженными антиоксидантными свойствами был выбран ионол. Олипи-фат вводили из расчета 1 мкл препарата на 1 г массы тела (25 мг/кг) однократно за 24 часа до проведения декапитации. Экстракт С. евеШепШБ вводили подкожно в дозе 10,0 мг/кг массы тела ежедневно в течение 7 дней. Динофен применяли внутрь в смеси с кормом из расчета 5 мг/кг в день ежедневно в течение 30 дней. Ионол применяли внутрь в смеси с кормом из расчета 5 мг/кг в день ежедневно в течение 30 дней. Животным контрольной группы вводили соответствующий объем стерильного физиологического раствора. Определяли концентрацию МДА, ГПО, ГР, каталазы в крови.

Установлено, что концентрация МДА на фоне применения С. esculentus и динофена достоверно снижалась соответственно на 6,7% (Р<0,05) и 30,8% (Р<0,001) по сравнению с контролем, причем на фоне применения динофена данный показатель являлся на 7,7% меньшим, чем на фоне действия ионола. На фоне действия олипифата наблюдалась тенденция к повышению концентрации МДА на 6,9% (таблица 9). Применение всех изучаемых препаратов способствовало повышению активности ГПО. Эффективность олипифата и С. esculentus являлась сопоставимой с ионолом, находясь в пределах 3,7-4,6%. Наибольшее повышение активности ГПО наблюдалось при применении ди-нофена и составило 11,3%, что является достоверным (Р<0,01). Максимальное повышение активности ГР наблюдалось так же под воздействием динофена -активность ГР в данной опытной группе являлась достоверно (Р<0,001) на 40,0% большей по сравнению с контролем и на 14,0% по сравнению с ионолом. Применение олипифата и С. esculentus обеспечило повышение содержания ГР на 13,4% (Р<0,05) и 31,0% (Р<0,001) соответственно. На фоне применения динофена и ионола было выявлено снижение активности каталазы соответственно на 18,6% (Р<0,01) и 12,0% по отношению к контролю. В отличие от динофена и ионола, на фоне введения олипифата наблюдалась тенденция к повышению активности каталазы на 7,2%, а применение С. esculentus обеспечило достоверное повышение данного показателя на 20,0% (Р<0,01).

Таблица 9.

Сравнительная характеристика влияния олипифата, динофена и Сурегш esculentus L. на интенсивность ПОЛ и систему АОЗ здоровых крыс

Показатели Кон (роль Олилифат С. ежиК Динофен Ионол

Концентрация МДА, мкМ/л 1,5±0,04 1,6±0,05 1,4±0,020 * 1,0±0,02 *** 1,1±0,03 ***

МДА, % к контролю - 106,9 93,3 69,2 76,9

Активность ГПО, мкМ СвН/л минЮ3 40,4±0,81 41,9±1,10 42,2±0,91 44,9±1,17 ** 42,0±0,86

ГПО, % к контролю - 103,7 104,6 111,3 104,1

Активность ГР, мкМ ОББО/лмин 129,9±5,44 147,3±6,15 * 170,2+7,66 *** 181,8±9,37 *** 163,7+6,49 ***

ГР, % к контролю - 113,4 131,0 140,0 126,0

Активность каталазы, мкМ Н202/л мин. 45,1±1,82 48,3+1,93 54,1 ±1,92 ** 36,7+1,99 39,7±2,73

Каталаза, % к контролю - 107,2 120,0 81,4 88,0

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001 -достоверность различий при сравнении показателей в опытных группах с контролем.

Таким образом, изучение влияния исследуемых препаратов на интенсивность ПОЛ и активность системы АОЗ у здоровых животных показало, что наиболее выраженным антиоксидантным действием обладает динофен, что характеризуется снижением на фоне его применения концентрации про-

дуктов ПОЛ (МДА) и повышением активности ферментов системы АОЗ (ГПО, ГР и каталазы). Антиоксидантная активность С. esculentus является менее выраженной, по сравнению с динофёном и классическим антиоксидан-том ионолом. Олипифат не оказывает достоверного влияния на интенсивность ПОЛ и систему АОЗ здоровых животных, вызывая незначительное потенцирование свободно-радикальных процессов и соответственно активацию антиоксидантной защиты, не выходящих однако за пределы нормального функционирования здорового организма.

3.4.3. Изучение влияния олипифата на интенсивность процессов ПОЛ крови мышей при острой интоксикации аллоксаном.

Исследование проведено на 30 мышах самцах массой 18-20 г. Животные были разделены на три группы - интактную, контрольную и опытную, по 10 мышей в каждой. Животным контрольной и опытной групп вводили аллоксан в дозе 240,0 мг/кг однократно подкожно после 24-часового голодания. Животным опытной группы через 24 часа после введения аллоксана вводили олипи-фат однократно внутримышечно в дозе 10,0 мг/кг массы тела. Животных ин-тактной группы никаким воздействиям не подвергали. Животных убивали де-капитацией через сутки после инъекции аллоксана. Для исследования использовали цельную кровь. Антиоксидантную активность олипифата определяли по интенсивности процессов ПОЛ в гемолизате крови методом люминолзави-симой индуцированной биохемилюминесценции. Интенсивность свечения опытных проб сравнивали с контрольной пробой, содержащей вместо органического субстрата бидистиллированную воду, и определяли антиокислительные свойства крови - антиокислительную активность - по разнице между светосуммой хемилюминесценции контрольной пробы (образца без добавления плазмы крови) и опытной пробы (с добавлением плазмы крови).

Таблица 8.

Влияние олипифата на антиокислительную активность крови

белых мышей при острой аллоксановой интоксикации.

Группа Интакт Контроль Олипифат

ДБ.тУ 31,6±0,80 21,2±0,99 +++ 33,7±1,02 ***

% к контролю 149,0 - 159,0

% к интакту - 67,1 106,6

Примечание: - Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показагелей опытных групп с контролем; +++ - Р<0,001 - достоверность различий показателей при сравнении показателей с интактом.

Установлено, что на фоне острой интоксикации аллоксаном у животных контрольной группы антиокислительная активность крови достоверно (Р<0,001) снижается на 32,9% по сравнению со здоровыми животными (группа интакт). Введение олипифата обеспечивает повышение антиокислительной активности крови как по отношению к контролю - на 59,0% (Р<0,001), так и по отношению к здоровым животным - на 6,6% (таблица 8).

Таким образом, в условиях повышения интенсивности процессов ПОЛ, вызываемых аллоксаном, олипифат проявляет выраженные антиоксидантные свойства, что характеризуется повышением антиокислительной активности крови животных.

3.5. Изучение антидиабетических свойств олипифата и Сурегш еэсШепШэ Ь.

3.5.1. Изучение антидиабетических свойств олипифата на модели стрептозотоцинового сахарного диабета.

Исследование проведено на 50 самцах крыс линии """^г. Животные были разделены на 5 групп по 10 в каждой. Животным контрольной группы вводили стрептозотоцин внутрибрюшинно, в разовой дозе 30,0 мг/кг, трехкратно с интервалом 24 часа. Животным опытных групп вводили олипифат однократно внутримышечно в дозах 1,0, 10,0 и 100,0 мг/кг массы тела, на 4-й день после первого введения стрептозотоцина. Длительность наблюдений составляла 14 дней. На фоне введения стрептозотоцина в указанной дозе, гибели животных не наблюдалось, статистически значимых изменений массы тела не было выявлено как в контрольной, так и в опытных группах. Критериями оценки опыта являлись изменение концентрации глюкозы за период наблюдений и динамика гликемии при проведении глюкозотолерантного теста. Глюкозотолерантный тест проводили на 11-й день от начала эксперимента в контрольной и опытных группах по вышеописанной методике.

Установлено, что олипифат в дозе 1,0 мг/кг на 4-й день обеспечивает в 1,5 раза (Р<0,01) меньший уровень гликемии, чем в контроле. Тенденция к нормализации гликемии в данной группе выявлена начиная с 10-го дня - концентрация глюкозы составляла 7,0+0,51 мМ/л против 11,0±1,45 мМ/л в контроле, на 12-й день - в 1,4 раза (Р<0,05) меньший уровень гликемии по сравнению с контрольной группой (таблица 10).

Таблица 10.

Влияние олипифата на динамику гликемии

при стрептозотоциновом сахарном диабете.__

Время, дни Группы

Контроль Олипифат 1,0 Олипифат 10,0 Олипифат 100,0

3 22,8±2,45 17,0+2,24 25,0+2,11 28,8+0,82*

4 24,6±2,10 15,7+1,40** 22,7+1,92 28,3+0,59

5 17,0+2,11 17,3+1,73 34,4+4,01 21,0+1,10

6 18,6±1,99 14,3+1,15* 19,8+1,20 28,3+1,21***

8 16,2±2,02 15,2+1,71 19,2+0,91 8,7+0,27***

10 11,0+1,45 7,0+0,51** 6,6+2,19 13,3+0,63 V .

12 7,8+0,85 5,4+0,50* 7,8+0,31 12,0+3,28

14 7,0+0,58 6,0+0,40 12,2+3,10 12,1+2,86

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01, *** - Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показателей в опытных группах с контролем

Олипифат в дозе 10,0 мг/кг за период наблюдений не оказывал достоверного влияния на концентрацию глюкозы крови. Тем не менее, следует отметить, что на 10-й день наблюдений гликемия в данной группе составила 6,б±2,19 мМ/л и являлась в 1,6 меньшей по сравнению с контролем, однако данные изменения не являлись достоверными.

На фоне применения олипифата в дозе 100,0 мг/кг за период с 3-го по 6-й день отмечалась тенденция к возрастанию уровня гликемии относительно контрольной группы, так на 3-й и 6-й день гипергликемия была соответственно в 1,2 раза и 1,5 раза выше, чем в контрольной группе. Однако, на 8-й день концентрация глюкозы в данной группе являлась в 1,8 раза (Р<0,001) меньшей, чем в контроле. В течение дальнейшего периода наблюдений значимой положительной динамики гликемии в данной группе не было выявлено.

Таким образом, на модели стрептозотоцинового сахарного диабета установлено, что олипифат обладает антидиабетической активностью, о чем свидетельствует тенденция к более ранней нормализации гликемии в течение периода наблюдений. Наиболее эффективной следует считать дозу 1,0 мг/кг при введении олипифата на 4-й день после первого введения стрептозотоцина.

3.5.2. Сравнительная характеристика антидиабетической активности олипифата и Сурегш еэси1еП:и8 Ь. при аллоксановом сахарном диабете.

Исследование проведено на 40 самцах крыс с массой тела 160 - 200 г. Животные были разделены на 4 группы по 10 животных в каждой. Сахарный диабет воспроизводили путем введения аллоксана подкожно однократно после 24-часового голодания в дозе 130,0 мг/кг. Животных интактной группы никаким воздействиям не подвергали. Животным опытных групп за 24 часа до введения аллоксана вводили олипифат (в дозе 1,0 мг/кг) или экстракт С. esculentus (в дозе 10,0 мг/кг). Контрольным животным вводили подкожно однократно соответствующие объемы стерильного физиологического раствора. Длительность наблюдения - 14 дней. Критериями оценки антидиабетической активности препаратов являлась динамика концентрации глюкозы крови за период наблюдений. На фоне введения аллоксана в указанной дозе, гибели животных в контрольной и опытных группах не наблюдалось.

Установлено, что в опытных группах начиная с 3-го дня наблюдений наблюдался более низкий уровень гликемии, чем в контрольной группе - на фоне действия олипифата гликемия являлась в 1,7 раза более низкой, чем в контроле, для С. esculentus данный показатель являлся в 1,4 раза меньшим по сравнению с контрольной группой (таблица 11).

Введение олипифата начиная с 5-го дня наблюдений обеспечило стабильное снижение концентрации глюкозы, сохранявшееся в течение всего последующего периода - гликемия колебалась в пределах от 3,7±0,44 мМ/л до 5,9±1,27 мМ/л. Наибольший защитный эффект олипифата, выражающаяся в виде разницы с контролем, проявлялся на 8-й день и составил 72,68%. Введение С. esculentus так же обеспечивало значительно более низкий уровень гликемии. В течение всего периода наблюдений концентрация глюкозы у

животных данной опытной группы не превышала мМ/л, тогда как в

контрольной группе максимальная гипергликемия составила мМ/л.

Максимальная эффективность действия С. esculentus (разница с контролем) составила 28,95% (на 3-й день наблюдений).

Таблица 11.

Сравнительная характеристика антидиабетических свойств олипифата и Cvpeшs esculentus L. при аллоксановом диабете._

Концентрация глюкозы

Дни

Йнтакт

Контроль

С. езсикпйк

мМ/л

% к контролю

Олипифат

мМ/л

4,8±0,27

18,9±1,56

13,4±1,9

71,05

10,9±1,57

+++ **

5,1±0,35

17,4±1,14

12,8±1,6 +++ *

73,94

7,1±1,47 ***

4,9±0,25

15,2±1,06

11,5±3,6

+++ *

76,00

5,9±1,2г ***

4,3 ±0,34

, 13,5±1,37 +

10,3±1,1

76,74

ц4,3±0,47 ***

4,7±0,44

14,9±1,36

11,6*2,7

+

77,92

3,7±0,44 ***

10

4,9+0,28

12,8±1,29

+++

11,9±1,5

93,10

4,7±037 ***

'12

4,8±0Д6

,12,1±иб

11,8±2,6

98,07 '

4,7±0,35 ***

14

4,5±0,27

8,7±0,26

8,5±1,0

97,95

5,0±0,36

Примечание + - Р<0,05, ++ - Р<0,01, +++ - Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показателей контрольных и опытных групп с ицтактом, * - Р<0»05, ** - Р-$0,01, *** - Р<0,001 - достоверность различий показателей опытных групп с контролем

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что олипифат и С. евсикПш проявляют антидиабетические свойства, причем на модели аллоксанового диабета олипифат обладает большей эффективностью по сравнению с С. esculentus.

3.53. Сравнительная характеристика влияния олипифата и Сурегиэ е8си1еПи Ь. на динамику концентрации глюкозы крови при проведении глюкозотолерантного теста на здоровых животных.

Исследование проведено на 30 здоровых крысах самцах с массой тела 210-230 г. - 1 контрольная и 2 опытных группы по 10 крыс в каждой. Животным первой опытной группы вводили олипифат в дозе 1,0 мг/кг массы тела однократно внутримышечно за 24 часа до измерения исходной гликемии и проведения ГТТ. Животным второй опытной группы вводили экстракт С. es-

сЫеПш однократно подкожно в дозе 10,0 мг/кг массы тела за 90 минут до измерения исходной концентрации глюкозы и проведения П Т. Животным контрольной группы предварительно вводили соответствующий объем стерильного физиологического раствора. Предварительно крысы были подвергнуты пищевой депривации в течение 12 часов при свободном доступе к воде.

" В результате проведенного исследования установлено, что на фоне предварительного введения экстракта С. esculentus у животных данной опытной группы наблюдалось достоверное (Р<0,001) снижение исходной концентрации глюкозы на 36,0% по сравнению с контролем. Олипифат не оказывал влияния на концентрацию глюкозы при ее измерении через 24 часа после введения препарата (исходный уровень). При проведении ГТТ введение экстракта С. esculentus обеспечивало достоверное снижение гликемии - через 30 минут на 303% (Р<0,01), через 60 минут на 18,8% (Р<0,05) по сравнению с контролем. Введение олипифата не отразилось положительно на динамике гликемии в течение первых 30 минут. На фоне влияния олипифата значимое снижение концентрации глюкозы было выявлено только через 60 минут, причем его гипогликемизирующее действие являлось на 8,7% более выраженным, по сравнению с С. esculentus/ На момент окончания ГТТ в контрольной и опытных группах не было выявлено достоверных различий в концентрации глюкозы крови, гликемия составила соответственно 5,7, 4,7 и 5,0 мМ/л (таблица 13).

Таблица 13.

Сравнительная характеристика влияния олипифата и Сурегш евси1еПш L. на динамику концентрации глюкозы при ГТТ на здоровых животных.

Примечание: * - Р<0,05, ** - Р<0,01; *** - Р<0,001 - достоверность различий при сравнении показа гелей в опытных группах с контролем.

Таким образом, установлено, что олипифат, в отличие от С. евсикПш не обладает непосредственным гипогликемизирующим действием при введении здоровым животным, а при проведении глюкозотолерантного теста оли-пифат значительно уступает экстракту С. esculentus по выраженности гипог-ликемизирующей активности.

4. ВЫВОДЫ

1. Фенол-содержащие препараты олипифат, динофен и Сурегш esculentus L. являются малотоксичными: олипифат относится к IV классу токсичности (малотоксичные вещества), Сурегш esculentus L. - к VI классу токсичности (относительно безвредные вещества), динофен относятся к веществам IV класса опасности (малоопасные вещества).

2. Олипифат, динофен и экстракт Сурегш esculentus L. обладают адаптоген-ными свойствами. Адаптогенная активность олипифата является наиболее выраженной при применении в дозе 100,0 мг/кг массы тела из расчета по действующему веществу (гуминовым веществам).

3. Эффективность олипифата и Сурегш esculentus L. в качестве адаптоген-ных препаратов на модели иммобилизационного стресса является сопоставимой, динофен уступает данным препаратам по выраженности адапто-генных свойств. На модели принудительного плавания мышей с грузом адаптогенные свойства олипифата являются менее выраженными по сравнению с экстрактом Сурегш esculentus L.

4. Олипифат, динофен и экстракт Сурегш esculentus L. проявляют антиокси-дантные свойства. Наибольшим антиоксидантным действием обладает динофен. Олипифат, в отличие от динофена и Сурегш esculentus L., не оказывает влияния на систему ПОЛ-АОЗ у здоровых животных, но проявляет выраженные антиоксидантные свойства при патологии, и, таким образом, антиоксидантную активность олипифата следует характеризовать как модулирующую.

5. Олипифат и экстракт Сурегш esculentus L. оказывают антидиабетический эффект на экспериментальных моделях сахарного диабета. Антидиабетические свойства олипифата являются максимальными при дозе 1,0 мг/кг. Эффективность олипифата в качестве антидиабетического средства при ал-локсановом диабете является более выраженной, чем при стрептозотоцино-вом диабете. Олипифат превосходит экстракт Сурегш esculentus L. по эффективности на модели аллоксанового диабета.

6. Олипифат, в отличие от Сурегш esculentus L., не обладает непосредственными гипогликемизирующими свойствами. Антидиабетический эффект олипифата, таким образом, вероятно, связан с его адаптогенной и антиок-сидантной активностью

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Необходимо проведение клинических испытаний фенол-содержащих препаратов - олипифата, динофена и Сурегш esculentus L. в качестве адапто-генов, антиоксидантов и средств, применяемых в составе комплексной терапии сахарного диабета.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Адаптоген-стресс корректор [текст]/Ю.Н. Чернов, B.C. Бузлама, И.Б. Ушаков, Ю.В. Водолазский, Д.В. Золотарев, О.А Мубаракшина, А.В. Бузлама, Е.Л. Карпова, С.К. Солдатов, С.Н. Радченко. Патент на изобретение РФ№ 2176516,2001.-8 с.

2. Адаптогенная стресс-корректорная активность олипифата и ее механизмы [текст]/В.С. Бузлама, Ю.В. Водолазский, Б.Л. Жаркой, А.В. Бузлама, МА. Луцкий, М.И. Редкий // Опыт доклинического исследования на примере олипифата / под ред. В.А. Филова, A.M. Берковича. - СПб.: Ника, 2002. -С. 109-145.

3. Антидиабетическое средство [текст]/Ю.Н.Чернов, B.C. Бузлама, О.А. Му-баракшина, Ю.В. Водолазский, Б.Л. Жаркой, А.В. Бузлама. Патент на изобретение РФ № 2197259,2003. - 8 с.

4. Антидиабетическое средство [текст]/Ю.Н.Чернов, B.C. Бузлама, О.А. Мубаракшина, Ю.В. Водолазский, Б.Л. Жаркой, Е.Л. Карпова, А.Б. Бузлама Патент на изобретение РФ № 2195300,2002. - 8 с.

5. Антиоксидант [текст]/В.С. Бузлама, АБ. Бузлама, Л.Д. Кудрявцев, А.Б. Мо-лодыка, В.А. Привалов, А.В. Гусев, В.Е. Ударов. Патент на изобретение РФ №2141316, 1999.-14с.

6. Бузлама, А.В. Олипифат - новое перспективное средство против сахарного диабета [текст]/А.В. Бузлама // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: V Международный съезд, Санкт-Петербург - Петродворец, 5-7 июля 2001 г.: сб. науч. тр.-СПб., 2001.- С. 195-198.

7. Бузлама, А.В. Эффективность препарата БАВ-01 при экспериментальном сахарном диабете [текст]/АБ. Бузлама //Современные проблемы клинической и экспериментальной медицины: сб. науч. тр. - Воронеж, 2001.- С. 6.

8. Бузлама, А.В. Оценка антидиабетических свойств олипифата [текст]/А.В. Бузлама, Ю.Н. Чернов // Опыт доклинического исследования на примере олипифата / под ред. ВА. Филова, A.M. Берковича. - СПб.: Ника, 2002. -С.200-205.

9. Бузлама, А.В. Изучение антиоксидантной активности динофена /АБ. Бузлама [текст]//Перспективы развития теоретической и практической медицины: сб. науч. тр. - Воронеж: Истоки, 2003. - С. 27-29.

10.Бузлама, А.В. Сравнительная характеристика антиоксидантного действия олипифата и динофена [текст]/А.В. Бузлама //Новые технологии в биологии и медицине: сб. науч. тр. - Воронеж, 2004. - С. 23-25.

11.Бузлама, B.C. Олипифат - адаптогенные, стресс-корректорные и антидиабетические свойства [текст]/В.С. Бузлама, A.M. Беркович, А.В. Бузлама // Отечественные противоопухолевые препараты: Всеросс. научно-практическая конференция: сб. науч. тр. - М., ООО «Лигфарм», РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 2002. - С. 39-57.

12.Воспроизведение модели аллоксанового диабета у крыс для последующего изучения возможностей фармакотерапии [текст]/Д.В. Золотарев, ОА.

Мубаракшина, Ю.В. Водолазский, А.В. Бузлама //Теоретические и клинические проблемы медицины сб. науч. тр. - Воронеж, 2000. - С. 5-6.

13 Способ профилактики и терапии сахарного диабета [текст]/А.М. Беркович, Ю.Н. Чернов, АБ. Бузлама, B.C. Бузлама. Приоритетная справка от 15.04.2003, № 2003110637. -19 с.

14.Чернов, Ю Н. Сравнительная характеристика антидиабетического действия олипифата при аллоксановом и стрептозотоциновом диабете [текст]/Ю.Н. Чернов, А.В. Бузлама // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: V Международный съезд, Санкт-Петербург - Петродворец, 5-7 июля 2001 г,: сб. науч. тр.-СПб., 2001,-С. 301-303.

15.Чернов, Ю.Н. Полифенольные соединения: структура, свойства и прикладные аспекты применения [текст]/Ю.Н. Чернов, А.В. Бузлама, Ю.М. Дронова //Фарматека - 2004. -№8. - С. 43-48.

Зак. № 5,2005 г., т. 100 экз. Объем 1,0 п.л.

Отпечатано в издательстве «Кварта» с готовых оригиналов. (0732) 75-55-44

f r.

/ s,

[ 3 *

2 ?••;■? 2"\i c • ' i L «vtí r"