Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Состояние сурфактантной системы легких плода при экспериментальном сахарном диабете у беременных

; ' На правах рукописи

- 5 МАЯ Ш-

КОВАЛЕНКО Людмила Васильевна

СОСТОЯНИЕ СУРФАКТАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКИХ ПЛОДА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ У БЕРЕМЕННЫХ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинскихнаук

Москва - 1997

Работа выполнена

на кафедре патофизиологии Карагандинского государственного медицинского института

<—

Научные консулыпагти:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАЕН

И. А. Серебровская Л. К. Романова

Официальные оппоненты:

доктор биологических^наук, профессор В. А. Сафонов

доктор медицинских наук,, профессор В. В. Ерохин

доктор медицинских наук, профессор В. И. Кандрор

Ведущее учреждение:

.Московская медицинская академия им

И. М. Сеченова

Защита диссертации состоится 997г. ' в часов

на заседании Диссертационного совета Д 001.03.03 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Москва, ул. Балтийская, 8)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Автореферат разослан ^ОуЬ^ЧЗ^. 1997г.

•Ученый секретарь Диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Л. Н. Скуратовская

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД - альЕеолоциты

БАС - брогого-альвеолярный ашз

КРИ - шыунореэкгивный инсулин

ИС - индекс стабильности

КС - коэффициент стабильности

Ж - легочный коэффициент

ЛС - легочный сурфазстанг

ПАВ - поверхностно-активные вещества

ПАС - аозэрхностно-активные СЕОКСтза

ПН - поверхностное натяжение

ППМ - показатель поляризационной микроскопии

РДО - ресшфаторнш! дистресс-синдром

СДР - синдром дыхательных расстройств

СОЛ - сурфактантнал система лэпих

ТСХ - тонкослойная хроматография

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕШ. В настоящее время синдром дыхательных расстройств (СДР) новорожденных, обусловленный дефицитом или инактивацией легочных сурфактаитов, занимает одно из центральных мест в перинатальной медицине (Н.Е.Бубнова, 1990; И.Ю.Гордиенко с соазт., 1990; Г.М.Дементьева, 1933; A.Jobe, 1988; 1931; C.Mendelson, V.Boggaram, 1991; Г'.К.Зымануилидис, Б.Г.Байлен, 1994; Д.Моррей, 1995). По данным международной статистики СДР является причиной перинатальной смертности в 10-15Х случаев и в 25-35% - гибели новорожденных. Несмотря на многочисленные, исследования но изучению механизмов развития СДР, проводимые в различных лабораториях, проблема гормональной регуляции синтеза и секреции поверхностно-активных веществ легких остается во многом еще малоизученной.

История исследования этого вопроса непродолжительна, а потому роль изменений гормонального статуса в образовании легочного сурфактанта ври эндокринных расстройствах остается недостаточно ясной.

Новорожденные больных' диабетом женщин - имеют в S3 раза больший риск возникновения зтой тяжелой дыхательной патологии независимо от срока беременности и характера родоразрешения, чем новорожденные здоровых женщин (M.Robert et al., 1982). До ары открытия инсулина 65£ случаев беременности, осложненной диабетом, заканчивались перинатальной гибель» и в 30% Был риск материнской смертности (V.F.Bsrss, 1989), но и сейчас смертность таких новорожденных остается стабильно высокой (Г.М.Дементьева, 1993; E.A.Reece et ai., 1938; Y.Lasaran-Vague, 1990).

Одной из предполагаемых причин более частого Еознхкнове-ния СДР у новорожденных при материнском диабете является угнетающее действие на синтез сурфактанта в легких плода избытка инсулина, который вследствие гипергджемш усиленно секрэтиру-ется его псдаелудочвой жедегой (М.Robert et al., 1982; C.Mendelson, V.Boggarsn, ■19?ü;1991). Одпако роль глдеринсулкя-еыии, равно как: и других метаболических сдвнгов, свойственных диабету у беременных, в нарушении формирования сурйаегантяой системы легких (ССЛ) плода остается до конца ее Еыяснехной.

Конкретные регуляториые механизмы процессов синтеза и

секреции легочных сурфактантов в алъвеолоцитах II типа (АЦ II йота ) могут быть объяснены лишь с позиции современных пред-■ ставлент-й об универсальных мессещжерных путях регуляции биологической активности клеток (ОЛтагЬиг1оп а1., 1989; Ь.В.ВоЬЬз еЬ а!., 1991; М.&1ене еЬ а1., 1991; Т.НааешасЬег еЬ з1., 1994).

Существенный практический интерес для клиники представляет проблема поиска своевременных и безопасных приемов диагностики зрелости СОЛ плода. Не менее актуальной для клиники является задача использования эффективных и безвредных средств, способствущих пополнению легочного оурфэетанта при его дефи-' ните или ИН2КТИВЗШ1И, а также ускоряющих процесс созревания легких плода з антенатальном периоде при недоношенной и осложненной беременности. Столь важные для клзшическай перикзтоло-гии вопросы пока нельзя считать достаточно разработанными.

Наиболее подходящей модель» для подобных исследований является легкое плодов животных различных сроков гостацик.

II ЗАДАЧИ ШЙВДОЗДШЗ!. Основной цельо работа явилось научение в эксперименте влияния гипергликемии и гкперинсулкн-еиии з механизме нарушения созрэвапкя сурфгктгнтной система легких плода при диабете у матери а разработка патогенетически обоснованных методов его коррекция.

В соответствии с этим были поставлены следухщиэ задачи:

1. Изучить состояние ССЛ плода и определить показатели Фосфсинозятадного сбыена в легких при экспериментальных моделях сахарного диабета разной тяжести течения у беременных.

2. Исследовать влияние гипергликешш и гкперинсулинеыии разной интенсивности на состояние ССЛ и содержание полифосфо-янозитэдоз в легких плода.

3. Определить характер воздействия кетоновых тел ка функ- . циоЕальвуо активность легочных сурфактантов плода и возможность участия глюкозы крови в образовании внутрилегочных липи-дов.

4. Выяснить роль гипогликемии и гиперинсулинемии в. изменении состояния ССЛ плода и компонентов фосфоинозитидной системы легких.

..." 4 ~ ■ .

5. Исследовать влияние инсулина на состояние ССЛ плода через изменение активности аденилатциклааного и фосфоияозктид-ного путей передачи сигнала в клетку. Показать взаимосвязь между созреванием ССЛ плода и компонентами полифосфоинозитидов в легких.

6. Выявить взаимосвязь между состоянием ССЛ плода и изменением содержания миоинозита в амниотической жидкости и брон-хо-альвеолярных смывах.

7. Разработать в эксперименте условия, ускоряющие и нормализующие функции ССЛ плода при сахарном диабете у беременных.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ШСЭД02АШШ. Настояпря работа представляет собой одно из первых экспериментальных исследований, в котором детально анализируется роль инсулина в задержке созревания ССЛ плода при диабете у беременных с позиций современных представлений об универсальных мессеяджэрных путях регуляции биологической активности клеток всех тканей организма.

В работе впервые показана функциональная взаимосвязь между состоянием ССЛ плода и компонентами фосфоннозитидного обмена в легких при изменениях- глакозо-изсулинового статуса плода, ■• обусловленного материнским диабетом. Установлено, что при диабете разной тяжести течения изменение состояния ССЛ плода носит разнонаправленный характер. Впервые показано, что миоино-аит, в избытке определяемый в крови у плода при сахарном диабете у беременных, оказывает стимулирузщее воздействие на ССЛ, в то время как инсулин тормозит этот стимулирующий аффект. Получены новые данные о тем, что замедление созревания ССЛ плода при диабете у матери во многом определяется изменением показателей фосфоикозитидного обмена в легких.

Впервые.представлена детальная характеристика состояния ССЛ плода при возможных вариантах его глгоозо-инсулинового статуса в условиях некомпенсированного диабета у матери.

Впервые показана взаимосвязь иезду поверхностно-активными свойствами легочных .сурфзктангов плода и содервазаем миоинозита в околоплодных водах и бронхо-альвеолярных огивах.

Впервые показано благоприятное воздействие на ССЛ плода нифедипина, эссенциале и адзнозин- 5 * - трифосфата. Впершэ отмечен норыадизущий аффект эооенцаале и £&еноэда-5'-трЕфосфата

- S -

на наруиенный в условиях диабета у беременных процесс созревания ССЛ плода.

Экспериментально доказано, что наиболее действенным путем восстановления нарушенного функционального состояния ССЛ плода при диабете у матери является нормализация углеводного обмена до зачатия и во время беременности.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ОНАЧЯШЯЬ РАБОТЫ. Результаты выполненной работы позволили обосвозать ранее не известные механизмы задержи созревания СОЛ плода при диабете у матери, обусловленные, изменением активности фосфоинозитццвой мессенд-яерной системы внутриклеточной сигнализации.

В эксперимента показано, что реактивная гиперинсулинемия у пледа, связанная с диабетом у беременной, тормозит распад полифосфоиЕозитидов, следствием чего является функциональная и биохимическая незрелость ССЛ. Избыток инсулина подавляет также стимулирущкй аффект миоинозита - основного предшественника биосинтеза фосфсинозитндоз - на продукция легочных сурфактантов.

Результаты проведенного исследования имеют значение не только для понимания механизмов развития СДР у новорожденных при диабете у матери. Они мотут' послужить основой для применения в перинатологии патогенетической гералкл задержки созревания ССЛ плода. Использование доступных и безопасных биологических соединений позволяет надеяться на широкое их применение в клинической практике. Использованные в работе подходы к патогенетически обоснованной терапии ускорения "и нормализации процесса созревания ССЛ плода могут быть применены для разработки терапии друпк форм патслохчш СОЛ новорожденных.

В процессе изучения" взаимосвязи между функциональной и биохимической зрелостью СОЯ плода и содержанием миоинозитз показано, что в ходе' гестационного развитая нарастглт ПАС легких плода и содержание ыиоинезнта в его кроги и амниотической жидкости. К моменту роэдеша и сразу после него количество этого шестиатомного спирта резко снижается.' В то ке' время нами полу- ' чены данные о том, - что при диабете у беременной, когда биохимическое' и функциональное созреваете CCI шюда замедлено, количество шоивозита не только не снижается к концу гестационного развития, но и продолжает нарастать. Это позволяет реко-

- б -

уендовать метод определения количества миоинозята в околоплодных водах в качестве диагностического теста для установления зрелости ССЛ плода.

Полученные нами конкретные данные, касащиеся участия при определенном гормональном дисбалансе нарушений мессендаернкх механизмов регуляции функций АД II типа в развитии тяжелой перинатальной дыхательной патологии, позволявт привлечь внимание исследователей к разработке аналогичных механизмов других видов патологии. В научной литературе, особенно з клинической, подобные патогенетические пути почти не находят отражения, тогда как их знание и использование могли бы иметь существенное практическое значение. В этом, как нам представляется, можно усмотреть в более широком плане научно- практическую значимость представленного исследования.

Данные диссертационного исследования могут быть использованы при чтении лекций на кафедрах патофизиологии, эндокринологии и перикатологш медицинских вузов. По материалам,диссертации изданы 6 информационных листков ЦНТК, оформлено одно рационализаторское предложение, выпущены методические рекомендации "Патогенез и профилактика нарушений развития сурфактантной системы легких плода при диабете у матери", которые используются в учебном процессе и учитываются в практической работе в Карагандинском и Акмолинском медицинских институтах.

П010ШШ, ШШСШЕ НА ЗАЦИГУ:

1. Разнонаправленный характер изменения состояния ССЛ плода при диабете у матери определяется тяжестью заболевания, изменением глюкозо-шсулиаового статуса плода и свойственным некомпенсированному диабету повышенным уровнем кетоновых тел в крови.

2. Инсулин подавляет функциональные свойства легочных ПАВ путем воздействия на вещества, регулирущка -жгиьвость адеик-латциклазЕой. и фосфслнозетидаой мэссэндк&ршх систем.

3.' Сюезрекэнная нормализация углеводного обмана до зачатия и во вре>*л беременности, а также применение ко-лщованвш. нами зссенциале, шз^едшшна, аденозин-Б'-трг^есфаха, воедэй-ствуглих на базисные механизмы нарушили созревания ССЛ плода при ослолнаннон сахарнш диабетом беременности, являются паго-

генетически обоснованными методами предупреждения риска возникновения СДР новорожденных.

• АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты проведенной работы были доложены и обсуждены на III Всесоюзном съезде патофизиологов (Тбилиси, 1982), . I Всесоюзном конкурсе молодых патофизиологов (Москва, 1984), Республиканской научно-практической конференции эндокринологов (Душанбе, 1989), III Всесоюзном съезде эндокринологов (Ташкент, 1939), IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989), I-IV научно-практических конференциях "Сурфактаятная и антисурфакгантная система легких" (Харьков, 1939, 1990; Ялта, 1991, 1992), I Объединенном Интернациональном конгрессе патофизиологов (Москва, 1991), Всесоюзной конференции по клинической витаминологии (Москва, 1991), на I и II конгрессах диабетологов Центральной Азии (АлматАта, 1994; Ташкент, 1996), 2-м симпозиуме "Неинвазивные методы диагностики"' (Москва, 1995), I и II конференциях эндокринологов Центрального Казахстана (Караганда, 1996, 1997), III Региональном конгрессе педиатров Центральной Азии и Турции с международным участием (Алма-Ата, 1995), I Российском конгрессе по патофизиологии с международным'участием (Москва, 199В);

СТРЖОТА И ШэЬЕИ Д8ССЕРГАЦЙН. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 6 глав собственных исследований', обсуждения результатов, выводов, указателя литературы. Работа излажена на 272 страницах, содержит 27 рисунков и 51 таблицу.. Список литературы включает 411 источников, из которых "110 опубликовано в отечественных и 301 в зарубежных изданиях.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В хронических опытах было использовано 6207 плодов 723 беременных крыс, 112 плодов 20 беременных крольчих, 131 взрослая крыса. В качестве контроля использовали 2042 швда 234 бе-

ременных крыс, 54 плода 9 беременных крольчих и 30 взрослых небеременных крыс.

Исходная масса небеременных крыс составляла 180-200 г, кроликов - 2,8-3,5 кг.

Животных содержали в виварии на стандартном лабораторном рационе при температуре окрукгащэй среды 18-20°С.

Было проведено 6 серии основных опытов, перечень которых представлен в таблице 1.

Воспроизведение экспериментальной патологии, • другие методы воздействия

Для получения алдаясансшага дкабата голодавшим з течение 24 ч крысам-самкам аллвшкш вводили в бедренную иену в дозе 40-50 мг/кг в виде 4%-ного водного раствора. Сирептоао-хофш также после 24-часового голодания вводили медленно в бедренную вену из расчета 30-40 ыг/кг. Возникавший у яивотвых диабет квалифицирован как тяжелый при колебаниях уровня глюкозы в крови от 15,8 до 25,5 мыоль/л, как диабет средней тягкести -•при уровне глюкозы от 8,8 до 16,5 -ммолъ/л. Выраженной и умеренной гипергликемив мы считали при колебаниях содержания глв-козы в крови соответственно от 17,7 до 24,4 шаль/л и от 9,3 до 10,7 ммоль/л (при норме 3,3-5,5 ммоль/д). ПсетгшякреЕззкто-ннческую модель диабета получали путем субтаггльнЕй регакгрш поджелудочной кадеза (й.Когес, 1967). Оиерацвэ выполняли под эфирным наркозом после лшения шшщ на 24 ч. ^яззоасшй диабет у предварительно голодавших в течение 24 ч крольчих вызывали на 2-й дань после спаривания путем внутривенного введения водно-агелиачного раствора дитизона рН 7,2-7,4 из расчета 35-40 мг/кг.

Квд&Еированкэ разкмкян Барйаятап глгзкозо-кнсулинозого статуса и других сопутстБузашдх дкабэ?у цегвЗолшоскж сдвигпз гомеостаза стало еозш;хнш благодаря разработке игла! оригинального устройства для 'длительной внутривенной щйуэш редкостей необездмкенньгм ашвостыа СЛ.В. Коваленко, Е.Н.Вахрушаз, 1984). Оно дозволяет в течение нескольких суток шддарешшть необходимую концентрации вещества в' крскш.

Благодаря кепрерщшсыу аведеиио в чеченке трек суток 40%-

Таблица 1

СЕРИИ ОПЫТОВ

Число

Цеди эксперимента плодов (пометов)

2

I. Влияние изменении глшозо-инсулшювого ста-

туса к других метаболических сдвигов при

экспериментальном сахарном диабете на со-

стояние ССЛ и .обмен шляфосфсинозит'идоз у

взрослых крыс? и плодов.

1. Гиперглшхемия и гипоинсулинемия у взрос-

лых крыс:

а) аллоксановый диабет п - 43

- б) стрептозотоциновкй диабет п - 43

Контроль п - 30

2. Гкперглакемия, гипер- и гипоинсудинеыиа

у плодов крыс при диабете разной степе-

ни тяжести у матери:

а) умеренный ..аллоксановый диабет 400. (49)

б) тямеднй аллоксановый диабет 193 (20)

в) умеренный стрептозотоциновый диа-

бет 192 (19)

г) умеренный постпанкреатэктомнческий

диабет 184 (18)

Контроль 437 (53)

3. Введение LigCDa больным диабетом бере-

менным крысам:

а) умеренный аллоксановый диабет 76 (Ю)

б) умеренный аллоксановый диабет

4 LÍ2CQ3 84 (Ю)

в) тяжелый аллоксановый диабет 75 (Ю)

г) тяжелый аллоксановый диабет

V.LÍ2CO3 " 72 (9)

п - число животных-

1 2'

4. Введение 14С-г.еокозы беременным крысам:

а) умеренный аллоксановый диабет 41 (5)

6} тяжелый аллоксановый диабет 33 (5)

Контроль 51 (6)

5. Влияние кетоновых тел на состояние ССЛ

плода после непрерывного введения в те-

чение трех суток внутривенно беременной:

а) адетоуксусной кислоты 104 (13)

б) в-гидрооксимасляной кислоты 90 (11).

в) ацетона 87 (11)

Контроль - введение стерильной дистилли-

рованной воды 82 (10)

II. Влияние умеренной и вырааеиной гилерглкке-

мии и гиперзнсулинемии без метаболкчесяагх'

сдвигов на состояние ССЛ и обмен полнфосфо-

инозитидов в легких плода.

1. Непрерывное 'введение беременным крысам

"25Х-ного раствора глюкозы:

а) 18,5-18,5 оут беременности 54 (5)

б) 18,5-20,5 оут беременности 47 (5)

в) 18,5-21,5 сут беременности 120 (15)

Контроль - введение стерильной дистилли-

рованной воды 231 (26)

2. Непрерывное введение беременным крысам

40%-ного раствора глпкоаа:

- а) 13,5-19,5 сут беременности 43 (5)

б) 18,5-20-,Б оут беременности - 51 (5)

в) 18,5-21,5 сут беременности 103 (14)

Коатрогь - сЗейй а-11.1.

1

Ш. Взашве 'гшеряаоугййбует а гкпогзяигьаи т 1 показатели соагаата СЯЛ 55 о&эн пол^осфо-] гагааетэдов ааггсос пзода. \

1. Непрерывное введений кржа« а тг^енке !

18,5-21,5 оу? береиевзсога к&оузпнь | 128 (16)

1 2

Контроль - введение стерильной дистилли-

рованной воды 119 (15)

2. Введение инсулина плодам in utero:

а) однократно на 18,5 аут гестации 33 (4)

б) двукратно на 18,5-19,5 сут

гестации 53 (5)

в) трехкратно на 18,5; 19,5 и 20,5

гестации 131 (15)

Контроль - введение физ.раствора" 201 (25)

IV. Влияние на состояние ССЛ плода регуляторов

синтеза сурфактанта.

1. Аденилатциклааный путь: . :

а) введение адреналина 103 (11)

б) введение инсулина 91 (12)

в) одновременное введение

адреналина и инсулина 94 (12)

Контроль - введение дист:шшровандой

воды и физ.раствора . . . .89 (11)

2. Фосфоизозитидный путь:

а) введение миоинозжга 230 (22)

б) одновременное введение

миоиноэита и инсулина 200 (22)

Контроль - введение дистиллированной

воды и физ.растЕора 142 (15)

в) введение форбол-12-миристагх,-13- .

ацетата плодам in situ 94 (И)

Контроль - введение физ.раствора 85 (11)

г) введение нкфедкшша 100 (И)

Контроль - введение физ.раствора 9Б (11)

V. ПАС легких' в перинатальном периоде и уро-

вень шязинозита в биологических жидкостях.

1. ПАС легких плодов и новорожденных крысят

и уровень ишинозита в сыворотке крови

и околоплодных водах:

1 2 '"

а) при физиологической беременности 359 (38)

б) при беременности, осложненной са-

харным диабетом 366 (43)

.2. ПАС легких плодов и новорожденных кроль-

чат и уровень миоиноэита в сыворотке >

крови, околоплодных водах и бронхо-аль-

веолярных смывах:

а) при физиологической беременности 54 (9)

б) при беременности, осложненной

дитизоновым диабетом 58 (11)

VI. "Ускоряюще и нормализующие воздействия на

физиологическое и нарушенное при диабете

созревание ССЛ плода.

1. Ускоряющее воздействия:

а) зссенциале 48 (7)

Контроль 40 (6)

Б) аденозин аденозин-5*-монофосфат аденозин-5* -дифосфат аденоаин-5'-трифосфат Контроль 48 (7) 40 (6) 37 (5) 46 (5) 56 (5)

2. Нормалиаущае воздействия:

а) инсулин 46 (7)

Контроль 39 (6)

б) зссенциале 44 (Б)

Контроль 42 (6)

в) витамин А + карнитин 37 (5)

г) аденозин-5'-трифосфат 42 (6)

д) нифедшик • 44 (6)

Контроль 47 (7)

ЭТОГО: Опыт - взрослые крысы плоды крыс —плода кроликов 81 4165 (489) 58 (И)

- Контроль - взрослые крысы плоды крыс плоды кроликов 30 2042"(234) 54 (9)

или 25%-ного растворов глюкозы при помощи описанного устройства нам удалось получить модели гиперглняемин и вызванной ею гшюрянсуянненни разной степени интенсивности у беременных самок и их плодов.

Непрерывная инфузия 2 ЕД инсулина, в 40. мл дистиллированной воды в течение трех суток со скоростью 1,5-1,7 мл/ч беременным крысам позволила создать модель стойкой управляемой ги-перинсулинешш у самок и гипогликемии у плодов.

Птершшяноантешш у беременных крыс и их плодов получали путем непрерывного трехсуточного введения 0,01%-ного водного раствора, мшинозита (30-35 мл/суг) при помощи этого же устройства.

Получение перманентной гшеркетонення стало возможным благодаря внутривенному вливанию через яремную вену беременным }фысам раствора ацетоиа, ацэтоуксусной и 0-пщрооксинаслянай киаш.г.

Введение в катетеризированную яремную вену 0,5%-ного водного растзора ацетона квалификации о.с.ч. в последние трое су-' ток беременности воспроизводило один из элементов метаболических сдвигов гомеостаза при осложненной сахарнш диабетом бере-■ менности. ......... ••

Непрерывная инфузия 3-гидрооксимасляной кислоты (25 мг/кг) фирмы "SERVA" (Германия) в течение 18,5-21,5 суток беременности через яремную вену крысы также способствовала поддержанию гиперкетонемии.

Ацетоуксусную кислоту (25 мг/кг) фирмы "SERVA" (Германия) при соблюдении таких же условий эксперимента вливали , беременным крысам в течение 18,5-21,5 суток беременности со скоростью 1,5-1,7 мл/ч (35-40 мл/сут).

Стойкое повышение в крови у беременных }фыс и их плодов уровня категояашшав также было достигнуто при введении в яремнув вену самке с 18,5 до 21,5 сут беременности 0,001%-ного раствора адреналина в количестве D, 1 мг/100 г • массы., Выбор п именно этого срока гестационного развития' для экспериментальных воздействий обусловлен наиболее интенсивным накоплением поверхностно-активных веществ, обусловливающих созревание ССЛ плода.

В контроле во всех описанных сериях исследования во избэ-

жание избыточно» нагрузки организма натрием беременным крысам вливали не физиологический раствор, а стерильную дистиллированную воду в количестве, не вызывающем гемолиз эритроцитов.

У плодов состояние пшеринсулинеюш получали после введения каждому ив них в заднюю лапку через стенку матки 2 ЕД про-тамин-инсулина на 18,5, 19,5 и 20,5 дни гестации после разреза брюшной стенки матери с последующим ушиванием4 (L. Angervall et al., 1981). Для исследования плодов извлекали на вторые, третьи и сутки после одно-, дву- и трехкратной инъекции инсулина.

Форбаз-12-ъшржгсат-13-ацетат плодам крыс in situ вводили на 20,5 сут гестации в количестве 0,5 мет каждому через < вену плаценты после срединной лаларотомии. Плодов извлекали через 2 часа.

Раствор нифедшшна ("sigma" США) вводили через зонд в желудок беременным крысам трехкратно на 18,5-20,5 сут.

Водную суспензию U.2CO3 на 18,5, 19,5 и 20,5 дни беременности вводили крысам через зонд в желудок однократно в дозе 1 мг/100 г, 2 мг/100 г и 3 мг/100 г соответственно в первый, второй- и третий дни. • • -

Пуринэргические агонисты: аденозин, аденозин-5'-монофос-фат, аденозш-5'-дифосфат и аденоэин-5'-трифосфат вводили внутримышечно, начиная с 16,5 до 18,5 дня беременности крысам в дозе 10 мг/100 г в 1%-ном растворе бикарбоната натрия. Аде-ноаин-5'-трифосфат в дозе 10 мг/100 г вводили больным диабетом крысам в течение 18,5-20,5 сут беременности.

Для получения плодов и новорожденных на известном сроке гестации к самкам о 20 ч до 8 ч следующих суток подсаживали самца, и этот день считался первыми сутками беременности.

Введение испытуемых веществ производили следующим образом.

Беременным крысам, больным адлоксановым диабетом средней тяжести, до зачатия подбирали дозу инсулина (Actrapid), сшзгазо-шую уровень глюкозы крови дэ вдрмогликеыия. Сна составила от ' 4 до б ЕД ежесуточно. Actrapid вводили ежедневно в течение 14 дней до зачатия и затем на протяжении всего периода .беременности. '

Ретинола ацетат (витамин А) в масляном растворе дазааи

ежедневно внутрь из гашетки больным диабетом беременным крысам в дозе 2000 МЕ, начиная с 18,5 дня беременности. Раствор кар-шетша хЕоргда (20%-нын) по 50 мг/кг этим ае крысам вводили спустя полчаса рег оз.

Препарат эссенциале, глазным дейсгзуи^кы веществом которого является дзшшолеил-фосфатидилхолин, вводили по 0,2 мл интраамнкалвно на 16,5-18,5 дни гестации после срединной лапа-ротомии беременной крысы под кеталзрозш наркозом.

ВКаХЕШЧтКЙЕ КЕ1ЩЫ 1Я5ЛЕД0ВАШШ. Определение глккози в крови проводили глякозооксидаэным методом с псмощьа реактивных полосок для глюкотеста Во&Ьг1п^ег МаппЬэип на глшшетре НеГ1о1ач Тур 578019 (Германия).*

Содержание шмунореактивного инсулина (ЙРЙ) в снвсроткэ крози у йздзотных определяли радиоишунологическиы методом двойных антител с помощью наборов 1пз1с-1 фирмы "Сеа-1ге-5сг1п" (Франция) и риа-ЙНС-ПР12^ ИБОХ АН Беларуси. Для выяснения морфо-функционакькой характеристики панкреатических островков поджелудочную келеау плодов фиксировали в жидкости Буэ-на и проводили а спиртах возрастающей крепости. Срезы окрашк-вали аяьдегидфуксином и поевдоизоцианивом по методу ' К.Е.Сса1нсп (1955) для дифферещировки островковых клеток и выявления з бета-клетках депонированной формы инсулина.

Наличие гцатока а моче определяли диагностическими полосками "Кетофан" фирмы "ЬасЬеша" (Чехо-Сювакия).

Цитохимическое исследование }фови за казгашгадокы проводили по методу А.И.Шрдарь, Д.П.Кладиевко (1985).

Эвтаназию плодов но завершении опыта в одно и то яе время производили декалктацией. Взрослым животным предварительно вводили кеталар (125 мг/кг).

Содержание лшзет в золе шсуиенных до сухого остатка на-ззеках ткани мозга, легких и сыворотке крови у плода определяли количественным зыиотюЕао-слекгрографическим методом на дифракционном спектрографе СТЗ-1.

Выраъая благодарность козсулыгзшяу фирму ВоеЬПг&ег МаппсЬвт прсф.Г.Г.Мгйрамову за помощь в обеспечении многими рззштат при выпожявти зтой работ.

Методы исследования клеточного и внеклеточного / компонентов сурфактаятной системы легких

Для характеристики состояния ССЛ использовали биофизические, биохимические, морфологические и радиологические методы исследования. Исследовали: 1) поверхностное натяжение (ПН) бронхо-альвеолярных смывов и экстрактов ткани легких; 2) коэффициент стабильности (КС) пузырьков, вызатых из легочной паренхимы в калла физиологического раствора по методу Pattie; 3) количественный показатель поляризационной шпфоскшшя в за---мороженных несщгашешшх срезах фиксированных легких; 4) морфологическую картину легких плодов методом световой и электронной микроскопии; 5) фосфолшидкый состав легких.

БНОЕШЧШШЕ !ЖЩЩ. Определенна 1Ш сынзпа и эпжтражгоз лагюп: на псаерлшютнт ваоах. У крае и крольчат легочный смыв получага путем 9-10-кратного введения шприцем в трахезо изолированных легких по 8-10 мл физиологического раствора с последующим отсасыванием его до накопления объема, необходимого для заполнения наветы . весов (90 или. 100 ил). Для освобождения от. клеток о&т цензригоугкровагя з течение 10 мин при 2000 сб/мин.

Для приготовления экстракта легкие измельчали, гомогенизировали в ызжроизмельчителе 2 мин и центрифугировали при 6000 об/мин 20 мин. Надосадочную липкость фильтровали через 4 слоя марли и разводили физиологическим раствором кз расчета 100 мл жидкости на 1 г легочной паренхимы у взрослых крыс. Экстракты из ткани легких плодов и новорожденных. красят готовили поел? объединения всех- извлеченных легких дивотеых одного помета в единую пробу из расчета 0,3 г на 100 мл физиологического раствора. ПК полученных субстратов' измеряли.на юдкфнцкрованных Э.В.Бадем (1975) весах Вильгельма.

Для исследования околоплодных вед кркс и "кроликов тополь-гезали разработанный нами прием ш извлэтеняя (Л.В.Коваленко, 1995).-Под кеталарэвш наркогом по зниигаоиетральной "сове?";-' ности делали разрез последовательно, зхздого ллодоЕместзыеда и из выступившего прозрачного пувнръка проколом "засстреяного конца стеклянного капилляра, направленного под углом, снизу rrsnx, производили извлечение чистой околошгадной щдкпетн баа

примеси крови. Закрытые с обоих концов капилляры устанавливали а итатив из пенопласта. Для получения необходимого количества-сколошгодной яидкссти ее набирали в несколько капилляров.

Вычисление когйкцкепта стабгшышсяз! (КС) пузырьков воздуха, выжатых из легких в гкидкость (метод Pattie), производили по Фосмулэ:

Да2

кс------,

Д12

где Д1 - диаметр пузырьков, измеренный через 2 мин после их вынимания Е капли физиологического раствора, Да - кх диаметр через 20 пин.

ЕКОЖКЧШСЕ '2X0ДЫ. Исследовали состав литщов легких пледов крыс общепринятым методом (Я.Д.Бергельсон с соавт., 1981) тонкослойной хроматографии на " пластинах сшшкагеля "MERK" (Гермзлкя). 3 качестве стандарта нспользовали лецитин, фссфатвдишноззк, фосфатидилэтанолзыия, фосфатиднлглщерин, фосфатццилсврин з сфиЕгомиелип "SEPvVA" (Германия), в части опытов использовал:'! стандартные фосфолшшды, полученные из яичного -желтка. Количественную оценку производили -на денситометре, Csmsg: (USA). По ссотнозеетга на денситограммах высоты и сирины пиков фосфошлшдов или' по кх весу на аналитических весах судили о процентном соотношении основных фракций фосфоли-пидов.

Выделение пвг;5сс§ейнсаязжказ легочной- паренхимы производили следуищш сбразсм.

ФосфоиЕозютда характеризуются быстрым посмертным разрушением. Поэтому при их выделении необходимо использовать приемы, предупреждающие и енняэоцие посмертный гидролиз. Нами использован быстрый способ фиксации - действие тепла, выделяющегося при микроволновом облучении тканей 15-25 Ггц (В.И.Евец с соазт., 1987; Л.В.Коваленко, 1995). При этом происходит необ-раткиая денатурации формантов, разрушающих'фосфоинойитиды, ■ а структура тканей остается неизменной. При микроволновом облучении xoposo сохраняются наиболее метаболически активные Форш фосфоинозитидов - тркфосфоинозитиды.

Из легких общепринятым методом (Л.Д.Бергельсон с соавт.,

1981) отделяли фосфолшиды. После чего ткань экстрагировали смесью хлороформ - метанол - конц.НС1 (200:100:1) дважды но 3 мл в течение 20 ыие. После центрифугирования нздосадочную жидкость дважды промывали. Первый раз смесью метанол - 0,1 N HCl (1:1) и второй раз метанол - 0,01 N HCl (1:1). Низший слой после центрифугирования упаривали и растгоряли в, 50 мкл смеси хлороформ - метанол. Разделение смеси фэсфоинозитидов производили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах ск-ликагеля фирмы "МЕЖ" (Германия), предварительно кшрогниро-ванньк 1% оксапатом калкя в смеои С2Н5ОН - Н2О (2:3) и активированных при t 110°С. Система для ТСХ - хлороформ: ацетон: мэта-нол:уксусная кислота: вода (40:15:13:12:8) . В качестве стандарта использовали фсюфатидил1шозкт-4,5-Д!1Йюсфат - фирма "МЕЖ" (Германия). Количественное определение фракций попяфосфоиЕози-тидов производили на денситометре Cansg (USA) при длине волны 547 нм.

В части опытов для изучения интенсивности обмана фосфатных групп на 20,5 день беременности крысам подкокнс вводили ИагНР3^ из расчета 18,5х103 Ек/100 г. Через 2 часа после, введения изотопа .крысят быстро -извлекали-зыеств с шюдозмести- - -лещем и подвергали микроволновому облучению 15-25 Ггц. ТСХ фосфоиноэитидов проводили внаеошюанныу способом. После высушивания пластины обрабатывали реагентом Банковского. Полосы, соответствующе отдельным фракциям фосфоиЕозитидов, тщательно соокабзквали и зльировади 4 раза по 10 мин при 50° смеоьи хлороформ - метанол - конц.НЙ (200:100:1). Из полученных элаатов брата пробы на определение фосфора и на изменение радиоактивности. Ягащцы минерализовали 57% хлорной кислотой в прлсут-" стзий ыолибдага аммония.

Для каждой фракции фосфоиноаитвдов рассчитква-ш содержание фосфора в шцфогр^ййх на 1 г сирой ткана к относительную удельную радксаккЕШзета.

Анализ юввзэднт. в' сыаорохке крсод околс.ллодшх годах к , брозхо- альвеолярных смивах проводили с нстагьгаганаеы га-зс-хромзтогрзфическзй системы "Shymadzu" серзз; SS-9A (Japan). Количественное содержание шювшзкта определяла, по ссшношэниэ шющцей и высот пиков исследуемого соедингнкп к внутреннему

if

стандарту - глюкозе.

ШШШГКЧЕСКНЕ МЕТОДЫ. Общеморфологшескую картину цито-архитектоники легких плодов исследовали при окрашивании депа-рафинированных срезов гемгтмскданам и звзшоы.

Для але;гаранпо-иккроскотР1аскаго исследования фиксацию легких плодов крыс проводили в 2,5%-ном растворе глютаральде-гида на 0,1 И фосфатном буфере (рН 7,2-7,4} с постфиксацией 1%-ным раствором четырехокиси осмия. Ткань заключали в арал-дит. Ультратонкяэ срезы толщиной 20-30 км получали на ультратеме ЖБ-3, контрастировали урзлил-ацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу.**

Внутриклеточные запасы сурфактанта определяли методом по~ лкрнзацкопкпй штроскопш.

Сутцность метода заключается в том, что альвеолоциты И типа становятся оптически выявляемыми при исследовании,в поляризованном озете криоотатных срезов, приготовленных из фиксированных з формалине легких. При зтом лшщцные включения цитоплазмы альвеолоцктов II типа дают интенсивное двойное лучепреломление. Количественное определение двозкощэелсмЕЯЩИх структур сурфактангз проведено при 520 нм на цзшзфстсметре, . смонтированном на основе СЭУ-31 на микрссгсспе HU-2E ("Zeiss", ■ ГДР) с фотометрической насадкой С&ВЛ-1А. В каждом из 10 срезов легких животных каядой серии фатомэтрировала по 10 полей зрения, выбранных по методу случайного отбора (Н. И. ЯБлучачский, В.В.Губеяко, 1978).

РДЩ1ШШ7Е£С!Е йЕГОДЦ. БеремеЕНш крысам с тяжелым аз-локсановым диабетом и диабетом средней тяжести внутривенно вводили *%-газясэу в дозе 2х103 Ек/ЮТ г (В/0 "Изотоп"). Спустя одна чао под к&таларовш наркогом извлекали плодов. Радиоактивную метку з фосфолипидах легких плодов, полученных методом ТСК, определяли при помощи счетчика "ГАША-12".

Зш §per*f}&c> работ sanamssu я люборапприи яейгебио-легии Центра молекухярзой дизззоспит и лечения. РАМН.

В&рэхзю ■ искразвт благодарность старшей/ научному сотруднику, кгтдидашу шлтеских яаук М.Л.ЦирэншюЛ за методическую помощь и центе совет при жыполчевии зтк исследований.

** Утзохяый фрагмент работ бмл ' таютея при прямом угасши доц. кафедры гшюлогтеской жатамии КШ1 М.М.Туаупбековой, зз шо as/юр Bhiceassm глубокую благодащоешь.

- 20 -

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с помощью параметрических критериев. В основном достоверность различий между группами оценивали с помощью {^-критерия Стью-дента и в отдельных группах определяли коэффициент корреляции.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЕЙЕНИЕ

ВЛИЯНИЕ ИЗМЕНЕНИЙ ГЛЮК030-ШСУЛИН0В0Г0 СТАТУСА К ДРУГИХ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СЩЕИГОВ ГШЕОСТАЗА ПРИ РАЗНЫХ ВИДАХ- ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА НА ПОКАЗАТЕЛИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ ССЛ И ОБМЕН ПОЖ2ШЮИНОЗЗГЩЩЗВ

Гипергликемия и гипоинсудинемия у взрослых крыс при экспериментальном сахарном диабете

Введение экспериментальным животным "химических" диабето-геноз - аллоксана и стрептозотоцина - привело к развитию сахарного диабета. Обе модели диабета характеризовались выраженной степенью первичной инсулиновой недостаточности, высоким подъемом глюкозы в крови и существенной потерей веса. Достоверно возросло содержание миоинозита з сыворотке крови больных яивотных.

При аллоксзновом диабете поверхностно-активные свойства (ПАС) легочного экстракта, отражающие процессы внутриклеточного синтеза сурфактанта, были изменены в сторону повышения 'статического и максимального поверхностного натяжения (Ш). Достоверно уменьпился индекс стабильности (ИС) - интегральный показатель поверхностной активности. При поляризационной микроскопии срезы легких крыс этой серии представлялись содержащими явно меньиее количество двоягапрэлошзшгах структур сравнительно' с интактвши животными. Показатель поляризационной микроскопии (ГШ) был достоверно в 1,4 раза ниже сравнительно с контрольными исследованиями.

Таким образом, развитие аллоксанового диабета о выраяои-

ной первичной инсудиновой недостаточностью, гипергликемией к повышением концентрации миоинозита в сыворотке 1фови привело к понижению ПАС легочных экстрактов и понижению ППМ.

Отсутствие изменений со стороны поверхностных свойств легочного смыва и коэффициента стабильности (КС), выжатых из ткани легкого пузырьков воздуха свидетельствовали о сохранении процесса секреции ЛС на альвеолярную поверхность.

Стрептозотациновый диабет также характеризовался некоторыми изменениями показателей - состояния сурфактантной системы легких'(ССЛ): возросло Шипя, легочного экстракта при одновременном снижении КС. Поляризационная гхикроскопия выявила обеднение клеточных элементоз альвеолярных перегородок фосфолипид-ными компонентами сурфактанта.'Отсутствие изменений со стороны ПН бронхо-альвеолярного смыва и коэффициента стабильности пузырьков, выжимаемых из легких, свидетельствовало о сохранении обычной секреции легочного сурфактанта.

Введение инсулина крысам с испытуемыми моделями диабета несколько нормализовало у них углеводный обмен. Содержание глюкозы в крови снизилось, но не достигло значений в контроле. Достоверно уменьшилось содержание миоинозита.

• При аллоксановом диабете -введение инсулина сопровождалось уменьшением ПНиахс. и увеличением КС. Еозросло и значение ППМ. Введение инсулина при стрептозотоциновом диабете привело к уменьшению Ш^зкс. и ПНШШ, при одновременном возрастании ИС, что свидетельствовало об усилении ПАС легочных экстрактов.

Известно, что легкие способны утилизировать глюкозу с образованием de novo жирных кислот и лепндов, участвующих в биосинтезе легочных сурфактантов (C.Mendelson, V-Boggaram, 1991). Несмотря на то, что у всех испытуемых животных уровень глюкозы значительно превышал контрольные величины, изменение функциональных свойств их легочной паренхимы свидетельствовало о подавлении в ней продукции поверхностно-активных веществ (ПАВ). Наиболее вероятным объяснением этого факта является дефицит инсулина, ' поскольку его введете в наших условиях, нормализуя углеводный обмен4и содержание миоинозита, повышало ПАС легких.

- 22 -

Состояние ССЛ плода и содержание фосфоинозитидов , в его легких при разных экспериментальных моделях диабета умеренной тяжести течения у беременных 5фыс

Реакция сурфактантной системы легких плодов крыс на изменение концентрации глюкозы, миоинозита и инсулина в крови отличается от реакции взрослого организма. При наблюдении за беременными крысами отмечались значительные колебания глюкозы в крови при аллоксановом диабете. Стрептозотоцинсвый и постпанк-реатэктомический диабет характеризовались более стабильным течением. К концу срока наблюдения гликемия у беременных крас при аллоксановом, стрептозотоциново« и постпэвкрэатактсыиче-ском диабете цревыззала контрольные значешш соответственно в 3,5; 2,1 и 2,7 раза. У плодов этих крыс по завершении опыта отмечено достоверное пезышение глюкозы и шокаозита в крови во всех группах наблюдений. Мегду концентрацией глюкозы к миоинозита в крови имела место прямая корреляционная зависимость (Р<0,01). Уровень иммунореактивного инсулина в сивсротке крози был в 2,1 раза выле при алжжеанавем диабете, в 2 раза - при стрептозотоциновом и в 1,9 раза - --при постпанкреатэкгомическом.

При исследовании поверхностной активности легочных экстрактов плодов, отражающей суммарную активность клеточного и неклеткочного компонентов ССЛ, отмечено достоверное увеличение ЯНШШ. при аллоксзновса и стрептозотоцкновом диабете. При этих "хиьшчаезазх" моделях диабета у плодов крыс - достоверно уменьшился ППМ. Наиболее выраженные изменения в ВДС легких плодов произошли при постпанкреатэктомическом диабете - достоверно возросли все регистрируемые показатели Ш при одновременном уменьшения ИС. ПОМ, как и в предшествующи двух группах наблюдений, существенно уменьшился.

При анализе результатов исследования обращает на себя вн&шше тот факт, что понкдэнле функциональной нхтизпостн легочных экстрактов ври всех экошр;мгнта:йьшх шмелях диабета произошло на фоне пшбрмзкэмии, гксеринсули^ш а похшеиик уровня миоинозита в сыворотке крози у плодов.

Биохимическое определение лишздоа легких плодов выйнйло поникзнке фракций ефшгомиелина, лецитина и фссфатидклглицери-на. Одновременно повысилось сод^раанке фос^амояомегкзэ'гнзола-

мина и фосфатядилшюзита. Отсюда следует, что ври сахарном диабете у плодов беременных крыс нарушается образование наиболее важных позерхнсстно-активных веществ легких - лецитина и фос-фатидилглнцерина, т.е. замедляется процесс биохимического созревания легких.

Возрастание содержания трифосфоинозитидов при всех трех моделях диабета свидетельствовало о замедлении гидролиза фос-фоннозитидов легких. В таких условиях кокет напугаться образование вторичных иеосэндяеров, в частности, драцклглицерина и шозитолтрнфосфата, принимающих участие в передаче сигнала в АЦ II типа- _

При алектронной микроскопии альЕеолоцитов II типа дышавших плодов (21,5 сут) на фоне аллоксаяового диабета выявлено наличие множественных зон ателектаза, а также пвноэ снижение в апикальной и баззльной части клеток количества цитофосфолшю-сом. -

Таким образом, гиперглжемия, повышение концентрации ми-оинозита и иноулиЕа з крови у плода, возникающие при умеренном течении экспериментального диабета у матери, вызывают нарушения биохимических и функциональных свойств легочного сурфактанта в развивающемся организме плода. .......

Состояние ССЛ плода и содержание в его легких фосфоинозитидов при умеренном и тяжелом аллоксзновом диабете у беременных крыо

При тяжелом течении аллоксанозого диабета у беременных крыс в крови их плодов наблюдали гипергдикеыип и гшюинсулине-ыию. Она сохранялась на протяжении всех сроков наблюдений (19,5-21,5 сут гестации), а перед рождением уровень иммуноре-ач:тивного инсулина (ИРИ) в крови плодов был в 1,4 раза ниже з сравнении с контролем. На фоне умеренного течения аллоксаново-го диабета у беременных крыс в крови их плодов отмечалось' достоверное повышение ПРИ, а к 21,5 сут гестации его уровень превысил контрольные значения в 2,7 раза.

Количество миоинозита, возросшее в контрольной группе в сыворотке крови на 20,5 сут гестации до 3,910,45 иошь/ма, к

-S4 -

концу срока наблюдении (21,5 сут) снизилось до 2,210,31 мкыоль/мл. При умеренном и тяжелом диабете у беременных крыс количество миоинозита в сыворотке крови плодов возрастало по мере увеличения сроков гестации и к 21,5 сут пранатального развития было а 3,3 раза выше, чем в контроле.

При анализе ПАС легочных экстрактов плодов обнаружено достоверное саже-кие функциональной активности легочных сур-фактантов плодов при умеренном течении диабета у беременных. Наряду с повышением всех регистрируемых показателей ПН экстрактов легких проиасшо уменьшение КС и ШШ. Такие изменения функциональной активности легочных сурфактантов плодов бшш отмечены на щютяхении всего срока наблюдения (19,5-21,5 сут гестации).

При тяжелой диабете изменение ПАС легочных акстржеов плодов косило с самого начала наблюдения (19,5 сут) противоположный характер. Гипергликемия и гипермиоинозитекия в сочетании с понижением уровня ЯРИ в сыворотке крови плода при тяжелом течении диабета у беременной привели к уменьшению ПН исследуемого субстрата и возрастанию КС. Достоверно Еозрос и показатель поляризационной микроскопии.

На 21,5 сут гестации в липищюм составе легких плодов произоилс уменьшение фракций лецитина и фосфатидилглицерииа при умеренном диабете у беременных крыс. При тяжелом диабете в легких плодов крыс достоверно возросло содержание фракции лецитина.

Накопление в легких плодов при умеренном азлоксановоы диабете у береыекшх крыс трЕфосфоикозитвдов укалывало на замедление гидролиза этого полифосфоннозитида в условиях гшеринсу-линеыш, гипергликемии и повышении концентрации миоинозита в крови, что, безусловно, препятствует образованию вторичных ыессенджеров я соответственно тормозит биологичегааш ответ клетки.

Напротив, .при тяжёлом jysaSàte у беременных крыо,. когда у плода отмечали гипергликемию, тошоулинеияю 'и гаясчжвйшозяг-емко произошло ускорение' распада трифосфоинозггггщон, о чсу свидетельствовало уменьшение его количества в легких. Такое усиление гидролиза полифосфоинозитидоз активирует "фоафошозк-тидзый путь передачи сигнала з клетку. , -

Включение 14С-ггпоязоэн а липиды легких плодов при умеренном к тккеясм диабете у береметшх крыс

Поскачку гжкюга пнаяется одним из зожяешшх субстратов образогм-лтт? жегочннк суржзкяйятов, предсгаэляет общественный гстерго ее зктчение в ¿оо^юллеян плода при диабете разной ст':*п?ни ■жхзст.ч у бйремэкнкх крыс. З^ссдедопашю этого процесса тем более интересно, что при материнском диабете разной степени тяжести конценграцгя инсулина - зазшого регулятора вквоче-янл предиэотв&ннпкэз з фоофэлкпвдн легких ~ меряется по-разному.

Еклвчеяие 14С-г»2коаы в лецитин легких при умеренном диабете с-оотакаш только 54,8% от контрольного, но на 44,1% пре-даяоо эти значения для включения метки з состав фосфатидиз-икозита. При анзлизе зкгачения метки в фосфолнпиды легких плодов крис при гяхелзд материнском диабете не выявлено разницы мэяду оокозпыми фосфо.шгпздйш - зсцииаем и фосфатядкЕглЕцерк-ном, но произошло достоверное усиление этого процесса в фосфа-тидилсериз на 29,6% и в фргкцч» сфиггониелина на 24,0%.

Следует отметать; что "при уизрвшагдиабегв у беременных крыс содержание ПРИ в сыворотке зареви'их плодов было достоверно з 2,5 раза внзе ьхжтрэльногс, а при тяжелом, напротив, нда.е з 1,5 раза.

Результаты этих исследований показали, что гипериноулизэ-зста шюда при диабете беременной умеренной тяиеоти течения за-дерзяиает жшкзязе глакозы в состав наиболее поверхностно- активных дкпидов его легких. Это мажет быть обусловлено нарушением мекуточнаго обмена глюкозы (Л.ЗсигЬоп, Р.РаггеП, 1935). Эти ззтера полагают, что происходящая под влиянием гиперинсу-лктемки стгйг/ляцзя нирузатдегндрогезазы з легких плода при диабете у мзтета мелет способствовать усиленному превращению глюкозы з лвктат и ацетил-СоА, а это.в своэ очередь может приводить к снижении доступности глицерол-3-фосфата для синтеза фосфолишщов.

Влияние LÍ0CO3 на содержание ыкоиноэита, фоофоинозитидов легких и состояние ССЛ плода при умеренном и тиж&доы аллоксановоы диабете у беременных крыс

Наш уда было показано, что при разных экспериментальных моделях диабета у беременных крыс в крови их пдодое нарастает концентрация ыисинозига при одновременном изыон&нии ПАС их легких я содержания а них фосфоинозитидов. Отмечено, что ионы литкя стимулируют распад фосфоинозитидов (В.И.Швец с. ссавт., 1387), что сопровождается' акт-нацией фосфокаоэитадногоi пути передачи сигнала в клетку.

Введение LÍ2CO3 беременным крысам с умеренным течением аллсксакового диабета достоверно снизило концентрацию мишко-зита з сыворотке крови плода с 6,9±0,4S до 4,2±1,03 мкьпгь/ш. При тяжелом диабете концентрация ыкоиноаита у плода после введения LÎ2CO3 беременном самкам не отличалась от контрольной (7,3±0,55 и 7,5±0,41 мкмоль/мл). Уровень ,тркфосфоиЕОзитвдов легких плодов при.умеренном диабете под влиянием -ионов лития достоверно снизился а 41,0+1,55% до 34,7¿1,53£, а при тяжелом не отличался от контрольного (32,3+2,53 и 3î,5±l,4S£).

При анализе ПАС легочных экстрактов плодов на фоне LI2CO3 беременным самкам обращает на себя внимание достоверное умень-шэкме ПН до всем регистрируемым показателям. Такие сдвиги в совокупности с возрастанием ИС и ШЗМ свидетельствуют об ркти-нац?ш продукции легочных сурфактантов плода.

Уовл&ше распада фосфсйшозиткдов в легкая плода при введении беременным самкам с уморанннм дяабетоы ионов лития, уменьшаете коБцеэтрзцвд «ъоиновъта в сочетании о повышением ПАС легочных экстрактов к варастанвш двоякопрплЫтазгщх фоо-фсшшщяых структур s аяьиеоадррм* переторжках о^чжыасяву-ит об участил Зэе^шисхдагздшгз иутя t регугщугл бгодагдокзкзй активности альвеспоцчтов П тина.

Состояние ССЛ плода при непрерывной инфузки в течение трех суток адетоуксусной, в-гидрооксимасляной кислоты и ацетона беременным крысам

Еведение разным группам беременных крыс в сроке мекду 18,5 и 21,5 сут ацетоуксусной, в-гидрооксимасляной кислот и ацетона сопровождалось вкрзженнкми колебаниями кетоновых тел в моче в течение трех суток наблюдений (соответственно 1,9-5,2 шоль/л; 2,2-4,8 ммоль/д и 2,0-4,9 ммоль/л).

При введении ацетоуксусной кислоты уменьшение всех регистрируемых показателей ПН экстракта легких плодов неоспоримо свидетельствовало об увеличения продукции легочных сурфчктан-тов. Еозрос ШУ до 19,1+0,50 (в ¡лктроле - 12,9+0,94). Непрерывное введение в-гидрооксимасяяной кислоты беременным крысам не вызывало сдвига бупкщюнаггБньк свойств акстрактоз легких плодов и содержания лжнщав их легких. Введение 0,01%-ного раствора ацетона беременным крысам в течение трех суток с 18,5 по 21,5 сут сопровождалось достоверным понижением ПН по всем регистрируемым показателям (Р<0,С01) . я повышением показателя, поляризационной микроскопии (Р<0,02), что свидетельствовало об узелдчешш функциональной активности легочных сурфактантов под действием ацетона. Ацетоуксусяат кислота и ацетон, вводимые беременным крксач, увеличивали образование лецитина в 1,1 раза и фосфатидилг.21щерз5на в 1,4 раза в легких их плодов.

СУРФАКТАНТНАЯ СИСТЕМА ЛЕГКИХ К СОДЕРЖАНКЕ гШЮШШЩЦОВ У ПЛОДА ПРИ УМЕРЕННОЙ И ВЫРАЖЕННОЙ ГШЮТЛИШ.Ш И ПШЕРЙНСУЛЙНЭШ БЕЗ )|ЕТАБОЖЧЕСКЙХ СДВИГОВ Г0МЕ0СТАЗЛ

Введение беременным крысам 25Х-ного раствора глюкозы уз?.е через суткй привело к подъему ее концентрации в крови у плода и превысило контрольные значения в 2,0 раза. Через 2 и 3 суток глкемгя остгзалзсь примерно на том ?.е уровне и превышала значение в контроле соответственно в 2,4 и з 1,9 раза. Уровень

ИРК у.плодов после трех суток введения беременным сгшкзм 25%-ного раствора глюкозы достоверно отличался от контрольного в 1,2 раза. У плодов крыс, которым вводили 40%-нь'й раствор глюкозы, содержание глзкоэк превысило контрольные значения спустя 1 сут в 3.5 раза, а через 2 и 3 сут - в 4,5 раза,. Содержание МРИ в сыворотке крови у плодов через какдые сутки возрастало соответственно в 3,4, 1,5 к 2,4 раза. Колзмеотвэ ииокнозита в' сыворотке крови плодоз после введения беременным самкам з течение трех суток 25%-ного и 40%-кого раствора глюкозы составило ?г2±0,50 мкыояь и 14/3 ьимзль/л, что превысило контрольную величину (1,6*0,19 шноль/л) соответственно в 4,5 СРС0.СЮ1) к 9,3 (Р<05001) раза.

■ ПАС экстрактов легких плодов при введении самкам 25%-ного раствора глюкоза существенно снизились. Введение беременным животным 40%-ного раствора глззкозы привело к противоположному направлению сдвига фуакционагьких свойств легочных сурфзктан-тов плодов (табл.2). Свдер;£азие лецитина в легких плодов после введения беременным крысам 25%-кого раствора глюкозы уместилось в 1,1 раза (Р<0,02), {ос^тддияглЕцерина в 2 раза (Р<0,02), а количество фосфаиэдзшашзита возросло в 1.8 раза (Р<0,01). Введение -да самкам 40%-еого раствора глюкозы- повысило содержание лецитина в легких их плодов в 1,1 раза (Р<0,05). Содержание трифоа$аиноантидов в легкий плодов крыс при введении 25%-ного к 40%-ного растворов глюкозы возросло соответственно до 42,1±1,22 (Р<0,01) и 40,4±0,75 (Р<0,02) против 35,6+1,33% в контроле.

Цитохимическое определение катеходашшов в эритроцитах плода показало их достоверное увеличение при использовании 40%-ного раствора глюкозы до 3,2±0Д2 усл.ед. (Р<0,001). При умеренной гтергдикемии (25%-ный раствор глюкозы) содержанке катехоламзшов составило 2,3+0,11 усл.ед., что практически не отличалось от контрольного уровня (2,2+0,09 усл.ед.).

Таблица 2

Изменение ПАС экстрактов и ПП),1 срезов легких плодов (21,5 оут) после поддер^-ания у беременных самок гнперглпкешш в течение трех суток

ПН

Серия опытов мН/ы ИС

стат. макс. мин.

1. Контроль п - 43 (5 пометов) 35,9±1,34 43,7±1,40 17,6+0,82 0,85+0,036 16,3+0,82

2. 25%-ный раствор глюкозы п - 39 (5 пометов) '40,1±1,04 47,6+1,22 21,8±1,38 0,75+0,033 13,2+0,96

3. \ 40%-ный раствор глюкозы п 37 (Б пометов) 28,6+0,96 1 40,1±0,98 13,3+0,88 1,0 +0,031 19,6+0,65

р 1-3 <0,05 <0,001 <0,05 <0,01 <0,02 <0,05 <0,02

- so -

СУР&АКТАНТНАЯ СИСТЕМА ЛЕГКИХ И СОДЕРЖАНИЕ ШЯаШЮЗШДОЗ У ПЛОДА ПРИ ГШЮГЖКЕШИ К ГШЕЯШСГ/ЖНЕШй

Сурфаккактная система легких плодов, при введении инсулина беременным крысам в течение трех суток

Введение сачкам в течение 18,5-21,5 сут беременности 2 ЕД

?

инсулина в 40 мл дискшсфованной воды сопровождалось изменением концентрации глюкозы, в-их щзови. Через двое и трое суток содержание сахара-в крози было в 1,5 (Р<0,02) и 1,7 .раза (Р<0,05) ниже в сравнении о контрольными значениями. К концу эксперимента произошло достоверное повышение в 3,3 pasa ИРй в сыворотке крови у "беременных крыс- в сравнении с контролем. Следует полагать, что к у плодов имели место такие же изменения концентрации гдакоэы, поскольку она свободно по градиенту концентрации поступает через плаценту. На 21,5 сут гэстации уровень гликемии у плодов при введении беременным самкам инсулина был в 1,5 раза ma-г в сравнении с контролем (Р<0,Ш1). Содержание миокцозита .также достоверно снизилось до 2,0±0,10 мкмоль/мл и было в 1,5 раза нкие контрольного (Р<0,01). Концентрация ИРй не отличалась от контрольных - значений.

В этих условиях, когда у плода имели место гипогликемия и гипомиоивозитеыия без изменений концентрации инсулина в крови различий в ПАС экстрактов легких плодов в опытной и контрольной группах не обнаружено. Биохимический состав фосфолипидов легких плодов также не изменился, как и не произошло изменений содержания трифосфоинозитидов и дифосфоинозитидов.

Сурфактантная система легких плодов крыс при введении им инсулина in utero

Однократное введение 2 ЕД инсулина Actrapid плодам in utero через 24 ч на 19,5 сут геотации не приводило к изменению содержания глюкозы, миоинозита и инсулина в их крови. Двукрат-

ное введение инсулина на 20,5 сут гестации вызвало у плодов достоверное снижение в 1,5 раза содержания глюкозы (Р<0,001). Трехразовое введение инсулина привело в конце срока гестацион-ного развития (21,5 сут) к возрастанию уровня ИРИ в 1,2 раза (Р<0,05) и снижению глюкозы в 1,7 раза (Р<0,001). Уровень мио-инозита в этот срок внутриутробного развития не изменился. - ПАС легких плодов после одно- и двукратного введения инсулина на 19,5 и 20,5 сут были такими же, как и в контроле. На 21,5 сут гестации повышение всех регистрируемых показателей ПН свидетельствовало о замедлении созревания ССЛ плода. При поляризационной микроскопии срезов их легких отмечено уменьшение численности и интенсивности излучения двоякопреломляющих фосфоли-пидов сурфактанта в альвеолярных перегородках. В фосфолипидном составе легких плодов в условиях гиперинсулинемии и гипогликемии произошло понижение фракций лецитина в 1,2 раза (Р<0,01) и сфингомиелина в 1,4 раза (Р<0,001) при одновременном возрастании доли шосфоинозитидоз в 2,1 раза (Р<0,001). Содержание три-фосфоиноэитидов в легких возросло до 40,2±1,05Х против 35,0+1,55% в контроле (Р<0,05), что является следствием ослабления фосфодизфирного гидролиза трифосфоинозитидов в условиях ' гиперинсулинемии. В совокупности описанные факты можно расценить как свидетельство замедления синтеза сурфактанта легкими .плодов при введении им на поздних стадиях эмбриогенеза инсулина в количестве, вызывающем гипогликемию.

Тормозящее влияние инсулина на эмбриональное развитие легких, с одной стороны, может быть связано с подавлением гли-когенодиза в АД II типа (М.На11шап еЪ а1., 1992). С другой стороны, вероятно, этот эффект обусловлен недостаточным притоком глюкозы к альвеолоцитам II типа. Известно, что необходимый для синтеза легочных фосфолишздов глицерин синтезируется из а-глицерофосфата, непосредственным .предшественником которого является глюкоза (Н.В.Сыромятникова с соавт., 1987). Наконец, как показали наши • исследования,; , в условиях гиперинсулинемии • тормозится гидролиз трнфосфоинозитвдов, что может привести к нарушению передачи сигнала в АЦ II типа.

СУРОАКТАНТНАЯ СИСТЕМА ЛЕГКИХ ПЛОДА

ПРИ АКТИВАЦИИ АДЕНИЛАТЦЛКЛАЗНОГО И СЮСФОИНОЗЙТИДНОГО ПУТЕЙ ПЕРЕДАЧИ- СИГНАЛА В • КЛЕТКУ

Активация аденилатциклазного пути

.. Введение 0,0012-ного раствора адреналина беременным кры--сам сопровождалось к концу срока наблюдения (21,5 сут) повышением в 1,2 раза (Р<0,01)' уровня глюкозы в крови их плодов. Возрастало в 1,2 раза (Р<0,02) содержание ИРИ. Цитохимическое определение содержания катехоламинов в эритроцитах показало их увеличение в 1,4 раза (Р<0,001) в сравнении о контролем. Введение 2 ЕД протаыин-1Шсулина плодам in utero сопровождалось понижением содержания глюкозы в их крови в 1,3 раза (Р<0,01). Содержание ИРИ возросло в 1,5 раза (Р<0,001), а уровень катехоламинов также превысил контрольные значения в 1,3 раза (Р<0,001).

Инсулка, введенный плодам внутриутробно на фоне инфузии адреналина, приводил к повышении содержания ИРИ в 1,4 раза .. (Р<0,01)-. Содержание .глюкозы возросло в 1,1 раза (Р<0,05), а уровень катехоламинов в эритроцитах был в 1,3 раза выше контрольных значений (Р<0,01).

При исследовании ПАС экстрактов легких плодов (табл.3) обнаружено снижение ПН всех регистрируемых показателей на фоне введения адреналина. Это свидетельствовало об активации продукции легочных сурфактантов. Повышение ЛШ подтвердило это заключение. Введение инсулина плодам внутриутробно приводило к противоположному направлению сдвига ПАС легочных экстрактов. Возрастание ПНцакс.» ЕНшш.а также снижение ЙС указывало на понижение функциональных свойств ЛС,-что подтверждалось снижением двоякопреломлягщих структур фосфолипидов сурфакталта з септальных перегородках.. ' Как выяснилось, к тому же.. инсулин тормозил стимулирующий. эффект адреналина при их совместном введении. При биохимическом исследовании липидов легких плодов обнаружено достоверное повышение фракции лецитина в 1,1 раза (Р<0,05), тогда как инсулин уменьшал содержание лецитина в 1,1

Таблица 3 .

Поверхностное натяжение экстрактов и ППМ срезов легких плодов (21,5 сут) крыс при'введении им адреналина и/или инсулина

ПН

Серия опытов мН/м ИС

стат. мако. мин.

1.. Контроль п - 48 (6 пометов) 47,7±1,1б 49,711,42 19,4+0,20 0,88*0,030 15,3*0,35

2. Адреналин п - 51 (6 пометов) 43,2*0,33 45,9+0,41 15,6+0,44 0,97+0,012 18,2*0,91

3. Инсулин п - 48 (7 пометов) 47,7±0,89 51,3*0,96 25,2*0,81 0,74*0,041 11,4*0,85

4. Адреналин + гаюулин п - 53 (7 пометов) 45,8+0,72 49,2*0,70 23,1*0,62 0,72+0,012 10,9*0,41

' Б*"* Р1-3 Р1-4 Ра-4 <0,01 <0,01 <0,05 <0,001 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,05 <0,02 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,02

раза (Р<0,001) г. сфингомиелдаа в 1,3 раза (Р<0,02). Одновременно возросло содержание фосфаткдилинозита в 1,9 раза (Р<0,001). Одновременное введение адреналина и иноулина так&е уменьшало содержание лецитина в 1,1 раза и сфингомиелина в 1,3 раза при одновременном возрастании доли фосфатидшшнозита в 1,7 раза (Р<0,05).

Таким образом, инсулин, введенный плодам внутриутробно, вызывал в наших исследованиях торможение стимулирующего эффекта адреналина, понижая функциональные свойства легочных экстрактов и снижая запасы сурфактанта в септальных перегородках. Этому соответствовала и биохимическая незрелость их легких.

Активация фосфоинозитидного пути

Длительная инфузия 0,01%-ного раствора миоинозита беременным крысзм уже в первые сутки привела к подъему его уровня в крови в 4,5 раза в сравнении с контролем. На протяжении вторых и третьих суток наблюдении концентрация шоинозита поддерживалась на таком же высоком уровне. У плодов к ганцу эксперимента концентрация миоинозита в крови была в 2,9 раза выше, чем в контроле. (Р< 0,001)^ Введение инсулина плодам in-utero на фоне постоянной инфузии миоинозита не повлияло на его содержание в их крози. На 21,5 сут гестацки его концентрация в крови превысила показатель в контроле в 3 раза (Р<0,001).

Исследование ПАС легких плодов после непрерывного трехсу-. точного введения беременным крысам шоинозита по'сазало явное возрастание функциональной активности легочных сурфакзантоз (табл.4). Повышение ГОЛ указывало на .усиленную продукцию ЛС в альвеодоцитах 11 типа. Введение инсулина плодам внутриутробно на фоне непрерывной инфузии миоинозита тормозило стимулирующий аффект шоинозита. Уменьшение ПШ срезов легких плодов свидетельствовало о замедлении морфологического созревания ССЛ.

Анализ спектра липидов легких плодов поаде непрерывной инфузии миоинозита' показал повышение содеркагия лецитина в 1,1 раза (Р<0,05) и фосфатидилинозита в 1,2 раза (Р<0,05). Инсулин, введенный плодам in utero при избытке миоинозита в их крови, привел к уменьшению содерзказкя в их легких фосфатадкл-глицерина в 1,8 раза (Р<0,001) и сфингомиелина в 1,4 раза

Таблица 4

ПН легочных экстрактов и ППМ сревов легких плодов после непрерывного введения 0,01%-ного раствора ыиоиноаита в течение трех оуток

ПН

Серия опытов мН/м ИС

■ стат. мако. мин."

1. Контроль п - 46 (Б пометов) 35,0+1,02 46,3+0,98 18,1*1,07 0,88+0,030 15,5+0,79

2. Мионноаит г. —77 (7 пометов) 27,8+0,77 42,3+0,66 11,7+0,56 1,14+0,021 19,3+0,45

3. Миошюэит + инсулин п - 64 (7 пометов) 45,9+0,73 54,0+0,68 23,6+0,78 0,78*0,014 11,8+0,59

Р1-2 Р1-Э Р2-3 <0,001 <0,001 <0,001 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,01 <0,01 <0,001

- за -

(P<Q,Q1).

Введение миоинозита беременным самкам привело к достоверному подъему фракции монофосфоинозитэдов (Р<0,05) и сниаенио уровня трифосфоинозитидов до 25,4+1,141, что в 1,4 раза • (Р<0,001) превысило значения в контроле (35,2+1,091), что свидетельствовало об активации процесса гидролиза полкфосфоилози-тидоз. Однако инсулин существенно тормозил этот процесс, что отравилось в достоверном возрастании фракции трифосфоинозитидов до 32,3±0,68% (Р<0,001).

На фоне избытка ышиноаита при алектронно-микроскопичес-ксм ксследованки в альвеолоцктах II типа, обнаружено явное увеличение числа цитофосфолипосом в апикальной части клеток и вокруг ядра. Помимо пластинчатых, телец'в АЦ II типа отмечено больное количество митохондрий с четкими кристами. Во всех аяьвеорлярных клетках II типа имезтся мультизезикулярные тельца. Практически во всех просветах альвеол отмечено значительное скопление пластинчатых телец с четкими осмиофдльными мембранами, в некоторых клетках наблюдаются признаки из развертки. В совокупности эти признаки свидетельствовали об ускорении морфологического созревания ССЛ плода на фоне избытка миоино-зита. ' • • .........

Введение инсулина при постоянной ннфузии миоинозита привело к сякжеЕиа количества цитофосфолипосом и в апикальной, и в базалъвой части клеток.

Таким образом, миоинозит, постоянно поступающий в организм плода при внутривенном - введении его саже в последние сроки беременности, не только не тормозит, а, напротив, стимулирует процесс биохимического, морфологического и функционального созревания легких. Инсулин, введенный в организм плода Енутриутробно, тормозит стимулирущий эффект шюинозита.

Сурфактантная система легких плода при введении форбол-12-миристат-13-ацетата и нифедипина " '

Введение аналога диацилглицерола - форбол-12-миристат--13-ацетата плодам in situ сопровождалось повышением поверхностной активности их легких. Об этом свидетельствовало пони-

жение всех регистрируемых показателей ЕН исследуемого экстракта. ШМ, отражающее! внутриклеточные запасы сурфактанта, татаке возрастал. Как показали наш исследования, такое повышение ПАС легких плодов могло произойти за счет повышения в 1Д раза количества в них лецитина (Р<0,05), являющегося основным поверхностно- активным компонентом легочных липидов.

Введение нифедипива беременным крысам не только не понизило поверхностную активность легочных экстрактов плодов, а, напротив, способствовало значительному понижению поверхностного натяжения и повышению индекса стабильности. Такие сдвиги ПАС, как и возрастание ППМ, свидетельствовали о повышении функциональной активности легочных сурфактантов плодов .под действимем нифедшшза. Это было подтверждено повышением в 1,1 раза (Р<0,05) содержания лецитина.

СУРФАКТАНТНАЯ СИСТОЛА ЛЕГКИХ ПЛОДА И УРОВЕНЬ МИОИНОЗИТА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

ССЛ плода 1г уровень миоинозита при физиологической ' и осложненной сахарным диабетом беременности у крыс

По мере увеличения сроков гестационного развития с 19,5 до 21,5 сут ПАС легши плодов при физиологической беременности возрастали (табл.5). У плодоз-беременных крыс с аллоксановым диабетом в эти сроки такме происходило возрастание функциональной активности ЛС, но во все сроки исследования - функциональное созревание легких плода при осложненной беременности отставало от показателей контроля. У новорожденных крысят здоровых самок ПАС экстрактов легких были такими же, как и у плодов 21,5 сут гестации. У новорожденных больных диабетом крыс Сшш отмечено повышение ПАС легких в сравнении с плодами 21,5 сут развития,. что указьшало на напряженность -продукции ЛС, но оно значительно отставало от показателей в контроле.

Уровень глакозы в сыворотке крови плодов при физиологической беременности характеризовался постоянством, как и у плодов больных диабетом крыс. У новорожденных при экспершен-

•Таблица Б

Поверхностное натяжение экстрактов л ППМ срезов легких плодов и новорожденных при аллоксаноЕом диабете у беременных крыс

Сроки геотации оут Сорил опитов ПН ППМ (уол.ед.)

мН/м ис

стат. | макс, МИН.

1 ' 2 3 ] 4 5 { 6 7

19,5 ■I. 1. Контроль п - 49 (6 пометов) 2. Аллокоановый диабет п - 42 (5 пометов) Р1.1-1.2 48,4+1,12 55,8+1,66 ' <0,01 59,3+2,11 62,4+1,00 32,711,00 35,9+0,95 <0,05 0,60+0,019 0,51+0,011 <0,001 7,9+0,91 5,0+0,74 <0,05

20,0 . П. 1. Контроль п - 61 (6 пометов) 2. Аллокоановый диабет п - 47 (Б пометов) Рп.1-11.2 44,7+1,15 50,5+0,79 . <0,01 Б6,311,17 61,4+0,95 <0,01 20,1+1,07 30,7+0,74 <0,01 0,81+0,013 0,69+0,015 <0,001 10,7±0,95 7,0+0,98 <0,05

Продолжение таблицы 5

1 2 3 4 5 6 7

21,5 III. 1, Контроль п - 48 (5 пометов) 2. Аллокоановый диабет п - 42 (Б пометов) Pill.1-1II.2 42,310,66 48,111,09 <0,01 50,011,10 57,610,92 <0,001 19,411,13 27,011,88 <0,02 0,9010,020 0,7510,024 <0,01 14,710,66 11,610,73 <0,02

Новорож-1 денные IV. 1. Контроль п - 56 (7 пометов) 2. Аллокоановый диабет п - 48 (6 пометов) PlV.l-IV.2 40,511,18 45,6+0,99 <0,01 45,711,76 52,4+1¿88 <0,05 17,710,19 21,410,96 <0,01 0,9210,031 0,8010,013 <0,01 17,410,91 12,7+0,81 <0,01

Pl.l-H.i Pll.l-lll.i PlII.l-IV.l Pl.2-11.2 PlI.E-III.2 Pill.2-IV.2 <0,05 <0,05 <0,01 <0,05 <0,05 <0,001 <0,01 <0,01 <0,05 <0,001 <0,01 <0,001 <0,01 <0,05 <0,01

тальном диабете содержание глюкозы в сравнении с плодами 21,5 сут гестации снизилось в 4 раза. Количество ИРИ и в опытной, и в контрольной груше возрастало до мере увеличения сроков гес-тационного развития. У здоровых новорожденных произошло достоверное снижение ИРК после роядения до 121,4±13,41мкЕД/ш, в то время как у крысят больных диабетом крыс в период новорожденное™ уровень ИРК оставался таким же высоким (458,6±21,64 мкЕД/ыл), как и у плодов, что и привело к развитию у них гипогликемии. ■ .

, Содержание миоинозита сыворотки крови и в опытной, и в контрольной группе по мере увеличения сроков гестационного развития до 20,5 сут продолжало нарастать, однако во все сроки наблюдения у экспериментальных животных оно было выше контрольного соответственно в 1,3 и 1,7 раза. Перед рождением количество миоинозита в контрольной группе снизилось в 1,6 раза в сравнении с предшествующа днем, а у экспериментальных животных продолжало нарастать (рис.1).

У новорожденных здоровых крыс количество миоинозита еще больше снизилось в сравнении с 21,5 сут гестации, но у новорожденных крысят больных диабетом самок оно оставалось таким же высоким,, как и у зрелых плодов.

В околоплодных водах содержание миоинозита при физиологической беременности возрастало до 20,5 сут гестации, а на 21,5 сут, перед рождением, снизилось. При беременности, осложненной сахарным диабетом, оно оставаясь стабильно высоким, превышая в 2,7 раза значения в контроле.

Между интегративным показателем поверхностной активности экстрактов плодов - индексом стабильности (ИС) и содержанием миоинозита при физиологической беременности выражена прямая корреляционная зависимость: коэффициент корреляции г - 0,84 (Р<0,01). Такая же прямая корреляционная зависимость имеет' место до 20,5 сут и при осложненной диабетом беременности при г - 0,79 (Р<0,01). При беременности,, осложненной диабетом, содержание миоинозита в околоплодных водах остается "таким высоким во все сроки наблюдения. Функциональная зрелость легких в это время значительно уступает по всем показателям в контроле.

мкмоль/мл

9 8 -7 -• 6 •5 4

3 + 2 1 +

п

I

19,5

20, Б

21,5

новорожд. Дни геотации

Рио.1. Содержание миоиноэита в сыворотке крови плодов при аллоксаловом диабете у самок: | [ - контроль; \/// ~ аллокоановый диабет.

ССЛ плода и уровень миоинозита при физиологической и осложненной сахарным диабетом беременности у кроликов

По мере увеличения сроков гестационного развития о 24 по 28 дни и у плодов кроликов ПАС легких в контрольной группе нарастали. Постепенное увеличение коэффициента стабильности (КС), пузырьков воздуха, выжатых из ткани легких, свидетельствовало о нарастании секреции ЛС на поверхность альвеол. Внутриклеточные запасы сурфактанта, определяемые методом поляризационной микроскопии, также были высокими. Такое же направление сдвига ПАС легочных экстрактов плодов кроликов отмечено и при дитизо-новом диабете по мере увеличения сроков внутриутробного развития. Но в каждой группе на 24 и 28 дни исследуемые показатели ПН, КС и 13ПМ свидетельствовали о запаздывании функционального созревания ССЛ, наиболее отчетливо отразившемся у новорожденных.

Уровень миоинозита на 24 сут в опытной группе был вше, чем в контроле в 1,3 раза (Р<0,02), а на 28 сут - в 2,3 раза (Р<0,001). В бронхо-альвеолярном смыве (БАС) легких плодов на 24 и 28.дни содержание миоинозита нарастало в обеих сериях, но в каждый срок наблюдения эти показатели достоверно не отличались. Однако, если сразу после рождения количество в контрольной группе снизилось в сравнении с показателями 28 сут геста-ции в 6,6 раза, то в бронхо-альвеолярном смыве у плодов при дитизоновом диабете у крольчих не только не снизилось,, но и продолжало увеличиваться (рис.2).

Таким обрззом, функционально зрелой ССЛ новорожденного кролика соответствуют низкие показатели содержаний в бронхо-альвеолярном смыве миоинозита. Е условиях зке дитизозового диабета, когда функциональное созревание ССЛ у крольчат было замедлено, количество миоинозита в БАС новорожденных было таким же высоким, как и у плода.

Миоинозит нмоль/мл

4 --

2 -

1

24

28

новорожденные Дни геотации

Рис.2. Содержание миоинозита в БАС плодов кроликов • • при дитизоновом диабете: -

опыт; - контроль.

УСКОРЯЮЩИЕ И НОГШЛИЗУЩИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ И НАРУШЕННОЕ В УСЛОВИЯХ ДИАБЕТА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОЗРЕВАНИЕ ССЛ ПЛОДА

3

Наиболее аффективно ускорял функциональное сзвровааве СИЛ плодов, крыс при физиологической беременности аденсзш~5'-?ри-фосфат, вводимый парентерально в деза 10 ыгЛ.ОО г в течение 16,5-18,5 сут. Наряду с певнзениеы ПАС легочных экстрактов произошло и возрастание показателя поляризационной микроскопии.

Эффект от применения в же сроки аденозкяа, адено-ззш-5*-монофосфата и аденозиа-5'-днфосфата был менее выраженный.

- 44 -

йнтраамниальное введение эсоенциале также при физиологической беременности в количестве 0,2 мл привело к достоверному понижению ПН всех регистрируемых показателей экстракта легких плодов, что свидетельствовало об ■ ускорении функционального созревания легких. '

Эсоенциале и аденозин-Б'-трифосфат оказывали в нагих исследованиях нормализующее воздействие ва функциональное созревание ССЛ плодов крыс, больных аллоксановым диабетом. При этом главным действующим началом эсоенциале являются так называемые зссенциальные фосфолипеды (субстанция EPL, входящая в состав фосфатидилхолина - основного компонента сурфактант'а). Ускоряющий и нормализующий эффект аденозин-Б'-трщюсфата обусловлен, по-вздимому, воздействием препарата на обнаруженные в легком пуринергические рецепторы (t»i.Qriesse et al., 1991) и специфические системы транспорта аденозина (D.Das, H.Steinberg, 1933).

Нормализация инсулином углеводного обмена у беременных самок, больных диабетом, за 2 недели до зачатия и во время беременности восстановила нарушенный процесс функционального согревания ССЛ плода.

Совместное применение витамина А и каряитика также нормализовало -ПАС -экстрактов легких плодов -при беременности,- сопровождаемой диабетом. Восстанавливающее воздействие витамина А мсжет найти объяснение в усилении им продукции глюкокортикок-дов (С.Ram, G.Misra, 1975), которые являются мощными активаторами синтеза поверхностно-активного материала в легких (C.Mendelson, V.Boggaram, 1391)Ретинол обладает и антиокси-дантными свойствами, которые при диабете, сопровождающемся усилением свободно-радикальных процессов, могут оказать защитное действие на ССЛ. Карнитин принимает важное участие" в обмене кирных кислот, необходимых для синтеза легочного сурфактан-та (M.L.Haipern et al., 1977).

Введение нифедипина заметно не изменило функциональной активности легочных сурфактантов плодов самок при беременности, осложненной сахарным диабетом. " '

- 45 -ЗАКЛЮЧЕН НЕ

Изложенные результаты экспериментальных исследований позволяют сделать 'заключение, что последствия1 влияния избытка инсулина на функциональное и биохимическое созревание СИЛ определяются его концентрацией в ¡фови у плода, а такте уровнем в ней глюкозы, миоинсзита и некоторыми другими метаболическими сдвигами, характеризующими диабет у беременныЕсть Есе основания полагать, что действие этих фактороз опосредуется адеяилатциклазпой и фосфоинозитидной мессенджерпнпги системами. Какова взаимосвязь компонентов этих систем и последовательность их включения в сложный механизм повреждения ССЛ плода при диабете у матери, предстоит выяснить. И тем не менее, только на примере действия инсулина ясно, что различные влияния на вторичные мессендиеры и комбинаторные взаимодействия ме:яду ними определяют возникающие' виды биологических реакций (Т. ЕасЗетасЬег еЬ а!., 1994). В этом смысле проблема регуляции " образования легочных сурфактантов смыкается с общими проблемами биологии клетки, и их освоение весьма эффективно для понимания патогенеза СЩР. новорожденных при диабете у матери. . . .

Возникая на уровне альвеолоцитов 11 типа, нарушения регуляции их функции под действием избытка инсулина, вероятно, распространяются на ' органный уровень и заканчиваются расстройствами регуляции деятельности интегративных систем организма. Клиническим проявлением этого является синдром дыхательных расстройств новорожденных.

Тагам образом, ведутпим патогенетическим звеном в формировании этой тяжелой дыхательной патологии являются расстройства регуляции, в том иди ином виде имеющие место при всех патологических процессах {Г.Н.Крыжановский, 1989,1930,1996).

ВЫВОДЫ

1. Первичная ннсулиновая недостаточность при экспериментальных "хшичегаак" моделях диабета у взрослых крыс, сопро-воддаащзяся выракснвш подъемом глюкозы и шоинозита з крови, приводит к сшгаешш ПАС экстрактов легких. ПАС бронхо-альвео-

Рис.3. Схема вероятного механизма развития СДР новорожденного при диабете у беременной.

лярных смывов при этом не изменяются, что свидетельствует о торможении синтеза легочных сурфактантов в альвеолоцитах II типа без выраженного изменения их секреции.

2. Избыток инсулина в крови плода при диабете у матери тормозит созревание ССЛ.

3. Инсулин, введенный плодам внутриутробно, тормозит стимулирующий зффект адреналина и миоинозита на функциональное и биохимическое созревание ССЛ плода.

4. Гипогликемия и понижение содержания миоинозита в крови у плода без изменения содержания инсулина (при непрерывной ин-фузии инсулина в вену беременным крысам в течение трех суток) не влияют на биохимический состав и функциональные свойства легочных сурфактантов.

5. Гипогликемия в сочетании с гиперинсулинемией после внутриутробного введения плодам инсулина, ослабляя гидролиз трифосфоинозитидов легких, понижает функциональную активность легочных ПАВ и замедляет биохимическое созревание ССЛ плода.

6. Умеренная гипергликемия (выше в 1,9 раза сравнительно с контролем) и гиперинсулинеыия (выше в 1,2 раза сравнительно с контролем) в крови 'у плода "при введений ' беременным крысам 25%-ного раствора глюкозы приводит к увеличению содержания трифосфоинозитидов в его легких и замедлению функционального и биохимического согревания ССЛ плода. Выраженная гипергликемия (выше в 4,5 раза сравнительно с контролем) и гиперинсулинемия (выше в 2,4 раза сравнительно с контролем) при введении беременным крысам 40%-ного раствора глюкозы сопровождается увеличением содержания трифосфоинозитидов в легких плода и. ускорением биохимического и функционального созревания его ССЛ.

7. Своевременная нормализация углеводного обмена у беременных животных, больных диабетом, до и во время беременности способствует восстановлению ПАС легочных сурфактантов плода.

8. шны лития, усиливая гидролиз трифосфоинозитидов в легких плода при умеренном диабете у беременных крыс и уменьшая содержание миоинозита в крови,'повышают функциональную активность легочных сурфактантов плода. Введение ЫгСОз беременным крысам на фоне тяжелого диабета не влияет на распад трифосфоинозитидов в лег гам плода, содержание миоинозита в его крови и фунтащэнальнув активность ПАВ легких.

- 48 -

9. Аналог диацилглицерола - вторичного мессенджера фосфо-иновшидного пути внутриклеточной сигнализации - форбол-12-ми-ристат-13-,ацетат стимулирует функциональное и биохимическое созревание CCI плода.

10.' Аденозин-5'-трифосфат, нифедишш и эссенциале усиливают функциональную активность CCI плода при физиологической беременности. Аденозин-5'-трифосфат и эссенциале восстанавливают нарушенный процесс физиологического ЛС при сопровождаемой диабетом беременности.

11. Определение содержания мшикозита в околоплодных водах является одним из критериев зрелости ССЛ плода при осложненной диабетом беременности. Прямая корреляционная зависимость ■ между ПАС легочных экстрактов плодов (до 20,5 сут геотации) при физиологической и сопровождаемой диабетом беременности у крыс и увеличением содержания миоинозита в околоплодных водах доказывает наличие функциональной связи между этими явлениями.

12. Увеличение количества миоинозита в бронхо-альвеолярных смывах новорожденных крольчат при дитизоновом диабете у беременных самок свидетельствует о снижении функциональных возможностей их CCJI1 " '

СПШЖ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕПЕ ДЙССЕРТА1ЩИ

1. Изменение легочной сурфактантной системы и Биологически активных веществ при патологии легких //Псзркгздэкие и регуляторные процессы организма. Тез.докл. 3-го Есес.съезда патофизшлогоз. М. - 1982. С.214. Соавт.: И.А. Серебровская, З.В.Еюль, В.В.Шишканов, Г.М.Елисеева, М.Б.Жангэлова, Х.М.Баи-манова, Г.В.Баранова.

2. Состояние сурфактантной системы легких при нарушении секреции инсулина в эксперименте //Теоретические,к клинические аспекты патологии дыхания; Куйбышев. - 1983. - С.64165. Соавт.: И.А.Серебровская, Э.Е.Бюль, Г.{¿.Елисеева.

3. Опыт изучения патологии сурфактантной системы легких ' //Вопросы патологической физиологии в зкопершентке и клинике. Алма-Ата. - 1984. - С.49-БВ. Соавт.: И.А.Серебровская,

Э.В.Бюль, В.В.Шишканов, Х.М.Байманова, Г.М.Елисеева, Б.А.До-роватовский, Б.Н.Вахрушев.

4. Сурфактантная система легких у взрослых животных при изменениях концентрации глюкозы и инсулина в крови' //Вопросы патологии эндокринной системы. , Алма-Ата, 1984. - С.66-68. Соавт.: Г.М.Елисеева, И.А.Серебровская.

5. Развитие сурфактантной системы легких у плодов при изменениях концентрации глюкозы и инсулина в крови //Вопросы патологии эндокринной системы. Алма-Ата, 1984. - С.68-71. Соавт.: И.А.Серебровская, Е.В.Зыкова.

6. Устройство для непрерывной внутривенной инфуаии с минимальной заданной скоростью: Информационный лист N 16-84. Караганда, ЦНТИ. - 1984. - 3 с. Соавт.: Б.Н.Вахрушев.

7. - Получение стабильной гипергликемии в течение трех суток у необездвиженных беременных крыс //Ешл. аксперим. биологии и медицины. Депонированные научн.работы. М., 1986. - N 1.

6 о. Соавт.: И.А.Серебровская, Б.Н.Вахрушев.

8.- Патогенез и профилактика нарушений развития сурфактантной системы легких плода при диабете у матери. Караган-

• да. - 1986. - 11 С; Соавт.: И.А.Серебровская.

9. Ускорение развития сурфактантной системы легких плода ретинола ацетатом и карнитином в эксперименте //Еспр.охраны материнства и детства. - 1986. - Т.31, Н 7. - С.68-70. Соавт.: И.А.Серебровская.

10. Ускорение созревания сурфактантной системы легких плода при экспериментальном диабете у матери //Проблемы сахарного диабета. Гурьев, 1986. - С.63-65.

11. Комплексное биофизическое исследование сурфактантной системы-легких //Информационный лист N 107-86. Караганда, ЦНТИ. - 1986. - 4 с.

12. Состояние сурфактантной системы 'легких плодов при изменениях инсулиногенеза //Нереспиратиорные функции легких. Ленинград. - 1988. - С.56-59.

13.'" Влияние некомпенсированного диабета матери на сурфак-тантную систему легких плода и возможности воздействия на ее созревание //Вопросы эндокрино логии. Алма-Ата, 1989. -С.30-32. Соавт.: И.А.Серебровская.

14. К вопросу о профилактике синдрома дыхательных рас-

стройств //Тез.докл.Респ.научно-практической конференции эндокринологов. Душанбе, 1989. - 0.59-50. Соавт.: К.А.Сереб-ровская.

15. Состояние сурфактантнсй системы-легких плода в условиях моделирования различных вариантов его глакоэо-инсулиново-го статуса при некомпенсированном сахарном диабете у матери //Тез.докл.III Бсес.съезда эндокринологов. Ташкент, 1989. -С.389. Соавт.: Н.А.Сереброаскгя.

16. Нарушение метаболизма легочных биологически активных веществ и их коррекция //Тез.докл. IV Бсес.съезда патофизио-логоз.. -Москва, 1939. - С.1113. Соавт.: И.А.Серебровская, Х.Ы.Еайыакова, В.А.Дороватовскин, Г.М.Елисеева, Л.Г.Фомич.

17. Комплексное исследование поверхностно-активных свойств легочных сурфактантов //Сурфактактная и антисурфактантная система легких. Тез.докл. 1-ой вау"шо-щ)ачЕкческой конференции. Харьков, 1939. - С.37-39. Соавт.: И.А.Серебровская, З.В.Бюль, Е.А.Дароватовсккй, л.Г. Фс-кич.

18. Состояние сурфачтантной системы легких плода при гипер-кетонемии у беременных ¡фыо //Сурфактантная и антиоурфак-тантная система легких. Тез.докл. П-ой научно-практической конференции. Харьков. - i990. - С.14-15.'

19. йвменение поверхностно-активных свойств легких после введения изолированных панкреакачеокш. островков в легочное сосудистое русло //Патол.фкзиод. и эксзерии.терапия. - 1991. - N 1. - С.50-52. Соазт.: И.А.Серебровская, Л.К.БыстреЕскзя.

20. Включение 14С-глюкозы в лшщцы легких крыс, больных аллоксановым диабетом //Сурфактантная и антисурфактантная система легких. Тез.докл. II 1-й научно-практической конференции. Ялта, 1991. - С.47-48. Соавт.г Г.Г.Утепова.

21. Endo- and exogenous factors In disturbances of function of pulmonary surfactant system and their correction //Abstr. Constituent Congress International Society for Pathophysiology. Moscow, May 28 - June 1. - 1991. - P. 148. Coauthor.: J.A'.Serebrovskaja,' V.A.Dorovatovskii, " E.V.Byul, L.G.Fomicn.

22. Восстанавливающее и регулирующее воздействие альфа-то' коферола и ретинола при повреждении и нарушении развития

сурфактантной системы легких //Клиническая витаминология.

Тез.Всес.конференции. N 7, 1991. - С.247-248. Соавт.: И.А.Се-ребровская, В.А.Дороватовский.

23. Поверхностно-активные свойства легких плодов при раз-

■ ных вариантах течения сахарного диабета в эксперименте //Сур-фактантная.система легких в норме и патологии. Тез.докл. IV научно-практической конференции. Ялта, 1992. - С.39-40.

24. Поверхностно-активные свойства легких плода при осложненной сахарным диабетом беременности у матери //Материалы I Конгресса диабетологов Центральной Азии. Алматы, 1994. -С.8-10.

25. Комплексное исследование поверхностно-активных свойств фаринго-трахеальных аспиратов новорожденных и задних околев плодных вод как показателей зрелости легочной ткани //Неин-вазизные методы диагностики. М., 1995. - С.43. Соавт.: Э.В.Еюль, Н.А.Пирцхалава, Л.Г.Фомич.

26. Сурфактантзая система легких плода при экспериментальном сахарном диабете и патогенетическая профилактика нарушений ее созревания //Здоровье населения Республики Казахстан и пути его улучшения. Алматы, 1995. - С.233-235.

27. ■ Способ извлечения околоплодной жидкости у"беременных крыс и кроликов в разные сроки внутриутробного развития //Информационный лист N 185-95. Караганда, ЩШ1. - 1995. -2 с.

28. Усовершенствованный метод выделения полифосфоинозити-дов легочной ткани плода в эксперименте //Информационный лист N 184-95. Караганда, ЦНТИ. - 1995. - 2 с.

29. Определение миоинозита в околоплодных годах как показателя зрелости сурфактантной системы легких плода //Информационный лист N 183-95. Караганда, ЦНТИ. - 1995. - 4 с.

30. Способ определения 'зрелости внеклеточного компонента сурфактантной системы легких новорожденных по количественному изменению миоинозита в бронхо-альвеолярвЕоз* смыве в эксперименте //Информационный лист N 186-95. Караганда. 1995. -4 с. Поазт.: И.А.Серебровская, Л.К.Романова.

31. Влияние миоинозита на поверхностно-активные свойства легочных сурфактантов- плодов крыс //Здравоохранение Казахстана. - 1996. - N 3."- С.54-56. -

32. К вопросу о вздержке созревания сурфактантной системы

легких плода при экспериментальном сахарном диабете //МатЛ Конференции диабетологов Центрального и. Северного Казахстана. Караганда. - 1996. - С.24-27.

33.' Поверхностно-активные свойства легких шюдоз и содержание миоизозита при экспериментальном сахарном диабете //Материалы II Международного Конгресса диабетологов Центральной Азии. Ташкент, 1996. - С.19-20.

34. Experimental results on surfactant system of infants born to mothers with diabetes mellitus //Abstr.Ihird regional Congress of pediatrics of Central Asia and Turkey with international participation. Aimaty, 1996. - P;175.

35. Сурфактантная система легких плода и некоторые биохимические показатели при экспериментальном моделировании различных вариантов глюкозо-инсулиноЕого статуса //Патофизиология органов к систем. Типовые патологические процессы. Тез. докл. I Российского Конгресса по патофизиологии с международным участием. М., 1995. - С.115.

35. Роль инсулина в аденилатциклазной и фосфошюзитидной системах передачи сигнала в альвеолоциты II типа //Медицина И экология. - 1997. - N 1. - С.

37. Фосфокноаитидный ответ и поверхностно-активные свойства легких плодов при экспериментальном сахарном диабете //Диабет в Казахстане. Караганда, 1997. - С.42-45.

33. Проблема гормональной регуляции продукции легочных сурфактантов и роль в ней мессенджерных систем //Физиология человека. - 1997 (принято в печать). Соазт.: К.А.Серебров-ская.