Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Состояние перекисного окисления липидов и лизосом сердца, печени и почек при чрезмерном стрессовом воздействии

Государственный медицинский университет им. Н. Тестемицану Республики Молдова

На правах рукописи

ЧАВДАРЬ Ирина Афанасьевна

УДК: 616-001.36+616—008.94-616.12+616.36+616.6—092

СОСТОЯНИЕ ПЕРЕПИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И ЛИЗОСОМ СЕРДЦА, ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК ПРИ ЧРЕЗМЕРНОМ СТРЕССОВОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

14.00.17— Нормальная физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Кишинев — 1992

л

/ .

/

Работа выполнена в Государственном медицинском универси тете им. Н. А. Тестсмицану Республики Молдова.

Научный руководитель:

заслуженный деятель наук, доктор медицинских наук, профсс сор Кобы.гянский Леонид Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, заведующий кафедрой акушерствс гинекологии и искусственного осеменения сельскохозяйственны животных Санкт-Петербургского ветеринарного института, прс фессор Степанов Г. С.

руководитель группы биохимии, адаптации и функциональны нарушении Института физиологии АН Республики Молдова, вс дущий научный сотрудник, кандидат биологических нау Мамалыга Л. М.

Ведущая организация: Государственный университет Республики Молдова Защита состоится « С-СС-С^Сс^у 1992 г. на заседани

специализированного Совета Д. 012.08.01. по защите диссертаци на соискание степени доктора наук по специальности «Нормал! пая физиология» (14.00.17.), при Институте физиологии Акад< мни наук Республики Молдова (277028 г. Кишинев, ул. Акаде мическая, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке универм тета им. Н. А. Тсстемкцану и Института физиологии АН РМо; дова.

Реферат разослан « Н » cc.cc? 1Л<Яу 1992 г.

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат биологических наук

Тугоц

Наталья Борисовь

.v'."í* л-

ОБЗДН XAPAI5.TEFKCTККЛ PABOTN

Джтуог-лресгь гггсЗ.г^:'::. я последнее г.рти пояпют.оъ гюго-'шелзш» дшпи.'э о слиянии чрез^рчого стрссса ría гозшштсга-»'«? -псп.'ппгоек!;;: и союптскрх »!*.6o'»pívii"'\ { Чзвпц.

1873; Здоров, 1У73; 1G77, 1.'г<?рсон, 19*35 0:е'^нг;о

часто регистрирует.?:.; ссшикковзшге патоногичадких состоят;;» при чрязг-прт'ы-: стрессах, bkímvwwíx пгшотрясешапм, п!, ор-'риямч па ?р'лиспорт0 и др. ( 1'ул^пп, 1970; Герман». 1Р03; ¡'ГобьдаТПСП!:!, 1975; ?! Др, 1ВД" ).

Вгссяорво, что з ответт« реакциям оргяиит га еого стр-осопс> гоядегствио п?(;а,:опг?.Л1у;о роль играет соется-н;:е Л1зссс?,я:ого пппер-тга ( ГКжрозсгспЗ и ¿р. , 1 ove; Исбыхлне-iCiíC. 1905;Ельски!^ ü др. ,l№7). одною до сих пор о-ггпглса гс-пешл'и ».яхаикэдл* акхспапии гидрофан и г.оврегдоиич :;::зссс!;;".г.: «»•Рраи, пркг.олящяо i'. дочзбпапвш процессам в юк>г;->.

По дячиш литературы, рель основного яглна >> чатогея'гг.-? P'iíj.'is'.'-mj.TX последзткий '.т^зкорпогс стрссся, в том. число и ррс; - спнлроча, игр'^т ГШОГ.С;-: г, р?-.впр?гстсп r результат'" y—nv

С'Н'П Д^Лтга СТ'Я К И«Ч,прчС!!1реЛ'!>Л<гш1Я 1ф01'".1 -3 С>;Су;:'".С1С'

Р70Л'?. ( Гпоздоо, Солоз'рг., 1УС'1, !"ут<??, 1931). К?г«?стт:о, 'íto ripu iv.wá?. состояния", сопро^о;*;;'-.:r<u:;:''~

ироч^опп ""ронногоге OÍ'ÜÍC'OH"'! .""'т'п'от! í IIVI ), что upun'vnrr в 1 <;Ч«то, к ¡юкро^'пк'';-!

prv¡ ( ¡1 ,1374,' WS; /"!!;:'!», 1578; Бур.тс-ота ,

ю?::; !^opoo!tt 1933, I*.'?.«; ;t-ür;n-;n, 18П9, Бчт^ог;.?., нта ). Fe Kctwsrr»«?». что НПЛ «rp.'wjT вакнуэ роль т irmuíw:-« гопрг'де-иич Стлч'Я'брон га<?тпк :г сгй'.'-по'ших структур и в усгорпях тр-чпязтичосгаго • воадайетвпа. Опчзга этот вопрос !;Г'Л!7П№?ски но изучмлел. Н<? исслодогано т'чего состоят» оптчокепдачтчоЯ заплти в рончно гк-рноди чрг?.>:<грного стрессового т-огягН'.сгрия. КрОМЧ ТГОГО Г; ЛГГ^Р'М'УРО ПряКТКЧ<*С1«1 ИЗТ ИЗбЛГД01П«1 ОТр.ЧГЗП-

i.jjx наличие зависимости j¡ircocoí.w« процессов и 1ЮЛ п клетга. ífc^'y тем, не исключено, что причиной повыдеига активности гидрола^ при гсртз - синдроме служи накопление продуктов ГОЛ.

*

Актуальность перечисленных вопросов определили цель и задачи настоящей работы.

Цалъи нашего исследования явилось определение состояния ПОЛ и его значение в изменении свойств лизосом сердца, печени и почек при отдаленной механической травме.

,В соответствии с поставленной целью в рабцте решались следующие задачи:

1. Исследовать активность лизосомалышх гидролаз в органах, непосредственно не подвергаемых механической травме (сердце., печень, почки) и плазме крови при чрезмерном стрессовом воздействии.

2., Исследовать состояние перекисного окисления липидов и шггиоксидантной защити в выше указ шип jx органах.'

■ 3. Определить функциональное состояние кардиомиоцитов, гепатоцитов и реноцитов в динамику развития краш-синдрома.

4. Провести корреляционный анализ изменения активности лизосомалышх ферментов в зависимости от изменения уровня продуктов ЮЛ

5. Определить значение лизосомного механизма в изменении деятельности сердца, печени и почек посредством проведения корреляционного анализа активности лизосом и ACT, ЛЛТ, ДЦГ. ■ ' •

Научная шпкавд исследований. Выявлена фазность изменений не только лизосомалышх ферментов , но и продуктов ГЮЛ, ферментов антиоксидантной заветы при чреамрном стрессовом воздействии; показано ,что в первой ([woe изменения показателей функциональной активности кардиомиоцитов, гепатоцитов и реноцитов, а ташке лизосомалышх' гидролаз, продуктов ГЮЛ, ферментов антиоксидантной защити носит адаитиииий характер и направлены на сохранение гомэостапа ь условиях траьматичс-ско-го стресса. Во второй же фазе наблюдается срыв этих мохшшз-. мов, которые начинают1 уже играть поврбмдгшцу» роль па уровне клетки и организма в целом. Исследована впервые изменение ПОЛ в органам на подвергаемых действию травмы в компрессионном периоде развития краш - синдрома. Показано впервые влияние ПОЛ на активность лизосомалышх гидролаз, которое проявляется Неоднозначно и зайцеит от периода развития патологического

процесса, от вида фзрмеита и определяется тагле оргаиоспеци-фичностью. Исследована активность фзрментов антиоксидантной ¡защиты в компрессионном периоде развития крага - синдрома.

Тсорэттсстая и прмспзчосиаз згкмтюсть. При краш-сиид-роме до развития токсемии в деятельности ливосомного аппарата органов, непосредственно иэ подпоргп<гм!1Х травме, выделяются два периода. В раинчм периода иямсияотся, глазпш образом, общая активность лизосомалыш фрнентов, без суврсткениого отклонения от норм» стабильности >Г'Мбр~н .-¡;зосон и Фермонтя-мш; в позднем периоде развивается дестабилизация мембран ли-зосои и нарастает фермеитс!/ня. Установлена аашсиюстъ ивно-ппимюсти лкяоеомавьяих фермоитоя от степени развития процессов ПОЛ; кроме этого Г',илв.лено( чго в поадад'.«? периоды г:#:пш:я краш-синдрома ешттаетсч щсгивиость зптиокеидзягшлс

Фермента?..

Т. о. .определение уровня продуктов ПОЛ, ф'"р"оптои ант'Д-с'-:г:ид':нт!!ой оаш.итм далт слуотгъ дагщосптсики и пропгсгти-чссгсш прнепаком, определяя тяяэсть и Екрагениостх. раггиткя грзт-сикдгюмт, i:pct/e этого дает возмолюсть обеспечить правильную горр^ктировну пптогежгппоского лечения болмш с !фП! ¡-синдромом.

Осиоптше положения дайной работы пгкмекягатеа иа кафедре патгЗияиолопго ГЬС/ им. Н А. Тостичвдзиу для теоретической подготовки 'студентов в разделе " Экстремам,шга состояния

Методики определения диеновых кзишгат и лиоикзтоков, использованные в работе» внедрены в ЦШЛе ГЫУ им. IL А. Тостоми-цану.

ЛгтроГшрго рдСчзта Основные положения и результат» работы доложены и обсушены на общеинститутской конкуренции по травматологии 25 мня 1991 г. С г'. Кишинев ), на международном учредительном конгрессе общества патофизиологов 28 мая - 1 июня 1991 г. ( г.Москва );на заседании кафедры патофизиологии КГМУ им. Н. Л. Тестемицану 28 апреля 1991 г. ( г. Кишинев ); на пленуме секции N 1 проблемной комиссии N 2 Ю СССР и проблемной комиссии " Экстремальные и терминальные состояния " АМН СССР R7 - 28 сентября 1991 г.

На засуну выносятся следующие положения.

- G -

- при чрезмерном стрессовом воздействии наблюдается фаз-ность изменений показателей функциональной активности клеток сердца, печени и почек, а также лизосом и ЮЛ;

. - отклонения показателей ПОЛ имеют значение в нарушении стабильности лизосомных и клеточных мембран исследованных тканей-, . '■

- роль полученных данных в патогенезе краш - синдрома неоднозначна и зависит от периода его развития.

Структура и объем исследования. Диссертация изложена н; 164 страницах машинописного текста, 26 рисунков, 9 таблиц, 264 литературных источников ( 141 отечественных и 123 зарубежных ),

Материал и метода исследования.

Опыты проводились на крысах-самцах линии Вистар, в количестве 210. Б качестве модели чрезмерного стрессового воздействия послужило сдавденш мягких тканей задних конечностей крыс, методика которой была разработана сотрудниками кафедры патофизиологии ВЮЛА им. Кирова ( Кулагин, 1978 ),

Исходя из задач работы крысы были разделены на несколько групп: ' контрольная, 3, 10, 30, 60, 90 и 120 мин сдавления мягких тканей. В одной серии использовалось -10 крыс.

Об изменении активности лизосомных гидролаз в сердце, печени, почках и плазме крови судили по маркерным ферментам лизосом: арилсульфатааы А и В и кислую фосфатазу. Состояние ПОЛ оценивали по уровню содержания диеновых кшьюгат, диенке-тонов, малонового . диальдегида; об антиокислителыюй защит* организма - супероксицдисмутазе и каталазе es исследуемых органах в динамике развития краш-синдрома. Для оценки состоянш кардиомиоцигов, гелатоцитов и реноцитов определяли активное^ аспартатамикотрасферазы ( АСТ ), атанинамшютрансфераз1 (АЛТ), лактатдегидрогеназы ( ДДГ ) и его изоферментний спект] в тех же тканях при чрезмерном стрессовом воздействии.

После декапнтацш животных извлекали исследуемые орган: и. готовили гомогенат. Для'определения лизосомалышх ферменто в качестве суспендирующей среды использовали 0,25 М раство Захаровы ( РН 7,4 ), содержащей р,001 Ы ЭДТА. Для исследова

- Y - '

ния остальных показателей гомргенат' готовили с использованием в качестве среды выделения фосфатный буфер ( РН 7,4 ).

Для определения общей активности ферментов лизосом гомо-генаты исследуемых органов подвергали 3-х минутной инкубации при ЗГС с тритоном Х-100 ( Serva, ФРГ ) в конечной концентрации 0,1% с целью разрушения липопротеидных лизосомных мембран.

Приготовление материала для определения неседиментируе-мой aicruBHOcTn ферментов лизосом осуществлялось путем центри- , фугирования гомогенатов исследуемых органов на центрифуге "Суперспид 65" (Англия ) при 105000 g в течении 30 мин. Су-пернатант и гомогенат хранили в замороженном состоянии при -20"С. Огтаивание образцов проводили при + 25е 0 .

Все разведения гомогенатов ткани сердца,•печени и почек, необходимые для дальнейших определений исследуемых ферментов, готовили на 0,25 М растворе сахарозы ( РН 7,4 ), содержащей . 0,001 М ЭДТА и на фосфатном буфере'( РН 7,4 ).

В плазме крови, гомогенатах и в надосадочной жидкости сердца, печени и почек крыс определяли активность двух специфических ферментов: кислой фосфат аз и и эрилсульфатас А и В. В гомогенатах этих органов исследовали диеновые коныогаты, ди-епкетоны и мапоновый диальдегид, а также ферменты супероксид-дисмутазу, катадазу, ACT, АЛТ, ДДГ и его изоферментный спектр. Измерения производили на спектрофотометрах СФ - 46 и " Specord-40 М".

Для .определения активности кислой фосфатази и арилсуль-фатаз А и В были использованы методы, разработанные Покровским и соавт. ( Покровский , Арчаков, 1968 )

Активность ферментов выражали, соответственно, в мкмолях фосфата, освободиввегося в результате зпзиматического гидролиза за 1с. на 1 г. белка или л. плазмы крови и шкромолях 4 - нитрокатехола, освободившегося в результате энзиматической реакции за 1 с на 1 г белка. §

Приготовление реактивов производили согласно методике. Определение уровня диеновых коньюгат С ДК ) и диенкетонов ( ДК'Г ) осуществляли в экстракте липидов, полученном из исс- ■ ледубмых тканей tro методу Елай- Дайера в модификации Кейтс

г u -

(1975 ). Измерения производили при длине волны 200-300 им.

Содержание ДК и ДОГ шражали в ед. опт. пл. па 1 г липи-дов . Б экстрактах исследуемых тканей общие липиды определяли по методике, приложенной к набору " Общие липиды " фирмы "LAXEMA" .

Определение малонового диальдегвда производили по методу Владимирова, Арчакова (1972 ). измерения производили при длине волны 585 нм. Содокаше МДА расчитывали по моллярному коэффициенту зкстинкции, образующегося окрашенного комплекса, который равнялся 1.56 х 10 и'рМ"'.

Активность супороксиддисмутазы определяли по методу Mlstra, .Frldovich,(1972). Намерения проводили при длине волны 480 нм и активность ьиражиш в ед активности в 1 с на 1 г белка.

Определение' катала&и проводнлисъ по методу АзОи (1970 ). Активность выражали в нм 1 с на 1 г Сежа. Активность

АОТ и АЛТ исследовали по методике, приложенной к набору " ACT и ■ АЛТ " фирмы " LAXEMA " и выражали в мкмолях пирувата в 1 на 1 г оелка.

Определение обшрй активности ЛДР осуществляли но методу Еергмейера и соавг. (ЮбЬ ) и ниражали в мкмолях НАДН в 1 с на 1 г белка. Изоферыоиты определяли элактрофюретически на системе " Paragon " фирмы " Векшп ".

РЕЗУЛЬТАТЫ сшсгшишх ИОСДВДОШШЙ.

Согласно данным литературы ( Криворучко, 1963;■ Нигуля-ну, 1966; Лысый, 1969; Кулагин, 10VS; Койшшгский, 1085 ), край - синдром вызывает в организме развитие явлений, характерных для травматического шока, о чем сэддотельствуиг и дашшо наших исследований. Так, после uaJto,конин тисков у животных отмечались явления выраженного возОуедони.н, которое даже в условиях наложения тисков проявлялось двигательным Ооспокайотвс •. с ограниченной фиксацией реакции агрессии, мочеиспусканием i дефекацией. В этот же период отмечались изменения оаиошш) общеклинических показателей, поьышеиие ирториального давления, тахинное, тахикардия и гипертермия. Затем еошчшшй возбуждения сменялось угнетением, постепенно нараставшая и ста новивпшся отчетливо выраженным спустя два часа с мамонт;

травмы, к этому тс времени реакция животных на болевые и тактильные раздражения снижались, возникала артериальная гипо-тензия, брадикардия, брадишюе и гипотермия.

Таким образом, как общее состояние тавотных, так н объективно регистрируемые параметры некоторых Физиологических функций свидетельствуют о фазности ответной реакции крыс при крат - синдроме.

Нами изучались ферменты, которые участвупг в трзнсами-нированш аминокислот - ЛОТ и АЛТ. В проведенных исследовали- . ях выявлено снижение активности указанных фэрк-зптов сердца на протяжении всего срока развития крат-синдрома ( рис 1 - 6 ). Динамика изменения аминотрансфораз в ткани печени слчественно отличалась от таковой в ткани сердца;наблюдалось повкзенкэ активности ACT в ранние сроки развития края-сиядрокз, а на 90 мин (¡давления мягких тканей - и АЛТ; ко 2-му ч после воздействия травмы уровни ферментов снижались. В ткани почек содержа-: ние ACT было снижено на протяжении всего срока развития крап-синдрома. Активность АЛТ те, нарастая к 10 шн после воздействия травмы, и в последующие сроки оставалась на высоком уровне.

Таким образом, в условиях прогрессиругерго каруиепня ге-моциркуляции С Селезнев, 1971 ), а также функционального яап-ря?кения в исследуемых органах ( сердце, печени и почтах ) наблюдаются шрадазшше метаболические изменения, которые носят адаптивный характер в начальные периоды развития крат-синдрома, но по мере увеличения срока воздействия стресса на организм эти механизмы истощаются.

В экстремальных условиях' при снижении доставки кислорода к тканям удельный вес гликолиза в энергетике тканей возрастает. Нами определялся фермент ДДГ, который участвует в анаэробном гликолизе и катализирует обратимую реакцию превращения пнрува-та в лакгат.

В ранние сроки развития краш-синдрома в ткани сердца отмечали увеличение ЛДГ, что может свидетельствовать об усиление процессов анаэробного гликолиза, направленного па адаптацию миокарда к экстремальным условиям. По мере увеличепия срока сдавления мягких тканей общая активность ДДГ снижалась или незначительно отличалась от уровня контроля. Изофермент-

ш. ■

Рис.VI.. Изменение" активности доследованию: ферментов в ткани сердца (I явчзш ( 2 ),-потек ( 3 ) дра дикт&яееом едавдевие мягких тканей крас ( сдавление 3 мин )

Рис. 2. Изменение щкжзностл яослэдозшнвх фершнгоз в ттаня сердца ( I ), шчвна ( 2 ) ,почэк ( 3 ) прл длительном сдавивши, мягяах'тканей ■' крыо ( сдавленна ю шз )

Рис. 3. Изменение активности яссяедованннх формантов в ткани оердца ( I ), печени ( 2 ), -шнек ( 3 ) при длительном сдавленна мягкйх тканей mm ( славление 30 мин )

Рис...4. йзшненив активности исследованных ферментов в ткани сердца (I ),' печени ( 2 ), почек ( 3 > при длительном «давлении мягких ткаееЕ крыс ( сдавлвние 60 >дттт )

Рис. 5.

Изменение активности исследуемых ферментов в ткани сердца ( I ), печени ( 2 ), почек ( 3 ) при длительном сдавлешш мягких тканей крыс (сдавяение 90 мин)

Рис. 6.

Изменение агаишооти иошшованных фаршнтав г ткани сердца ( I ), печена С 2 5, пенек ( 3 ) при длительном о давлении мягких тйанвй ^Ф20 ( одавленве 120 ш )

ный спектр , а именно ДЦГ^ , ЛД& на протяжении всего исследуемого срока существенно не изменялся по сравнению с контролем. В ткани печени отмечалось повышение общей ЛДГ только на 3-й мин с момента нанесения травмы, а в последующие сроки уровень ДЦГ был ниже контроля. В изоферментном спектре отмечалось значительное повышение изофермента ЛД5- на фоне снижения общего ДЦГ. Это свидетельствуем о повышении выработки лактата в условиях дефицита энергии. О поралшши печени свидетельствует также преобладание в плазме крови изофермента ДЦГ^.

В ткани почек в первые минуты сдавления мягких тканей отмечалось повышение уровня общей ЛДГ, но по мере увеличения сроков исследования активность фермента снижалась. Изоферментный спестр характеризовался незначительными изменениями как ЛДР, так и ЛДСг, что свидетельствует об интенсивности процессов аэробного и анаэробного гликолиза.

Таким образом, повышение активности АС'Г, АЛТ, ЛДГ в ранние сроки развития краш - синдрома, сменяется понижением их активности в поздние , сопровождающееся повышением их активности в плазме крови. Эти изменения свидетельствует о лабили-зации мембран кардиомиоцитов, реноцитов и, особенно, гепато-цитов.

Проведенные исследования позволили обнаружить и существенную перестройку функционального состояния лизосом, которое проявлялась отклонением от нормы уровня обшей активности изученных ферментов в ткани сердца, печени и почек ( рис 1-6).

Так, в ткани сердца наблюдалось повышение активности кислой фосфатази ( ОКФ ) уже в первые минуты развития краш - синдрома и держалось на высоком уровне на протяжении всего исследуемого срока сдавления мягких тканей, за исключением периода 10 и 60 мин, когда наблюдалось достоверное изменение ее активности. В ткани печени активность ОКФ снизилась к 10 - мин сдавления , но впоследствии отмечалось постепенное повышение его активности , достигая к 120 мин травмагизации 3,25 мкмоль / с / г белка . В ткани почек ,как и в ткани сердца, наблюдалось повышенное содержание кислой фосфатази на протяжении всего срока исследования.

- 17'-

Активность арилсульфатаз А и В (ОАР) изменялась в исследуемых органах также неоднозначно. Так, в ткани сердца активность арилсульфатаз А и В снижалась в первые минуты нанесения травмы, но впоследствии постепенно повышалась до уровня контрольных величин; в ткани печени активность арилсульфатаз А и В достоверно повышалась только к 120 мин травматизации, а остальные сроки значительных отклонений от контроля не наблюдалось; в ткани почек уровень арилсулфатаз А и В с 10 мин нанесения травмы снижался , но с 30 мин отмечалось его повышение

Т.о. , механическое повреждение задних конечностей крыс вызывает ответную реакцию лизосомного аппарата в органах, отдаленных от травмы. Однако, эта реакция проявляется неодинаково в исследуемых органах, что , по всей видимости , связано с их (функциональной принадлежностью и, возможно,активизация изученных гидролаз носит в известной степени адаптивный характер, связанный с реконструктивной функцией лизосом С Покровский, ТутельянДЭУб ). Вторым признаком существенных сдвигов в функциональном состоянии лизосом сердца, печени и почек при крши-синдроме явилось изменение стабильности их мембран. Обнаруженное нами увеличение неседиментируемой активности ли-зосомных гидролаз (НКФ.НАР) в большей степени наблюдалось в ткани печени, в несколько меиьшей-в ткани- сердца и почек. Причем в ткани почек в ранние сроки (¡давления мягких тканей не наблюдалось повышения неседиментируемой активности лизо-сомных ферментов, в то время как в ткани сердца и печени отмечалось достоверное повышение арилсульфатаз А и В уже с первых минут нанесения травмы. Изменения же кислой фосфатазы были незначительными. Несмотря на то, что повышение неседиментируемой активности лиаосомных ферментов достигало значительных величин на начальных этапах развития краш-синдрома, нам вое йй представляется, что оно не сопровождалось деструкцией мембран лизосом. В подтверждение этому можно привести данные активности лнаооомных ферментов в крови: повышение уровня арилсудъфатаа А и В с 90 мин , кислой фосфатазы - 120 мин нанесении травмы.

Наблюдаемая разница в динамике изменения активности ли-госомнмх ферментов - в ткани сердца, печени и ткани почек, но- видимому, объясняется разной функциональной активностью

этих органов. Не исключено, что регуляторные влияния изменяют функциональные и пластические связи между различными органами, например, мелщ сердцем,печенью и почками. В частности, как это наблюдалось в наших экспериментах, регуляторная активация метаболических и лизосомных процессов в сердце и печени может сопровождаться ослаблением их в nonitax, что способно предупреждать выведение из организма необходимых для него продуктов, а в целом, способствовать экономии энергетических и пластических ресурсов организма в условиях стресса. Таким образом, на ранних этапах травматического процесса в основе указанной органоспецифичности лежит различная реакция сердца, печени и почек на регуляторные влияния, что обусловлено неодинаковым по характеру участием данных органов в анализируемом процессе.

Для выявления связи мекду лизосомньши ферментами и энзимами, участвующими в обмене аминокислот и энергетическом обмене, был проведен корреляционный анализ мегвду ними. Отмечанная взаимосвязь в разные периоды краш-синдрома проявлялась неоднозначно и зависела от срока развития патологического процесса и вида фермента.

. Из• вышеизложенного совершенно очевидно, что лизосомы оказывают' существенное регуляторное действие практически на все виды обмена веществ в организме. Этот механизм может реализоваться по различным каналам: через изменение факторов , активирующих и ингибирующих ферменты, через изменение ферментных композиций, регуляцию периода полукизни энзимных белков ( Мертвецов, 1981; Панин,1087 ).

Для нормальной жизнедеятельности метки наряду с различными видами обмена важную роль играет стабильность мембран, а также ее микроструктур. По данный литературы, не последняя роль в этом отводится процессам перекисного окисления липидов ( ПОЛ ). Динамика изменения уровня ДК и ДКГ в ткани сердца, печени и почек весьма любопытна. Так, на 3 мин нанесения травмы отмечалось снижение их содержания во всех органах. По мнению некоторых авторов ( Гуляева, 1988, Cohen,1985 ), первоначальный мощный выброс катехоламинов и некоторых стероидных гормонов подавляет активацию ПОЛ, поскольку в избыточном •

количестве они обладаю!' свойствами " ловушек " супероксидных радикалов. lio это, по - видимому, кратковременный эффект. К 10-й мин воздействия травмы мы уже отмечали повышение уровня '.Щи ДКТ. На 60-й мин наблюдалось уменьшение их количества. Такое фазное изменение уровня продуктов ПОЛ в органах, которое ташке прослеживается и в плазме крови, объясняется многими факторами,в основе которых лежит нейро-эндокринная регуляция . Скорость нарастания малонового диальдегида - конечного про; дукта ИОЛ - во всех исследуемых органах Сыла ниже показателя контроля.

Следует отметить неодинаковую степень активации процессов ПОЛ в исследуемых органах. Так, наиболее выражена она была в ткани сердца, наименее - в ткани печени. Это, возможно, связано как с исходным состоянием антиоксидантной защиты, так и с действием прооксидантов.

Известно, что чрезмерное накопление продуктов ПОЛ приводит к повреждению липидного бислоя клеточных мембран, о чем свидетельствуют и наши данные о динамике изменения содержания внутриклеточных ферментов в плазме крови. Так, период максимального накопления продуктов ГОЛ в исследуемых органах совпадал с достоверным повышением активности исследованных внутриклеточных ферментов в плазме крови. Последующее понижение активности этих энзимов в крови, по-видимому, вызвана увеличением их выведения почками или инактивацией в кровяном русле ( Вилкинсон, 1981 ).

При краш-синдроме в компрессионном периоде отмечались фазные изменения ферментов антиоксидантной защиты. В первые минуты нанесения травмы наблюдалось повышение активности как каталазы, так и супероксиддисмутазы ( СОД ), причем наиболее выраженные изменения были получены в тканях печени и сердца. Па 30 - й мин после нанесения травмы уровни ферментов приближались к контрольным значениям. Активность СОД на 60 - й мин воздействия значительно возросла в ткани сердца и печени, а в ткани почек - на 120 - й мин.

Как следует из наших данных, активность СОД в течение всего периода развития краш-синдрома находилась на значениях, превышающих контрольные, за исключением срока 30 мин. Инте-

ресно отметить, что на фоне повышения СОД не наблюдалось активации каталазы (КАТ), которая разрушает Нг0^, являющуюся ингибитором СОД.

Из вышеизложеиного следует, что наблюдаемая активация ферментов антиоксидантиой защиты мокет быть недостаточна для предотвращения инициации процессов I10JL Накопление продуктов ПОД можт служить сигналом для активации компонентов антиоксидантиой защиты клетки, а также их cle novo - т. е. действовать по принципу обратной связи, что отмечалось с работе Бур-лаковой ( 1983 ).

Кроме того, накопление продуктов НОЛ оказывает влияние г на активность лизоеомннх ферментов, которая изменяется неоднозначно и зависит от органа и вида фермента, ( Так, если в ткани сердца по мере нарастания сод?р?шия про дуктов ПОЛ активность кислой фосфатавы снижается, то активность арилсульфатаз к и в, наоборот, повышается, В ткани печени активация процессов ПОЛ сопровождается поша'гпиоы уровня кислой фэсфатазхы и угнетением активности арадсульфатаз А и В . В ткани почек активируются арилсульфатазы А и Р. и в некоторых сериях - ¡желая фосфатово. Известно, что в лнзосомах содержатся свободная и мёгйраиосвязашшя арилсульфатази fi и В. причем они с мембраной связаны непрочно.■ По-видимому, при усиления процессов ПОЛ гидролазы освобождаются из мембран, что сопровождается их активацией в органах. Повышение те уровня кислой фосфатазы, по всей видимости, вызвано метаболическими изменениями в исследуемых органах.

Таким образом , на фоне гипоксии тканей развивается их эне ргодефицит, активируется процессы ПОЛ, снижается активность ферментов антиоксидантиой защиты, что ведет к повреждению биомембран и выраженной ферментемии. Все эти изменения сопровоздаются параллельным повреждением мембран лизосом, что еще более усугубляет метаболические расстройства в клетках.

ЕЦВОДЦ:

1. Изменение поведенческих реакций животных при чрезмерном стрессовом воздействии, обусловленном сдавлением мягких тканей имеют фазный характер. Каждый период сопровождается характерными изменениями общеклинических показателей, активности лизосомальных гидролаз,интенсивности перекисного окисления азипидо'в и уровня антиоксидантной защиты.

2. Чрезмерное стрессовое воздействие, приводящее к развитию краш-синдрома сопровождается изменениями активности

емшютрансфораэ, наиболее выраженными в ткани печени, характер которых свидетельствует об активации энерго- и белковооб-разователыюй функции органа. По мере развития патологического процесса, и особенно во второй его фазе, эти функции печени угнетаются. \

3. Синдром длительного сдавления мягких тканей приводит к активации анаэробного метаболизма, о чем свидетельствуют изменения активности ДЦГ и ее изоферментов. Общая активность фермента и его катодных фракций в ранние периоды развития травматического процесса повышаются во всех исследованных органах, с последующим снижением их уровня в ткани сердца и печени в более поздние периоды.

4. Ранние сроки краш-синдрома характеризуются высокой общей активностью лизосомних ферментов в тканях всех исследованных органов.. Повышение иесодю,'оптируемой активности гидро-лаа в поздние сроки развития процесса указываю! на лабилиза-щм мембран лиьрссзм.

5. В поздние периоды крат-синдрома ( с 60-й мин ) возникают деструктивные изменении в мембранах клеток и лизосом, о чем смшдетольстнуот повышенно активности в плазме крови как гидролаа, так п АЛТ, ACT, ДЦГ, Преимущественное повышение в ллешые крпъи активности наофегрмеита ДЩ , a raic.se АЛТ и ACT к 00-А мни одаьпсшш мягкий тканей указывают на поражение, в первую очоредь гепатоцитов. ■

Г). Динамика активности ферментной антиоксидантной защити иес-лодуеиъи: органов иые.ч?т волнообразный характер со снижением ( в перьой 4к1зс ) па 31 -¡1 мин процесса, когда отмечается мак-

сшашга© усиление перекисного окисления лвпидов. Последнее выступает главным фактором лобилизации Оиомембран, свндетель-стзом чэго является повшэние активности лнзосомных 'ферритов л носледукэдеП фазе.

Ci'iisois работ, oajtiKEWJtaJEr-cxi по т?я.:а.

1. Ввияниз адаптации и дездаптаг-л:; к гкзакзни на лизозсм-ные к гидроп8р815!сюэ механизмы пр-да - сгащ»:п. / соагг: Сыляяскин Л. IL , Хптроз ILK., Дербента Д. В. к др. // Hvrcp«a;:i' шадукародиого конгресса по патофизиологии, И. г., стр. 51

2. Значение лизосомашшх мехшшиэъ поьрекдзвия прр крез.: - синдроме на фоке адаптации и деадаптахши ц птоксш. / со-авг: КоОылянский JL Е . Дербеицев А. £. , ГаФонко В. 1!. , к т.р. , // Актуальные дроблены стресса . Сборник научных трудов АН Республики Молдова., ¡йгишща., Ктшмв, J 991 г. ,стр. Q1

3. Изменение продуктов перекисного окисления липндэб г-динаиига развития синдрома длительного сдаг,допет. мягких тканой крыс. / соавт: Нобаишский Д. К. , l'r<oi",:o В. 11 , Кпридк А. Д. и др. // Актуальные проблемы стресса. .COopm-i: кч^вш трудое АН Республики Иоддаиа, Шгшшца, Ьиытгп, 1091., ст^п/

4. Голь гпдропс-рокйсиого окисль.'ьля в hoijро7Д штtт миОкярда при краш - с;цщро).:э на фону деадан?з»л!Д к гипоксии. / ееаюа Гафенко В. М, , Дербенте а. Б. , Кирнкк А. д. и др. // к'дтсГ'Иапм общеинститутской научной конференции, , Ш'Щ. Виазшив , 189J.

5. ЛиЗОСОМНьй ЬШДОШШ ПОБЬе/^ЦУJillil КЛСТОЧНЫК структур сердца, печени, почек при краш - сипдрог.» на фоне гшюрти!«-"-sa. / Юбшкиский Ji.il. , Борз; Э.Ф. , Гафонко ail и др. // Trr»: т.

6. Значение лшзосомиьк механизмов повреждения миокарда при край - синдроме на фоне адаптации к гниошш. / соавт: КоОилякскш! Л Е , Гафенко В. М. , Кирияк А. Д. я др. // Гам ж.

7. Изменение содержания продуктов перекисного окислен« липидов ( ПОЛ ) и активности лизосонньк ферментов в .плазме крови в динамике развития краш - синдрома. / Кобклякокш; JLR , Гафенко ЕЕ , Борш Э. Ф. и др. // Там же.