Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Соматическая патология и потребление алкоголя у женщин г. Новосибирска в связи с генетическим полиморфизмом алкогольметаболизирующих ферментов

На правах рукописи

БЕЛКОВЕЦ АННА ВЛАДИМИРОВНА

СОМАТИЧЕСКАЯ ПАТОЛОГИЯ И ПОТРЕБЛЕНИЕ АЛКОГОЛЯ У ЖЕНЩИН г. НОВОСИБИРСКА В СВЯЗИ С ГЕНЕТИЧЕСКИМ ПОЛИМОРФИЗМОМ АЛКОГОЛЬ-МЕТАБОЛИЗИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТОВ

14.00.05 - внутренние болезни 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2004

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском Институте терапии Сибирского отделения Российской академии наук и Новосибирской Государственной медицинской академии Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Курилович Светлана Арсентьевна

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Воевода Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Верещагина Галина Николаевна доктор медицинских наук Вавилин Валентин Андреевич

Ведущая организация:

Сибирский Государственный Медицинский Университет

со

на заседании

Защита состоится 2004 г. В -/г-

диссертационного совета Д 001.029.01 в НИИ терапии СО РАМН по адресу: 630089, г. Новосибирск, ул. Бориса Богаткова 175/1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ терапии СО

РАМН

Автореферат разослан 1

Ученый секретарь

диссертационного совета доктор медицинских наук

НА. Куделькина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Чрезмерное потребление алкоголя и алкоголизм являются одной из серьёзнейших медико-социальных проблем. Показатели, характеризующие здоровье и демографическую ситуацию в России, прямо или косвенно зависят от уровня потребления алкоголя населением, что отражается на снижении уровня ожидаемой продолжительности жизни и увеличении смертности (Balkau В., 1999; Кошкина ЕА и соавт., 2000). Статистика свидетельствует об увеличении числа женщин, злоупотребляющих алкоголем, что негативным образом сказывается на рождаемости, здоровье потомства, приобщении к алкоголю детей и подростков (Иванец Н.Н. и соавт., 2000; Svikis D.S., и соавт., 2003).

Соматическая патология, связанная с потреблением алкоголя, разнообразна и характеризуется повреждением таких органов мишеней, как печень, сердце и мозг (Rimm Е.В. и соавт., 1991; Adami H.O. и соавт., 1992). Сроки развития соматической патологии и алкогольной зависимости варьируют и определяются, кроме индивидуальной чувствительности тканей к этанолу и его метаболитам, также активностью ферментных систем, ответственных за метаболизм этанола и формирование алкогольной зависимости. Генетический полиморфизм ферментов, ответственных за метаболизм этанола, в частности, алкогольдегидрогеназы (АДГ), альдегиддегидрогеназы (АльДГ) и CYP2E1, вероятно, играет важную роль в формировании как алкоголизма, так и соматических последствий алкоголизации. Изучение генетического полиморфизма АДГ среди алкоголиков выявляет более низкую распространенность аллелей АДГ2*2 и АДГЗ*1 в некоторых азиатских странах (Borras E., 2000). Изоформы фермента, кодируемые данными аллелями, определяют более интенсивное окисление этанола и накопление ацетальдегида - токсичного метаболита этанола. У лиц с АДГ2*2/2 генотипом выявлены более высокие, чем при других АДГ2 генотипах, значения уровня АД, концентрации липидов (ТГ) и

з

активности ферментов сыворотки крови (ГГТП) (Hashimoto Y., 2002). К тому же, значительное повышение уровня ацетальдегида в крови после приема алкоголя может быть обусловлено и дефицитом изоформы АльДГ2, окисляющей ацетальдегид, что ведет к его аккумуляции и развитию алкоголь-зависимых соматических реакций, таких, как флаш-синдром (Agarwal D.P., 2001). Поэтому у лиц с неактивным вариантом гена АльДГ2 наблюдается развитие неприязни к алкоголю, имеющее протективное значение. Типичный флаш-синдром после приема алкоголя чаще встречается у монголоидов, у которых распространенность генотипа Аль ДГ2*2/2 варьирует в пределах 10-44%, в то время как у европеоидов данный генотип практически не выявляется (Yoshida А. и соавт., 1991). Частота выявления мутантной аллели с2 гена CYP2E1, определяющей высокую активность фермента, варьирует в различных популяциях и ассоциируется с высоким риском развития алкогольного поражения печени (Stephens E.A. и соавт., 1994). Продемонстрировано и наличие связи между структурным Cys311 вариантом допаминового рецептора D2 (DRD2) и алкоголизмом у японцев (Higuchi S. и соавт., 1994). К тому же влияние генетических факторов на развитие алкогольной зависимости и соматических осложнений в значительной степени зависит от пола (Caldwell С.В. и соавт., 1991). В России выполнены единичные работы по изучению связи полиморфизма алкоголь-метаболизирующих ферментов (АДГ2) с соматической патологией у больных алкоголизмом (Ogurtsov P.P. и соавт., 2001). Частота и взаимосвязь полиморфизма специфических генов с особенностями потребления алкоголя и соматическими осложнениями алкоголизации в женской популяции до настоящего времени остается не изученной. Именно поэтому изучение соматической патологии и особенностей потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска в связи с полиморфизмом генов, ответственных за метаболизм этанола и формирование алкогольной зависимости, послужили основанием для настоящего исследования.

Цель исследования: Изучить некоторые аспекты соматической патологии (частоту ИБС, АГ, диффузных изменений печени, ЖКБ и показатели липидного обмена) у женщин г. Новосибирска в связи с потреблением алкоголя и полиморфизмом генов ферментов метаболизма алкоголя.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности текущего и прошлого потребления алкоголя, частоту и особенности флаш-реакции у женщин г. Новосибирска и их ассоциации с соматической патологией.

2. Изучить полиморфизм генов некоторых ферментов метаболизма алкоголя (АльДГ2, АДГ2, АДГЗ, цитохром Р450-СУР2Е1) и допаминового рецептора Б2 (БКБ2) у женщин г. Новосибирска.

3. Изучить ассоциации аллелей и генотипов генов некоторых алкоголь-метаболизирующих ферментов и рецепторов ЦНС с особенностями потребления алкоголя, флаш-реакпией и соматической патологией.

Научная новизна исследования: Впервые изучены особенности потребления алкоголя и флаш-реакции в открытой популяции женщин г. Новосибирска. Продемонстрирована высокая частота флаш-реакции в ответ на прием алкоголя у женщин г. Новосибирска и ее атипичность (отличается непостоянством появления, чаще возникает после приема крепких спиртных напитков и не препятствует дальнейшему приему алкоголя). Впервые в Сибирской европеоидной популяции женщин проведено прямое генотипирование генов, участвующих в метаболизме алкоголя и формировании алкогольной зависимости (АльДГ2, АДГ2, АДГЗ, цитохром Р450-СУР2Е1 и БКБ2), и выявлена более высокая частота АДГ2*2 и АДГЗ*2 аллелей, по сравнению с другими европеоидными популяциями. Не выявлен полиморфизм гена АльДГ2, что подтверждает атипизм флаш-реакции, наблюдаемый у женщин г. Новосибирска. Впервые в Сибири в эпидемиологическом исследовании женщин-европеоидов обнаружена ассоциация генетического полиморфизма алкоголь-метаболизирующих

ферментов с соматической патологией, а именно полиморфизма АДГ2 с АГ, ИБС, с липидными показателями, активностью ферментов сыворотки крови и полиморфизма АДГЗ с флаш-реакцией и диффузными изменениями печени.

Практическая значимость работы. Полученные данные о характере эпидемиологической ситуации потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска (преобладание крепких алкогольных напитков; при наличии симптомов алкогольной зависимости лишь у 2% женщин такие проблемы, как неприятности в семье, на работе, а также чувство вины в связи с потреблением алкоголя встречаются, значительно чаще, не менее, чем у 10%) могут быть использованы в практическом здравоохранении и исполнительными органами региона при разработке медико-социальных программ, направленных на проведение антиалкогольных мероприятий. Выявленное в работе отсутствие протективного действия «атипичной» флаш-реакции у женщин г. Новосибирска в отношении потребления алкоголя, а также более частое появление симптомов алкогольной зависимости у флаш-позитивных лиц, требует учитывать ее как дополнительный фактор риска развития соматических осложнений, связанных с хронической алкоголизацией в общей и индивидуальной санитарно-профилактической работе. Данные о связи генетического полиморфизма алкоголь-метаболизирующих ферментов с соматической патологией (АДГ2 с АГ, ИБС, показателями липидов и активности ферментов сыворотки крови; АДГЗ с ДИП) могут быть применены в практической наркологии и клинике внутренних болезней для формирования групп риска. Более того, полиморфизм генов АДГ2 и АДГЗ может быть использован как прогностический признак преимущества риска поражения сердца или печени.

Основные положения, выносимые на защиту:

\. В женской популяции г. Новосибирска преобладает эпизодическое потребление алкоголя в виде крепких алкогольных напитков. Частота потребления алкоголя положительно коррелирует с разовой и недельной дозами, частотой симптомов алкогольной зависимости. Флаш-реакция встречается почти у 30% женщин г. Новосибирска, носит атипичный характер (возни-

кает при приеме разных доз и различных алкогольных напитков, не ограничивает дальнейший прием алкоголя) и ассоциирована с более высокими значениями АД, ТГ и активности ACT.

2. В женской популяции г. Новосибирска ген АльДГ2 мономорфен по анализируемому полиморфизму, а гены АДГ2 и АДГЗ полиморфны с более высокими частотами аллелей АДГ2*2 и АДГЗ*2 по сравнению с другими европеоидными популяциями. Флаш-реакция не связана с полиморфизмом генов АльДГ2 и АДГ2, но чаще встречается у лиц с генотипом АДГЗ* 1/1. Частоты аллелей с2 гена CYP2E1 и Cys311 гена DRD2 не отличаются от полученных для европеоидов других стран, и их полиморфизм не связан с показателями потребления алкоголя и симптомами алкогольной зависимости.

3. Соматическая патология (АГ, ИБС, ДИП), показатели липидного обмена (ТГ, ОХС) и активность ферментов (АЛТ, ЩФ) сыворотки крови у женщин г. Новосибирска связаны с потреблением алкоголя и полиморфизмом АДГ2 и АДГЗ.

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации, ее результаты и выводы внедрены в работу научной лаборатории НИИ терапии СО РАМН, используются в лекционном курсе и практических занятиях на циклах усовершенствования врачей Новосибирской государственной медицинской академии («Избранные главы терапии», «Актуальные проблемы гастроэнтерологии», «Диагностика и лечение заболеваний органов пищеварения» и др.).

Апробация диссертации и публикации результатов исследования.

Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на конференции молодых ученых НГМА (Новосибирск, 1998); международной конференции по проблемам зависимости (Мангейм, Германия, 1999); конгрессе международного общества по изучению биомедицинских проблем алкоголизма (ISBRA, Йокогама, Япония, 2000); городской научно-практической конференции "Актуальные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); конгрессе. Европейского общества по изучению

биомедицинских проблем алкоголизма (ESBRA, Париж, Франция, 2001). По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 18 работ отечественных и 267 иностранных авторов. Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста, иллюстрирована 27 таблицами и 5 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характеристика эпидемиологического исследования. Исследование выполнено на основе материалов международного проекта ВОЗ «Длительное мониторирование тенденций сердечно-сосудистых заболеваний и факторов, их определяющих» («MONICA»). Обследована репрезентативная выборка женщин в возрасте 25-64 лет, проживающих в Октябрьском районе г. Новосибирска (756 человек). Использовали стандартные опросники, пред ложен -ные протоколом MONICA, включая опрос по текущему потреблению алкоголя. Все технические процедуры выполнялись в строгом соответствии с принятыми ВОЗ стандартными методами исследования по протоколу программы «MONICA». Перед опросом для оценки потребления алкоголя обследуемым разъяснялась цель исследования и гарантировалось сохранение тайны полученной информации. По текущей частоте потребления алкоголя (ЧПА) выделяли 5 групп: 1) не употреблявшие алкоголь в течение последнего года (аб-стейнеры), редко употребляющие алкоголь (несколько раз в году, но не ежемесячно), употребляющие алкоголь 1-2 раза в месяц, 4) употребляющие алкоголь 1 раз в неделю, 5) употребляющие алкоголь чаще 1 раза в неделю. Последние две группы обследуемых относили к часто пьющим или интенсивным потребителям алкоголя. Определяли недельную дозу (НД, доза алкоголя, принятая в течение последней недели перед обследованием), а также разовую дозу (РД, доза алкоголя, обычно выпиваемая в течение одного алко-

гольного эксцесса). Эти данные выяснялись для каждого вида алкогольного напитка. Для перерасчета потребления на чистый алкоголь использовали следующие коэффициенты: водка (г) х 0,4; вино сухое (г) х 0,1; вино креплёное (г) х 0,152; пиво (число бутылок по 0,5 л) х 16,5 (Халтаев Н.Г., 1985). Симптомы алкогольной зависимости изучали используя модифицированный CAGE опросник (Mayfield D. и соавт., 1974). Используя опросникYаmаdа К. и соавт. (1988), выявляли частоту появления основных субъективных симптомов флаш-реакции после употребления алкоголя. Клинические симптомы флаш-реакции оценивали в 3-х вариантах: „никогда", „иногда", „всегда". Учитывали дозу алкоголя, вызывающую флаш-реакцию, выясняли возможность дальнейшего приема алкоголя, а также наличие флаш-реакции у родителей и частоту потребления алкоголя родителями в течение жизни.

Для изучения распространенности ишпемической болезни сердца (ИБС)

и основных факторов ее риска использовали стандартные методы,

применяемые в эпидемиологических исследованиях (Жуковский Г.С., 1981):

стандартный опросник ВОЗ для выявление стенокардии напряжения по

Роузу, запись ЭКГ покоя с оценкой изменений по Миннесотскому коду (МК).

Выделяли следующие группы ИБС: 1 — определенный инфаркт миокарда без стенокардии напряжения (М.К 1-1-1-2-7); 2 - инфаркт миокарда со стенокардией напряжения; 3 — стенокардия напряжения в сочетании с ишемическими изменениями на ЭКГ; 4 — безболевая ИБС (М.К. 4-1, 4-2, 5-1, 5-2при отсутствии 3-1,3-3); 5— возможная ИБС (М.К. 1-2-8-1-3,4-3,5-3,61, 6-2, 7-1, 8-3 при отсутствии порока сердца и тиреотоксикоза для последнего, 4-1, 4-2, 5-1, 5-2 при отсутствии 3-1 и 3-3); 6 — документированный инфаркт миокарда в анамнезе без стенокардии и изменений на ЭКГ; 7 - нет ИБС; 8 - стенокардия напряжения без инфаркта миокарда. К определенной ИБС относили группы 1, 2, 3, 4, 8; к возможной ИБС - группы 5 и 6.

Обследуемых опрашивали также о курении, осведомленности о

наличии артериальной гипертензии (АГ) и приеме гипотензивных препаратов в течение двух недель перед обследованием. АД измеряли ртутным сфигмоманометром Рива-Рочи на правой руке дважды с интервалом в 5 минут с точностью до 2 мм.рт.ст. В группу лиц с АГ относили женщин, имевших показатели АД, превышающие 140 мм.рт.ст. для САД и 90 мм.рт.ст.

9

для ДАД (ВОЗ, МОК 1999), и принимавших гипотензивные препараты. Антропометрические измерения включали измерение длины тела медицинским ростомером и веса тела на медицинских весах. Индекс массы тела (индекс Кетле 2, ИМТ) вычисляли по формуле: ИМТ = ВЕС (кг): РОСТ (м2). Клиническая оценка состояния печени включала выяснение жалоб на боли в правом подреберье, наличие в анамнезе желтухи и описторхоза. Ультразвуковое исследование печени и желчевыводящих путей проводили на «88Б-260» («АЬОКА», Япония).

По степени выраженности ультразвуковые признаки диффузных изменений печени подразделяли на три группы: 1 степени (незначительные) - гепатомегалия (увеличение косо-вертикального размера правой доли более 15 см) или изменение эхогенности и звукопроводимости паренхимы; 2 степени (умеренные) — признаки 1 степени + изменения архитектоники печеночных вен (обеднения венозного рисунка); 3 степени (выраженные) — признаки 2 степени + 2 и более из следующих: 1) диффузно-очаговые изменения паренхимы печени; 2) признаки портальной гипертензии (увеличение диаметра ствола воротной вены более 14мм и/или селезеночной вены более 6мм в ретропанкреатической ее части); 3) спленомегалия.

Для диагностики холелитиаза использовали стандартные

ультразвуковые критерии:

1. отсутствие признаков конкрементов: содержимое гомогенное, анэхогенное, толщина передней стенки пузыря < 3 мм, размеры полости нормальные. 2. камни желчного пузыря: 1) фокальная, смещаемая в зависимости от положения тела исследуемого, эхоплотная структура в проекции полости пузыря без/или с акустической тенью за ней; 2) полость пузыря четко не визуализируется, в проекции ложа пузыря гиперэхогенные структуры с массивной акустической тенью, не смещающиеся при перемене положения тела или при кишечной перистальтике; 3) несмещаемая гиперэхогенная структура, в шейке желчного пузыря, дающая акустическую тень. 3. Желчный пузырь не визуализируется, на передней брюшной стенке -послеоперационн ый рубец.

Характеристика лабораторных методов исследования. Биохимические исследования выполнены в лаборатории клинической биохимии НИИ терапии СО РАМН с внутрилабораторным и внешним контролем качества. Кровь забирали из локтевой вены в период между 10 и 12 часами дня с помощью вакутейнеров. Концентрацию ОХС, ТГ, ХС ЛПВП в сыворотке крови определяли на автоанализаторе «ТесИшкопААР» (США).ХСЛПВП опреде-

ляли после осаждения ЛПНП и ЛПОНП гепарином и MgCl2. Активность ГТТП, АЛТ, ACT, ЩФ сыворотки крови определяли на автоанализаторах «ФП-901» фирмы «Labsistem» (Финляндия) и «Corona» (Швеция) с использованием наборов реактивов фирмы «Lachema».

Методом случайных чисел для генотипирования было отобрано 299 образцов крови с одинаковым представительством в разных возрастных группах. ДНК выделяли по методике Manniatis (1982), с обработкой образцов протеиназой К, фенол-хлороформной экстракции и преципитации этанолом. Амплификацию интересующих участков ДНК, содержащих полиморфные фрагменты и сайты рестрикции, проводили методом полимеразной цепной реакции с использованием соответствующих праймеров. Фрагменты ампли-фицированной ДНК в виде продуктов рестрикции разделяли методом гель-электрофореза в 8% полиакриламидном геле при 10 "V/1 час и визуализировали окраской серебром (Budowle В. и соавт., 1991). Анализ препаратов ДНК для генотипирования гена АльДГ2 проводили по методу Harada S. (1989), гена АДГ2, АДГЗ и CYP2E1 по методам Groppi А- (1990) и Pirmohamed M. (1995), соответственно, для генотипирования гена DRD2 использовали методы Itokawa М. (1993) и Higushi S. (1994). Полиморфизм гена АДГ2 идентифицировали по трем фрагментам длиной в 28,35 и 63 пар нуклеотидов (п.н.). Полиморфизм гена АДГЗ идентифицировали по трем фрагментам длиной 63, 67 и 130 п.н. Генотип АльДГ2 идентифицировался при наличии двух фрагментов длиной 125 и 135 п.н. Для более точного типирования полиморфизма гена АльДГ2 использовали модификацию метода Suzuku К. (1994). Полиморфизм гена CYP2E1 идентифицировали по трем фрагментам длиной 412; 351 и 61 п.н. Продукты амплификации соответствовали 112 и 133 п.н. для генотипов DRD2 гена. Прямое генотипирование генов выполнено в Институте генетики человека г. Гамбурга, Германия (проф. D.P. Agarwal)

Статистический анализ результатов проводили, используя пакет прикладных программ SPSS-11.0. Применяли стандартные методы вариационной статистики: вычисление средних, стандартных ошибок, доверительного ин-

тервала; достоверность различий показателей оценивали по критериям Стъюдента и х2. При необходимости данные стандартизовали по возрасту методом линейной регрессии. Для анализа порядковых переменных и переменных, не подчиняющихся нормальному распределению, использовали метод ранговой корреляции по Спирману. Для оценки значимых связей между показателями проводили множественный регрессионный, дисперсионный и логистический регрессионный анализ1.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Особенности потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска по данным опроса

Выявлено преобладание эпизодического потребления алкоголя (от 1-2 раз в месяц до нескольких раз в году) у 84,7% опрошенных женщин. Группа систематических потребительниц алкоголя (1 раз в неделю и чаще) составила 7,0%, не употреблявших алкогольные напитки в течение последнего года -8,3%. Корреляционный анализ продемонстрировал статистически достоверную отрицательную связь между ЧПА и возрастом (r = - 0,29; рх0,01). По данным скрининга средняя НД составила 18,9 ± 1,4 г. чистого алкоголя, а средняя РД для всех лиц, потреблявших алкоголь, составила - 27,2 ± 0,86 г. и была представлена крепкими алкогольными напитками. Так как РД и НД зависели от возраста (г = - 0,168 иг = - 0,157; р<0,01, соответственно), проводили стандартизацию этих показателей по возрасту с использованием метода линейной регрессии. При сравнении стандартизованных показателей с ЧПА статистически достоверная корреляционная зависимость (с РД r = 0,368; с НД г = 0,454; р<0,01) сохранялась. Корреляционная связь между ЧПА и РД, ЧПА и НД выявлялась во всех возрастных группах. Несмотря на сообщаемые относительно низкие дозы потребления алкоголя, были отмечены симптомы алкогольной зависимости: потеря контроля у 1,6%, алкогольная амнезия у

1 Автор выражает сердечную благодарность коллективу, выполнявшему схрининговое исследование по проекту «MONICA», а также Щербаковой JIB. за помощь в статистической обработке материалов.

12

1,7%, абстинентный синдром у 0,5% женщин. Кроме того, 1,1% женщин указали на проблемы в семье в связи с потреблением ими алкоголя, 7,0% чувствовали вину или досаду в связи с выпивкой и 5,8% приходила мысль о сокращении потребления алкоголя. К тому же выявлена статистически достоверная корреляционная связь между ЧПА и частотой симптомов алкогольной зависимости: самочувствием на следующий день после выпивки (г = 0,174; р<0,01); улучшением состояния после приема алкоголя (г = 0,147; р<0,01); потерей контроля после приема алкоголя (г = 0,145; р<0,01); алкогольной амнезией (г = 0,147; р<0,01); чувством вины или досады в связи с выпивкой (г = 0Д19; рО,01); неприятностями на работе (г = 0,127; р<0,01); проблемами в семье в связи с выпивкой (г = 0,107; р<0,01).

При изучении биохимических показателей, относящихся к «биологическим маркерам» систематического потребления алкоголя, выявлена достоверная связь между стандартизованными по возрасту показателями потребления алкоголя, концентрацией липидов и активностью ферментов сыворотки крови (табл. 1).

Таблица 1

Коэффициенты корреляции (г) между стандартизованными по возрасту показателями активности ферментов, концентрации липидов сыворотки крови и __потреблением алкоголя__

ЧПА РД НД

АСТ 0,234 ** 0,158 ** 0,160 "

АЛТ 0,212 *♦ 0,187 »* 0,173 •*

ЩФ - 0,106 * 0,025 0,108 •

ГТТП 0,022 0,016 0,053

хслпвп 0,092 « 0,087 0,230 *

охс -0,122 " -0,065 -0,073

тг -0,150* -0,083 -0,079

*.р<0,05; **-р<0,01

По данным множественного регрессионного анализа активность ГТТП наиболее значимо коррелировала с НД ^ = 0,186; И2 = 0,035; критерий Дар-бина-Ватсона = 1,952).

Частота и особенности флат-реакцииу женщин г. Новосибирска

В обследованной популяции женщин на вопрос, бывает ли у вас покраснение лица после приема алкоголя, ответили: никогда - 520 человек (71,5%); иногда -113 женщин (15,5%); всегда - 94 (12,9%). При этом, процент флаш-позитивных лиц оказался достаточно высок в группе систематических потребительниц алкоголя (30,7%) (табл. 2).

Таблица 2

Частота флаш-реахции в зависимости от ЧПА

Покраснение лица ЧПА

1 2 3 4+5

п % п % п % п %

Нет 34 89,5 246 70,5 203 70,7 36 69,2

Иногда 1 2,6 50 14,3 47 16,4 15 28,8

Всегда 3 7?9 53 15,2 37 12,9 1 1,9

Примечание: 4 и 5 группы по ЧПА объединены в одну группу - систематически потребляющих алкоголь

Более того, появление флаш-реакции после приема алкоголя у большинства женщин не препятствовало дальнейшему его приему. Так, 165 опрошенных женщин (83,8%), испытывавших флаш-реакцию иногда или всегда, оказались в состоянии продолжать выпивать и после покраснения лица, причем эту реакцию вызывали разные алкогольные напитки. Эти данные свидетельствует об атипичном характере флаш-реакции у женщин г. Новосибирска. На определенную роль наследственности в формировании флаш-реакции указывает ее высокая частота у родителей женщин-флашеров. Это подтверждает и положительная корреляционная связь между наличием фла-шинга у обследуемых женщин и их родителей (индекс корреляции составил с отцом (г = 0,301; р<0,01); с матерью (г = 0,502; р<0,01). При анализе средних показателей АД и ИМТ в зависимости от наличия флаш-реакции выявлено, что у флаш-позитивных женщин показатели САД и ДАД достоверно выше, чем у флаш-негативных женщин, без различий по ИМТ (табл. 3).

Таблица 3

Средние показатели САД, ДАД и ИМТ в зависимости от флаш-реакции

Флаш «+» Флаш «-»

САД 137,6 ±26,0 132,3 +24,7*

ДАД 86,6 ±12,2 83,9 ± 12,3*

ИМТ 28,7+5,6 27,9 ±5,6

* - р < 0,05 в сравнения с флаш «+»

Выявленные различия показателей АД сохраняются и при стандартизации по возрасту.

Анализ по возрастным декадам, в группе 55-64 лет выявил более высокий уровень ТГ и активности ACT сыворотки крови у флаш-позитивных женщин (ТГ: 139,02 ± 6,02; ACT: 27,7 ± 5,8), чем у флаш-негативных (ТГ: 127,9 ± 5,6; р<0,05; ACT: 25,04 ± 4,6; р<0,05). У женщин 35-44 лет обнаружено, что концентрация ТГ выше, а уровень ХС ЛПВП и активность ЩФ ниже у флат-позитивных женщин (ТГ: 127,6 ± 8,2; ХС ЛПВП: 50,3 ± 2,5; ЩФ: 146,3 ± 6,8), чем у женщин без флаш-реакции (ТГ: 99,03 ± 4,9; р<0,05; ХС ЛПВП: 58,3 + 5,7; р<0,05; ЩФ: 162,6 ± 3,8; р<0,05).

Полиморфизм генов ферментов, ответственныхзаметаболизм этанола и ацетальдегида (АДГ,АльДГ, CYP2E1) и допаминового рецептора D2 (DRD2)у женщин г. Новосибирска

Для анализа связи между полиморфизмом генов, ответственных за метаболизм алкоголя, и показателями потребления алкоголя, выделенные ранее в зависимости от ЧПА пять групп были объеденены в три: 1) не употреблявшие алкоголь в течение последнего года, 2) потреблявшие алкоголь от нескольких раз в году до 1-2 раз в месяц (эпизодическое потребление) и 3) потреблявшие 1 раз в неделю и чаще (систематическое потребление). Анализ полиморфизма гена АльДГ2 не выявил атипичной аллели АльДГ2*2. В исследуемой популяционной выборке был обнаружен только генотип АльДГ2*1/1. Распределение генотипов АДГ2, АДГЗ и CYP2E1 у женщин г. Новосибирска представлено в таблице 4. Частота аллели АДГ2*2 составила

0,197, что выше по сравнению с другими европеоидными популяциями (0,01 - 0,13) (^ата1 Б.Р., 1990). Гомозиготный генотип АДГ2*2/2 обнаружен в 8,7% случаев, а частота аллели АДГЗ*2 составила 0,52. В случае генов АДГ2 и АДГЗ наблюдалось статистически значимое отклонение от равновесия Харди-Вайнберга, что требует дальнейших исследований данного феномена. В качестве наиболее вероятной причины можно предполагать, что отклик на приглашение к участию в исследовании, возможно, несколько различается для разных генотипов анализируемых генов вследствие их потенциальной ассоциации с аддиктивными и связанными социальными характеристиками, которые могут оказывать влияние на отношение к проводимому обследованию.

Таблица 4

Частоты генотипов и аллелей по анализируемым полиморфизмам генов

АДГ2, АДГЗ и СУР2Е1 у женщин г. Новосибирска Генотип Частоты генотипов Частоты аллелей

АДГ2 р(5) п АДГ2*1 АДГ2*2

1 -1 0,692(0,027) 207 0,803 (0,016) 0,197(0,016)

1-2 0,221 (0,024) 66

2-2 0,087(0,016) 26 Соответствие равновесию Харди-Вайнберга р < 0,001

АДГЗ р^) п АДГЗ*1 АДГЗ*2

1 -1 0,201(0,023) 60 0,482(0,020) 0,518(0,020)

1-2 0,562 (0,029) 168

2-2 0Д38 (0,025) 71 Соответствие равновесию Харди-Вайнберга р < 0,05

СУР2Е1 р(%) п с 1 С 2 1 -1 0,940(0,014) 281 0,970(0,007) 0,030(0,007) 1 -2 0,060(0,014) 18 2-2 0 0 Соответствие равновесию Харди-Вайнберга р > 0,05_

Частота флаш-реакции оказалась практически одинаковой у женщин с различным генотипом АДГ2 (АДГ2*1/1 - 29,4%; АДГ2*1/2 - 30,8% и АДГ2*2/2 - 29,2%), однако у лиц с генотипом АДГЗ* 1/1 флаш-синдром встречался чаще, чем с АДГЗ* 1/2 и АДГЗ*2/2 генотипами (44,6% против 25%

и 28,8%, соответственно). Многофакторный анализ с использованием метода логистической регрессии выявил, что наряду с другими независимыми переменными (показатели потребления алкоголя, уровень липидов, активность гепатоспецифических ферментов. ИМТ, возраст) с флаш-реакцией также оказался ассоциирован полиморфизм АДГЗ (р = 0,019). Следует отметить, что из числа выявленных носителей аллелей АДГ2*2 и АДГЗ*1 - 66,7% женщин были не способны продолжать прием алкоголя после развития вызванной алкоголем флаш-реакции.

Частоты распространенной аллели (аллель cl) и редкой аллели (аллель с2) гена CYP2E1 составили 0,969 и 0,03 соответственно, а гомозиготный вариант с2/с2 гена CYP2E1 в исследуемой выборке не был обнаружен.

Частота аллели Cys311 гена DRD2 у обследуемых женщин составила 0,021, что совпадает с данными, полученными при обследовании других европеоидных популяций (0,008 - 0,018) (Gejman P.V. и соавт., 1994; Craddock N. и соавт., 1995). Наиболее часто встречающийся гомозиготный генотип Ser311/ Ser311 был обнаружен у женщин всех трех обследованных групп. Выявлено отсутствие значимой корреляции между полиморфизмом DRD2 и характером потребления алкоголя, флаш-реакцией и частотой симптомов алкогольной зависимости.

Полиморфизмом генов алкоголь-метаболизирующихферментов, допаминовогорецептора D2 (DRD2) и соматические последствия хронической алкоголизации

При сравнении концентраций липидов (ОХС, ХС ЛПВП, ТГ), активности печеночных ферментов (АЛТ, ACT, ЩФ, ГГЕТП) сыворотки крови женщин с различными вариантами генотипов АДГ2, АДГЗ, CYP2E1 и DRD2, выявлены более высокие значения уровня ТГ и низкие - ОХС у женщин с генотипом АДГ2*2/2 (ТГ: 116,0 ± 15,2; ОХС: 188,1 ± 11,6), чем у женщин с генотипом АДГ2*1/1 (ТГ: 112,2 ± 4,1 р = 0,010; ОХС: 203,6 ± 3,2; р = 0,011). У лиц с генотипом АДГЗ*2/2 обнаружены более высокие значения

концентрации ТГ (115,8 ± 7,7), чем у женщин с АДГЗ*1/1 (93,9 ± 5,4) и АДГЗ*1/2 (107,01 ± 4,4; р = 0,027) генотипами. Анализ связи полиморфизма АДГ2 и АДГЗ с показателями липидов (ТГ и ОХС) по возрастным декадам представлен в таблице 5.

Активность АЛТ была выше у женщин группе 45 - 54 лет с гетерозиготным генотипом АДГ2*1/2 (21,5 ± 1,4), чем с генотипом АДГ2*1/1 (18,03 ± 0,9; р<0,05) и у женщин старшей возрастной группы (55 - 64 лет) с генотипом АДГЗ* 1/1 (21,1 ± 0,7) в сравнении с женщинами с генотипом АДГЗ*2/2 (18,7 ± 0,8; р<0,05) и АДГЗ*1/2 (18,9 ± 0,5; р<0,05). Активность ЩФ была выше у лиц 45-54 лет с генотипом АДГЗ*1/1 (193,3 ± 18,4), чем у женщин с генотипом АДГЗ*1/2 (165,7 ± 7,6; р<0,05).

Таблица 5

Средние показатели концентрации липидов (ТГ и ОХС) сыворотки крови в

зависимости от АДГ2 и АДГЗ генотипов по возрастным декадам

Гено- ТГ ОХС

типы Возрастные декады (лет

25-34 35-44 45-54 55-64 25-34 35-44 45-54 55-64

АДГ2

1-1 79,0 ± 72,0 ± 112,1 ± 116,5 ± 180,7± 186,9 ± 225,7 ± 227,3 ±

4,3 6,9 8,4 7,9 3,8 5,5 6,6 6,9

1-2 76,6 ± 81,7 ± 110,4± 78,3 ± 162,5 + 183,0 ± 231,5 ± 199,5 ±

4,2 7,1* 13,8 8,7* 5,7* 10,7 14,2 12,2*

2-2 85,3 ± 122,3 ± 78,8 ± 148,5 ± 119,0 ± 173,0 ± 202,7 ± 214,6 ±

14,5 9,т 8,6 28,3 # 53,7*# 17,1 15,2 12

АДГЗ

1-1 78,8 ± 88,5 + 106,7 ± 125,0 ± 165,5 ± 215,6 ± 224,3 ± 221,8 +

5.3 8.7 14.7 12.5 6.5 9.1 12.4 16.4

1-2 81,5 ± 113,9± 96,0 ± 135,9 ± 175,3 ± 181,6 221,1 ± 222,7 ±

4.6 9.6 7.2 9.5 4.8 +5.2* 8.4 5.8

2-2 77,9 ± 125,3 ± 135,1 ± 143,5± 176,2 ± 167,6 ± 232,8 + 211,3 ±

6.4 27.6 16.1# 15.2 86 14.5* 10.1 14.1

* - р < 0,05 по сравнению с генотипом 1 -1; #- р < 0,05 по сравнению с генотипом 1-2

В зависимости от генотипа СУР2Е1 выделяли 2 группы: 1- с1-с1; 2-с1-с2. Статистически достоверные различия в концентрации ОХС были выявлены в возрастной группе 45- 54 лет: с1-с1 (227,7 ± 5,7) и с1-с2 (176,7 ± 17,5; р<0,05). Активность ЩФ была достоверно выше у женщин с

гетерозиготным генотипом ЗегЗП/СуэЗП гена Б1Ш2 (199,3 ± 14,3), чем с генотипом БегЗ 11/8ег311 (171,14 ±3,2; р<0,05).

Показатели АД, артериальная гипертензия, потребление алкоголя и полиморфизм алкоголъ-метаболизирующих ферментов

Отрицательная корреляционная связь выявлена между САД и ЧПА (г = - 0,198; р<0,01) и ДАД и ЧПА (г = - 0,136; р<0,01). Сравнение стандартизованных по возрасту показателей показало статистически достоверную связь только между ДАД и НД (г = 0,071; р<0,05). Более высокие показатели САД и ДАД наблюдались у женщин с генотипом АДГ2*2/2, чем у женщин с генотипом АДГ2*1/1 (табл. 6), в основном за счет возрастной группы 55-64 лет.

Таблица 6

Средние показатели САД и ДАД в зависимости от генотипа АДГ2

АДГ2

1-1 1-2 2-2

САД 134,1 ±1,7 125,7 ±2,5 * 141,3 ±6,2 #

ДАД 84,5 ±0,81 81,04 ±1,4* 88,2 ±3,1 U

* - р<0,05 по сравнению с генотипом 1 -1; # - р<0,05 по сравнению с генотипом 1-2

ЛГ была выявлена у 354 женщин (47,3%), причем ее частота также оказалась выше у женщин с генотипом АДГ2*2/2, чем с генотипами АДГ2*1/2 и АДГ2*1/1 (рис. 1).

1-1 1-2 2-2 Рисунок 1. Частота АГ в зависимости от генотипа ДДГ2

* - р<0,05 по сравнению с генотипом 1 -1; # - р<0,05 по сравнению с генотипом 1-2

ИБС,потребление алкоголя иполиморфизм алкоголь-метаболи-зирующих ферментов

Эпидемиологические признаки ИБС обнаружены у 150 женщин (19,9%), из них определенная ИБС - у 104 (13,8%) и возможная - у 46 человек (6,1%) Наибольшая частота определенной ИБС отмечена у непьющих и систематически потребляющих алкоголь (еженедельно) женщин (табл. 7).

Таблица 7

Доля женщин г. Новосибирска с эпидемиологическими признаками

ИБС в зависимости от ЧПА

ЧПА

1 2 3 4 5

п % п % п % п % п %

Нет ИБС* 42 67,7 279 79,5 236 82,9 35 79,5 9 100

Определенная ИБС* 16 25,8 51 14,5 28 9,8 9 20,5 0 0

Возможная ИБС 4 6,5 21 6,0 21 7,3 0 0 0 0

Достоверность различий между группами: ЧПА: * - Р 1.2.1 -з.з-< < 0,05

ИБС встречалась примерно с одинаковой частотой как у флаш-позитивных, так и у флаш-негативных женщин (определенная ИБС: 13,2% против 14,1% ; возможная ИБС: 6,3% против 6,0%). Корреляционный анализ по Спирману выявил наряду с ИМТ (г = 0,08; Р < 0,05), ОХС (г = 0,1; Р < 0,01), ТГ (г = 0,1; Р < 0,01), возрастом (г = ОД; Р < 0,001), положительную связь ИБС с активностью ГГТП (г = 0,1; Р < 0,01), ЩФ (г = 0,1; Р < 0,01) и отрицательную с ЧПА (г = - 0,08; Р < 0,05).

Частота генотипов по анализируемому полиморфизму АДГ2 отличалась между женщинами с признаками ИБС и без ИБС (табл. 8). У лиц с признаками определенной ИБС генотип АДГ2*1/2 встречался в 2 раза чаще, чем у женщин без признаков ИБС.

Таблица 8

Частота генотипов АДГ2 у женщин в зависимости от наличия ИБС

АДГ2

1-1 1-2 2-2

п % п % п %

Нет ИБС 183 72 51 20,1 20 7,9

Определенная ИБС 12 44,4* 13 48,1* 2 7,4

*р < 0,01 по сравнению с группой без ИБС (х2=9,383)

Логистический регресионный анализ, в качестве наиболее значимых переменных, ассоциированных с наличием признаков ИБС по эпидемиологическим критериям, идентифицировал генотип АДГ2 (В = 0,87; р<0,01), возраст (В = 0,07; р<0,05), ХС ЛПВП (В = - 0,08; р<0,05) и НД (В = 0,02; р<0,05).

Патология печени иЖКБ, потребление алкоголя и полиморфизм алкоголь-метаболизирующих ферментов Признаки диффузных изменений печени (ДИП) выявлены у 18,8% обследованных женщин, из них незначительные - 15,1%, умеренные - 3,7%, причем признаки ДИП выявлены у 22,5% лиц, систематически употребляющих алкоголь за счет преобладания лиц младшей возрастной группы. Однако с увеличением ЧПА отмечается снижение ДИП, что подтверждается корреляционным анализом (г = - 0,127; р<0,01). ДИП наблюдались примерно с одинаковой частотой как у флаш-позитивных, так и у флаш-негативных женщин (незначительные: 16,4% против 14,1%; умеренные: 3,9% и 3,9%). Сопоставление ДИП и активности гепатоспецифических ферментов выявило прямую корреляционную зависимость между ДИП и активностью АЛТ (г = 0,158; р<0,01), ЩФ (г = 0,203; р<0,01), ГГТП (г = 0,176; р<0,01), а также возрастом (г = 0,24; р<0,001), ИМТ (г = 0,4; р<0,001) и уровнем липидов: ОХС (г = 0,17; р<0,01), ХС ЛПВП (г = - 0,1; р<0,01), ТГ (г = 0,17; р<0,001).

Не выявлено связи полиморфизма АДГ2 с признаками ДИП. Частота генотипов по анализируемому полиморфизму АДГЗ отличалась между женщинами с признаками ДИП и без ДИП (табл. 9). У женщин с признаками ДИП генотип АДГЗ*2/2 встречался чаще, чем у женщин без признаков ДИП,

хотя достоверность различий была типа тенденции в связи с малым числом наблюдений.

Таблица 9

Частота генотипов АДГЗ у женщин в зависимости от наличия ДИП

АДГЗ

1-1 1-2 2-2

п % п % п %

Нет ДИП 50 19,8 149 58,9 54 21,3

Признаки ДИП 9 26,5 14 41,2* 11 32,4*

*р = 0,069 по сравнению с группой без ДИП (х2=3,306)

Тем не менее, многофакторный анализ с методом логистической регрессии и включением в модель независимых переменных (ЧПА, НД, РД, ИМТ, возраст, анамнестические указания на перенесенный гепатит и описторхоз, генотипы алкоголь-метаболизирующих ферментов), в качестве наиболее значимымых, ассоциированных с развитием ДИП, отобрал ИМТ, ЧПА и генотип АДГЗ.

ЖКБ выявлена у 10,8% обследованных женщин, с одинаковой частотой как у флат-позитивных, так и у флаш-негативных женщин (10,7% и 11%, соответственно), но чаще в группе непьющих (21%). Самая низкая частота ЖКБ оказалась у потребляющих алкоголь с частотой 1 раз в неделю (4,5%).

Корреляционный анализ выявил отрицательную связь между ЖКБ и ЧПА (r = - 0,105; р<0,01), РД (r = 0,1; р<0,05); положительную между ЖКБ и ИМТ (г = 0,2; р<0,001), возрастом (r = 0,2; р<0,001), ЩФ (r = 0,1; р<0,01) и ГГТП (г = 0,1; р<0,05). Не выявлено связи между генетическим полиморфизмом алкоголь-метаболизирующих ферментов и наличием ЖКБ. Многофакторный анализ определил ИМТ (х2 Wald - 6,72; р = 0,010) и возраст женщин (X Wald - 5,64; р = 0,018) как наиболее значимые для ЖКБ факторы и исключил показатели потребления алкоголя и генотипы алкоголь-метаболизирующих ферментов.

выводы

1.В популяции женщин г. Новосибирска преобладает эпизодическое употребление алкоголя в виде крепких алкогольных напитков. Его частота прямо коррелирует с разовой и недельной дозами и частотой симптомов алкогольной зависимости.

2. Флаш-реакция наблюдается у 28,4% женщин, носит атипичный характер (возникает после приема различных доз крепких спиртных напитков, не ограничивает дальнейший прием алкоголя), коррелирует с наличием флашинга у родителей, что косвенно свидетельствует о ее наследственном характере, и ассоциируется с более высокими показателями АД, уровня ТГ и активности ACT сыворотки крови.

3. В обследованной выборке обнаружен только наиболее распространенный в европеоидных популяциях генотип АльДГ2*1/1 гена АльДГ2. Частота более редкой аллели АДГ2*2 по анализируемому полиморфизму гена АДГ2 и аллели АДГЗ*2 гена АДГЗ в популяции женщин г. Новосибирска выше, чем в других европеоидных популяциях. Флаш-реакция не связана с полиморфизмом гена АДГ2, но чаще встречается у лиц с генотипом АДГЗ*1/1.

4. Частота аллели с2 гена CYP2E1 и аллельный вариант (Cys311) гена DRD2 у женщин г. Новосибирска не отличаются от частот у других европеоидов и их полиморфизм не связан с показателями потребления алкоголя и симптомами алкогольной зависимости.

5. Уровень ХС ЛПВП сыворотки крови прямо, а уровень ОХС и ТГ обратно, коррелируют с частотой потребления алкоголя. Концентрация ТГ достоверно выше, а ОХС ниже у женщин с гомозиготным генотипом АДГ2*2/2, чем у женщин с генотипами АДГ2*1/1 и АДГ2*1/2. У женщин с гомозиготным вариантом генотипа АДГЗ* 1/1 концентрация ТГ ниже, а уровень ОХС выше, чем у женщин с генотипами АДГЗ*2/2 и АДГЗ* 1/2.

6. Значения САД и ДАД обратно коррелируют с частотой потребления алкоголя, а стандартизованный по возрасту показатель ДАД прямо коррелирует с недельной дозой потребляемого алкоголя. АД и частота АГ достоверно выше у женщин с гомозиготным генотипом АДГ2*2/2, чем у женщин с генотипами АДГ2* 1/1 и АДГ2* 1 /2.

7. У женщин с эпидемиологическими признаками определенной ИБС генотип АДГ2*1/2 встречается чаще (48,1%), чем у женщин без признаков ИБС (20,1%). В качестве наиболее значимых переменных, ассоциированных с наличием ИБС, идентифицируются генотип АДГ2 и недельная доза потребляемого алкоголя.

8. У женщин с признаками ДИП генотип АДГЗ*2/2 встречается чаще (32,4%), чем у женщин без признаков ДИП (21,3%). Многофакторный анализ с включением в модель в качестве независимых переменных показателей потребления алкоголя, ИМТ, возраста, анамнестических указаний на перенесенный гепатит и описторхоз, подтверждает связь генотипа АДГЗ с развитием ДИП

9. Наибольшая частота ЖКБ встречается у непьющих, что подтверждает корреляционный анализ. Связи ЖКБ с генетическим полиморфизмом алко-голь-метаболизирующих ферментов не обнаружено.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Эпидемиологические данные о негативных последствиях потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска рекомендуется использовать в практическом здравоохранении при разработке медико-социальных антиалкогольных программ.

2. Симптомы флаш-реакции у женщин г. Новосибирска целесообразно использовать в качестве дополнительных прогностических факторов развития соматической патологии, связанной с потреблением алкоголя.

3. Риск развития соматических осложнений (ИБС, АГ, ДИП) при систематическом потреблении алкоголя выше у носителей АДГ2*2 и АДГЗ*2 аллелей, что должно быть учтено при формировании групп риска по этим заболеваниям. Более того, полиморфизм генов АДГ2 и АДГЗ может- быть использован как прогностический признак преимущества риска поражения сердца или печени.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Белковец А.В. Особенности потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска // Тез. докл. конф. молодых ученых НГМА, Н - ск, 1998. - С. 27 -28.

2. Belkovets A., Kurilovich S. Alcohol consumption among women from West Siberia // The future of addiction research and treatment Abstract Int. Conf. Manheim, Germany.- 1999.-P.7.-P.N7.

3. Belkovets A., Kurilovich SA, Agarwal D.P. Alcohol drinking habits, flushing response and polymorphism of alcohol metabolizing enzymes in females from Novosibirsk // Alcoholism. - 2000. - Vol. 24. -N 5. - Suppl.-P. 197A.

4. Белковец А.В., Курилович С.А., Малютина СК. Потребление алкоголя женщинами г. Новосибирска. Опыт эпидемиологического исследования // Актуальные вопросы современной медицины // Тез. докл. науч. - практ. конф., Н- ск. - 2001. - С. 341.

5. Agarwal D., Belkovets A, Kurilovich SA, Avksentyuk A. Genetic polymorphism alcohol metabolism genes and alcohol drinking habits in Siberian females // Alcohol and Alcoholism. - 2001. - Vol. 36, N 5. - P. 446, SY37.

6. Belkovets A., Kurilovich SA, Agarwal D.P. Cytochrome P 450 (CYP2E1) and dopamine DRD2 receptor gene polymorphism and alcohol drinking habits in females from West Siberia // Alcohol and Alcoholism. - 2001. - Vol. 36, N5.-P.471,P8.

7. Belkovets A.V., Kurilovich SA Avksentyuk A and Agarwal D.P. Alcohol drinking habits and genetic polymorphism of alcohol metabolism genes in West Siberia// Int. J. Human Genetics. -2001. -Vol. 1. -N3 . -P. 165 -171.

8. Belkovets AV., Kurilovich SA and Agarwal D.P. Functional polymorphism (Ser311 Cyslll) in the dopamin D2 receptor gene and alcohol drinking habits in females from West Siberia // Int. J. Human Genetics. - 2001. - Vol. 2. -N 1.-P. 11-14.

9. Курилович C.A, Белковец A.B., Агарвал Д.П., Малютина СК. Полиморфизм генов алкоголь-метаболизирующих ферментов и флаш-реакция у женщин г. Новосибирска // Наследственные болезни и патология человека, Тез. Сиб. науч.- практ. конф. Новосибирск, 2003. - С. 60 - 62.

10. Курилович С.А., Белковец А.В., Рябиков А.В., Воевода М.И. Полиморфизм алкоголь-метаболизирующих ферментов и диффузная патология печени у женщин г. Новосибирска // Клин, и эксперимент, гастроэнтерология, 2004.- N.-0. (в печати).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - артериальная гипертензия

АД - артериальное давление

АДГ - алкогольдегидрогеназа

АльДГ - альдегиддегидрогеназа

AJIT - аланиновая аминотрансфераза

ACT - аспарагиновая аминотрансфераза

CYP2E1 - изоформа цитохрома Р450

DRD2 - допаминовыЁ рецептор D2

i ГШ - гамма-глутамилгранспепгадаза

ДАД - диастолическое артериальное давление

ДИП - диффузные изменения печени

ЖКБ - желчнокаменная болезнь

ИБС - ишемическая болезнь сердца

НД - недельная доза

ОХС - общий холестерин сыворотки крови

РД - разовая доза

САД - систолическое артериальное давление

ХС ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности

ЧПА - частота потребления алкоголя

ЩФ - щелочная фосфатаза

Ser - серии

Cys - цисте ин

ТГ - триглицериды

ПЦР - полимеразная цепная реакция

Соискатель ——

Белковец А.В.

Подписано в печать 03.10.04 г. Формат 60 х 84/16 Усл. печ. л. 1.0. Тираж 100 экз. Заказ № 157-п

Отпечатано в типографии издательства «Сибмедюдат»

630091, г. Новосибирск, ул. Красный проспект, 52. Тел.: (383-2) 29-10-83'. Е-пиЛ: 81Ыпеёк<1а1@гатЬ1ег.ш

»1928(1

РНБ Русский фонд

2005-4 16331

Актуальность проблемы. Чрезмерное потребление алкоголя и алкоголизм являются одной из серьёзнейших медико-социальных проблем. Показатели, характеризующие здоровье и демографическую ситуацию в России, прямо или косвенно зависят от уровня потребления алкоголя населением, что отражается на снижении уровня ожидаемой продолжительности жизни и увеличении смертности (Balkau В., 1999; Кошкина Е.А. и соавт., 2000). Статистика свидетельствует об увеличении числа женщин, злоупотребляющих алкоголем, что негативным образом сказывается на рождаемости, здоровье потомства, приобщении к алкоголю детей и подростков (Иванец Н.Н. и соавт., 2000; Svikis D.S., и соавт., 2003).

Соматическая патология, связанная с потреблением алкоголя, разнообразна и характеризуется повреждением таких органов мишеней, как печень, сердце и мозг (Rimm Е.В. и соавт., 1991; Adami Н.О. и соавт., 1992). Сроки развития соматической патологии и алкогольной зависимости варьируют и определяются, кроме индивидуальной чувствительности тканей к этанолу и его метаболитам, также активностью ферментных систем, ответственных за метаболизм этанола и формирование алкогольной зависимости. Генетический полиморфизм ферментов, ответственных за метаболизм этанола, в частности, алкогольдегидрогеназы (АДГ), альдегиддегидрогеназы (АльДГ) и CYP2E1, вероятно, играет важную роль в формировании как алкоголизма, так и соматических последствий алкоголизации. Изучение генетического полиморфизма АДГ среди алкоголиков выявляет более низкую распространенность аллелей АДГ2*2 и АДГЗ*1 в некоторых азиатских странах (Borras Е., 2000). Изоформы фермента, кодируемые данными аллелями, определяют более интенсивное окисление этанола и накопление ацетальдегида - токсичного метаболита этанола. У лиц с АДГ2*2/2 генотипом выявлены более высокие, чем при других АДГ2 генотипах, значения уровня АД, концентрации липидов (ТГ) и активности ферментов сыворотки крови (ГГТП) (Hashimoto Y., 2002). К тому же, значительное повышение уровня ацетальдегида в крови после приема алкоголя может быть обусловлено и дефицитом изоформы АльДГ2, окисляющей ацетальдегид, что ведет к его аккумуляции и развитию алкоголь-зависимых соматических реакций, таких, как флаш-синдром

Agarwal D.P., 2001). Поэтому у лиц с неактивным вариантом гена АльДГ2 наблюдается развитие неприязни к алкоголю, имеющее протективное значение. Типичный флаш-синдром после приема алкоголя чаще встречается у монголоидов, у которых распространенность генотипа АльДГ2*2/2 варьирует в пределах 10-44%, в то время как у европеоидов данный генотип практически не выявляется (Yoshida А. и соавт., 1991). Частота выявления мутантной аллели с2 гена CYP2E1, определяющей высокую активность фермента, варьирует в различных популяциях и ассоциируется с высоким риском развития алкогольного поражения печени (Stephens Е.А. и соавт.,

111

1994). Продемонстрировано и наличие связи между структурным Cys вариантом допаминового рецептора D2 (DRD2) и алкоголизмом у японцев (Higuchi S. и соавт., 1994). К тому же влияние генетических факторов на развитие алкогольной зависимости и соматических осложнений в значительной степени зависит от пола (Caldwell С.В. и соавт., 1991).

В России выполнены единичные работы по изучению связи полиморфизма алкоголь-метаболизирующих ферментов (АДГ2) с соматической патологией у больных алкоголизмом (Ogurtsov P.P. и соавт., 2001). Частота и взаимосвязь полиморфизма специфических генов с особенностями потребления алкоголя и соматическими осложнениями алкоголизации в женской популяции до настоящего времени остается не изученной. Именно поэтому изучение соматической патологии и особенностей потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска в связи с полиморфизмом генов, ответственных за метаболизм этанола и формирование алкогольной зависимости, послужили основанием для настоящего исследования.

Цель исследования: Изучить некоторые аспекты соматической патологии (частоту ИБС, АГ, диффузных изменений печени, ЖКБ и показатели липидного обмена) у женщин г. Новосибирска в связи с потреблением алкоголя и полиморфизмом генов ферментов метаболизма алкоголя.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности текущего и прошлого потребления алкоголя, частоту и особенности флаш-реакции у женщин г. Новосибирска и их ассоциации с соматической патологией.

2. Изучить полиморфизм генов некоторых ферментов метаболизма алкоголя (АльДГ2, АДГ2, АДГЗ, цитохром P450-CYP2E1) и допаминового рецептора D2 (DRD2) у женщин г. Новосибирска.

3. Изучить ассоциации аллелей и генотипов генов некоторых алкоголь-метаболизирующих ферментов и рецепторов ЦНС с особенностями потребления алкоголя, флаш-реакцией и соматической патологией.

Научная новизна исследования'. Впервые изучены особенности потребления алкоголя и флаш-реакции в открытой популяции женщин г. Новосибирска. Продемонстрирована высокая частота флаш-реакции в ответ на прием алкоголя у женщин г. Новосибирска и ее атипичность (отличается непостоянством появления, чаще возникает после приема крепких спиртных напитков и не препятствует дальнейшему приему алкоголя).

Впервые в Сибирской европеоидной популяции женщин проведено прямое генотипирование генов, участвующих в метаболизме алкоголя и формировании алкогольной зависимости (АльДГ2, АДГ2, АДГЗ, цитохром P450-CYP2E1 и DRD2), и выявлена более высокая частота АДГ2*2 и АДГЗ*2 аллелей, по сравнению с другими европеоидными популяциями. Не выявлен полиморфизм гена АльДГ2, что подтверждает атипизм флаш-реакции, наблюдаемый у женщин г. Новосибирска.

Впервые в Сибири в эпидемиологическом исследовании женщин-европеоидов обнаружена ассоциация генетического полиморфизма алкоголь-метаболизирующих ферментов с соматической патологией, а именно полиморфизма АДГ2 с АГ, ИБС, с липидными показателями, активностью ферментов сыворотки крови и полиморфизма АДГЗ с флаш-реакцией и диффузными изменениями печени.

Практическая значимость работы. Полученные данные о характере эпидемиологической ситуации потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска (преобладание крепких алкогольных напитков; при наличии симптомов алкогольной зависимости лишь у 2% женщин такие проблемы, как неприятности в семье, на работе, а также чувство вины в связи с потреблением алкоголя, встречаются значительно чаще, не менее, чем у 10%) могут быть использованы в практическом здравоохранении и исполнительными органами региона при разработке медико-социальных программ, направленных на проведение антиалкогольных мероприятий.

Выявленное в работе отсутствие протективного действия «атипичной» флаш-реакции у женщин г. Новосибирска в отношении потребления алкоголя, а также более частое появление симптомов алкогольной зависимости у флаш-позитивных лиц, требует учитывать ее как дополнительный фактор риска развития соматических осложнений, связанных с хронической алкоголизацией в общей и индивидуальной санитарно-профилактической работе.

Данные о связи генетического полиморфизма алкоголь-метаболизирующих ферментов с соматической патологией (АДГ2 с АГ, ИБС, показателями липидов и активности ферментов сыворотки крови; АДГЗ с ДИП) могут быть применены в практической наркологии и клинике внутренних болезней для формирования групп риска. Более того, полиморфизм генов АДГ2 и АДГЗ может быть использован как прогностический признак преимущества риска поражения сердца или печени.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В женской популяции г. Новосибирска преобладает эпизодическое потребление алкоголя в виде крепких алкогольных напитков. Частота потребления алкоголя положительно коррелирует с разовой и недельной дозами, частотой симптомов алкогольной зависимости. Флаш-реакция встречается почти у 30% женщин г. Новосибирска, носит атипичный характер (возникает при приеме разных доз и различных алкогольных напитков, не ограничивает дальнейший прием алкоголя) и ассоциирована с более высокими значениями АД, ТГ и активности ACT.

2. В женской популяции г. Новосибирска ген АльДГ2 мономорфен по анализируемому полиморфизму, а гены АДГ2 и АДГЗ полиморфны с более высокими частотами аллелей АДГ2*2 и АДГЗ*2 по сравнению с другими европеоидными популяциями. Флаш-реакция не связана с полиморфизмом генов АльДГ2 и АДГ2, но чаще встречается у лиц с 1 генотипом АДГЗ* 1/1. Частоты аллелей с2 гена CYP2E1 и Cys гена DRD2 не отличаются от полученных для европеоидов других стран, и их полиморфизм не связан с показателями потребления алкоголя и симптомами алкогольной зависимости.

3. Соматическая патология (АГ, ИБС, ДИП), показатели липидного обмена (ТГ, ОХС) и активность ферментов (АЛТ, ЩФ) сыворотки крови у женщин г. Новосибирска связаны с потреблением алкоголя и полиморфизмом АДГ2 и АДГЗ.

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации, ее результаты и выводы внедрены в работу научной лаборатории НИИ терапии СО РАМН, используются в лекционном курсе и практических занятиях на циклах усовершенствования врачей Новосибирской государственной медицинской академии («Избранные главы терапии»,

Актуальные проблемы гастроэнтерологии», «Диагностика и лечение заболеваний органов пищеварения» и др.).

Апробация диссертации и публикации результатов исследования.

Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на конференции молодых ученых НГМА (Новосибирск, 1998); международной конференции по проблемам зависимости (Мангейм, Германия, 1999); конгрессе международного общества по изучению биомедицинских проблем алкоголизма (ISBRA, Иокогама, Япония, 2000); городской научно-практической конференции "Актуальные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); конгрессе Европейского общества по изучению биомедицинских проблем алкоголизма (ESBRA, Париж, Франция, 2001). По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 18 работ отечественных и 267 иностранных авторов. Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста, иллюстрирована 27 таблицами и 5 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. В популяции женщин г. Новосибирска преобладает эпизодическое употребление алкоголя в виде крепких алкогольных напитков. Его частота прямо коррелирует с разовой и недельной дозами и частотой симптомов алкогольной зависимости.

2. Флаш-реакция наблюдается у 28,4% женщин, носит атипичный характер (возникает после приема различных доз крепких спиртных напитков, не ограничивает дальнейший прием алкоголя), коррелирует с наличием флашинга у родителей, что косвенно свидетельствует о ее наследственном характере, и ассоциируется с более высокими показателями АД, уровня ТГ и активности ACT сыворотки крови.

3. В обследованной выборке обнаружен только наиболее распространенный в европеоидных популяциях генотип АльДГ2*1/1 гена АльДГ2. Частота более редкой аллели АДГ2*2 по анализируемому полиморфизму гена АДГ2 и аллели АДГЗ*2 гена АДГЗ в популяции женщин г. Новосибирска выше, чем в других европеоидных популяциях. Флаш-реакция не связана с полиморфизмом гена АДГ2, но чаще встречается у лиц с генотипом АДГЗ* 1/1.

0 1 1

4. Частота аллели с2 гена CYP2E1 и аллельный вариант (Cys ) гена DRD2 у женщин г. Новосибирска не отличаются от частот у других европеоидов и их полиморфизм не связан с показателями потребления алкоголя и симптомами алкогольной зависимости.

5. Уровень ХС ЛПВП сыворотки крови прямо, а уровень ОХС и ТГ обратно, коррелируют с частотой потребления алкоголя. Концентрация ТГ достоверно выше, а ОХС ниже у женщин с гомозиготным генотипом АДГ2*2/2, чем у женщин с генотипами АДГ2*1/1 и АДГ2*1/2. У женщин с гомозиготным вариантом генотипа АДГЗ* 1/1 концентрация ТГ ниже, а уровень ОХС выше, чем у женщин с генотипами АДГЗ*2/2 и АДГЗ* 1/2.

6. Значения САД и ДАД обратно коррелируют с частотой потребления алкоголя, а стандартизованный по возрасту показатель ДАД прямо коррелирует с недельной дозой потребляемого алкоголя. АД и частота АГ достоверно выше у женщин с гомозиготным генотипом АДГ2*2/2, чем у женщин с генотипами АДГ2* 1/1 и АДГ2* 1/2.

7. У женщин с эпидемиологическими признаками определенной ИБС генотип АДГ2*1/2 встречается чаще (48,1%), чем у женщин без признаков ИБС (20,1%). В качестве наиболее значимых переменных, ассоциированных с наличием ИБС, идентифицируются генотип АДГ2 и недельная доза потребляемого алкоголя.

8. У женщин с признаками ДИП генотип АДГЗ*2/2 встречается чаще (32,4%), чем у женщин без признаков ДИП (21,3%). Многофакторный анализ с включением в модель в качестве независимых переменных показателей потребления алкоголя, ИМТ, возраста, анамнестических указаний на перенесенный гепатит и описторхоз, подтверждает связь генотипа АДГЗ с развитием ДИП.

9. Наибольшая частота ЖКБ встречается у непьющих, что подтверждает корреляционный анализ. Связи ЖКБ с генетическим полиморфизмом алкоголь-метаболизирующих ферментов не обнаружено.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Эпидемиологические данные о негативных последствиях потребления алкоголя женщинами г. Новосибирска рекомендуется использовать в практическом здравоохранении при разработке медико-социальных антиалкогольных программ.

2. Симптомы флаш-реакции у женщин г. Новосибирска целесообразно использовать в качестве дополнительных прогностических факторов развития соматической патологии, связанной с потреблением алкоголя.

3. Риск развития соматических осложнений (ИБС, АГ, ДИП) при систематическом потреблении алкоголя выше у носителей АДГ2*2 и АДГЗ*2 аллелей, что должно быть учтено при формировании групп риска по этим заболеваниям. Более того, полиморфизм генов АДГ2 и АДГЗ может быть использован как прогностический признак преимущества риска поражения сердца или печени.