Системные управляющие эффекты ультрафиолетового облучения крови в восстановительной медицине

Сусликов, Александр Владимирович

Диссертации по медицине → Восстановительная медицина, спортивная медицина, курортология и физиотерапия

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.51) на тему:Системные управляющие эффекты ультрафиолетового облучения крови в восстановительной медицине

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Сусликов, Александр Владимирович Тула 2005 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.51

Автореферат диссертации по медицине на тему Системные управляющие эффекты ультрафиолетового облучения крови в восстановительной медицине

На правах рукописи

СУСЛИКОВ

АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ

СИСТЕМНЫЕ УПРАВЛЯЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОГО ОБЛУЧЕНИЯ КРОВИ, В ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ М

14.00.51 - Восстановительная медицина,

лечебная физкультура и спортивная, медицина, физиотерапия и курортология (медицинские науки) 05.13.01- Системный анализ, управление и обработка информации (медицинские науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Тула-2005

Работа выполнена в ГУЛ НИИ новых медицинских технологий (г. Тула), кардиологическом отделении больницы Путинского научного центра и Институте биофизики клетки РАН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация:

Московская медицинская академия им. И М. Сеченова

Защита состоится 17 марта 2005 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 212.271.06 при Тульском государственном университете по адресу: г. Тула, ул. Болдина, д. 128.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Тульского государственного университета по адресу: 300600, г. Тула, пр-т Ленина, 92.

Автореферат разослан 14 марта 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Хадарцев Александр Агубечирович Чемерис Николай Константинович

Карандашов Владимир Иванович Субботина Татьяна Игоревна

А 3. Гусейнов

Посвящается памяти первого руководителя диссертационной работы

д. ф.-м. наук, проф. В.А. Печатнике ва

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

В Российской Федерации отмечается рост заболеваемости населения болезнями системы кровообращения. К 1999 году заболеваемость (распространенность) сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) по сравнению с 1990 годом возросла на 20%. Ежегодно в лечебно-профилактические учреждения страны по вопросам, связанным с болезнями системы кровообращения, обращаются впервые более 2 млн. человек. В кардиологической помощи в настоящее время нуждается 19,2 млн. человек, из них 639 тыс. - детей и подростков. Объем выполнения коронарографий составляет 7,2%, шунтирования - 4%, транслюминальной баллонной коронарной ангиопластики - 2% (Федеральная Программа, Постановление правительства РФ № 540,2001 г.). На сегодняшний день остро стоит задача разработки и внедрения эффективных и общедоступных методов немедикаментозной коррекции симптоматики этих заболеваний.

В последнее время все более широкое развитие получил один из перспективных методов лечения - фотогемотерапия, одним из направлений которой является ультрафиолетовое облучение крови (УФОК) (Кукуй Л.М., 1997; Ветчиннитова О.Н., 2002; Карандашов ВН., 2004).

Несмотря на длительное применение УФОК в медицине, молекулярные механизмы его лечебного действия остаются недостаточно исследованными. Неизвестны критерии выбора индивидуальной дозировки и контроля эффективности применения УФОК при лечении отдельных сердечно-сосудистых заболеваний.

Большое значение в патогенезе ишемичесной болезни сердца имеют нейтрофилы. Генерируемые активированными нейтрофилами активные формы кислорода (АФК) оказывают повреждающее действие на окружающие ткани организма человека при ишемии органов с последующей реперфузией (Hearse D., 1992). Важную роль при ишемии-реперфузии, наряду с НАДФН-оксидазой, играет миелопероксидаза (МПО) нейтрофилов (HansenP.R., 1995).

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ СНсЛИОГСКА С.Гитербург

200 <£к

Снижение продукции АФК циркулирующими активированными нейггрофилами возможно с помощью активации их апоптоза под действием УФОК, что приводит к уменьшению концентрации нейтрофилов. Представляется актуальной разработка способа снижения патологической реактивности нейтрофилов оптимизацией их апогггоза под действием УФОК.

Цель исследования.

Изучение системных механизмов действия ультрафиолетового облучения крови на регуляцию апоптоза, функциональные свойства нейтрофилов и управляющих эффектов при сердечно-сосудистых заболеваниях (ишемической болезни сердца) для оптимизации процесса восстановительного лечения.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить механизмы регуляции апоптоза и функционирования нейтрофилов под действием ультрафиолетового излучения диапазона С (254нм)(УФС).

2 Изучить эффективность использования УФС при сердечнососудистых заболеваниях и коррекции факторов риска развития сосудистой патолЪгии - гиперлипидёмии.

3. Провести сравнительный анализ результатов традиционных методов лечения больных ССЗ и способов немедикаментозной коррекции с использованием УФОК на основе изучения механизмов регуляции УФС-индуцированного апоптоза и функциональных характеристик нейтрофилов.

4. Разработать рекомендации по применению УФОК в комплексной восстановительной терапии ССЗ.

Научная новизна.

Впервые показано, что действие УФОК сопоставимо по эффективности лечения и реабилитации больных с ССЗ с действием сгагинов.

Продемонстрировано, что УФОК наиболее эффективно при сосудистой патологии (после перенесенного инсульта, прогрессирующей стенокардии, облитерирующих заболеваниях артерий нижних конечностей).

Впервые доказано, что УФОК потенциирует гипотензивный эффекг при лекарственной терапии рефрактерной артериальной гипертонии.

Разработаны принципы и структура проведения лечебно-восстановительных мероприятий при лечении ССЗ с использованием УФОК на основе мониторинга параметров функционального состояния нейтрофилов пациентов с ССЗ. 4

Впервые установлено, что терапевтическое действие УФОК может быть основано на снижении повреждающего эффекта, вызываемого гиперактивированными циркулирующими нейтрофилами, за счет ингибирования продукции АФК и сокращения времени циркуляции нейтрофилов при апогтгозе.

Практическая значимость исследования.

Изучение механизмов эффективности УФОК позволило разработать рекомендации по применению метода проточной цигофлуориметрии для проведения экспресс-диагностики функционального состояния нейтрофилов для контроля за ходом восстановительной терапии ССЗ при использовании УФОК.

Выявленные эффективность, безопасность и доступность метода УФОК позволяют широко использовать его в восстановительной терапии ССЗ в стационарных и амбулаторных условиях.

Разработанные принципы и структура проведения лечебно-восстановительных мероприятий при лечении ССЗ с использованием УФОК на основе мониторинга параметров функционального состояния нейтрофилов пациентов с ССЗ могут бьггь применены в учреждениях практического здравоохранения.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследований используются в работе кардиологических» отделения БПНЦ, в работе ГУЛ НИИ новых медицинских технологий, в педагогическом процессе на кафедре медию-биологических дисциплин ТулГУ

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены на Национальном конгрессе кардиологов, Москва, 10-12 октября 2000 г; на II Национальном конгрессе по кардиологии, Москва, 9-11 октября 2001 г; на конференции «От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям», Пущино, ноябрь 2002 г; на 7-ой Пущинской конференции молодых ученых «Биология - наука 21-го века», Пущино, 14-18 апреля 2003 г.; на Международном семинаре «Экология и здоровье, экологическая медицина. Управление качеством жизни»; Москва, октябрь 2003 г; на 1-ом съезде Общества клеточной биологии, Санкт-Петербург, 2003 г; конференции «40 лет БПНЦ», Пущино, июль 2004 г.

Апробация работы состоялась на совместном заседании Ученого Совета НИИ новых медицинских технологий, сотрудников лаборатории регуляции апоптоза, лаборатории регуляции в биомедицинских системах ИБК РАН и больницы ПНЦ.

Публикации. Основные результаты диссертации опубликованы в 11 печатных работах, в том числе в 4-х статьях (2 в журналах,

рекомендованных ВАК).

Объем и структура диссертации. Диссертация имеет общепринятую структуру, состоит из введения; трех глав, в которых представлен обзор литературы, объект и методы исследования, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключения; выводов; практических

рекомендаций; списка литературы; приложения. Работа изложена на_

страницах, иллюстрирована таблицами и рисунками Список литературы представлен_источниками (отечественных и зарубежных авторов)

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Терапевтическое действие УФОК может быть основано на снижении повреждающего действия гиперактивированных циркулирующих нейтрофилов за счет ингибирования продукции АФК и сокращения времени циркуляции нейтрофилов при апоптозе.

2. Применение УФОК нормализует показатели липидного обмена и обеспечивает эффект, аналогичный при использовании статинов

3 УФОК обеспечивает потенциирование эффекта гипотензивных средств при рефрактерной артериальной гипертонии.

4 УФОК эффективно при облитерирующих поражениях сосудов сердца, головного мозга и нижних конечностей.

ОБЬЕКТИМЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Объект исследования

Для решения поставленных задач был пролечен с применением метода УФОК 251 пациенте возрасте от 21 до 75 лет, большинство из них - больные с ИБС (ишемическая болезнь сердца) (таблица 1)

2. Методы исследования

2.1 Общеклинические, лабораторные и инструментальные методы

обследования.

Общеклтическб^Шследование сбор анамнеза, результаты объективного обследования, применение лабораторных и функциональных методов диагностики (УЗИ, ЭКГ, ЭХОКГ,

Таблица 1

Характеристика больных, пропеченных УФОК

Нозологические формы Количество больных

ИБС (различные формы) 115

Гиперлипидемии 36

Рефрактерная гипертоническая болезнь 38

Облитерирующие болезни н/конечностей 57

Состояние после перенесенного инсульта 29

Септические состояния (бак. эндокардит) 5

Всего 251

дуплексное сканирование артерий нижних конечностей на ультразвуковом сканере БИОМЕДИКАЛ АУ-5 (Италия)) согласно общепринятым протоколам обследования.

Инструментальные методы :

• чрезпищеводная электрическая стимуляция предсердий (ЧПЭС)

• нагрузочные тесты (велоэргомегрия)

• суточное мониторирование ритма и артериального давления (АД) и ЭКГ в динамике

• у больных с облитерирующими заболеваниями нижних иэнечностей использовано дуплексное сканирование сосудов нижных конечностей до применения УФОК и после курса лечения, включающего традиционную терапию и УФОК и измерение количества безбопевых шагов

Биохимические методы исследования:

УгщдеетовсгиперлипидемиямиопределяшСЖ,ТГ,Ж ЛГО до лечения и после едка УФОК. Произведено сравнение результатов лечения больных статном (вазилип 20 мг,МГ Бубнова, 2003) и собственных результатов после курса УФОК (5-7 процедур).

Метод УФОК

Проведено более2000процедур УФОК на аппарате«Изольда» (МД-73М)у различных категорий больных по общепринятым методикам забор крови (150200 мл, облучение крови при реинфузии за ЗОминвзонеУФС 254 нм). Аппарат разрешен к использованию в медицинсюй практике протоколом № 8 комиссии Комитета по новой медицинсюй технике Управления по внедрению новых лекарствеш1ых<з)ектвимедт»шаойтесни^ Шдежабря 1985 года.

Специальные методы исследования'.

Использованы нейтрофилы периферической крови человека. Нейтрофилы выделяли из крови здоровых доноров и больных ССЗ методом центрифугирования на 2-х слойном градиенте плотности фиколл-верографина (1,119 и 1,077). После этого дважды отмывали клетки от градиентного раствора центрифугированием 7 минут при 200 g в фосфатном буфере. Затем нейтрофилы ресуспендировали в фосфатном буфере до концентрации 107 кл/мл и хранили при 4°С Процент живых клеток определяли методом проточной цитомегрии с использованием йодистого пропидия. Жизнеспособность выделенных нейтрофилов составляла 98-99%.

Облучение нейтрофилов УФС проводами на аппарате «Изольда» (МД-73М). Дозу облучения клеток регулировали временем экспозиции и расстоянием от-лампы прибора. Расчет дозы ультрафиолетового облучения проводился с помощью приборов ULX-3W и «Аргус-06».

Измерение образования АФК нейтрофилами проводили методом хемилюминесценции (Владимиров Ю. А., Шерстнев М. П, 1989) в присутствии люцигенина.

Нейтрофилы культивировали в стандартной культуральной среде

Процент апоптозных клеток определяли методами проточной щггометрии с использованием флуоресцентного зонда Hoechst-33258 (Донская И. А., 1997).

МПО определяли с помощью ортофенилендиамина по оптической плотности при 492 нм на приборе «Specord М40».

2.2. Статистическая обработка

Обработка результатов проведенных исследований проведена с оценкой различий по методу Стьюдента (Excel 7.0), корреляционный и регрессивный анализ - с помощью пакета статистических программ «Statgraphics 2.6».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Действие ультрафиолета С на функционирование нейтрофилов

1.1. Действие ультрафиолета Сна апоптоз нейтрофилов человека

На первом этапе работы мы провели исследование действия УФС в широком диапазоне доз (от 0 до 600 Дж/м2) на продолжительность жизни 8

культивируемых нейтрофилов Нами было обнаружено, что в

100 80

* 60

со

| 40

| 20

Время, час

Рис. 1. Действие УФС на кинетику апоптоза нейтрофилов. По оси ординат - доля апоптозных клеток, %. 1, 2, 3-320, 80, 0 Дж/м2, соответственно.

диапазоне доз от 0 до 300 Дж/м2 происходит активация апоптоза исследуемых клеток. При дальнейшем увеличении дозы облучения (до 600 Дж/м2) процент апоптозных клеток не увеличивается. Доля живых нейтрофилов в этом диапазоне доз изменяется незначительно (94-98%). Культивируемые нейтрофилы без УФС погибают медленнее, чем при действии ультрафиолета С. Увеличение дозы УФС облучения клеток приводит к более быстрой гибели этих клеток (рис. 1,1,2) по сравнению с контролем (рис 1,3).

1.2. Действие ультрафиолета С на продукцию активных форм кислорода нейтрофилами человека.

Для выяснения роли АФК в УФС-индуцированном апоптозе нейтрофилов было проведено исследование раздельного действия УФС на клеточные системы генерации АФК: НАДФН-оксидазу и миелопероксидазу.

На рис 2 представлены данные по действию УФС на функционирование НАДФН-оксидазной системы-. Показано, что наблюдается ингибирование образования супероксвдного анион-радикала при облучении нейтрофилов ультрафиолетом (600 Дж/м2) до 65%, что указывает на непосредственное ингибирующее действие ультрафиолетового излучения на функционирование НАДФН-оксидазы.

Также было исследовано влияние ультрафиолетового излучения диапазона С на миелопероксидазу (рис. 3). Мы облучали миелопероксидазу, полученную при дегрануляции нейтрофилов, ультрафиолетом в диапазоне

доз от 0 до 2400 Дж/м2 Облучение приводило к дозозависимому ингибированию активности миелопероксидазы при дозе облучения 600 Дж/м2 до 76,8 ± 1,9 % (от контроля), при дозе облучения 2400 Дж/м2 - до 74,04 ±3,13% (от контроля)

Рис

100 200 300 400 МО 800 Д01аУ*С(ДОм2)

Зависимость активности от дозы

«о

О 500 1000 1И0 2000 2900 Доза облучения (Дж/м2)

Рис. 3. Зависимость активности

МПО от дозы облучения УФС.

НАДФН-оксидазы облучения УФС

Таким образом, нами показано, что УФС вызывает ингибирование как НАДФН-оксидазной, так и миелопероксидазной активности при респираторном взрыве нейтрофилов.

Нейтрофилы являются короткоживущими клетками Время их циркуляции в кровяном русле составляет около 10 часов, после чего они подвергаются апоптозу и фагоцитируются моноцитами или уходят в ткани, где погибают через 4-5 дней и фагоцитируются тканевыми макрофагами

Нейтрофилы облучали УФС (80-320 Дж/м2), культивировали 3 часа, окрашивали Аппехт У-ИТС и регистрировали фагоцитоз апоптозных нейтрофилов моноцитами (рис. 4).

О 100 200 300 «0 Доза УФС, Дж/м1

Рис. 4. Фагоцитоз моноцитами нейтрофилов, облученных УФС. По оси абсцисс - доза УФС облучения нейтрофилов. Нейтрофилы обработаны Аппехт V - ИТС

Полученные результаты подтверждают наше преположение о том, что УФС вызывает ускорение апоптоза нейтрофилов и ускорение элиминации из циркуляции апоптозных нейтрофилов моноцитами.

1.3. Влияние ингибиторов образования АФКна УФС-индуцированный апоптоз нейтрофилов

Учитывая роль каталазы (фермента антиоксидантной защиты организма) в механизме образования АФК нейтрофилов, мы исследовали влияние каталазы на спонтанный и УФС-индуцированный апоптоз этих клеток. Нами было показано, что каталаза в диапазоне концентраций (0-1 мг/мл) вызывает дозозависимое снижение величины спонтанного апоптоза нейтрофилов (это хорошо коррелирует с литературными данными) и практически не оказывает влияния на УФС-индуцированный апоптоз нейтрофилов (рис. 5).

* 60

I 40 ' о

| 20 0

О 0,04 0,2 1 Концентрация каталазы, мг/мл

100

0 2 10

Концентрация 0Р1, мкМ

Рис 5 Действие каталазы на Рис. б. Действие DPI на

спонтанный и УФС-индуцированный спонтанный и УФС-апопгоз нейтрофилов. о -120 Дж/м2, ■ индуцированный апоптоз - без УФС нейтрофилов. d - 120 Дж/м2, ■ -

без УФС

С целью изучения роли НАДФН-оксидазы в УФС индуцированном апоптозе нейтрофилов было исследовано влияние специфического ингибитора НАДФН-оксидазы дифенилениодония (DPI) на УФС-индуцированный и спонтанный апоптоз нейтрофилов Оказалось, что DPI примерно на 30 процентов ингибировал спонтанный апоптоз нейтрофилов и незначительно ингибировал УФС-индуцированный апоптоз (рис. 6)

Сравнительное исследование величины спонтанного апоптоза нейтрофилов, выделенных из крови пациентов с ИБС до и после УФОК показало, что после УФОК происходит увеличение апоптоза нейтрофилов на 10% ±0,8% (контроль -100%).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что

положительный лечебный эффект УФОК может быть основан на ускорении апоптоза циркулирующих нейтрофилов.

2. Клинические результаты применения УФОК

2.1. Эффективность УФОК при лечении ИБС

В исследовании приняли участие больные с ИБС в возрасте от 36 до 67 лет ( мужчины и женщины). В эту же группу были включены пациенты с непереносимостью нитратов и имеющие противопоказания для использования других препаратов (в частности, бета-блокаторов) (табл 2). Все больные страдали ИБС, которую диагностировали на основании анамнеза, клинической картины, результатов лабораторных и функциональных методов обследования. Основными показаниями для использования УФОК при комплексном лечении больных стенокардией были следующие:

- приступы стенокардии на фоне активного и адекватного лечения согласно принятым стандартам;

- больные с низкой толератностью к нагрузкам;

- стенокардия Щ-IV функционального класса (ФК); • прогрессирующая стенокардия;

- мультифокальный атеросклероз,

- перенесшие инфаркт миокарда.

Нами пролечено более 115 пациентов с ИБС, у большинства пациентов был получен положительный эффект. После процедур УФОК у больных со стабильной стенокардией (ФК III) менялся функциональный класс стенокардии в сторону уменьшения. При сравнении с традиционным лечением быстрее наступала стабилизация состояния и достоверно отмечалось повышение толерантности (велоэргометрическая нагрузка, стресс-зхокардиограмма).

При повторном амбулаторном обследовании через 6 месяцев отмечено сохранение терапевтического эффекта УФОК не явлется конкурентным методом современным хирургическим и интервенционным технологиям, в то же время является методом выбора для больных, которым не может быть выполнена хирургическая коррекция коронарного кровотока. Способность метода УФОК влиять на основные патогенетические звенья заболевания и высокая терапевтическая эффективность расширяет арсенал современных средств, применяемых при лечении ИБС. 12

Таблица 2

Клиническая характеристика больных с ИБС

Показатель Абсолютное число Процент Эффективность %

Количество больных 115 100

Возраст 50 ±14

Стенокардия 56 49 90

IIIФК 31

IV ФК 15

Нестабильная стенокардия 10

ИМ в анамнезе 29 26 50

Мелкоочаговый (без О) 11

Крупноочаговый 19

Мультифокальный атеросклероз 30 30 60

2.2. Эффективность УФОК при лечении гинерпипидемий

В группу пациентов с гиперлипидемией были включены 36 человек с уровнемОХС до6,7 мкмоль/л, ХС ЛПНГГдо 4,7 мкмоль/л, ТГдо2 мкмоль/ л. Больных отбирали по следующим признакам: с документированной ИБС, (18 пациентам выполнена стресс-эхокардиограмма, 7 - коронарографии) из числа, находившихся на стационарном лечении в кардиологическом отделении БПНЦ. Больные не получали статины, имели различные проявления ИБС, стенокардии различного функционального класса. Решалась задача сравнения эффективности лечения статинами (вазилип-терапия в течение 6 недель) в дозе 20 мг с эффективностью лечения УФОК.

В процессе курса лечения УФОК (5-7 процедур) отмечен регресс клинических проявлений - реже приступы стенокардии У 30 пациентов приступы стенокардии прекратились, они полностью отказались от дополнительного приема нитроглицерина, у них возросла толерантность к физическим нагрузкам, при контрольном исследовании отмечено достоверное снижение уровня ОХС, ХС ЛПНП, повышение ХС ЛПВП, снижение уровня ТГ (табл 3,4).

Таблица 3

Динамика уровней липидов крови и их соотношение у больных ИБС на фоне проведения курса УФОК (п=36)

Показатели, ммоль/л Исходно После УФОК Р

ОХС 6,8±0,5 4,8±0,5 р<0,01

тг 2,0±0,5 1,5±0,5 р<0,05

ХСЛПНП 4,7±0,7 2,8±0,5 р<0,01

хслпвп 1,1±0,3 1,3±0,5

Таблица 4

Динамика уровней липидов крови и их соотношение у больных ИБС на фоне лечения вазил ином 20 мг (п=24),

(М.Г. Бубнова, 2003)

Показатели .Исходно После 6-ти недель лечения Р

охс 7,07±0,94 5,9±0,56 р<0,01

тг 1,73±0,09 1,48±0,66 р<0,05

ХСЛПНП 5,09±0,93 4,02±0,51 р<0,001

хслпвп 1,19±1,27 1,27±0,23

Существуют ограничения применения статинов (при заболеваниях печени). Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что УФОК показано при нарушении функций печени, когда не могут быть рекомендованы статины Наше исследование показало высокую эффективность (90% улучшения) применения УФОК при этой патологии и является методом немедикаментозной коррекции. Действие УФОК сопоставимо по клиническому эффекту действию статинов.

Гипохолестериновый эффект УФОК и снижение концентрации ХСЛПНП реализует первичную и вторичную профилактику атеросклероза

2.3. Эффективность УФОКпри септических состояниях.

В течение последних лет участились случаи бактериального эндокардита с поражением 1 или 2-х клапанов, обусловленные двумя причинами: измененными клапанами до возникновения эндокардита (врожденные дегенеративные соединительно-тканные изменения или ревматические атаки) и врожденными нарушениями иммунитета.

Нами пролечено 5 больных с септическим эндокардитом (2 женщины и 3 мужчин в возрасте от 21 до 48 лет) с клиническим лабораторно и инструментально доказанным диагнозом. Динамика показателей в процессе лечения УФОК представлена в табл. 5.

Таблица 5

Динамика клинических показателей в ходе лечения УФОК больных септическим эндокардитом

Показатели Процедуры УФОК

1 2 3 4

Температура, °С 41 37,7 36,6 36,2

Лейкоциты (г/л) 26 12 11 7

П/я лейкоциты (%) 20 14 9 6

СОЭ (мм/ч) 56 37 22 14

Положительная динамика клинических показателей подтверждает высокую эффективность применения УФОК при лечении септического эндокардита.

2.4. Эффективность УФОК при рефрактерной артериальной

гипертонии

Особое место в кардиологической практике занимает рефрактерная артериальная гипертония (АГ) (лечение 3 препаратами по трехюмпоненггной схеме с включением диуретика более 3 недель без эффекта, систолическое артериальное давление (САД) выше 170 мм.рт.ст., диастолическое артериальное давление (ДАД) выше 95 мм.рт.ст.). К этой категории были отнесены 38 больных в возрасте от 42 до 67 лет, 21 мужчина и 17 женщин в связи с неэффективностью лечения стандартными комбинациями гипотензивных препаратов.

Всем пациентам было проведено от 5 до 7 сеансов УФОК Достоверное снижение артериального давления наблюдалось у 36 пациентов

Полученные результаты показывают, что у данной категории больных УФОК может быть использован для преодоления рефрактерности артериальной гипертонии. На рисунке 7 представлены результаты лечения больных с рефрактерной АГ В контрольной группе были пациенты с трехкомпонентным лечением, включая диуретический препарат.

Дни

Рис. 7. Динамика САД (1, 2) и ДАД (3, 4) на фоне УФОК и трехкомпонентного лечения. 1,3 - без УФОК, 2,4 - с УФОК.

2.5. Лечение УФОКоблитериррощих заболеваний артерий нижних конечностей

Нами пролечено 57 больных На рис. 8 показано, что у пациентов после лечения с применением УФОК наблюдается значительное увеличение количества безболевых шагов и общее улучшение самочувствия, которое проявлялось в ослаблении симптомов перемежающейся хромоты, прекращении ночных болей.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности применения ультрафиолетового облучения крови в терапии облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей

200 -6 180 \

I 40

Ч во •

0 2 4 в 8 10 12 14 16

2000 1300 1000 800

Л-

ШВ до УФОК ЩИ После УФОК

■л ■

Лл

0 1 2 3 4 5 в

Пациенты

Рис. 8. Изменение дистанции безболевого пути пациентов при лечении облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей после УФОК

Для количественной оценки проведенного восстановительного лечения был введен критерий эффективности лечения. Эффективность лечения определяется как отношение количества шагов больных после лечения УФОК к исходному количеству. Анализ полученных результатов позволил сгруппировать пролеченных больных в три группы (рис. 9).

£ 5

5 4

<я

у*-*

Г :

¡р ^

1»

1 2 3

Группы пациентов

Рис. 9. Эффективность лечения больных облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей после УФОК. 1 группа - 51% (п=29); 2 группа - 30% (п=15); 3 группа - 19% (п=13).

При завершении курса лечения УФОК у 51 % пациентов количество безболевых шагов увеличилось приблизительно в 5 раз, у 30% пациентов -в 3,5 раза, у 19% пациентов - в 1,5 раза.

выводы

1. Установлено, что терапевтическое действие УФОК основано на снижении повреждающего действия гиперактивированных циркулирующих нейтрофилов за счет ингибирования продукции АФК и сокращения времени циркуляции нейтрофилов.

2. Впервые показано, что применение УФОК нормализует показатели липидного обмена у больных с гиперлипидемиями Эффективность применения УФОК сопоставима с терапевтической эффективностью статинов.

3 Выявлено, что УФОК в случаях рефрактерной артериальной гипертонии является эффективным методом преодоления резистентности.

4. Метод УФОК может быть рекомендован как эффективный и доступный метод восстановительной терапии у больных с ССЗ как в стационарных, так и амбулаторных условиях, позволяющим в сочетании с медикаментозными методами лечения обеспечить скорейшее достижение терапевтического эффекта и сократить длительность стационарного лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Показано применение УФОК у больных с гиперлипидемиями, рефрактерной артериальной гипертонией, облитерирующими заболеваниями нижних конечностей, у больных, перенесших нарушение мозгового кровообращения в учреждениях здравоохранения различного уровня.

2. Рекомендовано применение УФОК для лечения пациентов с септическим эндокардитом.

3 Рекомендовано использование УФОК в качестве вторичной профилактики острого инфаркта миокарда у пациентов с ИБС.

4. Для контроля восстановительных мероприятий при ССЗ целесообразно применение метода проточной цитофлуориметрии для регистрации функциональных характеристик и апоптоза нейтрофилов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Действие ультрафиолетового облучения диапазона С на функциональные свойства нейтрофилов человека (Беляева ТВ, Винокуров М Г, Юринская М.М, Печатников В. А.)//Иммунология - 2005, (в печати)

2 Исследование апоптоза культивируемых нейтрофилов человека, индуцированного коротковолновым излучением (Винокуров М.Г, Юринская М М, Садикова Д Г, Печатнигов В А.у/ Цитология - 2001, т. 43, №9, С. 845-846.

3. Совместное действие ультрафиолетового излучения и ионов ртути на реактивность нейтрофилов человека (Винокуров М.Г, Беляева ТВ , Юринская М.М, Печатников В А)//Медицинская иммунология -2003, т 5, №3-4, С. 195.

4 Молекулярные механизмы апоптоза нейтрофилов человека. Медицинские аспекты (Печатников В А, Винокуров М Г., ЮринскаяМ.М., БеляеваТВ.)//«Горизонты биофизики От теории к практике», Пущино 2003.-С. 225-228.

5. Молекулярные механизмы апоптоза нейтрофилов человека Медицинские аспекты (Печатников В. А., Винокуров М.Г, Юринская М.М.У / Труды конференции «От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям», Пущино, 2002,- С. III.

6. Новые формы образовательно-профилактической работы в Московской области (Поздняков Ю.М., Гуревич М.А., ПискуноваГГ., Наумчева Н.Н, Уринский М.Е., Королев О П., Кузнецов Р.Л., Белоносова С.В., Лауль И.А., Патрихалкина О.В., Иванова Й.А., Гольдман КБ.)// Московский областной кардиологический центр, Москва, 10-12 октября 2000 г. -С. 235.

7. Индукция апоптоза в нейтрофилах человека ультрафиолетовым излучением (Винокуров МГ, Юринская М.М., КосяноваНИ, Гражданкин Е.Б., ПрохоренкоИ.Р.,Печатников В.А.) //Конференция «От современной фундаментальной науки к новым наукоёмким технологиям», Пущино. 2001.-С. 47.

8. Совместное действие ионов ртути и ультрафиолета С на регуляцию апоптоза нейтрофилов человека (Винокуров М.Г, ЮринскаяМ.М, Беляева ТВ , Косякова Н.И , Печатников В.А.) //Сборник научных трудов международного семинара «Экология и здоровье, экологическая медицина. Управление качеством жизни», Москва, 2003 -С. 102-104.

9. Влияние ультрафиолетового облучения крови на активность миелопероксидазы нейтрофилов больных сердечно-сосудистыми заболеваниями. (Бурювецкая М.Е., Винокуров М.Г., Юринская М.М.,

Беляева ТВ., Печатников В.А.) // Сборник тезисов 7 Пущинской конференции молодых ученых «Биология - наука 21 -го века», Пущино, 1418 апреля 2003.-С. 55.

10. Влияние ультрафиолетового излучения диапазона С на активацию и апоптоз нейтрофилов человека. (Винокуров М.Г., Юринская ММ., Садимэва ДГ, Печатников В. А) // П Всероссийский национальный конгресс кардиологов, Москва, 9-11 октября 2001. - С. 75.

11. Действие ионов ртути на респираторный взрыв и регуляцию апогпоза нейтрофилов человека (Винокуров М Г, Юринская М М., Садикова Д Г, Беляева ТВ., Печатников В А.) //Цитокины и воспаление, 2002 -№ 2 - С. 8.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СО КРАЩЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода АГ - артериальная гипертония ВЭМ - велоэргометрическая проба ИБС -ишемическая болезнь сердца ИМ - инфаркт миокарда МПО - миелопероксидаза ОХ - общий холестерин ТГ - триглицериды

УЗИ- ультразвуковое исследование' " УФОК - ультрафиолетовое облучение крови УФС -ультрафиолет С ФК - функциональный класс XJI - хемшпоминесценция

ХС ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности

ХС ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности

ЧПЭС - чрезпищеводная электрическая стимуляция сердца

ЭКГ - электрокардиограмма

ЭХОКГ - эхокардиофамма

DPI - dipileniumiodonium

FITC - флуоресцеинизотиоцианат

РНБ Русский фонд

2005-4 47683

Оглавление диссертации Сусликов, Александр Владимирович :: 2005 :: Тула

Список использованных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ультрафиолетовое облучение крови

1.1.1. Ультрафиолетовое облучение крови как метод лечения 10 различных заболеваний

1.1.2. Действие ультрафиолетового излучения на клетки крови 13 человека

1.2. Сердечно-сосудистые заболевания

1.2.1. Распространенность сердечно-сосудистых заболеваний

1.2.2. Определение сердечно-сосудистых заболеваний

1.2.3. Теории атеросклероза

1.3. Полиморфно-ядерные лейкоциты (нейтрофилы)

1.3.1. Созревание нейтрофилов

1.3.2. Активация нейтрофилов

1.3.3. Адгезия на сосудистый эндотелий

1.4. Окислительные механизмы бактерицидное™ нейтрофилов

1.4.1. НАДФН-окислительная система и респираторный взрыв 29 нейтрофилов

1.4.2. Строение миелопероксидазы

1.4.3. Образование и созревание МПО

1.4.4. Энзимология миелопероксидазы

1.4.5. Биологические мишени миелопероксидазы

1.4.6. Роль миелопероксидазы в тканевом повреждении и патогенезе 37 различных заболеваний

1.4.7. Роль МПО в развитии атеросклероза и ССЗ 38 1.5. Апоптоз нейтрофилов

1.5.1. Морфологические и биохимические признаки апоптоза

1.5.2. Молекулярные механизмы апоптоза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Общеклинические, лабораторные и инструментальные методы 50 исследования

2.2.2. Статистическая обработка

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Действие ультрафиолета С на функционирование нейтрофилов

3.1.1. Действие ультрафиолета С на продукцию активных форм 56 кислорода нейтрофилами человека

3.1.2. Действие ультрафиолета С на апоптоз нейтрофилов человека

3.1.3. Влияние ингибиторов образования АФК на УФС- 64 индуцированный апоптоз нейтрофилов

3.2. Клинические результаты применения УФОК

3.2.1. Эффективность УФОК при лечении ИБС

3.2.2. Эффективность УФОК при лечении гиперлипидемий ->

3.2.3. Эффективность УФОК при септических состояниях

3.2.4. Эффективность УФОК при рефрактерной артериальной 89 гипертонии

3.2.5. Лечение УФОК облитерирующих заболеваний артерий нижних 94 конечностей

3.2.6. Эффективность применения УФОК после острого нарушения 100 мозгового кровообращения

Введение диссертации по теме "Восстановительная медицина, спортивная медицина, курортология и физиотерапия", Сусликов, Александр Владимирович, автореферат

Актуальность проблемы.

В Российской Федерации отмечается рост заболеваемости населения болезнями системы кровообращения. К 1999 году заболеваемость (распространенность) сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) по сравнению с 1990 годом возросла на 20%. Ежегодно в лечебно-профилактические учреждения страны по вопросам, связанным с болезнями системы кровообращения, обращаются впервые более 2 млн. человек. В кардиологической помощи в настоящее время нуждается 19,2 млн. человек, из них 639 тыс. - детей и подростков. Объем выполнения коронарографий составляет 7,2%, шунтирования - 4%, транслюминальной баллонной коронарной ангиопластики - 2% (Федеральная Программа, Постановление правительства РФ № 540, 2001 г.). На сегодняшний день остро стоит задача разработки и внедрения эффективных и общедоступных методов немедикаментозной коррекции симптоматики этих заболеваний.

В последнее время все более широкое развитие получил один из перспективных методов лечения - фотогемотерапия, одним из направлений которой является ультрафиолетовое облучение крови (УФОК) (Кукуй JI.M., 1997; Ветчинникова О.Н., 2002; Карандашов В.И., 2004).

Большое значение в патогенезе ишемической болезни сердца имеют нейтрофилы. Генерируемые активированными нейтрофилами активные формы кислорода (АФК) оказывают повреждающее действие на окружающие ткани организма человека при ишемии органов с последующей реперфузией (Hearse D., 1992). Важную роль при ишемии-реперфузии, наряду с НАДФН-оксидазой, играет миелопероксидаза (МПО) нейтрофилов (Hansen P.R., 1995).

Снижение продукции АФК циркулирующими активированными нейтрофилами возможно с помощью активации их апоптоза под действием ультрафиолетового облучения (УФО), что приводит к уменьшению количества нейтрофилов. Представляется актуальной разработка способа снижения патологической реактивности нейтрофилов оптимизацией их апоптоза под действием УФО.

Цель исследования.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

2. Изучить эффективность использования УФС при сердечно-сосудистых заболеваниях и коррекции факторов риска развития сосудистой патологии -гиперлипидемии.

4. Разработать рекомендации по применению УФОК в комплексной восстановительной терапии ССЗ.

Научная новизна.

Впервые показано, что действие УФОК сопоставимо по эффективности лечения и реабилитации больных с ССЗ с действием статинов.

Впервые доказано, что УФОК потенциирует гипотензивный эффект при лекарственной терапии рефрактерной артериальной гипертонии.

Практическая значимость исследования.

Изучение механизмов эффективности УФОК позволило разработать рекомендации по применению метода проточной цитофлуориметрии для проведения экспресс-диагностики функционального состояния нейтрофилов для контроля за ходом восстановительной терапии ССЗ при использовании УФОК.

Разработанные принципы и структура проведения лечебно-восстановительных мероприятий при лечении ССЗ с использованием УФОК на основе мониторинга параметров функционального состояния нейтрофилов пациентов с ССЗ могут быть применены в учреждениях практического здравоохранения.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследований используются в работе кардиологического отделения БПНЦ РАН, в работе ГУП НИИ новых медицинских технологий (г. Тула), в педагогическом процессе на кафедре медико-биологических дисциплин ТулГУ.

Публикации. Основные результаты диссертации опубликованы в 11 печатных работах, в том числе в 4-х статьях (2 в журналах, рекомендованных ВАК).

Заключение диссертационного исследования на тему "Системные управляющие эффекты ультрафиолетового облучения крови в восстановительной медицине"

выводы

2. Впервые показано, что применение УФОК нормализует показатели липидного обмена у больных с гиперлипидемиями.

Эффективность применения УФОК сопоставима с терапевтической эффективностью статинов.

3. Выявлено, что УФОК в случаях рефрактерной артериальной гипертонии является эффективным методом преодоления резистентности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Показано применение УФОК у больных с гиперлипидемиями, рефрактерной артериальной гипертонией, облитерирующнми заболеваниями нижних конечностей, у больных, перенесших нарушение мозгового кровообращения в учреждениях здравоохранения различного уровня.

2. Рекомендовано применение УФОК для лечения пациентов с септическим эндокардитом.

3. Рекомендовано использование УФОК в качестве вторичной профилактики острого инфаркта миокарда у пациентов с ИБС.

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю безграничную благодарность моему первому научному руководителю настоящей работы доктору физико-математических наук, профессору

Владимиру Алексеевичу Печатникову

Печатников В.А.| был инициатором совместной работы ученых и медиков. Благодаря его помощи метод ультрафиолетового облучения крови был внедрен в практическое здравоохранение г. Пущино.

Сердечная благодарность доктору медицинских наук, профессору Александру Агубечировичу Хадарцеву за его помощь и мудрое руководство на завершающем этапе написания диссертации.

Выражаю признательность и благодарность моему научному руководителю доктору биологических наук, профессору Николаю Константиновичу Чемерису за его советы, обсуждение и постоянную поддержку в процессе написания диссертации.

Огромное спасибо сотрудникам лаборатории регуляции апоптоза Института биофизики клетки РАН к.б.н. Максиму Григорьевичу Винокурову и к.б.н. Марине Михайловне Юринской за их ежедневную бескорыстную помощь, дружбу и участие в получении результатов исследований, вошедших в кандидатскую диссертацию.

Особую признательность выражаю моему оппоненту, доктору медицинских наук, профессору Владимиру Ивановичу Карандашову. Своевременные замечания и советы сделали работу более яркой и убедительной.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Сусликов, Александр Владимирович

1. Антоненко В.Т. Патологическая физиология иммунных повреждений сердца. Киев,"Наукова думка", 1979 г.

2. Арутюнов А.С., Карасёв А.Б., Ковалёв О.И. (1988) Опыт клинического применения устройства для проточного ультрафиолетового облучения крови. Мед. техника, №1, с. 48 50.

3. Атясов Н.И. (1985) Вопросы использования оптического облучения в медицине. Саранск, 139 с.

4. Атясов Н.И. (1987) Лечебно-оздоровительное действие оптического излучения на организм животных и человека. Саранск, 155 с.

5. Белишева Н.К., Фирулина И.И. и др. (1986) Модификация ростостимулирующих свойств донорской крови при её ультрафиолетовом облучении. Механизмы вл. облуч. УФ-луч. кр. на орган, чел. и жив, Л.: Наука, с. 194 202.

6. Большая медицинская энциклопедия. 1986 г.,Т.27, с. 131-137.

7. Ветчинникова О.Н., Пиксин И.Н., Калинин А.П. (2002). Экстракорпоральное ультрафиолетовое облучение крови в медицине. М., 263 с.

8. Винокуров М.Г., Юринская М.М., Печатников В.А. (2002). Ионы ртути ингибируют апоптоз нейтрофилов, индуцированный ультрафиолетовым излучением диапазона С. Биофизика, 2002, том 47, вып. 4, с.683-685.

9. Винокуров М.Г., Косякова Н.И., Николаева Н.Н., Печатников В.А. (1999). Биофизика, 1999, том 44, вып. 5, с. 929-930.

10. Ю.Вихреев Б.С., Маркелов И.М., Матвеенко А.В. и др. (1986) Иммуностимулирующее и антиоксидантное действие аутотрансфузии УФ-облучённой крови. Механизмы влияния облучения УФ-лучами на организм человека и животных. Л.: Наука, с. 39 40.

11. П.Владимиров Ю.А. Инактивация ферментов ультрафиолетовым облучением, Соросовский образовательный журнал, 2001, том 7, №2 , с. 5-8.

12. Волгарёва Е.В. (1991) Функциональная активность лимфоцитов крови человека после её УФ-облучения в терапевтической дозе. Автореф. дис.к.м.н., Л., 23 с.

13. Волгарёва Е.В., Волгарёв А.П., Самойлова К.А. (1990) Влияние УФ-облучения и УФ-облучённой аутокрови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека. Цитология, т.32, № 12, с. 1217- 1224.

14. Н.Волков В.И., Серик С. А. Противовоспалительные цитокины и растворимая молекула межклеточной адгезии при ишемической болезни сердца. Кардиология, 2000, 9, с. 12-16.

15. Гагушин В.А., Овчинников В.В., Младшов В.В., Матвеева JI.JL (1992) УФО крови в комплексном лечении перитонита. В сб.: Применение ультрафиолетового облучения крови в медицине. Саранск, с. 100 103.

16. Ганелина И.Е., Самойлова К.А. (1986) Механизмы влияния облучённой ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. Л.: Наука, с. 3 7.

17. П.Гребенщикова Л.А., Косенко В.А.(1989) Реинфузия облучённой УФ-лучами собственной крови как приём воздействия на показатели гуморального иммунитета. Саранск, с. 105 112.

18. Гуревич К.Я., Костюченко А. Л, Белоцерковский М.В. (1993) Патогенетические механизмы эфферентной терапии. Гематол. и трансфузиол., № 9, с. 42 46.

19. Дваладзе Н.А. (1993) Аутотрансфузия фотомодифицированной крови на нарушения иммунитета в хирургической практике. Автореф. дис.к.м.н., СПб., 23 с.

20. Дидковский Н.А., Трескунов В.И., Захаржевская Т.В. и др. (1989) Гемосорбция влечении больных аспириновой бронхиальной астмой. Клинич. медицина, т. 67, №12, с. 40 44.

21. Ибрагимова А.Г. (1975) Изменение функционального состояния коры надпочечников при воздействии УФ-лучей. Совр. мет. иссл. в клинике и экспер., Труды Казанск. мед. инст-та., т. 47, с. 45 47.

22. Иванов Е.М. (1989) Аутотрансфузия УФ-облучённой крови как метод неспецифической терапии. Метод, реком., Владивосток, 21 с.

23. Иванов Е.М., Капшиенко И.Н., Триль Н.М. (1989) Влияние УФ-облучённой крови на гуморальное звено иммунного ответа у больных с хроническими воспалительными процессами. Вопр. курортол., физиотер. и леч. физ-ры., №1, с. 45 47.

24. Иванов Е.М., Дедова Т.Г. (1990) АУФОК терапия больных неспецифическими заболеваниями лёгких. Врач, дело, №1, с. 42 - 43.

25. Казаков В.Н., Синяченко О.В., Файнерман В.Б. и др. (1996) Динамическое поверхностное натяжение биологических жидкостей здоровых людей. Арх. клин, экспер. мед. т. 5, № 1, с. 3 6.

26. Казаков В.Н., Миллер Р., Синяченко О.В., и др. (1997) Динамическая межфазная тензиометрия новый метод изучения биологических жидкостей человека: Используемая техника. Вестн. нов. мед. технол., т. 4, №4, с. 100- 103.

27. Казаков В.Н., Синяченко О.В., Файнерман В.Б., Миллер Р. (1997) Динамическое поверхностное натяжение биологических жидкостей в медицине. Из-во медуниверситета, Донецк, 296 с.

28. Казаков В.М., Синяченко О.В., Файнерман В.Б. (1998) Методи вивчення динам1чного поверхневого натягу рщин i перспективи використання Ух в бюлогп та медицин!. Ф1зюл. журн., т. 44, № 3, с. 331 332.

29. Карандашов В.И. (1991) Квантовая гемотерапия и реология крови // в кн.: Применение УФО-крови в медицине.Саранск, с. 103 108.

30. Карандашов В.И., Петухов Е.Б. (1997) Ультрафиолетовое облучение крови. Медицина, Москва, 224 с.

31. Карандашов В.И., Черняков В.П. (1992) Экстракорпоральное УФО крови в клинической медицине. СПб, 48 с.

32. Карандашов В.И., Петухов Е.Б. (1993) Ультрафиолетовое облучение всей : циркулирующей крови . Вест. РАМН. М.: Медицина, № 9, с. 38 41.

33. Карандашов В.И., Петухов Е.Б., Зродников B.C. Фототерапия. Москва, "Медицина", 2001 г.

34. Карандашов В.И., Петухов Е.Б., Зродников B.C. (2004). Квантовая терапия. Москва, "Медицина", 336 с.

35. Козинец Г.И. (ред.) (1997) Практическая трансфузиология. "Триада-Х", Москва, 442 с.

36. Козлов И.Г., Горлина Н.К., Чередеева А.Н. Рецепторы контактного взаимодействия. Иммунология 1995, 5, с. 14-24

37. Конев С.В., Волотовский И.Г. (1979) Фотобиология. Минск, 541 с.

38. Константинова Н.А., Петухов Е.Б., Лаврентьев В.В. (1985) Влияние ультрафиолетового облучения на активность системы комплемента и иммунные комплексы сыворотки крови . Иммунология, №6, с. 83 84.

39. Костюченко А.Л. (ред) (2000) Эфферентная терапия. Спб., Фолиант, с. 71 -76.

40. Куницина JI.A. (1985) Применение ультрафиолетового облучения при нервных, сердечно-сосудистых и лёгочных заболеваниях. Метод, реком. Ялта, 16 с.

41. Купновицкая И.Г. (1992) Квантовая терапия у больных ИБС. Врачебное дело, №7, с.27 29.

42. Лисовский В.А., Мирошников М.М. (1986) Ультрафиолетовое облучение аутокрови и возможности его применения в лечебных учреждениях. ВМЖ, №9, с. 64 66.

43. Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М. (1989) Эфферентные методы в медицине, М., Медицина, 352 с.

44. Лужников (ред) (2001) Неотложная терапия острых отравлений и эндотоксикозов. М., Медицина, с. 42 48.

45. Малиновская И.Э., Сиренко Ю.Н., Шумаков В. А. и др.(1991) Холтеровское мониторирование в оценке эффективности квантовой гемотерапии у больных нестабильной стенокардией. Тер. архив, № 8, с. 45-48.

46. Марусанов В.Е. (1991) Лечебное действие облучённой ультрафиолетовыми лучами аутокрови. Метод, пособие, СПб., 30 с.

47. Маянский А.Н., Маянский Н.А., Заславская М.И., Поздеев Н.М., .Плескова С.Н. Апоптоз нейторфилов. Иммунология, 1999, 6, с. 5-10.

48. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. Москва, "Медицина", 1984 .

49. Муравьев Р.А., Бут П.Г., Фомина В.А., Роговин В.В. Механизм бактерицидной активности в фагосомах нейтрофилов. Известия Академии наук. Серия биологическая, 2002, 4, с. 4-10.

50. Неймарк И.И., Овчинников В.А. и др. (1991) Эфферентная терапия в лечении сепсиса. Тер. архив, т.21, №11, с. 74 77.

51. Неймарк И.И., Овчинников В.А. и др. (1991) Опыт применения экстракорпоральных методов детоксикации организма при острых заболеваниях органов брюшной полости. Вестник хирургии, № 1, с. 86 -90.

52. Новикова Р.И., Черний В.И., Костенко B.C., Шраменко Е.К. (1999) Применение эфферентных методов терапии при критических состояниях. Метод, рекоменд. Донецк, 60 с.

53. Оболенская К.Д., Арцишевская Р.А. (1986) Структурно-функциональные изменения клеток донорской крови при ультрафиолетовом облучении в аппарате "Изольда". Эффект дозы. Механизмы вл. облуч. УФ-луч. кр. на орган, чел. и жив., JL: Наука, с. 187.

54. Оболенская К.Д., Фрейдлин И.С., Самойлова К.А. (1987) Изменение фагоцитарной активности лейкоцитов донорской крови после ее УФ-облучения. Цитология, N. 8, С. 948-954.

55. Петухов Е.Б., Матусенко А.А., Корнеев А.А. и др. (1990) Коррекция повышенной вязкости крови у больных с постэмболической лёгочной гипертензией. Грудная и серд.-сосуд. хирургия, №10, с. 34 37.

56. Попов Ю.В., Лазарев Д.Н. (1986) Аппаратура для УФО-крови. Механизмы вл. облуч. УФ-луч. кр. на орган, чел. и жив., Л.: Наука, с. 28 -30.

57. Поташов Л.В., Чеминава Р.В. (1982) Ультрафиолетовое облучение крови. Вестн. хирургии, №6, с. 130 133.

58. Рекомендации группы экспертов Национальной образовательной программы США (III доклад по диагностике, оценке и лечению высокого холестерина крови у взрослых, 2001) JAMA, 2001, 285: 2486-2497.

59. Репин B.C. Клеточные механизмы атеросклероза. Соросовский образовательный журнал, 1998, 9, с. 6-10.

60. Роговин В.В., .Муравьев Р.А, Муштакова В.М. Состав пероксидазосом нейтрофилов. Известия Академии наук. Серия биологическая, 2001, 4, с. 5-9.

61. Самойлова К.А., Арцишевская Р.А. (1986) Стимулирующее действие УФ-излучения на активность антител и комплемента крови человека. Механизмы вл. облуч. УФ-луч. кр. на орган, чел. и жив., Л.: Наука, с. 207 -211.

62. Самойлова К.А., Миронова А.П., Арцишевская Р.А. (1984) Выход веществ из лимфоцитов периферической крови человека, облучённой коротковолновыми УФ-лучами. Цитология, т. 26, № 1, с. 102 108.

63. Самойлова К.А., Оболенская К.Д. (1990) Изменение поверхности и активации циркулирующих лейкоцитов при аутотрансфузии УФ-облучённой крови. Вестн. хир., №6, с. 99 103.

64. Сюч Н.И., Вокуев И.А. Диагностические возможности лейкоцитарной формулы крови у больных ишемической болезнью сердца пожилого истарческого возраста. Клиническая лабораторная диагностика, 2000, 11, с.5.

65. Титов В.Н. (2000). Общность атеросклероза и воспаления: специфичность атеросклероза как воспалительного процесса. Клиническая лабораторная диагностика, 4, с. 3-9.

66. Титов В.Н. (2001). Атеросклероз патология полиеновых жирных кислот. Клиническая лабораторная диагностика, 1, с. 3-9.

67. Трещинский А.И., Васильев Г.А, Шейман Б.С. (1984) Экстракорпоральное УФО крови. Врач, дело, №3, с. 11- 16.

68. Ультрафиолетовое облучение крови в практической медицине. Метод, рекоменд./ МЗ Латвии.- Рига, 1990.- 26 с.

69. Физиология и патофизиология сердца. Под ред. Н.Сперелакиса.Том 2, Москва, "Медицина", 1988 г.

70. Филатов А.Н., Касумов Г.Г. (1937) Экспериментальное и клиническое наблюдение по вопросу о переливании крови, подвергнутой облучению УФ-лучами при анемиях. Вест, хир., №1, с. 3 5.

71. Финкельштейн Б.Б., Зверькова Ф.А. (1986) Опыт применения аутотрансфузии УФО-крови в детской дерматологии. Механизмы вл. облуч. УФ-луч. кр. на орган, чел. и жив., Л., Наука, с. 122 132.

72. Холмогоров В.Е. (1988) УФО-аутокрови. Клиническое применение. Магнитный резонанс в биол. и медицине: тез. докл. Всесоюзн. симпоз., Черноголовка, с. 22-23.

73. Чаленко В.В., Медведев А.Н., Раковщик Д.Г. (1992) Физиологические фотоэффекты УФО-крови. Саранск, с. 4 9.

74. Черний В.И., Шраменко Е.К., Степанюк В.А. и др. (2001) Применение тензиометрии и реометрии для оценки эффективности эфферентных методов при критических состояниях. Бшь, знебол. i штенс. тер., № 2, с. 116-117.

75. Шано В.П. (1998) Клинические лекции по интенсивной терапии. Донецк, 624 с.

76. Ярилин А.А. Апоптоз. Иммунология, 1996, 1, с. 4-10.

77. Alberts H., Kromphardt H. (1964) Biochemische Grundlagen der Hamagenen Oxidationstherapie. Phys. Diat. Therapie, bd. 5, s. 235.

78. Baumler H. (1983) Hypertension Secondary to Serum Hyperviscosity in a Patient with Sepsis. Am. J. Med., 82, 1039 1045.

79. BielensteinE. UV irradiation of blood in oxygen atmosphere (Wehrli's H.O.T.); with special reference to oxygenation methods and UV irradiation of blood.Z Arztl Fortbild (Jena). 1972 Jul 15;66(14):711-6.

80. Borregaad Niels, Jack B. Cowland. Granules of human neutrophilic polymorphonuclear leucocyte/ Blood, Vol 89, No 10, 1997, pp3503-3521.

81. Burner Ursula, Paul G. FurtmuE Her, Anthony J. Kettle, Willem H. Koppenol, and Christian Obinger. Mechanism of Reaction of Myeloperoxidase with Nitrite. The journal of biological chemistry, Vol. 275, No. 27, pp. 2059720601,2000.

82. Capron L. Pathogenesis of atherosclerosis: an update on the three main theories. Ann Cardiol Angeiol (Paris). 1989;38:631-634.

83. Carr Anitra C., Mark R. McCall, Balz Frei. Oxidation of LDL by Myeloperoxidase and Reactive Nitrogen Species Reaction Pathways and Antioxidant Protection. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000;20:1716-1723.

84. Chen Si-xue and Peter Schopfer. Hydroxyl-radical production in physiological reactions. Eur. J. Biochem. 260, 1999.

85. Dalen Christine J., Christine C. Winterbourn, Revathy Senthilmohan, and Anthony J. Kettle. Nitrite as a Substrate and Inhibitor of Myeloperoxidase. The journal of biological chemistry, Vol. 275, No. 16, pp. 11638-11644, 2000.

86. Edwards SW, and Hallett MB. Seeing the wood for the trees: The forgotten role of neutrophils in rheumatoid arthritis. Immunol Today, 1997. 18:320-324.

87. Engelhardt G. (1977) Der Einfluss der UVB auf das hamopoetische System. Ztschr. Physiother., bd. 29, N 2, s. 345 352.

88. Faggiotto A., Paoletti R. Statins and blockers of the rennin-angiotensin system-vascular protection beyond their primary mode of action hypertension. 1999; 34 part 2.: 987-996.

89. Falk RJ, and Jennette JC. Anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies with specificity for myeloperoxidase in patients with systemic vasculitis and idiopathic necrotizing and crescentic glomerulonephritis. N Engl J Med, 1988, 318:1651-1657.

90. Fan J., Unoki H., Iwasa S., Watanabe. Role of endotheline-1 in atherosclerosis. Ann NY Acad Sci, 2000, 902, 84-93.

91. Frasch S.C., Nick J.A., Fadok V.A., Bratton D.L., Worthen G.S., Henson P.M. // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. P. 8389- 8397.

92. Frick G., Gansicke F., Wiesner A., Wiesner S. (1975) Gert zur Ultrafiolettbestrahlung des Blutes. Medizintechnik, bd. 16, h.2, s. 44 46.

93. Frick U., Wiedenholt J.(1983) Hamatologische Befunde zur Ultraviolettbestrahlung des Blutes unter begonderer Berycksichtigung der Trombozytenagregation. Ztschr. Physiother., bd. 34, N 4, s. 265 273.

94. Furtmuller Paul G., Christian Obinger, Yuchiong Hsuanyu and H. Brian Dunford. Mechanism of reaction of myeloperoxidase with hydrogen peroxide and chloride ion. Eur. J. Biochem. 267, 2000.

95. Gullberg U, N. Bengtsson, E. Bulow, D. Garwiez, A. Lindmark, I. Olsson. Processing and targeting of granule proteins in human neutrophils. Journal of immunological methods, 232, 1999, pp201-210.

96. Hampton Mark В., Anthony J. Kettle, and Christine C. Winterbourn. Inside the Neutrophil Phagosome: Oxidants, Myeloperoxidase,and Bacterial Killing.Blood, Vol 92,(9) ,november 1, 1998.

97. Hansen Peter Riis, MD, PhD, Role of Neutrophils in Myocardial Ischemia and Reperfusion. Circulation. 1995;91:1872-1885.

98. Haunstetter Armin, Seigo Izumo. Apoptosis Basic Mechanisms and. Implications for Cardiovascular Disease. Circ Res. 1998;82:1111-1129.

99. Hoeg JM, Klimov AN. Cholesterol and atherosclerosis: "the new is the old rediscovered." Am J Cardiol. 1993;72:1071-1072.

100. Karlsson, C. Dahlgren. Assembly and Activation of the Neutrophil NADPH Oxidase in Granule Membranes. Antioxidants & Redox signaling,Vol.4, (1), 2002.

101. Klippel A, Reinhard C, Kavanaugh WM, Appel G, Escobedo MA, and Williams LT (1996). Membrane localization of phosphatidylinositol 3-kinase is sufficient to activate multiple signal-transducing kinase pathways. Mol Cell Biol 16:4117-4127.

102. Knott E. (1948) Development of ultraviolet blood irradiation. Amer. J. Surg., vol. 76, p. 65 171.115. Lancet, 2005;365:217-223.

103. Li J, Huang CY, Zheng RL, Cui KR, Li JF. Hydrogen peroxide induces apoptosis in human hepatoma cells and alters cell redox status. Cell Biol Int 2000;24(l):9-23.

104. Libby P. Molecular bases of the acute coronary syndrome. Circulation. 1995; 21, 2844-2850.

105. Libby P. Current concept of the pathogenesis of acute coronary syndromes. Circulation; 2001; 104; 365-372.

106. Malle Ernst, Georg Waeg, Renate Schreiber, Elisabeth F., Wolfgang Sattler and Hermann-Josef. Immunohistochemical evidence for the myeloperoxidase/H202/halide system in human atherosclerotic lesions. Eur. J. Biochem. 267, 4495±4503 (2000).

107. Masuda Mitsuharu, Toshinori Suzuki, Marlin D. Friesen, Jean-Luc Ravanat, Jean Cadet, Brigitte Pignatelli, Hoyoku Nishino, and Hiroshi Ohshima. Chlorination of Guanosine and Other Nucleosides by Hypochlorous

108. Acid and Myeloperoxidase of Activated Human Neutrophils. The journal of biological chemistry, Vol. 276, No. 44, pp. 40486-40496, 2001.

109. McCall Mark R, Balz Frei. Oxidation of LDL by Myeloperoxidase and Reactive Nitrogen Species. Reaction Pathways and Antioxidant Protection. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000;20:1716-1723.

110. Memon Riaz A., Ilona Staprans, Mustafa Noor, Walter M. Holleran, Yoshikazu Uchida, Arthur H. Moser, Kenneth R. Infection and Inflammation Induce LDL Oxidation In Vivo. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2000;20:1536-1542.

111. Mietkevsky (1997) Determination of equilibrium surface tension value by extrapolation via long time approximation. Clin. Med. J., 84, 447 450.

112. Nordestgaard BG, Nielsen LB. Atherosclerosis and arterial influx of lipoproteins. Curr Opin Lipidol. 1994;5:252-257.

113. Olney R.(1970) The Role of UVB irradiation Therapy Knott Technic in Surgery. J. Intern. Coll. Of Surgeons, vol. 11, p. 353 356.

114. Phelps P, and McCarty JR . Crystal-induced inflamma-tion in canine joints. Importance of polymorphonuclear leukocytes. J Exp Med. 1966.124:150-162.

115. Prince A. The CFTR advantage-capitalizing on a quirk of fate. Nature Med, 1998,4:663-664.

116. Repke H. (1984) Zkusenosti s hematogenni oxidachi lecbou podle wehrliho u perifirnich arteriopatii. Cas. Lek. ces., Bd. 106, N 49, s. 1336 -1338.

117. Ross R (1993). The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s. Nature; 362:801-809.

118. Schrijver G, Bogman MJ, Assmann KJ, de Waal RM, Robben HC, Van Gasteren H, and Koene RA. Anti-GBM nephritis in the mouse: Role of granulocytes in the heterolo-gous phase. Kidney Int, 1990, 38:86-95.

119. Shohat В.(1993) Present status of UVB irradiation. Arch. Phys. Therapy. 62, 368 372.

120. Thubrikar MJ, Keller AC, Holloway PW, Nolan SP. Distribution of low density lipoprotein in the branch and non-branch regions of the aorta. Atherosclerosis. 1992;97:1-9.

121. Torres Martine, Tomas De Coates. Function of the cytosceleton in human neutrophils and methods for evaluation. Journal of immunological methods 232(1999), 89-109

122. Watjen W, Cox M, Biagioli M, Beyersmann D. Cadmium-induced apoptosis in C6 glioma cells: mediation by caspase 9-activation. Biometals 2002 Mar, 15(1): 15-25.

123. Weisner A. (1974) Zur Geschichte der UV-therapie. Fpl. Haematol., bd. 101, h. 5, s. 848 -856.

124. Wels K. (1960) The UV irradiation of auto-transfused human blood; studies in oxygen absorbtion values. Am. J. M. Sc., 197, 42 49.

125. Wenning F. (1987) Objektivierung rheologischhamodynamischer und metabolischer Effekte der UVB bei peripheren sarteriellen. Z. gess. inn. Med., Bd 42, s. 44 50.

126. Widlak P, Garrard WT. Ionic and cofactor requirements for the activity of the apoptotic endonuclease DFF40/CAD. Mol Cell Biochem 2001 Feb;218(1-2): 125-30.

127. Wiesner S. (1985) Zur Wirkungsweise der UVB bei chronisch-arteriellen Verschlusskrankheiten der unteren Extremititen. Z. Physioter., bd. 37, h.2, s. 115-121.

128. Winterbourn Christine C, PhD, Margret CM Vissers, PhD, and Anthony J Kettle, PhD. Myeloperoxidase. Current Opinion in Hematology 2000, 7:5358.

129. Зам. директора по науке, доктор биологических наук, доктор технических наук,профессор1. А.А. Яшин

130. Ст. научн. сотрудник, кандидат химических наук1. В.А. Евтеева

131. БОЛЬНИЦА ПУЩИНСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК

132. ИНН 5039002859 г.Пущино Московской области Инд. 1422S0 Тел. 73-24-061. На №1. АКТвнедрения результатов диссертации Сусликова А.В. по теме: « Системные управляющие эффекты ультрафиолетового облучения крови в восстановительной медицине»

133. Результаты диссертационной работы Сусликова А.В. используютя в научно-практической деятельности кардиологического отделения стационара Больницы Пущинского Научного центра РАН .t X

134. Акт составлен для представления в диссертационный совет Д212.271.06 при-Тульском государственном университете.

135. Зам. главного врача по лечебной работе А.В.Мамонов1. УТВЕРЖДАЮ

136. Зам. декана медицинского факультета Тульского госудащгвеНного университета1. Ю.Н. Борисова1. Л Vy J -j !2005 г.1. АКТвнедрения диссертационной работы Сусликова Александра Владимировича

137. Профессор кафедры медико-биологических дисциплин, д. мед. наук, профессорI1. В.Н. Морозов