Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции

Зима, Анастасия Павловна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Зима, Анастасия Павловна Томск 2009 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции

ООЭ455882

На правах рукописи

Зима Анастасия Павловна

СИСТЕМА ЦИТОКИНОВ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ: МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДИЗРЕГУЛЯЦИИ

14.00.16 - патологическая физиология 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск - 2008

003455882

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, Заслуженный деятель науки РФ

Рязанцева

Наталья Владимировна Новицкий

Вячеслав Викторович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН

Стеновая

Елена Алексеевна Дыгай

Александр Михайлович Шкурупий

Вячеслав Алексеевич

Ведущая организация:

Государственное учреждение научно-исследовательский институт вирусологии имени Д.И. Ивановского Российской академии медицинских наук (г. Москва)

Зашита состоится ¿¿¿¿¿¿ум 2009 г. в часов на заседании диссерта-

ционного совета Д 208.096.01 при Сибирском государственном медицинском университете (643050, г. Томск, ул. Московский тракт, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета

Автореферат разослан /^-¿^¿у* 2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Суханова Г.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблема персистентных вирусных инфекций приобретает все большую актуальность в современной медико-биологической науке и практическом здравоохранении в связи с возросшей заболеваемостью, их широким распространением среди трудоспособного населения, недостаточной эффективностью современных методов профилактики. Особо следует подчеркнуть трудность прогнозирования характера течения заболевания, выявления предрасположенности/резистентности к развитию хронических форм инфекции, отсутствие молекулярных технологий предупреждения развития осложнений: дегенеративных, фибротических и опухолевых процессов. Актуальным аспектом практической медицины остается недостаточная эффективность противовирусной терапии, а также отсутствие четких предикторов эффективности проведения дорогостоящих лечебных мероприятий применительно к конкретному пациенту. Принципиально важно, что растет число вялотекущих, стертых и бессимптомных форм вирусных инфекций [Воробьев A.A. и соавт., 2000; Покровский В.И. и со-авт., 2000; Шевченко Ю.Л., 2000; Пименов Е.В. и соавт., 2003; Ивашкин В.Т., 2004; Hoffman H.R., 2006; Львов Д.К., Злобин В.И., 2007; Kneisson V.M. et al„ 2007].

Эволюция инфекционной патологии ставит перед медициной новые задачи, обусловливая необходимость расширения и углубления фундаментальных исследований процессов в системе патоген-хозяин. Представления о патогенезе инфекционных заболеваний человека весьма динамичны. В настоящее время многие вопросы, касающиеся молекулярной патофизиологии инфекций, вызванных вирусами семейства Flaviviridae, остаются открытыми. В частности, до конца не установлены факторы, определяющие разные исходы болезни: от полной элиминации инфекта и бессимптомного носительства до трансформации в прогреди-ентную хроническую форму с формированием осложнений (цирроз печени, гепа-тоцеллюлярная карцинома в случае вирусного гепатита С, парезы, параличи и аутоиммунные процессы при клещевом энцефалите). Это обосновывает необходимость проведения фундаментальных исследований, направленных на идентификацию общих и специфических для конкретной нозологии молекулярно-генетических факторов, определяющих ключевые фенотипичсские характеристики заболевания - от исхода взаимодействия патогена и организма человека до риска развития тяжелых форм заболевания и его осложнений, вероятности адекватного ответа на лекарственную терапию.

На современном этапе медицинских знаний нет сомнений в том, что форма течения инфекционного процесса определяется сложным комплексом взаимодействия патогена и организма человека. Известно, что особенности формирования и течения хронической инфекции обусловлены, с одной стороны, гетерогенностью самого патогена (вирулентность, контагиозность, лекарственная устойчивость), а, с другой, - определяются состоянием иммунной системы организма, от адекватности функционирования которой зависят характер течения и исход заболевания [Richardson М.М., 2006; Holden A.F. et al., 2007]. Факт формирования расстройств иммунного реагирования при развитии вирусных инфекций установлен давно.

Известно, что возбудители инфекционных заболеваний обладают иммуномоду-лирующей активностью, вызывая иммунодефицитные состояния, степень выраженности которых связана непосредственно с характером и тяжестью инфекционного процесса и зависит от преморбидного фона пациента [Долгих В.Т., 2000; Павлович С.А., 2001; Субботин А.В. и соавт., 2002; Чуйкова К.И., 2002; Ивашкин В.Т. и соавт., 2004; Серов В.В. и соавт., 2004; Рязанцева Н.В. и соавт., 2006]. Особо следует акцентировать внимание на том, что флавивирусы, в том числе вирус гепатита С (hepatitis С virus - HCV) и вирус клещевого энцефалита (tick-borne encephalitis virus - TBEV), способны размножаться в эффекторных клетках иммунной системы, реализуя тем самым механизмы «ускользания» от иммунного надзора [Букринская А.Г., 1986; Погодина В.В. и соавт., 1986; Серов В.В., Мухин Н.А., 2000; Ивашкин В.Т. и соавт., 2001; Пименов Е.В. и соавт., 2003].

Особую роль в дизрегуляции функционирования иммунной системы при развитии инфекционного процесса играют нарушения межклеточной сигнализации. Известно, что в становлении и стабилизации контактов между взаимодействующими в ходе реализации противоинфекционной защиты клетками макроорганизма важное значение принадлежит биологической мультасистеме — цитокин-рецепторной сети [Ярилин А.А., 1999; Фрейдлин И.С. и соавт., 2001; Хаитов P.M., 2001; Симбирцев А.С., 2004]. В современной мировой литературе существуют данные, свидетельствующие о том, что возбудители могут использовать разные молекулярные механизмы, опосредующие изменение роли системы цито-кинов в межклеточной кооперации иммуноцитов. В основе этого могут лежать как непосредственное воздействие патогенов на продукцию цитокинов мононук-леарными лейкоцитами и рецепторный аппарат лимфоцитов, так и опосредованное их влияние путем супрессии внутриклеточных сигналов активации, механизмов сигнальной трансдукции и транскрипции [Ивашкин В.Т. и соавт., 2000; Кетлинский С.А., 2002; Царегородцева Т.М., Серова Т.И., 2003; Gomez I. et al., 2004; Nelson B.H., 2004; Best S.M. et al., 2005; Smith P.L. et al., 2005; Boettler T. et al., 2005; Bolacchi F. et al., 2006; Werme K. et al., 2008].

Высказывается предположение о генетически детерминированных нарушениях коммуникативных рецепторзависимых взаимодействий эффекторных клеток, а, следовательно, формирования иммунного ответа и элиминации инфекта. Установлено, что гены цитокинов и их рецепторов в популяции человека характеризуются аллельным полиморфизмом и наличием изоформ, что определяет их способность модулировать направление иммунного ответа и лежит в основе предрасположенности к саморазрешающейся инфекции или развитию хронического инфекционного процесса [Al Sharif F. et al., 1999; Рахманова А.Г. и соавт., 1999; Цой P.M., 2001; Сенников C.B. и соавт., 2002; Ракова И.Г., Коненков В.И., 2004; Бархаш А.В. и соавт., 2005; Richardson et al., 2005; Коненков В.И. и соавт., 2006; Фрейдин М.Б. и соавт., 2006; Авдошина В.В. и соавт., 2007; Коненков В.И. и соавт., 2007; Chen Т.У. et al., 2007; Hennig B.J. et al., 2007; Lund R.J. et al., 2007; Pérsico M. et al., 2007; Hegazy D. et al., 2008].

организма к инфекции, являются дискутабельными. Накопленные в обозначенной тематике факты, однако, зачастую носят сугубо феноменологический характер. В связи с этим представляется весьма актуальным оценить ассоциированность предрасположенности/резистентности организма человека к персистентному течению флавивирусных инфекций с рядом аллельных вариантов генов иммуноци-токинов и их рецепторов. Анализ распространенности различных аллелей генов интерлейкинов и их рецепторов среди пациентов с хронической персистенцией вирусов семейства Flaviviridae позволит установить общие факторы, определяющие связь между индивидуальным молекулярно-генетическим профилем системы межклеточной кооперации и характером течения инфекционного процесса. В то же время логично предположить существование совокупности специфических молекулярно-генетических маркеров для каждого конкретного заболевания. Полученные в указанном аспекте фундаментальные знания не только дополнят существующие на сегодняшний день представления о механизмах генетически детерминированной предрасположенности и резистентности организма человека к хроническому течению F/av/vinßfae-инфекции, но и могут послужить основанием для разработки иммуногенетических подходов для ранней диагностики, прогноза, лечения и профилактики заболеваний.

Цель исследования: установить молекулярные механизмы дизрегуляции ци-токинопосредованной кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Flaviviridae.

Задачи исследования:

1. Оценить продукцию цитокинов (IL2, IL4, ILIO, TNFa и IFNy) мононукле-арными лейкоцитами крови и направленность Thl/Th2—поляризации иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита).

2. Дать комплексную оценку состояния рецепторного аппарата (IL2R, IL4R, IL10R, TNFR, sTNFR, IFNR) лимфоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae.

3. Установить общие закономерности и особенности изменений цитокино-посредованной кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хроническом вирусном гепатите С и клещевом энцефалите в зависимости от нозологической принадлежности инфекта, клинического течения инфекции.

4. Выявить молекулярно-генетические механизмы дизрегуляции цитокино-вой системы при хронической Flaviviridae-инфекции у лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири.

Научная новизна. Впервые с привлечением современных гематологических, иммунологических и молекулярно-биологических методов исследования представлены знания фундаментального характера о роли генетически детерминированных механизмов дизрегуляции системы цитокинов в формировании длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae.

Показано, что у пациентов с хроническим носительством вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита) развивается дисбаланс цитокинопосредованного кооперативного взаимодействия иммунокомпетентных клеток крови, опосредующий поляризацию иммунного ответа в направлении Th2, что подтверждается фактом об-

наружения угнетения продукции и рецепции мононуклеарными лейкоцитами крови Thl-цитокинов (IL2, IL2R, IL12, TNFa, TNFR) и увеличения - Th2-цитокинов (IL4, IL4R, ILIO, IL10R) и комплиментарных им рецепторов (IL2R и TNFR).

Установлено, что характер и направленность изменений продукции и рецепции цитокинов (IL2, IL4, ILIO, TNFa, IFNy) не зависят от этиологического варианта флавивирусной инфекции и согласуются с концепцией типовых механизмов развития инфекционного процесса.

Показано, что при остром клещевом энцефалите возрастает продукция мононуклеарными лейкоцитами крови Thl-цитокинов (TNFa, IL2, IFNy), в то время как длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита сопровождается дисбалансом продукции и рецепции цитокинов эффекторными клетками крови. Установлено, что закономерности нарушения системы цитокинов и их рецепторов при персистенции TBEV определяются активностью инфекционного процесса.

Впервые комплексно и в сравнительном аспекте представлена характеристика системы цитокинов и их рецепторов у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита, сопровождающейся остаточными проявлениями нейроинфекции в виде цереброгенной астении, пациентов с бессимптомным но-сительством антигена вируса клещевого энцефалита и больных хроническим клещевым энцефалитом (полиомиелитическая форма, рецидивирующее течение). Установлено, что цитокиновый статус крови у пациентов с длительной антигенемией TBEV и больных хроническим клещевым энцефалитом характеризуется однонаправленными различной степени выраженности изменениями продукции и рецепции основных иммунорегуляторных цитокинов (IL2, IL4, ILIO, TNFa, IFNy).

Выявлено, что у больных хроническим вирусным гепатитом С слабовыра-женной и умеренной степени активности (на основании определения полуколичественного гистологического индекса активности - индекс Knodell), изменения в системе цитокинов и их рецепторов носят однонаправленный характер, при этом являются более выраженными в отношении изменения продукции ТЬ2-цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С умеренной степени активности.

Впервые проведено исследование полиморфизма генов цитокинов и рецепторов (IL2, 1L4, IL4R, ILIO, IL]2, TNFa) у лиц европеоидной популяции с хронической Flaviviridae-инфекцией, проживающих на территории Западной Сибири. Определено, что полиморфизмы в промоторных регионах генов ILIO и IL4RA50 обладают протективным эффектом в отношении HCV-инфекции; генов TNFA, ILl2p40 и IL4R/150 - в отношении длительной антигенемии TBEV. Предрасположенность к развитию хронического вирусного гепатита С ассоциирована с аллелями промоторных регионов -330G гена IL2 и -592А гена /I/O; клещевой нейроинфекции — с С/С генотипом промоторного региона А-1188С гена ILI2p40, Val/Ile генотипом промоторного региона IIe-50VaI гена IL4R, полиморфизмами в промоторных регионах Q-576R гена IL4R и С-592А гена ILIO.

генемия вируса клещевого энцефалита). Определена важная роль в этом процессе нарушения продукции и рецепции иммунорегуляторных цитокинов (IL2, IL4, ILIO, TNFa, IFNy), регулирующих баланс ТЫ/ТЬ2-пути антигенспецифического иммунного ответа. Установлены иммуногенетические факторы, обладающие протективным эффектом и определяющие риск прогрессирования и хронизации вирусного гепатита в отношении длительной персистенции вирусов гепатита С и антигенемии вируса клещевого энцефалита.

Положения исследования могут служить основанием для разработки стратегии изучения молекулярных и клеточных механизмов формирования длительной персистенции вирусов в организме. Полученные фундаментальные знания представляют основу для разработки новых подходов к прогнозированию клинического течения клещевого энцефалита и вирусного гепатита С, а также технологии персонализированной коррекции дизрегуляции цитокинопосредованного кооперативного взаимодействия иммунокомпетентных клеток крови с целью проведения патогенетически обоснованной терапии иммунных нарушений и своевременной профилактики развития хронических форм инфекции, а также осложнений, возникающих при длительной вирусной персистенции.

Положения, выносимые на защиту:

1. При хронических вирусных инфекциях, вызванных вирусами семейства Flaviviridae (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С), развивается типовой дисбаланс системы цитокинов.

2. Преимущественная активация ТЬ2-пути иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) выражается в угнетении продукции IL2, IL12 и TNFa, увеличении секреции IL4 и ILIO мононуклеар-ными лейкоцитами крови.

3. Длительная персистенция вирусов семейства Flaviviridae (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) сопровождается дисбалансом продукции IL2, IL4, ILIO и TNFa, а также презентации на лимфоцитах комплиментарных им рецепторов (IL2R, IL4R, IL10R и TNFR1), опосредующим нарушение межклеточной коммуникации иммунокомпетентных клеток крови.

4. Интра- и интернозологическая (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) оценка нарушений функционирования системы цитокинов при хронической Fla\iviridae-nn$eKum демонстрирует однонаправленность, но различную степень их выраженности.

5. Среди лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири, степень риска прогрессирования и хронизации вирусного гепатита С ассоциирована с аллелями промоторных регионов -330G гена IL2 и -592А гена ILIO (С/А генотип); клещевого энцефалита — А-1188С гена lL12p40 (С/С генотип), Ile-50Val гена 1L4R, Q-576R гена IL4R, С-592А гена ILIO; резистентность к заболеванию хроническим вирусным гепатитом С — С-592А гена ILIO (С/С генотип) и Ile-50Val гена IL4RA50; в отношении длительной антигенемии TBEV — G-308А гена TNFA, A-1188С гена ILl2p40 (А/А генотип), IIe-50Val гена IL4R.

Апробация и реализация работы. Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на второй международной конференции «Патофи-

зиология и современная медицина» (Москва, 2004); V Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004); III российский конгрессе по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляцион-ная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)» (Москва, 2004); Всероссийской конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2004); VI конгрессе с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Анталия, 2004); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005); Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Вирусные гепатиты - проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием к 100-летию со дня рождения А.Г. Панова «Современное состояние проблемы нейроинфекций» (Санкт-Петербург, 2005); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет.» (Новосибирск, 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); XII Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практическая конференции «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке» (Томск, 2006); Российском медицинском форуме с международным участием «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006); Съезде неврологов Сибирского федерального округа (Ярославль, 2006); 15 Российско-Японский Симпозиуме медицинского обмена «Москва-2007» Пути развития и перспективы (Благовещенск, 2007); II Российско-Германской конференции Форума Коха-Мечникова «Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении» (Томск, 2007); Всероссийской научной конференции «Современные научные и прикладные аспекты клещевого энцефалита», Москва, 15-16 ноября 2007.

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры патофизиологии (разделы «Патофизиология системы крови», «Патофизиология инфекционного процесса», «Патофизиология иммунной системы», «Патофизиология клетки»), микробиологии (разделы «Рабдо- и арбовирусы», «Возбудители гепатитов»), кафедры фундаментальных основ клинической медицины (разделы «Клиническая патофизиология реактивности организма», «Молекулярные основы патологии»), кафедры морфологии и общей патологии («Инфекция и иммунитет»), а также в лекционном курсе по инфекционным болезням для студентов лечебного, педиатрического и медико-биологического факультетов Сибирского государственного медицинского университета.

неинфекционной природы» (НШ-4153.2006.7), «Роль генетически детерминированных реакций системы крови в патоморфозе инфекционных заболеваний» (НШ-2334.2008.7), а также результаты научно-исследовательских работ «Молекулярные механизмы предрасположенности и резистентности организма человека к персистентным бактериальным и вирусным инфекциям» РИ-112/001/158 (Государственный контракт от 05.09.2005 г. № 02.445.11.7110), «Молекулярные и клеточные основы управления реактивностью системы крови при актуальных заболеваниях инфекционной природы» 2006-РЙ-112.0/001/384 (Государственный контракт от 09.06.2006 г. № 02.445.11.7419), «Молекулярные основы персонализированной терапии социально-значимых инфекционных заболеваний и прогнозирование исхода взаимодействия инфектогена и иммунной системы макроорганизма» (Государственный контракт от 27.02.07 г. № 02.512.11.2040), «Молеку-лярно-генетические основы управления адаптационной реактивностью системы крови человека при инфекции» (Государственный контракт от 05.06.2007 г. № 02.512.11.2112), в выполненных в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002-2006,2007-2012 годы».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 44 работы, из них 16 статей в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ, 28 статей и тезисов в материалах конференций, конгрессов и съездов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 352 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 97 таблицами. Библиографический указатель включает 534 источника (203 - отечественных и 351 - иностранных).

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу настоящей работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного обследования 311 человек (188 мужчин и 123 женщины в возрасте от 18 до 55 лет, средний возраст - 33±3 лет), инфицированных вирусами клещевого энцефалита и гепатита С. Обследованные пациенты находились на стационарном лечении и диспансерном учете в инфекционном отделении госпитальных клиник ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (главный врач - Заслуженный врач РФ канд. мед. наук В.М. Шевелев, заведующий отделением - канд. мед. наук, доцент Н.С. Бужак), в терапевтическом отделении медико-санитарной части «Строитель» г. Томска (главный врач - H.H. Бартфельд, заведующий отделением - О.В. Буров), гастроэнтерологическом отделении Томской областной клинической больницы (главный врач - Заслуженный врач РФ Б.Т. Серых, заведующий отделением - С.Ю. Стан) и инфекционном отделении городской больницы №3 г. Томска (главный врач - канд. мед. наук М.А. Лукашев, заведующий отделением -Г.В. Западаева).

Набор клинического материала осуществлялся при непосредственном участии заведующего кафедрой инфекционных болезней ГОУ ВПО СибГМУ Росзд-

рава д-ра мед. наук, профессора A.B. Лепехина, заведующего кафедрой терапии ФУВ и ППС ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава д-ра мед. наук, профессора Э.И. Бе-лобородовой и профессора кафедры неврологии и нейрохирургии ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава д-ра мед. наук Н.Г. Жуковой.

Клинически и анамнестически у всех обследованных лиц были исключены инфекционные заболевания другой этиологии, обострение хронических воспалительных процессов, аутоиммунные, наследственные и психические болезни, а также злоупотребление алкоголем и прием гепатотоксических лекарств.

В зависимости от этиологического фактора и ведущей органной патологии обследованные пациенты были разделены на две группы. Первую группу составили 196 человек, инфицированных вирусом клещевого энцефалита, ко второй -были отнесены 115 пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.

Контрольной группой служили 80 здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту (54 мужчины и 26 женщин в возрасте от 20 до 42 лет, средний возраст - 29±4 лет).

Согласно клинической классификации, предложенной Н.Г. Жуковой и соавт. [2002], все обследованные пациенты с антигенемией вируса клещевого энцефалита были разделены на следующие группы:

I группа - 25 пациентов с острой антигенемией вируса клещевого энцефалита (манифестная лихорадочная формы средней степени тяжести);

II группа - 89 пациентов с длительным бессимптомным носительством антигена TBEV (более 6 мес после острого периода клещевого энцефалита);

III группа - 75 пациентов с длительной антигенемией TBEV, сопровождавшейся остаточными проявлениями клещевого энцефалита (более 6 мес после острого периода клещевого энцефалита);

IV группа - 7 больных, страдающих хроническим клещевым энцефалитом (полиомиелитическая форма, рецидивирующее течение).

Первую группу обследованных лиц составили пациенты с острой антигенемией вируса клещевого энцефалита. Диагноз клещевого энцефалита (рубрика А84.0 МКБ-10) в острый период заболевания верифицировался на основании данных оценки неврологического статуса, определения уровня специфических антител к антигену вируса клещевого энцефалита в клеще (35%) и крови у пациентов (100%) методами непрямой реакции гемагглютинации и иммунофермент-ного анализа (ИФА), специфических антител классов IgM (87%) и IgG (74%) к антигену TBEV (ИФА), обнаружения вирусной РНК в крови методом полимераз-но-цепной реакции (ПЦР), а также результатов инструментальных исследований.

Лабораторное обследование пациентов с клещевым энцефалитом осуществлялось в диагностическом центре ФГУП Микроген «НПО Вирион» в г.Томске. При этом 12,6% обследованных лиц проходили плановую противоэнцефалитную вакцинацию; 85,7% обратившихся на пункты серопрофилактики было проведено введение специфического иммуноглобулина с целью экстренной серопрофилактики и лечения клещевого энцефалита. Инкубационный период оказался весьма вариабельным (от нескольких часов до 60 дней и более) и продолжался в среднем 10,2±0,9 сут. Клиническая картина обследованных пациентов с острой антигенемией TBEV характеризовалась гипертермией различной степени тяжести от 37,2 до 39,6° С (длительность - от 3 до 7 дней). Заболевшие предъявляли жалобы на

головную боль, общую слабость, тошноту, мышечные и суставные боли разной локализации, сонливость. У больных отмечались явления менингизма без воспалительных изменений цереброспинальной жидкости, но со значительным повышением внутричерепного давления. В клинической картине острого периода инфекции обращали на себя внимание нарушения со стороны вегетативной нервной системы в виде дистального гипергидроза, стойкого красного дермографизма и лабильности артериального давления. У пациентов была обнаружена рассеянная неврологическая симптоматика в виде легкого центрального пареза мимических мышц, неравномерности кожных и глубоких рефлексов, непостоянных симптомов орального автоматизма, нарушения конвергенции и болезненности точек выхода тройничного нерва.

У лиц, отнесенных ко II группе [пациенты с длительным (более 6 мес после острого периода нейроинфекции) бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита], при наличии в крови вирусной РНК клиническая картина начального периода заболевания практически редуцировалась. Пациенты во время обследования активно жалоб не предъявляли, каких-либо патологических изменений со стороны неврологического и соматического статуса выявлено не было. Следует отметить, что при различных физических и/или эмоциональных нагрузках у незначительного числа обследованных (13,2%) выявлялись клинические признаки астенического синдрома.

III группу составили лица с остаточными проявлениями нейроинфекции в виде цереброгенной астении и длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита (более 6 мес после острого периода инфекционного процесса). Основными резидуальными явлениями были симптомы, входящие в рамки стойкого асте-но-вегетативного синдрома (быстрая утомляемость, раздражительность, нарушение концентрации внимания, снижение инициативы и ухудшение памяти, нарушение аппетита, расстройства сна, головокружение, слабость и эмоциональная лабильность), упорные головные боли, особенно к окончанию рабочего дня и после эмоционального напряжения. В неврологическом статусе выявлялись рассеянные органические микрознаки: слабость конвергенции, легкий центральный парез мимической мускулатуры, анизорефлексия глубоких брюшных рефлексов. Из вегетативных расстройств обращали на себя внимание бледность кожных покровов, гипергидроз дистальных отделов конечностей, повышенная общая потливость. Пациенты с остаточными проявлениями клещевого энцефалита характеризовались наличием тревожности и диешмическими нарушениями, частота встречаемости которых была существенно ниже по сравнению с периодом острой антигенемии, однако значительно выше по сравнению с аналогичным показателем у лиц с длительным бессимптомным носительством антигена ТВЕУ.

Клиническая история пациентов IV группы, страдающих хроническим клещевым энцефалитом (полиомиелитическая форма, рецидивирующее течение), продолжалась более 8 мес после стационарного лечения лихорадочной формы острого клещевого энцефалита. Ведущим симптомом данной формы инфекции являлось наличие вялых параличей мышц шеи, плечевого пояса и конечностей (преимущественно верхних). Ретроспективный анализ выявил наряду с длительной антигенемией ТВЕУ появление новой очаговой неврологической симптоматики, характерной для клещевого энцефалита. По срокам развития у всех пациен-

тов диагностировалась прогредиентная форма хронического клещевого энцефалита. У больных регистрировалось нарастание возникших ранее парезов мышц шеи, плечевого пояса, при этом сухожильные и периостальные рефлексы с ног были повышенными. В зоне пораженных мышц выявлялось снижение болевой чувствительности. У 33,3% пациентов обнаруживались амиотрофии, протекающие со снижением или полной утратой рефлексов. В зоне пораженных мышц выявлялось снижение болевой чувствительности чаще по сегментарному типу. У 75,0% лиц была выявлена нейросенсорная тугоухость, 50,0% обследованных страдали вегетативными кризами.

В программу обследования были включены 115 пациентов, страдающих вирусным гепатитом С (по МКБ-10 рубрика В18.2 - хронический вирусный гепатит С). Все пациенты представляли группу риска по инфицированию возбудителем гепатита С (в анамнезе были оперативные вмешательства с переливанием крови, лечебные инъекции многоразовыми шприцами, лечение и удаление зубов, эпизоды наркомании, сексуальные контакты с больными вирусными гепатитами, работа с препаратами крови и больными у медицинских работников). Давность заболевания составляла от 1 года до 16 лет (в среднем 5±2 года).

Анамнестически у всех пациентов были определены сроки и источник инфицирования, оценивались жалобы, характер течения заболевания и объективные признаки. Проводились общий и биохимический анализ крови, оценка иммунного статуса. В клинике пациенты проходили ультрасонографическое исследование органов брюшной полости для исключения сопутствующей патологии, а также сцинтиграфическое исследование печени, выявившее умеренное диффузно неравномерное накопление радиофармпрепарата в паренхиме органа, характерное для воспалительного процесса.

Диагноз хронического вирусного гепатита основывался на наличии клинико-инструментальных симптомов (гепато-, спленомегалия), клинико-лабораторных синдромов (холестаза, цитолиза, мезенхимально-воспалительного). Этиологическая верификация диагноза проводилась путем выявления в крови РНК вируса гепатита С (HCV) (метод ПЦР), серологических маркеров HCV (анти-HCV Ig к cor, С-протеину, неструктурным белкам NS-3, NS-4, NS-5, анти-HCV IgM) (метод ИФА).

С целью морфологического подтверждения диагноза и определения степени активности воспалительного процесса с использованием гистологического индекса активности по А. Knodell [1981] и стадии фиброза по U. Desmet [1995] всем пациентам проводилась пункционная биопсия печени по Mengini. По данным морфологического анализа полученного биопсийного материала, различали минимальную (1-3 балла), слабовыраженную (4-8 баллов), умеренную (9-13 баллов) и выраженную степени активности воспалительного процесса (более 13 баллов).

В соответствии с классификацией, принятой Всемирным конгрессом гастроэнтерологов в Лос-Анжелесе (1994) [Ивашкин В.Т., 1995], были выделены следующие группы. По степени активности воспалительного процесса: I группа — больные хроническим гепатитом С умеренной степени активности воспалительного процесса в печени; II группа - больные хроническим гепатитом С слабовы-раженной степени активности. По стадии фиброза печени: I группа - больные хроническим гепатитом С, стадия фиброза 1; II группа - больные хроническим гепатитом С, стадия фиброза 2.

Анализ клинической картины у больных хроническим вирусным гепатитом умеренной степени активности показал, что наиболее часто выявлялся астено-вегетативный синдром (87,8%). Диспептический синдром (непереносимость жирной пищи, тошнота, горечь во рту, изжога, метеоризм) встречался у 65,9% пациентов. Синдром холестаза (желтушное окрашивание кожи и склер, зуд, билиру-бинемия) обнаруживался у больных хроническим гепатитом С в 45,2% случаев. В большинстве случаев гепато- и спленомегалия, выявленные физикально, подтверждались результатами ультразвукового исследования. При анализе биохимических показателей крови ведущим сивдромом был цитолиз. У больных хроническим гепатитом С повышение активности аланинаминотрансферазы (AJIT) и ас-партатаминотрансферазы (ACT) отмечалось в 77,4% случаев. Мезенхимально-воспалительный синдром (увеличение значений СОЭ, тимоловой пробы, повышение уровня у-глобулинов) по частоте встречаемости среди обследованных данной категории находился на втором месте.

Пациенты с хроническим гепатитом С слабовыраженной степени активности характеризовались отсутствием клинической симптоматики поражения печени, нормальными значениями биохимических показателей. Из серологических маркеров HCV-инфекции у них выявлялся анти-HCV IgG. Эпизодически они получали курсы общеукрепляющей терапии. Трудовая деятельность не страдала.

Материалом исследования являлась венозная кровь обследованных лиц, взятая утром до приема пищи (кровь стабилизировали гепарином - 25 Ед/мл).

У пациентов с длительной персистенцией вирусов клещевого энцефалита, гепатита С, а также у здоровых доноров проводили комплексное сравнительное исследование иммунофенотипического статуса лимфоцитов, выявление особенностей продукции мононуклеарными лейкоцитами крови иммунорегуляторных цитокинов, анализ спонтанной и индуцированной in vitro рецепции цитокинов лимфоцитами, а также анализ полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов (табл. 1).

Определение общего количества лейкоцитов крови и подсчет их отдельных морфологических форм проводили стандартными гематологическими методами [Меньшиков В.В., 1987].

Иммунофенотипирование лимфоцитов крови по CD-маркерам (CD3+, CD4+, CD8+, CD22+) проводили иммуноцитохимическим методом [Тотолян А.Н. и со-авт., 2002]. Результаты выражали в относительных и абсолютных значениях.

Мононуклеарные лейкоциты выделяли в стерильных условиях из цельной крови методом градиентного центрифугирования с использованием Ficoll-Paque («Pharmacia», Швеция) (р=1,077 г/смЗ) [Натвиг Дж. и соавт., 1980]. Выделенные клетки культивировали в течение 18 ч при температуре 37° и 5% СОг в полной культуральной среде (90% RPMI-1640 ("Вектор-Бест", Новосибирск), 10% инак-тивированная эмбриональная телячья сыворотка ("Биолот", Санкт-Петербург), 0,3 мг/мл L-глутамина) без митогена или с добавлением 10 мкг/мл фитогемагг-лютинина (ФГА) ("Difco", Германия) для активации лимфоцитов [Хаитов P.M. и соавт., 1995]. Затем проводили оценку содержания цитокинов (IL2, IL4, ILIO, IL12, TNFa, IFNy) и растворимого рецептора к TNFa в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов методом иммуноферментного анализа согласно

Таблица 1

Распределение здоровых доноров и пациентов с клещевым энцефалитом, гепатитом С в соответствии с использованными методами исследования

Группы обследованных

№ n/n Методы исследования Здоровые доноры Пациенты с антигенемией вируса клещевого энцефалита Пациенты с хроническим вирусным гепатитом С

1 Определение количества лимфоцитов крови, экслрессирукшщх CD3-, CD4-, CDS-, CD22- и С056-маркер, цитохимическим методом 19 21 45

2 Исследование содержания в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови шггокинов (IL2, IL4, ILIO, IL12, TNFa, IFNy) и растворимого рецептора первого типа к TOFa с использованием иммуно-ферментного анализа 25 65 32

3 Определение количества рецептор-позитивных (IL2R, IL4R, IL10R, TNFaR, IFNyR) лимфоцитов крови методом проточной лазерной цитофлуориметрии 15 63 19

4 Дифференцированная оценка количества CD4+- и С08+-лимфоцитов крови, экспрес-сирующих рецепторы к цитокинам (IL2R, IL4R, 1L10R, TNFaR, IFNyR), методом проточной лазерной цитофлуориметрии 10 12 10

5 Исследование полиморфизма генов цито-кинов и рецепторов (IL2, IL4,IL4R, ILIO, ¡L12, TNFa) методом полимеразной цепной реакции 48 84 62

инструкциям, предлагаемым производителями тест-систем («Ргосоп», Россия; «Biosource», Бельгия, «Cytimmun», США). Учет результатов проводили с применением фотометра для микропланшетов «Multiscan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия) при длине волны 450 нм.

Оценку презентации мембраносвязанньгх форм рецепторов к IL2, IL4, ILIO, TNFa и IFNy на лимфоцитах крови проводили методом проточной лазерной двухцветной цитометрии с использованием моноклональных антител к цитоки-новым рецепторам, меченных флуоресцентными метками. Регистрацию презентации цитокиновых рецепторов на лимфоцитах проводили согласно протоколу фирмы производителя («R&D Systems», США). Анализ образцов клеточных суспензий осуществляли на проточном цитометре Epics XL («Beckman Coulter», Франция) с применением автоматического программного обеспечения и методов сбора и анализа данных с высоким разрешением (1024 канала) (рис. 1).

Рис. 1. Распределение лимфоцитов по интенсивности флуоресценции в РИ-канале (оценка содержания TNFRl+-клеток, меченных Е1ТС, в гейте лимфоцитарных клеток).

а - принцип автоматического выделения гейта лимфоцитов по показателям малоуглового (Р8) и бокового (БЗ) светорассеивания;

б - одномерная гистограмма интенсивности флуоресценции в гейте лимфоцитарных клеток по ИЛ -каналу (слева от оси - несветящиеся клетки, справа - ИТС-положительные лимфоциты)

ДНК выделяли по инструкции, предлагаемой производителем тест-системы ("Лаборатория МЕДИГЕН", Россия). Метод выделения основан на специфической обратимой сорбции ДНК в присутствии хаотропной соли (гуанидинизотио-цианат) на частицы силикагеля [Boom R. et al., 1991]. Генотипирование аплель-ных вариантов генов цитокинов и их рецепторов (G-308A TNFA, T-33ÛG IL2, С-590Т IL4, Ile50Val IL4R, Q-576R IL4R и С-592А IL10) осуществляли методом ре-стрикционного анализа продуктов амплификации (ПДРФ-анализ) специфических участков генома. Амплификацию осуществляли в пробирках типа «Эппендорф» путем полимеразной цепной реакции, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе (табл. 2), и учитывая применение нами амплификатора «Tercik МС2» («ДНК- технология», Россия).

Оценку полученных результатов проводили методами статистического описания и проверки статистических гипотез. При анализе имеющихся выборок данных использовали гипотезу нормальности распределения (критерий Шапиро-Вилка). Для нормально распределенных выборок вычисляли средневыборочные характеристики: среднее арифметическое (X), среднее квадратичное отклонение (о), ошибка среднего (m). Для выборок, распределение которых отличалось от нормального, рассчитывали медиану (Me), первый и третий квартили (Qi, Qî). С целью попарного сравнения показателей в исследованных группах применяли критерий Манна-Уитни для независимых групп. Различие двух сравниваемых величин считали достоверным при уровне значимости р<0,05. С целью обнаружения связи между исследованными показателями проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г) [Гланц С., 1999; Боровиков В.П., 2001].

Таблица 2

Характеристика исследованных полиморфизмов генов цитокинов

Ген Полиморфизм Структура праймера Температура отжига С) Фермент рестрикции

TNFA G-308A 5'- aggcaataggttttgagggccat -3' 5'- acactccccatcctcccggct -3' 57 Bspl9 I (Neo I)

IL2 T-330G 5' -tattcacatgttcagtgtagtt ct-3' 5'- acattagcccacacttaggt -3' 48 Mael

IL4 C-S90T 5'- cagggagagccaatcagt-3' 5'- atgatptccagactccaagatct -3' 57 BsmFI

IL4R Ile-50Val 5'- gcg agt gga aga tga atg gt -3' 5'- cgc tgg gct tga agg ag-3' 65 Rsal

1L4R Q-576R 5'- cccccaccagtggctacc-3' 5'- gccccaaacccacatttc -3' 93 MspI

ILIO С-592А 5'- atccaagacaacactactaa -3' 5'- taaatatcctcaaagttcc -3' 54 Rsal

JL12 А-1188С 5'- ctgatccaggatgaaaatttgg-3' 5'- cccatggcaacttgagagctgg -3 62 Taql

Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий '/2 Пирсона и точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с использованием критерия отношения шансов OR с расчетом для него 95% доверительного интервала (CI) [Флейс Дж., 1989].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Система цитокинов и их рецепторов в межклеточной коммуникации иммунокомпетентных клеток крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae

Исследования особенностей реагирования системы иммунитета на различные антигенные структуры как в норме, так и при патологических процессах свидетельствуют о том, что существующий в организме баланс показателей клеточного звена иммунитета является одним из важнейших условий поддержания эффективного иммунного ответа на внедрение многообразных патогенов. Ключевая роль принадлежит иммунокомпетентным клеткам крови, в частности лимфоцитам и моноцитам/макрофагам [Кетлинский С.А., 2002; Симбирцев A.C., 2004; Ярилин A.A., 2004].

В проведенном нами исследовании была предпринята попытка выявить общие закономерности и особенности цитокинопосредованной межклеточной коммуникации иммунокомпетентных клеток крови при персистентном течении Flaviviridae-тОрекцт.

При рассмотрении фундаментальной проблемы взаимоотношения вируса и организма человека посредством концентрации внимания на роли в этом процессе цитокинопосредованного взаимодействия иммунокомпетентных клеток на первый план выходят ряд вопросов: являются ли изменения системы цитокинов отражением реактивности организма (в т.ч. иммунной системы) на вторжение патогена или неполноценный противовирусный иммунный ответ может быть генетически детерминирован; каковы молекулярные механизмы предрасположенности организма человека к хроническому течению (бессимптомному вирусоносительству) флави-вирусных инфекций; возможен ли в перспективе переход к персонализированной профилактике и терапии вирусных инфекций на основе идентификации молекулярных механизмов повреждения?

Особенности состояния системы IFNy-IFNR мононутеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae. Известно, что ведущую роль в защите организма от вирусной агрессии играют интерфероны, обладающие противовирусным, иммуномодулирующим и антипролиферативным эффектами [Ершов Ф.И., 1998; Кузнецов В.П., 1998; Ройт А. и соавт., 2000; Samuel С.Е., 2001; Кадагидзе З.Г., 2003; Maldonado R.A. et al, 2004].

Нами было установлено, что in vitro как в покое, так и при стимуляции ФГА мононуклеарные лейкоциты крови у пациентов с острой антигенемией TBEV сек-ретировали значительно более высокие концентрации IFN у, чем клетки у здоровых людей (рис. 2). Обнаруженный факт увеличения продукции IFNy мононуклеарны-ми лейкоцитами, на наш взгляд, мог быть обусловлен рядом причин. С одной стороны, возрастание синтеза IFN у можно рассматривать как универсальную реакцию иммунной системы, направленную на элиминацию вируса путем нарушения работы вирусного генома и вирусных протеинов [Samuel С.Е., 2001; Вершинина М.Ю. и соавт., 2003; Nobuhiro F. et al., 2004; Bonjardim С.A., 2005]. С другой стороны, про-тективный эффект IFNy обусловлен в значительной степени его иммуномодули-рующей активностью, нежели непосредственно противовирусным действием. Роль IFNy в противовирусном иммунном ответе связана с его активирующим влиянием на фагоцитарную активность макрофагов, прямую цитотоксичность Т-лимфоцитов, антителоопосредованный лизис инфицированных клеток макрофагами и поли-морфноядерными лейкоцитами [Samuel С. Е., 1988, 1991, 2001; Павлова JT.E. и соавт., 2000; Sun P. et al., 2006; Keller B.C. et al„ 2006; Park G.S. et al„ 2007].

Формирование иммунного ответа в условиях длительной персистенции вирусов является сложным и многокомпонентным процессом. Так, нами было установлено, что длительная персистенция HCV и TBEV сопровождается также повышением продукции IFNy мононуклеарными лейкоцитами крови относительно соответствующих показателей у здоровых индивидов. При этом у больных с хронической HCV-инфекцией имело место возрастание и числа 1РЫ-Н+-лимфоцитов (рис. 2,3).

Таким образом, в остром периоде флавивирусной инфекции мы отмечали высокий потенциал иммунокомпетентных клеток крови продуцировать IFNy. Однако иммуномодулирующая и антирепликативная способность этого противовирусного цитокина оказалась недостаточной для элиминации вируса. На наш взгляд, хроническое течение инфекции само по себе является доказательством того, что противовирусный иммунитет оказывается нерезультативным для естественного

------ Относительное количество ¡ЬИ-позитивных лимфоцитов крови (% от значений у здоровых доноров)

- Содержание цитокина в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови (% от значений у здоровых доноров)

Рис. 2. Цитокиновый статус мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с персистенцией возбудителей семейства ПамМпйае

I — относительные значения исследуемого показателя у пациентов с остаточными проявлениями клещевого энцефалита, 2-е бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита, 3-е острой антигенемией вируса клещевого энцефалита, 4-е хронической формой клещевого энцефалита, 5, б — с хроническим вирусным гепатитом С слабовыраженной и умеренной степени активно-

тара

завершения инфекции. Вероятно, неэффективность действия интерферонов является следствием нарушения трансдукции сигналов активации от цитокина. В последние годы в литературе появились сообщения, что вирусы семейства Flaviviridae обладают способностью ингибироватъ внутриклеточный каскад трансдукции сигнала (Jak/STAT) в ответ на действие IFN [Levy D.E., Darnell J.E., 2002; Best S.M. et al., 2005; Palmer D.R. et al., 2005; Lin R.J. et a!., 2006; Park G.S. et al., 2007; Werme K. et al., 2008]. Высказываются предположения, что NS5 вирусов семейства Flaviviridae либо связывается с субъединицами рецептора к IFN, вызывая нарушение их пространственной конформации, и, следовательно, блокируя реализацию внутриклеточных эффектов, либо сам непосредственно выступает в роли вирусного эквивалента - негативного регулятора белковой фосфатазы тирозина, удаляя фосфатные группы от каталитических доменов JAK [Best S.M. et al., 2005]. B.G. Neel, N.K. Tonks [1997] и M.M. Brierley, E.N. Fish [2002] высказывалось предположение, что вирусы комплекса клещевого энцефалита активируют SOCS-белки, подавляя тем самым действие интерферонов.

Особенности состояния системы TNFa-TNFR мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae. Особую роль в формировании специфического иммунного ответа, развивающегося при действии различных патогенных агентов - носителей чужеродной генетической информации, играет TNFa. Общеизвестно, что в физиологических условиях TNFa функционирует как иммунорегуляторный медиатор и обеспечивает пролиферацию и дифференцировку разных типов клеток, активирует нейтрофилы, Т- и B-лимфоциты, участвует в регуляции апоптоза [Кашкин К.П., 1998; Блохин Б.М. и соавт., 1999; Логинов A.C., 2001; Царегородцева Т.М., Серова Т.Н., 2003; Симбирцев A.C., 2004; Собчак Д.М., Монакова Э.А., 2004; Wang L. et al., 2007]. TNFa, являясь одним из основных цитокинов, обладающих провоспалительной функцией, запускает "цитокиновый каскад" в очаге воспаления, увеличивая продукцию IL1, IL2, IL6, ILIO и INFy, которые в свою очередь оказывают влияние на экспрессию TNFa и его рецептора [Zylberberg H. et al., 1999; Kim К. et al., 2000; Зубова С.Г., 2001; Barash J. et al., 2003]. Таким образом, TNFa опосредует не только реализацию неспецифического иммунного ответа, но и выступает в качестве индуктора дифференцировки ThO в ТЫ, модулируя тем самым направление специфического иммунного ответа в сторону преобладания клеточного звена резистентности [Luster M.I. et al., 1994; Ihle J.N., 1995; Возианов А.Ф. и соавт., 1998; Roitt E.I. et al., 1998; Friedman S.L., 1999; Ивашкин В.Т. и соавт., 2003].

Учитывая одну из ведущих ролей TNFa в пара- и аутокринной цитокиновой регуляции функциональной активности иммунокомпетентных клеток, изучение аспектов кооперации иммуноцитов при участии TNFa является перспективным с точки зрения выявления маркеров хронизации и разработки патогенетически обоснованной терапии хронических вирусных инфекций.

Проведенный нами иммуноферментный анализ содержания TNFa в суперна-тантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови установил увеличение продукции исследуемого цитокина интактными иммунокомпетентными клетками, полученными у больных острым клещевым энцефалитом (рис. 2,3).

Рис. 3. Цитокиновыи статус Ф! А-стимулированных мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с персистенци-ей возбудителей семейства Па\>№п<1ае

1 - относительные значения исследуемого показателя у пациентов с остаточными проявлениями клещевого энцефалита, 2-е бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита, 3-е острой антигенемией вируса клещевого энцефалита, 4-е хронической формой клещевого энцефалита, 5, 6 — с хроническим вирусным гепатитом С слабовыраженной и умеренной степени активности, соответственно, 7, 8-е хроническим вирусным гепатитом С 1 и 2 стадией фиброза, соответственно__

Оценка продукции TNFa лейкоцитами крови при длительном течении флави вирусных инфекций выявила иные закономерности. Проведенный нами детальный анализ позволил констатировать факт угнетения базапьной и индуцированной in vitro ФГА продукции TNFa мононуклеарами крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae (рис. 2, 3). Существует мнение, что гиперпродукция TNFa может являться одним из основных механизмов активации инфекционного процесса при переходе из латентного состояния в фазу клинических проявлений и свидетельствует о прогрессировании заболевания. Угнетение продукции TNFa в более поздних стадиях заболевания может быть связано с глубокой дизрегуляцией иммунного ответа [Хаитов P.M., 2001; Ивашкин В.Т. и со-авт., 2002; Царегородцева Т.М., Серова Т.И., 2003; Gelderblom Н.С. et al., 2007; Wang L. et al, 2007].

Известно, что хроническая инфекция, индуцированная HCV, может сопровождаться изменением продукции TNFa. Это, вероятно, обусловлено свойствами самих вирусов и реализацией их онкогенного потенциала [Ягода A.B. и соавт, 2000; Ивашкин В.Т. и соавт, 2000; 2001; 2003; Логинов A.C. и соавт, 2001; Мам-маев С.Н. и соавт, 2002; Царегородцева Т.М, Серова Т.И, 2003]. Однако следует отметить, что данные литературы, касающиеся продукции TNFa при флавиви-русных инфекциях, носят весьма противоречивый характер. Так, рядом авторов установлено, что либо мононуклеарные клетки у больных хроническим вирусным гепатитом С in vitro продуцируют меньшее количество TNFa, чем у здоровых людей [Cohen М.С, Cohen S, 1996], либо уровень TNFa мало изменяется по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе [Корочкина О.В. и соавт, 2003].

Кроме того, известно, что нативный TNFa находится в биологических жидкостях в форме тримера, что характерно для всех лигандов и рецепторов семейства TNF. Существуют данные о возможности аномального фолдинга TNFa, приводящего к формированию димерных молекул вместо тримерных. Такой белок стабилен в растворе лишь непродолжительное время и не способен к спонтанному переходу в истинно нативную конформацию [Суровцева Е.В. и соавт, 2005]. Однако для формирования комплексного представления об участии TNFa в механизмах хронизации вирусных инфекций и систематизации уже имеющихся в настоящее время данных литературы необходима комплексная оценка взаимодействия этого цитокина с рецепторным комплексом иммунокомпетентных клеток.

Известно, что растворимые рецепторы к TNFa являются важными регуляторами активности цитокина [Степанец О.В. и соавт, 2003; Алекперов Р.Т. и соавт, 2004; Wang M. et al, 2004]. Показано, что они могут как препятствовать связыванию TNFa с мембранными рецепторами и таким образом нарушать проведение сигнала, так и, выступая в роли переносчиков, защищать цитокин от разрушения протеазами, удлиняя время его пребывания в системном кровотоке [Itoh Y. et al, 1999; Barash J. et al, 2003; Chodorowska G. et al, 2003]. Установленное нами в ходе настоящего исследования достоверное увеличение средних величин базальной и индуцированной ФГА in vitro продукции мононуклеарными лейкоцитами sTNFRl отмечалось у всех обследованных пациентов независимо от этиологического варианта инфекции и длительности антигенемии вируса.

Нами также обнаружено наличие отрицательных корреляционных связей

между содержанием sTNFRl и TNFa в супернатантах культуры мононуклеарных лейкоцитов как у больных хроническим вирусным гепатитом С (г=-0,593, р<0,05 и г=-0,6]3, р<0,05 в интактной и ФГА-стимулированных культурах клеток, соответственно), так и у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита (г=-0,593, р<0,05 и г=-0,613, р<0,05 в интактной и ФГА-стимулированных культурах клеток, соответственно).

Исходя из полученных нами результатов, становится очевидным, что одним из возможных механизмов снижения уровня TNFa в культуральных жидкостях мононуклеарных лейкоцитов у пациентов с длительной HCV- и TBEV-иифекцией может быть возрастание содержания «ловушек» цитокина, в роли которых выступают растворимые формы рецептора [Ивашкин В.Т. и соавт., 2002; Анисимова Н.Ю. и соазт., 2003; Рязанцева Н.В. и соавт., 2005].

В настоящее время обсуждаются различные причины возрастания концентрации растворимых рецепторов цитокинов в биологических жидкостях. Согласно данным литературы, растворимые формы рецептора к TNFa могут быть результатом возрастания вирусиндуцированного шеддинга рецепторов с мембран клеток вследствие активации последних в процессе интернализации мембранас-социированных форм при связывании молекул TNFa, и, что особенно значимо, в результате деструктивных процессов в плазматической мембране (интенсификация перекисного окисления липидов и, как следствие, - изменение упорядоченности и микровязкости липидного бислоя мембран, ведущие к модификации их структуры) [Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980; Cohen М.С., Cohen S., 1996; Геннис P., 1997; Игнатьева Г.А., 1997; Фрейдлин И.С., 1998; 2001; Анисимова Н.Ю. и соавт., 2003; Новицкий В.В. и соавт., 2003]. При вирусных инфекциях происходят существенные изменения физико-химических свойств плазматических мембран иммунокомпетентных клеток [Мищенко В.А. и соавт., 1994; Панин Л.Е. и соавт., 2003; Рязанцева Н.В. и соавт., 2003; Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., 2004; Токарева Н.В., 2004]. Среди возможных механизмов возрастания концентрации растворимых рецепторов цитокинов называют также оверэкспрессию альтернативно сплайсированных мРНК мононуклеарных лейкоцитов, диссоциацию комплексов цитокин-рецептор [Степанец О.В. и соавт., 2003].

Реализация биологической роли TNFa осуществляется посредством его связывания со специфическими высокоаффинными мембранными рецепторами [Cohen М.С., Cohen S., 1996; Анисимова Н.Ю. и соавт., 2003; Степанец О.В. и соавт., 2003]. Однако действие TNFa на клетку, опосредованное TNFR1, не однозначно. Во-первых, TNFa активирует транскрипционные факторы NF-kB и JNK, ведущие к индукции провоспалительных и иммуномодулирующих генов. Во-вторых, TNFR1 служит сенсором внеклеточных сигналов к апоптозу [Nagata S., 1997; Simpson K.J. et al., 1997; Ramadori G., Christ В., 1999; Herbein G., O'brien W.A., 2000; Пальцев M.A., 2004; Holtmann M.H., Neurath M.F., 2004; Schneider-Brachert W. etal., 2004].

Для нас представлялась интересной, наряду с определением методом имму-ноферментного анализа уровня TNFa и растворимого рецептора к нему в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови, оценка с использованием проточной лазерной цитометрии количества TNFR1-несущих лимфоцитов крови (рис. 2, 3). Следует отметить, что у обследованных здоровых доноров были выяв-

лены корреляционные связи между продукцией растворимых рецепторов моно-нуклеарными лейкоцитами крови и содержанием TNFRl-несущих лимфоцитов (г=-0,86, р<0,05 и г=-0,54, р<0,05 в интактной клеточной культуре, так и при стимуляции ФГА, соответственно). У пациентов с острой формой клещевого энцефалита количество ТЫРЯ1+-лимфоцитов в культуре мононуклеарных лейкоцитов соответствовало таковому у здоровых людей. При этом у больных, страдающих хроническим вирусным гепатитом С, у пациентов с длительной антигенемией TBEV и больных хроническим клещевым энцефалитом отмечалось снижение числа клеток, презентирующих на мембране рецепторы к TNFa (рис. 2,3).

Таким образом, нами был установлен выраженный дисбаланс продукции и рецепции TNFa мононуклеарными лейкоцитами крови у пациентов с длительной флавивирусной инфекцией. С одной стороны, угнетение продукции TNFa можно рассматривать как фактор дизрегуляции иммунного ответа, недостаточной противовирусной активности иммунитета, что негативно сказывается на течении заболевания. С другой стороны, ограничение продукции TNFa в условиях длительной вирусной персистенции может выступать в качестве адаптивной реакции системы иммунитета, направленной на предотвращение реализации проапопто-тического потенциала клеток и развития необратимого повреждения тканей, обусловленного действием самого вирусного агента [Хаитов P.M., 2001; Ивашкин В.Т. и соавт., 2003].

Особенности продукции IL12 мононуклеарными лейкоцитами крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae., IL12 является ключевым иммунорегуляторным цитокином, который служит связующим звеном между неспецифической защитой и специфическим иммунным ответом [Фрейдлин И.С., 1999; Pitzurra L. et al., 2000; Plummeridge M.J. et al., 2000; Durali D. et al., 2003; Lund R.J. et al., 2004]. Этот интерлейкин обладает уникальной способностью регулировать баланс Thl и Th2, является стимулятором продукции и синергистом действия IFNy [Фрейдлин И.С., 1999; Ивашкин В.Т. и соавт., 2001, 2002; Sun P. et al., 2006],

Нами было установлено, что у пациентов с длительной антигенемией TBEV и у больных с HCV-инфекцией спонтанная продукция IL 12 мононуклеарными лейкоцитами крови оставалась в пределах нормы (57,84(42,36-90,23) пг/мл, 54,42(46,15-68,32) пг/мл и 49,15(35,81-57,16) пг/мл у пациентов с TBEV-, HCV-инфекцией и здоровых доноров, соответственно). Однако секреция IL 12, индуцированная в условиях эксперимента ФГА, оказалась ниже таковой у здоровых людей (205,88(164,71-327,59) пг/мл, 243,17(186,82-264,27) пг/мл и 386,84(300,53-442,75) пг/мл, у пациентов с TBEV-, HCV-инфекцией и здоровых доноров, соответственно). Высказывается предположение, что именно ингибирование эффектов IL12 является одним из ведущих механизмов поляризации баланса Thl/Th2-лимфоцитов [Sun P. et al., 2006; Chareonsirisuthigul T. et al., 2007; Zhou Y. et al., 2007]. Эффекты IL12 реализуются путем связывания его с IL12R [Szabo S. et al., 1997]. Известно, что IL4 и IFN оказывают модулирующее действие на экспрессию IL12R после активации Т-клеток. IL4 угнетает экспрессию IL12R, что ведет к блокированию эффектов соответствующего лиганда IL12, смещая, соответственно, направление реализации иммунного ответа в сторону Th2.

Таким образом, несмотря на то, что до сих пор остаются неясными точные

молекулярные механизмы дефекта в системе 1L12 и его рецепторов при длительной вирусной персистенции и отсутствуют данные о влиянии флавивирусов на внутриклеточные факторы трансдукции сигналов активации, не вызывает сомнения, что изменения в системе IL 12 и его рецепторов играют существенную роль в нарушении межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток в условиях развития хронической вирусной инфекции. Имеется предположение, что смещение направления иммунного ответа в сторону Th2 при нормальной и сниженной продукции IL12 может быть обусловлено длительной стимуляцией иммунокомпетентных клеток IL4 (что и было выявлено в поведенных нами исследованиях) и ингибированием функциональной активности IL12R.

Особенности состояния системы IL2-IL2R мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистеицией возбудителей семейства Flaviviridae. В соответствии с общими закономерностями иммунопатогенеза пер-систентных вирусных инфекций важным условием эффективности механизмов защиты макроорганизма от инфекции является интенсивность иммунного ответа, определяемая функциональной активностью Т-лимфоцитов [Соринсон С.Н, 1996; Freeman A.G. et al, 2001]. Основной результат активации Т-клеток состоит в индукции экспрессии генов ростовых факторов и их рецепторов. IL2, являясь основным аутокринным ростовым фактором Т-лимфоцитов, обеспечивает их клональную экспансию при ответе на антиген [Мищенко В. А. и соавт, 1994; Симбирцев А.С, 1998, 2004; Eckels D.D. et al, 1999; Хаитов P.M., 2001; Корочки-на О.В. и соавт, 2003; Gomez I. et al, 2004].

При проведении оценки цитокинового статуса у пациентов с острой антиге-немией TBEV нами было зарегистрировано увеличение, а у пациентов с длительной флавивирусной инфекцией, напротив, угнетение продукции IL2 мононукле-арными лейкоцитами крови в ФГА-стимулированных in vitro культурах клеток по сравнению с таковым у здоровых доноров (рис. 3). Стимуляция продукции IL2 в остром периоде заболевания соответствует классическим представлениям об активации противовирусного иммунитета в ответ на вирусную агрессию, однако механизмы подавления индуцированного синтеза IL2 при вирусных инфекциях остаются недостаточно изученными. По-видимому, имеет место не один, а несколько типов ингибирования [Сенников C.B. и соавт, 2003; Gomez I. et al, 2004]. Особенности действия, уровень продукции цитокина и его биологическая активность находятся под влиянием различных факторов: соотношения рецепторов - агонистов и антагонистов («ловушек»), связи с компонентами внеклеточного матрикса и белками плазмы, в частности с ar-макроглобулином, способствующим инактивации циркулирующего цитокина, величины рН, антиоксидант-ного потенциала клетки [Ивашкин В.Т. и соавт, 2003]. Имеются сведения, например, что белковые продукты HCV могут блокировать внутриклеточную передачу сигналов от рецепторов IFN и снижать секрецию IL2 и IFNy активированными Т-лимфоцитами, что также вызывает смещение баланса в пользу Th2, являясь частью стратегии выживания вируса [Jia H. et al, 2003; Kasprzak A. et al, 2004]. Известно, что мыши, дефицитные по IL2 и/или IL2R, обладают фатальными аутоиммунными осложнениями, а люди, цитокиновый статус которых характеризуется угнетением продукции IL2, отличаются повышенной восприимчивостью к инфектам вирусной и бактериальной природы [Sadlack В. et al, 1995;

Sharfe et al, 1997; Lin J-X., Warren J.L., 2000; Ma A. et al., 2000; Nelson B.H., 2004].

В результате проведения цитофлуориметрического исследования рецептор-ного аппарата иммунокомпетентных клеток нами было установлено снижение у пациентов как с острой, так и с хронической флавивирусной инфекцией количества лимфоцитов, презентирующих мембранную молекулу рецептора к IL2, вне зависимости от содержания самого исследуемого цитокина в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови (рис. 2, 3). При этом следует подчеркнуть, что у пациентов с длительной антигенемией TBEV было зафиксировано более низкое относительное количество IL2R-no3HTHBHbix лимфоцитов (в 1,4 раза) в интактной культуре мононуклеаров, а также снижение продукции IL2 (в 1,4 раза) и абсолютного количества С025-несущих лимфоцитов (в 2,3 раза) в условиях стимуляции in vitro культуры клеток ФГА.

Таким образом, еще в начале инфекционного процесса развивается дисбаланс продукции и рецепции IL2, усугубляющийся при длительной персистенции флавивирусов.

Известно, что связывание 1L2R со своим лигандом после активации Т-лимфоцита может приводить к нескольким альтернативным исходам, включая пролиферацию, дифференцировку, стимуляцию функциональной активности и апоптоз. Согласно современным представлениям, С04+СЭ25+-клетки (Tregs) способны поддерживать иммунологическую толерантность организма автономными механизмами межклеточной кооперации Т-лимфоцитов, ограничивая активную экспансию Т-лимфоцитов в экспериментах in vitro и подавляя действие аутореактивных Т-лимфоцитов в естественных условиях [Annacker О. et al., 2001; Surh C.D., Sprent J., 2002; Bach J.F., 2003; Симбирцев A.C., 2004; Nelson B.H., 2004; Boettler T., et al., 2005; Bolacchi F. et al., 2006]. In vivo после гомеостатиче-ской экспансии Tregs и выполнения ими специфической функции CD4+CD25+-лимфоциты теряют a-цепь IL2R и становятся нечувствительными к IL2.

В результате проведенных нами методом проточной лазерной цитофлуори-метрии с использованием двойной метки исследований количества CD4+CD25+-Tregs крови было установлено, что в интактных культурах мононуклеарных клеток число С04+Сй25+-лимфоцитов увеличивалось у больных хроническим вирусным гепатитом С (55,63(50,47-59,83) % и 32,65(28,45-39,72) % у пациентов с HCV-инфекций и здоровых доноров, соответственно), а в ФГА-стимулированных in vitro - оказалось значительно ниже значений аналогичного показателя у здоровых людей (3,18(2,57-3,59) %) как у пациентов с хронической персистенцией HCV (9,15(7,20-9,64) %), так и с длительной антигенемией TBEV (6,53(5,02-7,28) %). Необходимо отметить, что количество С04+С025+-лимфоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом Сиу пациентов с длительной персистенцией вируса клещевого энцефалита имело положительную корреляцию с числом С04+-клеток. Можно говорить о том, что флавивирусная инфекция способна приводить к экспансии CD4+CD25+-T-mieTOK, которые, с одной стороны, выполняют иммунорегуляторную роль, предотвращая развитие аутоиммунных процессов, с другой стороны, — способны подавить ответ СЭ8+-лимфоцитов на вирусные антигены с последующей хронизацией инфекционного процесса. При этом T. Manigold et al. [2006], проведя оценку количества CD4+CD25+-

лимфоцитов в крови у больных и в экспериментах in vitro, утверждают, что именно HCV индуцирует истощение клона CD4+CD25+-Tregs, способствуя тем самым длительной персистенции вируса, сопровождающейся явлениями аутоаг-рессии макроорганизма, что и подтверждается полученными нами результатами.

Имеются данные, что IL2 оказывает влияние не только на CD4+-Tregs, но и на CD8+-Tregs субпопуляции [Stephens L.A., Mason D., 2000; Graca L et al., 2002; Bach J.F., 2003; Jonuleit H„ Schmitt E„ 2003; Nelson B.H., 2004]. Нами было установлено, что у пациентов с длительной антигенемией TBEV количество С08+С025+-лимфоцитов не изменялось относительно аналогичного показателя у здоровых людей; у больных с HCV-инфекцией число CD8+CD25+-Tregs возрастало. Механизмы иммунорегулирующего действия CD8+CD25+-wieTOK до сих пор остаются малоизученными. Однако существует гипотеза, что именно возрастание численности клона CD8+CD25+-Tregs может приводить при длительной антигенной нагрузке к истощению CD4+CD25+ субпопуляции Т-лимфоцитов [Suzuki Н. et al., 1995; Leung D. et al., 2000].

Следует отметить, что среди механизмов клеточной защиты в противовирусном иммунитете ведущее место занимают CD8+-цитотоксические лимфоциты, основная функция которых направлена на эрадикацию возбудителя, что обусловлено, с одной стороны, их способностью непосредственно вызывать гибель инфицированных клеток, а, с другой, - способностью продуцировать противовирусные факторы. Активация эффекторных клеток с фенотипом CD8+ требует, помимо связывания антигена, комплексированного с МНС I класса, воздействия IL2, источником которого служат Thl-клетки и сами С08+-лимфоциты [Хаитов P.M., 2001]. Как показало проведенное нами исследование, содержание CD8+-лимфоцитов у пациентов с бессимптомной антигенемией TBEV было выше соответствующих показателей у здоровых доноров ((1,17±0,22)-109/л и (0,47±0,05) •109/л, соответственно). Можно предположить, что выявленное нами снижение резервной способности мононуклеарных лейкоцитов крови продуцировать IL2 непосредственно связано с изменением пролиферации и дифференцировки цитотокси-ческих лимфоцитов.

Особенности состояния системы IL4-IL4R мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae. Общеизвестно, что две основные группы лимфокинов, продуцируемых соответственно Thl- и ТЬ2-лимфоцитами, оказывают положительное взаимное влияние. При этом, обладая выраженными контрвоспалительными свойствами, IL4 и ILIO стимулируют преимущественно гуморальное звено иммунитета, способствуя дифференцировке по Th2-nyra иммунного ответа [Ярилин A.A., 1997; Фрейдлин И.С., 2001; Хаитов P.M., 2001; Kim S.H. et al., 2006; Lund R.J. et al., 2007; Odaka M. et al., 2007].

Нами было установлено, что в условиях острой антигенемии TBEV как продукция мононуклеарными лейкоцитами IL4, так и количество лимфоцитов, несущих IL4R, соответствовали норме. При этом обращало на себя внимание значительное возрастание как конституциональной, так и индуцированной in vitro ФГА продукции иммунокомпетентными клетками крови IL4 у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae. При этом изменения количества лимфоцитов, несущих мембранную форму рецептора к IL4, у пациентов с дли-

тельной антигенемией TBEV и у HCV-инфицированных лиц имели одинаковую направленность, однако разный характер выраженности: у пациентов с длительной антигенемией TBEV относительная доля С0124+-лимфоцитов в интактных культурах клеток превышала их уровень у здоровых людей, тогда как у больных хроническим вирусным гепатитом С она увеличивалась как по сравнению с контролем, так и относительно пациентов с антигенемией TBEV. У больных хроническим клещевым энцефалитом количество лимфоцитов, несущих мембранный рецептор к IL4, также достоверно превышало их содержание у здоровых людей (рис. 2,3).

Анализируя роль IL4 и его рецепторов в аутокринной и паракринной цито-киновой регуляции межклеточной кооперации иммуноцитов, необходимо отметить, что лиганд-рецепторная система IL4 в большинстве случаев выступает в качестве антагониста IFNy при воздействии на макрофаги, Т- и B-лимфоциты. Прежде всего, IL4 ингибирует продукцию мононуклеарами провоспалительных ци-токинов и хемокинов — TNFa, IL1, IL12 (р40) и IP10, синтез которых индуцируется или стимулируется IFNy. Способность IL4 ингибировать IFNy-индуцируемые свойства может быть опосредована через супрессию транскрипции соответствующих генов. Параллельно IL4 ингибирует продукцию макрофагами супероксидных и нитроксидных радикалов и нарушает ответ макрофагов на действие отдельных субклассов иммуноглобулинов, изменяя экспрессию соответствующих рецепторов [Paludan S., 1998; Фрейдлин И.С., 2001]. Считается, что IL4 является основным фактором в определении дифференцировки стимулированных антигеном наивных С04+-Т-клеток в Th2. Однако механизмы, которые способствуют гиперсекреции IL4 и увеличению числа лимфоцитов, презенти-рующих соответствующие рецепторы к нему, у людей с длительной персистен-цией флавивирусов до сих пор остаются неизученными. Имеются сведения, что Т-лимфоциты, приобретающие в процессе дифференцировки способность продуцировать IL4, утрачивают при этом способность секретировать IL2 [Horuk R. et al., 1998]. Возможно, именно это обстоятельство предопределяет вирусиндуциро-ванный дисбаланс Thl/Th2 путей иммунного ответа в сторону активации гуморального иммунитета, а выявленные нами изменения продукции и рецепции 1L4 являются одним из ведущих факторов дизрегуляции коммуникаций в системе иммуноцитов, осложняющихся невозможностью макроорганизма элиминировать вирусы и, соответственно, развитием длительной персистенции последних. Однако это предположение носит гипотетический характер и требует дополнительного специального исследования.

Особенности состояния системы IL10-IL10R мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae. Основным синергистом IL4 в реализации негативной цитокиновой регуляции провоспалительных функций иммунокомпетентных клеток является ILIO [Фрейдлин И.С., 2001; Matsui Т. et al., 2007].

Как показали результаты проведенных нами исследований, у пациентов с острой антигенемией вируса клещевого энцефалита абсолютное и относительное количество лимфоцитов, экспрессирующих IL10-R, содержание ILIO в суперна-тантах интактных и стимулированных in vitro ФГА культур мононуклеарных лейкоцитов не отличались от аналогичных показателей у здоровых людей. Оцен-

ка продукции и рецепции ILIO мононуклеарньтми лейкоцитами крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae показала, что как количество 1Ы0-11+-лимфоцитов, так и концентрация лиганда в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов возрастали относительно медианных значений соответствующих показателей у здоровых людей (рис. 2,3).

Известно, что ILIO является физиологическим антагонистом и ингибитором синтеза цитокинов, опосредующих Thl-ответ. ILIO ингибирует продукцию моно-нуклеарными лейкоцитами большинства провоспалительных цитокинов, экспрессию рецепторов к TNFa и IL 12 на NK-клетках. Ингибирование ILIO продукции IFNy Т-лимфоцитами связывают с супрессией презентации на мембране ан-тигенпредставляющих клеток костимулирующих молекул В7 и синтеза макрофагами IL 12. Обращает на себя внимание способность самих макрофагов продуцировать ILIO, являющийся для них аутокринным ингибитором [Lester M. et al, 1995; Isomaki P. et. al, 1998]. Как правило, мононукпеары продуцируют и секре-тируют последовательно провоспалительные цитокины, в том числе и IL 12, а затем ILIO, но с преобладанием IL 12. Однако в некоторых случаях продукция ILIO может резко увеличиваться, что и было зарегистрировано нами при обследовании пациентов с длительной HCV-инфекцией. Установлено, что избыток ILIO ведет к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронических форм инфекций [Фрейдлин И.С, Кузнецова С.А, 1999; Sutterwala F, Mosser D, 1999; Фрейдлин И.С, 2001; Сенников C.B. и соавт, 2004; Chen R.F. et al, 2005; Aborsangaya K.B. et al, 2007; Blackburn S.D., Wherry E.J, 2007; De Maria A. et al, 2007; Rigopoulou E.I. et al, 2007; Swarup V. et al, 2007; Saito К. et al, 2008].

Таким образом, в результате реализации исследования нами были выявлены закономерности нарушения цитокинопосредованной коммуникации иммуноком-петентных клеток крови при персистенции двух различных представителей семейства Flaviviridae - вируса гепатита С и вируса клещевого энцефалита. Приведенный выше фактический материал убедительно свидетельствовует, что изменения продукции и рецепции основных иммунорегуляторных цитокинов как в случае длительной персистенции вируса гепатита С, так и в случае длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита носят однонаправленный характер, однако, характеризуются различной степенью выраженности.

2. Клинико-иммунологические закономерности дисфункции системы цитокинов у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae

Анализ возможных причин различных исходов длительной персистенции вирусов в настоящее время сфокусирован главным образом на факторах возбудителя инфекции (генотип, вирусная нагрузка). Однако не менее важное влияние на течение заболевания оказывает, без сомнения, состояние системы иммунитета [Маянский А.Н., 1999; Абдурахманов Д. Т, 2001; Boot J.C.L. et al, 2001]. В связи с этим нами была предпринята оценка цитокинового статуса мононуклеарных лейкоцитов как основных участников реализации специфического иммунного ответа в зависимости от клинических особенностей течения клещевой нейроинфек-ции (клинические проявления цереброгенной астении на фоне длительной анти-

генемии TBEV или бессимптомное носительство), формы острого периода перенесенного заболевания (в анамнезе) в случае клещевого энцефалита, а также от степени активности, стадии хронизации вирусного гепатита в случае хронического вирусного гепатита С.

При выявлении клинико-иммунологических параллелей между продукцией и рецепцией цитокинов, с одной стороны, и клиническим проявлением течения инфекционного процесса, с другой стороны, у пациентов с длительной антигенеми-ей вируса клещевого энцефалита была установлена однонаправленность изменений цитокиновой системы как у пациентов без клинической симптоматики, так и у пациентов с остаточными признаками нейроинфекции. Так, цитокиновый статус у пациентов с цереброгенной астенией на фоне перенесенного клещевого энцефалита с длительной антигенемией TBEV характеризовался выраженным дисбалансом продукции и рецепции основных иммунорегуляторных Thl/Th2 цитокинов (более глубокое угнетение продукции и рецепции TNFa, IL2, митоген-стимулированной продукции IL12 и, напротив, более выраженная активация системы IL4 и ILIO, а также повышенное содержание растворимого рецептора к TNFa). Продукция и акцепция IFNy у пациентов с остаточными проявлениями клещевой нейроинфекции в сочетании с длительным носительством антигена TBEV соответствовала таковой у здоровых людей. Однако у пациентов с бессимптомной антигенемией вируса клещевого энцефалита нами было установлено увеличение как продукции IFNy мононуклеарными лейкоцитами крови в эксперименте in vitro, так и количества лимфоцитов, несущих молекулу CD119w, являющуюся цепью интерферонового рецептора. Вероятно, данный факт можно рассматривать как частичное сохранение компенсаторных механизмов макроорганизма по защите от вирусной агрессии.

Необходимо отметить, что у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита как количество клеток, несущих цитокиновые рецепторы, так и концентрация соответствующих лигандов в супернатантах культур моно-нуклеаров не зависели от формы острого периода заболевания (лихорадочная, стертая и субклиническая формы острого периода).

Кроме того, нами была проведена сравнительная оценка цитокинпродуци-рующей и рецепторпрезентирующей функции мононуклеарных лейкоцитов у пациентов с острой антигенемией TBEV и больных прогредиентной формой хронического клещевого энцефалита. Закономерными, на наш взгляд, являются выявленные у пациентов с острой формой носительства антигена вируса клещевого энцефалита изменения в системах таких цитокинов, как TNFa, IL2 и IFNy, являющиеся признаками активации системы иммунитета в ответ на внедрение вирусного агента. Однако нами не было обнаружено увеличения продукции IL 12 -провоспапительного цитокина, выполняющего роль связующего звена в переключении неспецифического иммунного ответа на специфический и активации клеточного (Thl) звена иммунитета. Также не было выявлено ожидаемых положительных корреляционных связей между продукцией IL12 и IFNy - синергистов в реализации противовирусного иммунитета. Таким образом, еще на начальных стадиях формирования специфического иммунного ответа у пациентов с TBEV-инфекцией выявляются признаки дизрегуляции основных иммунорегуляторных Thl/Th2 цитокинов, которые, во-первых, могут модулировать механизмы реализации противовирусного иммунитета, нарушать эффективную элиминацию пато-

гена и приводить к формированию длительной персистенции, во-вторых, усугубляя дисбаланс ТЬ1/ТЬ2, приводить к активации гуморального звена иммунитета и формированию признаков аутоагрессии. Изменения цитокинового статуса у больных хронической прогредиентной формой клещевого энцефалита имели одинаковую направленность и степень выраженности с таковыми у пациентов с остаточными симптомами клещевой нейроинфекции. По всей видимости, длительная персистенция ТВЕУ приводит к дизрегуляции цитокинопосредованной кооперации иммуноцитов, степень выраженности которой в дальнейшем определяется индивидуальными особенностями макроорганизма.

Резюмируя представленные результаты исследования, необходимо также остановиться на особенностях цитокинопосредованной коммуникации лейкоцитов крови у больных хроническим вирусным гепатитом С. Как известно, под степенью активности гепатита понимают совокупность клинических данных, активности трансаминаз и результатов гистологического исследования биоптатов печени. Проведенная нами оценка цитокинового статуса лимфоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом С в зависимости от степени активности, основываясь на определении полуколичественного гистологического индекса активности (индекс КпоёеН) (слабовыраженная и умеренная) позволила установить, что изменения носили однонаправленный характер.

Кроме того, у обследованных нами пациентов с длительной флавивирусной инфекцией уровень продукции и рецепции иммунокомпетентными клетками крови не определялись длительностью течения заболевания (до 1 года, от 1 до 3 лет и более 3 лет в случае длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита; менее 5 лет и более 5 лет в случае хронической персистенции вируса гепатита С).

Таким образом, результаты проведенного нами исследования свидетельствуют о выраженном дисбалансе продукции и рецепции основных иммунорегуля-торных ТЬ1/ТЬ2 цитокинов как при продолжительной персистенции вируса гепатита С, так и при длительной антигенемии ТВЕУ. Очевидно, что выявленные изменения, с одной стороны, являются следствием нарушения иммунологического равновесия, необходимого для адекватного реагирования макроорганизма на вирусную интервенцию. С другой стороны, принимая во внимание лимфотропные свойства ТВЕУ и НСУ, указанные нарушения могут выступать в качестве причины нарушения коммуникации иммунокомпетентных клеток посредством модуляции функциональной активности лимфоцитов на молекулярно-генетическом уровне (рис. 4).

3. Молекулярно-генетические механизмы изменения системы цитокинов у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства р1а\тШае

Рассматривая проблему взаимоотношения вируса и организма человека посредством концентрации внимания на роли в этом процессе цитокинопосредованной коммуникации иммунокомпетентных клеток, мы затронули лишь одну

Рис. 4. Молекулярные механизмы модуляции цитокиновой активности при персистентной вирусной инфекции

(результаты собственных исследований выделены серым)

сторону вопроса: все рассмотренные выше изменения продукции цитокина рассматривались с точки зрения ответной реакции организма на вторжение патогена. Но возможна и другая ситуация, когда неполноценный противовирусный иммунный ответ может быть генетически детерминирован. В связи с этим в последние годы в центре внимания исследователей все чаще оказываются генетические факторы, определяющие характер взаимодействия возбудителя и макроорганизма и, соответственно, исход инфекционного заболевания. С одной стороны, особенности формирования и течения хронической инфекции обусловлены генетической гетерогенностью самого патогена (вирулентность, контагиозность, лекарственная устойчивость и др.), а, с другой, - определяются иммуногенетическими особенностями организма. В настоящее время не установлены генетические маркеры, позволяющие достоверно прогнозировать характер течения инфекционного процесса, а также вероятность развития осложнений. Изучение механизмов, определяющих связь генотипа макроорганизма и клинических особенностей инфекционных заболеваний, является приоритетным направлением молекулярной медицины. Предпосылкой к изучению данной проблемы стало также утверждение, что, согласно мультифакторной модели, заболевание развивается только у тех субъектов, чей комбинированный груз генетических и средовых факторов превысит определенный пороговый уровень [Пузырев В.В. и соавт., 2002].

Известно, что нормальное функционирование иммунной системы строится на генетически детерминированном балансе Thl и Th2 лимфоцитов [McClain C.J. et al., 1999; Симбирцев А.С., 2001; Хаитов Р.М., 2001]. Исследования аллельного полиморфизма генов в целом и отдельных аллелей генов, ассоциированных с повышенной либо сниженной продукцией соответствующего цитокина, весьма актуальны при изучении функционирования цитокиновой сети в условиях вирусной агрессии. С помощью такого подхода можно понять межиндивидуальные различия в реагировании иммунной системы на стимулы [Nebert D.W., 1997; Баранов В.С., 2000; 2004; Бархаш А.В. и соавт., 2005]. Показано существование аллелей генов многих цитоки-нов и рецепторов к ним, а также доказана связь аплельных вариантов генов цитоки-нов с тяжестью и продолжительностью заболеваний. Помимо роли цитокинов в патогенезе и клинических проявлениях заболеваний, установлено, что структурные особенности белковых продуктов полиморфных генов цитокинов ведут к различному качеству иммунного ответа и, соответственно, к различным особенностям течения и вариантам исхода болезни [Ben-Ari Z. et al., 2003; Ракова И.Г., Коненков В.И., 2004].

Установлено, что полиморфные варианты промотора гена TNFA обеспечивают различную предрасположенность к персистенции вирусов [Wilson A.G. et al., 1993; Arias A.l. et al., 1997; Brinkman B.M. et al., 1997; Hohler T. et al., 1998; Louis E. et al., 1998; Fernandez-Arquero M. et al., 1999; Смольникова M.B. и соавт., 2004]. Известно, что точечная замена G—»А в позиции -308 промотора влияет на экспрессию гена TNFA и, следовательно, на уровень его белкового продукта. Для нас представлялось интересным проанализировать распределение аллелей гена TNFA в данном полиморфном локусе, которое помогло бы сделать вывод о предрасположенности либо резистентности организма к хроническому течению вирусного гепатита С и развитию длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита.

Анализ полиморфизма промоторного региона гена TNFA в участке G-308A у

здоровых лиц европеоидного происхождения, проживающих на территории Западной Сибири, больных хроническим вирусным гепатитом С и пациентов с длительной антигенемией TBEV того же этнического состава, показал, что распределение генотипов TNFA в контрольной группе соответствовало таковому у европеоидов других стран, где генотип G/G занимает доминантное положение [Fernandez-Arquero М. et al., 1999; Rosen Н. et al., 2002; Goyal A. et al., 2004; Mangia A. et al., 2004]. Так, анализ распределения аллельных вариантов гена TNFA у пациентов с длительной антигенемией TBEV позволил зарегистрировать доминирование гомозиготного варианта G/G (68%) над гетерозиготными G/A (22%) и А/А (8%) (рис. 5). При этом значения критерия отношения шансов были существенно меньше единицы (OR=0,26), что является вероятным свидетельством протективного характера генотипа G/G в отношении длительной антигенемии TBEV. У больных вирусным гепатитом С, несмотря на то, что имелась тенденция к увеличению частоты генотипа G/A (20 против 8 %), разница в распределении частот генотипов между группами не достигла критерия достоверности (рис. 5).

Роль TNFa в патогенезе вирусных инфекций связывают с изменением его продукции мононуклеарными лейкоцитами [Hohler Т. et al., 1998]. Имеются данные, что транзиция -308 G/A сопровождается повышением секреции TNFa почти в 2 раза [Wilson A.G. et al., 1997; Hohler Т. et al., 1998]. Однако проведенное нами исследование подобной закономерности не выявило: в частности, не зависимо от генотипа содержание TNFa в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae оставалось сниженным.

Представляют интерес результаты анализа распределения частот аллельных вариантов полиморфизма T-330G гена 1L2: среди пациентов с длительной персистенцией HCV нами зарегистрировано доминирование гетерозиготного варианта T/G (59%) над гомозиготным Т/Т (36%) (рис. 5). При этом у HCV-инфицированных лиц частота генотипа Т/Т оказалась достоверно ниже (Х2=8,71; р<0,01), а варианта T/G, напротив, выше (хг=8,08; р<0,01), чем у здоровых индивидов. Учитывая значения критерия отношения шансов (OR=3,48), мы предположили, что степень риска дальнейшего прогрессирования и неблагоприятного исхода хронического вирусного гепатита С положительно ассоциирована с гетерозиготным T/G генотипом. В связи с тем, что замена нуклеотида локализована в промоторной области гена IL2, мы предположили, что ее фенотипический эффект может заключаться в изменении экспрессии гена и, следовательно, уровня его белкового продукта. Однако у больных хроническим вирусным гепатитом С и пациентов с TBEV-антигенемией — носителей разных генотипов полиморфного участка T-330G гена IL2 — уровень спонтанной и стимулированной продукции IL2 статистически значимо не различался.

Оценка распределения генотипов гена IL12p40 — одного из ключевых цитоки-нов активации неспецифического и специфического звеньев иммунореактивности и, в частности, Thl-лимфоцитов, — у пациентов с длительной антигенемией TBEV позволила определить, что частота гомозиготного варианта С/С (27%) оказалась выше (Х2=11,02; р<0,001), чем аналогичные показатели у здоровых людей (2%) (рис. 5). Зная значения критерия отношения шансов (OR= 17,41), можно говорить о том, что гомозиготный вариант С/С промоторного варианта А-1188С гена 1Ы2р40 выступает в качестве предиктора длительной антигенемии TBEV в организме.

G-308A TNFa C-592A ILIO lle-50Val IL4R Q-576R IL4R C-590T IL4 T-33DG IL2

G-308A TNFa C-592A ILIO lle-50Val IL4R Q-576R IL4R C-590T IL4 T-330G IL2

G/G'

■G/A A/A

, С 1С

.CIA.

, AI А

V/V УЛ 1Л

, П/П D/R R/I

Вйййй i'':', ШШЖ ШЯШЩ/мж

с/с С/Т Т/Т

20%

60%

100%

G-308A TNFa C-592A IL10 lle-50Val IL4R Q-576R IL4R C-590TIL4 T-330G IL2

G/A A/A

A/A

R/R

G/G

100%

Рис. 5. Анализ распределения генотипов генов цитокинов и их рецепторов (IL2, IL4, IL4R, ILIO, TNFa) у здоровых доноров (А), пациентов с длительной антигене-мией вируса клещевого энцефалита (Б), хроническим вирусным гепатитом С (В)

Сопоставление результатов распределения генотипов промоторного региона А-1188С гена IL12p40 с уровнем секреции соответствующего цитокина показало, что у пациентов с длительной антигенемией TBEV выявлялся схожий уровень продукции IL12 у носителей разных генотипов полиморфного локуса А-1188С гена ILl2p40.

Склонность к хроническому затяжному течению вирусных инфекций может быть связана с аллельным вариантом С-590Т гена 1L4. Рядом авторов была показана ассоциация генотипа Т/Т промоторного региона С-590Т гена IL4 с гиперпродукцией цитокина при инфекции, определяющая быстрое прогрессирование заболевания [Смольникова М.В., 2002; Пузырев В.П., 2002]. Среди пациентов с длительной фла-вивирусной инфекцией и здоровых людей статистически значимых различий в распределении генотипов промоторного региона С-590Т гена IL4 обнаружено не было (рис. 5). Анализ ассоциированности генотипа клеток, продуцирующих IL4, и содержания IL4 в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae показал, что генотип Т/Т чаще выявляется среди индивидов с высоким уровнем продукции цитокина. Однако статистически значимой зависимости продукции этого контрвоспалительного цитокина от генотипа промоторного региона С-590Т гена IL4 установлено не было.

Анализ полиморфизма промоторного региона Q-576R гена IL4RA576 показал, что среди пациентов с длительной персистенцией флавивирусов достоверные различия по сравнению со здоровыми людьми отсутствовали (рис. 5). Однако предпринятая нами попытка оценить распределение генотипов и аллелей гена IL4RA576 среди пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита в зависимости от клинических проявлений нейроинфекции позволила установить статистически значимое (х2=6,92; р<0,01) преобладание частоты гетерозиготного варианта Q/R (69%, OR=3,05) над гомозиготным вариантом Q/Q (20%) промоторного региона Q-576R гена IL4RA576 у пациентов с остаточными проявлениями клещевой нейроинфекции.

Оценка распределения генотипов гена IL4RA50 у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae позволила определить, что частота гетерозиготного варианта Val/Ile (61%) гена IL4RA50 оказалась статистически значимо выше (х2=4,61; р<0,05), а гомозиготного Ile/Ile (30%) - ниже (/v2=4,95; р<0,05), чем аналогичные показатели у здоровых людей. Основываясь на значениях критерия отношения шансов, можно предположить, что генотип Ile/Ile является протективным фактором в условиях длительной антигенемии TBEV (OR=0,39), а увеличение частоты гетерозиготного варианта Val/Ile (OR=1,03) указывает на его положительную ассоциацию с длительной персистенцией TBEV в организме.

По данным литературы, иммуногенетическим фактором резистентности к развитию хронического вирусного гепатита С является генотип А/А гена ILIO в точке алпельного полиморфизма С-592А [Yee L.J. et al., 2001; Смольникова M.B. и соавт., 2002; Knapp S. et al., 2003]. Среди больных хроническим вирусным гепатитом С нами было выявлено преобладание варианта С/А полиморфного региона гена ILIO в участке С-592А (96%), положительно связанного с риском дальнейшего прогресси-рования и неблагоприятного исхода инфекции (OR=8,74) (рис. 5). Обращало на себя внимание отсутствие среди HCV-инфицированных лиц с гомозиготным генотипом по аллелю С. Необходимо подчеркнуть, что у пациентов с длительной антигенемией TBEV была показана инверсия в частоте распределения генотипов и аллелей промо-

торного региона гена ILIO в участке С-592А по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц: генотип С/С превышал частоту вариантов С/А и А/А (рис. 5). Следует также отметить, что OR оказался равным 5,15, что свидетельствовало в пользу ассоциации генотипа С/С участка С-592А гена ILIO с длительной персистен-цией TBEV.

Современные исследователи склонны считать, что феномен гиперпродукции IL4 и ILIO, регистрируемый при длительной персистенции вирусов, а также другой патологии (например, атопическом дерматите), может быть обусловлен не одним аллельным вариантом гена, а комплексом генов, от которых зависит уровень продукции цитокинов Thl- и ТЬ2-типа [Mosmann T.R., Sad S., 1996; Kraslova I. et al., 2003].

Итак, поскольку нормальное функционирование иммунной системы возможно лишь путем поддержания определенного баланса продукции и акцепции цитокинов, чрезвычайно важным является определение всех факторов, влияющих на изменение гомеостаза цитокиновой сети [Arai К. et al., 1991; Коненков В.И. и соавт., 2006]. Полиморфизм генов цитокинов, вероятно, является существенным фактором предрасположенности (резистентности) к инфицированию вирусами и к последующей персистенции (элиминации) инфекга в макроорганизме (рис. 6). В то же время пока не ясно, какие мутации и каких именно генов имеют решающее значение. По-видимому, большую роль играют не столько отдельные аллели генов, сколько их сочетания. В связи с этим перспективным направлением иммуногенетических исследований при персистентных вирусных инфекциях является изучение роли сочетаний аллелей генов при оценке подверженности к инфицированию и длительному пребыванию вируса в организме с учетом этнических особенностей пациентов.

Таким образом, использование современных молекулярно-биологических методов исследования позволяет значительно расширить возможности изучения патогенеза персистентных инфекций. По мнению современных исследователей, ключом к разгадке феномена персистенции вирусов в организме человека служит генетически детерминированная иммунореактивность системы крови, баланс влияний Thl- и ТЬ2-путей иммунитета. Результаты настоящего исследования с убедительностью продемонстрировали, что предиктором развития длительной персистенции возбудителей семейства Flaviviridae являются нарушения генетически детерминированных молекулярных механизмов регуляции системы цитокинов в кооперации иммунно-компетентных клеток. Длительная персистенция вирусов семейства Flaviviridae (на модели длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита и хронического вирусного гепатита С) сопровождается дисбалансом продукции основных про- и противовоспалительных цитокинов (IL2,1L4, ILIO и TNFa), количеством лимфоцитов, презентирующих комплиментарные им рецепторы (IL2R, IL4R, IL10R и TNFR1). Существенным фактором предрасположенности (резистентности) к длительной флавивирусной инфекции является полиморфизм генов цитокинов (С-592А гена ILIO, Ile-50Val гена IL4RA50, G-308A гена TNFA, А-1188С гена 1L12P40, T-330G гена IL2). Резюмируя представленный выше фактический материал, следует отметить общую направленность и характер изменений показателей иммунофенотипического и цитокинового статуса мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией Flaviviridae-внрусов.

В целом, представленные данные отвечают лишь на отдельные вопросы пробле-

Резистентность

Предрасположенность

T-330G гена 1L2 С-590Т гена IL4 Q-576R гена IL4R Ile-50Val гена IL4R А-1188С гена 1112 G-308A гена TNFA С-592А ILIO

0,5

Критерий отношения шансов, отражающий относительный риск развития заболевания при определенном генотипе по сравнению со здоровыми донорами

Резистентность

Предрасположенность

T-330G гена 1L2 ш

» С-590Т гена IL4

Q-576R гена IL4R

Ile-50Vai гена IL4R

А-1188С гена/¿/2

G-308A гена TNFA j

шшшшшшшшшшш, С-592А ILIO шшшшшшшшшш

0,5

Рис. 6. Результаты комплексного иммуногенетического обследования пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита (А) и больных хроническим вирусным гепатитом С (Б)

мы дизрегуляции иммунного ответа при инфицировании макроорганизма вирусами семейства Пттпйае и открывают новые перспективы изучения молекулярных и I клеточных механизмов модификации продукции и рецепции цитокинов, а также трансдукции полученных от них сигналов активации при длительной персистенции вирусов с целью прогноза темпа прогрессирования хронической инфекции, а также для создания персонализированных профилактических и терапевтических средств поддержания защитных сил инфицированного организма.

ВЫВОДЫ

1. Механизмы развития хронического носительства вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита) сопряжены с типовым дисбалансом цитокинопосредованного взаимодействия иммунокомпетентных клеток крови.

2. Нарушения системы IL2 при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита) проявляются снижением индуцированной ФГА in vitro продукции цитокина, абсолютного и относительного количества СБ25+лимфоцитов, что приводит к угнетению Thl-пути иммунного ответа.

3. Активация продукции и рецепции IL4 мононуклеарными лейкоцитами крови является одним из факторов, способствующих поляризации иммунного ответа в направлении Th2 при хроническом вирусном гепатите и длительной антигене-мии вируса клещевого энцефалита.

4. Дисбаланс системы TNFa и его рецепторов, проявляющийся в снижении продукции мононуклеарными лейкоцитами крови цитокина и презентации комплиментарного ему мембраносвязанного рецептора при одновременном повышении продукции растворимых форм рецептора, является звеном патогенеза угнетения антигенспецифического иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae.

5. Иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении длительной персистенции вирусов гепатита С среди лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири, являются генотип С/С промоторного региона С-592А гена ILIO и генотип Ile/TIe промоторного региона Ile-50Val гена IL4RAJ0; в отношении длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита — генотипы G/G промоторного региона G-308A гена TNFA и А/А промоторного региона А-1188С гена IL12p40, генотип Ие/Ие промоторного региона Ile-50Val гена IL4R.

6. Механизмы развития неэффективного противовирусного иммунного ответа при хроническом вирусном гепатите С ассоциированы с T/G генотипом промоторного региона -330G гена IL2 и С/А генотипом — -592А гена ILIO-, клещевом энцефалите — с С/С генотипом промоторного региона А-1188С гена IL12p40, Val/Ile генотипом промоторного региона Ile-50Val гена IL4R, Q/R генотипом промоторного региона Q-576R гена IL4R, С/С генотипом промоторного региона С-592А гена ILIO.

7. Закономерности нарушения системы цитокинов при персистенции вируса клещевого энцефалита определяются активностью инфекционного процесса: в остром периоде заболевания возрастает продукция мононуклеарными лейкоцитами крови провоспалительных Thl-цитокинов (TNFa, IL2, IFNy); длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита характеризуется дисбалансом системы цитокинов, обусловливающим поляризацию иммунного ответа в направлении Th2.

носительства антигена вируса клещевого энцефалита, являются более выраженное увеличение продукции мононуклеарными лейкоцитами IL4, sTNFR, количества лимфоцитов, презентирующих рецепторы к IL4, ILIO, снижение продукции TNFa, количества лимфоцитов, презентирующих рецепторы к TNFa и IL2. Пациенты с бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита характеризуются сохранной функцией эффекторных клеток иммунной системы отвечать увеличением продукции IFNy и презентации комплиментарных рецепторов в ответ на инфекцию. 9. Изменения системы цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С различной степени активности (слабовыраженная и умеренная) носят однонаправленный характер, при этом являются более выраженными в отношении продукции IL4 и ILIO у больных хроническим вирусным гепатитом С умеренной степени активности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Патофизиология иммунных нарушений при хронических вирусных гепатитах / О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, Т. Т. Радзивил, C.JI. Михеев, А.П. Мельникова // Материалы Второй международной конференции «Патофизиология и современная медицина», Москва, 22-24 апреля 2004 г. - Москва. 2004. - С. 154-157.

2. Иммунорегуляторные Thl- и ТЬ2-цитокины при хронической инфекции, вызванной вирусами гепатитов В и С / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, Е.В. Белобородова, В.В. Белоконь, М.А. Антошина, Ю.В. Томсон, Е.С. Зверева, Н.В. Токарева, О.Б. Жукова, А.П. Мельникова // Материалы Второй международной конференции «Патофизиология и современная медицина», Москва, 22-24 апреля 2004 г. -Москва, 2004. - С. 86-87.

3. Хронические вирусные гепатиты - актуальная проблема медико-социального значения / О.Б. Жукова, А.П. Мельникова, Н.В. Рязанцева и др. // Сборник научных работ «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии». - Томск, 2004. -№2. -С. 347.

4. Молекулярно-генетические механизмы дисфункции лимфоцитов крови при хронической вирусной инфекции / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, О.Б. Жукова, А.П. Мельникова и др. // Всероссийская конференция «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», Санкт-Петербург, 8-10 июня 2004 г. - СПб., 2004. - С. 204-205.

5. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов при длительной вирусной персистснции / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова, А.П. Мельникова и др. // Сборник научных работ VI конгресса с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении», Турция, г. Анталия, 24-30 апреля 2004 г. - Паллиативная медицина и реабилитация. - 2004. - №2. - С. 29-30.

6. Молекулярно-генетические механизмы хронизации вирусной инфекции / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, О.Б. Жукова, И.О. Наследникова, А.П. Мельникова и др. // III российский конгресс по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляци-онная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)», Москва, 9-12 ноября 2004 г. - Москва, 2004. - С. 142.

7. Закономерности изменений цитокинпродуцирующей способности лимфоцитов при хроническом вирусном гепатите / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новиц-

кий, О.Б Жукова, А.П. Мельникова и др. // III российский конгресс по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляционная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)», Москва, 9-12 ноября 2004 г. - Москва, 2004. - С. 72.

8. Хронический вирусный гепатит С: продукция фактора некроза опухолей альфа и его растворимого рецептора мононуклеарными лейкоцитами / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, А.П. Зима и др. II Сибирский журнал гастроэнтерологии. - 2004. - №18 -С. 45-46.

9. Роль нарушений иммунофенотипического профиля лимфоцитов крови в формировании хронической антигенемии вируса клещевого энцефалита / O.E. Чечина, О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Материалы Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные экологические и клинические аспекты», Новосибирск, 5-7 октября, 2004 г. - Новосибирск,

2004. - С. 86-87.

10. Молекулярные механизмы изменения продукции ФНО-а мононуклеарами крови при хроническом вирусном гепатите С / Н.В. Рязанцева, И.О. Наследникова, А.П. Зима и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - №2. - С. 191-195.

11. Изменение межклеточной кооперации мононуклеарных лейкоцитов в механизмах формирования персистентных вирусных инфекции / А.П. Зима, Ю.В. Миночен-ко, B.C. Козырева и др. // Материалы VI Международного конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 20-21 мая 2005 г. - Томск, 2005. - С. 24.

12. Фактор некроза опухолей альфа при хронических вирусных гепатитах / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Материалы 6-й Всероссийской научно-практической конференции «Вирусные гепатиты - проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики», Москва, 25-26 мая 2005 г. - С. 297-298.

13. Механизмы межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хронической персистенции вируса клещевого энцефалита / Н.В. Рязанцева, А.П. Зима,

B.В. Новицкий и др. // Материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием к 100-летию со дня рождения А.Г. Панова «Современное состояние проблемы нейроинфекций», г. Санкт-Петербург, 19-22 мая 2005 г. - Нейроим-мунология. - 2005. - №2. - С. 17.

14. Зима А.П. Молекулярно-генетические механизмы реализации противовирусного иммунитета у пациентов с хроническими вирусными гепатитами / А.П. Зима, Н.В. Рязанцева, И.О. Наследникова // Материалы Международного конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии», г. Москва, 3-8 октября 2005 г. - Журнал Ассоциации Детских Аллергологов и Иммунологов России. - 2005. - Т.6, №5 (Приложение 1). -

C. 197-198.

15. Изменение межклеточной кооперации мононуклеарных лейкоцитов в механизмах формирования персистентных вирусных инфекций / Н.В. Рязанцева, А.П. Зима, В.В. Новицкий и др. // Всероссийский научный симпозиум «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет.», г. Новосибирск, 19-21 июля 2005г. - Цитокины и воспаление. -

2005. - Т.4, №2. - С. 97-98.

16. Роль изменения экспрессии цитокинов и их рецепторов мононуклеарными лейкоцитами в условиях формирования противовирусного иммунитета / А.П. Зима, Ю.В. Миноченко Н.В. Рязанцева и др. // Тезисы докладов V Сибирского физиологиче-

ского съезда, г. Томск, 29 июня - 1 июля 2005 г. - Бюллетень сибирской медицины. -2005. - Т.4, Приложение 1. - С. 95.

17. Роль нарушений продукции фактора некроза опухоли альфа мононуклеарами крови в механизмах модуляции апоптоза при гепатите С / В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова, Т.Т. Радзивил, Е.В. Белобородова, А.П. Зима и др. // Медицинская иммунология. - 2005. - № 4. - С. 417-420.

18. Хронический вирусный гепатит С: иммунорегуляторные цитокины и хрониза-ция инфекции / И.О. Наследникова, Е.В. Белобородова, Н.В. Рязанцева, Э.И. Белобородова, В.В. Новицкий, Г.Э Черногорюк, В.В. Белоконь, М.А. Антошина, А.П. Зима // Клиническая медицина. - 2005. - № 9. - С. 40-44.

19. Полиморфизм промоторного участка генов G-308A TNFA, T-330G IL2, С590Т IL4, С-703ТIL5 и С-592А ILIO у больных вирусным гепатитом С / В.В. Авдошина, В.В. Коротченко, Е.В. Белобородова, И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.И. Коненков,

A.П. Зима // Цитокины и воспаление. - 2005. - № 2. - С. 78.

20. Дизрегуляция клеточного звена иммунитета при хроническом вирусном гепатите / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, Е.В. Белобородова, В.В. Новицкий, Э.И. Белобородова, О.Б. Жукова, А.П. Зима и др. // Бюдлегаш СО РАМН. - 2005. - № 4. - С. 5963.

21. Разработка технологии прогнозирования течения и исходов вирусных инфекций на основе идентификации молекулярных мишеней повреждения ключевых систем гомеостаза человека / О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, А.П. Зима и др. // Материалы II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», г. Москва, 20-21 октября 2005 г. - Москва, 2005. - С.132-133.

22. Нарушения продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови при персистенции вируса клещевого энцефалита / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2006. - №12. - С. 57-62.

23. Иммунопатогенетические особенности клещевого энцефалита / Н.В. Рязанцева,

B.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Вопросы вирусологии. - 2006. - №6. - С. 35-39.

24. Закономерности нарушений межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток при антигенемии вируса клещевого энцефалита / А.П. Зима, Р.Ф. Насырова, Н.Г. Жукова и др. // Всероссийская научно-практическая конференция «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке». Томск, 14-15 февраля 2006 г.- С. 48-49.

25. Направленность клеточной дифференцировки в условиях хронического носи-тельства вируса клещевого энцефалита / Р.Ф. Насырова, Н.Г. Жукова, О.Б. Жукова, А.П. Зима и др. // Всероссийская научно-практическая конференция «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке». Томск, 14-15 февраля 2006 г.- С. 96-97.

26. Молекулярные основы противовирусной стратегии организма при клещевом энцефалите / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, О.Б. Жукова, А.П. Зима // Всероссийская научно-практическая конференция «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке». Томск, 14-15 февраля 2006 г.- С. 50-51.

27. Молекулярные и клеточные основы патогенеза клещевого энцефалита / Насырова Р.Ф., Н.В. Рязанцева, Н.Г. Жукова, А.П. Зима и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - Т.5, Приложение 1. - С. 42-52.

28.Современные клинические проявления клещевого энцефалита в Томской области / Н.Г. Жукова, A.B. Лепехин, Лукашева Л.В., Р.Ф. Насырова, Н.В. Рязанцева, М.Р.

Карпова, М.Н. Добкина, А.П. Зима // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - Т.5, Приложение ]. - С. 52-57.

29. Избранные вопросы состояния клеточных факторов резистентности при клещевых природно-очаговых микст-инфекциях / Н.П. Пирогова, М.Р. Карпова, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - Т.5, Приложение 1. -С. 144-151.

30. Цитокины и противовирусный иммунитет / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, В.В. Белоконь, А.П. Зима и др. // Успехи физиологических наук. - 2006. - № 4. - С. 1-11.

31. Молекулярно-клеточные основы патогенеза хронических вирусных гепатитов / О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, А.П. Зима и др. // Российский медицинский форум с международным участием «Фундаментальная наука и практика» г. Москва, 18-20 октября 2006 г. - Москва, 2006. - С. 52.

32. Механизмы изменения продукции фактора некроза опухоли альфа при перси-стенции вируса клещевого энцефалита / A.I1 Зима, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова и др. II Съезд неврологов Сибирского федерального округа, г. Ярославль, 30-31 мая 2006 г. -Ярославль, 2006. - С. 108-109.

33. TNF-mediated apoptosis of peripheral blood lymphocytes in chronic hepatitis С / O.B. Zhukova, N.V. Ryazantseva, V.V. Novitskiy, A.P. Zima et al. // 4th Conference Cytokines and Inflammation. - USA, California, January 30-31, 2006. - P. 236.

34. Распределение аллелей полиморфных участков промоторов генов интерлейки-на-4 С-590Т IL-4 и генов рецепторов к нему IL-4RA Q-576R и 4RA Ile-50Val среди больных вирусным гепатитом С / В.В. Авдошина, В.И. Коненков, В.В. Дортман, Е.В. Белобородова, И.О. Наследникова, А.П. Зима и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2007 - №1. - С. 43-46.

35. Дисбаланс иммунорегуляторных Thl- и ТЬ2-цитокинов при персистентных вирусных инфекциях / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, С.Б. Ткаченко, А.П. Зима // Медицинская иммунология. - 2007. - № 1. - С. 53-60.

36. Молекулярно-генетические механизмы формирования вирусной персистенции / Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова, И.О. Наследникова, А.П. Зима и др. // Материалы 15 Российско-Японского Симпозиума медицинского обмена «Москва-2007» Пути развития и перспективы. - г. Благовещенск, 2007 г. - С. 236.

37. Аллельный полиморфизм генов ИЛ-4 и ИЛ-10 как один из возможных механизмов, способствующих хронизации вирусных гепатитов / Н.В. Рязанцева И.О. Наследникова. В.И. Коненков, В.В. Новицкий, С.Б. Ткаченко, А.П. Зима и др. // Иммунология. - 2007. - Том 28, №2. - С. 68-72.

38. Роль генетически детерминированной продукции иммунорегуляторных цито-кинов в иммунопатогенезе хронических вирусных гепатитов / И.О. Наследникова, В.И. Коненков, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, С.Б. Ткаченко, А.П. Зима и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т. 143, № 6. - С. 648-654.

39. Хронический вирусный гепатит: генетически детерминированная продукция иммунорегуляторных цитокинов и хроническая инфекция / И.О. Наследникова, А.П. Зима, Е.В. Белобородова // Тезисы II Российско-Германской конференции Форума Коха-Мечникова Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении, Томск, 9-12 сентября 2007 г. - С. 164.

40. Молекулярные основы дизрегуляции системы цитокинов при клещевом энцефалите / Н.В. Рязанцева, А.П. Зима, В.В. Новицкий и др. // Всероссийская научная конференция «Современные научные и прикладные аспекты клещевого энцефалита

(К 70-летию открытия вируса клещевого энцефалита)», Москва, 15-16 ноября 2007 г. -

41. Система фактора некроза опухолей альфа и его рецепторов в иммунопатогене-зе персистентных вирусных инфекций / А.П. Зима, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий и др. // Иммунология. - 2007. - Том 28, №6. - С. 357-361.

42. Механизмы дизрегуляции системы цитокинов при клещевом энцефалите / А.П. Зима, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова и др. // Омский научный вестник. - 2007, - № 3, Прил. 2.-С. 124-125.

43. Молекулярные основы персонализированной терапии социально-значимых инфекционных заболеваний и прогнозирование исхода взаимодействия инфектогена и иммунной системы макроорганизма / В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, О.И. Уразова, И.О. Наследникова, О.В. Воронкова, А.П. Зима и др. // Сборник работ по результатам выполнения мероприятий за 2007 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» - Москва, 2007. -

44. Дисбаланс продукции и рецепции IL2 и IL4 при длительной антигенемии виру-а клещевого энцефалита / А.П. Зима, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий и др. // Медицин-кая иммунология. - 2008. - № 4-5. - С. 389-396.

С. 106-107.

.50-51.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ПК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИФА - иммуноферментный анализ

ВЕ - клешевой энцефалит ПЦР - полимеразная цепная реакция НК - рибонуклеиновая кислота ГА - фитогемагглютинин Э - кластер дифференцировки СУ - вирус гепатита С I"» - интерферон

Ig - иммуноглобулин

IL- интерлейкин

JAK. - киназы семейства Janus

МНС - главный комплекс гистосовместимости

NF-kB - транскрипционный ядерный фактор кВ

NS - неструктурный белок

Th-T-хелпер

TNF - фактор некроза опухоли Tregs - Т-регуляторные лимфоциты

Тираж 100. Заказ № 980. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40

Оглавление диссертации Зима, Анастасия Павловна :: 2009 :: Томск

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Молекулярные основы функционирования цитокиновой сети.

1.1.1. Структурная организация цитокиновой сети, принципы функционирования.

1.1.2. Закономерности взаимодействия цитокинов и их рецепторов.

1.1.3. Трансдукция цитокинового сигнала в клетке.

1.1.4. Молекулярные механизмы регуляции функциональной активности системы цитокин-рецептор.:.

1.2. Общая характеристика систем цитокин-рецептор мононуклеарных лейкоцитов.

1.3 Цитокинопосредованные механизмы кооперации иммунокомпетентных клеток в реализации противовирусного иммунитета.

1.3.1. Основы иммунологического реагирования при вирусных инфекциях.

1.3.2. Дисбаланс цитокиновой сети при хронической вирусной инфекции.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика клинического материала.

9 11 Т<ГтТТГ£ПТ1ТЯ>Г>ТГС1СТ УЯП!1АГ»ТТОТГТI/-О ПС1ТТГ;ГРТ-1ТГ\Г1 Г ЯНТТ.ТГРТ^МТ'ТРТТ «Т-ГГП/Г»«!

1.1, Акакии! ^шръикХмрхх^^хти 11И1 ЦЦ V уиушслуи V« клещевого энцефалита.

2.1.2. Клиническая характеристика пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение содержания лимфоцитов крови.

2.2.2. Иммуноцитохимический метод определения экспрессии лимфоцитами СБЗ+, СБ4+, СБ8+, СБ22+, СБ56+.

2.2.3. Выделение мононуклеарных лейкоцитов крови.

2.2.4. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов крови.

2.2.5. Определение содержания цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови.

2.2.6. Оценка количества лимфоцитов крови, несущих мембраносвязанные формы цитокиновых рецепторов.

2.2.7. Определение содержания растворимого рецептора Т№а в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов крови.

2.2.8. Выделение ДНК.

2.2.9. Исследование полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов.

2.2.10. Статистическая обработка результатов исследования.юо

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Р1аутпс1ае.

3.2. Цитокиновый статус мононуклеарных лейкоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Р1сг\?Мпс1ае. гепатитом С.

3.2.2. Особенности продукции 1Ь2 и его рецепторов мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энпеЛалита и больных хпоническим випусным гепатитом С.

1 X x X j

3.2.3. Особенности продукции IL4 и его рецепторов мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита и больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.2.4. Особенности продукции ILIO и его рецепторов мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита и больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.2.5. Особенности продукции 1ЬКу и его рецепторов мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого

ОШТйЛ\ОТТТДТЯ и УПОШ^ПЙР^Тт ВППТ^иИТИ* ГАГТОТТРГАЛ! Р л /т\

ХАД^ А * А X и 11 /Ь^/Ч/ХХХХ X ••• . . . ••• •••»•

3.2.6. Особенности продукции ПЛ2 мононуклеарами крови у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита и больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.3. Дифференцированная оценка CD4+- и СБ8+-лимфоцитов, экспрессирующих мембранные формы рецепторов цитокинов, у пациентов с длительной персистенцией возбудителей семейства Flaviviridae.

3.4. Анализ распределения аллельных вариантов и генотипов генов

Щ-иОКИНОБ у ЗДОрОВЫХ ДОНОрОВ, ПаЦИ^шOB С ДЛИТСЛЬНОК ariiIn СНСМИСИ вируса клещевого энцефалита, хроническим вирусным гепатитом.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Зима, Анастасия Павловна, автореферат

Актуальность проблемы. Проблема персистентньтх вирусных инфекций приобретает все большую актуальность в современной медико-биологической науке и практическом здравоохранении в связи с возросшей заболеваемостью, их широким распространением среди трудоспособного населения, недостаточной эффективностью современных методов профилактики. Особо следует подчеркнуть трудность прогнозирования характера течения заболевания, выявления предрасположенности/резистентности к развитию хронических форм инфекции, отсутствие молекулярных технологий предупреждения развития осложнений; дегенеративных, фибротических и опухолевых процессов. Актуальным аспектом практической медицины остается недостаточная эффективность противовирусной терапии, а также отсутствие четких предикторов эффективности проведения дорогостоящих лечебных мероприятий применительно к конкретному пациенту. Принципиально важно, что растет число вялотекущих, стертых и бессимптомных форм вирусных инфекций [Воробьев A.A. и соавт., 2000; Покровский В.И. и соавт., 2000; Шевченко Ю.Л., 2000; Пименов Е.В. и соавт., 2003; Ивашкин В.Т., 2004; Hoffman H.R., 2006; Львов Д.К., Злобин В.И., 2007; Kneisson V.M. et al., 2007].

Эволюция инфекционной патологии ставит перед медициной новые задачи, обусловливая необходимость расширения и углубления фундаментальных исследований процессов в системе патоген-хозяин. Представления о патогенезе инфекционных заболеваний человека весьма динамичны. В настоящее время многие вопросы, касающиеся молекулярной патофизиологии инфекций, вызванных вирусами семейства Flaviviridae, остаются открытыми. В частности, до конца не установлены факторы, определяющие разные исходы болезни: от полной элиминации инфекта и оо^птт» «rrrrti гттлпо fтгюгitj^угу /»tii^n tx/\ foiimr ч п**лп«атгттпгтттгтл vjccvi-imiixvjivlruji о riv-'vi'iiv^jib^ida до xpunv^ljjupiviuii1i/u-i d llpui рсдгхч^п!njixj хроническую форму с формированием осложнений (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома в случае вирусного гепатита С, парезы. параличи и аутоиммунные процессы при клетевом энцефалите). Это обосновывает необходимость проведения фундаментальных исследований, направленных на идентификацию общих и специфических для конкретной нозологии молекулярно-генетических факторов, определяющих ключевые фенотипические характеристики заболевания — от исхода взаимодействия патогена и организма человека до риска развития тяжелых форм заболевания и его осложнений, вероятности адекватного ответа на лекарственную терапию.

Т.1 UV^sJ uj ,Ц11 Л- VJ1XA ZililpVlVijliV/lll 1Ш/1 'JUWWJi VlitLllllli V^UillU^UiW X иммуномодулирующей активностью, вызывая иммунодефицитные состояния, степень выраженности которых связана непосредственно с характером и тяжестью инфекционного процесса и зависит от преморбидного фона пациента [Долгих В.Т., 2000; Павлович С.А., 2001; Субботин А.В. и соавт., 2002; Чуйкова К.И., 2002; Ивашкин В.Т. и соавт., 2004; Серов В.В. и соавт., 2004; Рязанцева Н.В. и соавт., 2006]. Особо следует акцентировать внимание на том, что флавивирусы, в том числе вирус гепатита С (hepatitis С virus - HCV) и вирус клещевого энцефалита (tick-borne дм Л N п МТ1Г т М t*1 1 п I U I—J \ / \ лгтллл Г» Т ТТ Т n^m «ТТ ЛЧТ1»Г»Т<Г г\гт тл ПТ^ПЛ«ТТТТЛГ Ti-TTjlTlTl-nv

1/llCypllUJ.lUO VJJ.UO — 1 LJij V J, CaHJOWWrLDl pcuivixnjyncn О wi XJ aipip^IVHjpnbl/V lvJlV^AJVCUV иммунной системы, реализуя тем самым механизмы «ускользания» от иммунного надзора [Букринская А.Г., 1986; Погодина В.В. и соавт., 1986;

Серов В.В., Мухин Н.А., 2000; Ивашкин В.Т. и соавт., 2001; Пименов R.B. и соавт., 2003].

Особую роль в дизрегуляции функционирования иммунной системы при развитии инфекционного процесса играют нарушения межклеточной сигнализации. Известно, что в становлении и стабилизации контактов между взаимодействующими в ходе реализации противоинфекционной защиты клетками макроорганизма важное значение принадлежит биологической мультисистеме - цитокин-рецепторной сети [Ярилин А.А., 1999; Фрейдлин И.С. и соавт., 2001; Хаитов P.M., 2001; Симбирцев А.С., 2004]. В современной мировой литературе существуют данные, свидетельствующие о том, что возбудители могут использовать разные молекулярные механизмы, опосредующие изменение роли системы цитокинов в межклеточной кооперации иммуноцитов. В основе этого могут лежать как непосредственное воздействие патогенов на продукцию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами и рецепторный аппарат лимфоцитов, так и опосредованное их влияние путем супрессии внутриклеточных сигналов активации, механизмов сигнальной трансдукции и транскрипции [Ивашкин В.Т. и соавт., 2000; Кетлинский С.А., 2002; Царегородцева Т.М., Серова Т.И.,

0ППЗ- Плшрт Т М с] 1ППЛ- ХЫсгт П Т-Т 1004- T^of <5 Л/Г At al ОПГК- Qrrn'tb р т л* \j \j mj 2 4J ViHW£J X* VL ul. j \j I J J. 1 WUVil JL-X ,i.Xtj Atf U U | J W J t кУ Vb uii J Arf Wb/J L/lilibii X - ' /, et al., 2005; Boettler T. et al., 2005; Bolacchi F. et al., 2006; Werme K. et al., 2008].

Высказывается предположение о генетически детерминированных нарушениях коммуникативных рецепторзависимых взаимодействий эффекторных клеток, а, следовательно, формирования иммунного ответа и элиминации инфекта. Установлено, что гены цитокинов и их рецепторов в популяции человека характеризуются аллельным полиморфизмом и наличием изоформ, что определяет их способность модулировать ттпттмпг» ттопттд п» пгттттлрА лфплт>л тт ттл^птр т» лл»тлтъл гтаттппгтЛ1тл^"яттттлл'пт1 тг riciiipoDji^.njri^' iriiviivi jnnvji \j uiDuia jrl JlC/rvni jo u^nwoC iip^ApubiiOjujyiv^rirnjui iv саморазрешающейся инфекции или развитию хронического инфекционного процесса [Al Sharif F. et al., 1999; Рахманова А.Г. и соавт., 1999; Цой P.M.,

2001; Сенников C.B. и соавт., 2002; Ракова И.Г., Коненков В.И.,200.4;.Бархат А.В. и соавт., 2005; Richardson et al., 2005; Коненков В.И. и соавт., 2006; Фрейдин М.Б. и соавт., 2006; Авдошина В.В. и соавт., 2007; Коненков В.И. и соавт., 2007; Chen T.Y. et al., 2007; Hennig B.J. et al., 2007; Lund R.J. et al., 2007; Pérsico M. et al., 2007; Hegazy D. et al., 2008].

Изучение механизмов, определяющих связь генотипа или аллельного варианта и клинических особенностей инфекционных заболеваний, является одним из приоритетных направлений молекулярной медицины. Многие вопросы, касающиеся молекулярно-генетических основ предрасположенности и резистентности организма к инфекции, являются дискутабельными. Накопленные в обозначенной тематике факты, однако, зачастую носят сугубо феноменологический характер. В связи с этим представляется весьма актуальным оценить ассоциированность предрасположенности/резистентности организма человека к персистентному течению флавивирусных инфекций с рядом аллельных вариантов генов иммуноцитокинов и их рецепторов. Анализ распространенности различных аллелей генов интерлейкинов и их рецепторов среди пациентов с хронической персистенцией вирусов семейства Flaviviridae позволит i/rTQiinDHTi. nRnmp Жонтппч лпррпрттщлтпмр гчэоог. »iPirm; ittjttttd тлтч/q ггг, иг i-г vi j UiUllUiJlliU \-f W ■ ■ ■ IIV ^sajly v/llpbf^v jl/iivtifliv UII/l-JU IflV^ll^^ ^¿AXilA^J молекулярно-генетическим профилем системы межклеточной кооперации и характером течения инфекционного процесса. В то же время логично предположить существование совокупности специфических молекулярно-генетических маркеров для каждого конкретного заболевания. Полученные в указанном аспекте фундаментальные знания не только дополнят существующие на сегодняшний день представления о механизмах генетически детерминированной предрасположенности и резистентности организма человека к хроническому течению Flaviviridae-инф е кции, но и

ГТЛОТПГ^Т^ТГГГ ЛЛТТЛГЮТТТ1А* г ТТТТТ ш « » ni ггт/чгдттдггтттталт^ттдг ТТЛТПГЛТТЛТ1

1V1VJ1 у I iivj^ji jyrvi-i i о OLnui)onnCm Д.1 i>i pcupuuOiJvri riivnviynul CnClj'nvvnuA хшдлиДип для ранней диагностики, прогноза, лечения и профилактики заболеваний.

Цель исследования: установить молекулярные механизмы дизрегуляции цитокинопосредованной кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Flaviviridae.

Задачи исследования:

1. Оценить продукцию цитокинов (TL2, IL4, ILIO, TNFa и IFNy) мононуклеарными лейкоцитами крови и направленность Thl/Th2-поляризации иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита).

2. Дать комплексную оцешсу состояния рецепторного аппарата (IL2R, IL4R, IL10R, TNFR, sTNFR, IFNR) лимфоцитов крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae.

3. Установить общие закономерности и особенности изменений цитокинопосредованной кооперации иммунокомпетентных клеток крови при хроническом вирусном гепатите С и клещевом энцефалите в зависимости от нозологической принадлежности инфекта, клинического течения инфекции.

4. Выявить молекулярно-генетические механизмы дизрегуляции цитокиновой системы при хронической F/avzvzWi/яе-инфекции у лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири.

Установлено, что характер и направленность изменений продукции и рецепции цитокинов (IL2, IL4, EL 10, TNFa, IFNy) не зависят от этиологического варианта флавивирусной инфекции и согласуются с концепцией типовых механизмов развития инфекционного процесса.

Показано, что при остром клещевом энцефалите возрастает продукция мононуклеарными лейкоцитами крови иммунорегуляторных Thl -цитокинов (TNFa, EL2, IFNy), в то время как длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита сопровождается дисбалансом продукции и рецепции цитокинов эффекторными клетками крови. Установлено, что закономерности нарушения системы цитокинов и их рецепторов при персистенции TBEV определяются активностью инфекционного процесса.

Впервые комплексно и в сравнительном аспекте представлена характеристика системы цитокинов и их рецепторов у пациентов с длительной антигенемией вируса клещевого энцефалита, сопровождающейся остаточными проявлениями нейроинфекции в виде цереброгенной астении, пациентов с бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита и больных хроническим клещевым энцефалитом (полиомиелитическая форма, рецидивирующее течение). Установлено, что цитокиновый статус крови у пациентов с длительной антигенемией TBEV и больных хроническим клещевым энцефалитом характеризуется однонаправленными различной степени выраженности изменениями продукции и рецепции основных иммунорегуляторных цитокинов (EL2, IL4, ILIO, TNFa, IFNy).

Выявлено, что у больных хроническим вирусным гепатитом С слабовыраженной и умеренной степени активности (на основании определения полуколичественного гистологического индекса активности индекс Knodell), изменения в системе цитокинов и их рецепторов носят однонаправленный характер, при этом являются более выраженными в отношении изменения продукции ТЬ2-цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С умеренной степени активности.

Впервые проведено исследование полиморфизма генов цитокинов и рецепторов (IL2, IL4, IL4R, ILIO, IL12, TNFa) у лиц европеоидной популяции с хронической F/av/v/nGfoe-инфекцией, проживающих на территории Западной Сибири. Определено, что полиморфизмы в промоторных регионах генов ILIO и IL4RA50 обладают протективным эффектом в отношении HCV-инфекции; генов TNF A, IL12p40 и IL4RA50 - в отношении длительной антигенемии TBEV. Предрасположенность к развитию хронического вирусного гепатита С ассоциирована с аллелями промоторных регионов -330G гена IL2 и -592А гена ILIO', клещевой нейроинфекции — с С/С генотипом промоторного региона А-1188С гена IL12p40, Val/Ile генотипом промоторного региона Ile-50Val гена IL4R, полиморфизмами в промоторных регионах Q-576R гена IL4R и С-592А гена/¿70.

Теоретическая и практическая значимость. Впервые установлены закономерности нарушения цитокинопосредованного кооперативного взаимодействия иммунокомпетентных клеток крови у пациентов с длительной персистенцией вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита). Определена важная роль в этом процессе нарушения продукции и рецепции иммунорегуляторных цитокинов (IL2, IL4, ILIO, TNFa, IFNy), регулирующих баланс Thl/Th2-nym антигенспецифического иммунного ответа. Установлены иммуногенетические факторы, обладающие протективным эффектом и определяющие риск прогрессирования и хронизации вирусного гепатита в отношении длительной персистенции вирусов гепатита С и антигенемии вируса клещевого энцефалита.

Положения, выносимые на защиту:

2. Преимущественная активация ТЬ2-пути иммунного ответа при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) выражается в угнетении продукции IL2, IL 12 и TNFa, увеличении секреции IL4 и ILIO мононуклеарными лейкоцитами крови.

3. Длительная персистенция вирусов семейства Flaviviridae (длительная ан-тигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) сопровождается дисбалансом продукции IL2, IL4, ILIO и TNFa, а также презента-ции на лимфоцитах комплиментарных им рецепторов (IL2R, IL4R, IL10R и TNFR1), опосредующим нарушение межклеточной коммуникации иммунокомпетентных клеток крови.

4. Интра- и интернозологическая (длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита, хронический вирусный гепатит С) оценка нарушений функционирования системы цитокинов при хронической Flaviviridae-инфекции демонстрирует однонаправленность, но различную степень их выраженности.

5. Спели лип евпопеоилной поттуляттии. ттоживаютпих на тегтитопии

1 ' 1 1 А ' ' * х х ±

Западной Сибири, степень риска прогрессирования и хронизации вирусного гепатита С ассоциирована с аллелями промоторных регионов -330G гена JL2 и -592А гена НЮ (С/А генотип); клещевого энцефалита — А-1188С гена ЕЛ2р40 (С/С генотип), Ile-50Val гена IL4R, Q-576R гена IL4R, С-592А гена ILIO; резистентность к заболеванию хроническим вирусным гепатитом С — С-592А гена ILIO (С/С генотип) и Ile-50Val гена IL4RA50; в отношении длительной антигенемии TBEV — G-308A гена TNF А, А-1188С гена IL12p40 (А/А генотип), Ile-50Val гена IL4R.

Annniiauiju п прппичашмя nniinjphi Ре^гтьтяткт ттпгтр.ттештму

----/------,--------— /-----------,--------л-----1с-----------j---' ----— —Г"-------исследований докладывались и обсуждались на второй международной конференции «Патофизиология и современная медицина» (Москва, 2004); V Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004); III российский конгрессе по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляционная патология органов и систем (экспериментальная и клиническая патофизиология)» (Москва, 2004); Всероссийской конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2004); VI конгрессе с международным

XrtIQPTHAH/Г //ГТ^ТТТТГЮТТЛЭиОЯ * ТТТТТ ГТ/fUr Я Т я r4^q^T/TTTTTT,QTTT/TCT Т> On^QDnnvnQ UAUMMW j JIUW LliVill Wl. JLUJiJiimi JCllii.ii4/i iTiV/J|<llJ)<li.iU Xi P VUUliJAH x m,i,ri/i ü

Анталия, 2004); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005); Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Вирусные гепатиты - проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием к 100-летию со дня рождения А.Г. Панова «Современное состояние проблемы нейроинфекций» (Санкт-Петербург, 2005); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка.

Иммунитет.» (Новосибирск, 2005): V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); XII Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практическая конференции «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке» (Томск, 2006); Российском медицинском форуме с международным участием «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006); Съезде неврологов Сибирского федерального округа (Ярославль, 2006); 15 Российско-Японский Симпозиуме медицинского обмена «Москва-2007» Пути развития и перспективы (Благовещенск, 2007); II Российско-Германской конференции Форума Коха-Мечникова «Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении» (Томск, 2007); Всероссийской научной конференции «Современные научные и прикладные аспекты клещевого энцефалита», Москва, 15-16 ноября 2007.

1111 ии,ци II ^ \JXJX-fr ^ У^Ш Л. МНишХии// кафедры фундаментальных основ клинической медицины (разделы «Клиническая патофизиология реактивности организма», «Молекулярные основы патологии»), кафедры морфологии и общей патологии («Инфекция и иммунитет»), а также в лекционном курсе по инфекционным болезням для студентов лечебного, педиатрического и медико-биологического факультетов Сибирского государственного медицинского университета.

В работе приводятся результаты исследований, поддержанных Советом по грантам при Президенте РФ для поддержки ведущих научных школ РФ по проблеме «Молекулярные механизмы нарушения структуры, метаболизма и функции клеток крови при патологии» (НШ-1051.2003.4), «Молекулярные основы нарушения гомеостаза клеток крови при актуальных заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы» (Н1ТТ-4153.2006.7). «Роль генетичес1ш детерминированных реакций системы крови в патоморфозе инфекционных заболеваний» (НШ-2334.2008.7), а также результаты научно-исследовательских работ «Молекулярные механизмы предрасположенности и резистентности организма человека к персистентным бактериальным и вирусным инфекциям» РИ-112/001/158 (Государственный контракт от 05.09.2005 г. № 02.445.11.7110), «Молекулярные и клеточные основы управления реактивностью системы крови при актуальных заболеваниях инфекционной природы» 2006-РИ-112.0/001/384 (Государственный контракт от 09.06.2006 г. № 02.445.11.7419), «Молекулярные основы персонализированной терапии социально-значимых инфекционных заболеваний и прогнозирование исхода взаимодействия инфектогена и иммунной системы макроорганизма» (Государственный контракт от 27.02.07 г. № 02.512.11.2040), «Молекулярно-генетические основы управления адаптационной реактивностью системы крови человека при инфекции» (Государственный контракт от 05.06.2007 г. № 02.512.11.2112), в выполненных в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002-2006, 2007-2012 годы».

Заключение диссертационного исследования на тему "Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции"

296 ВЫВОДЫ

2. Нарушения системы IL2 при длительной персистенции вирусов семейства Flaviviridae (хронический вирусный гепатит, длительная антигенемия вируса клещевого энцефалита) проявляются снижением индуцированной ФГА in vitro продукции цитокина, абсолютного и относительного количества СТ)25+лимфоцитов, что приводит к угнетению Thl-пути иммунного ответа.

3. Активация продукции и рецепции IL4 мононуклеарными лейкоцитами крови является одним из факторов, способствующих поляризации иммунного ответа в направлении Th2 при хроническом вирусном гепатите и длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита.

5. Иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении длительной персистенции вирусов гепатита С среди лиц европеоидной популяции, проживающих на территории Западной Сибири, являются генотип С/С промоторного региона С-592А гена IL10 и генотип Ile/Ile промоторного региона Ile-50Val гена IL4RA50; в отношении длительной антигенемии вируса клещевого энцефалита — генотипы G/G промоторного региона G-308A гена TNFA и А/А промоторного региона А

1188С гена IL12p40, генотип Ile/Ile промоторного региона Ile-50Val гена IL4R.

6. Механизмы развития неэффективного противовирусного иммунного ответа при хроническом вирусном гепатите С ассоциированы с T/G генотипом промоторного региона -330G гена JL2 и С/А генотипом — 592А гена ILIO; клещевом энцефалите — с С/С генотипом промоторного региона А-1188С гена IL12p40, Val/Ile генотипом промоторного региона Ие-50Val гена IL4R, Q/R генотипом промоторного региона Q-576R гена IL4R, С/С генотипом промоторного региона С-592А гена ILIO.

8. Основными признаками дисбаланса системы цитокинов, отличающими длительную антигенемию вируса клещевого энцефалита, сопровождающуюся проявлениями нейроинфекции в виде цереброгенной астении, от бессимптомного носительства антигена вируса клещевого энцефалита, являются более выраженное увеличение продукции мононуклеарными лейкоцитами IL4, sTNFR, количества лимфоцитов, презентирующих рецепторы к IL4, ILIO, снижение продукции TNFa, количества лимфоцитов, презентирующих рецепторы к TNFa и IL2. Пациенты с бессимптомным носительством антигена вируса клещевого энцефалита характеризуются сохранной функцией эффекторных клеток иммунной системы отвечать увеличением продукции IFNy и презентации комплиментарных рецепторов в ответ на инфекцию.

9. Изменения системы цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С различной степени активности (слабовыраженная и умеренная) носят однонаправленный характер, при этом являются более выраженными в отношении продукции IL4 и ILIO у больных хроническим вирусным гепатитом С умеренной степени активности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вопросы, касающиеся молекулярно-биологических аспектов формирования персистентной вирусной инфекции, относятся к актуальным проблемам современной медико-биологической науки. Это связано как с возрастающей частотой хронизации инфекционного процесса, так и с возможностью развития опасных осложнений, вызванных реализацией онкогенного потенциала вирусов [Погодина В.В. и соавт., 1986; Tremoloda F. et al., 1991; Покровский В.И. и соавт., 1993; Jablonska M., 1997; Okoth F.A., 1996; Sharara A.L. et al., 1996; Чуйкова К.И., 2000; Boyer N., Marcellin P., 2000; Абдурахманов Д.Т., 2002; Жукова Н.Г. и соавт., 2002]. Помимо несомненного значения для медицинской науки и практического здравоохранения, хронические вирусные инфекции представляют собой интересный биологический феномен длительного (иногда пожизненного) персистирования чужеродного генетического объекта в зараженной клетке, несмотря на выраженный противовирусный иммунный ответ. Представители большинства таксономических групп вирусов могут служить причиной развития патологических процессов, при которых их репликация обеспечивается жизнеспособностью клетки-хозяина [Антоненко C.B. и соавт., 1981; Oldstone М.В., 1989; Dillon А.Р., Dusheiko G.M., 1995; Антонов П.В., Цинзерлинг В.А., 2001; Апросина З.Г., Серов В.В., 2001; Игнатова Т.М., Серов В.В., 2001; Arbutnot P., Kew M., 2001].

Используемые в последние годы молекулярно-биологические методы исследования позволили значительно расширить возможности изучения патогенеза персистентных инфекций. Вирусная интервенция индуцирует активацию защитных сил организма, биологической ролью которых является удаление вируса и зараженных им клеток как генетически чужеродного объекта. Из этого следует, что природа вирусного персистирования подразумевает наличие у возбудителей факторов, направленных на нарушение иммунного ответа и активное ускользание от действия защитных сил организма [Покровский В.И. и соавт., 1993; Хаитов P.M., 2000].

Резюмируя представленный выше фактический материал, следует отметить общую направленность и характер изменений показателей иммунофенотипического и цитокинового статуса мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у пациентов с длительной персистенцией Flaviviridae-вирусов.

Одним из центральных звеньев патогенеза хронических вирусных инфекций, вызванных возбудителями семейства Псмш^ае, является дизрегуляция иммунных реакций, что способствует поддержанию длительной циркуляции вирусов в макроорганизме. В настоящее время поиск молекулярных детерминант длительной персистенции вирусов связан с изучением процессов межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток, опосредованной цитокинами. Полученные нами данные убедительно свидетельствуют в пользу того, что длительная персистенция вирусов клещевого энцефалита и гепатита С сопровождается цитокинопосредованной модификацией межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток крови, характеризующейся, главным образом, выраженным дисбалансом продукции и рецепции основных иммунорегуляторных ТЫ /ТЬ2-цитокинов.

Ключом к разгадке феномена персистенции вирусов в организме человека, по мнению современных исследователей, служит баланс влияний ТЫ- и ТЬ2-типов. Одним из свойств вирусов, выработавшихся в результате коэволюции, как раз и является способность модулировать иммунный ответ в пользу реакций ТЬ2-типа, чем, вероятно, и объясняется феномен длительной персистенции. Предположительно, возбудители семейства Р1сышпс1ае используют молекулярные механизмы цитокинопосредованной модуляции межклеточной кооперации иммунокомпетентных клеток, в основе которых лежит как непосредственное воздействие на рецепторный цитокиновый аппарат лимфоцитов, так и опосредованное влияние на продукцию и рецепцию основных иммунорегуляторных цитокинов путем супрессирования внутриклеточных механизмов сигналов активации, ингибирования активности факторов транскрипции.

Известно, что, с одной стороны, вирус обладает иммуномодулирующим воздействием, что приводит к нарушению равновесия в системе иммунитета (цитокиновой сети), а, с другой стороны, — продукция цитокинов реализуется через генетическую детерминированность уровня определенного иммунорегулятора в ответ на инфицирование.

Многочисленными исследованиями последних лет установлено, что структурные особенности белковых продуктов полиморфных генов цитокинов ведут к различному качеству иммунного ответа, а также к различным течению и исходу инфекции. Проведенное нами иммуногенетическое исследование позволило установить, что степень риска прогрессирования и хронизации вирусных гепатитов была ассоциирована с аллелями промоторных регионов -330G гена IL2 и -592А гена ILIO, с Т/Т генотипом полиморфного участка С-590Т гена IL4\ длительной антигенемии TBEV - с А/А генотипом промоторного региона А-1188С гена ILI2p40, Val/Ile генотипом гена IL4RA50, С/С генотипом промоторного региона С-592А гена ILIO. Фактором резистентности к длительной персистенции вирусов гепатита С оказался генотип С/С промоторного региона С-592А гена ILIO, фактором резистентности к длительной антигенемии TBEV — генотип G/G промотрного региона G-308A гена TNF А, генотип А/А промоторного региона А-1188С гена IL12p40, генотип Ile/Ile гена IL4RA50.

Полученные нами данные открывают новые перспективы более детального изучения механизмов генетически детерминированной реакции иммунокомпетентных клеток в условиях длительной персистенции вируса.

В целом, представленные данные свидетельствуют о необходимости углубленного изучения молекулярных механизмов продукции и рецепции цитокинов, а также трансдукции полученных от них сигналов активации при длительной персистенции вирусов с целью прогноза темпа прогрессирования хронической инфекции, а также для создания персонализированных профилактических и терапевтических средств поддержания защитных сил инфицированного организма.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Зима, Анастасия Павловна

1. Абдурахманов, Д. Т. Клинико-биологическое значение мутаций генома вируса гепатита В / Д. Т. Абдурахманов // Клиническая медицина. -2001.-№12.-С. 9- 12. 2002

2. Абдурахманов, Д.Т. Хроническая HBV-инфекция / Д. Т. Абдурахманов // Клиническая медицина. 2002. - № 4. - С. 20 - 26.

3. Абдурахманов, Д.Т. Латентная HBV-инфекция в патогенезе хронических заболеваний печени / Д.Т. Абдурахманов.- Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2002.- № 6.- С. 3137.

4. Алекперов, Р. Т. Фактор некроза опухоли альфа при системной склеродермии / Р.Т. Алекперов, A.B. Тимченко, E.JL Насонов // Клиническая медицина: Научно-практический журнал. 2003. - Т. 81, № 12 . - С. 4-7.

5. Алтухов, Ю.П. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике / Ю.П. Алтухов, Е.А. Салменкова // Генетика. 2002. №9. - С. 1173-1195.

6. Аммосов, А.Д. Клещевой энцефалит / А.Д. Аммосов. Новосибирск: «Вектор-Бест», 2002. - 115 с.

7. Анализ белков вируса гепатита С в клетках печени больных хроническим гепатитом С / О.В. Масалова, А.Г. Абдулмеджилова, Т.В. Шкурко // Вопр. вирусологии. 2003. - №1. - С. 9-14.

8. Анализ белков вируса гепатита С в клетках печени больных хроническим гепатитом С / О.В. Масалова, А.Г. Абдулмеджилова, Т.В. Шкурко // Вопр. вирусологии. 2003. - №1. - С. 9-14

9. Антонов, П.В. Современное состояние проблемы хронических и медленных нейроинфекций / П.В. Антонов, В.А. Цинзерлинг // Арх. патологии.- 2001.- Т. 63, № 1.-С. 47-50.

10. Апросина, З.Г. Патогенез хронического гепатита В / З.Г. Апросина, Серов В.В. // Архив патологии. 2001. - Т.63, №2. - С. 58 - 61.

11. Ассоциированность аллелей гена фактора некроза опухоли альфа (G-308А) с HLA-антигенами локусов DRB1, DQA1, DQB1 у больных атопическим дерматитом / В.И. Коненков, A.B. Карпова, Н. Н. Свечникова и др. // Иммунология. 2007. - Т.28, N 6 . - С. 331-335.

12. Бажан, С.И. Молекулярно-генетические аспекты индукции и противовирусного действия интерферона / С.И. Бажан, O.E. Белова // Вестник РАМН. 1998. - N 3. - С. 18-24.

13. Баранов B.C. Генетические основы предрасположенности к некоторым частым мультифакториальным заболеваниям // Медицинская генетика. — 2004. №3. - С. 102-112.

14. Баранов B.C. Геномика и молекулярная медицина / Молекулярная биология. 2004. - №1. - С. 1-7.

15. Батухтин, A.B. Характеристика состояния мембран эритроцитов периферической крови у детей в норме, с инсулинзависимым сахарным диабетом и острой пневмонией / A.B. Батухтин: Дис. . канд. мед. наук. -Томск, 1998.-141с.

16. Белоконь, В.В. Нарушения цитокинпродуцирующей функции мононуклеаров крови при персистентных вирусных инфекциях: Автореф. дис. . канд. мед. наук/В.В. Белоконь. Томск, 2005. -23 с.

17. Болдырев, A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов / A.A. Болдырев. М.: Изд-во МГУ, 1985. - 93 с.

18. Болдырев, A.A. Введение в биомембранологию / A.A. Болдырев,- М.: Изд-во МГУ, 1990.-208 с.

19. Букринская, А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская. М.: Медицина, 1986. -336 с.

20. Быстрицкий, Л.Д. Анализ заболеванемости клещевым энцефалитом в Томской области. Экономическая оценка профилактики и диагностики клещевого энцефалита / Л.Д. Быстрицкий, Т.Э. Ильченко // Сибирский медицинский журнал. 2004. - №2. - С. 31-34.

21. Взаимодействие вирусов гепатита В и С с клетками иммунной системымакроорганизма / В.Т. Ивашкин, С.Н. Мамаев, А.О. Буеверов, Ю.О. Шульпекова // Клинич. лабораторная диагностика -2001. -№7. С. 45^48.

22. Владимиров, Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов / Ю.А. Владимиров // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1989. - № 4. -С. 7-19.

23. Владимиров, Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов. М, 1980.320 с.

24. Владимирская, Е.Б. Механизмы действия ростовых факторов в кроветворении / Е.Б. Владимирская // Лабораторная медицина. — 2002. -№5.-С. 26-30.

25. Воробьев, A.A. Мир микробов / A.A. Воробьев, А. JI. Гинцбург, В. М. Бондаренко // Вестник РАМН. 2000. - N 11 . - С. 11-14.

26. Геннис, Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. -М., 1997.-622с.

27. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям / М.Б. Фрейдин, И.А. Гончарова, A.A. Рудко и др. // Молекулярная медицина. 2006. - № 3 . - С. 39-46.

28. Гепатит С: механизмы многолетней персистенции вируса и фазы течения инфекционного процесса / С.Н. Соринсон, H.A. Селиванов, О.В. Корочкина и др. // Клинич. медицина. 1997. - №10. - С. 27-30.

29. Герцог, O.A. Роль провоспалительных цитокинов в патогенезе ревматоидного артрита / O.A. Герцог, C.B. Сенников // Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты / Под. ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004. - С. 215-229.

30. Горбаков, В.В. Современные подходы к лечению хронических вирусных заболеваний печени / В.В. Горбаков // Терапевтический архив. 2000. -№8.-С. 5-9.

31. Горбунов, Н.В. Влияние структурной модификации мембранных белков на липид-белковое взаимодействие в мембранах эритроцитов человека / Н.В. Горбунов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1993. -№ 11.-С.5-8.

32. Дизрегуляция клеточного звена иммунитета при хроническом вирусном гепатите / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, Е.В. Белобородова и др. // Бюллетень Со РАМН. 2005. - № 4. - С. 56-59.

33. Долгих, В. Т. Основы иммунопатологии / В. Т. Долгих. М: Мед. книга, Н. Новгород: изд-во НГМА, 2000. - 204 с.

34. Ершов, Ф.И. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях / Ф.И. Ершов, А.Н. Наровлянский, М.В. Мезенцева // Цитокины и воспаление. 2004. - №1. - С.3-6.

35. Ешану, В. С. Цитокины и их биологические эффекты при некоторых болезнях печени / B.C. Ешану // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2004. - N 5 . - С. 11-16.

36. Жукова Н.Г. Проблемы современной классификации клещевого энцефалита / Консилиум. 2000. - №5. - С. 68-71.

37. Журкин, A.C. Продукция цитокинов и интерферонотерапия у больных хроническими вирусными гепатитами / A.C. Журкин, C.B. Соловьев // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - №5. - С. 27-29.

38. Засухина, Г.Д. Механизмы защиты клеток человека, связанные с генетическим полиморфизмом / Г.Д. Засухина // Генетика. 2005. - № 4. - С. 520-535.

39. Злобин, В.И. Клещевой энцефалит в Российской Федерации: современное состояние проблемы и стратегия профилактики / В.И. Злобин // Вопросы вирусологии. 2005. - N 3 . - С. 26-32.

40. Злобин, В.И. Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе / В.И. Злобин // Российские медицинские вести. 2004. - Том 9, N 1 . - С. 68-69.

41. Зубова, С. Г. Молекулярные механизмы действия фактора некроза опухолей альфа и трансформирующего фактора роста бета в процессе ответа макрофага на активацию / С. Г. Зубова, В. Б. Окулов // Иммунология. 2001. - N 5 . - С. 18-22.

42. Иванов, A.A. Роль методов клеточной и молекулярной биологии в патологии / A.A. Иванов, М.А. Пальцев // Архив патологии. 1998. - №3. - С. 3-5.

43. Ивашкин В.Т. Классические провоспалительные цитокины и их биологические эффекты при заболеваниях печени / Ивашкин В.Т., Ю.О. шульпекова, Е.А. Лукина / молекулярная медицина. 2003. - №3. - С. 34-43.

44. Ивашкин, В.Т. Механизмы устойчивости вируса гепатита С к противовирусным препаратам / В.Т. Ивашкин, А.О. Буеверов, А.Е. Грязин // Молекулярная медицина. 2004. - №2. - С. 18-23.

45. Игнатова, Т.М. Патогенез хронического гепатита С / Т.М. Игнатова, В.В. Серов // Архив патологии. 2001. - №3. - С. 54-59.

46. Игнатьева, Г.А. Иммунная система и патология / Г.А. Игнатьева // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 1997. № 4. -С. 26-45.

47. Иерусалимский, А.П. Клещевые инфекции с позиции клинициста-невролога / А.П. Иерусалимский // Журнал неврологии и психиатрии им. С. С. Корсакова. 2006. - Том 106, N 2 . - С. 71-74.

48. Иерусалимский, А.П. Клещевые нейроинфекции / А.П. Иерусалимский // Неврологический журнал. 2003. - Том 8, N 1 . - С. 4-9.

49. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных / И.А. Горошинская, Л.Ю. Голотина, Е.И. Горло, Т.А. Ровда и др. // Вопросы медицинской химии.- 1999.- № 1.-С.53-57.

50. Изменения поверхностного фенотипа эндотелиальных клеток под влиянием провоспалительных и противовоспалительных цитокинов / Э.А. Старикова, Е.И. Амчиславский, Д.И. Соколов и др. // Медицинская иммунология. 2003. - Т.5, № 1-2. - С. 39-48.

51. Изменения продукции иммунорегуляторных цитокинов мононуклеарами крови при хронической герпесвирусной инфекции / В.В. Новицкий, И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2005. - № 5. - С. 43-45

52. Изучение активации лимфоцитов при вирусных инфекциях / В. А. Мищенко, А. С. Толокнов, Е. В. Новожилова и др. // Иммунология. -1994.-№ 6.-С. 33-35.

53. Изучение антиинфекционного потенциала рекомбинантного фактора некроза опухоли альфа / Ю. Т. Калинин, Н. М. Пустошилова, Л. А. Денисов и др. // Вестник РАМН. 1998. - N 10 . - С. 29-32.

54. Иммунный ответ при иксодовом клещевом боррелиозе в сочетании с клещевым энцефалитом / Н. П. Пирогова, В. В. Новицкий, М. Р. Карпова и др. // Сибирский медицинский журнал : Научно-практический рецензируемый журнал. 2003. - Том 18,Ы 3 . - С. 26-28

55. Иммуногенетические маркеры хронических заболеваний печени: современное состояние проблемы / Е.А. Попов, Б.Н. Левитан, О.А. Пронина и др. // Молекулярная медицина. 2004. - №2. - С. 12-18.

56. Иммуногенетические методы в прогнозе клинического течения клещевого энцефалита / Л.О. Черницина, В.Ф. Прокофьев, В.И. Коненков, А.П. Иерусалимский // 1990. № 11. - С. 38-43.

57. Иммунопатогенетические особенности клещевого энцефалита в условиях длительной вирусной анигенемии / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др. // Вопросы вирусологии. 2006. -N6.-0. 3539.

58. Иммунорегуляторные ТЫ- и ТЪ2-цитокины при хронических инфекциях, вызванных вирусами гепатитов В и С / Л.С. Приймяги, В.Т. Тефанова, Т.Г. Талло и др. // Вопросы вирусологии. 2003. - №4. - С. 3740.

59. Интерлейкины при хроническом вирусном гепатите / А. С. Логинов, Т. М. Царегородцева, М. М. Зотина и др. // Терапевтический архив. 2001. -Том 73,N 2 . - С. 17-20

60. Кадагидзе, 3. Г. Цитокины / 3. Г. Кадагидзе // Практическая онкология : Ежеквартальный тематический журнал. 2003. - Том 4, N3 . - С. 131139.

61. Карпов, С.Ю. Клиническая характеристика и особенности течения хронического гепатита С низкой степени активности / С.Ю. Карпов, П.Е. Крель // Клиническая медицина. 2005. - №1. - С. 14-19.

62. Кашкин, К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность / К.П. Кашкин. Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 11. - С. 21 - 32.

63. Кетлинский, С. А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С. А. Кетлинский // Иммунология: Двухмесячный научно-теоретический журнал / РАМН. 2002. -N2.-0. 77-79.

64. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А.Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. 1995. - №3. - С. 30 - 44.

65. Кирдей, Е.Г. Иммунология / Е.Г. Кирдей. Иркутск, 2000. - 232 с.

66. Клетки крови современные технологии их анализа / Г.И. Козинец, В.М. Погорелов, Д.А. Шмаров и др. -М.: «Триада-фарм», 2002. - 200 с

67. Клиническое значение фактора некроза опухоли / Б.М. Блохин, Е.С. дубровина, А.Ю. Щербина и соавт. // Гематология и трансфузиология. — 1999. №5.-С. 34-35.

68. Козинец, Г.И. Исследование системы крови в клинической практике / Г.И. Козинец. -М.: Медицина, 1997. 457 с.

69. Козинец, Г.И. Конфигурация и поверхность клеток крови в норме и при патологии / Г.И. Козинец, З.Г. Шишканова, Ю.К. Новодержина. М.: «Триада-фарм», 2004. - 152 с.

70. Коненков, В.И. Полиморфизм промоторных регионов генов 1Ь-4 и 10, ТЫГ-а у ВИЧ-инфицированных / В.И. Коненков, М.В. Смольникова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,- 2000.- N9.- С. 8083.

71. Коненков, В.И., Смольникова, М.В. Структурные основы и функциональная значимость аллельного полиморфизма генов цитокинов человека и их рецепторов / Медицинская иммунология. 2003. - №1-2. -С. 11-28.

72. Кузнецов, В. П. Интерфероны в каскаде цитокинов: исторический и современный аспекты / В. П. Кузнецов // Антибиотики и химиотерапия. -1998.-N5.-С. 28-41.

73. Курамшин, Д.Х. Иммунотропные свойства возбудителя вирусного гепатита С / Д.Х. Курамшин, С.В. Сенников, В.А. Козлов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2004. - №2. - С. 110-114.

74. Леонова, Г.Н. Проблема клещевого энцефалита на юге Дальнего Востока: от открытия до настоящего времени / Г.Н. Леонова // Бюллетень СО РАМН. 2007. - N 4 . - С. 7-13.

75. Леонова, Г.Н. Антигенемия у людей, инфицированных вирусом клещевого энцефалита / Г.Н. Леонова, О.С. Майстровская, В.Б. Борисевич //Вопросы вирусологии. 1996. - № 6. - С. 260-263

76. Леонова, Г.Н. Вирусемия у больных клещевым энцефалитом и у лиц с присасыванием иксодовых клещей / Г.Н. Леонова, О.С. Майстровская // Вопросы вирусологии. 1996. - № 5. - С. 224-228.

77. Львов, Д.К. Стратегия и тактика профилактики клещевого энцефалита на современном этапе / Д.К. Львов, В.И. Злобин // Вопросы вирусологии. -2007.-N 5.-С. 26-30.

78. Макаров, В.К. Фосфолипиды сыворотки крови в дифференциальной диагностике хронического вирусного гепатита В и цирротической стадии заболевания / В.К. Макаров // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 2. - С.41-42.

79. Мамаев, С.Н. Динамика показателей цитокинового статуса больных хроническим вирусным гепатитом С при лечении а-интерфероном / С.Н. Маммаев. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2001. - №1. - С. - 39 - 43.

80. Маммаев, С.Н. Субпопуляционный состав лимфоцитов крови больных хроническим гепатитом С / С.Н. Мамаев // Клиническая лабораторная диагностика.-2002.-№6.-С. 15-18.

81. Маянский, А.Н. Микробиология для врачей (Очерки патогенетической микробиологии) / А.Н. Маянский. Нижний Новгород: Изд-во НГМА. -1999.-335 с.

82. Маянский, H.A. Каспазонезависимый механизм апоптоза нейтрофилов: апоптогенный эффект туморонекротического фактора альфа1 / Н. А. Маянский // Иммунология: Двухмесячный научно-теоретический журнал/РАМН. 2002. - N1 . - С. 15-17.

83. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / Под ред. A.A. Воробьева. -М.: «Мед. информ. агенство», 2004. -691 с.

84. Механизмы иммунного «ускользания» при хроническом гепатите С / С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина, Ю.О. Шульпекова и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2002. - №2. - С. 55-60.

85. Механизмы иммунного ускользания при вирусных гепатитах / В.Т. Ивашкин, С.Н. Мамаев, А.О. Буеверов и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2000.-№5.-С. 7-12.

86. Молекулярные механизмы изменения продукции ФНО-а мононуклеарами крови при хроническом вирусном гепатите С / Н.В. Рязанцева, И.О. Наследникова, А.П. Зима и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - № 2. - С. 191-195.

87. Морфологические признаки гепатита С и цирроза С при разной активности процесса / В.В. Серов, JI.O. Севергина, И.В. Попова, Т.М. Игнатова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1995. - Т. 5, №3. - С. 58 - 61.

88. Наследникова, И.О. Молекулярные механизмы противовирусной стратегии организма / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий. Томск: Издательство Томского университета, 2005. - 128 с.

89. Насонов, E.JI. Специфические ингибиторы циклооксигеназы (ЦОГ)-2, решенные и нерешенные проблемы / Е. Л. Насонов // Клиническая фармакология и терапия. 2000. - Том 9,N 1 . - С. 57-64.

90. Недоспасов, С. А. Фактор некроза опухолей и лимфотоксин: молекулярная генетика, регуляция и физиологическая роль / С. А. Недоспасов // Генетшса. 2003. - Том 39, N 2 . - С. 207-214.

91. Нестеренко, В.Г. Иммунологические подходы в инфектологии / В.Г. Нестеренко // Вестник РАМН.- 2001.- № 11.- С.40-41.

92. Новое в гастроэнтерологии от патогенеза к клинической практике / Под ред. A.B. Ягода. - Ставрополь, 2003. - 184 с.

93. Nel, A.E. Активация Т-лимфоцитов, опосредованная рецептором антигена / A.E. Nel // Аллергология и иммунология. 2003. - №3. — С. 1528.

94. Носик, H.H. Цитокины при вирусных инфекциях / H.H. Носик. Вопросы вирусологии. 2000. - № 1. - С. 4 - 9.

95. Павлова, JI.E. Система интерферона при вирусных гепатитах / JI.E. Павлова, В.В. Макашева, А.К. Токмаев // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2000. - №1. - С. 48-51.

96. Павлович, С.А. Основы вирусологии / С.А Павлович. Вышэйшая школа, 2001.- 192 с.

97. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов, С.Е. Северин. М.:Медицина, 2003. - 288 с.

98. Пальцев, М.А. Медицина 21 века в свете клеточной биологии / М. А. Пальцев // Врачебная газета. 2004. - N 3 . - С. 9-10.

99. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов, С.Е. Северин 2-е изд. - М.: Медицина, 2003. - 286 с.

100. Пальцев, М.А. Молекулярная медицина: достижения и перспективы / М.А. Пальцев // Молекулярная медицина. 2004. - N 4 . - С. 3-8.

101. Персистенция вирусов: иммунологические и патогенетические аспекты / А.Н. Маянский, А.Н. Бурков, Д.Г. Астафьев, С.П. Рассанов // Клиническая медицина. 1998. - №12. - С. 1925.

102. Пирогова, Н.П. Механизмы нарушений клеточного звена резистентности при клещевых природно-очаговых инфекциях / Н.П. Пирогова: Дис. . докт. мед. наук. Томск, 2004. - 338 с.

103. Погодина, В.В. Хронический клещевой энцефалит / В. В. Погодина,

104. М.П. Фролова, Б. А. Ерман Новосибирск: Наука, 1986. - 232 с.

105. Погодина, В.В. Мониторинг популяций вируса клещевого энцефалита и этиологической структуры заболеваемости за 60-летний период /В.В. Погодина // Вопросы вирусологии. 2005. - N 3 . - С. 7-13.

106. Погодина, В.В. Семьдесят лет открытия клещевого энцефалита / В.В. Погодина //Вопросы вирусологии. 2007. - N 5 . - С. 5-8.

107. Показатели цитокиновой регуляции иммунного ответа у больных хроническим гепатитом С / О.В. Корочкина, В.М. Собчак, Е.А. Михайлова, Э.А. Монакова // Клинич. медицина. 2003. - №9. - С. 50-53

108. Покровский, В.И. Современные представления об инфекционной патологии и основные направления совершенствования стратегии ее профилактики / В.И. Покровский, Г.Г. Оншценко, Б.Л. Черкасский // Вестник РАМН. 2000. - N 1 . - С. 3-7.

109. Покровский, В.И. Человек и микроорганизмы. Здоровье и болезнь / В.И. Покровский // Вестник РАМН. 2000. - N 11 . - С. 3-6.

110. Покровский, В.И. Инфекционные болезни в России: оцешса ситуации / В.И. Покровский // Русский медицинский журнал. 2000. - T.8,N 17 . - С. 666-667.

111. Полиморфизм промоторного участка гена фактора некроза опухоли альфа у больных вирусным гепатитом С / М.В. Смольникова, В.В. Авдошина, В.И. Коненков и соавт. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. - №3. - С. 306-308

112. Прионные болезни на современном этапе и исследования, проводимые в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова / В.М. Ройхель, В.В. Погодина, В.Я. Кармышева и др. // Вопросы вирусологии. 2005. - N 3 . - С. 23-26.

113. Продукция цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С на фоне терапии IFN-a / С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина, С.А. Луговская и др. // Клинич. лабораторная диагностика.- 2001.- №8.- С. 15-18

114. Ракова И.Г. Изменения цитокиновой сети при тромбозе / И.Г. Ракова, В.И. Коненков // Система цитокинов / Под. ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004. - С. 229-241.

115. Растворимые рецепторы ФНО-альфа с молекулярной массой 55 кДа при ревматоидном артрите: клиническое значение / О. В. Степанец, Н. В. Чичасова, М. Б. Насонова и др. // Клиническая медицина. 2003. - Том 81, N4.-С. 42-46.

116. Ратникова, Л.И. Современные представления о патогенезе клещевого энцефалита / Л.И. Ратникова, Л.В. Тер-Багдасарян, И.Л. Миронов // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. - №5. - С. 41-46.

117. Рахманова, А.Г. Хронические вирусные гепатиты и цирроз печени / А.Г. Рахманова, A.A. Яковлев, E.H. Виноградова. СПб.: СпецЛит, 2006. -413 с.

118. Регуляция воспаления и фиброза печени цитокинами при ее хроническихпоражениях / С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина, Ю.О. Шульпекова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - № 12. - С. 37 - 39.

119. Решенные и нерешенные проблемы профилактики клещевого энцефалита / В.В. Погодина, Л.С. Левина, Н.Г. Бочкова и др. // Дезинфекционное дело. 2007. - N 1 . - С. 42-45.

120. Ройт А. Иммунология. Пер. с англ. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. -М.: Мир, 2000.-582 с.

121. Роль иммунофенотипических и цитогенетических изменений лимфоцитов крови в механизмах хронизации вирусной инфекции / Н.В Рязанцева, О.Б. Жукова, В.В. Новицкий и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. - № 6. - С. 23-27.

122. Роль нарушения продукции фактора некроза опухоли альфа мононуклеарами крови в механизмах модуляции апогггоза при гепатите С / В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, О.Б. Жукова и соавт. // Медицинская иммунология. 2005. - Том 7, N 4 . - С. 417-420.

123. Роль цитокинов и интерферона-a в патогенезе хронических диффузных заболеваний печени / А.В Астахин, С.С. Афанасьев, A.A. Воробьев и соавт. // Вестник РАМН. 2004. - №4. - С. 19-23.

124. Связь полиморфизмов генов OAS3 и PKR с восприимчивостью человека к заболеваниям, вызываемым вирусами семейства Flaviviridae / A.B. Бархаш, Е.П. Сивкова, В.Ф. Кобзев и др. // Медицинская генетика. -2005. Том 4, № 9 . - С. 415-419.

125. Сенников, C.B. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний / C.B.

126. Сенников, А.Н. Силков, В. А. Козлов // Иммунология. 2002. - №4. - С. 243-250.

127. Сенников, C.B. Альтернативный сплайсинг в формировании структуры системы цитокинов / C.B. Сенников, А.Н. Силков, В.А. Козлов // Система цитокинов / Под. ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. -Новосибирск: Наука, 2004. С. 7-23.

128. Сенников, C.B. Система цитокинов при вирусном гепатите С / C.B. Сенников, Д.Х. Курампшн, Н.П. Толоконская и др. // Система цитокинов / Под. ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004. -С. 194-202.

129. Сенников, C.B. Состояние системы цитокинов при атопическом дерматите / C.B. Сенников, Д.В. Курамшина, В.А. Козлов // Система цитокинов / Под. ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004.-С. 202-215.

130. Сергеев, П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, H.JI. Шимановский, В.И. Петров // М.1999,- 640 с

131. Серов, В.В. Иммунопатология хронических вирусных заболеваний печени / В.В. Серов, H.A. Мухин // Вестник РАМН. 2000. - №11. - С. 44-47.

132. Серов, В.В. От целлюлярной патологии Вирхова до молекулярной патологии сегодняшнего дня / В.В. Серов // Архив патологии. 2001. -№1. - С. 3-5.

133. Сидорова, И.С. Внутриутробные инфекции: хламидии, микоплазмоз, герпес, цитомигалия / И.С. Сидорова, И.Н. Черниенко // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1998. - № 3,- С. 7-13.

134. Симбирцев, A.C. Интерлейкин-2 и рецепторный комплекс интерлейкина-2 в регуляции иммунитета / A.C. Симбирцев. Иммунология. - 1998. -№6.-С. 3-8.

135. Симбирцев, A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / A.C. Симбирцев. - Цитокины и воспаление. - 2002.-Т. 1, № 1. С. 9 - 17.

136. Симбирцев, A.C. Цитокины: классификация и биологические функции / A.C. Симбирцев. Цитокины и воспаление. - 2004. - Т. 3, № 2. - С. 16 -21.

137. Симонова, A.B. Фенотип лимфоцитов при инфекционных заболеваниях человека / A.B. Симонова // Иммунология. 2002. - №5. - С. 310-313.

138. Система HLA и патология человека. Под ред. A.A. Баранова, Б. С. Каганова, С.А. Шер, А.Е. Богорад. М.: Издательский дом «Династия», 2003.-152 с

139. Система цитокинов у больных хроническим гепатитом С при лечении INF / В.Т. Ивашкин, С.Н. Мамаев, Е.А. Лукина и др. // Терапевтический архив.- 2002.- №2.- С. 41-44

140. Система цитокинов у больных хроническими диффузными заболеваниями печени / В.Т. Ивашкин, С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина и др. // Иммунология. 2001. - №1. - С. 46-49.

141. Смирнова, О.В. Короткие формы мембранных рецепторов: образование и роль в проведении гормонального сигнала / О.В. Смирнова, Р.Л. Богорад // Том 69, № 4, 2004.

142. Смольникова, М.В. Клиническая иммуногенетика заболеваний человека / М. В. Смольникова, В. И. Коненков // Медицинская иммунология. -2001. Том 3,N 3 . - С. 379-388.

143. Смольникова, М.В. Полиморфизм генов цитокинов в норме и при ВИЧ-инфекции: Автореф. Дис. . канд. мед. наук / М.В. Смольникова. -Новосибирск, 2002. — 22 с.

144. Собчак, Д.М. Показатели иммунитета у больных хроническим гепатитом С при различной гистологической активности / Д.М. Собчак, Э.А. Монакова // Клинич. Медицина. 2004. - №4. - С. 49-52.

145. Современные представления о патогенезе инфекционных заболеваний / Е.В. Пименов, A.A. Тотолян, A.A. Бывалов и др. // Вестник РАМН. -2003,-№6. -С. 3-9.

146. Современные клинические проявления клещевого энцефалита в Томской области / Н.Г. Жукова, A.B. Лепехин, Лукашева Л.В. и др. // Бюллетень сибирской медицины. 2006. - Т.5, Приложение 1. - С. 52-57.

147. Степовая, Е.А. Механизмы нарушений структурно-метаболического статуса и функциональных свойств эритроцитов у больных со злокачественными новообразованиями / Е.А. Степовая: Дис. . д-ра. мед. наук. Томск, 1999.-499 с.

148. Структурно-функциональные особенности плазматической мембраны лимфоцитов и эритроцитов при вирусных инфекциях / Н.В. Рязанцева, Л.Е. Панин, Н.В. Токарева и др. // Сибирский медицинский журнал. -2003. -№3. С. 34-38.

149. Субботин, A.B. Клинические особенности менингита при сочетанной инфекции клещевого энцефалита и иксодового боррелиоза у детей / A.B. Субботин, Т.В. Попонникова // Педиатрия: Журнал им. Г. Н. Сперанского. 2002. - N 6 . - С. 27-29.

150. Токарева Н.В. Изменение структуры плазматических мембран лимфоцитов и эритроцитов при персистентных вирусных инфекциях: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.В. Токарева. Томск, 2004. - 25 с.

151. Толоконская, Н.П. Значение исходного статуса пациентов в течении клещевого энцефалита и его прогнозе / Н.П. Толоконская, Ю.В. Казакова, В.В. Проворова // Инфекционные болезни. 2007. - Том 5, N 2 . - С. 42-47.

152. Томова, А. С. Роль фактора некроза опухоли альфа во взаимодействии макро- и микроорганизма / А. С. Томова, Ю. М. Романова, А. Л. Гинцбург // Вестник РАМН. 2005. - N 1 . - С. 24-29.

153. Фагоцитарные функции крови у больных острым клещевымэнцефалитом / Н.П. Пирогова, В. В. Новицкий, М. Р. Карпова и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - Том 135, N 1 . - С. 83-85.

154. Фактор некроза опухоли альфа при хронических вирусных гепатитах: патогенетическая роль, пути фармакологической коррекции / A.B. Ягода, Н.И. Гейвандова, Ш.М. Хубиев, Д.С. Цупрунова // Иммунология. 2000. - №2. - С. 36-38.

155. Факторы риска заражения больных гепатитом С в инфекционных больницах Новосибирска / И.В. Гаврилова, A.B. Шустов, Г.В. Кочнева и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. - N 6 . - С. 28-33.

156. Феномен антигенемии вируса клещевого энцефалита: некоторые пути патогенеза / И.О. Наследникова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2005. № 4. — С. 446-450

157. Флуоресцентное зондирование плазматической мембраны лимфоцитов и эритроцитов при персистенции вируса клещевого энцефалита: мониторирование структурных изменений / JI.E. Панин, Н.В. Рязанцева,

158. B.В. Новицкий и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - № 8. - С. 213-216.

159. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и ее дефекты / И.С. Фрейдлин. -СПб.- 1998.-257с

160. Фрейдлин, И.С. Иммунные комплексы и цитокины / И.С. Фрейдлин,

161. C.А. Кузнецова // Медицинская иммунология. 1999. - Т. 1, № 1 - 2. - С. 27-36

162. Фрейдлин, И.С. Интерлейкин-12 ключевой цитокин иммунорегуляции /И.С. Фрейдлин // Иммунология. - 1999. - № 4. - С. 5-8.

163. Фрейдлин, И.С. Клетки иммунной системы / И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян. СПб.: Наука, 2001. - 390 с.

164. Фрейдлин, И.С. От вирусов нас защищают клетки-убийцы / И.С. Фрейдлин // Соровский образовательный журнал. 1997. - №6. - С. 33

165. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. — 2001. №5. — С. 415.

166. Фрейдлин, И.С. Регуляторные функции провоспалительных цитокинов и острофазных белков / И.С. Фрейдлин, П.Г. Назаров // Вестник РАМН. -1999.-№5.-С. 28-32.

167. Фрейдлин, И.С. Цитокины и межклеточные контакты в противоинфекционной защите организма / И.С. Фрейдлин // Соровский образовательный журнал. 1996. - №7. - С. 19-25.

168. Функциональное состояние системы интерферона при иннапарантной и клинической инфекции вирусными гепатитами В и С / JI.C. Приймяги, И.Б. Кремерман, В.Т. Тефанова и др. // Вопросы вирусологии.- 1999.-№2.- С. 85-88.

169. Хаитов, P.M. Взаимодействие клеток иммунной системы: физиологические и медицинские аспекты иммунитета / P.M. Хаитов. -Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999. - №1. - С. 6-20.

170. Хаитов, P.M. Генетика иммунного ответа / P.M. Хаитов, Л.П. Алексеев // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 11-15.

171. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. -М.: Медицина, 2000. 429 с.

172. Хаитов, P.M. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Пинегин Б.В. // Иммунология. 2001. - №4. -С. 4-6.

173. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - №1. — С. 61-64.

174. Хаитов, P.M. Физиология иммунной системы / P.M. Хаитов. — М.: ВИНИТИ РАН, 2001. 224 с.

175. Хронический вирусный гепатит одна из наиболее важных проблемсовременной медицины/ B.B. Серов, З.Г. Апросина, П.Е. Крель и др. // Архив патологии. 2004. - №6. — С. 6-11.

176. Хронический вирусный гепатит / В.В. Серов, З.Г. Апросина, Т.М. Игнатова и др. // Вестник РАМН. 2003. - №4. - С. 34-38.

177. Хронический вирусный гепатит С: иммунорегуляторные цитокины и хронизация инфекции / И.О. Наследникова, Е.В. Белобородова, Н.В. Рязанцева и др. // Клиническая медицина. 2005. № 9. - С 40-44.

178. Царегородцева, Т.М. Цитокины в гастроэнтерологии / Т.М. Царегородцева, Т.И. Серова. — М.: «Анахарсис», 2003. 96 с.

179. Цитогенетика лимфоцитов периферической крови у пациентов с персистенцией вируса клещевого энцефалита / В.В. Новицкий, О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева и соавт. // Бюллетень СО РАМН. 2003. - N 4 . -С. 66-68.

180. Цитокин-продуцирующая способность мононуклеаров при хронических вирусных гепатитах "В" и "С" / В.В. Новицкий, Е.В. Белобородова, Н.В. Рязанцева и др. // Аллергология и иммунология. 2005. - Том 6, N 2 . - С. 257.

181. Цой, P.M. Показатели иммунного ответа на антиген вируса гепатита В у жителей северного города / P.M. Цой, Н.В. Жданюк, И.В. Пак // Иммунология. 2001. - N 3 . - С. 49-51.

182. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю., 2001 Физиология иммунной системы и экология / В. А. Черешнев, H. Н. Кеворков, Б. А. Бахметьев и др. // Иммунология. 2001. - N 3 . - С. 12-16.

183. Чуйкова, К.И. Актуальные вопросы эпидемиологии и профилактики вирусных гепатитов В и С в Томской области / К. И. Чуйкова; Сибирский медицинский университет // Сибирский медицинскийжурнал. 2000. - Том 15,N 3 . - С. 27-29.

184. Чуйкова, К.И. Комплексная терапия хронического вирусного гепатита, протекающего на фоне описторхоза / К.И. Чуйкова,- Терапевтический архив,- 2002,- Т.74, №11.- С. 52-55.

185. Шевченко, Ю.Л. Значение социальных факторов во взаимодействии человека и микроорганизмов / Ю.Л. Шевченко // Здравоохранение Российской Федерации. 2000. - N 5 . - С. 3-16.

186. Шичкин, В.П. Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой/антицитокиновой терапии / В.П. Шичкин. Иммунология. -1998.-№2.-С. 9-13.

187. Эволюция клещевого энцефалита и проблема эволюции возбудителя / В.В. Погодина, Л.С. Карань, Н.М. Колясникова и др. // Вопросы вирусологии. 2007. - N 5 . - С. 16-21.

188. Экспрессия генов и продукция основных иммунорегуляторных цитокинов при вирусном гепатите С / C.B. Сенников, Д.Х. Курамшин, Н.П. Толоконская, В.А. Козлов // Цитокины и воспаление. 2003. - №4. -С. 10-13.

189. Этногеномика и наследственные основы широко распространенных болезней / В.А. Степанов // Вестник РАМН. 2003. - №12. - С. 85-95.

190. Ярилин, A.A. Контактные межклеточные взаимодействия при иммунном ответе / A.A. Ярилин // Медицинская иммунология. 1999. - Т. 1, № 1 -2.-С. 37-46.

191. Ярилин, A.A. Межклеточная кооперация при иммунном ответе / A.A. Ярилин // Вестник РАМН. 1999. - № 4. - С. 25-29.

192. Ярилин, A.A. Основы иммунологии / A.A. Ярилин. М.: Медицина, 1999.-608 с.

193. Ярилин, A.A. Симбиотические взаимоотношения клеток иммунной системы / A.A. Ярилин // Иммунология. 2001. - № 4. - С. 16 - 20.

194. Ярилин, A.A. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / A.A. Ярилин // Иммунология. 1997. - № 5. - С. 7-14.

195. A combination of genetic polymorphisms increases the risk of progressive disease in chronic hepatitis С / M.M. Richardson, E.E. Powell, H.D. Barrie et al. // J. Med. Genet. 2006. - Vol. 42, N7. - P. 45.

196. A natural immunological adjuvant enhances T cell clonal expansion through a CD28-dependent, interleukin (IL)-2-independent mechanism / A. Khoruts, A. Mondino, K.A. Pape et al. // J. Exp. Med. -1998. Vol 187 (2). -P. 187- 225.

197. A randomised controlled trial of recombinant interferon-gamma in Chinese patients with chronic hepatitis В virus infection / J.Y. Lau, C.L. Lai, P.C. Wu et al // J. Med. Virol. 1991. - Vol. 34(3). - P. 184-187.

198. A rare polymorphism at position -28 in the human RANTES promoter / F. al Sharif, W.E. Ollier, A.H. Hajeer // Eur. J. Immunogenet. 1999. - Vol. 26, N 5.-P. 373-374.

199. A receptor for interleukin 10 is related to interferon receptors / A.S. Ho, Y. Liu, T.A. Khan et al // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993. -Vol. 90 (23).-P. 11267-71.

200. A role for the immunological synapse in lineage commitment of CD4 lymphocytes / R.A. Maldonado, D.J. Irvine, R. Schreiber, L.H. Glimcher // Nature. 2004. - Vol. 431(7008). - P. 527-32.

201. Acetaminophen hepatotoxicity: An update / C.J. McClain, S. Price, S. Barve et al. // Curr. Gastroenterol. Rep. 1999. - Vol. 1, N 1. - P. 42-49.

202. Activation of tumor necrosis factor-alpha system in chronic hepatitis С virusinfection / D.R. Nelson, H.L. Lim, C.G. Marousis et al. // Dig. Dis. Sci. -1997. Vol. 42. - P. 2487-2494.

203. Altered T helper 1 reaction but not increase of virus load in patients with dengue hemorrhagic fever / R.F. Chen, J.W. Liu, W.T. Yeh et al // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2005. - Vol. 44(1). - P. 43-50.

204. An immunomodulatory role for CD4(+)CD25(+) regulatory T lymphocytes in hepatitis C virus infection / R. Cabrera, Z. Tu, Y. Xu et al. // Hepatology.2004. Vol. 40(5). -P. 1062-71.

205. Anergic T cells are defective in both Jun NH2-terminal kinase and mitogen-activated protein kinase signaling pathways / D.R. DeSilva, W.S. Feeser, E.J. Tancula, P.A. Scherle // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 183. - P. 2017-2023.

206. Antibody to hepatitis C-virus in post-transfusion / F. Tremoloda, C.Casarin, A. Tagger et al. // Ibid. 1991. - Vol. 114. - P. 277-281.

207. Antiviral cell-mediated immune responses during hepatitis B and hepatitis C virus infections / C. Ferrari, A. Penna, A. Bertoletti et al. // Recent Results Cancer Res. 1998. - Vol. 154. - P. 330-336.

208. Antony, P.A., Restifo, N.P. CD4+CD25+ T regulatory cells, immunotherapy of cancer, and interleukin-2 / P.A. Antony, N.P. Restifo // J. Immunother.2005.-Vol. 28(2).-P. 120-8.

209. Antony, P.A., Restifo, N.P. Do CD4+ CD25+ immunoregulatory T cells hinder tumor immunotherapy? / P.A. Antony, N.P. Restifo // J. Immunother. -2002.-Vol. 25(3).-P. 202-6.

210. Apolipoprotein E-epsilon 4 protects against severe liver disease caused by hepatitis C virus / M.A. Wozniak, R.F. Itzhaki, E.B. Faragher et al. // Hepatology. 2002. - Vol. 36, N 2. - P. 456-463.

211. Arbutnot, P., Kew, M. Hepatitis B virus and hepatocellular carciboma / P. Arbutnot, M. Kew // Int. J. Exp. Pathol. 2001. - Vol. 82, N2. - P. 77-100.

212. Ashkenazi, A., Dixit V.M. Apoptosis control by death and decoy receptors / A. Ashkenazi, V.M. Dixit // Curr. Opin. Cell Biol.- 1999.-Vol. 11, N 2.- P. 255-260.

213. Association of genetic variants of the chemokine receptor CCR5 and its ligands, RANTES and MCP-2, with outcome of HCV infection / S. Hellier,

214. A.J. Frodsham, B.J. Hennig et al. // Hepatology. 2003. - Vol. 38, N 6. -P. 1468-1486.

215. Association of TNF-beta polymorphism with disease severity among patients infected with hepatitis C virus / A. Goyal, S.N. Kazim, P. Sakhuja et al. // J. Med. Virol. -2004. Vol. 72, N 1. - P. 60-65.

216. Association of tumour necrosis factor alpha variants with the CF pulmonary phenotype / J. Yarden, D. Radojkovic, K. De Boeck et al. // Thorax. 2005. -Vol.4.-P. 320-325.

217. Bach, J.F. Regulatory T cells under scrutiny / J.F. Bach // Nat. Rev. Immunol. -2003.-Vol. 3.-P. 189.

218. Bailly, S. Polymorphic tandem repeat region in interleukin-1 alpha intron 6 / S. Bailly, F.S. di Giovine, G.W. Duff//Hum Genet.- 1993.-V. 91.-P. 85-86.

219. Baldwin, A.S. Series introduction: the transcription factor NF-kappaB and human disease / A.S. Baldwin // J. Clin. Invest. 2001. - Vol. 1. - P. 3-6.

220. Bassiri, H. A requirement for IL-2/IL-2 receptor signaling in intrathymic negative selection / H. Bassiri, S.R. Carding // J. Immunol/ 2001. - Vol. 166. -P. 5945.

221. Bazan, J.E. Haemopoietic receptors and helical cytokines / J.E. Bazan // Immunol. Today. 1990. - Vol. 10. - P. 350-354.

222. Bazzoni F. Chimeric tumor necrosis factor receptors with constitutive signaling activity / F. Bazzoni, E. Alejos, B. Beutler // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol. 92(12). - P. 5376-5380.

223. Bazzoni, F. How do tumor necrosis factor receptors work? / F. Bazzoni,

224. B. Beutler //J. Inflamm. 1995. - Vol. 45(4). -P. 221-238.

225. Bazzoni, F. Comparative expression of TNF-alpha alleles from normal and autoimmune-prone MHC haplotypes / F. Bazzoni, B. Beutler // J. Inflamm.1995. Vol. 45(2). - P. 106-114.

226. Bazzoni, F. The of tumor necrosis factor ligand and receptor families / F. Bazzoni, B. Beurler // Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334. - P 1717-1723.

227. Beasley, R.P. Hepatitis B virus: the major etiology for hepatocellular carcinoma/R.P. Beasley.- Cancer.- 1998,- Vol. 61.-P. 56-61.

228. Bellingham, J. A poly-morphic dinucleotide repeat in the 59 flanking region of the human interleukin 11 gene / J. Bellingham, K. Gregory-Evans, C.Y. Gregory- Evans // Immunogenet. .1998. - Vol. 47. - P. 499-500.

229. Blackburn, S.D. IL-10, T cell exhaustion and viral persistence / S.D. Blackburn, E.J. Wherry // Trends Microbiol. 2007. - N 4. - P. 143-146.

230. Blocked signal transduction to the ERK and JNK protein kinases in anergic CD4+ T cells / W. Li, C.D. Whaley, A. Mondino, D.L. Mueller // Science.1996. Vol. 271. - P. 1272-1270.

231. Blocking of interferon-induced Jak-Stat signaling by Japanese encephalitis virus NS5 through a protein tyrosine phosphatase-mediated mechanism / R.J. Lin, B.L. Chang, H.P. Yu, et al. // J. Virol. 2006. - Vol. 80, N 12. - P. 59085918.

232. Bonjardim, C.A. Interferons (IFNs) are key cytokines in both innate and adaptive antiviral immune responses-and viruses counteract IFN action / C.A. Bonjardim // Microbes, Infect. 2005. - Vol. 3. - P. 569 - 578

233. Boot, J.C.L. Clinical guidelines on the management of hepatitis C / J.C.L. Boot, J. O'Crady, J. Heuberger // 1-st Asia Forum on Quality Improvement in Health Care. 2001. - Vol. 49. - Suppl. 1. - P. 3

234. Both virus and tumor necrosis factor alpha are critical for endothelium damage in a mouse model of dengue virus-induced hemorrhage / H.C. Chen, F.M. Hofman, J.T. Kung et al. // J. Virol. 2007. - N 11. - P. 5518-5526.

235. Both CD4+CD25+ and CD4+CD25" regulatory cells mediate dominant transplantation tolerance / L. Graca, S. Thompson, C. Y. Lin et al. // J.1.munol. 2002. - Vol. 168. - P. 5558.

236. Boyer, N. Pathogenesis, diagnosis and management of hepatitis C. / N. Boyer, P. Marcellin // J. Virol. 2000. - Vol.32, № 1. - P. 98-112.

237. Brewster, E.S. Dinucleotide repeat poly-morphism in the IL-2R beta gene / E.S. Brewster, M.B. Brennan, H. Vissing //Nucleic Acids Res. 1991. -Vol. 19. - P. 4022.

238. Brierley, M.M. IFN-alpha/beta receptor interactions to biologic outcomes: understanding the circuitry / M.M. Brierley, E.N. Fish // J. Interferon Cytokine Res. 2002. - N 22. - P. 835 - 845.

239. Caamaño, J. NF-kappaB family of transcription factors: central regulators of innate and adaptive immune functions / J. Caamaño, C.A. Hunter // Clin. Microbiol. Rev. 2002. - Vol. 15, N 3. - P. 414-429.

240. Carding, S.R. Cytokines in T-cell development / S.R. Carding, A.C. Hayday, K. Bottomly//Immunol. 1991. -N. 12. -P. 239.

241. CD25+ CD4+ T cells regulate the expansion of peripheral CD4 T cells through the production of IL-10 / O. Annacker, R. Pimenta-Araujo, O. Burlen-Defranoux et al. // J. Immunol. 2001. - Vol. 166(5). - P. 3008-18.

242. CD4 regulatory T cells prevent lethal autoimmunity in IL-2R-defícient mice: implications for the nonredundant function of IL-2 / T.R. Malek, A. Yu, V. Vincek et al. // Immunity. 2002. - N. 17. - P. 167.

243. CD40 ligand enhances dengue viral infection of dendritic cells: a possible mechanism for T cell-mediated immunopathology / P. Sun, C.M. Celluzzi, M. Marovich et al. // J. Immunol. 2006. - Vol. 177, N 9. - P. 6497-6503.

244. Cebulla, C.M. Viral inhibition of interferon signal transduction / C.M. Cebulla, D.M. Miller, D.D. Sedmak // Intervirology. 1999. - N 42. - P.325. 330.

245. Celec, P. Nuclear factor kappa B~molecular biomedicine: the next generation /P. Celec //Biomed. Pharmacother. 2004. - Vol. 58, N 6-7. - P. 365-371.

246. Cellular and molecular immunology. / A.K. Abbas, A.H. Lichtman, J.S. Pober et al. // Harcout Brase & Comp. 1994. - 386 p.

247. Cellular responses to interferon-gamma / U. Boehm, T. Klamp, M. Groot, J. C. Howard //Annu. Rev. Immunol. 1997. - Vol. 15. - P. 749 - 795

248. Chan, F.K.M. The pre-ligand binding assembly domain: a potential target of inhibition of tumour necrosis factor receptor function / F.K.M. Chan // Ann. Rheum Dis. -2000. Vol. 59, N 1. - P. 50-53.

249. Chang, K.M. Regulatory T cells in hepatitis C virus infection / K.M. Chang // Hepatol. Res. 2007. -N 3. - P. 327-330.

250. Characterization of recombinant extracellular domain of human interleukin-10 receptor / J.C. Tan, S. Braun, H. Rong et al. // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270, N21.-P. 12906-12911.

251. Chee, A.V. Herpes simplex virus 1 gene products occlude the interferon signaling pathway at multiple sites / A.V. Chee, B. Roizman // J. Virol. -2004. N78.-P. 4185-4196.

252. Chemical genetics to identify NFAT inhibitors: potential of targeting calcium mobilization in immunosuppression / N. Venkatesh, Y. Feng, B. DeDecker et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. -N24.-P. 8969-8974.

253. Chen, J. Effects of mitogens on the expression of interleukin-2 receptor and the cytotoxicity of human monocytes / J. Chen, H. Dong // Zhonghua Xue Ye XueZaZhi.-1997. Vol. 18, N6.-P. 291-294.

254. Circulating Thl and Th2 cytokines in patients with hepatitis C virus infection / X.G. Fan, W.E. Liu, C.Z. Li et al. // Mediators Inflamm. 1998. - Vol. 7.1. P. 295-297.

255. Clearance of hepatitis C virus is not associated with single nucleotide polymorphisms in the IL-1, -6, or -10 genes / E.J. Minton, D. Smillie, P. Smith et al. // Hum. Immunol. 2005. - Vol.2. - P. 127-132

256. Clinical observation of serum IL-18, IL-10 and sIL-2R levels in patients with chronic hepatitis C pre- and post antiviral treatment / H. Jia, J. Du, S. Zhu et al. // Chin. Med. J. -2003. Vol. 116, № 4. -P. 605-608

257. Coffman, R.L. The stability and reversibility of Thl and Th2 populations. R.L. Coffman, S. Mocci, A. O'Garra // Curr. Top Microbiol. Immunol. -1999.-N238.-P. 1-12.

258. Cohen, J. The scientific challenge of hepatitis C / J. Cohen // Science. 1999. -Vol. 25.-P. 26-30.

259. Cohen, M.C. Cytokine function: a study in biologic diversity / M.C. Cohen, S. Cohen // Am. J. Clin. Pathol. 1996. - Vol. 105, N 5. - P. 589-598.

260. Common polymorphisms in the coding part of the IL4-receptor gene / K. Deichmann, J. Bardutzky, J. Forster et al. //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - Vol. 231. - P. 696-697.

261. Comparison of genetic heterogeneity of hepatitis C viral RNA in liver tissue and serum / X. Fan, H. Solomon, J.E. Poulos // Am. J. Gastroenterol. 1999. -Vol. 29, N5.-P. 1347-1354

262. Comparison of tacrolimus with cyclosporin as primary immunosuppression in patients with hepatitis C virus infection after liver transplantation / Z. Ben-Ari, E. Mor, N. Bar-Nathan et al. // Transplant Proc. 2003. - Vol. 35(2). - P. 612-613.

263. Comparison of two polymorphisms of the IL-1 gene family: IL-1 receptor antagonist polymorphism contributes to susceptibility to severe sepsis / X.M. Fang, S. Schroder, A. Hoeft, F. Stuber // Critical Care Medicine. 1999. - Vol. 27, N7.-P. 1330-1334.

264. Compartmentalization of TNF receptor 1 signaling: internalized TNF receptosomes as death signaling vesicles / W. Schneider-Brachert,

265. V. Tchikov, J. Neumeyer et al. // Immunity. 2004. - N 3. - P. 415-428.

266. Constitutive activation of STATs upon in vivo human immunodeficiency virus infection / C. Bovolenta, L. Camorali, A.L. Lorini et al. //Blood. — 1999. Vol. 94, N 12. - P. 4202-4209.

267. Constitutively activated Jak-STAT pathway in T cells transformed with HTLV-I / T.S. Migone, J.X. Lin, A. Cereseto et al. // Science. 1995. -Vol. 269, N5220.-P. 79-81.

268. Control of the production of soluble interleukin-4 receptors: implications in immunoregulation / R. Fernandez-Botran, P.M. Chilton, Y. Ma et al. // J. Leukoc. Biol. 1996. - Vol. 59, N 4. - P. 499-504.

269. Cookson, W.O.C.M. Genetics of asthma and allergic disease / W.O.C.M. Cookson, M.F. Moffatt // Hum. Molec. Genet. 2000. - Vol. 9. - P. 23592364.

270. Cooper, G.M. Direct binding and activation of STAT transcription factors by the herpesvirus saimiri protein tip / G.M. Cooper, D.A. Hartley // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, N 22. - P. 16925-16932.

271. Correlation of serum soluble TNF-alpha receptors I and II Levels with disease activity in patients with ulcerative colitis / H. Hanai, F. Watanabe, M. Yamada et al. // Am J Gastroenterol. 2004. - Vol. 99, N 8. - P. 1532-8.

272. Cross talk between interferon-gamma and -alpha/beta signaling components in caveolar membrane domains / A. Takaoka, Y. Mitani, H. Suemori et al. // Science. 2000. - Vol. 288, N 5475. - P. 2357-2360.

273. Crystal structure of the tyrosine kinase domain of the human insulin receptor / S.R. Hubbard, L. Wei, L. Ellis, W.A. Hendrickson // Nature. 1994. -Vol. 372, N 6508. - P. 746-754.

274. Cytokine expression in normal, atopic, and asthmatic subjects using the combination of sputum induction and the polymerase chain reaction / C.M. Gelder, P.S. Thomas, D.H. Yates et al. // Thorax. 1995. - Vol. 50. - P. 1033-1037.

275. Cytokine gene polymorphism and heart transplant rejection / P. Turner, S.

276. Grant et al. // Transplantation. 1997. - Vol.64. - P. 3195-3199.

277. Cytokine gene polymorphisms and genetic association with coeliac disease in the Finnish population / N. Woolley, K. Mustalahti, M. Maki, J. Partanen // Scand. J. Immunol. -2005. Vol.1. - P. 51-56.

278. Cytokine gene polymorphisms in Japanese patients with hepatitis B virus infection—association between TGF-betal polymorphisms and hepatocellular carcinoma / K. Migita, S. Miyazoe, Y. Maeda et al. // J. Hepatol. 2005. -Vol.4.-P. 505-510.

279. Cytokine gene polymorphisms in patients infected with hepatitis B virus / Z. Ben-Ari, E. Mor, O. Papo et al. // Am. J. Gastroenterol. 2003. - Vol. 1. -P. 144-150.

280. Cytokines in alcoholic liver disease / C.J. McClain, S. Barbe, I. Deaciuc et al. // Semin. Liver Dis. 1999. - Vol. 19, N 2. - P. 205-219.

281. Cytokines: coordinators of immune fnd inflammatory responses / K. Arai, F. Lee, F. Miyajima et al. // Ann. Rev. Immunol. 1990. - Vol.59. - P. 783-802.

282. Cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 inhibits GATA-3 but not T-bet mRNA expression during T helper cell differentiation / F. Nasta, V. Ubaldi, L. Pace et al. // Immunology. 2006. - Vol. 117, N 3. -P. 358-367.

283. Davis, R.J. Signal transduction by the JNK group of MAP kinases / R.J. Davis // Cell. 2000. - Vol. 103, N 2. - P. 239-252.

284. Delayed lymphoid repopulation with defects in IL-4-driven responses produced by inactivation of NF-ATc / A.M. Ranger, M.R. Hodge, E.M. Gravallese et al. // Immunity.- 1998. Vol. 8, N 1. - P. 125-134.

285. Dengue virus (DV) replication in monocyte-derived macrophages is not affected by tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), and DV infection induces altered responsiveness to TNF-alpha stimulation // S. Wati, P. Li, C.J.

286. Burrell, J. Carr//J. Virol. 2007. - Vol. 81, N 18. -P. 10161-10171.

287. Deregulated T cell activation and autoimmunity in mice lacking interleukin-2 receptor / H. Suzuki, T.M. Kundig, C. Furlonger et al. // Science. 1995. — N 268.-P. 1472.

288. Detection of T lymphocyte subsets and mIL-2R on surface of PBMC in patients with hepatitis / K.X. Wang, J.L. Peng, X.F. Wang et al. // B. World J. Gastroenterol. 2003. - Vol. 9, N 9. - P. 2017-20.

289. Development and function of T cells in mice rendered interleukin-2 deficient by gene targeting /H. Schorle, T. Holtschke, T. Hunig et al. //Nature. 1991. -N. 352.-P. 621.

290. Differential effects of dengue virus on infected and bystander dendritic cells / D.R. Palmer, P. Sun, C. Celluzzi et al. // J. Virol. 2005. - Vol.79. - P. 24322439

291. Differential IL-10R1 expression plays a critical role in IL-10-mediated immune regulation / Y. Ding, L. Qin, D. Zamarin et al // J. Immunol. 2001. -Vol. 167, N 12. - P. 6884-6892.

292. Differential responses of human brain cells to West Nile virus infection / M.C. Cheeran, S. Hu, W.S. Sheng et al. // J. Neurovirol. 2005. - Vol. 11, N 6. - P. 512-524.

293. Differential functional avidity of dengue virus-specific T-cell clones for variant peptides representing heterologous and previously encountered serotypes / A. Imrie, J. Meeks, A. Gurary et al. // J. Virol. 2007. - Vol. 81, N18.-P. 10081-10091.

294. Dillon, A.P. Pathology of hepatitis C virus infection / A.P. Dillon, G.M. Dusheiko //Histopathology. 1995. - Vol. 26, N 4. - P. 297-309.

295. Direct evidence for immunomodulatory properties of ribavirin on T-cell reactivity to hepatitis C virus / E.I. Rigopoulou, W.G. Abbott, R. Williams, N.V. Naoumov // Antiviral. Res. 2007. - Vol. 75, N 1. - P. 36-42.

296. Down-regulating effects of IL-4 and IL-10 on the IFN-gamma response in atopic dermatitis / M.R. Lester, M.F. Hofer, M. Gately, et al. // J Immunol. -1995. Vol. 154, N 11. -P. 6174-6181.

297. E1A sensitizes cells to tumor necrosis factor-induced apoptosis through inhibition of IkappaB kinases and nuclear factor kappaB activities / R. Shao, M.C. Hu, B.P. Zhou et al. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 2149521498.

298. Early Induction of Interleukin-12 by Human Monocytes Exposed to Cryptococcus neoformans Mannoproteins / L. Pitzurra, R. Cherniak, M. Giammarioli et al. // Infection and Immunity. 2000. - N2. - P. 558-563.

299. I.Early target genes of IL-12 and STAT4 signaling in th cells. / R.J. Lund, Z. Chen, J. Scheinin, R. Lahesmaa // J. Immunol. 2004. - Vol. 172, N 11. -P. 6775-6782.

300. Effects of a polymorphism in the human TNF-a promoter on transcriptional activation / A.G. Wilson, J.A. Symons, T.L. McDowell et al. //PNAS. 1997. -Vol. 94.-P. 3195-3199.

301. Effects of catecholamines on kinase activation in lung neutrophils after hemorrhage or endotoxemia / J. Arcaroli, K.Y. Yang, H.K. Yum et al. // J. Leukoc. Biol. 2002. - Vol. 72(3). - P. 571-9.

302. Efficient purification of recombinant human tumor necrosis factor beta from

303. Escherichia coli yields biologically active protein with a trimeric structure that binds to both tumor necrosis factor receptors / H.J. Schoenfeld, B. Poeschl, J.R. Frey et al. // J. Biol. Chem. -1991. Vol. 266, N 6. - P. 3863-3869.

304. Elevated serum levels of soluble immune activation markers are associated with increased risk for death in HAART-naive HIV-1-infected patients. /N.V. Sipsas, P.P. Sfikakis, G. Touloumi et al. //AIDS Patient Care STDS. -2003.-Vol. 17, N4.-P. 147-153.

305. Endotoxin-induced cytokine gene expression and excretion in the liver / M.I. Luster, D.R. Germolec, T. Yoshida et al. // Hepatology. 1994. - Vol. 19, N 2.-P. 480-488.

306. Eskdale, J. A polymorphic dinucleotide repeat in the human IL-10 promoter / J. Eskdale, G. Gallagher //Immunogenetics.- 1995.-V. 42, N 5.-P. 444-445.

307. Essential role for STAT5 signaling in CD25+CD4+ regulatory T cell homeostasis and the maintenance of self-tolerance / A. Antov, L. Yang, M. Vig et al. //J. Immunol. 2003. - Vol. 171. - P. 3435.

308. Expression cloning and characterization of a human IL-10 receptor / Y. Liu, S.H. Wei, A.S. Ho et al. // J. Immunol. 1994. - N 4. - P. 1821-1829.

309. Extrahepatic manifestations of chronic hepatitis C / P. Cacoub, T. Poynard, P. Ghilliani et al. // Arthrl. end Rheum. 1999. - Vol. 42. -P. 2204-2212.

310. Foxp3+CD4+CD25+ T cells control virus-specific memory T cells in chimpanzees that recovered from hepatitis C / T. Manigold, E.C. Shin, E. Mizukoshi et al. // Blood. 2006. - Vol. 107, N 11. - P. 4424-4432.

311. Friedman, S. L. Cytokines and fibrogenesis / S. L. Friedman // Semin. Liver Dis. 1999.-Vol. 19, N2. - P. 129-140.

312. Garcia-Sastre, A. Mechanisms of inhibition of the host interferon alpha/betamediated antiviral responses by viruses / A. Garcia-Sastre // Microbes Infect. -2002. -N4.-P. 647-655.

313. Garcin D. Sendai virus C proteins counteract the interferon- mediated induction of an antiviral state / Garcin D, Latorre P, Kolakofsky D // J Virol. 1999 Aug;73(8):6559-65

314. Gender susceptibility to chronic hepatitis C virus infection associated with interleukin 10 promoter polymorphism / N. Paladino, H. Fainboim, G. Theiler et al. //J. Virol. -2006. Vol. 80, N 18. - P. 9144-9150.

315. Generalized autoimmune disease in interleukin-2-deficient mice is triggered by an uncontrolled activation and proliferation of CD4+ T cells / B. Sadlack, J. Lohler, H. Schorle et al. // Eur J. Immunol. 1995. - Vol. 25. - P. 3053.

316. Genome-wide identification of novel genes involved in early Thl and Th2 cell differentiation / RJ. Lund, M. Loytomaki, T. Naumanen et al. // J. Immunol. -2007. Vol. 178, N 6. - P. 3648-3660.

317. Glucocorticoids enhance the gamma-interferon augmentation of human monocyte immunoglobulin G Fc receptor expression / M.T. Girard, S. Hjaltadottir, A.N. Fejes-Toth, P.M. Guyre // J. Immunol. 1987. -Vol. 138, N10.-P. 3235-3241.

318. Goh, K.C. p38 MAP kinase is required for STAT1 serine phosphorylation andtranscriptional activation induced by interferons / K.C. Goh, S.J. Haque, B.R. Williams // EMBO J. 1999. - Vol. 18. - P. 5601.

319. Goodbourn, S. Interferons: cell signalling, immune modulation, antiviral response and virus countermeasures / S.L. Goodbourn, L. Didcock, R.E. Randall // J. Gen. Virol. 2000. - N 81. -P. 2341-2364.

320. Gravestein, L.A. Tumor necrosis factor receptor family members in the immune system / L.A. Gravestein, J. Borst // Semin. Immunol. 1998. - Vol. 10.-P. 423-434.

321. Gruss, H.J. The TNF ligand superfamily and its relevance for human diseases /H.J. Grass, S.K. Dower//Cytokines Mol. Ther. 1995.-Vol. l.-P. 75-105.

322. Hatada, E.N. NF-kappaB and the innate immune response / E.N. Hatada, D. Krappmann, C. Scheidereit // Curr. Opin. Immunol. 2000. - Vol. 12, N 1. -P. 52-58.

323. Hay, S. A time to kill: viral manipulation of the cell death program / S. Hay,

324. G. Kannourakis // J. Gen. Virol. 2002. - Vol. 83, Pt. 7. - P. 1547-1564.

325. Heaney, M.L. Soluble receptors in human disease / M.L. Heaney, D.W. Golde // J. Leukoc. Biol. 1998. - Vol. 64, N 2. - P. 135-146.

326. Heim, M.H. Expression of hepatitis C virus proteins inhibits signal transduction through the Jak-STAT pathway / M.H. Heim, D. Moradpour,

327. H.E. Blum// J. Virol. 1999. - Vol. 73, N 10. -P. 8469-8475.

328. Hepatitis C Virus Nonstructural 5B Protein Regulates Tumor Necrosis Factor Alpha Signaling through Effects on Cellular IkB Kinase / S.-H. Choi, K.-J. Park, B.-Y. Ahn et al. // Mol. Cell. Biol. 2006. - Vol. 26, N 8. - P. 30483059.

329. Hepatitis C is associated with perturbation of intrahepatic myeloid and plasmacytoid dendritic cell function / W.K. Lai, S.M. Curbishley, S. Goddard et al. // J. Hepatol. 2007. - Vol. 47, N 3. - P. 338-347.

330. Hepatitis C virus NS5A protein modulates c-Jun N-terminal kinase through interaction with tumor necrosis factor receptor-associated factor 2 / K.J. Park, S.H. Choi, D.H. Choi et al. // Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 3071130718.

331. Hepatitis C virus inhibits cell surface expression of HLA-DR, prevents dendritic cell maturation, and induces interleukin-10 production / K. Saito, M. Ait-Goughoulte, S.M. Truscott et al. // J. Virol. 2008,- Vol. 82, N 7. - P. 3320-3328.

332. Herbein, G. Tumor Necrosis Factor (TNF)-a and TNF Receptors in Viral Pathogenesis / G. Herbein, W.A. O'brien // J. Experimental Biology and Medicine. 2000. - Vol. 223. -P. 241-257.

333. Herdegen, T. Inducible and constitutive transcription factors in the mammalian nervous system: control of gene expression by Jun, Fos and Krox, and CREB/ATF proteins / T. Herdegen, J.D. Leah JD // Brain. Res. 1998. -Vol. 28, N. 3.-P. 370-490.

334. Herpes simplex virus type 1 suppresses the interferon signaling pathway by inhibiting phosphorylation of STATs and janus kinases during an early infection stage / S. Yokota, N. Yokosawa, T. Kubota et al. // Virology. -2001.-Vol. 286.-P. 119-124.

335. Hiscott, J. Hostile takeovers: viral appropriation of the NF-kappaB pathway / J. Hiscott, H. Kwon, P. Genin // J. Clin. Investig. 2001. - Vol. 107. - P. 143151.

336. HTV-1 infection induces a selective reduction in STAT5 protein expression / F. Pericle, L.A. Pinto, S. Hicks et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, N 1. -P. 28-31.

337. HLA and cytokine gene polymorphisms are independently associated with responses to hepatitis B vaccination / C. Wang, J. Tang, W. Song et al. // Hepatology. 2004. - Vol.4. - P. 978-988

338. Holtmann, M.H. Differential TNF-signaling in chronic inflammatory disorders / M.H. Holtmann, M.F. Neurath // Curr. Mol. Med. 2004. - Vol. 4, N4.-P. 439-444.

339. Horvath, C.M. Weapons of STAT destruction / C.M. Horvath // Eur. J. Biochem. 2004. - N 271. - P. 4621-4628.

340. How cells respond to interferons / G.R. Stark, I.M. Kerr, B.R. Williams et al. // Annu. Rev. Biochem. 1998. - Vol. 67. - P. 227-264.

341. Human cytomegalovirus inhibits IFN-alpha-stimulated antiviral and immunoregulatory responses by blocking multiple levels of IFN-alpha signal transduction /D.M. Miller, Y. Zhang, B.M. Rahill et al. // J. Immunol. 1999. -Vol. 162.-P. 6107-6113.

342. Human cytomegalovirus inhibits major histocompatibility complex class II expression by disruption of the Jak/Stat pathway / D.M. Miller, B.M. Rahill, J.M. Boss et al. // J Exp. Med. 1998. - Vol. 187. -P. 675-683.

343. Human immune disorder arising from mutation of the chain of the interleukin-2 receptor / N. Sharfe, H.K. Dadi, M. Shahar, C.M. Roifinan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA/ 1997/ - N. 94. - P. 3168.

344. Human T-cell leukemia virus type 1 Tax induction of NF-kappaB involves activation of the IkappaB kinase alpha (IKKalpha) and IKKbeta cellular kinases / R. Geleziunas, S. Ferrell, X. Lin et al. // Mol. Cell. Biol. 1998. -Vol. 18.-P. 5157-5165.

345. Identification and functional characterization of a second chain of the interleukin-10 receptor complex / S.V. Kotenko, C.D. Krause, L.S. Izotova et al. //EMBO J. 1997. - Vol. 16, N 19. - P. 5894-5903.

346. Identification of three new single nucleotide polymorphisms in the human tumor necrosis factor-alpha gene promoter / A.M. Uglialoro, D. Turbay, P.A. Pesavento et al. // Tissue Antigens.- 1998.-Vol. 52,- P. 359-367

347. Idriss, H.T. TNF alpha and the TNF receptor superfamily: structure-function relationship(s) / H.T. Idriss, J.H. Naismith // Microsc. Res. Tech. 2000. -Vol. 50, N3.-P. 184-195.

348. Identification of residues critical for the interferon antagonist function of Langat virus NS5 reveals a role for the RNA-dependent RNA polymerase domain / G.S. Park, K.L. Morris, R.G. Hallett et al. // J. Virol. 2007. - Vol. 81, N13.-P. 6936-6946.

349. Ihle J.N. Cytokine receptor signaling / J.N. Ihle // Nature. 1995. - Vol. 377.-P. 591-594.

350. IL-4 induces expression of TARC/CCL17 via two STAT6 binding sites / G. Wirnsberger, D. Hebenstreit, G. Posselt et al. // Eur. J. Immunol. 2006. -Vol. 36,N7.-P. 1882-1891.

351. IL-4-STAT6 signal transduction-dependent induction of the clinical phase of Sjogren's syndrome-like disease of the nonobese diabetic mouse / C.Q. Nguyen, J.H. Gao, H. Kim et al. // J. Immunol. 2007. - Vol. 179, N 1. - P. 382-390.

352. IL-10 haplotypes as possible predictors of spontaneous clearance of HCV infection / A. Mangia, R. Santoro, M. Piattelli et al. // Cytokine. 2004. -Vol. 25, N3,-P. 103-109.

353. Ilangumaran, S. Regulation of cytokine receptor signaling by SOCS1 / S. Ilangumaran, R. Rottapel // Immunol. Rev. 2003. -N 192. - P. 196-211.

354. Ilangumaran, S. Regulation of the immune system by SOCS family adaptor proteins / S. Ilangumaran, S. Ramanathan, R. Rottapel // Semin. Immunol. -2004.-N16.-P. 351-365.

355. Immunology / Eds I. Roitt et al. 5-th Ed. - London, 1998.- P. 423.

356. Immunopathogenesis of hepatitis C virus infection / A.G. Freeman, G. Marinos, R.A. French, A.R. Lloyd // Immunology and Cell Biology. -2001.-Vol. 79.-P. 515-536.

357. Impact of serum levels and gene polymorphism of cytokines on chronic hepatitis C infection / T.Y. Chen, Y.S. Hsieh, T.T. Wu et al. // Transl. Res. -2007.-Vol. 150,N2.-P. 116-121.

358. Impact of aboriginal ethnicity on HCV core-induced IL-10 synthesis: interaction with IL-10 gene polymorphisms / K.B. Aborsangaya, I. Dembinski, S. Khatkar et al. // Hepatology. 2007. - Vol. 45, N 3. - P. 623630.

359. Implications of dynamic changes among tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), membrane TNF receptor, and soluble TNF receptor levels in regard to the severity of dengue infection / L. Wang, R.F. Chen, J. W. Liu et al. // Am. J.

360. Trop. Med. Hyg. 2007. - Vol. 77, N 2. - P. 297-302.

361. In human B cells, IL-12 triggers a cascade of molecular events similar to Thl commitment / D. Durali, M.G. de Goer de Herve , J. Giron-Michel et al. // Blood. 2003. - Vol. 12, N 102. -P. 4084-4089.

362. In vitro human Th-cell responses to a recombinant hepatitis C virus antigen: failure in IL-2 production despite proliferation / D.D. Eckels, N. Tabatabail, T.H. Bian et al. // Hum. Immunol. 1999. - Vol. 60. - P. 187-199

363. Increased natural cytotoxicity receptor expression and relevant IL-10 production in NK cells from chronically infected viremic HCV patients / A. De Maria, M. Fogli, S. Mazza et al. // Eur. J. Immunol. 2007. - Vol. 37. N 2. -P. 445-455.

364. Induction of the cytokine signal regulator SOCS3/CIS3 as a therapeutic strategy for treating inflammatory arthritis / T. Shouda, T. Yoshida, T. Hanada et al. // J. Clin. Investig.-2001.-Vol. 108.-P. 1781-1788.

365. Infection of human dendritic cells by dengue virus activates and primes T cells towards ThO-like phenotype producing both Thl and Th2 cytokines / L.J. Ho, M.F. Shaio, D.M. Chang et al. // Immunol. Invest. 2004. - Vol. 33, N 4. -P. 423-437.

366. Influence of IL-10RA and IL-22 polymorphisms on outcome of hepatitis C virus infection / B.J. Hennig, A.J. Frodsham, S. Hellier et al. // Liver Int.2007. Vol. 27, N 8. - P. 1134-1143.

367. Inhibition of Interferon-Stimulated JAK-STAT Signaling by a Tick-Borne Flavivirus and Identification of NS5 as an Interferon Antagonist / S.M. Best, L. Keely, L. Morris et al. // J. Virol. 2005. - Vol. 79, N 20. - P. 1282812839.

368. Inhibition of T-cell inflammatory cytokines, hepatocyte NF-kappaB signaling, and HCV infection by standardized Silymarin / S.J. Polyak, C. Morishima, M.C. Shuhart et al. // Gastroenterology. 2007. - Vol. 132, N 5. - P. 19251936.

369. Interferon-alpha-dependent activation of Tyk2 requires phosphorylation of positive regulatory tyrosines by another kinase / M.C. Gauzzi, L. Velazquez, R. McKendry et al. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271, N 34. - P. 2049420500

370. Interleukin 10 polymorphisms as predictors of sustained response in antiviral therapy for chronic hepatitis C infection / L.J. Yee, J. Tang, A.W. Gibson et al. // Hepatology. 2001. - Vol. 3. - P. 708-712.

371. Interleukin 10 promoter polymorphisms and the outcome of hepatitis C virus infection / S. Knapp, B.J. Hennig, A.J. Frodsham et al. // Immunogenetics. 2003. - Vol. 6. - P. 362-369.

372. Interleukin-10 / K.W. Moore, A. O'Garra, R. de Waal Malefyt et al. // Annu. Rev. Immunol. 1993. -N 11. -P. 165-190.

373. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor / K.W. Moore, R. de Waal Malefyt, R.L. Coffinan, A. O'Garra // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. -P. 683-765.

374. Interleukin 12B gene polymorphism and apparent resistance to hepatitis C virus infection / D. Hegazy, P. Thurairajah, M. Metzner et al. // Clin. Exp. Immunol. 2008. - Vol. 152, N 3. -P. 538-541.

375. Interleukin-2 receptor regulates the size and content of the peripheral lymphoid compartment / D.M. Willerford, J. Chen, J. A. Ferry et al. // Immunity. 1995. - Vol. 3. - P. 521.

376. Interleukin-4-specific signal transduction events are driven by homotypic interactions of the interleukin-4 receptor alpha subunit / S.Y. Lai, J. Molden, K.D. Liu et al. //EMBO J. 1996. - Vol. 15, N. 17. - P. 4506-4514.

377. Isolation and mapping of a polymorphic CA repeat sequence at the human interleukin 6 locus / K. Tsukamoto, K. Haruta, T. Shiba, M. Emi // J. Hum. Genet. 1998. -Vol. 43. - P. 71-72.

378. Jablonska, M. Viruses and primary hepatocellular carcinoma / M. Jablonska // Cas. Lek. Cesk. 1997.-Vol. 136, N20.-P. 619-623.

379. Jak2 is essential for signaling through a variety of cytokine receptors / E. Parganas, D. Wang, D. Stravopodis et al. // Cell. 1998. - Vol. 93, N 3. -P. 385-395.

380. Janeway, C.A. How the immune system protects the host from infection / C.A. Janeway//Microbes Infect.-2001.-Vol. 3,N13.-P. 1167-1171.

381. Janeway, Ch.A. The T cell receptor as a multicomponent signallingmachine: CD4/CD8 coreceptors and CD45 in T cell activation / C.A. Janeway. Ann. Rev. Immunol. - 1992. - Vol. 10. - P. 645-674.

382. Janus kinases and signal transducers and activators of transcription: their rolesin cytokine signaling, development and immunoregulation / R.A. Ortmann, T. Cheng, R. Visconti et al. // Arthritis Res. 2000. - Vol. 2, N 1. - P. 16-32.

383. Japanese encephalitis virus infection decrease endogenous IL-10 production: correlation with microglial activation and neuronal death / V. Swarup, J. Ghosh, R. Duseja et al. // Neurosci. Lett. 2007. - Vol. 420, N 2. - P. 144149.

384. Katze, M.G. Viruses and interferon: a fight for supremacy / M.G. Katze, Y. He, M. Gale // Nat. Rev. Immunol. 2002. - Vol. 2. - P. 675-687.

385. Kawahara, A. Evidence for a critical role for the cytoplasmic region of the interleukin 2 (IL-2) receptor gamma chain in IL-2, IL-4, and IL-7 signalling / A. Kawahara, Y. Minami, T. Taniguchi // Mol. Cell. Biol. 1994. - Vol. 14, N8.-P. 5433-5440.

386. Kim, S.H. STAT4/6-dependent differential regulation of chemokine receptors / S.H. Kim, K.V. Gunst, N. Sarvetnick // Clin. Immunol. 2006. - Vol. 118, N2-3.-P. 250-257.

387. Krappmann, D. Regulation of NF-kappaB activity by IkappaB alpha and IkappaB beta stability / D. Krappmann, C. Scheidereit // Immunobiology. -1997. Vol. 198, N 1-3. - P. 3-13.

388. Kurane, I. Dengue hemorrhagic fever with special emphasis on immunopathogenesis / I. Kurane // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. -2007. Vol. 30, N 5-6. - P. 329-340.

389. Lau, J.F. Mechanisms of type I interferon cell signaling and STAT-mediated transcriptional responses / J.F. Lau, C.M. Horvath // Mt. Sinai J. Med. 2002. -Vol. 69.-P. 156-168

390. Lenardo, M.J. Interleukin-2 programs mouse alpha beta T lymphocytes for apoptosis /M.J. Lenardo //Nature. 1991. - Vol. 353. - P. 858

391. Leonard, W.J. Cytokine receptor signaling pathways / W.J. Leonard, J.X. Lin // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - Vol. 105, N 5. - P. 877-888.

392. Leung, D.T.M. Regulation of lymphoid homeostasis by IL-2 receptor signals in vivo / D.T. Leung, S. Morefield, D.M. Willerford // J. Immunol. 2000.

393. Vol. 164, N7.-P. 3527-3534.

394. Levine, S.J. Mechanisms of soluble cytokine receptor generation / S.J. Levine // J. Immunol. 2004. - Vol. 173, N 9. - P. 5343-5348.

395. Levy, D.E. Stats: transcriptional control and biological impact / D.E. Levy, J.E. Darnell // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2002. - Vol. 3. - P. 651 -662.

396. Levy, D.E. The virus battles: IFN induction of the antiviral state and mechanisms of viral evasion / D.E. Levy, A. García-Sastre // Cytokine Growth Factor Rev. 2001. - Vol. 12. - P. 143-156.

397. Lin, J.X. The role of Stat5a and Stat5b in signaling by IL-2 family cytokines / J.X. Lin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - N 9. - P. 5336-5341.

398. Long-term follow-up study of serum IgM antibody to hepatitis C virus (HCV), HCV replication, and liver disease outcome in chronic hepatitis C / J.A. Quiroga, M. Herrero, I. Castillo et al. // J Infect Dis. 1994. - Vol. 170, N 3. -P. 669-673.

399. Loss of tolerance and autoimmunity affecting multiple organs in STAT5A/5B-deficient mice / J.W. Snow, N. Abraham, M.C. Ma et al. // J. Immunol. 2003. -N. 171. -P. 5042.

400. Loss of type I IFN receptors and impaired IFN responsiveness during terminal maturation of monocyte-derived human dendritic cells / M.C. Gauzzi, I. Canini, P. Eid et al. // J. Immunol. 2002. - N 169. - P. 3038-3045.

401. Ma, A. Not so interleukin 2-like after all // A. Ma, D.L. Boone, J.P. Lodolce // J. Exp. Med. 2000. - Vol. 191. - P. 753

402. MacEwan, D.J. TNF ligands and receptors-a matter of life and death / D.J. MacEwan // Br. J. Pharmacol. 2002. - Vol. 135, N 4. - P. 855-875.

403. MacEwan, D.J. TNF receptor subtype signalling: differences and cellular consequences / D.J. MacEwan // Cell Signal. 2002. - N 6. - P. 477-492.

404. Madreñas, J. A SLAT in the Th2 signalosome / J. Madreñas // Immunity. -2003. Vol. 18, N. 4. - P. 459-461.

405. Maliszewski, C.R. Soluble receptors for IL-1 and IL-4: biological activity and therapeutic potential / C.R. Maliszewski, W.C. Fanslow // Trends Biotechnol.- 1990. Vol. 8, N 11. - P. 324-329.

406. May, M.J. Rel/NF-kappaB and IkappaB proteins: an overview / M.J. May, S. Ghosh//Cancer Biol. 1997. -Vol. 8.-P. 63-73.

407. Mechanisms of proinflammatory cytokine-induced biphasic NF-kappaB activation / C. Schmidt, B. Peng, Z. Li et al. // Mol. Cell. 2003. - Vol. 12, N5.-P. 1287-1300.

408. Mertani, H.C. Cytoplasmic and nuclear cytokine receptor complexes / H.C. Mertani, G. Morel, P.E. Lobie // Vitam. Horm. 1999. - Vol. 57. -P. 79-121.

409. Molecular and biological characterization of a ligand for CD27 defines a new family of cytokines with homology to tumor necrosis factor / R.G. Goodwin, M.R. Alderson, C.A. Smith et al. // Cell. 1993. - Vol. 73, N 3. - P. 447-456

410. Molecular mechanisms for suppression of interferon signal transduction pathways caused by viral infections / F. Nobuhiro, Y. Shin-Ichi, Y. Noriko, O. Tamaki // Uirusu. 2004. - Vol. 2. - P. 169-178.

411. Molecular-cloning and expression of a receptor for human tumor-necrosis-factor/ T. J. Schall, M. Lewis, K. J. Koller et al. // Cell. 1990. - Vol. 61. -P. 361-370.

412. Monocyte-derived dendritic cells from chronic HCV patients are not infected but show an immature phenotype and aberrant cytokine profile / H.C. Gelderblom, L.E. Nijhuis, E.C. de Jong et al. // Liver Int. 2007. - Vol. 27, N 7. P. 944-953.

413. Mosmann, T.R. The expanding universe of T cell subsets: Thl, Th2 and more / T.R. Mosmann, S. Sad // Immunol. Today. 1996. - Vol. 17. - P. 138 - 146.

414. Mout, R. Repeat polymorphisms in the interleukin-4 gene (IL4) / R. Mout, R. Willemze, J.E. Landegent//Nucleic Acids Res. 1991. -Vol. 19. - P. 3763.

415. Nagata, S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell. 1997. - Vol. 88. -P. 355-365.

416. Nebert D.W. Polymorphisms in drug-metabolizing enzymes: what is their clinical relevance and why do they exist? / D.W. Nebert // Am. J. Hum. Genet. 1997. - Vol. 60, N 2. - P. 265-271.

417. Neel, B.G. Protein tyrosine phosphatases in signal transduction / B.G. Neel, N.K. Tonks // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. - Vol. 9. - P. 193-204

418. Nelson, B.H. Biology of the interleukin-2 receptor // B.H. Nelson, D.M. Willerford // Adv. Immunol. 1998. -N70. -P. 1-81.

419. Nelson, B.H. IL-2, regulatory T cells, and tolerance / B.H. Nelson // J. Immunol. 2004. - Vol. 172, N 7. - P. 3983-3988.

420. New views on immunopathology of viral hepatitis B and C / I. Kraslova, L. Vitek, L. Muchova, N.V. Naoumov // Cas. Lek. Cesk. 2003. - Vol. 142, N10.-P. 590-594.

421. New views on immunopathology of viral hepatitis B and C / I. Kraslova, L. Vitek, L. Muchova, N.V. Naoumov // Cas. Lek. Cesk. 2003. - Vol. 142, N 10.-P. 590-594.

422. NFATI enhances HTV-1 gene expression in primary human CD4 T cells / R.Q. Cron, S.R. Bartz, A. Clausell et al. // Clin. Immunol. 2000. - Vol. 94, N 3.-P. 179-191.

423. Nicola, N.A. Guidebook to Cytokines and their Receptors / N.A. Nicola. -Oxford University Press, 1994. 284 pp.

424. Nishikomori, R. T helper type 2 cell differentiation occurs in the presence of interleukin 12 receptor beta2 chain expression and signaling / R. Nishikomori, R.O. Ehrhardt, W. Strober // J. Exp. Med. 2000. - N 5. - P. 847-858.

425. Nonstructural 5A protein of hepatitis C virus modulates tumor necrosis factora-stimulated nuclear factor kB activation / K.J. Park, S.H. Choi, S.Y. Lee et al. // J. Biol. Chem. 2002. -N 277. - P. 13122-13128.

426. Novel variants of the IL-10 receptor 1 affect inhibition of monocyte TNF-alpha production / C. Gasche, P. Grundtner, P. Zwirn et al. // J. Immunol. -2003. Vol. 170, N 11.-P. 5578-5582.

427. Okoth, F.A. Viral hepatitis / F.A. Okoth // E. A. Med. J. 1996. - Vol. 173. -P. 308-312.

428. Oldstone M. B. Viralpersistence / M. B. Oldstone // Cell. 1989. - Vol. 56, N4.-P. 517-520.

429. Oilier, W.E. Cytokine genes and disease susceptibility / W.E. Oilier // Cytokine. -2004. Vol. 4-5. - P. 174-178.

430. On the ontogeny and physiology of regulatory T cells / O. Annacker, R. Pimenta-Araujo, O. Burlen-Defranoux, A. Bandeira / Immunol. Rev. -2001. Vol. 182.-P. 5-17.

431. Paludan, S.R. Interleukin-4 and interferon-gamma: the quintessence of a mutual antagonistic relationship / S.R. Paludan // Scand. J. Immunol. 1998. -Vol. 48, N5.-P. 459-468.

432. Pathways of T cell activation and terminal differentiation in chronic inflammation / P. Isomaki, J.M. Clark, M. Panesar, A.P. Cope // Curr. Drug. Targets Inflamm. Allergy. 2005. - Vol. 4, N 3. - P. 287-293.

433. Paul, W.E. Interleukin-4: a prototypic immunoregulatory lymphokine / Blood. 1991. - Vol. 77, N 9. - P. 1859-1870.

434. Plevy, S., Meeting summary: Signal transduction pathways in immune and inflammatory cells / S. Plevy, L. Mayer // Inflamm. Bowel. Dis. 2003. -Vol. 9, N. l.-P. 28-33.

435. Polymorphism of the interleukin-10 gene is associated with susceptibility to

436. Epstein-Barr virus infection / M. Helminen, N. Lahdenpohja, M. Hurme // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180. -P. 496-499.

437. Polymorphisms in interferon-induced genes and the outcome of hepatitis C virus infection: roles of MxA, OAS-1 and PKR / S. Knapp, L.J. Yee,

438. A.J. Frodsham et al. // Genes Immun. 2003. - Vol. 4, N 6. - P. 411-419.

439. Poorly-immunogenic tumor is capable of inducing proliferation of CD4 (+) CD25 (+) regulatory T-lymphocytes in vitro / Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi. 2005. - Vol. 34, N 9. - P. 583-587.

440. Prevalence of extrahepatic manifestations of HCV infection / C. Mazzaro, S. Baracetti, G.S. Camiello et al. //Hepatology. -2001. Vol. 4. - P. 18-22.

441. Protein kinase Calpha (PKCalpha) acts upstream of PKCtheta to activate IkappaB kinase and NF-kappaB in T lymphocytes / S.A. Trushin, K.N. Pennington, E.M. Carmona et al. // Mol. Cell. Biol. 2003. - Vol. 23, N. 19.-P. 7068-7081.

442. Ramadori, G. Cytokines and the hepatic acute-phase response / G. Ramadori,

443. B. Christ // Semin. Liver Dis. 1999. - Vol. 19, N 2. - P. 141-155.

444. Rane, S.G. JAK3: a novel JAK kinase associated with terminal differentiation of hematopoietic cells / S.G. Rane, E.P. Reddy // Oncogene. 1994. - Vol. 9, N8.-P. 2415-2423.

445. Ras/Erk pathway positively regulates Jakl/STAT6 activity and IL-4 gene expression in Jurkat T cells / E. Y. So, J. Oh, J.Y. Jang et al. // Mol. Immunol. -2007. Vol. 44, N 13.-P. 3416-3426.

446. Ray, R.B. Hepatitis C virus core protein promotes immortalization of primary human hepatocytes / R.B. Ray, K. Meyer, R. Ray // Virologi. 2000. - Vol. 271.-P. 197-204.

447. Relationship of peripheral blood CD4-positive T cells to carcinogenesis in patients with HCV-related chronic hepatitis / T. Matsui, H. Nagai, Y. Sumino, K. Miki // Cancer. Chemother. Pharmacol. 2007. - Oct 12.

448. Receptors for interleukin (IL)-10 and IL-6-type cytokines use similar signaling mechanisms for inducing transcription through IL-6 responseelements / C.F. Lai, J. Ripperger, K.K. Morella et al. // J. Biol Chem. 1996. -Vol. 271, N24.-P. 13968-13975.

449. Reduced production of interleukin 12 by interferon y primed alveolar macrophages from atopic asthmatic subjects / M.J. Plummeridge, L. Armstrong, M.A. Birchall, A.B. Millar // Thorax. 2000. - Vol. 55. -P. 842-847.

450. Renz, H. Soluble interleukin-4 receptor (sIL-4R) in allergic diseases / H. Renz // Inflamm. Res. 1999. - Vol. 48, N 8. - P. 425-431.

451. Resistance to alpha/beta interferon is a determinant of West Nile virus replication fitness and virulence / B.C. Keller, B.L. Fredericksen, M.A. Samuel et al. // J. Virol. 2006. - Vol. 80, N 19. - P. 9424-9434.

452. Revisiting the liver in human yellow fever: virus-induced apoptosis in hepatocytes associated with TGF-beta, TNF-alpha / J.A. Quaresma, V.L. Barros, C. Pagliari et al. // Virology. 2006. - N 1. - P. 22-30.

453. Richter, A. Instruction for cytokine expression in T helper lymphocytes in relation to proliferation and cell cycle progression / A. Richter, M. Lohning, A. Radbruch // J. Exp. Med. 1999. - Vol. 190, N 10. - P. 1439-1450.

454. Role of IL-10 for induction of anemia during inflammation / H. Tilg, H. Ulmer, A. Käser, G. Weiss // J. Immunol. 2002. - N 4. - P. 2204-2209.

455. Rose-John, S. Soluble receptors for cytokines and growth factors: generation and biological function / S. Rose-John, P. Heinrich // Biochem J. 1994. -Vol. 300, Pt 2.-P. 281-290.

456. Rosen, H.R. Hepatitis C in the liver transplant recipient: current understanding and treatment / H.R. Rosen // Microbes Infect. 2002. - Vol. 4, N 12. - P. 1253-1258.

457. Samuel, C.E. Antiviral actions of interferon. Interferon-regulated cellular proteins and their surprisingly selective antiviral activities / C.E. Samuel. -Virology. -1991.-Vol. 183.-P. 1-11.

458. Samuel, C.E. Antiviral Actions of Interferons / C.E. Samuel. Clinical Microbiology Reviews. - 2001. - Vol. 14. - №4. - P. 778-809.

459. Samuel, C.E. Mechanisms of the Antiviral Actions of IFN / C.E. Samuel // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1988. - Vol. 35. - P. 27-72.

460. Sendai virus blocks alpha interferon signaling to signal transducers and activators of transcription / T. Komatsu, K. Takeuchi, J. Yokoo et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 2477-2480.

461. Serum levels of soluble immune factors and pathogenesis of chronic hepatitis C, and their relation to therapeutic response to interferon-alpha / J.A. Quiroga, J. Martin, M. Pardo, V. Carreno // Dig. Dis. Sci. 1994. - Vol.39, N11. -P. 2485-2496.

462. Serum levels of soluble tumor necrosis factor receptors and effects of interferon therapy in patients with chronic hepatitis C virus infection / Y. Itoh, T. Okanoue, N. Ohnishi et al. // Am. J. Gastroenterol. 1999. - N 5. - P. 13321340.

463. Serum levels of soluble tumor necrosis factor receptors and effects of interferon therapy in patients with chronic hepatitis C virus infection. / Y. Itoh, T. Okanoue, N. Ohnishi et al. // Am. J. Gastroenterol. 1999. - Vol. 94, N5.-P. 1332-1340.

464. Shahabuddin, S., Expression and release of IL-2 receptor and production of IL-2 by activated T lymphocyte subsets / S. Shahabuddin // J. Clin. Lab. Immunol. 1991. - Vol. 36, N 1. -P. 27-32.

465. Sharara, A.I. Hepatitis C / A.I. Sharara, C.M. Hunt, J.D. Hamilton // Ann. Intern. Med. 1996. - Vol. 125, N 8. - P. 658-668.

466. Shuai, K. Regulation of JAK-STAT signalling in the immune system / K. Shuai, B. Liu // Nat. Rev. Immunol. 2003. - N 3. - P. 900-911.

467. Signaling by type I and II cytokine receptors: ten years after / M. Gadina, D. Hilton, J.A. Johnston et al. // Curr. Opin. Immunol. 2001. - Vol. 13, N 3.-P. 363-373.

468. Simpson, K.J. Cytokines and the liver / K.J. Simpson // J. Hepatology. — 1997. -Vol. 6.-P. 1120-1132.

469. Smith, R.A. The active form of tumor necrosis factor is a trimer / R.A. Smith, C.J. Baglioni // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262, N 15. - P. 6951-6954.

470. SOCS2 can enhance interleukin-2 (IL-2) and IL-3 signaling by accelerating SOCS3 degradation / G.M. Tannahill, J. Elliott, A.C. Barry et al. // Mol. Cell Biol. 2005. - Vol. 25, N 20. - P. 9115-9126.

471. Soluble tumor necrosis factor receptors in chronic hepatitis C: a correlation with histological fibrosis and activity / H. Zylberberg, A. Rimaniol, S. Pol et al. //J. Hepatol. 1999. -N2. - P. 185-191.

472. Stat3 recruitment by two distinct ligand-induced, tyrosine-phosphorylated docking sites in the interleukin-10 receptor intracellular domain / R.M. Weber-Nordt, J.K. Riley, A.C. Greenlund et al // J. Biol. Chem. -1996. Vol. 271, N44. -P. 27954-27961.

473. Stat6 regulation of in vivo IL-4 responses / F.D. Finkelman, S.C. Morris, T. Orekhova et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 164, N 5. - P. 2303-2310.

474. Stephens, L.A. CD25 is a marker for CD4+ thymocytes that prevent autoimmune diabetes in rats, but peripheral T cells with this function are found in both CD25+ and CD25" subpopulations / L.A. Stephens, D. Mason // J. Immunol.-2000. -N165.-P. 3105.

475. Suppressor of cytokine signaling 3 regulates proliferation and activation of T-helper cells / C.-R. Yu, R.M. Mahdi, S. Ebong et al. // J. Biol. Chem. 2003. -Vol. 278, N32. - P. 29752-29759.

476. Suppressors of cytokine signaling proteins are differentially expressed in Thl and Th2 cells: implications for Th cell lineage commitment and maintenance / C.E. Egwuagu, C.R. Yu, M. Zhang et al. // J. Immunol. 2002. - Vol. 168, N 7.-P. 3181-3187.

477. Suppressor of cytokine signaling 3 (SOCS3) expression and hepatitis C virus-related chronic hepatitis: Insulin resistance and response to antiviral therapy /

478. M. Pérsico, M. Capasso, E. Pérsico et al. // Hepatology. 2007. - Vol. 46, N 4.-P. 1009-1015.

479. Surh, C. D. Homeostatic T cell proliferation: how far can T cells be activated to self-ligands? / C.D. Surh, J. Sprent // J. Exp. Med. 2002. - N 192. - P. 9-14.

480. Sutterwala, F.S. The taming of EL-12: suppressing the production of proinflammatory cytokines / F.S. Sutterwala, D.M. Mosser // J. Leukoc. Biol. 1999. - Vol. 65, N5. - P. 543-551.

481. Szabo, S.J. Genes that regulate interleukin-4 expression in T cells / S.J. Szabo, L.H. Glimcher, I.C. Ho // Curr. Opin. Immunol. 1997. - Vol. 9, N 6. - P. 776-81.

482. T cell-intrinsic requirement for NF-kappa B induction in postdifferentiation IFN-gamma production and clonal expansion in a Thl response / R.A. Corn, M.A. Aronica, F. Zhang et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 171, N 4. -P. 1816-1824.

483. T cells from elderly persons respond to neoantigenic stimulation with an unimpaired IL-2 production and an enhanced differentiation into effector cells /1. Gomez, F. Marx, E.A. Gould, B. Grubeck-Loebenstein // Exp. Gerontol. -2004.-Vol. 4.-P. 597-605

484. Takizawa T. Cytokine mediators in acute inflammation and chronic course of viral hepatitis / T. Takizawa // Nippon Inzo Pakk. 1993. - Vol. 10. -P. 1995-1999.

485. Tato, C.M. Host-pathogen interactions: subversion and utilization of the NF-kappa B pathway during infection / C.M. Tato, C.A. Hunter // Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 7. P. 3311-3317.

486. The hepatitis C virus (HCV) induces a long-term increase in interleukin-10 production by human CD4+ T cells (H9) / O. Delpuech, D.B. Buffello-Le Guillou, E. Rubinstein et al. // Eur. Cytokine Netw. 2001. - Vol. 12, N 1. -P. 69-77.

487. The human papilloma virus (HPV)-18 E6 oncoprotein physically associates with Tyk2 and impairs Jak-STAT activation by interferon-alpha / S. Li, S. Labrecque, M.C. Gauzzi et al. // Oncogene. 1999. - Vol. 18. - P. 57275737.

488. The Janus kinases (Jaks) / K. Yamaoka, P. Saharinen, M. Pesu et al. // Genome Biol. 2004. Vol. 5, N 12. - P. 253.

489. The polyoma virus T antigen interferes with interferon-inducible gene expression / X. Weihua, S. Ramanujam, D.J. Lindner et al. //Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1998. -N95. -P. 1085-1090.

490. The IL-4/IL-13/Stat6 signalling pathway promotes luminal mammary epithelial cell development / W.T. Khaled, E.K. Read, S.E. Nicholson et al. // Development. 2007. - Vol. 134, N 15. - P. 2739-2750.

491. The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-.J3 activation / H. Hsu, J. Xiong, D.V. Goeddel et al. // Cell. 1995. - N 81. - P. 495-504.

492. Tilg, H. Cytokines and liver diseases / H. Tilg, J. Can / Gastroenterol. 2001. -Vol. 15, N10.-P. 661-668.

493. TNF receptors TR60 and TR80 can mediate apoptosis via induction of distinct signal pathways / M. Grell, G. Zimmermann, D. Hulser et al. // J. Immunol. -1994. Vol. 153. -P. 1963-1972.

494. Tracey, K.J. Tumor necrosis factor: a pleiotropic cytokine and therapeutic target / K.J. Tracey, A. Cerami // Annu. Rev. Med. 1994. - Vol. 45. - P. 491.

495. Treatment of Crohn's disease with recombinant human interleukin 10 induces the proinflammatory cytokine interferon gamma / H. Tilg, C van Montfrans, A van denEnde et al. // Gut.- 2002. Vol. 50, N 2. - P. 191-195.

496. Trede, N.S. Activator protein-1 (AP-1) is stimulated by microbial superantigens in human monocytic cells / N.S. Trede, T. Chatila, R.S. Geha // Eur. J. Immunol. 1993. - Vol. 23, N 9. - P. 2129-2135.

497. Tripp, C.S. Secondary response to Listeria infection requires IFN-gamma but is partially independent of IL-12 / C.S. Tripp, O. Kanagawa, E.R. Unanue // J. Immunol. 1995. - Vol. 155, N 7. - P. 3427-3432.

498. Tumor necrosis factor (TNF)alpha and its soluble receptor (sTNFR) p75 during acute human parvovirus B19 infection in children / J. Barash, D. Dushnitzki, Y. Barak et al. // Immunol. Lett. 2003. - N 2. - P 109-112.

499. Tumor necrosis factor alpha promoter polymorphism at position -238 is associated with chronic active hepatitis C infection / T. Hohler, A. Kruger, G. Gerken et al. // J. Med. Virol. 1998. - Vol. 54, N. 3. - P. 173-177.

500. Tumor necrosis factor receptors—structure and function / J. Rothe, G. Gehr, H. Loetscher, W. Lesslauer // Immunol. Res. 1992. - Vol. 11, N 2. - P. 81-90.

501. Tumour necrosis factor alpha gene polymorphisms in rheumatoid arthritis: association with susceptibility to, or severity of, disease? / B.M. Brinkman, T.W. Huizinga, S.S. Kurban et al. // Br. J. Rheumatol. 1997. - Vol. 36, N 5. -P. 516-521.

502. Two distinct domains within the N-terminal region of Janus kinase 1 interact with cytokine receptors. / A. Usacheva, S. Kotenko, M.M. Witte, O.R. Colamonici // J. Immunol. 2002. - Vol. 169, N 3. - P. 1302-1308.

503. Two-site interaction of nuclear factor of activated T cells with activated calcineurin / F.J. Garcia-Cozar, H. Okamura, J.F. Aramburu et al. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273, N 37. - P. 23877-23883.

504. Ulcerative colitis-like disease in mice with a disrupted interleukin-2 gene / B.

505. Sadlack, H. Merz, H. Schorle et al. // Cell. 1993. - N 75. - P. 253.

506. Van Deventer, S.J.H Tumor necrosis factor and Crohn's disease / S.J.H Van Deventer // Gut. 1997. - Vol. 40. - P. 443-448.

507. Villinger, F. Cytokines as clinical adjuvants: how far are we? / F. Villinger // Expert Rev. Vaccines. 2003. - Vol. 2, N 2. - P. 317-26.

508. Viral IL-10 and soluble TNF receptor act synergistically to inhibit collagen-induced arthritis following adenovirus-mediated gene transfer / K. Kim, S. Watanabe, Y. Ma et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 1, N 3. - P. 1576-1581.

509. Viral inhibition of inflammation: cowpox virus encodes an inhibitor of the interleukin-1 beta converting enzyme / C.A. Ray, R.A. Black, S.R. Kronheim et al. // Cell. 1992. - Vol. 69, N 4. - P. 597-604.

510. Wajaint, H. The Jak-STAT pathway: cytokine signalling from the receptor to the nucleus /H. Wajaint // J. Recept. Signal Transduct. Res. 1999. - Vol. 19, N1-4.-P. 75-120.

511. Warzocha, K. Genetic Polymorphisms in the Tumor Necrosis Factor locus influense Non-Hodgkins Lymphoma outcome / K. Warzocha, P. Ribeiro, J. Bienvenu et al. // Blood. 1998. - Vol. 91, N 10. - P. 3574-3581.

512. Werme, K. Tick-borne encephalitis virus NS5 associates with membrane protein scribble and impairs interferon-stimulated JAK-STAT signaling / K. Werme, M. Wigerius, M. Johansson // Cell Microbiol. 2008. - Vol. 10, N3. -P. 696-712.

513. Whiteside, S.T. IkappaB proteins: structure, function and regulation / S.T. Whiteside, A. Israel // Cancer Biol. 1997. - Vol. 8. - P. 75-82.

514. Wisdom R. AP-1: one switch for many signals / R. Wisdom // Exp. Cell Res. 1999. - Vol. 253, N 1. - P. 180-185.

515. Wrenshall, L.E. Regulation of T cell homeostasis by heparan sulfate-bound DL-2 / L.E. Wrenshall., J.L. Piatt / J. Immunol. 1999. - N 163. - P. 3793.

516. Yang-Snyder, J.A. Spontaneous expression of interleukin-2 in vivo in specific tissues of young mice / J.A. Yang-Snyder, E.V. Rothenberg // Dev. Immunol. -1998.-N5.-P. 223.