Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Роль трасформирующего ростового фактора (TGF)b в прогрессии гепатокарцином
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.14
Оглавление диссертации Макарова, Мария Викторовна :: 2009 :: Москва
Список сокращений
Введение
Цели и задачи исследования
Научная новизна и практическая ценность работы
1. Обзор литературы
1.1. Канцерогенез
1.2. Трансформирующий фактор роста (
1.2.1. Процессинг и активация TGFp
1.2.2. Рецепторы и адаптерные молекулы к TGFP
1.2.3. Smad - зависимый контроль транскрипции
1.2.3.1. Smad белки
1.2.3.2. Взаимодействие белков Smad с ДНК
1.2.4. Альтернативные сигнальные пути
1.3. TGFp как опухолевый супрессор
1.3.1. Мутации генов, кодирующих компоненты TGFp сигнального пути в опухолях человека
1.3.2. Модельные системы канцерогенеза, в которых показана супрессорная роль TGFP
1.3.3. Механизмы противоопухолевого действия TGFp
1.3.3.1. Арест клеточного цикла
1.3.3.2. Индукция апоптоза
1.4. Про-опухолевые эффекты TGFP
1.4.1. Гиперэкспрессия TGFP в опухолях человека
1.4.2. Механизмы про-опухолевого действия TGFP
1.4.2.1. Ускорение пролиферации
1.4.2.2. TGFp зависимое уклонение от программы апоптоза
1.4.2.3. TGFP индуцирует эпителиально-мезенхимальный переход
1.4.2.4. Влияние TGFP на способность опухолевых клеток к инвазии
1.4.2.5. Действие на микроокружение опухоли
1.4.2.6. Регуляция ангиогенеза в опухолях
1.4.2.7. Модуляция иммунного ответа
1.5. Гепатоканцерогенез
1.5.1. Ткане-специфические транскрипционные факторы
1.5.2.Нарушение функции ГЯФ при гепатоканцерогенезе
1.5.3.Модель одноступенчатой прогрессии ГК мыши
2. Материалы и методы
2.1. Список использованных растворов и сред
2.2. Клеточные линии
2.2.1. Эукариотические клеточные линии
2.2.2. Бактериальные штаммы и плазмидные векторы
2.3. Трансформация клеток Е. Coli
2.4.1. Выделение препаративных количеств плазмидной ДНК
2.4.2. Выделение суммарной клеточной РНК
2.5. Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозных гелях
2.6. Метод "обратная транскрипция — полимеразная цепная реакция" (ОТ- ПЦР)
2.6.1. Подбор и синтез олигонуклеотидных праймеров
2.6.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с обратной транскрипцией (ОТ)
2.7. Иммунофлуоресцентное окрашивание препаратов 59'
2.8. Вестерн-блот гибридизация
2.9. Трансфекция и инфекция клеток линии HepG
2.10. Трансфекция и инфекция клеток линии НЗЗ
2.11. Определение количества TGF(32 в культуральной среде
2.11. Анализ активности репортерного гена люциферазы
2.12. Измерение скорости роста клеточных линий HepG2 и НЗЗ
2.11.1. Определение включения модифицированного нуклеотида в ДНК 64'
2.11.2. Измерение кинетики роста клеточных линий in vitro
2.11.3. Клоногенный тест
2.12.0пределение способности к инвазии и подвижности клеток
3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Изучение TGFP-индуцируемых эффектов в клеточной линии HepG
3.1.1. Анализ экспрессии генов, ассоциированных с прогрессией ГК, и генов, ответственных за поддержание дифференцированного статуса гепатоцитов, при обработке клеточной линии HepG2 цитокинамиTGFP 1 и TGF
3.1.2. Изменение экспрессии изоформ HNF4aPl и HNF4aP2 при ингибировании передачи сигнала от рецептора TGFJ
3.1.3. Активация Smad сигнального каскада в клеточной линии HepG2 под действием TGFp
3.1.4. Изменение экспрессии изоформ HNF4aPl и HNF4aP2 при ингибировании МЕК сигнального пути
3.1.5. Анализ экспрессии генов в клеточной линии HepG2, гиперэкспрессирующей TGFp
3.1.6. Изменение пролиферативных характеристик клеточной линии. HepG2 при гиперэкспрессии TGFp
3.1.7. Анализ активности Smad-зависимого сигнального каскада при гиперэкспрессии TGFp2 в культуре гепатомы HepG
3.2. Изучение эффектов, вызванных подавлением продукции.TGFP2 в клеточной линии НЗЗ
3.2.1. Подавление продукции TGFP2 в клеточной линии НЗЗ
3.2.2. Анализ экспрессии генов в клеточной линии НЗЗ, трансфицированной миРНК к TGFP
3.2.3. Изменение скорости пролиферации культуры клеток НЗЗ при подавлении продукции TGFP
3.2.4. Исследование подвижности и инвазии клеток НЗЗ при подавлении продукции TGFP
3.2.5. Анализ функциональной активности Smad белков в культуре клеток НЗЗ
Введение диссертации по теме "Онкология", Макарова, Мария Викторовна, автореферат
Гепатоцеллюлярная карцинома (ГК) является пятой по распространенности опухолью и третьей по уровню смертности в мире [Hamilton and Aaltonen, 2000]. В результате действия основных факторов риска; таких как вирусы гепатита В и С, алкоголь, химические канцерогены, возникают хронические заболевания печени, которые могут привести к образованию ГК. Дальнейшая прогрессия ГК выражается в снижении -уровня дифференцировки, которому может способствовать утрата эпителиальной морфологии и изменения локального микроокружения. Процесс дедифференцировки сопровождается нарушением функций исходной ткани и изменением экспрессии ткане-специфических генов. Дальнейшая-малигнизация заключается в том, что клетки ГК приобретают способность к инвазии и метастазированию.
Эксперименты, проведенные в лаборатории механизмов прогрессии эпителиальных опухолей, показали, что важным этапом дедифференцировки и прогрессии ГК является нарушение функционирования регуляторной сети гепатоцитарных ядерных факторов (ГЯФ). Ключевым событием такой, дедифференцировки является снижение экспрессии, гена HNF4a, одного из ключевых ГЯФ, реэкспрессия которого вызывает реверсию злокачественного фенотипа. Также было показано, что параллельно с этими изменениями! происходит активация TGFJ3 (трансформирующего фактора роста Р) сигнального пути за счет гиперэкспрессии гена TGFJ32 [Лазаревич, 2003]; На основании этих данных нами было высказано предположение о возможной роли TGF02 в прогрессии ГК и в регуляции экспрессии гена HNF4a.
Цитокины семейства TGFP участвуют в контроле пролиферации, апоптоза, клеточной морфологии и дифференцировки. TGFP взаимодействует с мембранным-рецептором семейства серин/треониновых киназ II типа (TpRII), который связывает и фосфорилирует рецептор I типа (TpRI) [Massague, 1998]. Такой комплекс способен активировать за счет фосфорилирования внутриклеточные субстраты. Наиболее изученными внутриклеточными медиаторами TGFP сигнального пути являются белки Smad2, Smad3 и Smad4. Эти белки способны самостоятельно, либо взаимодействуя с транскрипционными факторами, активировать или подавлять экспрессию различных генов. Цитокины семейства TGFP синтезируются в виде гомодимерных предшественников, в результате процессинга во внеклеточную среду секретируется активная форма TGFp, связанная с отщепившимся полипептидом, который называется LAP. Однако было показано, что в опухолях различного происхождения TGFP секретируется во внеклеточный матрикс (ВКМ) в непроцессированной форме.
У млекопитающих выявлены три белка семейства TGF0 (pi, Р2 и РЗ), которые высоко гомологичны по аминокислотной последовательности. Однако при инактивации генов TGFJ5 наблюдаются непохожие эффекты, что, по-видимому, свидетельствует о функциональном различии изоформ TGFP [Massague, 1998].
В нормальных взрослых гепатоцитах TGFpi не экспрессируется. При повышенной экспрессии (этого фактора купферовскими клетками печени-в гепатоцитах ингибируется синтез ДНК и индуцируется апоптоз [Bissell et al., 2001]. Однако на поздних стадиях гепатоканцерогенеза TGFpi гиперэкспрессирован. Более того, было показано, что TGFpi способен индуцировать эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) — процесс, при котором происходит утрата эпителиальной морфологии и приобретение клеткойсвойств, способствующих инвазии и метастазированию. Большинство исследований, проводимых на гепатоцитах, посвящено изучению роли TGFpi, однако, наши результаты свидетельствуют о том, что при прогрессии гепатокарцином может усиливаться транскрипция, гена TGFP2. Роль такой активации в гепатоканцерогенезе в настоящее время не изучена.
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Основной целью настоящей работы являлось* изучение ролиТСгрр2*в регуляции экспрессии генов, кодирующих ГЯФ и маркеры <дифференцировки, а также исследование влияния < TGFP2 на процессы, ассоциированные с прогрессией ГК. Для достижения поставленной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:
1. Проанализировать изменения экспрессии гепатоспецифических генов и генов, продукты которых ассоциированы с прогрессией! ГК, в культуре дифференцированной1, гепатомы человека HepG2 при обработке цитокинами/ TGFpi и TGFp2.
2. Провести трансфекцию линии гепатомы HepG2 лентивирусной конструкцией, экспрессирующей TGFp2. Исследовать влияние гиперэкспрессии гена TGFP2 на кинетику пролиферации, клоногенную активность, уровни экспрессии гепатоспецифических генов; генов, ассоциированных с ЭМП и TGFp2 - респонсивных мишеней.
3. Исследовать вклад латентной и активной формы TGFP2 в регуляцию процессов, связанных с активацией TGFp сигнального пути. Провести трансфекцию лентивирусной конструкцией, экспрессирующей мутантную форму TGFP2, не подвергающуюся; протеолитической деградации, и., сравнить, эффекты/ от аналогичной трансфекции конструкцией с нормальным вариантом TGFP2.
4. Разработать систему для подавления синтеза TGFP2 в культуре H33J полученной из низко дифференцированной быстрорастущей FK мыши. Изучить изменения в кинетике пролиферации, способности к инвазии» и профиля экспрессии; гепатоспецифических генов в клетках НЗЗ с подавленной продукцией TGFp2.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ
Исследования, проводимые на различных* модельных; системах, показывают, что нарушение TGFP сигнального пути является частым событием пригепато канцерогенезе. Иммуногистохимическн установлено, что в более: 40% исследованных образцов FK человека наблюдается'повышенный?уровенБ продущииЛХЗрр! [Bedossa et al., 1995; Abou-Shady et al., 1999]. Кроме,-того, показано,.что высокижуровень TGFp; в. плазме крови; и моче пациентов с ГК является неблагоприятным .прогностическим признаком JpTsai et al., 1997; Kim et al;,-2000]. Практически всеисследованияроли цитокиновсемейства TGFP b гепатоканцерогенезе сводились к изучению биологических эффектов TGFpi .
В представленной работе впервые проанализированы изменения экспрессии';генов, в; дифференцированной гепатоме человека HepG2 при воздействии; рекомбинантных цитокинов TGFpi и TGFp2. Обработка цитокинами!привела к, повышению экспрессии ? генов аЗ- субъединицы интегрина, остеопонтина, фибронекхина и pig-h3, активация которых ассоциирована с развитием злокачественного фенотипа; ГК; Кроме;того, было показано, что действие обоих цитокинов приводит к снижению; экспрессии генов, кодирующих РЯФ» которые необходимы для поддержания1 дифференцированного фенотипа гепатоцитов.
Мы показали, что экзогенная, экспрессия TGFP2 в культуре^ HepG2 вызывает снижение экспрессии ключевых регуляторов гепатоцитарной дифференцировки G/EBPa и : HNF4a, а также к повышению • скорости пролиферации и клоногенной активности этих клеток.
Впервые установлено, что подавление продукции TGFP2 в культуре клеток низкодифференцированной гепатомы НЗЗ индуцирует реэкспрессию эндогенных HNF4a и С/EBPa. Кроме того, подавление продукции TGFP2.привело к снижению подвижности и скорости пролиферации этих клеток.
Таким образом, мы показали, что TGFP2.регулирует экспрессию генов, продукты которых контролируют дифференцировку гепатоцитов, и влияет на такие важные свойства клеток, как пролиферация и подвижность. Эти данные свидетельствуют о том, что гиперэкспрессия TGFP2, наблюдаемая в дедифференцированных ГК мыши и человека, способствует развитию злокачественного фенотипа опухолевых клеток. Кроме того, полученные результаты демонстрируют возможность регуляции сети ГЯФ и дифференцировки клеток гепатоцитарного происхождения за счет изменения активности нетканеспецифических сигнальных путей. Эти факты способствуют расширению представлений о фундаментальных основах опухолевого роста и прогрессии злокачественных новообразований. Возможность восстановления дифференцированного фенотипа гепатоцитов при ингибировании TGFp сигнального пути представляется перспективным подходом для разработки новых методов прогноза и терапии ГК. Анализ TGFp-индуцируемых внутриклеточных механизмов будет способствовать развитию генно-инженерных методов эффективного подавления продукции TGFp для терапии эпителиальных опухолей различного происхождения. li ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1:1. КАНЦЕРОГЕНЕЗ
Канцерогенез представляет собой сложный многостадийный процесс, в,результате которого происходит клональная! экспансия .клеток. В процессе трансформации, клетки накапливают изменения протоонкогенов, генов супрессоров опухолей и' других генов, которые участвуют в прямом-или опосредованном контроле клеточной пролиферации. Постоянная селекция, которая» происходит под давлением со стороны организма, дает возможность выжить в популяции такого клона все более автономным» и агрессивным субклонам [Заридзе, 2004].
В настоящее время i признано, что процесс химически индуцированного канцерогенеза включает три основных этапа: инициацию, промоцию и прогрессию опухоли [Pitot and Dragan, 1991]. Первые этапы канцерогенеза связаны с инициацией образования опухоли. Эта стадия характеризуется необратимостью и происходит при воздействии канцерогена-или. спонтанных изменениях в клетке, приводящих к мутациям; отдельных генов.
Группы инициированных клеток получили» название пренеопластических фокусов или узелков. В нормальной ткани такие.клетки!можно обнаружить по ускорению роста; специфических маркеров они, как правило, не экспрессируют.
Следующей стадией канцерогенеза является промоция. В этот период, в> клетке происходят существенные изменения метаболизма и активности генов, способствующих трансформации. Эта стадия обратима,' при' отмене промотора возможна регрессия.' Промоторное действие оказывают вещества, изменяющие характер экспрессии! генов* и* способные индуцировать пролиферацию: При этом в клетке появляются белки, несвойственные для данной ткани или стадии дифференцировки.
Стадия промоции сопровождается морфологическими изменениями: деконденсацией хроматина, разрушением межклеточных контактов и отделением клеток друг от друга. Стадия промоции завершается либо полным исчезновением гиперплазии,-либо образованием опухоли, дальнейшее развитие которой происходит за счет прогрессии.
Прогрессией называется процесс постепенного приобретения опухолью все более автономного и агрессивного характера роста. Эта стадия необратима, так как для неё характерна растущая нестабильность генома, приводящая к анеуплоидиям и другим хромосомным аберрациям. В клетках отбираются и накапливаются изменения, приводящие к ускорению пролиферации, появлению инвазивности, а на последних стадиях и способности к метастазированию [Hanahan and Weinberg, 2000].
В процессе изучения механизмов трансформации клеток и прогрессии опухолей различного происхождения было получено множество данных, выявлено громадное количество мутаций в различных генах, ведущих к перерождению нормальной клетки в опухолевую [Hanahan and Weinberg, 2000]. Все это позволило выделить ряд важнейших свойств опухолевых клеток (Рис. 1).
Опухолевые клетки независимы от экзогенных пролиферативных стимулов, так как многие онкогены кодируют факторы роста или участвуют во внутриклеточной передаче митогенного сигнала. Кроме того, в трансформированных клетках инактивированы опухолевые супрессоры, что позволяет клетке быть нечувствительной к антипролиферативным сигналам. Опухолевые клетки также приобретают способность уклоняться от апоптоза - запрограммированной смерти.
Три перечисленных выше свойства, приобретаемых при трансформации, дают клетке возможность не зависеть от внешнего микроокружения. В принципе, приобретение этих свойств способствует образованию популяции постоянно пролиферирующих клеток, в результате чего может развиться опухоль. Тем не менее, многие исследования показывают, что этого недостаточно для экспансивного клонального роста трансформированных клеток. К необходимым изменениям относятся также появление теломеразной активности, в результате которой клетка обретает способность делиться неограниченное количество раз, и ангиогенез, способствующий разрастанию опухоли.
Приобретение всех вышеперечисленных свойств в процессе канцерогенеза так или иначе может осуществляться посредством изменений в геноме опухолевой клетки. Но возникновение мутаций во вполне определенных генах - событие, в общем-то, редкое, так как в нормальной клетке функционирует большое количество систем мониторинга ДНК повреждений и их репарации. Генетическая нестабильность вместе с постоянно идущим отбором в опухолевых клетках способствует накоплению и закреплению в ряду клеточных поколений нескольких мутаций в онкогенах, опухолевых супрессорах и других генах, придающих клетке совокупность необходимых для образования опухоли свойств. Генетическая нестабильность достигается за счет неточности репликации ДНК и сегрегации хромосом во время митоза, нарушения репарации повреждений ДНК или ошибок, возникших при репликации, ослабления функции чекпоинтов клеточного цикла, активируемых в ответ на повреждения структуры ДНК, а таюке за счет ослабления индукции апоптоза, вследствие чего делящиеся клетки с генетическими нарушениями не погибают, а выживают [Hanahan and Weinberg, 2000].
ВВД-"Ж:.".
Независимость от ростов их сипилов
УкЛояецпеот ало птоза -.---1
Непрерывный. шшэгошэ --—.—--
Инвазия и м етастазчровал не
Не чувствительность к atrrapocvoBWH —сншанам
Неограниченный рс п л и кятн б1j ьш потенциал
Рисунок 1. Основные свойства опухолевой клетки [no Hanahan and Weinberg,
2000],
Заключение диссертационного исследования на тему "Роль трасформирующего ростового фактора (TGF)b в прогрессии гепатокарцином"
Выводы
В клетках гепатомы человека HepG2 воздействие цитокинов TGFpi и TGFP2 вызывает подавление экспрессии факторов, контролирующих дифференцировку гепатоцитов (С/ЕВРа, HNFla), и активацию генов, продукты которых ассоциированы с прогрессией ГК (остеопонтин, фибронектин и аЗ субъединица интегрина).
При обработке TGFpi и TGFP2 в клетках гепатомы человека HepG2 происходит координированное изменение активности двух альтернативных промоторов гена HNF4a: активация альтернативного Р2 промотора и подавление основного промотора Р1. TGFp-зависимое подавление промотора Р1 гена FINF4a опосредованно активацией МАР-киназного сигнального пути. Экспрессия экзогенного TGFP2 в клетках HepG2 снижает экспрессию ключевых регуляторов гепатоцитарной дифференцировки С/ЕВРа и HNF4a. При гиперэкспрессии TGFp2 происходит ускорение пролиферации и повышение клоногенной активности клеток гепатомы HepG2. При подавлении продукции TGFP2 в клетках дедифференцированной гепатомы НЗЗ происходит реактивация эндогенной экспрессии факторов HNF4a и С/ЕВРа.
Подавление продукции TGFP2 в клетках НЗЗ вызывает снижение подвижности и скорости пролиферации этих клеток.
TGFP2 способен влиять на дифференцировочные, пролиферативные и миграционные свойства опухолевых клеток при прогрессии гепатоцеллюлярных карцином.
Заключение
Цитокины семейства TGFp оказывают двойственное влияние на клетки различного происхождения. С одной стороны они способны подавлять пролиферацию и индуцировать апоптоз, с другой — на множестве моделей показано, что TGFp, наоборот, активирует клеточный цикл, способствует уклонению от апоптоза, индуцирует ЭМП, усиливает инвазивный фенотип и способствует метастазированию опухолевых клеток.
При действии TGFpi на нормальные гепатоциты происходит индукция апоптоза и подавление пролиферации. Однако трансформация гепатоцитов приводит к тому, что механизмы действия TGFpi изменяются, и часть клеток выживает и претерпевает ЭМП. Кроме того, у пациентов с ГК уровень TGFpi в плазме и моче повышен. Практически все литературные данные о роли TGFp в гепатоканцерогенезе и его функциональной активности в нормальных гепатоцитах сводится к исследованиям свойств TGFpi. Возможная роль TGFP2 в канцерогенезе этого типа тканей практически не исследована.
Целью настоящей работы стало изучение роли TGFp2 в прогрессии ГК. Для этого были использованы две экспериментальные системы: линия дифференцированной гепатомы человека HepG2, в которой не экспрессируются цитокины семейства TGFp, и полученная из низкодифференцированной быстрорастущей ГК мыши культура НЗЗ, в которой нами выявлена гиперэкспрессия TGFP2. Таким образом, обрабатывая цитокином TGFP2 или индуцируя его экзогенную экспрессию в гепатоме HepG2, и, наоборот, подавляя его продукцию в' дедифференцированной гепатоме НЗЗ, мы предполагали выяснить вклад TGFP2 в прогрессию ГК.
В клетках дифференцированной гепатомы HepG2 обработка как TGFpi, так и TGFp2 привела к повышению экспрессии генов аЗ субъединицы интегрина, остеопонтина, фибронектина и pig-h3, для которых показана активация в ходе прогрессии ГК. Кроме того, произошло снижение экспрессии генов, кодирующих ГЯФ, которые определяют дифференцировку гепатоцитов. Одним из таких факторов является HNF4a — центральное звено гепато-специфической регуляторной сети. При обработке TGFpi и TGFP2 произошло координированное изменение экспрессии двух групп изоформ этого гена: снижение экспрессии группы, характерной для дифференцированных гепатоцитов, и повышение экспрессии «эмбриональных» изоформ. Мы также показали, что внутриклеточные механизмы этих изменений различны: снижение HNF4aPI происходит за счет TGFp-зависимой активации MEK — Erk сигнального пути, при этом повышение HNF4aP2 опосредовано другим механизмом.
Ранее в нашей лаборатории было показано, что большая часть TGFp, который продуцируют клетки дедифференцированной гепатомы мыши НЗЗ, находится в латентной, (непроцессированной) форме. Для исследования вклада активной и латентной форм TGFP2 в регуляцию процессов, ассоциированных с прогрессией ГК, а также для изучения эффектов долговременного действия TGFp2 нами были получены две клеточные линии HepG2, гиперэкспрессирующие нормальную и мутантную формы TGFP2. Мутация в гене TGFP2 приводила к нарушению процессинга, и в среду секретировался конститутивно латентный белок.
В клетках HepG2, гиперэкспрессирующих нормальный и мутантный вариант TGFP2, произошло снижение экспрессии гена Е-кадхерина и активация транскрипции гена, кодирующего его репрессор - Snail. Кроме того, произошло снижение экспрессии двух групп изоформ гена HNF4a и мишени HNF4aPl — ApoAIV. Одновременно произошло снижение экспрессии гена, кодирующего важный»регулятор дифференцировки и пролиферации гепатоцитов - С/ЕВРа. Необходимо отметить, что гиперэкспрсссия: TGFP2 привела к ускорению пролиферации и к повышению клоногенной активности.этих клеток.
Для подтверждения роли TGFp2 в прогрессии ГК необходимо было наряду с моделями, на которых изучались эффекты, индуцируемые TGFp2* рассмотреть модель, в которой можно было наблюдать эффекты, обусловленные подавлением активности * TGFP2. В качестве такой модельной системы была выбрана клеточная линия ГК мыши НЗЗ, в которой с помощью малых интерферирующих РНК мы подавили продукцию TGFP2.
При подавлении продукции TGFP2 в клетках НЗЗ произошла реактивация транскрипции двух генов, экспрессия которых критична для поддержания дифференцировки гепатоцитов и нарушение функции которых описано для ГК - HNF4a и С/ЕВРа. Более того, снижение синтеза TGFP2 привело к снижению таких ключевых для опухолевых клеток характеристик, как скорость пролиферации и подвижность. Все это свидетельствует в пользу того, что при подавлении продукции TGFP2 в культуре НЗЗ произошла частичная реверсия злокачественного фенотипа опухолевых клеток.
Таким образом, мы показали, что TGFp2 регулирует экспрессию генов, продукты которых контролируют дифференцировку гепатоцитов, и влияет на такие важные свойства клеток, как пролиферация и подвижность. Разработка методов эффективного подавления продукции этого цитокина как in vitro, так и in vivo представляется перспективным направлением в развитии методов противоопухолевой терапии.
Однако необходимо также определить, какие именно внутриклеточные сигнальные пути активируются под действием TGFp. Так как, например, исследование активации Smad сигнального каскада в описанных системах показало, что этот сигнальный путь функционально активен при обработке клеток HepG2 рекомбинантным цитокином. При этом ни при гиперэкспрессии TGFp2 в HepG2, ни в клетках НЗЗ активность Smad сигнального каскада не детектировалась. Поэтому использование в этих системах низкомолекулярных ингибиторов киназного домена TpRI, предотвращающих фосфорилирование Smad, вряд ли может оказаться эффективным инструментом для подавления действия TGFp.
В дальнейшем мы планируем подробно исследовать механизмы активации TGFp -индуцируемых внутриклеточных сигнальных каскадов в клетках дедифференцированных опухолей, а также детально исследовать механизмы TGFp — зависимой регуляции гена HNF4a в описанных системах.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Макарова, Мария Викторовна
1. Канцерогенез. Под редакцией Заридзе Д.Г. (2004), М.: Медицина.
2. Кудрявцева Е.И., Морозова О.В, Рудинская Т.Д., Энгельгардт Н.В. (2001). Нарушение межклеточных контактов и взаимодействия клеток с внеклеточным матриксом в быстрорастущей гепатокарциноме мышей. Архив патологии, 4: 33-37.
3. Лазаревич Н.Л. (2004). Молекулярные механизмы прогрессии опухолей печени. Успехи биохимии, 44: 365-418.
4. Лазаревич Н.Л. (2003). Изменения спектров экспрессии генов при гепатоканцерогенезе и прогрессии опухолей печени. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, Москва, МГУ.
5. Лазаревич Н.Л., Флейшман Д.И. (2008). Ткане-специфические транскрипционные факторы в прогрессии эпителиальных опухолей'. Биохимия, 73: 713—734.
6. Лазаревич Н:Л, Альперн Д.В. (2008). Гепатоцитарный ядерный фактор 4 в развитии и< канцерогенезе эпителиальных тканей. Молекулярная биология, 42 (5): 763-781.
7. Abou-Shady М, Baer H.U, Friess Н, Berberat Р, Zimmermann A., Graber Н, Gold L.I, Korc М, Biichler M.W. (1999). Transforming growth factor betas and their signaling receptors in human hepatocellular carcinoma. Am. J. Surg, 177(3): 209-215.
8. Annes J.P, Munger J.S, Rifkin D.B. (2003). Making sense of latent TGFbeta activation. J. Cell Sci, 116 (Pt 2): 217-224.
9. Bakin A.V, Rinehart C, Tomlinson A.K., Arteaga C.L. (2002). p38 mitogen-activated protein kinase is required for TGFbeta-mediated fibroblastic transdifferentiation and cell migration. J. Cell Sci, 115(Pt 15): 3193-3206.
10. Bakin A.V, Safma A, Rinehart C, Daroqui C, Darbary H, Helfman D.M. (2004). A critical role of tropomyosins in TGF-beta regulation of the actin cytoskeleton and cell motility in epithelial cells. Mol. Biol. Cell, 15(10): 4682-4694.
11. BarcelIos-Hoff М.Н., Dix T.A. (1996). Redox-mediated activation of latenttransforming growth factor-beta 1. Mol. Endocrinol., 10(9): 1077-1083.
12. Bates R.C., Mercurio A.M. (2005). The epithelial-mesenchymal transition (EMT) and colorectal cancer,progression. Cancer Biol. Ther., 4(4):365-370.
13. Bernard G., Mion F., Henry L., Plauchu H., Paliard P.(1993). Hepatic involvement in hereditary hemorrhagic telangiectasia: clinical, radiological, and hemodynamic studies of 11 cases. Gastroenterology, 105(2): 482-487.
14. Bhowmick N.A., Moses H.L. (2005). Tumor-stroma interactions. Curr Opin Genet Dev., 15(1): 97-101.
15. Birkey Reffey S., Wurthner J.U., Parks W.T., Roberts A.B., Duckett C.S. (2001). X-linked inhibitor of apoptosis protein functions as a cofactor in transforming growth factor-p signaling. J. Biol. Chem., 276: 26542-26549.
16. Bissell D.M., Roulot D., George J. (2001). Transforming growth factor beta and the liver.Hepatology, 34(5): 859-867.
17. Bissell D.M.,Wang S.S.; Jarnagin W.R., Roll F.J. (1995). Cell-specific expression of transforming growth factor-beta in rat liver. Evidence for autocrine regulation of hepatocyte proliferation, J. Clin. Invest., 96: 447-455.
18. Brown K.A., Pietenpol J.A., Moses H.L. (2007). A tale of two proteins: differential roles and regulation of Smad2 and Smad3 in TGF-beta signaling. J. Cell Biochem., 101(1): 933.
19. Chalaux E., Lopez-Rovira Т., Rosa J.L., Pons G., Boxer L.M., Bartrons R., Ventura F. (1999). A zinc-finger transcription factor induced by TGF-beta promotes apoptotic cell death in epithelial MvlLu cells. FEBS Lett., 457(3): 478-482.
20. Chen C.R., Kang Y., Siegel P.M., Massague J. (2002). E2F4/5 and pl07 as Smad cofactors linking the TGFP receptor to c-myc repression. Cell, 110: 19-32.
21. Choy L., Derynck R. (2003). Transforming growth factor-beta inhibits- adipocyte differentiation by Smad3 .interacting with CCAAT/enhancer-binding protein (C/EBP) and repressing C/EBP transact i vat ion function. J. Biol. Chem., 278(11): 9609-9619.
22. Cicchini C., Filippini D., Coen S., Marchetti A., Cavallari C., Laudadio I., Spagnoli F.M., Alonzi Т., Tripodi M. (2006). Snail controls differentiation of hepatocytes by repressing HNF4alpha expression. J. Cell Physiol., 209(1): 230-238.
23. Clotman F., Lannoy V.J., Reber M., Cereghini S., Cassiman D., Jacquemin P., Roskams Т., Rousseau G.G., Lemaigre F.P. (2002). The onecut transcription factor HNF6 is required for normal development of the biliary tract. Development, 129(8): 1819-1828.
24. DaCosta Byfield S., Major C., Laping N.J., Roberts A.B. (2004). SB-505124 is a selective inhibitor of transforming growth factor-beta type I receptors ALK4, ALK5, and ALK7. Mol. Pharmacol., 65(3): 744-752.
25. Datto M.B., Frederick J.P., Pan L., Borton A.J., Zhuang Y., Wang X.F. (1999). Targeted disruption of Smad3 reveals an essential role in transforming growth factor beta-mediated signal transduction. Mol. Cell Biol., 19(4): 2495-2504.
26. Derynck R., Feng X.-H. (1997). TGF-b receptor signaling. Biochim. Biophys. Acta, 1333(2): 105-150.
27. Derynck R., Zhang Y.E. (2003). Smad-dependent and Smad-independent pathways in TGF-beta family signalling. Nature, 425(6958): 577-584.
28. Dickson M.C., Martin J.S., Cousins F.M., Kulkarni A.B., Karlsson S., Akhurst R.J. (1995). Defective haematopoiesis and vasculogenesis in transforming growth factor-pl knock out mice. Development, 121(6): 1845-1854.
29. Dong M., How Т., Kirkbride K.C., Gordon K.J., Lee J.D., Hempel N. Kelly P., Moeller B.J., Marks J.R., Blobe G.C. (2007). The type III TGF-beta receptor suppresses breast cancer progression. J. Clin. Invest., 117(1): 206-217.
30. Drewes Т., Senkel S., Holewa В., Ryffel G.U. (1996). Human hepatocyte nuclear factor 4 isoforms are encoded by distinct and differentially expressed genes. Mol. Cell Biol., 16(3): 925-931.
31. Duncan S.A., Nagy A., Chan W. (1997). Murine gastrulation requires HNF-4 regulated gene expression in,the visceral endoderm: tetraploid rescue of Hnf-4(-/-) embryos. Development, 124(2): 279-287.
32. Dunn N.R., Koonce C.H., Anderson D.C., Islam A., Bikoff E.K. Robertson E.J. (2005). Mice exclusively expressing the short isoform of Smad2 develop normally and are viable and fertile. Genes. Dev., 19: 152-163.
33. Engel M.E., McDonnell M.A., Law B.K., Moses H.L. (1999). Interdependent SMAD and JNK signaling in transforming growth factor-beta-mediated transcription. J. Biol. Chem., 274(52): 37413-37420.
34. Felici A., Wurthner J.U., Parks W.T., Giam L.R., Reiss M., Karpova-T.S., McNally J.G., Roberts A.B. (2003). TLP, a novel modulator of TGF-beta signaling, has opposite effects on Smad2- and Smad3-dependent signaling. EMBO J., 22(17): 4465-4477.
35. Feng X.H., LinX., Derynck R. (2000): Smad2, Smad3 and Smad4 cooperate with Spl to induce p 15 (Ink4B) transcription in response to TGF-beta. EMBO J., 19(19): 5178-5193.
36. Finger E.C., Turley R.S., Dong M., How Т., Fields T.A., Blobe G.C. (2008). TbetaRIII suppresses non-small cell lung cancer invasiveness and tumorigemcity. Carcinogenesis, 29(3): 528-535.
37. Fischer A".N., Herrera В., Mikula M., Proell V., Fuchs E., Gotzmann J., Schulte-Hermann R., Beug H., Mikulits W. (2005). Integration of Ras subeffector signaling in TGF-beta mediated late stage hepatocarcinogenesis. Carcinogenesis, 26(5): 931-942.
38. Flodby P., Barlow C., Kyle^ord H., Ahrlund-Richter L'., Xanthopoulos K.G. (1996). Increased hepatic cell proliferation and lung abnormalities in mice deficient in CCAAT/enhancer binding protein alpha. J. Biol. Chem., 271(40): 24753-24760.
39. Friedman J.R., Kaestner K.H. (2006). The Foxa family of transcription factors in development and metabolism. Cell Mol. Life Sci., 63(19-20):2317-2328.
40. Funaba M., Zimmerman C.M., Mathews L.S. (2002). Modulation of Smad2-mediated signaling by extracellular signal-regulated kinase. J. Biol. Chem., 277: 41361-41368.
41. Garrigue-Antar L., Munoz-Antonia Т., Antonia S.J., Gesmonde J., Vellucci V.F., Reiss M. (1995). Missense mutations of the transforming growth factor p type II receptor in human head and neck squamous carcinoma cells. Cancer Res., 55: 3982—3987.
42. Ghellal A., Li C., Hayes M., Byrne G., Bundred N., Kumar S. (2000). Prognostic significance of TGF beta 1 and TGF beta 3 in human breast carcinoma. Anticancer Res., 20(6B): 4413-4418.
43. GiannellLG, Fransvea E, Marinosci F, Bergamini C, Colucci S, Schiraldi O, Antonaci S. (2002). Transforming growth factor-beta 1 triggers hepatocellular carcinoma invasiveness via alpha3beta 1 integrin. Am. J. Pathol. 161(1): 183-193.
44. Gong J, Ammanamanchi.S, Ко T.C, Brattain M.G. (2003). Transforming growth factor beta 1 increases the stability of p21/WAFl/CIPl protein and inhibits CDK2 kinase activity in human colon carcinoma FET cells. Cancer Res, 63(12): 3340-3346.
45. Gorelik L, Flavell R.A. (2001). Immune-mediated eradication of tumors through theblockade of transforming growth factor-p signaling in T cells, Nat. Med, 7: 1118-1122.i
46. Gotoh M, Sakamoto M, Kanetaka K, Chuuma M, Hirohashi S. (2002). Overexpression ofosteopontin in hepatocellular carcinoma. Pathol. Int., 52(1): 19-24.
47. Gotzmann J, Fischer A.N, Zojer M, Mikula M, Proell V, Huber H, Jechlinger M, Waerner T, Weith A, Beug H, Mikulits W. (2006). A crucial function of PDGF in TGF-beta-mediated cancer progression of hepatocytes. Oncogene, 25(22): 3170-3185.
48. Greenbaum L.E., Cressman DE., Haber B.A., Taub R. (1995).Coexistence of C/EBP alpha, beta, growth-induced proteins and DNA synthesis in hepatocytes during liver regeneration. Implications for maintenance of the differentiated state during liver growth.
49. J. Clin. Invest., 96(3): 351-1365.L
50. Hahn S.A., Schutte M., Hoque A.T., Moskaluk C.A., da Costa L.T., Rozenblum E., Weinstein C.L., Fischer A., Yeo C.J., Hruban R.H., Kern S.E. (1996) DPC4, a candidate tumor suppressor gene at human chromosome 18q21.1. Science, 271: 350-353.
51. Han G., Lu S.L., Li A.G., He W., Corless C.L., Kulesz-Martin M., Wang X.J. (2005). Distinct mechanisms of TGF-betal-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis during skin carcinogenesis. J. Clin. Invest., 115(7): 1714-1723.
52. Hanahan D., Weinberg RA. (2000). The hallmarks of cancer. Cell., 100(1): 57-70.
53. Hempel N., How Т., Cooper S.J., Green T.R., Dong M., Copland J.A., Wood C.G., Blobe G.C. (2008). Expression of the Type III TGF-{beta} Receptor is negatively regulated by TGF-(beta). Carcinogenesis, 29(5): 905-912.
54. Hempel N„ How Т., Dong M., Murphy S.K., Fields T.A., Blobe G.C. (2007). Loss of betaglycan expression in ovarian cancer: role in motility and invasion. Cancer Res. 52315238.
55. Heyer J., Escalante-Alcalde D., Lia M., Boettinger E., Edelmann W., Stewart C.L., Kucherlapati R. (1999). Postgastrulation Smad2-deficient embryos show defects inembryo turning and anterior morphogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 1259512600.
56. Hood J.D., Cheresh D.A. (2002). Role of integrins in cell invasion and migration. Nat. Rev. Cancer., 2(2): 91-100.
57. Huang S.S., Huang J.S. (2005). TGF-beta control of cell proliferation. J. Cell Biochem., 96(3): 447-462.
58. Huang S.S., Ling T.Y., Tseng W.F., Huang Y.H., Tang F.M., Leal S.M., Huang J.S. (2003). Cellular growth inhibition by IGFBP-3 and TGF-bl requires LRP-1. FASEB J., 17: 2068-2081.
59. Hwang-Verslues W.W., Sladek F.M. (2008). Nuclear receptor hepatocyte nuclear factor 4alphal competes with oncoprotein c-Myc for control of the p2I/WAFl promoter. Mol. Endocrinol. 22(1): 78-90.
60. Igarashi A., Okochi H., Bradham D.M., Grotendorst G.R. (1993). Regulation of connective tissue growth factor gene expression in human skin fibroblasts and during wound repair. Mol. Biol. Cell, 4: 637-645.
61. Ihara A., Yamagata K., Nammo Т., Miura A., Yuan M., Tanaka Т., Sladek F.M., Matsuzawa Y., Miyagawa J.-I., Shimomura I. (2005). Functional characterization of the HNF4a isoform (HNF4a8) expressed in pancreatic p-cells. BBRC, 329: 984-990.
62. Ishikawa F, Nose K, Shibanuma M. Downregulation of hepatocyte nuclear factor-4alpha and its role in regulation of gene expression by TGF-beta in mammary epithelial cells. (2008). Exp. Cell Res., 314(10): 2131-2140.
63. Ishikawa O., LeRoy E.C., Trojanowska M. (1990). Mitogenic effect of transforming growth factor p I on human fibroblasts involves the induction of platelet-derived growth factor a receptors, J. Cell. Physiol., 145: 181-186.
64. Ito N., Kawata S., Tamura S., Shirai Y., Kiso S., Tsushima H., Matsuzawa Y. (1995). Positive correlation of plasma transforming growth factor-beta 1 levels with tumor vascularity in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett., 89(1): 45-48.
65. Ivanovic V., Melman A., Davis-Joseph В., Valcic M., Geliebter J. (1995). Elevated plasma levels of TGF-beta 1 in patients with invasive prostate cancer. Nat. Med., 1(4): 282-284.
66. Janda E., Lehmann K., Killisch I., Jechlinger M., Herzig M., Downward J., Beug H., Griinert S. (2002). Ras and TGF-b cooperatively regulate epithelial cell plasticity and metastasis: dissection of Ras signaling pathways. J. Cell Biol., 156: 299-313.
67. Jang C.W., Chen C.H., Chen C.C., Chen J.Y., Su Y.H., Chen R.HI (2002). TGF-beta induces apoptosis through Smad-mediated expression of DAP-kinase. Nat. Cell Biol., 4(1): 51-58.
68. Ju W., Ogawa A., Heyer J., Nierhof D., Yu L., Kucherlapati R., Shafritz D.A., Bottinger E.P. (2006). Deletion of Smad2 in mouse liver reveals novel functions in hepatocyte growth and differentiation. Mol. Cell Biol., 26(2): 654-667.
69. Kaartinen V., Voncken J.W., Shuler C., Warburton D., Bu D., Heisterkamp N., Groffen J. (1995). Abnormal lung development and cleft palate in mice lacking TGFP3 indicates delects of epithelial-mesenchymal interaction. Nat. Genet., 11(4): 415-421.
70. Kalkuhl A., Kaestner K., Buchmann A., Schwarz M. (1996). Expression of hepatocyte-enriched nuclear transcription factors in mouse liver tumours. Carcinogenesis, 17(3): 609-612.
71. Kang Y., Siegel P.M., Shu W., Drobnjak M., Kakonen S.M., Cordon-Cardo C., Guise T.A., Massague J. (2003). A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell, 3: 537-549.
72. Kardassis D., Pardali K.; Zannis V.I. (2000). SMAD proteins transactivate the human ApoCIII promoter by interacting physically and functionally with hepatocyte nuclear factor 4. J. Biol. Chem., 275(52): 41405-41414.
73. Koli K., Saharinen J., Hyytiainen M., Penttinen C., Keski-Oja J.Latency (2001). activation, and binding proteins of TGF-beta. Microsc. Res. Tech., 52(4): 354-362.
74. Korchynskyi O., ten Dijke P. (2002). Identification and functional characterization of distinct critically important bone morphogenetic protein-specific response elements in the Idl promoter. J. Biol. Chem., 277: 4883-4891.
75. Krasagakis K., Tholke D., Farthmann В., Eberle J., Mansmann U., Orfanos C.E. (1998) Elevated plasma levels of transforming growth factor (TGF)-betal and TGF-beta2 in patients with disseminated malignant melanoma. Br. J. Cancer., 77(9): 1492-1494.
76. Laiho M., DeCaprio J.A., Ludlow J.W., Livingston D.M., Massague J. (1990). Growth inhibition by TGF-beta linked to suppression of retinoblastoma protein phosphorylation. Cell, 62(1): 175-185.
77. Lastres P., Letamendfa A., Zhang H., Rius C., Almendro N., Raab U., Lopez L.A., Langa C., Fabra A., Letarte M., Bernabeu C. (1996). Endoglin modulates cellular responses to TGF-beta 1. J. Cell Biol., 133(5): 1109-1121.
78. Leal S.M., Liu Q., Huang S.S., Huang J.S. (1997). The type V transforming growth factor b receptor is the putative insulin-like growth factor-binding protein.3 receptor. J. Biol. Chem., 272(33): 20572-20576.
79. Li M.O., Wan Y.Y., Sanjabi S., Robertson A.K., Flavell R.A. (2006). Transforming growth factor-p regulation of immune responses, Annu. Rev. Immunol., 24: 99-146.
80. Li Y., Yang J., Dai C., Wu C., Liu Y. (2004). Role for integrin-linked kinase in mediating tubular epithelial to mesenchymal transition and renal interstitial fibrogenesis. J. Clin. Invest., 112(4): 503-516.
81. Locker J. (2001). Tissue-specific regulation by transcription factors. BIOS Scientific Publishers, chapter 10.
82. Lu M., Lin S.C., Huang Y., Kang Y.J., Rich R., Lo Y.C., Myszka D., Han J., Wu H. (2007). XIAP induces NF-kappaB activation via the BIR1/TAB1 interaction and BIR1 dimerization. Mol. Cell,.26(5): 689-702.
83. Lucas В., Grigo K., Erdmann S., Lausen J., Klein-Hitpass L., RyfFel G.U. (2005). HNF4alpha reduces proliferation of kidney cells and affects genes deregulated in renal cell carcinoma. Oncogene, 42: 6418-6431.
84. Lucke C.D., Philpott A., Metcalfe J.C., Thompson A.M., Hughes- Davies L., Kemp P.R., Hesketh R. (2001). Inhibiting mutations in the transforming growth factor P type 2 receptor in recurrent human breast cancer. Cancer Res., 61(2): 482—485.
85. Luo K., Lodish H.F. (1997). Positive negative regulation * of type II TGF-beta receptor signal transduction by autophosphorylation on multiple serine residues. EMBO J. 16(8): 1970-1981.
86. Massague J. (2004). G1 cell-cycle control and cancer. Nature, 432(7015): 298306.
87. Massague J., Wotton D. (2000). Transcriptional control by the TGF-P/Smad signaling system. EMBO J., 19: 1745-1754.
88. Massague J., Seoane J., Wotton D. (2005). Smad transcription factors.Genes Dev., 19(23): 2783-2810.
89. Massague, J. (1998). TGF-beta signal transduction. Annu. Rev. Biochem., 67: 753-791.
90. Micke P., Ostman A. (2005). Exploring the tumour environment: cancer-associated fibroblasts as-targets in cancer therapy. Expert. Opin. Ther. Targets, 9(6): 1217-1233.
91. Miettinen P.J, Ebner R, Lopez A.R, Derynck R. (1994). TGF-beta Induced transdifferentiation of mammary epithelial cells to mesenchymal cells: involvement of type I receptors. J. Cell Biol, 127(6 Pt 2): 2021-2036.
92. Moren A, Itoh S, Moustakas A, ten Dijke P, Heldin С.- H. (2000). Functional consequences, of tumorigenic missense mutations in the amino-terminal domain of Smad4. Oncogene, 19(38): 4396-4404.
93. Okuda K. (2000). Hepatocellular carcinoma. J. Hepatol, 32: 225-237.
94. Ott M.O, Rey-Campos J, Cereghini.S, Yaniv M. (1991). vHNFl is expressed in epithelial cells of distinct embryonic origin during development and precedes HNF1 expression. Mech. Dev., 36(1-2): 47-58.
95. Ozdamar B, Bose R, Barrios-Rodiles M, Wang H.R, Zhang Y, Wrana J.L.2005). Regulation of the polarity protein Par6 by TGFp receptors controls epithelial cell plasticity. Science, 307:. 1603-1609.
96. Pardali К., Kurisaki A., Moren A., ten Dijke P., Kardassis D., Moustakas A. (2000) Role of Smad proteins and transcription factor Spl in p21(Wafl/Cipl) regulation by transforming growth factor-beta. J. Biol. Chem., 275(38): 29244-29256.
97. Pardali K., Moustakas A. (2007). Actions of TGF-p as tumor suppressor and pro-metastatic factor in human cancer. Biochimica et Biophysica Acta, 1775: 21-62.
98. Parikh S., Hyman D. (2007). Hepatocellular cancer: a guide for the internist. Am. J. Med., 120: 194-202. .
99. Peinado H., Quintanilla M., Cano A. (2003). Transforming growth factor beta-1 induces Snail transcription factor in epithelial cell lines: implications for epithelial mesenchymal transitions. J. Biol. Chem. 23: 21113-21123.
100. Perlman R., Schiemann W.P., Brooks M.W., Lodish H.F., Weinberg R.A. (2001). TGF-beta-induced apoptosis is mediated by the adapter protein Daxx that facilitates JNK activation. Nat. Cell Biol., 3(8): 708-714.
101. Petersen O.W., Nielsen H.L., Gudjonsson Т., Villadsen R., Rank F., Niebuhr E., Bissell M.J., Ronnov-Jessen L. (2003). Epithelial to mesenchymal transition in human breast cancer can provide a nonmalignant stroma. Am J Pathol., 162(2): 391-402.
102. Petritsch C., Beug H., Balmain A., Oft M. (2000). TGFp inhibits p70 S6 kinase via protein phosphatase 2A to induce G1 arrest. Genes Dev., 14; 3093-3101.
103. Pierce D.F. Jr, Gorska A.E., Chytil A., Meise K.S., Page D.L., Coffey R.J. Jr, Moses H.L. (1995). Mammary tumor suppression by transforming growth factor beta 1 transgene expression. Proc Natl Acad Sci USA, 92(10): 4254-4258.
104. Pietenpol J.A., Holt J.T., Stein R.W., Moses H.L. (1990) Transforming growth factor beta 1 suppression of c-myc gene transcription: role in inhibition of keratinocyte proliferation. Proc Natl. Acad. Sci. USA, 87(10): 3758-3762.
105. Pitot H.C., Dragan Y.P. (1991). Facts and theories concerning the mechanisms of carcinogenesis. FASEB J., 5(9): 2280-2286.
106. Ponce-Castaneda M.V., Esparza-Lopez J., Vilchis-Landeros M.M., Mendoza V., Lopez-Casillas F. (1998). Murine betaglycan primary structure, expression and glycosaminoglycan attachment sites. Biochim. Biophys. Acta, 1384: 189-196.
107. Prunier C., Ferrand N., Frottier В., Pessah M., Atfi A. (2001). Mechanism for mutational inactivation of the tumor suppressor Smad2. Mol. Cell. Biol., 21(10): 33023313.
108. Puchner M.J., Koppen J.A., Zapf S., Knabbe C„ Westphal M. (2002). The influence of tamoxifen on the secretion of transforming growth factor-beta2 (TGF-beta2) in glioblastomas: in vitro and in vivo findings. Anticancer Res., 22(1 A): 45-51.
109. Raftery L.A., Sutherland D.J. (1999). TGF-£ family signal transduction in Drosophila development: From Mad to Smads. Dev. Biol., 210: 251-268.
110. Reynisdottir I., Polyak K., Iavarone A., Massague J. (1995). Kip/Cip and Ink4 Cdk inhibitors cooperate to induce cell cycle arrest in response to TGF-beta. Genes Dev., 9(15): 1831-1845.
111. Rifkin D.B. (2005). Latent transforming'growth factor-beta (TGF-beta) binding, proteins: orchestrators of TGF-beta availability. J Biol Chem:, 280(9): 7409-7412.
112. Riggins G.J., Kinzler K.W., Vogelstein В., Thiagalingam S. (1997). Frequency ofV
113. Smad gene mutations in human cancers. Cancer Res., 57(13): 2578—2580.
114. Roberts A.B., Anz'ano M.A., Wakefield L.M., Roche N.S., Stern D.F., Sporn M.B. (1985). Type p transforming growth factor: a bifunctional regulator of cellular growth. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 82: 119-123.
115. Sanchez A., Alvarez A.M., Lopez Pedrosa J.M., Roncero C., Benito M., Fabregat 1. (1999). Apoptotic response to TGF-beta in fetal hepatocytes depends upon their state of differentiation. Exp Cell Res., 252(2): 281-291.
116. Schuster M.B:, Porse B.T. (2006). C/EBPalpha: a tumour! suppressor in multiple tissues. Biochim. Biophys. Acta, 1766: 88-103.
117. Selvamurugan N. Kwok S., Patridge N.C. (2004). Smad3 interacts with JunB and Cbfal/Runx2 for transforming growth factor-bl-stimulated collagenase-3 expression in human breast cancer cells. J. Biol. Chem., 279: 27764-27773.
118. Seoane J., Le H.V., Shen L., Anderson S.A., Massague J. (2004). Integration of Smad and forkhead pathways in the control of neuroepithelial and glioblastoma cell proliferation. Cell, 117(2): 211-223.
119. Sheahan S., Bellamy C.O., Dunbar D.R., Harrison D.J., Prost S. (2007). Deficiency of G1 regulators P53, P21Cipl and/or pRb decreases hepatocyte sensitivity to TGFbeta cell cycle arrest.BMC Cancer, 7:215.
120. Shen X., Li J., Hu P.P., Waddell D., Zhang J., Wang X.F. (2001). The activity of guanine exchange factor NET1 is essential for transforming growth factor-beta-mediated stress fiber formation. J. Biol Chem., 276(18): 15362-15368.
121. Shi Y., Massague J. (2003). Mechanisms of TGF-P signaling from cell membrane to the nucleus. Cell, 113: 685-700.
122. Shi Y., Wang Y.F., Jayaraman L., Yang H., Massague J., Pavletich N.P. (1998). Crystal structure of a Smad MH1 domain bound to DNA: insights on DNA binding in TGF-beta signaling. Cell, 94(5): 585-594.
123. Shima Y, Nakao K, Nakashima T, Kawakami A, Nakata K, Hamasaki K, Kato Y. (1999). Activation of caspase-8 in transforming growth factor beta-induced apoptosis of human hepatoma cells. Hepatology, 30: 1215-1222.
124. Spath G.F., Weiss M.C. (1998). Hepatocyte nuclear factor 4 provokes expression of epithelial marker, genes, acting as a morphogen in dedifferentiated hepatoma cells. J. Cell Biol., 140(4): 935-946.
125. Strutz F., Zeisberg M., Renziehausen A., Raschke В., Becker V., van Kooten C., Muller G. (2001). TGFp 1 induces proliferation in human renal fibroblasts via induction of basic fibroblast growth factor (FGF-2). Kidney Int., 59(2): 579-592.
126. Takaku K., Miyoshi H., Matsunaga A., Oshima M., Sasaki N., Taketo M.M. (1999). Gastric and duodenal polyps in Smad4 (Dpc4) knockout mice. Cancer Res., 59(24): 6113-6117.
127. Takekawa M., Tatebayashi K., Itoh F., Adachi M., ImaiK., Saito H. (2002). Smad-dependent GADD45beta expression mediates delayed activation of p38 MAP kinase by TGF-beta. EMBO J., 21(23): 6473-6482.
128. Tang В., Bottinger E.P., Jakowlevv S.B., Bagnall K.M., Mariano J:, Anver M.R., Letterio J.J., Wakefield L.M. (1998). Transforming growth factor-pi is a new form of tumor suppressor with true haploid insufficiency. Nat. Med., 4(7): 802-807.
129. Tang J., Wu Y.M., Zhao P., Jiang J.L., Chen Z.N. (2009). {beta}ig-h3 Interacts with {alpha}3{beta}l Integrin to Promote Adhesion and Migration of Human Hepatoma Cells. Exp. Biol. Med., 234(1): 35-39.
130. Tang J., Zhou H.W., Jiang J.L., Yang X.M., Li Y., Zhang H.X., Chen Z.N., Guo W.P. (2007). pig-h3 is involved in HAbl8G/CD147 mediated metastasis process in human hepatoma cells. Exp. Biol. Med., 232(3): 344-352.
131. Tang Y., Katuri V., Dillner A., Mishra В., Deng C.X., Mishra L. (2003). Disruption of transforming growth factor-beta signaling in ELF beta-spectrin-deficient mice. Science, 299(5606): 574-577.
132. Tavian D., De Petro G., Colombi M., Portolani N., Giulini S.M., Gardella R., Barlati S. (1994). RT-PCR detection of fibronectin EDA+ and EDB+ mRNA isoforms: molecular markers for hepatocellular carcinoma. Int. J. Cancer, 56(6): 820-825.
133. Thiery J.P. (2003). Epithelial-mesenchymal transitions in development and pathologies. Curr. Opin. Cell Biol, 15(6): 740-746.
134. Thiery. J.P. (2002). Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression. Nature Rev. Cancer, 2(6): 442-454.
135. Tian F„ DaCosta Byfield S, Parks W.T, Yoo S, Felici A, Tang B, Piek E, Wakefield L.M, Roberts A.B. (2003). Reduction in Smad2/3 signaling enhances tumorigenesis but suppresses metastasis of breast cancer cell lines. Cancer Res, 63(23): 8284-8292.
136. Tranche F, Ringeisen F„ Blumenfeld M, Yaniv M, Pontoglio M. (1997). Analysis of the distribution of binding sites for a tissue-specific transcription factor in the vertebrate genome. J. Mol. Biol, 266(2): 231-245.
137. Tsai J.F, Chuang L.Y, Jeng J.E, Yang M.L, Chang W.Y, Hsieh M.Y, Lin Z.Y, Tsai J.H. (1997). Clinical relevance of transforming growth factor-beta 1 in the urine of patients with hepatocellular carcinoma. Medicine, 76(3): 213-226.
138. Tsukazaki T, Chiang T.A., Davison A.F, Attisano L, Wrana J.L. (1998). SARA, a FYVE domain protein that recruits Smad2 to the TGFbeta receptor. Cell, 95(6): 779791.
139. Tucker R.F, Shipley G.D, Moses H.L, Holley R.W. (1984). Growth inhibitor from BSC-1 cells closely related to platelet type p transforming growth factor. Science, 226: 705-707.
140. Turley R.S., Finger E.C., Hempel N., How Т., Fields T.A., Blobe G.C. (2007). The Type III Transforming Growth Factor-P Receptor as a Novel Tumor Suppressor Gene in Prostate Cancer. Cancer Res., 67(3): 1090-1098.
141. Ueno Т., Hashimoto O., Kimura R., Torimura Т., Kawaguchi Т., Nakamura Т., Sakata R., Koga H., Sata M. (2001). Relation of type II transforming growth factor-beta receptor to hepatic fibrosis and hepatocellular carcinoma. Int. J. Oncol., 18: 49-55.
142. Vagenas K., Spyropoulos-C., Gavala V., Tsamandas A.C. (2007). TGFbetal, TGFbeta2, and TGFbeta3 protein expression in gastric carcinomas: correlation with prognostics factors and patient survival. J. Surg. Res., 139(2): 182-188.
143. Valcourt U., Kowanetz M., Niimi H., Heldin C.H., Moustakas A. (2005). TGF-beta' and the Smad signaling pathway support transcriptomic reprogramming during epithelial-mesenchymal cell transition. Mol. Biol. Cell, 16(4): 1987-2002.
144. Valderrama-Carvajal H., Cocolakis E., Lacerte A., Lee E.H., Krystal G., Ali S., Lebrun J.J. (2002). Activin/TGF-beta induce apoptosis through Smad-dependent expression ofthe lipid phosphatase SHIP. Nat. Cell Biol., 4(12): 963-969.
145. Wai P.Y., Kuo P.C. (2008) Osteopontin: regulation in tumor metastasis. Cancer Metastasis Rev., 27(1): 103-118.
146. Watkins P.J., Condreay J.P., Huber B.E., Jacobs S.J., Adams D.J. (1996). Impaired proliferation and tumorigenicity induced by CCAAT/enhancer-binding protein. Cancer Res., 56(5): 1063-1067.
147. Wick W., Platten M., Weller M. (2001). Glioma cell invasion: regulation of metalloproteinase activity by TGF-beta. J. Neurooncol., 53(2): 177-185.
148. Wikstrom P., Startim P., Franck-Lissbrant I., Damber J.E., Bergh A. (1998> Transforming growth factor betal is associated with angiogenesis, metastasis, and poor clinical outcome in prostate cancer. Prostate, 37(1): 19-29.
149. Wrana J.L., Attisano L., Wieser R., Ventura F., Massague J. (1994). Mechanism of activation of the TGF-beta receptor. Nature, 370(6488): 341-347.
150. Xie L., Law B.K., Chytil A.M., Brown K.A., Aakre M.E., Moses H.L. (2004). Activation of the Erk pathway is required for TGF-beta 1-induced EMT in vitro. Neoplasia, 6(5): 603-610.
151. Smad2 and Smad3. J. Biol. Chem., 274: 703-709.
152. Yakicier M.C., Irmak M.B., Romano A., Kew M., Ozturk M. (1999). Smad2 and Smad4 gene mutations in hepatocellular carcinoma, Oncogene, 18(34): 4879—4883.
153. Yang X., Letterio JJJ., Lechleider R.J., Chen L., Hayman R., Gu H., Roberts A.B., Deng C. (1999). Targeted disruption of SMAD3 results in impaired mucosal immunity and diminished T cell responsiveness to TGFp. EMBO J., 18(5): 1280-1291.
154. Yi J. Y., Shin I., Arteaga C. L. (2005). Type I transforming growth factor p receptor binds to and activates phosphatidylinositol 3-kinase. J. Biol. Chem., 280: 1087010876.
155. Yu Q., Stamenkovic I. (2000). Cell surface-localized matrix metalloproteinase-9 proteolytically activates TGF-beta and promotes tumor invasion and angiogenesis Genes Dev., 14(2): 163-176.
156. Yue J., Mulder K.M. (2000). Requirement of Ras/MAPK pathway activation by transforming growth factor beta for transforming growth factor beta 1 production in a smad-dependent pathway. J Biol Chem., 275(45): 35656.
157. Zavadil J., Bitzer M., Liang D., Yang Y.C., Massimi A., Kneitz S., Piek E., Bottinger E.P. (2001). Genetic programs of epithelial cell plasticity directed by transforming growth factor-beta. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(12): 6686-6691.
158. Zawel L., Dai J.L., Buckhaults P., Zhou S., Kinzler K.W., Vogelstein В., Kern S.E. (1998). Human Smad3 and Smad4 are sequence-specific transcription activators. Mol. Cell, 1:611-617.
159. Zhang H.Y., Phan S.H. (1999). Inhibition of myofibroblast apoptosis by transforming growth factor beta (1). Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 21(6): 658-665.
160. Zhu Y., Richardson J.A., Parada L.F., Graff J.M. (1998). Smad3 mutant mice develop metastatic colorectal cancer. Cell, 94(6): 703-14.