Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Роль стабилизаторов и тканевых регуляторов в гемато-лимфатическом обмене белка

РГ6 од - 1 ЯНВ 1996

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ННГГНТУТ ИНЯШОЛОШИ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

Па правах р^ьошси

м>галм\дш:пА лидажллл лтжомашоиил

РОЛЬ СГАЫ1Л11ЛАТОРОВ и тканевых регуляторов в ИМАГО ЛИМФАТИЧЕСКОМ ОБМЕНЕ БЕЛКА

14.Ш.17 • нормальная физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учитЯ степени доктора медицински* наук

АЛМАТЫ, Ю93

Работа выполнена в Институте физиологии человека и животных Национальной Академии Наук Республики Казахстан.

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Р.А.Гареев

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт гигиены и профзаболеваний Министерства Здравоохранения Республики Казахстан.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

А.М.Еекетаев

доктор медицинских наук, профессор М.С.Саулебекова

доктор медицинских наук, профессор М.Й.Алибеков

Защита состоится " ^ " ^995 г< в час

на заседании Специализированного Совета Д 53,26.01 при Институте физиологии человека и животных НАН РК по адресу: 480032, г.Алма-ты, Академгородок.

С диссертацией молено ознакомиться в библиотеке Института физиологии человека и животных НАН РК.

Автореферат разослан " 1895 г.

Ученый секретарь ___.—л

Специализированного Совета,. ,7 <

доктор биологических наук Р.С.АШОВА

£ВДАЯ ХАРЛ!ГГЕРНСГПйСЛ РДЕОТН

АКТУАЛЬНОСТЬ ПНШШ1. Гемато-гисто-лимфатический обмен веществ - один из важнейших процессов поддержания жизнедеятельности тканей, органов и организма. Главными компонентами этого обмена по массе являются белки и вода.

Известны вещества, называемые стабилизаторами, которые препятствуют агрегации стареющих белков (Шимановский, 1984; Александров, 1985; Степуро и др., 1988). Сведения по белковым стаби-• лиэаторам скудны (ноу-хау фармакологических и косметологических фирм), а в аспектах их влияния на крово-лимфообращение вообще отсутствуют. Важность выяснения роли белковых стабилизаторов в крово- лимфатическом обмене многогранна, поскольку они не только присутствуют в крови и лимфе, но их основные представители (жирные кислоты, глюкоза) являются энергетическими' источниками.

Хотя эритроцлтарная адсорбция белков и пептидов обнаружена более 50 лет назад, а позднее выявлена прямая корреляция между степенью адсорбции и концентрацией этил веществ в плазме (Збарс-кий, Демин, 1949; Linke et al., 1985; и др.), обмен веществ между эритроцитами и плазмой крови не связывался с транскапидллркым переходом макромолекул и воды. Данные о преимущественной адсорбции денатурированных белков на эритроцитах (Mota et al., 1985) и усилении выхода белка из крови при введении в кровоток денатурированных протеинов (Айтмагамбетовз, 1988) позволили предложить гипотезу о первоочередном вовлечении в транскапиллярный обмен макромолекул, ассоциированных с поверхностью эритроцитов ( Гареев, 1989). Вместе с тем не было ясности в важной вопросе, насколько транскапиллярный баланс белка зависит от соотношения адсорбции протеинов на эритроцитах артериальной и венозной крови. Отсутствовали также данные о влиянии стабилизаторов на адсорбции белка.

Интерстициальное пространство окрутает кровеносные и лимфатические сосуды и опосредует влияние транскапиллярного обмена на формирование лимфы (Куприянов и др., 1983; Банин и др., 1985). В классическом учении о крозо-лимфатическом переходе веществ ин-, терстицию отводится роль морфологического пассивного сита. Такое представление не объясняло иэвеотный "противоотечный потенциал"

- г -

иигерсгнция, крово-лимфатических соотношений белковых фракций при различных воздействиях (Rusznyak et al.. 1969; Aakland, Nlcolay-sen, 1981). По интерстицшо за последние 20 лет появились сведения о разделении его на 2 сектора (Zweifach, Silberberg. 1979; Куприянов и др., 1983; и др.); существовании эффекта пространственного высвобождения макромолекул, определяющего неравномерность распределения белка (Laurent, 1972; Witte, 1981; Ванин, Караганов, 1982; и др.); выракенной гидрофильное™ гиалуронанов (Claugh, Smaje, 197В; Meyer, Silberberg-, 1977; Bert, 1993; и др.); полифункциональности тканевых регуляторов (Линднер, Коган, 1976; Кульбаев, 1981; Konturek, Pawlik, 1986; и др.). В свете этих данных важным представлялось выяснение влияния даброкинов и белковых стабилизаторов на интерстициалыюе движение белка и воды.

Известно, что лимфатические узлы задерживают микроорганизмы и другие инфекционные начала (Жданов, 1954), а также денатурированные белки (Rusznyak et al., 1969). Однако до сих пор этот механизм не ясен. По нашему предпололения, первым этапом этого процесса является дестабилизация белка с образованием агрегатов. Протеолиз также начинается с денатурации бежа (Коли, I960). Но неизвестна взаимосвязь между протеолизом и стабилизацией. Лимфо-идная ткань богата протео- и липолитическими ферментами. Общая масса лимфоидной ткани сопоставима с кассой печени. Но до сих пор не ясно, могут ли лимфатические узлы восполнять протеолитическую функция печени?

Лимфатической системе принадлежит ведущая роль в резорбции и транспорте из ингерстициального пространства крулномолекулярных соединений, которые из-за своих размеров нэ могут поступать непосредственно в кровь. Резорбционно-транспортная функция лимфатической системы порой входит в противоречие с ее завдтно-барьерной и иммунологической функциями. Внесение ясности в сложный вопрос о взаимосвязи функций ваша для теоретической лкмфологии.

Существует мнение, что синдром "блокады тканевого обмена" обусловлен снижением интенсивности транскапиллярного обмена белка (Покалев, 1975). Механизм последнего не ясен. По-нашему, мнению, причина может быть в нарушении адсорбции белка на мембране эритроцитов и (или) движения макромолекул в интерстиции, в частности, из-аа недостаточности стабилизации и, вследствие этого, образова-

ния в тканях белковых агрегатов. Из причин не исключается, и недостаточность тучных клеток. Очевидно, что необходимо комплексное исследование всех этих предполагаемых причин и механизмов.

В настоящее время в медицине широко используются методы клинической лимфологии: лимфосорбция, лимфостимуляция, дренам грудного протока, лекарственные эндолиыфатические воздействия (Измаи-лова, 1979; Панченков и др., 1934-, Буянов, Алексеев, 1990; Ахундов и др., 1991; Ярема, Лигвинчук, 1991; Левин и др., 1994 и мн. др.). Вместе с тем, эти методы с позиций физиологии лимфатической системы недостаточно обоснованы. Tat, фактически не учитывается влияние внутрилимфатических инфузий лекарственных препаратов на иммунологическую, защитно-барьерную и транспортирующую функции лимфатических узлов. Из-за отсутствия ясности в понимании патоге-' неза "блокады лиыфооттока" при дренаже грудного протока клиницисты часто не могут преодолеть это осложнение (Панченков и др., 1934; Буянов, Алексеев, 1990). Таким образом, выявление ответов на отмеченные выше теоретические вопросы, несомненно, важно и для практической лимфологии.

Изучение многих вопросов в лимфологии задерживается из-за отсутствия адекватных методик исследования. И в нашем случае разработка методического обеспечения порой становилась первоочередной задачей.

Вышеизложенное определило ЦЕЛЬ РАЕОГИ: ВЫЯСНЕНИЕ ВЛШСШ ПРОТЕИНОВЫХ СТАБИЛИЗАТОРОВ И TKAIffiBUX Г'ЕГУ-ЧЛТСРОЗ НА ПРОЦЕССЫ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ГЕГИТО-ЛЙЙАТГОШЛаЙ СЕ2Л31 ЕЕДКЛ JI ВОДУ. -

Для достижения цели были поставлены следующие ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ:

1. Исследование стабилизации сывороточных белков и влияние на этот процесс протеаз.

2. Выяснение реакции лимфатической системы на введение протеиновых стабилизаторов и тканевых регуляторов.

3. Изучение влияния водка-солевых инфузий на артерио-венозную разницу белков, адсорбированных на мембране эритроцитов, а также влияние стабилизаторов на адсорбцию протеинов.

•1. Изучение влияния порто-кавалького анастомоза (со снижени-' ем в том числе катаболизма протеинов в печени) на лимфообращение при белковин нагруеках.

5. Исследование влияния протеиновых стабилизаторов и ткане-

вых регуляторов на связывание воды основным веществом соединительной ткани.

6. Методическое обеспечение.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые получены данные о влиянии системы веществ, стабилизирующих и дестабилизирующих протеины, на гемато-лимфатический обмен белка. По скорости стабилизирующего эффекта выделены стабилизаторы быстрого и замедленного действия, определена роль стабилизаторов в протеолиае, гидратации соединительной ткани. Обосновывается наличие функционального интерстици-ального барьера, который создается неравномерностью распределения белка и гидрофильностыо основного вещества, эффектом пространственного высвобождения макромолекул, меняющиеся под действием тканевых регуляторов (даброкинов, простатландинов, гиалуронида-зы).

Выявлена взаимосвязь транскалиллярного баланса белка о адсорбцией протеинов на мембране эритроцитов артериальной и венозной крови при водно-солевых инфузиях.

Найдены отличия аффектов внутривенного и внутрилимфатическо-го введений тканевых регуляторов, что указывает на наличие соче-танного (прямого и опосредованного) их влияния на лимфатическую систему. Выявлено, что Введение (в кровь й зндолимфатически) растворов стабилизированных, а также стабилизированных и'подвергнутых тепловой обработке белков идентично действий нативных на лимфообращение.

Зарегистрировано торможение лимфооттока при введении (в кровь и зндолю.гфагически) денатурированных белков. Уменьшение дебита протёиноз С лимфой грудного протока при инфузии денатурированных белков в кровь было наиболее выраженным на фоне снижения функции печени.

Установлено, что белковые растворы, подвергнутые ультразвуковому воздействию, при инфузии в кровь замедляют лимфообращение.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Разработаны способы определения белка в растворе и плазме крови (авторские свидетельства N1264286, N1454079); устройства для регистрации набухания образцов тканей и регистрации малых объемов лимфы (рационализаторские предложения); методика определения протеинстабилизирующх свойств у тестируемых веществ; методика определения количества денатурированных белков; методика определения количества белков, адсорби-

рованных на мембране эритроцитов.

Сформулированы рекомендации: 1) введение протеиновых стабилизаторов в доузловые лимфатические сосуды как способ повышения эффективности дренажа грудного протока; 2) использование протеиновых стабилизаторов как компонентов растворов для зндолимфати-ческого введения лекарственных веществ с целью предупреждения задержки белков в лимфатических узлах; 3) введение белковых растворов, обработанных ультразвуком (80 кГц, Б Вт/см2, 30 с) как способ снижения риска лимфогенного метастазирования злокачественных новообразований.

КОНЦЕПЦИЯ РАБОТЫ.

Гемато-лимфатический обмен бедка и воды зависит не только от эффективного фильтрационного давления, концентрации протеинов в плазме крови, морфологического иитерстициального барьера и лимфообращения, но и от разницы в адсорбции белка на эритроцитах артериальной и венозной крови, системы веществ, стабилизирующих и дестабилизирующих сывороточные протеины, тканевых регуляторов. Последние совместно с комплексом гиалуронидаза-гиалуронаны обуславливают состояние функционального интерстициального барьера и далее влияют на лимфообразование и транспорт лимфы по магистральным сосудам.

ОСНОВНЫЕ полошит, ЕШОСШДЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Скорость стабилизации белков зависит от вида стабилизаторов. По этому признаку они разделены нами на две группы: быстрого (свободные жирные кислоты) и замедленного действия (глюкоза). Стабилизаторы вместе с веществами, которые их разрушают, создают систему стабилизации-дестабилизации протеинов. Белковые стабилизаторы быстрого действия замедляют, но не ингибируют протеолиз. Исследованные протеиновые стабилизаторы быстрого действия не оказывают протекторного эффекта на структурные белки и не влияют на адсорбцию протеинов на мембране эритроцитов.

2. Накопление белка и воды в ингерсхиции при окклюзии лимфатических сосудов ведет к дегренудяцаи тучных клеток. Действие тканевых регуляторов на лимфатическую систему при эндолимфатичес-ком введении отличается от эффекта их введения в кровоток. Эндо1 лимфатическая инфузия растворов стабилизированных протеинов,также как и ВЕедение нативных стимулирует лимфоток в магистральных лимфатических сосудах. Снижение функции печени (порто-канальный

анастомоз) потенцирует уменьшение транспорта белка с лимфой иг грудного протока при инфузии денатурированных протеинов. Введение в кровоток растворов белков (дестабилизированных, стабилизированных) , подвергнутых ультразвуковому воздействию, замедляет лимфо-ток в магистральных сосудах с уменьшением транспорта белка лимфой.

3. Водно-солевые инфузии вызывают кратковременное поступление белка в кровоток на фоне фильтрации воды. С прекращением ин-фузий направленность перехода белка и воды меняется на противоположные. При этом снижается и выравнивается количество протеинов, адсорбированных на эритроцитах артериальной и венозной крови. В норме количество белков адсорбированных на "венозных" эритроцитах выше, чем на "артериальных". Гиалуронидаза, как и тканевые регуляторы, изменяют эффективность функционального интерстициального барьера, что проявляется сдвигами транскапиллярного обмена и лимфообразования .

В гемато-гисто-лимфатическом обмене веществ белковые стабилизаторы и тканевые биологически активные вещества создают систему защиты кровеносной и лимфатической систем и интерстициального пространства от денатурированных и токсичных протеинов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на П-й Всероссийской конференции "Актуальные проблемы лимфологии" (Москва, 1985); 1 съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 1986); XIV и XV съездах Всесоюзного физиологического общества СССР им. И.П.Павлова (Баку, 1983; Кишинев, 1987); I, 3 съездах физиологов Казахстана (Алма-Ата, 1988, 1995); П и VI Всесоюзных симпозиумах "Венозное кровообращение и лимфообращение" (Уфа, 1981; Алма-Ата, 1989); научной конференции "Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии" (Новосибирск, 1992); заседаниях Ученого Совета Института физиологии человека и животных НАН РК (Алматы, 1993, 1995).

По материалам диссертации опубликована 51 научная работа, в том числе 1 монография. Получено 2 авторских свидетельства на изобретения, знак "Изобретатель СССР", удостоверения на рационализаторские предложения.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы по изучаемым вопросам, главы с описанием примененных методик, 5 глав результатов собственных исследований,

¡к обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 248 страницах машинописного текста, содержит 40 рисунков и 29 таблиц. Список литературы включает 107 источников информации на русском и 107 на других языках.

СОДЕРЙАШШ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Эксперименты проведены на 129 взрослых беспородных собаках массой 10-18 кг, 7 белых лабораторных крысах линии Вистар массой 150-200 г, 2000 пробах соединительной ткани. Сделано более 10 000 анализов проб крови. Подопытных животных наркотизировали гексена-лом, тиопенталом натрия по общепринятым расчетам (Батрак, Кудрин, 1979). Для регистрации показателей гемодинамики и забора проб крови канюлировали бедренные артерию и вену, для сбора лимфы -грудной проток, для инфузий - лодыдечные венозный и лимфатические сосуды ( Гареев, Беклемишев, Мурэамадиева, 1991). Для оценки общего состояния подопытного .животного регистрировали АД (тенаодат-чиками), дыхание - сфигмографической приставкой.

Порто-кавальный анастомоз создавали по общепринятому методу (Лопухин, 1971). Окклюзию кишечного лимфатического сосуда крыс вызывали его перевязкой у корня брыжейки. Лимфоток из грудного протока регистрировали в каплях или гравиметрическим методом, кровоток - электромагнитным погокомером. Транскапиллярный обмен белка и воды вычисляли по данным кх артерио-венозной разницы (Гареев, 1989),

Тестируемые вещества инфузировапи в лодьшечный лимфатический сосуд с помощью программируемого насоса РРМ (Чехословакия) со скоростью 0.66 мл/мин.

В качестве образцов соединительной ткани использовали подкожные соединительную, жировую лсани и брыжейку собаки, пупочный канатик человека. На образцах тканей с помощью разработанной установки исследовали динамику их гидратации (Гареев, Мурзамадиева, 1984), экстрагированием - содержание белка (Мураамадиева, Гареев, 1981). Состояние тучных клеток брыжейки крыс анализировалось под микроскопом (объектив *40, окуляр *7) в 30 полях зрения.

• Сывороточные белки обезжиривали методом R.Chen (1976'), стабилизировали - инкубацией (1М:1М, 37°С) жирными кислотами и глюкозой (Шимановский, 1984), денатурировали - прогреванием на водяной бане при 60°С в течении 45 мин (Ноли, 1960).

В пробах крови и лимфы определяли концентрацию белка с учетом примеси гемоглобина (Гареев, Мурзамадиева, 1983), гемоглобина - гемиглобинцианидным методом (Пименова, Дервиз, 1974). вязкость, количество форменных элементов крови, гематокритное число. По разнице количества белка в отмытых и интактных эритроцитах определяли количество мембраноадсорбированных белков в расчете на 1 эритроцит.

Кинетические измерения ' проводили с помощью спектрофотометра "Specol 221" (Германия), имеющего соответствующую программу. Для регистрации других показателей использовали электромагнитный по-токомер (Япония), счетчик форменных элементов "Целлоскоп АИ 134" (Швеция), кондуктометр ОК-102/1 (Венгрия), спектрофотометры "Specol 21", "Specol 11" (Германия), электронные аналитические весы "Sartorius" (Германия), прецизионный цифровой рН-мегр ОК-208/1 (Венгрия), ультрацентрифуги, ультразвуковой дезинтегратор, лабораторные автоматические пипетки РР-2 (Германия), разбавители проб, термостаты, многоканальные (тип 304 и 315, Польша) насосы и другое оборудование. Запись физиологических показателей вели на 8-ми канальном самописце опытного завода АМН СССР, двухкоординат-ном самописце "XY-Recorder Endim 620.02" (Германия).

Ряд исследований провели с помощью оригинальных разработок (определение белка в растворе и крови, авторские свидетельства N1264386, N1454079; установка для регистрации набухания тканей; устройство для сбора малых объемов лимфы и др.).

Показатели выражали в единицах системы СИ, за исключением артериального и венозного давлений, которые по рекомендации ВОЗ даны в мм рт.ст. и см вод.ст.

Статистическая обработка данных (общая статистика, корреляционный анализ, построение графиков), редактирование проведены на ПЭВМ IBM PC/AT с помощью стандартных программ: Statgraphics, Graph In the Box, Lexicon.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССДЕДОВАШШ И ИХ СВСУйДЕШЕ

1. Стабилизация сывороточных белков и влияние на этот процесс протеаэ

Среди вешеств, известных своими белковостайилиэирующиыи свойствами (Александров, 1985; Степуро и др., 1988; и др.), в плазме кроеи и лимфе больше всего свободных жирных кислот (СЯК) и глюкозы. Поэтому, в первую очередь, необходимо было знать их скорость стабилизирующего эффекта. Но конкретных данных по этому вопросу не оказалось, что заставило нас апробировать разные методы регистрации этого показателя. Наиболее информативным оказался показатель кинетики экстинкции растворов.

Кинетика стабилизации обезжиренных белков СЖК. Стабилизация бел!са проявляется снижением экстинкции (осветлением) белковых растворов при прямом фотометрировании. Скорость осветления растворов всегда была (6 экспериментов по каждой серии наблюдений) максимальной в первые'40 с, затем она замедлялась. К 3 минуте величина осветления (стабилизации белка) достигала 90-95% от наблюдаемого в конце 6 мин. В контроле кинетика экстинкции растворов обезжиренных белков менялась мало, оставаясь положительной, т.е. мутность раствора постоянно увеличивалась. Была выявлена дозоза-висимость стабилизации белков. К примеру, максимальное осветление растворов сбезкиренных белков натрия пальмитатои достигалось при использовании дозы 13.Е мМ и выше (рис.1).

Рио.1. Экстинкция растворов обезжиренных белков после инкубации с натрия пады,штатом различной концентрации (1 - 3.3, 2 - 6.6, 3 - 13.2, 4 -19.8, б - 26.4 мМ). По оси абсцисс - время, мин; по оси ординат - Е, ед. опт. плотности от нулевого уровня

Скорость осветления растворов обезжиренных белков зависела и от вида СЖК: она была примерно одинаковой при использовании 1.8-3.6 мМ натрия стеарата и 13.2-19.8 мМ натрия пальмитата (разница в количестве молекул в 5.5-7.3 раза). Выявлено, что представители других классов химических веществ - янтарная кислота и ок-сибутират натрия, такие обладают протеинстабшшзирушим свойством.

ЗДект сочетанного действия протеаа и СЖК на белки. Для решения этого вопроса были проведены опыты с регистрацией кинетики экстингсций при добавлении к обезжиренным белкам протеазы (лекози-ма), а затем жирной кислоты. При этом, в первые Р. мин отмечалось невыраженное осветление растворов (отрицательные показатели кине-

0.075

£ од.опт.пл.

-3

-г —1

Рис.2. Зкстинкцкя растворов обезжиренных белков, после инкубации с протеа-зой (1), СЖК+прогеазой (2), протеазой+СЖК (3). Обозначения те же, что и на рис.1

4 шн 6

тики), затем -помутнение (положительные кинетические результаты). Длительность периода осветления растворов совпадала со временем проявления максимального стабилизирующего эффекта СЖК. Отсутствие абсолютной стабилизации белков СЖК, вероятно, связано с коротким (2-4 мин) периодом полураспада, комплекса белок-жирная кислота (Галлер и др., 1979). Изменение порядка внесения реагентов: СНК, а затем - протеагы, сохраняло тенденцию осветления растворов, хотя скорость реакции была на порядок ниже, чем в наблюдениях с применением только натрия стеарата (рис.2). Добавление к растворам обезжиренных белков только протеазы вызывало быстрое его помутнение. Таким образом, жирная кислота замедляла скорость проте-олиза, но не блокировала действие протеазы.

Отличия в стабилизации сывороточных белков глюкозой. Добав-

.пение глюкозооксидазы к растворам обезжиренных белков увеличивало (максимально на 30%) их мутность, что указывало на то, что часть протеинов стабилизирована глюкозой. Инкубация обезжиренных белков с глюкозой в дозе 20 мМ (37° С, 30 мин) сопровождалась образованием осадка, который в течении 1-2 ч исчезал при добавлении в раствор СЖК. Это указывало на то, что для стабилизации белков глюкозой необходимо значительно больше времени, чем в случае с СЯК. Такому заключению созвучны данные о том, что глюкоза в течении нескольких суток вытесняет СЖК из связи с белком (Степуро и др., 1988).

При проверке этого предположения - инкубации обезжиренных белков с глюкозой (37° С) в течение суток отмечено выраженное осветление растворов (0.363+0.056 и 0.138+0.037 ед. опт. пл.). Причем, эти белки оказались устойчивы к действо протеазы - через 30 мин инкубации (37° С) зкстинкция оставалась равной 0.136+0.039 ед. опт. пл.

Несмотря на то, что стабилизация белка зависела от довы и вида СЖК, характер кривой осветления растворов во всех случаях был одинаковым. Отличия глюкозы от этой группы стабилизаторов, как показано выше, значительны. Это - функционально разные стабилизаторы. Особенно значительна разница по времени, необходимом для стабилизации (мин, суг). Поэтому для ясности понимания отличий и удобства изложения мы ввели понятия "стабилизаторы бистро-го" и "замедленного действия".

В организме, наряду о прогеиногабилиаирующими веществами существуют соединения, разрушающие их. В совокупности они создают систему стабилизации-дестабилизации протеинов.

Разработка тестов определения количества денатурированных белков и наличия протеинстабилиэирующих свойств. На основе проведенных исследований нами разработана методика выявления у веществ протеинстабилиэирующих свойств. Предложенный тест, состоял ив последовательных процедур обезжиривания и дегликоаилирования сывороточных белков (степень пи«утнения раствора после этой процедуры соответствует количеству денатурированных протеинов) с последующим испытанием действия предполагаемых стабилизаторов. Простейшее (предварительное) определение заключалось в сравнении помутнения контрольного и испытуемого (с добавлением тестируемого вещества) растворов при комнатной температуре по времени (5, 10,

30 мин, 1.5 и 24 ч). При высокой скорости стабилизации более приемкам метод кинетических измерений экстннкции белковых растворов.

Разработанная нами методика определения количества денатурированных протеинов путем удаления основных стабилизаторов (СЖК и глюкозы) при сравнении с тимоловой показала качественно однозначные результаты, но, в отличие от нее, позволяла регистрировать все денатурированные белки.

2, Влияние введения стабилизированных и денатурированных протеинов на транспорт белка с лимфой из грудного протока

В крово-лимфатическом обмене одновременно участвуют нативные, стабилизированные и (информационно измененные протеины. Для выяснения вопроса о роли протеиновых стабилизаторов в деятельности лимфатической системы были поставлены опыты с внутривенным и внутрилимфатическим введением стабилизированных и нестабилизиро-ванных белков.

Влияние внутривенного введения растворов белков, подвергнутых обезжириванию, тепловой денатурации и стабилизации.на показатели лимфы грудного протока . В этой серии экспериментов (20 собак) растворы белков инфузировали внутривенно (90 мг/кг массы собаки), причем, часть растворов облучали ультразвуком (80 кГц, 5 Вт/см2, 30 с).

Было проведено 6 серий опытов по 5 наблюдений. К примеру (табл.1), при инфузии белков, стабилизированных СЕК, и обработанных ультразвуком, лимфоток из грудного протока в течении 60 мин достоверно снижался и к концу наблюдения стал вдвое ниже Фоноео-го. В варианте введения необработанных ультразвуком растворов белков лимфоток варьировал в фоновых пределах, Концентрация белка в лимфе в обоих вариантах' опытов существенно не менялась, транспорт белка с лимфой при введении стабилизированных и подвергнутых ультразвуковому воздействию белков достоверно снижался - к 60 мин (фон 21.0+0.72 мг/мин) до 10.61+ 0.29 мг/мин (Р < 0.05). йнфузия стабилизированных, но необлученных белков вызывала тенденцию увеличения этого показателя с 19.54+0.02 до 20.46+0.10 мг/мин. Аналогично характеризовался транспорт эритроцитов и лейкоцитов с лимфой, т.е. снижался вдвое в впервом варианте наблюдений и повы-

шалея во втором.

Таблица 1

Некоторые показатели лимфы грудного протока при внутривенной инфувии белков, стабилизированных натрия стеаратом

Время мин Лимфоток, мкл/мин Концентрация белка, г/л Количество, тыс/мкл

эритроцитов лейкоцитов

инфузия обработанных ультразвуком белков

фон 561+114 37.50+6.54 0.15+0.07 1,58+0.71

5 386+68 41.59+4.78 0.11+0.05 0.90Ю.44*

10 409+91 42.57+4.21 0.08+0.04* 1.18+0.42

15 346+62* 38.83+5.02 0.09+0.04 0.85+0.35*

20 316+67* 41.44+4.67 0.10+0.04 1.10Т0.43

25 285+54* 40.56+4.44 0.11+0.04 0.91+0.36*

30 295+55* 39.98+4.55 0.11+0.04 1.24+0.53

35 295+56* 39.67+4.36 0.10+0.04 1.04+0.49

40 276+66* 39.67+4.66 0.11+0.04 1.21+0.56

45 285+51* 39.08+4.81 0.10+0.04 1.8370.87

50 275+55* 38.93+4.65 0.10+0.04 1.48+0.61

55 255+57* 39.74+4.67 0.10+0.04 1.05+0.54

60 286+66* 37.64+4.76 0.09+0.03* 1.18+0.46

инфузия необработанных ультразвуком белков

фон 511+11 38.62+2.01 0.16+0.11 0.77+0.26

5 541+12 37.54+3.82 0.13+0.08 0.87+0.21

10 551+19 40.Б8+3.09 0.16+0.10 0.63+0.16

15 563+36 39.45+4.55 0.14+0.08 0.73+0.07

20 553+32 33.91+0.92 0.12+0.06 0.72+0.20

25 531+12 39.82+4.62 0.11+0.06 0.60+0.10

30 533+34 39.С0+4.34 0.11+0.05 0.65+0.10

35 531+18 41.57+3.38 0.12+0.05 0.77+0.19

40 532+28 38.90+6.18 0,12+0.05 0.83+0.24

45 501+18 40.04+5.48 0.13+0.05 0.65+0.21

50 543+37 41.29+4.27 0.20+0.09 0.75+0.13

55 543+34 39.53+4.54 0.14+0.06 0.72+0.04

60 543+39 37.90+3.49 0.16+0.06 0.88+0.06

» —

*) различия статистически достоверны по сравнению с фоном, Р < 0.05

Сходные изменения регистрируемых показателей отмечались и при инфуэии озвученных стабилизированных глюкозой, а также обезжиренных прогретых протеинов'(рис.3).

Таким образом, протеиновые стабилизаторы (СЖК, глюкоза) не> уменьшали лимфостимулирующий эффект внутривенного введения белковых растворов, тогда как обработанные ультразвуком белковые растворы оказывали ингибирующее влияние на транспорт белка с лимфой.

40 МЕН 60

Рис.3. Транспорт белка с лимфой из грудного протока при внутривенной инфу-зии стабилизированных натрия стеарагом (1, 4) и глюкозой (2, 5), обезжиренных (3, 6), обработанных (1-3) и необработанных ультразвуком протеинов (4-6). По оси абсцисс - время (мин): по оси ординат - транспорт белка (X)

Влияние внутривенного введения протеинов, подвергнутых тепловой денатурации, на дебит белка из грудного протока на фоне порто-кавадьного анастомоза. Считается, что утилизация денатурированных белков происходит ке только в печени и органах ретикуло-экдотелиальной системы (Короленко, 1990), но в интерстиции (Cas-ley-Smith, 1983) и лимфатических узлах (Рзаев, 1966). При выключении печени, на наш взгляд, денатурированные белки устремятся в интерстициальное пространство и лимфу. Какова при этом будет реакция лимфатической системы на внутривенное введение денатурированных белков? Для изучения этого вопроса были поставлены опыты с наложением порто-кавального анастомоза. Порто-кавальный анастомоз создает условия не только для исключения очищения крови v. porta в печени, ко и уменьшения тока лимфы из грудного протока (Ruszny-ak et al., 1969). После такого уменьшения со стабилизацией лимфо-тока внутривенная инфузия денатурированных белков (80 иг/кг) в наших опытах вызывала начальное (10 мин) недостоверное (7 собак) ускорение лимфотока из грудного протока. К концу наблюдений (60 мин) ускорение сменилось снижением до уровня иже фонового (соответственно 200+46 и 381+37 мкл/мин - фон, Р < 0.05). При этом концентрация белка в лимфе медленно повышалась с 26.61+5.61 до 31.87+4.20 г/л к концу наблюдений. * Транспорт белка с лимфой первоначально увеличивался, максимум отмечен на 10 мин (10.71+1.02 мг/мин). На 25 мин наблюдений показатель снизился до фонового значения (8.35+0.81 мг/мин), к концу наблюдения в среднем был равен 70Х от исходного. Вышеуказанные отличия нагляднее видны при

сопоставлении данных в % (рис.4).

•и мин 60

Рис.4. Лиыфоток (1), концентрация белка (2) и его транспорт с лимфой из грудного протока (3) при внутривенной инфузии денатурированных протеинов в условиях порто-канального анастомоза (Л)

В контрольных опытах (6 собак, на фоне лаларогомии) при ин-Ззувии' денатурированных белков отмечено 3 пика димфотока: на 5 и 50 мин, максимальный - на 25-30 мин (160£ от фонового уровня). Димфоток в среднем варьировал на исходном уровне (228+17 лкл/мин). Концентрация белка в пробах лимфы менялась мапо, транс-юрт белка с лимфой увеличивался (рис.5). Подобные данные при

40 ыщ

Рис.Б, Лимфоток (1), концентрация белка (2) и его транспорт с лимфой из грудного протока (3) при внутривенной инфузии денатурированных протеинов в условиях лапаротомии (7.)

[утривенном введении денатурированных белков получены и другими зторами (Гареев, 1989).

Разница наблюдаемых эффектов объясняется, на наи взгляд, !М, что при выключении печени основная масса денатурированных

белков переходила в интерстициалыгое пространство и далее в лим фу. Задерживаясь в лимфоузлах, они нарушали ток лимфы. Из-за длительного циркулирования денатурированных протеиноь происходила блокада пропускной способности всех лимфатических узлов. Переполнение узлов лимфой временами вызывало ситуацию "прорыва", усиления пропускной способности, чем и обусловлены отмеченные выше кратковременные пики ускорения лшфотока. Выраженное уменьшение лимфотока наступило к 40 мня наблюдений, что согласуется со временем перехода белков из крови в лимфу, вытекающую из грудного протока наркотизированных собак (Гареев, 1989).

Тэшм образом, нагрузка денатурированными белками на йонс снижения функции печени Быэывала подавление транспорта белка с лимфой из грудного протока, несомненно, за счет уменьшения пропускной способности лимфатических узлов вследствие задержки и накопления в них денатурированных белков.

Влияние эндолимфатического введения протеинов, подвергнутых тепловой денатурации, на дебит бедка из грудного протока. При внутривенном- введении денатурированных или дестабилизированных белков не исключается возможность их стабилизации . в крови, ин-терстиции и лимфе. При зндатшфатическом введении стабилизация протеинов в лимфе менее вероятна из-за преобладания инфузата I лимфе грудного протока. При икфузии раствора нативных белког (21.83+2.52 г/л) в лодыжечный лимфатический сосуд (V собак) сс скорость» 0.66 мл/мин (10 мин) отмечалось первоначальное (до £ мин) понижение содержания белка в пробах лимфы из грудного протока с 18.98+2.75 .до 14.59+2.27 г/л (Р < 0.05), с одновременны* увеличением тока лимфы, а затем его восстановление до фоновогс уровня к концу инфуаии. Такое понижение отмечалось и другими исследователями, оно объясняется уменьшением доли печеночной лимфь при повышении внутршшмфатического давления (1?и5гпуак еЬ а1., 1969; Гареев, 1989). Смена инфузата на раствор денатурированию белков (22.51+2.25 г/л, 15 мин) вызывала кратковременное сниженш лшфотока. Такой характер снижения, на наш взгляд, обусловлен бш принудительной инфуаией. Поэтому была поставлена, дoпoлнитeльнai серия экспериментов (8 собак) с введением растворов денатурированных белков (27.74+3.52 г/л, 20 мин). Сравнительные данные О %) по транспорту белка о лимфой из грудного протока за 10 мин о: начала икфузии представлены на рис.6.

100 -

-V

Рис.6. Транспорт белка с лимфой из грудного протока при эндолимфатической инфуэии нативных (1) и

;енатурированных

1ных белков

20

о мин г

£

8

ю

(2). По оси абсцисс -время (мин); по оси ординат - транспорт белка (X)

Как видно на рис.б, транспорт белка с лимфой при инфузии нативных белков в лодыжечный лимфатический сосуд начинает увеличиваться с 4 мин, что обусловлено постепенным заполнением лимфатического русла инфуэатом и началом выхода из грудного протока лимфы в смеси с инфуэатом. Этот же период при введении денатурированных белков характеризуется, наоборот, снижением дебита протеинов. В последующем, как и в случае с "нативным" инфуэатом транспорт белка увеличивается.

При эндолимфатических инфузиях с постоянным объемом, превышающим ток лимфы в обездвиженных конечностях, несомненно, повышается внугрилимфатическое давление. Этим увеличивается вероятность резорбции еоды и белка из лимфы з кровь при прохождении ее через лимфоузел (Бородин и др., 198В). Однакд, несомненно, часть денатурированных, нестабилизированных протеинов задерживается, вероятно, в узле, как это отмечено в опытах I.Иизгпуак а1. (1969) с инфуаией раствора денатурированных белков под постоянным давлением. На это указывает превышение в наиих опытах дефицита "денатурированных" белков (разница между транспортируемым из грудного протока белками и суммой инфузируешх с фоновыми) над дефигштом "нативных". За 10 мин разница составила 7-4.77 мг (дефициты 196.68 и 121.91 мг соответственно).

В целом, внутрилимфатическая ннфуаия денатурированных белков, в отличие от нативных, уменьшала транспорт белка с лимфой иа

грудного протока, вероятно, из-ва нарушения пропускной способности лимфатических узлов массой задержанных в них протеинов.

Влияние зндолимфатического введения стабилизированных СЖК прогретых протеинов на дебит белка из грудного протока. При такой же инфузии раствора нативных белков (25.83+2.37 г/л) в лодыжечный лимфатический сосуд (8 собак) лимфоток из грудного протока (фон 405+54 мкл/мин) к 5 мин (797+47 мкл/мин; Р < 0.05) увеличивался почти вдвое. Отмечено временное понижение, а затем повышение содержания лейкоцитов в лимфе, что, на наш взгляд, связано с форсированным вымыванием инфуэагом клеток из лимфатических узлов. Содержание белка в пробах лимфы из грудного протока существенно не менялось. Смена инфузата на раствор со стабилизированными прогретыми протеинами той же концентрации (15 мин) сохранила эту тенденцию.

Транспорт белка о лимфой из грудного протока, постепенно нарастая, стабилизировался на 7 мин, увеличившись почти вдвое. К концу инфуаии нативных белков их дебит из грудного протока превышал фоновый на 6.98 мг/мин. Смена инфузата на "стабилизированные прогретые белки" не меняла транспорта белка с лимфой. В обоих случаях дефицит транспортируемых белков из грудного протока равнялся 109.1 и 72.4 мг за 10 мин, обусловленный, на наш взгляд, резорбцией инфузируемых белков в кровеносные сосуды узла. Полученные данные свидетельствуют о том, что стабилизированные белки в лимфатической системе ведут себя как нативные, а стабилизация защищает протеины от тепловой денатурации. .

Таким образом, зндолимфатическая инфузия растворов стабилизированных прогретых белков, как и нативных, вызывала усиление лимфотока и транспорта белка с лимфой из грудного протока.

3. Транскапиллярный обмен белка и воды, адсорбция протеинов на мембране эритроцитов при водно-солевых инфузиях

Транскапиллярный обмен бедка и воды при водно-солевых инфу-зиях. Транскапиллярный обмен белка и воды меняется после приема жидкостей,, пищи и т.д. Поэтому водные нагрузки являются наиболее физиологичным методом изменения транскапиллярного обмена. В опытах (В собак) при 3 мин внутриартериальной инфузии физиологичес-

кого раствора (16.2 мл/мин) выявлена фильтрация воды из кровеносного русла в ткани (-28,61+8.22 мл; Р < 0.001) в момент введения, резорбция белка из тканей конечности в кровоток в первые 2 мин (+0.73+0.31 г; Р < 0,01), К концу наблюдений на 9 мин артерио-ве-нозный баланс (ABB) белка менялся на противоположный (-0.33+0.08 г; Р < 0.05), ABB воды составил -20,83+2.37 мл (Р < 0.05, рис,7).

В следующей серии экспериментов период внутриартериалыюго введения ЗХ NaCl по той же схеме характеризовался усилением фильтрации воды, также поступлением белка в кровоток; которое сменялось переходом его в ткани (к 9 мин ABB воды -5.6+1.2 мл, белка --0.7+0.3 г.)

Адсорбция белков на мембране эритроцитов при водно-солевых инфузиях. Для сопоставления гранскапиллярного баланса белка с его адсорбцией на мембране эритроцитов,были проведены опыты с определением количества белков, адсорбированных на эритроцитах артериальной и венозной крови после внутривенного введения солевых растворов (внутривенное введение солевых растворов вызывало аналогичные сдвиги транскашшшрного обмена; Гареев, 1989). Был использован оригинальный метод определения мембраноадсорбированных белков, который в отличие от метода "смывов" (Гареев, Беклемишев, Мурзамадиева, 1991), не мог влиять на исходный "газовый состав" эритроцитов.

В фоновых экспериментах количество мембраноассоциированных белков на эритроцитах артериальной и венозной крови составило соответственно 3.76+0.85 и 5.03+0.66 пг/эр, их разница - -1.27+0.42 пг/эр (Р < 0.05). Преобладание белков, адсорбированных на мембране эритроцитов венозной крови по сравнению с таковыми артериальной, вероятно, обусловлено увеличением объема и площади поверхности эритроцитов венозной крови из-за насыщения их углекислым газом.

Гидремия, вызванная инфузкей (2 мл/мин, 60 мин), в равной степени снижала концентрацию гемоглобина артериальной и венозной крови (85.5 и 81.6Х от фонового уровня). Количество мембраноадсорбированных белков на эритроцитах венозной крови уравнялось at таковыми артериальных: 3.34+0.89 и 3.30+0.42 пг/эр. Их АВР в среднем стала +0.04+0.02 пг/эр (Р > 0.05).

Известно, что 3% NaCl вызывает уменьшение объема эритроцитов за счет осмотического эффекта (Гареев, 1999), Это, возможно, уси-

ливает переход в плазму мембраноассоциированных белков.

Внутривенное введение ЗХ МаЯ в том же объеме, что и нормо-тонического, как и предполагалось, вызвало еще большее разведение артериальной и венозной крови. Снизилось и количество белков, адсорбированных на эритроцитах артериальной и венозной крови: соответственно 2.56+0.27 И 2.55+0.20 пг/вр (разница +0.01+0.037, Р > 0.05). Коэффициент корреляции между содержанием гемоглобина в крови и количеством белков, ассоциированных с мембраной эритроцитов в фоновых экспериментах и при инфузии солевых растворов был равен 0.86, Р < о.05.

Таким образом, чем значительнее была гидремия, тем выражен-нее эффект снижения адсорбции белка на эритроцитах. Более значительное уменьшение адсорбции белка на эритроцитах венозной крови, возможно, является одной из причин того, что в результате инфузии физиологического раствора происходило преобладание перехода протеинов из крови в ткани (рис.7).

Рис.7. Артерио-венозные балансы белка (1) и воды (2) в конечности при инфузии физиологического раствора в бедренную артерию. Стрелками обозначены начало и конец инфузии. По оси абсцисс -время (мин); по оси ординат - баланс.(воды - мл, белка - *10 г)

Влияние стабилизаторов на адсорбцию протеинов на мембране эритроцитов. Денатурированные белкя в первую очередь адсорбируются на эритроцитах (Mota eit al., 1980). Закономерно встал вопрос, влияют ли стабилизаторы на этот процесс? В наоих экспериментах при инкубации отмытых эритроцитов с нативными белками, в смыве получили 12.73-13.17 г/л белка, в варианте инкубации с денатурированными (обезжиренными, прогретыми) - 17.20-17.40 г/л, и стабилизированными СЯК прогретыми белками - 16.67-16.87 г/л. Эти результаты дают основание для утверждения, что протеиновые стабили-

мив

заторы не препятствуют адсорбции денатурированных белков на мембране эритроцитов.

4. Влияние тканевых регуляторов на показатели лимфы' и лимфотока из грудного протока

В интерстиции, наряду с системой гиалуронидааа-гиалуронаны, вырабатываются биологически активные вещества, называемые тканевыми регуляторами. К ним относятся простагландины и лаброкшгы, образующиеся в тучных клетках (лаброцитах) интерстиция. При дег-рануляции лаброцитов секретируются даброкины. Дегрануляция усиливается при накоплении в интерстиции белков, гидратации и дегидратации тканей. Это предполагало влияние на этот процесс блокады лимфооттока.

Влияние окклюзии кишечного лимфатического сосуда на тучные клетки брыжейки. Действительно, в наших опытах, окклюзия кишечного лимфатического сосуда (7 крыс) приводила как к увеличен™ общего количества клеток брыжейки, так и их дегранулированных форм. Число полных клетск уменьшалось (табл.2).

Таблица 2

Количество и распределение лаброцитов брыжейки крыс после 48 часовой окклюзии кшпечного лимфатического сосуда

Воздействие Общее число теток Полные клетки, У. Дегранулированные клетки, X

на 1/3 на 2/3 полностью

Контроль 882 +30 47.36 +5.17 20.84 +4.37 9.27 +1.25 22.63 +3.79

Окклюзия 1084 +48* 35.05 +3.27 30.64 +4.61* 11.98 +1.03 22.48 +2.98

*) различия статистически достоверны по сравнению о контролем, Р < 0.05

Тучные клетки располагаются как вокруг кровеносных, так и лимфатических капилляров. Нарушение лимфооттока, вызванное перевязкой лимфатического сосуда, вероятно, стимулировало дегрануля-цию, в первую очередь, паралимфатических тучных клеток. Несомнен-

но, часть лаброкинов, при любой возможности, поступает в лимфу. Изучение эффекта лаброкинов при их резорбции в лимфатические сосуда стало нашей следующей задачей.

Влияние внутривенного и внутрилиматического введения ряда лаброкинов на показатели лимфы и лимфотока из грудного протока. Введение растворов гистамина в лодыжечный лимфатический сосуд (0.2, 0.5, 0.8 и 1.0 мкг/мл, 5 мин) вызывало снижение концентрата! белка в лимфе и скорости лимфотока на 20-30% ниже фонового уровня (7 собак). Неравномерность содержания лейкоцитов в лимфе грудного протока: 3.21+ 2.56 (фон) и 19.55+14.21 тыс/мкл (4 мин) -вызвана, на'наш взгляд, стимуляцией, гистамином сократительной активности гладкой мускулатуры лимфатических сосудов и узлов. Уменьшение транспорта белка, с лимфой, скорее всего, обусловлено влиянием гисгашна на обмен воды и белка в лимфатическом узле (Бородин, Григорьев, 1988). На процесс лимфообразования накладывается фильтрация жидкости из лимфатических сосудов по ходу движения лимфы. Лимфу, вероятно, разбавляет и инфузат. К окончанию инфузии транспорт белка с лимфой снизился на треть от фонового уровня.

Эти результаты дополняют полученные нами данные по транскапиллярному обмену воды и белка. Учитывая, что под влиянием гиста-мина усиливается тромбообразование, в следующей серии опытов в бедренную артерий ыы вводили гистамин в смеси с гепарином (19.5 и 58.5 мкгЛдан, 3 мин). При этом зарегистрировано ускорение артериального кровотока (втрое выше исходного) и повышение венозного давления, К 9 мин АВР воды составил -18.9+0.5 мл, белка --1.94+0.4 г. Из-зз технических сложностей мы не регистрировали одновременно лимфоток из конечности, но лимфостимулирующее влияние гистамияа хорошо известно (Ризгпуак et а1., 1969). На основании этих данных можно полагать, что при дегрануляции тучных клеток будет усиливаться лимфообразование, лимфоток и транспорт белка с лимфой. В целом, Еышеукааанкое позволяет сделать заключение, что при дегрануляции лаброцитов гистамин с гепарином должны способствовать очищению интерстиция: усиливать —переход белков в лимфатическое и, вероятно, кровеносное, русло.

. Таким образом, внутрилимфатическое введение гистамина сопровождается уменьшением транспорта белка с лимфой из грудного протока га счет одновременного сн.здения скорости лимфотока и кон-

центрации бедка в лимфе.

При внутривенном введении серотонина (184 мкг) отмечалась умеренная реакция со стороны лимфатической системы (7 собак): временное достоверное снижение лимфотока из грудного протока с 466+72 до 322+43 мкл/мин (3 мин, Р < 0.05); уменьшение концентрации белка в лимфе с 48.93+2.03 до 44.15+1.83 г/л. Количество лей-, коцитов в лимфе варьировало на уровне фоновых показателей (1.05+0.16 тыс/мкл). Первоначальное снижение транспорта белка с лимфой с 24.47+4.45 до 15.38+2.25 мг/мин (15 мин) сменялось его восстановлением (20 мин) до фонового уровня (24.51+2.26 , мг/мин). Высокий коэффициент корреляции между лимфотоком и транспортом белка (0.98), в отличие от таковых между транспортом белка и клеток (0.66), лимфотоком и транспортом лейкоцитов (0.70). указывает на го, что серотонин при внутривенном введении оказывал влияние в основном на транспорт протеинов..

При эндолимфатической инфузии (7 собак) серотонина (3.7, 4.6, 7.4 и 9.2 мкг/мл, 5 мин) скорость лимфотока, независимо от дозы, сохранялась на фоновом уровне (330+46 мкл/мин); концентрация белка и содержание лейкоцитов в лимфе к концу наблюдений снижались: соответственно с 50.24+2.41 до 47.28+1.63 г/л; с 3.41+ 0.71 до 1.47+0.30 тыс/мкл (Р < 0.05). Отмечена тенденция роста транспорта белка с лимфой с 14.53+1.3 до 19.32+1.63 мг/мин (Р <0.05), тогда как транспорт клеток с лимфой характеризовался снижением.

Таким образом, результаты наших исследований показывают, что эндолимфатическое введение серотонина в противоположность внутривенному стимулирует дебит белка с лимфой.

Влияние внутривенного и эндолимфагического введения ряда простагландинов на показатели лимфы и лимфотока из грудного протока. Наряду с гистамином, гепарином тучные клетки продуцируют простатландины, являющиеся тканевыми модуляторами. Простенон (8 собак), препарат сосудистого действия (простатландин Ега), при внутривенной инфузии (500 мкг)'вызывал недостоверное увеличение лимфотока (от 451+45 до 514+70 мкл/мин) в течение всего периода наблюдений (20 мин). Концентрация белка в лимфе после временного увеличения (4-9 мин), в основном сохранялась на фоновом уровне (14.23+0.86 г/л). Количество лейкоцитов в лимфе нарастало до 5 мин инфузии (8.87+4.26 тыс/мкл), к концу наблюдений стало ниже

фоновых значений (3.57+1.60). В первые 5 мин наблюдалось выраженное повышение дебита белка с лимфой (на 40-50& от фонового уровня), на 8 и 17 мин отмечен повторный рост показателя. В целом, до конца наблюдений транспорт белка при всех вариантах сохранялся на уровне выше фонового. Транспорт клеток с лимфой варьировал волнообразно: повышение сменялось снижением до уровня ниже исходного.

При эндолимфатическом введении простенона (7 собак, 2, 5, 8 и 10 мкг/мл, 5 мин) наблюдалось недостоверное увеличение лимфото-ка из грудного протока. Концентрация белка в лимфе снижалась, достоверно изменяясь лишь при введении 8 и 10 мкг/мл простенона с 32.46+7.78 до '20.77+3.66 г/л. В отличие от этих показателей, содержание лейкоцитов нарастало, порой превышая фоновые (21.85+19.16 тыс/ыкл) в 3-3.5 раза (6.88+3.36 тыс/мкл), особенно при инфузии простенона в дозе 10 мкг/мл. Повышение транспорта белка с лимфой сменялось его снижением до исходного Vровня, тогда как в транспорте клеток выявлена обратная зависимость от дозы простенона.

Таким образом, можно сделать заключение, что внутривенное введение простенона в противоположность внутрилимфатическому стимулирует лимфообразование.

Внутривенное введение другого простагландина - эсгрофана, оказывающего в основном действие на гладкую мускулатуру, (8 собак, 100 м^) характеризовалось недостоверным усилением лтфото-ка: уже на 1 ми« лимфоток из грудного протока превышал в 1.5 раза (1275+323 мо/мин) фоновый (858+204 мкя/мин), максимума показатель достиг на 13 мин. В отличие от простенона, при инфузии эсгрофана концентрация белка в лимфе на 7-15 мин была выше фоновой в среднем на 30% (соответственно 49.15+6.19 г/л и 30.05+7.20), к концу наблюдений снизилась до исходного уровня. Количество лейкоцитов в лимфе варьировало. Расчет транспорта белка с'лимфой выявил резкое увеличение показателя на 142& от фоновых значений до 13 мин наблюдения, к концу наблюдений превышение составило 64-70%. Транспорт клеток с лимфой в целом нарастал и был выше исходного в 2-2.5 раза.

Первая волна изменений лиыфогока из грудного" протока (1-2 миц) при введении в кровоток веществ связана о непосредственным их действием на транспорт лимфы и.(или) с изменением перехода воды через стенку кровеносных ыкрососудов. Вторая волна (13-20

мин) - со сдвигами траискапиллярного обмена белка. Первая волна, в силу вышеуказанного механизма и проницаемости стенки лимфатических сосудов для воды, характеризуется обратной направленностью изменений лимфотока и содержания белка в лимфе. Вторая полна -могут быть самые разные сочетания динамики лимфотока и содержания белка (Гареев, 1989). При внутривенном введении просгенона имеюг--ся обе волны изменений лимфотока без какого-либо преобладания одной ив них.

ЭндолимФатическое введение эстрофана (1, 2.5, 4 и 5 мкг/мл, 5 мин) сопровождалось тенденцией увеличения скорости тока лимфы, достоверным увеличением концентрации белка в лимфе грудного протока с 20.51+3.05 (фон) до 29.60+3.43 г/л, Р < 0.05). Содержание лейкоцитов в лимфе варьировало в пределах фоновых значений (1.98+0.38 тыс/ми). Транспорт белка с лимфой по мере увеличения инфуаируемой дозы нарастал. Вероятно, это обусловлено стимулирующим влиянием эстрофана на фазную и тоническую активность лимфатических сосудов конечности (Sjoberg, Steen, 1991).

Полученные данные позволили заключить, что зстрофан, введенный как внутривенно, так и эндодимфатически, стимулировал транспорт белка и лейкоцитов с лимфой.

Анализ эффектов внутривенного и внутрилимфатического введении тканевых регуляторов па показатели деятельности лимфатической системы еыявил определенные различия. Это указывает на то, что инфузия их в лимфатические сосуды, с одной стороны, точнее моделируют эффект лаброкинсз на лимфатическую систему при их поступлении в лимфу, с другой стороны, на комплексный характер их действия на лимфатическую систему.

б. Роль интерстициального пространства в транскапиллярном обмене •

Судьба воды, поступившей в интерсгициальное пространство, зависит от системы гиалуронидаза-гиалуроновая кислота (Guyton, 1972; Laurent, 1972).

Транскапиллярный обмен белка и воды при инфузии гиадуроиида-зы. В наших опытах (4 собаки) инфузия раствора гиалуронидазы в бедренную артерию (200 Ед/мин, 0.64 мл/мин) в течение 40 мин не сопровождалась заметными гбиодинамическими сдвигами. Но АВБ воды

был равен 64.04+4,61 мл, белка - -2.37+0.45 г (рио.8).

Риалуронидаза, деполимериаующая гиадуронаны (основное вещество), вызывает потерю гидрофильности интерстицнального пространства и, вследствие этого, накопление свободной интерстициаль-ной жидкости. В кровоток реаорбировалась вода, появившаяся в результате деполимеризации гиалуронанов. Параллельно снижается эффект пространственного высвобождения макромолекул основным веществом и белок из перикапидллрного пространства, с близким по содержанию их в плазме крови, по концентрационному градиенту переносится вглубь основного вещества. Это, в свою очередь, влечет диффузию белка из крови в перикапиллярные каналы.

С позиций этих данных, логично известное усиление лимфотока и транспорта белка с лимфой при введении гиалуронидаэы (йизгпуак еЬ а1., 1969;и др.). Усиление перехода белка в лимфу можно объяснить также устранением функционального барьера и превращением интерстицнального пространства в простую транзитную среду.

Фазы набухания соединительной ткани. Ранее нами установлено, что гидратация кусочков подкожных соединительной и «провой ткани, пупочного канатика в водных растворах осуществляется в две фазы: быстрая обусловлена поступлением воды в тканевые каналы, замедленная - собственно связыванием воды гиалуронанами. У кусочков соединитель:"« ткани, предварительно обработанных гиалуронидазой,

г, мл

Рис.8. Аргерио-венозные балансы белка (1) и воды (2) в конечности при ин-фувии гиалуронидаэы в бедренную артерию. Обозначения те же, что и на рис. 7

отсутствовала вторая фаза гидратации. При этом масса ткани уменьшалась. Добавление в раствор белковых стабилизаторов (СЖК, глюко-

зы) не меняло вышеуказанную двухфазность набухания ткани. Эксперименты, проведенные на образцах тканей, та: в условиях натяжения их краев, так и свободного набухания показали, что протеиновые стабилизаторы rajone не предотвращали тепловую денатурацию коллагена. Это обусловлено, вероятно, тем, что стабилизация коллагено-вых фибрилл осуществляется белково-полисахаридными комплекса),ш-(Серов, Шехтер, 1981). Возможно, что стабилизация структурных протеинов в интерстиции предопределяется синтезом и катаболизмом соединительнотканных белков, как функции фибробластов. Это позволяет сделать заключение, что белковые стабилизаторы (свободные жирные кислоты, глюкоза) оказывают влияние преимущественно на свойства протеинов сыворотки крови.

Влияние лаброюшов на набухание соединительной ткани в растворах стабилизированных и денатурированных белков . На обмен воды и белка в интерстиции, следовательно, на лимфообращение, влияет комплекс факторов, в том числе способность гиалуронанов интерсти-циального пространства набухать в водных растворах и дегидратироваться. Лаброкины (гистамин, гепарин, серотонин и др. вещества) благодаря своим свойствам должны влиять на обмен белка и воды в интерстиции, в частности, на гидратацию соединительной ткани. Предполагалось, что это _влияние может быть разным в зависимости от присутствия нативных й денатурированных белков. При изучении этих вопросов выявлено (табл.З), что имеется достоверная разница (по сравнению с контролем) уменькения набухания после добавления в раствор гистамина и гепарина. Смесь лаброкинов дагала уменьшение гидратации яри концентрации гистамина 10~5 и 10"7 М. Отметим, что смесь составлена по соотношению серотонина, гистамина и гепарина в тучных клетках (1:20:60 по массе). Но, поскольку молекулярная масса гепарина в 50 и 100 раз больше, чем у серотонина и гистамина, именно молекул гистамина больше всего в гранулах лаброцитов и в использованной нами смеси лаброкинов.

Гепарин относится к гиалуронанам и по многим аспектам действия является антагонистом гисг'амина. Тем не менее, в диапазоне наиболее "физиологической" концентрации гистамина (Ю-7 М) смесь достоверно снижает набухание пупочного канатика. In situ это должно вести к появлению свободной воды, отсоединенной от гиалуронанов. Дегидратация основного вещества ведет к усилению эффекта выталкивания макромолекул в тканевые каналы. В своп очередь, при

появлении свободной води повышается интерстициалыюе давление, расширяются тканевые каналы, улучшается проходимость макромолекул

Таблица 3

Набухание пупочного канатика в растворах нативных и денатурированных белков при действии лаброкинов

Доза

Воздействие

гистамин

гепарин

серотонин

смесь

Контроль

10~б М

10~е М 10~7 М 10"8 м

10"9 м

0.239+0. 0.236+0.

0.140+0. 0.257+0.

0.220+0. 0.157+0.

0. 260+0. О.353+0.

О.206+0. О.199+0.

0.210+0.015 нативные белки 0.230+0.02? денатурированные белки

037 0.222+0.021 0.133+0.018* 0.156+0.020* 032 0.281+0.080 0.247+0.034 0.143+0.018*

,017* 0.228+0.031 0.243+0.035 .096 0.118+0.008* 0.217+0.031

020 0.178+0.015* 0.183Ю.032 018* 0.224+0.027 0.19370.014

О67 0.204+0.106 0.223+0.030 125 0.161+0.022* 0.297+0.036

014

026

О.233+0.032 0.189+0.035 0.292+0.005* 0.253+0.043

0.190+0.037 0.287+0.036

0.116+0.014* 0.160+0.007*

0.307+0.082 0.240+0.050

0.497+0.170* 0.319+0.093

*) различая статистически достоверны по сравнению контролем, Р <0.05

и агрегатов по ним.

Концентрация 10~5 М гистамина имеется лишь в лаброцитах. Концентрация лаброкинов в ингерстиции, в свою очередь, зависит от степени его гидратации. Известно, что дегрануляция усиливается не только при гипергидратации, но и при дегидратации интерстиция. В последнем случае важнее усилить связывание воды. Возможно, данные по концентрации 10"6 М отражают эту сторону действия лаброкинов. Обращает на себя внимание, что гепарин в этой дозе усиливает гидратацию ткани в присутствии денатурированных протеинов и уменьшает в растворе нагивнык. Известно, что денатурированные белки стимулируют дегрануляции тучных клеток. Денатурированные протеины накапливаются в тканях при длительном обезвоживании, что, в совокупности логично с точки зрения необходимости очистки ткани от денатурированных протеинов.

Более пестрая картича отмечена при инкубации проб соединительной ткани в растворах обезжиренных и стабилизированных жирной кислотой и глюкозой белков. Вероятно, в этих экспериментах накладывается эффект некоторого избытка жирных кислот и глюкозы, изменение pH растворов и др. факторы. Данное предположение - тема отдельной биофизической работы.

Концентрация белка в иктерсгициальном пространстве. Этот показатель в определенной степени зависел от использованных методов и поэтому нет единого мнения по этому вопросу (Aukland, Nlcolay-sen, 1981; Witte, Zenses-Geprags, 1978; и др.). В наших опытах в пробах подкожной соединительной ткани конечности собаки содержание белка, полученного экстрагированием (в отличие от других авторов), было равно 14.4+1.4, подкожной жировой - 19.9+5.3, брыжейке - 17.8+4.0 г/л. Преобладание концентрации белка в брыжейке обусловлено ее низкой гидратацией. Концентрация белка в соединительной ткани находилась в обратной зависимости от исходной гидратации ткани. При повышении венозного давления с 10 до 30 см вод.ст. и соответственно усилении фильтрации воды из крови в ткани, показатель снижался с 17.8+3.9 до 13.0+5.8 г/л. Содержание белка, с учетом наличия свободного гемоглобина, варьировало от 5.26 до 26.47 и в среднем составило 13.59+2.05 г/л. Исходя из данных, что тканевые каналы со свободной жидкостью занимают объем не Еыше IX. (Casley-Smith, 1980), мы рассчитали распределение белка в толше основного вещества (14.7-14.9 г/л) и перикапилляркых, периколлагеновых пространствах (49.7-53.9 г/л). Последний показатель оказался близким к таковому в плазме крови.

К вопросу о механизмах т)сане-крово-лимфатического обмена белка и воды. Анализ полученных, а также литературных данных, дает нам основание для утверждения, что интерстиций не является инертной структурой, а совокупность ее физико-химических свойств создают регулируемый функциональный барьер. Концентрация белка в тканевых каналах (в первую очередь паракапиллярных), на ная взгляд, создает первый компонент этого функционального барьера на пути макромолекул из крови в ткани. Второй - гидрофильные гиалу-ронаньг. Как было показано в наших опытах,'их деполимеризация (гиа-луронидаэой) сопровождается выходом белка из крови в ткани. Это, наряду с известными данными об увеличении лимфотока и транспорта белка с лимфой после введения гиалуронидазы, считаем, является

следствием снижения эффективности барьера в гемато-лшфатическом транспорте веществ. Совокупность интерстициавьных факторов создает систему, в которой, при изменении фильтрационного давления, дегрануляции тучных клеток, сдвигах в соотношении гиалуронида-за-гиалуронана и т.д., фактически постоянно происходят колебания движения (по скорости н направлению) макромолекул и • воды. Этим повышается интенсивность диффузионно-конвекционного обмена макромолекул в тканях, другими словами, оптимизируются возможности метаболизма каждой клетки, что является главной задачей кро-во-ткане-лимфатического обмена.

Несмотря на то, что лимфатической системе присуща резорбция и транспорт денатурированных белков, большие их количества блоки -руют пропускную способность лимфатических узлов. Положение усугубляется невысокой в норме их протеолитической активностью. При недостаточности доузлового лимфотока, послеузловой лимфоток поддерживается эа счет перехода воды и белка из крови в лимфу с а),ого узла (Бородин, Григорьев, 1988). Все это дает основание для предположения, что задержка денатурированных белков в узлах (при неизмененной протеолитической активности) необходима, в первую очередь, для запуска иммунологических процессов, а не для утилизации протеинов. В этом аспекте функция многозвенного функционального интерстициа^ного барьера сводится к предохранению лимфатической системы от поступления в лимфу чрезмерного количества денатурированных белков. Отсюда вытекает заключение, что иммунологическая функция в обычных условиях является ведущей,

В состав тучных клеток входит хнмааа (ингитор липаз). Наряду с этим гепарин активирует липазы и липопротеиназы,.что проявляется несколько позднее, по мере инактивации гистамина гисгаминазой (часть гепарина связывается гистачином). Продуктами ферментативной активности липаз и липопротеиназ являются свободные жирные кислоты. Просгаглаидины, наоборот, угнетают липолиэ. Наряду с печенью, катаболизм гиалуронанов осуществляется также в лимфоузлах (Серов, Шехтер, 1981; Laurent, 1988). Распад гиалуронанов (муко-полисахаридов) сопровождается появлением свободных Сахаров. Иными словами, имеется сложная взаимосвязь между стабилизаторами и тканевыми регуляторами. Все это, наряду о собственными данными, позволяет уточнить схему механизмов гемато-лимфатического обмена воды и белка (рис.9, дополненные■механизмы - в двойном контуре).

Концентрация белка в плазме

1ЕЕ

Адсорбция белков на поверхности! эритроцитов |

Возврат белка непосредственно в кровоток

Транскапиллярный обмен б ел га и воды

Чл

Морфологический интерстициальный барьер

Сократительная

активность лимфатических сосудов.факторы лимфотока

Растяжимость коллагенового

кариаса

-

Функциональный интерстициальный барьер

Лимфообразование

Эффективное фильтрационное давление

Тканевые регуляторы

1 *

Стабилизаторы сывороточных белков

Ингибиторы | стабилизаторов

Возврат с лимфой белка и воды в кровь

Рис.9. Схема механизмов гемато-гисто-лимфатического обмена воды и белка

При образовании белковых агрегатов в интерстиции усиливается дегрануляция лаброцптов. Секретируемый при этом гистамин повышает сосудистую проницаемость, усиливая резорбцию белков в лимфатическую систему. Исходя из изложенного в этом разделе, возможен (при экстраполяции наши данных) распад агрегатов или их образование. Денатурированные белки токсичны активированными аминными, карбоксильными и сульфгидрилъными группами. Поэтому агрегацию (замыкание активных групп на других молекулах белка), протеолиз, усиление резорбции в кровеносную и лимфатическую системы можно расценивать как защиту клеток от известного (Александров, 1980) их клеткоповреждающэго действия. В целом, взаимосвязь функций всех тканевых регуляторов направлена, на наш взгляд, на очищение ин-терстициального пространства от денатурированных, агрегированных белков.

Вышеизложенное дает основание к обобщению, что совокупность действия стабилизаторов и тканевых регуляторов в гемато-гис-го-лимфатическом обмене веществ создает многозвенный комплекс предохранения кровеносной и лимфатической систем и интерстициаль-ного пространства от денатурированных белков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поставленные цель и задачи решены.

Проведенные исследования свидетельствуют о наличии ранее неизвестных механизмов, участвующих в крово-ткане-лимфатическом обмене протеинов и воды. Впервые не только поднят вопрос, но и начаты исследования роли протеиновых стабилизаторов в физиологических процессах. Впервые показано, что транскапиллярный баланс белка коррелирует с разницей адсорбции его на поверхности"артериальных" и "венозных" эритроцитов. Определено, что утилизирующая способность лимфатической системы существенно ниже таковой печени. Получены косвенные данные о том, что в определенных концентрациях гистамин и смесь лаброкинов могут оказывать влияние на гидратацию интерстиция и т.д.

Закономерно, что вместе о тем расширились и определились горизонты изучения этих механизмов. Так, плодотворным представляются исследования влияния стабилизаторов на фракции белков, участвующих в крово-лимфатическом обмене. Весьма общее представление имеется о веществах, разрушающих стабилизаторы или обладающих выраженными дестабилизирующими свойствами. Перспективно выявление физиологичс"кой значимости стабилизаторов быстрого и замедленного действия для организма в целом. Стабилизаторы вместе с белками адсорбируются на поверхности эритроцитов. Как влияют на это биологические регуляторы (катехолашны, простагландикы, лаброкины и т.д.) - пока не ясно. По сути - это новые направления физиологических исследований.

Проведенная работа позволила обосновать рекомендации для практической лимфологии. Прикладная значимость не только в конкретных предложениях, но и в плодотворности самой теоретической концепции. К примеру, существенным уточнением является утверждение, что лимфатическая система не приспособлена к выведении из тканей больших количеств денатурированных белков, токсичных начал, опухолевых клеток с адекватной реализацией защитно-барьерной функции. Эта система, образно говоря, требует целенаправленную помощь при такой ее перегрузке. Это, на наш взгляд, важное положение для клинической лимфологии. .

ВЫВОДЫ

1. В органивме имеются вещества, которые стабилизируют и дестабилизируют сывороточные белки, участвующие в гемато-гис-го-лимфатическом обмене. Действие системы этих веществ направлено, на выполнение Белками их физиологических функций. Пластичность системы создается тем, что стабилизирующим свойством обладают представители разных классов химических соединений, различающиеся по скорости эффекта, а также наличием процессов, регулирующих уровень стабилизаторов (дестабилизаторов) в крови, лимфе и ин-терсгициальном пространстве..

2. Исследованные быстродействующие стабилизаторы не предотвращают тепловую денатурацию коллагена, не влияют на двухфазный характер и температурную зависимость набухания соединительной ткани, а также адсорбцию протеинов на мембране эритроцитов. Это дает основание полагать, что изученные стабилизаторы оказывают свое действие преимущественно на сывороточные белки.

3. Быстродействующие стабилизаторы замедляют, но не блокируют протеолиз, что имеет существенное значение в процессах метаболизма белка по ходу движения лимфы.

4. Артерио-венозная разница белков, адсорбированных на мембране эритроцитов является важным механизмом регуляции гемато-лимфатического обмена веществ. Инфузия в кровоток водно-солевых растворов вызывает снижение адсорбции протеинов на эритроцитах с устранением существующего в большинстве случаев преобладания "венозных" мембраноассоциированных белков. Уменьшение адсорбции протеинов на эритроцитах венозной крови коррелирует с накоплением протеинов в интерстиции.

5. Введение в кровоток белковых растворов, подвергнутых ультразвуковому воздействию, ведет к замедлению лимфотока в магистральных сосудах с уменьшением транспорта белка о лимфой.

6. Эндолимфатическая инфузия растворов стабилизированных протеинов, как и нативных, в отличие от денатурированных, стимулирует лимфоток в магистральных сосудах, что свидетельствует об отсутствии нарушения этими белками пропускной способности лимфатических сосудов и узлов.

7. Инфузия денатурированных белков в кровь на фоне порто-ка-

Бального анастомоза вызывает выраженное уменьшение транспорта белка с лимфой. По механизму эффект схож с торможением оттока лимфы при андолимфатическом введении растворов этих протеинов.

8. Окклюзия кишечного лимфатического сосуда вызывает дегра-нуляцию тучных клеток брыжейки. Лиыфостатическая дегрануляция лаброцитов, несомненно, направлена на восстановление нарушенного лимфооттока,

9. Выявленная сложная зависимость набухания пупочного канатика в растворах белков (нативных, денатурированных, обезжиренных и стабилизированных) от концентрации лаброкинов, вероятно, способствует интенсификации движения протеинов в интерстициаяьном пространстве.

10. Действие лаброкинов на лимфатическую систему при андолимфатическом введении отличается от эффекта их введения в кровоток. Это указывает на то, что инфузия их в лимфатические сосуды, с одной стороны, точнее моделируют эффект тканевых регуляторов на лимфатическую систему при их поступлении в лимфу, с другой стороны, на комплексный характер их действия на лимфатическую систему.

11. В гемато-гисто-лимфатическом обмене веществ взаимодействие белковых стабилизаторов и тканевых регуляторов создают комплекс защиты кровеносной и лимфатической систем и интерстициально-го простри *ства от денатурированных белков.

ШЩДРШЮ

1. Монография "Методики исследования гемато-лимфатического обмена" (Гареев Р.А., Беклемишев И.В., Ыурзамадиева A.A. Алма-Ата: Наука, 1992); "Транскапиллярный обмен и лимфообразование" (Гареев P.A. Алма-Ата: Наука, 1989; глава 5);

2. Авторские свидетельства N1254386, N1464079 (авание "Изобретатель СССР");

3. Методики и рационализаторские предложения, внедренные в исследования, проводимые в лабораториях Института физиологии человека и животных HAH PK.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ГЕКЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мурзамадиева А. А. Реакция тучных клеток при окклюзии кишечного лимфатического сосуда. /V Тр. науч. конф. мол. уч. Ин-та физиол. АН КазССР, поев. 60-летию образ. КазССР и КПК, Алма-Ата, 1980. - Деп. в КазНИИНТИ 19.11.81. - N Р-216. - С. 61-64.

2. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Соотношение содержания бел-, ка в подкожной соединительной ткани конечности и лимфе. // Венозное кровообр. и лимфообр.: Матер. П Всес. симп. Уфа, 1981. - С. 211-213.

3. Мурзамадиева А.А., Кульбаев И.О., Гареев P.A. Содержание плазменных белков в подкожной соединительной ткани конечности собаки. // Физиол. ж. СССР. - 1981. - Т.67. N 10. - С. 1558-1561.

4. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Показатели гидратации подкожной соединительной ткани собаки. // Изв. АН КазССР, сер. (¡полог. - 1981. - N 5. - С. 71-74.

5. Мурзамадиева A.A. Содержание белка в различных видах соединительной ткани. // Вестник АН КазССР. - 1982. - Н 10. - С. 71-72.

6. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. К методике определения белка в присутствии гемоглобина. // Изв. АН КазССР, сер. биолог. -1982. - М б. - С. 76-79.

7. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Установка для регистрации гидратации образцов ткани. // Физиол. ж. СССР. - 1984. - Т.71, N 1.-С. 102-105.

8. Мурзамадиева A.A. Фазы гидратации соединительной ткани. // Тр. науч. конф. мол. уч. Ин-га физиол. АН КавССР, поев. 60-летию образ. СССР, Алма-Ата, 1982. - Рук. деп. в ВИНИТИ 17.11.83. - N 6164-83 Деп. - С. 133-144.

9. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Влияние температуры на набухание соединительной ткани. // Лимфообр. и транскапил. обмен: Тр. Ин-та физиол. АН КазССР, Т.27, - Алма-Ата. - 1984. - С. 81-86.

10. Мурзамадиева A.A. Действие солевых и белковых растворов на набухание соединительной ткани. // Там же. - С.77-80.

11. Гареев P.A., Кульбаев И.С., Мурзамадиева A.A., Нигай В.Г., Сыэдыкова Р.Т. О механизмах лимфообразования. // Тез. XIV съезда физиол. общ-ва им. И.П.Павлова, Баку, 1983. - Т,2. - С. 157-158.

12. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A., Макарушко С.Г., Сыздыкова Р. Т. Артерио-венозный баланс воды, белка и сухого остатка в конечности собаки. // Участие лимф. сист. в обмене вещ-в: Ин-т физиол. АН КазССР, Алма-Ата, 1984. - Рук.деп. В ВИНИТИ 20,04.84. -N 1932-84 Деп. - С. 13-20.

13. Мурзамадиева A.A. О влиянии адреналина, гистамина и гепарина на гидратацию соединительной ткани. // Там же. - С. 84-90.

14. Кульбаев И.О., Нигай В.Г., Мурзамадиева A.A., Макарушко

С.Г. К вопросу о лимфообразовании в конечностях.// Рук. деп. в ВИНИТИ 23.01.85.N 1443-85 Д&П. - 5 С.

15. Мурзамадиева A.A. Рель интерстиция в переходе воды и белка через гемато-лимфатический барьер. // Веноаное кровооб. и лим-фообр. Матер. 111 Всес. сиып. Таллинн, 1985. - С. 175.

16. Мураамадиева A.A. Гранскапиллярный баланс воды и белка в связи со свойствами интерстиция. // Тр. конф. мол. уч. Ин-та фи-зиол. АН КазССР, Алма-Ата, 1985. - Рук.деп. в ВИНИТИ 10.12.85. -N 846V-B85. - 12 с.

17. Мурзамадиева A.A. Содержание белка в интерстициальной ткани конечности собаки. // Биохим. и фиаиол. лимф. сист.: Тр. йн-та физиол. АН КазССР, Т.SO. - 1985. - С. 104-111.

18. ГареевР.А., Мурзамадиева А.А., Макарушко С.Г., Сыздыкова Р.Т. Артерио-венозная разница еоды и сухого остатка в конечности до и во время введения физиологического раствора. // Там же. - С. 51-58.

19. Гареев P.A.', Мурзамадиева A.A. Схема взаимосвязи интерс-тициального транспорта воды и белка с транскашшшрным обменом и лимфообразованием. // Нейрогум. per. вегет. ф-ций: Матер, науч. конф. Мя -та физиол. АН КазССР, Алма-Ата, 1985. - Рук. деп. в ВИНИТИ 19.05.86. - N 3571-В86. - С. 21-24.

20. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Лимфоток и транскапиллярный обмен воды и белка при инфузии растворов в кровоток. // Акту-ал. проб, лимфологии: Матер.П Всерос. конф. - Москва,1985.- 0.31.

21. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Усовершенствование определения общего белка биуретовым методом. // Ред.ж. "Вонр. мед. химии" АМН СССР, Москва. - 1937, Рук. деп. в ВИНИТИ 13.01.87. - 1! 262-Б87. - .. с.

22. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Способ определения белка в растворе. // Авторское свидетельство N 1254386. - Ell. - 1986. - N 32.

23. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Гомеостатическая функция интерстиция в обмене воды и белка. // Актуальн. пробл. фиаиол. и струга.-функц. основ жизнедеят.: Матер. 1 съезда физиол. Сибири. - Новосибирск, 1987. - 0. 130,

24. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Зависимая от гипоксии погрешность в определении артерио-венозной разницы воды и белка по гематокриту. // Кровообр. в усл. высокогор. и эксперим. гипоксии: Тез. докл. Ш Всес. симп. - Фрунзе, 1986. - С. 38.

25. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Интерстицнй как функциональный барьер в транскалиллярнем обмене. // Проблемы цейро-гу-мор. per. деят. висцер. сист.: Тез. докл. Всес. конф. поев. 80-летию акад. В.Н,Черниговского. - J1., 1987. - С. 92-93.

26. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A., Сыздыкова Р.Т., Айтмагам-бетова И.А., Макарушко С.Г. Транакапиллярный баланс белка, свойства интерстиция и лимфообразование. // Тез. XV съезда физиол. общ-ва СССР, им.И.П.Павлова. - Кишинев, 1987. - Т.2. - с. 369,

27. Мурзамадиева А..А., Гареев P.A. Артерио-венозный баланс воды и белка при внутриартериалыюй инфузии гиалуронидазы. // Фи-зиол. ж. СССР. - 1987. - Т.73, N 6. - С. 841-844.

£8. Мурзамадиева A.A. Влияние эндолимфатического введения денатурированных и нативных белков аутоплазмы на содержание белка и лейкоцитов, лимфогок в лимфе грудного протока. // Вопросы образ, и трансформации состава лимфы: Ин-т физиол. АН КааССР, Алма-Ата, 1987. - Рук. деп. в ВИНИТИ 03.09.87. - H 6494-В87. - С. 48-54.

29. Мурзамадиева A.A., Садыкова Х.М., Гареев P.A. Сравнительное влияние внутрилимфатического введения простенона и' гистамина на лимфоток, содержание белка и лейкоцитов в центральной лимфе. // Там же. - С. 55-62.

30. Мурзамадиева A.A. Функциональные особенности интерстици-йльного пространства. // Физиол.и биох. гемато-лимфат. взаим.: Тр. Ин-та физиол. АН КазССР, Т.32. - Алма-Ата. - 1988. - С. 91-102.

31. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A., Сыздыкова Р.Т. Транскапиллярный баланс воды и белка при внутриартериальном введении папаверина и норадреналина. // Там же. - С, 50-55.

32. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Артерио-венозный баланс воды и белка в конечности при инфузии смеси гистамина с гепарином. // И5в. АН КазССР, сер.биол. - 1988. - N 2. - С. 65-69.

33. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Итоги и перспективы изучения роли интерстиция в лимфообразовании. // Регул, обраэ. и транспорта лимфы: Ин-г физиол. АН КазССР. - Алма-Ата. - 1988. -Рук.деп.В ВИНИТИ 17.10.88. - N 7472-В88. - С. 28-3S.

34. Мурзамадиева A.A. Действие эндолимфатического введения простагландина Fßa «à лимфоток, содержание белка й лейкоцитов в центральной лимфе. И Там же. - С. 68-76.

35. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Способ определения белка в растворе. // Изобретатель и рационализатор. - 1988. - N 7. - Реклама изобретения.

36. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Артерио-венозный баланс воды и белка в конечности при внутриартериальной инфузии безбелковых растворов. У/ Кровообращение. - 1689. - N 1. - С. 26-30.

37. Мурзамадиева A.A. Интерстициальный барьер в регуляции транскапиллярного обмена, У/ Матёр. I съезда физиол. Казахстана, Алма-Ата, 1988. - Т.1. - С. 28.

38. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Интерстиций в аспектах транскапиллярного обмена и лимфообразовании. // Р.А.Гареев. Транскапиллярный обмен и лимфообразование. - Алма-Ата: Наука. -1989. - С. 52-81.

39. Гареев P.A., Мурзамадиева A.A. Способ определения белка в плазме крови. // Авторское свидетельство N 1454079. - БИ. - 1988.

40. МурзамадиеЁа А,А,, Гареев P.A., Мухаметжанова А.Ж. Артерио- венозная разница ассоциированного с эритроцитами белка до и после введения солевых растворов. // Механизмы гематолимф. цирку-

ляцли ь-в; Лн-т физиол. АН КааССР, Алма-Ата, 1989. - Рук. деп. £, ВИНИТИ 13.02.90. - М 823-В90. - С. 31-39.

41. Murzamadiyeva A. The role of interstitium in lywphforma-tlon. // Prog, in lymphol.: Ed. H.Partsch. Vol.12. - Amsterdam, 1990.

42. ГареевР.А., Беклзмшшв II.Б., Мурзамадиева A.A. Методики научения гематолимфатического обмена. - Алма-Ата; Наука. - 1991.

- 136 с.

43. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Влияние стабилизаторов белка на функции лимфатической системы. <•'/ Рук. деп. в КазгссИНТИ 16.03.94. - Per. N 4593-Ка94. - 9 с.

44. Мурзамадиева A.A. Влияние денагурирзванного белки на лимфообращение в условиях порто-кавальиого анаотомоза. /V Рук. деп. в КазгосИНГИ 16.03,94. - Per. (1 4695-Ка94. - Б с.

45. Мурзамадиева А.А, Тесты стабилизации и денатурации белка. // Рук. деп. в КаагосИНТИ 16.03.94. - Per. N 4694-Кз94. - 6 с.

46. Мурзамадиева А.А., Ким Г.Д., Садыкова Х.М. Влияние порто -навального анастомоза на лимфообращение при белковой нагрузке. // Изв. HAH PK, сер. биолог. - 1994. - М 3. - С. 67-71.

47. Мурзамадиева A.A. Влияние иафувни стабилизированных протеинов на лимфообращение. // Рук. деп. в КаагосИНТИ 19.06.95 - II 6£06-Ка95. - 6 с.

48. Мурзамадиева A.A. Кинетика стабилизации белков и их про-теолиза. // Рук. деп.в КазгосИНТИ 19.06.95, - И 6207-Ка95. - 7 с.

49. Мурзамадиева A.A., Гареев P.A. Роль стабилизаторов в кро-бо-лимфатическом обмене белка. // Гев. 2 сгезда физиол. Сибири. -Новосибирск, 1995. - С. 53.

50. Мурзамадиева A.A. Роль белкоаих стабилизаторов в крово-димфатическом обмене белка. // Тез. 3 съезда физиол. Казахстана.

- Адматы, ."¡95. - С. 121.

51. ГареевР.А., Мурзамадиева A.A. Крово-ткане-лимфатический обмен макромолекул и клиническая лимфология. // Клиницист. -1995. - МЗ. - 0. 30-37.

ШРЗАШДИЕ8А АНДЖЕЛЛА АТЖО!ЛАРТ-КДВЫ

БЕЛОКТЩ ГЕМАТО-ЛИШАЛЬК АЛМАСУЬВДАГЫ Т¥РАК,ТАНДЫРРЫШТАР МЕН ТКАНДЖ РЕТТЕГШТЕРД1Н МАНЫЗЫ

Протеинд! гурактандыргштардвд зритроциттердег1 белок ад-сорбциясына, дэнекер ткандерд1ц 1с1ну1 мен лимфа айналымыныц кер-сетк!штер1не 8сер1 аерттелген. Тканд1к реттег!штерд1н капиллярлык алмасу мен лимфа айналымы керсетк1птер1не, клетка аралык, сацлау-дагы белок гидратациясы мен алмасуына 8сер1 аныктачган.

Белок пен судын, г е м ато- лимфалык алмасуы бурыннаи белгШ факторлармен катар артерия мен вена каннидагы зритроциттерд!ц бе-локты туту (адсорбциялау) каб1летШц айнрмашылыгына, кан оарысуы белоктарын тура^тандырып-турактандырмайтын эаттар мен тканд!к реттег1штерге тэуелд! болатындыгы дэлелденген. ТкаадЦк реттег!и-тер гиалуронидааа-гиалуроналдар жиынтыгымен (комплекс1мен) б1рле-се огырып, клетка аралия тоспалардьщ (барьерлерд!ц) функционалдик; куй!н еагертед1 дане де лимфаныц туаыухне, 1р1 (магистральдык) лимфа темырларымен онын, тасымалдануына зсер!и тиг1зед1.

Белокты турактандыррыштар мен тканд1к реттегштерд1ц жиынты-гы гемато-гисто-лимфа аралын; зат алмасуы барысында кри тане лимфа айналым куйелер! мен клетка аралык сацлауды вэгерген (денатураци-яланган) белоктардан крргайтш комплекс курайтындыгы квн1нде що-рытынды жасалды.

Жумыста автор усанган белок мэлиер1н аныктау эд1стер1 (авторами куэл1к алынган), заттардыц протеинд! турактандыргыш к;асие-т1н, денагурацияланган белоктар М9лиер1н аныктайтын, ткандерд!н, 1с1ну1н т!ркеу тгс1лдер1 баяндалган, практикалык; лимфология, фар-макологияда турак,тандыргыштарды пайдалану колдары усынылган.

MURZAMADIYEVA ANGELA ATJ0MART0VNA

THE ROLE OF STABILIZATORS AND TISSUE REGULATORS IN BLOOD-LYMPH PROTEIN EXCHANGE

The influence of protein stabilizators on the protein adsorption by erythrocytes, the swelling of connective tissue samples and the lymph circulation were investigated. The effect of tissue regulators on transcapillary exchange, interstitial hydration and protein exchange, as the lymph circulation were studied too.

It was shown that the bloob-lymph protein and water exchange depended on the differences of protein adsorption by erythrocytes in arterial and venous blood, on the serum protein's stabilizators and destabilizators, and the tissue regulators. The latter in joint with the complex of hyaluronidase-hyaluronans in tissues stipulate the state of the functional interstitial barrier that influence on the lymph formation and the transport of lymph by the magistral vessels.

It was concluded that the cooperation of protein stabilizators and t;^sue regulators created the complex which defended circulation, lymphatic system, and interstitial space from dena-turated proteins in the processes of blood-to-lymph exchange of substances.

The original methods of determination of the protein content (the patents), the protein-stabilizating properties of substances, the concentration of denaturated proteins were proposed.

The use of the stabilizators in practical lymphology, pharmacology was recommended.