Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Роль производных оксида азота в формировании эндогенной интоксикации у онкологических больных с различной распространенностью злокачественного процесса и при некоторых методах аутобиохимиотерапии

На правах рукописи

Нескубина Ирина Валерьевна

РОЛЬ ПРОИЗВОДНЫХ ОКСИДА АЗОТА В ФОРМИРОВАНИИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНОЙ РАСПРОСТРАНЕННОСТЬЮ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО ПРОЦЕССА И ПРИ НЕКОТОРЫХ МЕТОДАХ

АУТОБИОХИМИОТЕРАПИИ

14 00 14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г Ростов-на-Дону, 2008

003166133

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ФЕДЕРАЛЬНОМ ГОСУДАРСТВЕННОМ УЧРЕЖДЕНИИ «РОСТОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ВЫСОКОТЕХНОЛОГИЧНОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ» (директор института - АКАДЕМИК РАН И РАМН, ПРОФЕССОР Ю С СИДОРЕНКО)

Научный руководитель: - доктор биологических наук,

профессор И.А. Горошинская Официальные оппоненты: - доктор медицинских наук,

профессор Ю.Н. Бордюшков - доктор биологических наук, профессор В.В. Внуков

Ведущая организация: Волгоградский государственный

медицинский университет

Защита диссертации состоится » 2008 г в У/ часов на

заседании совета Д 208 083 01 по защите докторских и кандидатских диссертаций при ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (344037, г Ростов-на-Дону, 14-линия, 63)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий»

Автореферат разослан 2008 г

Ученый секретарь совета по защите

докторских и кандидатских диссертаций,

член-корр РАМН, доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В структуре клинических проявлений опухолевой болезни синдром эндогенной интоксикации, отдельные симптомы которого определяют основные субъективные показатели «качества жизни» больных, занимает одно из ведущих мест (Ковтунова ME и соавт,

2003, Наумов M M и соавт, 2004, Афанасьев С Г и соавт , 2007) Проблема эндотоксикоза у онкологических больных имеет особое значение, поскольку его проявления обусловлены не только тяжестью основного заболевания, но и применяемыми методами лечения химиотерапией, хирургическим лечением, лучевой терапией (Крутяков В M , 2001, Афанасьева А H Евтушенко В А , 2005, 2006,) Важную роль в формировании эндогенной интоксикации при новообразованиях играют процессы свободнорадикального окисления (Орлова Р В , 2001, Сафиуллина А Ф , 2002, Целебровская О H , 2003) При нарушении адекватного соотношения окислительных и антиокислительных процессов, несостоятельности антиоксидантных механизмов происходит избыточное накопление свободных радикалов, приводящее к повреждению нуклеиновых кислот, индукции хромосомных аберраций, нарушениям регуляции клеточной пролиферации и апоптоза, играющих важную роль в злокачественной трансформации клеток и опухолевой прогрессии (Пальмина H П , 2000, Савина Е В и соавт , 2001, Меныцикова Е Б и соавт , 2006, Das UN, 2002, Kohen R , Niska A , 2002, Ray G , Husaxn S A , 2002,)

Среди свободных радикалов особое место занимает оксид азота По современным представлениям его роль при злокачественном процессе неоднозначна - он обладает как противоопухолевым действием, так и способностью стимулировать опухолевый рост и метастазирование (Фукузова К и соавт,

2004, Broholm H, Brandstrup О, Lauritzen M 2001, Wang Guang-yi, Wang Xu 2004) При этом не только сам оксид азота, но и его производные осуществляют важные физиологические функции участвуют в регуляции апоптоза, ангио-генеза, свободнорадикальных процессов, кислородсвязывающих свойств гемоглобина (Ванин А Ф , 2001, Зинчук В В , 2003, Лю M Б , 2004, Реутов В П ,

2007) Однако систематизированные сведения об изменении содержания производных оксида азота при опухолевом процессе практически отсутствуют, что и обусловило цель и задачи нашего исследования

Цель исследования. Изучить содержание производных оксида азота в крови онкологических больных с различной распространенностью злокачественного процесса и выраженностью эндогенной интоксикации, а также при использовании некоторых методов аутобиохимиотерапии

Задачи исследования:

1 Исследовать показатели эндогенной интоксикации, свободноради-кального окисления и содержание производных оксида азота в крови больных с различной локализацией злокачественного процесса

2 Изучить показатели эндогенной интоксикации, свободнорадикадь-ного окисления и содержание производных оксида азота в крови больных с различной распространенностью злокачественного процесса

3 Изучить показатели эндогенной интоксикации, свободнорадикаль-ного окисления и содержание производных оксида азота в крови больных при использовании некоторых методов аутобиотерапии - интраоперационной ау-тогемохимиотерапии (ИОАГХТ) и аутомиелохимиотерапии (АМХТ)

Научная новизна работы Впервые у больных раком легкого, раком яичников и у онкологических больных с метастазами в головной мозг исследовано содержание производных оксида азота в плазме крови в зависимости от степени распространенности злокачественного процесса и выраженности эндогенной интоксикации, а также при использовании интраоперационной аутоге-мохимиотерапии и аутомиелохимиотерапии Установлены умеренной силы прямые корреляционные связи между уровнем пероксинитрита и коэффициентом интоксикации Результаты исследования расширяют имеющиеся представления о связи сдвигов метаболизма оксида азота с развитием злокачественного процесса

Практическая значимость работы. В процессе исследования были выявлены биохимические показатели, имеющие диагностическую и прогности-

ческую значимость для оценки степени распространенности опухолевого процесса, которые могут быть использованы для оптимизации комплексного противоопухолевого лечения На основании полученных данных предложен "Способ прогнозирования распространенности метастатического поражения головного мозга" Патент РФ № 2300104 Бюл № 15 от 27 05 2007 Использование способа будет способствовать раннему выявлению генерализации опухолевого процесса

Внедрение результатов исследования в практику здравоохранения.

Метод "Способ прогнозирования распространенности метастатического поражения головного мозга" внедрен и применяется в отделении опухолей центральной нервной системы Ростовского научно-исследовательского онкологического института

Основное положение, выносимое на защиту. Динамика уровня перок-синитрита и нитрозилгемоглобина отражает степень распространенности злокачественного процесса и влияет на выраженность эндогенной интоксикации у онкологических больных

Апробация диссертации. Материалы диссертации были представлены на V Всероссийской конференции молодых ученых в рамках VI съезда онкологов России (12-15 октября 2005 г, Ростов-на-Дону), на VI Межвузовской международной конференции молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (25-26 марта 2005 г , Ростов-на-Дону), на 4-ой и 5-ой Национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека» (18-22 сентября 2005, 2007 гг, Смоленск) Апробация диссертации состоялась 21 февраля 2008 г на заседании Ученого Совета Ростовского научно-исследовательского онкологического института

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 16 печатных работах

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы и 2 глав

собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций Список литературы включает 174 отечественных и 57 зарубежных источника, работа иллюстрирована 12 таблицами и 16 рисунками

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика материала и методов исследования

В работе представлены результаты исследования показателей эндогенной интоксикации, свободнорадикального окисления и содержания производных оксида азота в крови 89 онкологических больных в возрасте от 40 до 70 лет с опухолями следующих локализаций 38 больных раком легкого, из них 29 больных с местнораспространенным процессом (ИВ-Ш стадий) и 9 - с генерализованным (IV стадия), 18 больных с рецидивами рака яичников, из них 10 человек с локальным рецидивом (1-Ш стадий) и 8 - с генерализацией процесса (IV стадия), 33 больных с метастатическим поражением головного мозга (IV стадия), из них 20 человек с одиночным метастазом и 13 - с множественными Все больные находились на стационарном лечении в отделениях Ростовского научно-исследовательского онкологического института в период с 2002 - 2006 гг Одновременно было обследовано 27 относительно здоровых людей без онкопа-тологии, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными больными

У 20 больных раком легкого биохимические показатели исследовали до проведения интраоперационной АГХТ и на 2-е и 14-е сутки после проведенного лечения Группу сравнения составили 9 больных раком легкого, которым проводили только хирургическое лечение

У 18 больных рецидивами рака яичников биохимические показатели изучали перед началом АМХТ и спустя 3-4 недели после 1-го, 2-го и 3-го курсов данного метода аутобиохимиотерапии

Материалом исследования служила плазма крови онкологических больных Забор крови производили из локтевой вены в утреннее время, натощак Кровь собирали в стеклянные пробирки, содержащие раствор гепарина

(ЮООЕД/мл) из расчета 0,05 мл раствора на 1 мл крови, после чего центрифугировали 20 мин при 1500 об/мин

В плазме крови больных исследовали общую концентрацию альбумина (ОКА), которую определяли унифицированным колориметрическим методом с использованием набора реагентов Ольвекс Диагностикум (г Санкт-Петербург) Эффективную концентрацию альбумина (ЭКА), определяли модифицированным методом с использованием конго красного (Мельник И А и соавт, 1985) Связывающую способность альбумина (ССА) вычисляли, как отношение ЭК А/ОКА • 100% (Матвеев С Б и соавт , 2003) Индекс токсичности рассчитывали по формуле ИТ = ОКА/ЭКА - 1 Накопление молекул средней массы (МСМ) в плазме крови исследовали при двух длинах волн А,= 254 нм и \= 280 нм по модифицированному методу Н И Габриэлян, В И Липатовой (1984) Коэффициент интоксикации, рассчитывали по формуле КИМсм/эка = (МСМ254/ЭКА) • 1000 Светосумму перекись-индуцированной люминолзависи-мой хемилюминесценции плазмы крови оценивали по методу В А Шестакова и соавт (1979) Оксидазную активность церулоплазмина определяли колориметрически по методу В Г Колба, В С Камышникова (1982) Уровень пероксинит-рита и продуктов его взаимодействия с тиолами (ONOO" + R-S-NOx), а также содержание нитрозилгемоглобина, нитрозоглутатиона и нитротирозина в плазме крови определяли спектрометрически и рассчитывали с использованием выведенных молярных коэффициентов экстинции (Степуро ИИ и соавт, 1997, Лобышева И И и соавт , 1999)

Статистическую обработку полученных результатов проводили на персональном компьютере с использованием пакета статистических программ «Statistica 6 0»

Результаты исследования

При анализе степени эндогенной интоксикации у больных раком легкого, пациенток с раком яичников и у больных с метастазами в головной мозг были выявлены однонаправленные изменения показателей, характеризующих со-

стояние молекулы альбумина. Общая концентрация альбумина у больных с изученными локализациями злокачественного процесса не зависимо от степени его распространенности не отличалась от нормы, при этом имело место снижение эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности (рис. 1). Наибольшее снижение эффективной концентрации альбумина на 62,5%, 74% и 62,2% и его связывающей способности на 62,7%, 70,7% и 66,6% наблюдалось при генерализации рака легкого, рака яичников и множественном церебральном метастазировании. В этих же группах обнаружено увеличение

содержания молекул средней массы на 28, 46 и 26 % (рис. 2).

100 ---

альбумина альбумина

К

норма;

ПИ местнораспространенный рак легкого; Ц местнораспространенной рак яичников; одиночный п^в в головной мозг;

*- различия достоверны по сравнению группами больных.

Н генерализованной рак легкого; Ц генерализованной рак яичников; щ множественные пИв в головной мозг.

с нормой; **- различия достоверны между

Рис. 1. Уровень эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

X = 254 нм к = 280 нм

норма;

- т

местнораспространенный рак легкого; 1111 генерализованной рак легкого;

□ местнораспространенный рак яичников; Ц генерализованной рак яичников;

™ одиночный пйв в головной мозг; ™ множественные гпв головной мозг.

□

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 2. Содержание молекул средней массы у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

Коэффициент интоксикации и индекс токсичности были повышены у всех обследованных больных (рис. 3). Наиболее высокие их значения отмечались в группах больных с генерализованным раком легкого, яичников и с множественным церебральным метастазированием (коэффициент интоксикации в 4,8, 8,1 и 4,1 раза, а индекс токсичности в 35,7, 78,5 и 34,0 раза соответственно выше нормы).

** **

индекс токсичности коэффициент интоксикации

® норма;

□ ш

местнораспространенныи рак легкого; генерализованной рак легкого;

П местнораспространенный рак яичников;® генерализованной рак яичников;

одиночный пив в головной мозг; Щ множественные пНв в головной мозг.

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 3. Индекс токсичности и коэффициент интоксикации у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что снижение функциональной активности молекулы альбумина вносит значительно больший вклад в формирование эндогенной интоксикации, чем накопление молекул средней массы, а показатели, характеризующие комплексообразующую способность альбумина, могут служить дополнительным прогностическим критерием распространенности злокачественного процесса.

Анализ показателей эндогенной интоксикации позволил разделить всех больных на группы с высокой степенью эндогенной интоксикации, в которой коэффициент интоксикации превышал норму более чем в 4 раза, и группы с менее выраженной степенью эндогенной интоксикации - коэффициент интоксикации в среднем в 1,5 раза выше нормы. В первую группу вошли больные с наибольшим распространением злокачественного процесса (генерализованный

рак легкого, яичников, множественные метастазы в головной мозг). При исследовании показателей, характеризующих уровень свободнорадикальных процессов, было выявлено, что активность церулоплазмина была повышена у больных с высокой степенью эндогенной интоксикации. Светосумма хемилюминесцен-ции в плазме крови больных с высокой степенью эндогенной интоксикации изменялась по-разному: у больных с генерализацией процесса при рецидиве рака яичников - на 96% превышала донорские величины, а в группе больных с генерализованной формой рака легкого и с множественными метастазами в головной мозг была снижена на 44% и 32%. При этом у больных с меньшей степенью распространенности злокачественного процесса и эндогенной интоксикации активность церулоплазмина и интенсивность хемилюминесценции не претерпевала существенных изменений (рис. 4).

250 200

100 50

о

К норма;

И ..

местнораспространенныи рак легкого; генерализованной рак легкого;

□ местнораспространенныи рак яичников; Н генерализованной рак яичников;

в одиночный в головной мозг; Ц множественные пИв в головной мозг.

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 4. Активность церулоплазмина и интенсивность хемилюминесценции у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что нарастание эндогенной интоксикации у онкологических больных не всегда сопровождается усилением интенсивности процессов перекисного окисления липидов, индуцированных активными формами кислорода, о генерации которых мы судили по интенсивности хемилюминесценции. В связи с чем, несомненный интерес

**__АА_ АЛ

л * ** *

1

ш :Щ ** Л * *

1Ь 1 — Р 1

церулоплазмин хемилюминесценция

представляет исследование пероксинитрита - активной формы оксида азота, также участвующей в индукции перекисного окисления липидов.

Уровень пероксинитрита был повышен в крови у всех больных с изучаемыми локализациями злокачественного процесса (рис. 5). При этом у больных с высокой степенью эндогенной интоксикации (генерализованный рак легкого и рак яичников, множественные церебральные метастазы) уровень пероксинитрита достоверно превышал соответствующие значения у пациентов с менее выраженной степенью эндогенной интоксикации (местнораспространенный рак легкого, локальные рецидивы рака яичников, одиночные метастазы в головной мозг) на 64%, 18% и 55% соответственно.

%

250 200 150 100 50 0

S3 норма;

□ Щ

'—' местнораспространенный рак легкого; ш генерализованной рак легкого;

□ местнораспространенный рак яичников; Н генерализованной рак яичников;

Н одиночный mts в головной мозг; Ц множественные mts в головной мозг.

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 5. Содержание пероксинитрита у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

При исследовании уровня нитрозилгемоглобина, оказалось, что у больных с рецидивами рака яичников независимо от степени эндогенной интоксикации и распространенности опухолевого процесса его содержание находилось в пределах нормы (рис. 6). В то время как у больных раком легкого и у больных с метастазами в головной мозг с высокой степенью эндогенной интоксикации уровень нитрозилгемоглобина достоверно превышал значения у больных с меньшей степенью эндогенной интоксикации на 114,7%, 124,7% (Х= 418 нм) и

143%, 53,6% (А.=545 нм). Поскольку увеличение содержания нитрозилгемогло-бина происходит в условиях низкого кислородного насыщения (Зинчук В.В., 2003; Бескровная Е.В. и соавт., 2006), то полученные результаты позволяют предположить нарастание гипоксии у больных генерализованным раком легкого и множественными церебральными метастазами.

300 250 %200 150 100 50

о

S3 норма;

га и

^ местнораспространенныи рак легкого; генерализованной рак легкого;

О местнораспространенныи рак яичников; II генерализованной рак яичников;

gg одиночный mts в головной мозг: щ множественные mts в головной мозг.

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 6. Содержание нитрозилгемоглобина у онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса.

Уровень нитротирозина у всех обследованных больных не отличался от нормы, а содержание нитрозоглутатиона было повышено у всех больных раком легкого и больных с множественными метастазами в головной мозг (рис. 7).

Таким образом, из всех производных оксида азота динамика уровня пе-роксинитрита в наибольшей мере сопряжена со степенью распространенности опухолевого процесса и выраженностью эндогенной интоксикации. В связи с этим нами был проведен корреляционный анализ между содержанием перокси-нитрита и значением коэффициента интоксикации у больных раком легкого, пациенток с рецидивами рака яичников и у больных с метастазами в головной мозг. Были выявлены умеренной силы прямые корреляционные связи (г=0,451; г=0,694; г=0,577), что подтверждает опосредованное участие пероксинитрита в формировании эндогенной интоксикации.

А А

ц 1

* Н * *

fG 1 .. J 1 _ 1 Ш

— 1 1 L

ib ^ в м

А.=418 нм А,=545 нм

□ □

норма;

нитротирозин

нитрозоглутатион

ш

местнораспространенный рак легкого; генерализованной рак легкого; местнораспространенный рак яичников; Н генерализованной рак яичников;

|Щ] одиночный mts в головной мозг; gg множественные mts в головной мозг.

*- различия достоверны по сравнению с нормой; **- различия достоверны между группами больных.

Рис. 7. Содержание нитрозоглутатиона и нитротирозина у онкологических больных распространенностью опухолевого процесса.

Исследование содержания производных оксида азота и интенсивности хемилюминесценции, позволило разработать «Способ прогнозирования распространенности метастатического поражения головного мозга» (патент №2300104, Бюл. №15 от 27.05.2007).

Поскольку проведение химиотерапии оказывает токсическое действие не только на опухолевые клетки, но и на организм больного в целом, мы посчитали целесообразным исследовать показатели, отражающие степень эндогенной интоксикации, интенсивность свободнорадикальных процессов и содержание производных оксида азота при разработанных и применяемых в РНИОИ методах аутобиохимиотерапии - интраоперационной аутогемохимиотерапии (ИОАГХТ) и многокурсовой аутомиелохимиотерапии (АМХТ).

При изучении показателей, характеризующих эндогенную интоксикацию, у больных раком легкого на момент поступления их в отделение было выявлено, что общая концентрация альбумина достоверно не отличалась от нормы, эффективная концентрация альбумина и его связывающая способность были снижены на 31 % и 29%, в результате чего мы наблюдали пятикратное увеличение индекса токсичности и двукратное - коэффициента интоксикации (табл. 1).

Таблица 1

Влияние интраоперационной аутогемохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации у больных раком легкого

Группы Общая концентрация альбумина г/л (ОКА) Эффективная концентрация альбумина г/л (ЭКА) Связывающая способность альбумина (ССА%) Индекс токсичности ОКА/ЭКА-1 Молекулы средней массы (МСМ) ус ед Коэффициент интоксикации (МСМ254/ЭКА)« 1000

(Х=254 нм) (Х=280 нм)

Доноры п=15 50,4+1,75 46,17±2,39 91,2313,20 0,108±0,043 0,204±0,022 0,271±0,017 4,25+0,38

Больные раком легкого до операции п=29 47,8±3,32 31,83±2,93 64,4512,53 р=0,0008 0,581±0,068 р=0,0007 0,251±0,018 0,25210,014 8,5711,04 р=0,0080

Основная группа 2-е сутки п=20 46,9+4,04 28,1±1,84 р=0,0009 61,1±5,0 р=0,0007 0,685±0,152 р=0,0082 0,336±0,027 р=0,0070 Р1=0,0382 0,363±0,015 р=0,0074 Р1=0,0008 11,7911,21 р=0,0006 Р1=0,0604

Контрольная группа 2-е сутки п=9 37,1611,58 р=0,0008 Р1=0,018б Рк,о=0,0466 13,3±2,33 р=0,0007 Р1=0,0008 Рк,о=0,0006 35,616,0 р=0,0009 р1=0,0009 р.^0,0060 2,48±0,836 р=0,0141 Р1=0,0408 Рк,о=0000 0,384±0,013 р=0,0009 Р1=0,0008 0,30810,012 р=0,0614 Р1=0,0180 37,4419,93 р=0,0091 р 1=0,0179 р^ОООО

Основная группа 14-е сутки п=20 40±2,27 р=0,0076 р,=0,0568 28,3±3,07 р=0,0008 72,0±10,1 р=0,0512 0,487±0,215 р=0,0664 0,270±0,039 Р2=0,0472 0,238+0,026 р2=0,0091 11,8912,58 р=0,0157

Контрольная группа 14-е сутки п=9 42,66±2,38 р=0,0194 р2=0,0542 24,1+2,59 р=0,0008 Р1=0,051 р2=0,0185 56,6+6,95 р=0,0009 р2=0,0419 0,99±0,383 р=0,0390 р2=0,0571 0,321±0,011 р=0,0006 Р1=0,0080 р2=0,0070 Рк.о=0,0491 0,240+0,023 р2=0,0406 15,0912,97 р=0,0086 Р1=0,0509 Р2=0,0511

Примечание Указаны значения р только для достоверных изменений и тенденции к достоверности (0,05<р<0,1), р - достоверность различий по сравнению с донорами, р! - достоверность различий по сравнению со значениями до операции, р2_- достоверность различий между 2-ми и 14-ми сутками после операции, р^о - достоверность различий между значениями в контрольной и основной группами

На 2-е сутки после проведения больным раком легкого интраоперацион-ной аутогемохимиотерапии не отмечалось достоверных изменений показателей, характеризующих состояние молекулы альбумина (табл 1) В то же время проведение только хирургического лечения вызвало еще большее снижение этих показателей Подобные изменения привели к возрастанию индекса токсичности в контрольной группе в 4,3 раза по сравнению с дооперационными значениями, в то время как в основной группе индекс токсичности остался на прежнем уровне В крови больных раком легкого как контрольной, так и основной групп в раннем послеоперационном периоде содержание молекул средней массы повысилось по сравнению с фоновыми значениями (табл 1) Так в основной группе больных повышение составило 33,8% и 44%, а в контрольной -53% и 22,2% соответственно При этом в основной группе больных за счет сохранения функциональной активности альбумина коэффициент интоксикации увеличился всего в 1,3 раза, в то время как в контрольной группе - в 4,4 раза по сравнению с дооперационными значениями (табл 1)

К 14-м суткам послеоперационного мониторинга было обнаружено снижение фракций молекул средней массы, как в основной, так и в контрольной группах по сравнению с предыдущим сроком исследования У большинства больных основной группы значения эффективной концентрации альбумина не изменились, связывающая способность альбумина увеличилась и оказалась ниже нормы лишь на 21%, а индекс токсичности и коэффициент интоксикации остались на прежнем уровне Что касается изменений данных показателей у больных контрольной группы, то на 14-е сутки послеоперационного мониторинга лишь некоторые из исследованных показателей проявляли тенденцию к нормализации (табл 1)

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что в отличие от только хирургического лечения, проведение интраоперационной аутогемохимиотерапии больным раком легкого не только не вызывает значимого усугубления эндогенной интоксикации, но и способствует более успешной нормализации большинства показателей, характеризующих уровень токсемии,

в послеоперационном периоде По-нашему мнению, подобный эффект интрао-перационной аутогемохимиотерапии обусловлен восстановлением баланса между процессами накопления и элиминации токсических веществ за счет сохранения функциональной активности молекулы альбумина

При изучении показателей, характеризующих уровень эндогенной интоксикации, у больных с рецидивами рака яичников до начала аутомиелохимиоте-рапии были выявлены следующие особенности (табл 2) Общая концентрация альбумина не отличалась от донорских величин, эффективная концентрация альбумина и его связывающая способность были снижены на 54% и 51%, а фракции молекул средней массы повышены на 25% и 27% При этом индекс токсичности превышал донорские величины в 78 раз, а коэффициент интоксикации - в 5,5 раза

После проведения 1-го курса аутомиелохимиотерапии отмечена тенденция к нормализации ряда изученных показателей (табл 2) Эффективная концентрация и связывающая способность альбумина достоверно возросли, что привело к снижению индекса токсичности в 7 раз Наблюдалась нормализация содержания обеих фракции молекул средней массы Подобные изменения привели к снижению коэффициента интоксикации в 3 раза по сравнению с фоном до лечения Под действием аутомиелохимиотерапии очевидно происходит раскрытие и стабилизация активных центров молекулы альбумина, освобождение центров связывания, что приводит к снижению циркулирующих в крови токсикантов После проведения больным 2-го курса аутомиелохимиотерапии большинство показателей, характеризующих степень эндогенной интоксикации, остались на прежнем уровне Однако после 3-го курса аутомиелохимиотерапии наблюдалась отрицательная динамика изменений изученных нами показателей, при этом значения большинства показателей вернулись на уровень фоновых величин

Мы полагаем, что усиление эндотоксикоза при проведении многокурсовой аутомиелохимиотерапии может быть связано с накоплением продуктов распада опухолевой ткани под действием данного вида лечения

Таблица 2

Показатели эндогенной интоксикации у больных с рецидивами рака яичников в процессе многокурсовой аутомие-____лохимиотерапии __

Группы Общая концентрация альбумина г/л (ОКА) Эффективная концентрация альбумина г/л (ЭКА) Связывающая способность альбумина (ССА%) Индекс токсичности ОКА/ЭКА-1 Молекулы средней массы (МСМ) ус ед Коэффициент интоксикации (МСМ254/ЭКА)» 1000

(1=254 нм) (Х=280 нм)

Доноры п=12 45,33±0,77 43,01±1,1 94,8±2,014 0,06010,025 0,27910,004 0,20610,005 6,5610,243

До лечения п=18 43,3±2,32 19,89±2,9 р=0000 4б,75±6,89 р=0000 4,71010,599 р=0000 0,34810,029 р=0,0396 0,26210,010 р=0000 36,21612,05 р=0000

После 1-го курса АМХТп=18 44,14±3,73 2б,7±2,2 р=0000 Р1=0,0583 61,2514,05 р=0000 Р1=0,0544 0,65910,17 р=0,0024 р 1=0000 0,29010,017 р 1=0,0630 0,20010,027 р,=0,0402 12,211,99 р=0,0139 Р1=0000

После 2-го курса АМХТ п=11 42,8±1,92 25,77±1,04 р=0000 р,=0,0541 62,3314,1 р=0000 Р1=0,0537 0,47010,161 р=0000 р,=0000 0,353+0,033 р=0,0318 0,28010,025 р=0,0063 р2=0,0487 18,612,39 р=0000 Р1=0000

После 3-го курса АМХТ п=8 39,б±3,44 17,15±2,8 р=0000 Р2=0,0176 Рз=0,0189 44,0613,8 р=0000 р2=0,0472 Рз=0,0037 1,48010,352 р=0000 Р1=0,0085 р2=0,0516 Рз=0,0072 0,36610,035 р=0,0209 р2=0,0523 0,23710,032 24,4713,47 р=0000 р,=0000 р2=0,0152

Примечание Указаны значения р только для достоверных изменений и тенденции к достоверности (0,05<р<0,1), р - достоверность различий по сравнению со значениями у доноров, Р1 - достоверность различий по сравнению с значениями до лечения, Р2- достоверность различий по сравнению со значениями после 1-го курса АМХТ, рз- достоверность различий по сравнению со значениями после 2-го курса АМХТ

Интраоперадионная аутогемохимиотерапия не вызывала усиления интенсивности хемилюминесценции у больных раком легкого, а проведение многокурсовой аутомиелохимиотерапии больным с рецидивами рака яичников привело к нормализации изначально повышенного уровня хемилюминесценции. Активность церулоплазмина у больных раком легкого и с рецидивами рака яичников на всех этапах мониторинга не изменялась, превышая норму в среднем на 80-100%. Повышенная, как и до лечения, активность церулоплазмина очевидно, носит компенсаторно-приспособительный характер.

хсмилюминесценцня церулоплазмин

БЭ норма;

И до начала ИОАГХТ; И после лечения;

Р до начала АМХТ; Щ| после 3-х курсов АМХТ.

*- различия достоверны по сравнению с нормой.

Рис. 8. Интенсивность хемилюминесценции и активность церулоплазмина в плазме крови больных раком легкого и пациенток с рецидивами рака яичников при различных методах лечения.

Исследуя уровень производных оксида азота у больных раком легкого до проведения интраоперационной аутогемохимиотерапии, мы обнаружили повышенное содержание пероксинитрита и нитрозоглутатиона по сравнению с нормой на 57% и 84% соответственно (табл. 3). Проведение больным раком легкого интраоперационной аутогемохимиотерапии, в отличие от только хирургического лечения привело к снижению уровня пероксинитрита уже на 2-е сутки после операции по сравнению с фоном до лечения на 17%, а к 14-м суткам послеоперационного мониторинга уровень пероксинитрита нормализировался и был на 22,7% ниже дооперационных величин. У больных обеих групп к

14-м суткам мониторинга нормализовалось и содержание нитрозоглутатиона Поскольку известно, что нитрозотиолы обнаруживают антиапоптотическую активность, обусловленную их способностью дезактивировать каспазу 3 (Ванин А Ф , 2004), то данный факт представляет несомненный интерес

Таблица 3

Содержание производных оксида азота у больных раком легкого при проведе-

нии интраоперационной аутогемохимиотерапии

Группы Пероксинитрит нМ/мг белка МО-гемоглобин N0-глутатион нМ/мг белка N0- тирозин нМ/мг белка

Х=418 ус ед /мкг гемоглобина 1=545 нМ/мкг гемоглобина

Доноры п=15 85,51±5,31 9,43±0,94 21,93±2,4 27,79±1,52 5,18±0,504

Больные РЛ до операции п=13 134±5,73 р=0000 7,87+0,67 24,9±4,31 51,38±11,8 р=0,043 3,9±0,601

Основная группа 2-е сутки п=6 111,7+11,3 р=0,0301 Р1=0,0607 10,1+3,3 23,6±3,5 45,16±8,1 р=0,0503 2,86+0,7 р=0,041

Контрольная группа 2-е сутки п=7 196+27,0 р=0,00000 Р1=0,0057 рк о=0,0209 9,7+1,08 23,4+2,4 48,5+2,9 р=0,0000 5,17±0,5 Рк о=0,027

Основная группа 14-е сутки п=6 103,5±11,75 р,=0,0153 9,8±1,7 25,28+6,95 31,04±6,83 4,68±0,92

Контрольная группа 14-е сутки п=7 145,1±8,13 р=0000 рко=0,0179 9,49+0,77 29,22±6,19 33,84+7,58 4,41 ±0,18

Примечание Указаны значения р только для достоверных изменений и тенденции к достоверности (0,05<р<0,1), р - достоверность различий по сравнению со значениями у доноров, р1 - достоверность различий по сравнению со значениями до операции, рк 0 - достоверность различий между значениями контрольной и основной групп

У больных с рецидивами рака яичников до проведения аутомиелохимио-терапии содержание пероксинитрита на 52% превышало донорские значения, а

уровень 1\Ю-глутатиона характеризовался тенденцией к увеличению на 28% (табл 4)

Таблица 4

Содержание производных оксида азота у больных с рецидивами рака яичников _в процессе многокурсовой аутомиелохимиотерапии_

Группы Пероксинит-рит нМ/мг белка ИО-гемоглобин N0-глутатион нМ/мг белка NO-тиpoзин нМ/мг белка

Х=418 ус ед /мкг гемоглобина А,=545 нМ/мкг гемоглобина

Доноры п=12 85,51+5,31 9,43±0,94 21,93±2,4 27,79+1,52 5,18+0,50

До лечения п=18 129,8±13,36 р=0,00506 12,04±1,47 25,27±2,65 35,57+3,85 р=0,0590 5,38±0,54

После 1 курса АМХТ п=18 216,05±15,12 р=0000 р1=0000 12,66±2,43 30,82±4,46 р=0,0612 32,45±2,74 6,43+1,6

После 2 курса АМХТ п=11 142,1±24,01 р=0,0402 Р2=0,0218 11,46+1,16 26,36±3,15 30,9±6,78 4,32±0,765

После 3 курса АМХТ п=8 160,16+11,09 р=0000 р2=0,0171 13,2±3,14 26,89±4,62 39,38+4,24 р=0,0179 4,33±0,701

Примечание Указаны значения р только для достоверных изменений и тенденции к достоверности (0,05<р<0,1),

р - достоверность различий по сравнению с донорами, Р1 -достоверность различий по сравнению со значениями до лечения, Рг - достоверность различий по сравнению со значениями после 1 курса

После проведения первого курса аутомиелохимиотерапии содержание пероксинитрита увеличилось относительно фона до лечения на 67% и превысило норму на 152% Результатом проведения второго курса аутомиелохимиотерапии явилось снижение содержания пероксинитрита до уровня фоновых значений, которое сохранилось и после проведения третьего курса данного вида аутобиотерапии Содержание остальных производных оксида азота в процессе многокурсовой аутомиелохимиотерапии не изменялось

Таким образом, проведение химиотерапии на аутосредах организма - ин-траоперационной аутогемохимиотерапии и многокурсовой аутомиелохимиотерапии оказывает стабилизирующее действие на уровень производных оксида азота, что нашло отражение, в снижении продукции пероксинитрита Полученные в нашем исследовании результаты свидетельствуют о том, что в первую

очередь пероксинитрит, а также и нитрозилгемоглобин вносят существенный вклад в формирование эндогенной интоксикации при прогрессировании опухолевой болезни и отражают степень распространенности злокачественного процесса Исходя из этого, исследование уровня производных оксида азота имеет диагностическую и прогностическую значимость, что важно для оптимизации и индивидуализации тактики лечения онкологических больных

ВЫВОДЫ

1 У больных раком легкого, пациенток с рецидивами рака яичников и больных с метастазами в головной мозг снижение эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности отражает увеличение степени распространенности злокачественного процесса Наибольшее снижение этих показателей на 62,5-74% и 62,7-70,7% (р<0,001) по сравнению с нормальными значениями наблюдается при генерализации злокачественного процесса и множественном церебральном метастазировании

2 Увеличение степени эндогенной интоксикации у больных раком легкого, пациенток с рецидивами рака яичников и больных с метастазами в головной мозг сопровождается возрастанием уровня пероксинитрита на 55,3157% (р<0,01), что может свидетельствовать о его участии в формировании эн-дотоксикоза у онкологических больных

3 У больных генерализованным раком легкого и больных с множественными метастазами в головной мозг нарастание эндогенной интоксикации сопровождается достоверным повышением содержания нитрозилгемоглобина при Л.=418 нм на 79,2-83,5% (р<0,01) и при Х.=545 нм на 73,7-175,8% (р<0,001)

4 Проведение аутобиохимиотерапии (интраоперационной аутогемохи-миотерапии и первых двух курсов аутомиелохимиотерапии) не вызывает усиления эндогенной интоксикации за счет восстановления функциональной активности молекулы альбумина

5 Проведение интраоперационной аутогемохимиотерапии и многокурсовой аутомиелохимиотерапии оказывает стабилизирующее действие на уровень производных оксида азота и интенсивность хемилюминесценции

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Целесообразно использовать определение эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности в качестве дополнительного диагностического критерия распространенности злокачественного процесса

2 Комплексная оценка суммарного процента изменения содержания нит-розопроизводных и интенсивности хемилюминесценции плазмы крови больных может быть использована для дополнительной оценки степени распространенности метастатического поражения головного мозга

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Некоторые биохимические показатели у больных раком легкого после интраоперационной химиотерапии // Известия вузов Северо-Кавказский регион Естественные науки (приложение) 2004 № 6 С 66-72 (соавт Горо-шинская И А , Зинькович С А , Шалашная Е В , Качесова ПС)

2 Влияние интраоперационной аутогемохимиотерапии на некоторые биохимические показатели у больных раком легкого // Труды IV межвуз меж-дунар конф «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 25-26 марта 2005г) Ростов-на-Дону, 2005 С 57-60 (соавт Горошинская И А ,Зинькович С А , Качесова П С , Шалашная ЕВ)

3 Некоторые показатели свободнорадикального окисления, состояния мембран и эндогенной интоксикации у больных раком яичников с рецидивами при аутомиелохимиотерапии // Труды IV межвуз междунар конф «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 25-26 марта 2005г) Ростов-на-Дону, 2005 С 55-57 (соавт Горошинская И А , Бирюкова А А , Го-лотина Л Ю , Немашкалова Л А , Шалашная ЕВ)

4 Влияние интраоперационной аутогемохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации у больных раком легкого // VII науч конгр с между-нар участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (23-29 апреля 2005г) Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении 2005 №2 С 61 (соавт Горошинская И А, Зинькович С А, Шалашная ЕВ)

5 Прогностическое значение показателей свободнорадикальных процессов и состояния мембран у онкологических больных // 4-я национ научно-практ Конф с междунар участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, Россия 26-30 сентября 2005 г) Смоленск, 2005 С 227-228 (соавт Горошинская И А , Голотина Л Ю , Шалашная Е В , Владимирова Л Ю , Снежко И В , Бирюкова А А , Немашкалова Л А)

6 Влияние аутомиелохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации, свободнорадикального окисления и состояние мембран у больных с рецидивами рака яичников // Российский онкологический журнал 2007 № 2 С 27-31 (соавт Горошинская И А ,Голотина Л Ю , Бирюкова А А , Немашкалова Л А , Шалашная Е В , Качесова П С )

7 Уровень производных оксида азота в плазме крови онкологических больных с одиночными и множественными метастазами в головной мозг // Вопросы биологической, медицинской и фарм химии 2006 № 4 С 14-16 (соавт Горошинская И А , Айрапетов К Г , Сурикова Е И)

8 Влияние интраоперационной аутогемохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации у больных раком легкого // Сб ст «Актуальные вопросы теоретической, экспериментальной и клинической онкологии» Под ред ЮС Сидоренко М, 2006 С 139-144 (соавт Горошинская И А, Зинькович С А , Шалашная Е В , Качесова П С )

9 Влияние аутомиелохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации, свободнорадикального окисления и состояния мембран у больных с рецидивами рака яичников // Тезисы VIII Конгресс «Паллиативная медицина и

реабилитация в здравоохранении» 2006 С 87 (соавт Горошинская И А, Голо-тина JIЮ , Бирюкова А А , Немашкалова JIА , Шалашная Е В , Сурикова Е И , Качесова ПС)

10 Процессы эндогенной интоксикации и свободно-радикального окисления в крови онкологических больных с метастазами в головной мозг // Материалы конф «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности центральной нервной системы» (Пенза, 25-27 сентября 2006г) Пенза, 2006 С 91-92 (соавт Горошинская И А , Айрапетов К Г , Сурикова Е И, Шалашная Е В , Немашкалова JIА )

11 Состояние плазматических мембран и процессы свободнорадикаль-ного окисления в крови больных с рецидивами рака яичников на этапах химио-терапевтического лечения // Сб ст «Органосохраняющие и реконструктивные операции у больных злокачественными опухолями» Под ред Ю С Сидоренко Москва, 2007 С 48-54 (соавт Горошинская И А, Сурикова Е И, Голотина Л Ю , Бирюкова А А , Немашкалова JIА , Шалашная ЕВ)

12 Сравнительное исследование некоторых показателей свободнора-дикального окисления и эндогенной интоксикации у больных раком яичников при различных видах аутобиохимиотерапии // Междунар конф «Новые технологии в эксперим биологии и медицине» (Ростов-на-Дону, Россия, октябрь 2007) Ростов-на-Дону, 2007 С 114 (соавт Горошинская И А , Голотина JI Ю , Шалашная Е В , Бирюкова А А , Меньшенина А П , Сурикова Е И , Немашкалова JIА , Качесова ПС)

13 Содержание производных оксида азота в крови онкологических больных с различной выраженностью эндогенной интоксикации // VIII междунар конгресс «Здоровье и образование в XXI веке, концепции болезней цивилизации» (Москва, 14-17ноября 2007г) Мат-лы конгр, М, 2007 С 457-458 (соавт Шалашная Е В , Горошинская И А )

14 Влияние аутомиелохимиотерапии на показатели эндогенной интоксикации, свободнорадикального окисления и состояние мембран у больных с рецидивами рака яичников // Российский онкологический журнал 2007 № 2 С

27-31 (соавт Горошинская И А , Голотина Л Ю , Бирюкова А А , Немашкалова Л А , Шалашная Е В , Качесова ПС)

15 Исследование производных оксида азота в крови больных раком легкого при использовании интраоперационной аутогемохимиотерапии // Ме-ждунар конф «Новые технологии в эксперим биологии и медицине» (Ростов-на-Дону, Россия, октябрь 2007) Ростов-на-Дону, 2007 С 123 (соавт Горошинская И А , Зинькович С А , Шалашная Е В , Сурикова Е И , Немашкалова Л А , Качесова ПС)

ПАТЕНТ

Способ прогнозирования распространенности метастатического поражения головного мозга // Патент РФ № 2300104 от 27 05 2007г Бюл № 15 (соавт Сидоренко Ю С , Айрапетов К Г , Горошинская И А , Сурикова Е И , Шалашная ЕВ)

Печать цифровая Бумага офсетная Гарнитура «Тайме» Формат 60x84/16 Объем 1,0 ум -изд -л Заказ № 666 Тираж 150 экз Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г Ростов-на-Дону, ул Суворова, 19, тел 247-34-88

Актуальность работы. Известно, что среди факторов риска развития злокачественных новообразований важная роль принадлежит нарушению равновесия в системе свободнорадикальное перекисное окисление липидов (ПОЛ) - антиоксидантная система организма. При нарушении адекватного соотношения окислительных и антиокислительных процессов происходит избыточное накопление свободных радикалов, приводящее к повреждению нуклеиновых кислот, индукции хромосомных аберраций, нарушениям регуляции клеточной пролиферации и апоптоза, играющих важную роль в злокачественной трансформации клеток и опухолевой прогрессии (Пальмина Н.П., 2000; Савина Е.В. и соавт., 2001; Меныцикова Е.Б. и соавт., 2006, Das U.N., 2002; Kohen R., Niska А., 2002; Ray G., Husain S.A., 2002,).

Несбалансированность в системе про- и антиоксидантов приводит к нарушению гомеостаза и развитию эндогенной интоксикации в организме. При этом вещества, не обладающие токсическим действием в условиях нормальной жизнедеятельности, могут приобретать свойства эндотоксинов (Васильков В.Г. и соавт., 2001; Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б., 2001; Титов В.Н., 2002; Титов В.Н., Осипов С.Г., 2003; Авдеева М.Г. и соавт., 2008). Злокачественный рост сопровождается резкими изменениями жизненно важных функций организма и полиорганной недостаточностью, в том числе, в связи с развитием синдрома эндогенной интоксикации. Проведение химиотерапии и лучевого воздействия ведет к резкому нарастанию интоксикации как за счет увеличения уровня свободнорадикального окисления, так и за счет распада опухолевых клеток (Крутяков В.М., 2001; Сафиуллина А.Ф., 2002).

Известно, что активированные кислородные метаболиты (АКМ) могут рассматриваться как универсальный инструмент опухолевой трансформации, вызывающий спонтанный и индуцированный физическими и химическими факторами канцерогенез. Оксид азота, по разным литературным данным, играет двойственную роль при злокачественном росте. В высоких концентрациях он уничтожает раковые клетки, а при низких - стимулирует опухолевый рост и метастазирование (Фукузова К. и соавт., 2004; Broholm H., Brandstrup О., Lauritzen M. 2001; Wang Guang-yi, Wang Xu. 2004). Оксид азота принимает участие в промоции канцерогенеза как модификатор метаболизма ксенобиотиков и как агент, нарушающий про- и антиканцерогенный генетический баланс, вызывая одно- и двунитевые разрывы ДНК (Каримов Х.Я. и соавт., 2002; Реутов В.И. и соавт., 2007). Метаболит оксида азота пе-роксинитрит (OONCT) является мутагеном. (Маеда X., Акаике Т. 1998; Клебанов Г.И. и соавт., 2006). Кроме того, оксид азота может стимулировать ПОЛ, индуцированное активными формами кислорода: Ог~, Н202, НО" (Ray G., Husain" S.A., 2002). Поскольку оксид азота является фактором, регулирующим проницаемость сосудов, и играет важную роль в ангиогенезе иросте опухолей, исследование его свойств дает важную информацию для оценки1 клинического течения заболевания (Лю М.Б. и соавт., 2004; Zhou Dong et al., 2002). При этом не только сам оксид азота, но и его производные осуществляют важные физиологические функции: участвуют в регуляции апоптоза, ангиогенеза, свободнорадикальных процессов, кислородсвязывающйх свойств гемоглобина (Ванин А.Ф., 2001; Зинчук В.В., 2003; Лю М.Б., 2004; Реутов В.П., 2007). Однако систематизированные сведения об изменении содержания производных оксида азота при опухолевом процессе практически отсутствуют, что и обусловило цель и задачи нашего исследования.

Цель работы: Изучить содержание производных оксида азота в крови онкологических больных с различной распространенностью злокачественного процесса и выраженностью эндогенной интоксикации, а также при использовании некоторых методов аутобиохимиотерапии.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать показатели эндогенной интоксикации, свободнора-дикального окисления и содержание производных оксида азота в крови больных с различной локализацией злокачественного процесса.

2. Изучить показатели эндогенной интоксикации, свободноради-кального окисления и содержание производных оксида азота в крови больных с различной распространенностью злокачественного процесса.

3. Изучить показатели эндогенной интоксикации, свободноради-кального окисления и содержание производных оксида азота в крови больных при использовании некоторых методов аутобио-терапии (интраоперационной аутогемохимиотерапии (ИОАГХТ) и аутомиелохимиотерапии (АМХТ)).

Научная новизна работы.

Впервые у больных раком легкого, раком яичников и у онкологических больных с метастазами в головной мозг исследовано содержание производных оксида азота в плазме крови в зависимости от степени распространенности злокачественного процесса и выраженности эндогенной интоксикации, а также при использовании интраоперационной аутогемохимиотерапии и аутомиелохимиотерапии. Установлены умеренной силы прямые корреляционные связи между уровнем пероксинитрита и коэффициентом интоксикации. Результаты исследования расширяют имеющиеся представления о связи сдвигов метаболизма оксида азота с развитием злокачественного процесса.

Практическая значимость работы.

В процессе исследования были выявлены биохимические показатели, имеющие диагностическую и прогностическую значимость для оценки степени распространенности опухолевого процесса, которые могут быть использованы для оптимизации комплексного противоопухолевого лечения. На основании полученных данных предложен "Способ прогнозирования распространенности метастатического поражения головного мозга". Патент РФ № 2300104. Бюл. № 15 от 27. 05. 2007. Использование способа будет способствовать раннему выявлению генерализации опухолевого процесса.

Основное положение, выносимое на защиту.

Динамика уровня пероксинитрита и нитрозилгемоглобина отражает степень распространенности злокачественного процесса и влияет на выраженность эндогенной интоксикации у онкологических больных.

ВЫВОДЫ

1. У больных раком легкого, пациенток с рецидивами рака яичников и больных с метастазами в головной мозг снижение эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности отражает увеличение степени распространенности злокачественного процесса. Наибольшее снижение этих показателей на 62,5-74% и 62,7-70,7%^(р<0,001) по сравнению с нормальными значениями наблюдается при генерализации злокачественного процесса и множественном церебральном метастазировании.

2'. Увеличение степени эндогенной интоксикации у больных раком, легкого, пациенток с рецидивами рака яичников и больных с метастазами в головной мозг сопровождается возрастанием уровня пероксинитрита на 55,3-157% (р<0,01), что может свидетельствовать о его участии в формировании эндотоксикоза у онкологических больных.

3. У больных генерализованным раком легкого и больных с множественными метастазами в головной мозг нарастание эндогенной интоксикации сопровождается достоверным повышением содержания^ нитрозилгемог-лобина: при А,=418 нм на 79,2 и 83,5% (р<0,01) и при А,=545 нм на 73,7 и 175,8% (р<0,001).

4. Проведение аутобиохимиотерапии (интраоперационной аутогемо-химиотерапии и первых двух курсов аутомиелохимиотерапии) не вызывает усиления эндогенной интоксикации за счет восстановления функциональной активности молекулы альбумина.

5. Проведение'интраоперационной аутогемохимиотерапии и многокурсовой аутомиелохимиотерапии оказываем стабилизирующее действие на уровень производных оксида азота и интенсивность хемилюминесценции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Целесообразно использовать определение эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности в качестве дополнительного диагностического критерия распространенности злокачественного процесса.

2. Комплексная оценка суммарного процента изменения содержания нитрозопроизводных и интенсивности хемилюминесценции плазмы крови больных может быть использовано для дополнительной оценки степени распространенности метастатического поражения головного мозга.