Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль перекисного окисления липидов в структурно-функциональных нарушениях стекловидного тела при экспериментальном внутриглазном кровоизлиянии

РГ6 00

то

ЙСк№АКД1ЩМ1 {ОДЩИНСКИХ НАУК НАЛШО-ИССЯЕЩОВАТМЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи

ЭМЗДИЕВ Наэим Миркасум оглы

РОЛЬ ПЕРЫШЮГО ОКИСЛЙШ ЛМ1ИДОВ В СТРУШТНО-ФУШЩИОНАЛЬЙЫХ НАРУШЕНИЯХ СТЕКЛОВИДНОГО ТМА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ВНУТРИГЛАЗНОМ КРОВОИЗЛИЯНИИ

14.00.16 - Патологическая физиология

14.00.08 - Глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 1992

Работа шнодвдна в НИИ офтальмологии Минздрава Азербайджанской Республики и в лаборатории биофизики рецепции Института физиологии АН Азербайджанской Республики.

Научный консультант -

доктор биологических наук, профессор, Лауреат Гоо.преши Азерб.Республики А.Й,Цжафаров

доктор медицинских наук, профессор П.Н.Александров доктор медицинских наук, профессор Р.Ц.Семфулла доктор медациноких наук Л.Ф.Лаэаренко

Ведущее учреждение -

Санкт-Петербургский институт усовершенствования врачей 1 чинздрава Российской Федерации '

в Л:, часов на заседании Специализированного совета Ц.001.03.01 . при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке.

Официальные оппоненты -

Защита диссертации состоится

Автореферат разослан

Учений секретарь Специализированного совета кандидат мецицш.оких наук

Л. II. Скуратовскад

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность пробдеш. Особое место в патологии глаза принадлежит внутриглазным кровоизлияниям. Внутриглазное кровоизлияние является частым компонентом прошкагаих п контузион -пых травм глаза, резко ухудшающее их исход в связи с развитием помутнений оптических сред, образованием соецинителъно-ткашшх тяжей - швартов, тракционной отслойки сетчатки (Тундорова и др., 1966; Фрищлан, Ромашенко, 1986).

Судя по данным литературы, рассасывание крови в стекловидном теле характеризуется рядом взаимосвязанных и последовательных процессов, В иродеосо расорйции крови в стекловидном теле происходит гемолиз крови, усиление фагоцитоза и фибринолиза (Ромашенко, 1978;м&Ьег11 Uhiaholin 1970;i'orester, Lee 1978), что сопровождается деполимеризацией гиалуроиовой кислота, а таюхе нарушением структуры эластичных коляагеновых волокон (Лазаренко и .др., 1982).

. Полученные факты свидетельствуют о том, что в ряда случаев часть излившейся крови свертывается, образуя сгустки, в дальнейшем переходящие в соединительно-тканные тчжл - пварти, приводящие к отолойке сетчатки п потере зрения.

Несмотря на го, что к настоящему времени в клинической офтальмологии разработан:; различные методы лечения внутриглазного кровоизлияния, они все, в основном, малоэффективны и передо-"

сопровождаются осложнениями.

Как следует из клинических данных, при наличии а стекловидном тело крупных фиксированных сгустков при истинно; гемо-фтальме эффективность рассасывающей терапии. проводимой фибрнко-литическши препаратами, с одной стороны, низкая (ЛогаП, 1980; Куглоев и др., ХУ82), а с другой стороны, применяемые препарата сами вызывают, в той или иной степени виратсешше, измаиашш. структура стекловидного тала (üaeoraki Í98.3).

Эффективность интравлгреалышх операдий, часто применяемых при внутриглазном кровоизлиянии, не всегда достаточно высока из-за частях осложнений, недостаточно!! разработки обдих принципов операций и отсутствия оптимальных способов зааояения стекловидного тела (Архангельский, 1976; "Федоров, Глгагеук,IST7G).

Анализ литературы показывает, что ограниченное применение интравитреальных операций и фибринолитических средств в офтальмологической практике в большей мере оаязано с недостаточным изучением механизма шваргообразования, различных физико-химических процессов при кровоизлиянии, отсутствием эффективности лекарственных средств, способствующих рассасыванию крови и предупреждении разных осложнений.

Однако конкретный механизм физико-химических изменений при кровоизлиянии в настоящее время недостаточно ясен.

Исследованиями последних десятилетий удалось показать, что развитие кровоизлияния сопровождается такими различными физико-химическими изменениями, как смещение рН в кислую сторону, накопление ионов металлов переменной валентности, молочной кислоты, увеличение содержания как общих, так и нейтральных липидов и аскорбиновой кислоты, уменьшение содеркалия оеро- . тонина, восстановленного глутатиона (Курский, Ьакшеев, 1974 ; Лазаренко и др., 1982; üessur et eJ. 1975). Создание таких условий в стекловидном теле может способствовать усилению сво-боднорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ) в нем как in vivo , так и в модельной системе (Лазаренко, 1982; Лазаренко и др., 1982; Постникова, Соломатина, 1983).

В последние года появились единичные работы, в которых указывалось на усиление перекисного окисления липидов в стекловидном теле как при травматическом кровоизлиянии, так и при кровоизлиянии, вызванном различными патологиями сетчатки (Лазаренко и др., 1932; Постникова, Соломатина, 1983).

Вместе о тем, вышеприведенные работы не дают ответа на вопрос о механизмах усиления ПОЛ, а танае той роли, которую может сыграть накопление продуктов этого процесса при кровоизлиянии. Ме.-кду тем, накопление продуктов ПОЛ в мембранных образованиях, как известно ( l>eaai, ¿Xy;! ! 1968; iioubal, Tappel 1966), может приводить к инактивации мембранноовязанных комплексов, полимеризации белков, увеличение проницаемости мембран, подавлению синтеза белков. Следовательно,■накопление продуктов ПОП может иметь немаловажное значение в возникновении таких нарушений структурно-функционального состояния стекловидного тела при кровоизлиянии, как его помутнение, нарушение полимерной огруктуры гиалуроновей кислоты, метаболизма коллагоиовых белков

и образование тяхей (Исаева, Опричев, 1975).

Однако, цитируемые работы не содержат систематизированных исследований, выявляющих развитие ПОЛ на различите стадиях патогенетических изменений при кровоизлиянии, а связи с чем они не позволяит составить конкретное-мнение о путях инициации и роли этого процесса в наблюдаемых деструктивных изменениях органов зрения.

Кроме того, несмотря на икевдиеся указания об интенсификации ПОЛ при кровоизлиянии, • до сих пор остается невыясненном терапевтический эффект применения различных природнцх и синтетических ингибиторов этого процесса.

Решение этих задач позволяет выяснить значение ПОД в развитии патологических изменений при кровоизлиянии и может способствовать разработке новых методов леченая этой патологии глаза.

Цель и задачи исследования. Настоящая работа посвящена изучению роли ИОЛ в механизме структурно-функциональных нарушений стекловидного тела и сетчатки, а также путей антиокси -дантной регуляции их при кровоизлиянии.

■ В соответствии с этим основные задачи нашего исследования сводятся к следу .эдему:

1. Установить динамику изменений интенсивности ДОЛ стекловидного тела я сетчатки при' экспериментальном кровоизлиянии в

• зависимости от расположения, количества и срока введения ауто-крови.

2. Шяънть взаимосвязь медцу уровнем ПО;: и функциональной активностью стеш;обидного тела и сетчатки при экспериментальном кровоизлиянии.

3. Установить физико-химические изменения в структурных кошонентах - в системе гиалуроновой кислоты и коллагеловой сети! стекловидного тела в зависимости от интенсивности ПОЛ при экспериментальном геиофтальме.

4. Изучить зависимость меаду интенсивностью ПОЛ и структурной модификацией стэкловьдного тела при экспериментальном кровоизлиянии.

5. Последовать биохимические и клинические особенности ' процесса экспериментального гемефтальма при развитии ПОЛ.

•

6. Изучить механизм изменения интенсивности ПОЛ в стекловидной теле и сетчатке при экспериментальном кровоизлиянии,

?. Выяснить возможность регуляции ПОЛ в стекловидном теле различными природными и синтетическими протекторами свободно-радикального окисления при экспериментальном кровоизлиянии и изучить возможность за прхшенения в лечении контузиошшх кровоизлияний.

Научная новизна. Впервые на модели экспериментального гемофтальма исследованы кинетические закрномерности процесса ПОЛ в стекловидном геле и сетчатке в зависимости от места расположения, количества и срока введения аутокрови. Показан конкретный вклад процесса ПОД в развитие физико-химических и биохимических изменений, включающихся в патогенез экспериментального гемофтальма.

Лсследована взаимосвязь между изменением интенсивности ПОЛ и нарушением функциональной активности стекловидного тела и сетчатки. Показано, что накопление продуктов ПОЛ приводит к нарушению функциональной активности стекловидного тела и сетчатки: уменьшению прозрачности и вязкости стекловидного тела и подавлению электрической активности сетчатки. При экспериментальном гемофтальме выявлена возможность регуляции процессов ПОЛ в стекловидном теле и сетчатке о помощью различных анти-окоидантов.

Впервце установлен возможный механизм усиления ПОЛ в стекловидном теле при введении аутокрови, идентифицирована роль отдельных радикальных шиермедиагов кислорода в интенсификации ПОЛ. Составлена схема, иляюстриру-ддая механизм протекающих при гемофтальме физико-химических процессов, вызывающих наруше1шя функциональной активности стекловидного тела.

?

Теоретическое значение работы определяется тем, что в ней впервые исследованы -механизмы интенсификации ПОЛ в тканях глаза при натравитреальном кровоизлиянии и показаны пути участия продуктов ПОЛ в структурномункц! шальных нарушениях стекловидного тела и сетчатки. Изучена эффективность антиокоидан-тов различшх групп в коррекции ПОЛ в зависимости от срока развития экспериментального интравитреального кровоизлияния, что имеет принципиально важное значение в понимании механизма ста-

бшшзации структурно-функциональных мода^пкаций при гомофгальмэ.

Практическая значимость результатов работа. Выявлена последовательность отдельных физико-хшшчеоких процессов в патогенезе пнтравит,; зального кровоизлшптя. Полученные результаты показывают, что радикальные интермедиати кислорода, генерированные под действием металлов переменной валентности п гемоглобина излившейся крови, усиливают ИОЛ, продукты которг^о вызывают деполимеризацию гпалуроновоИ кислота, усиленно коллагенеза.ухуд-? шепяе прозрачности, вязкости стекловидного тела и элект чгческой активности сетчатки и, наконец, образование соедтявгтельно-ткан-них шварт. Эти дашше имеют существенное практическое значение как для профилактики, так и для разработки эффективных средств, предотвращающих сложные осложнения шгаравитреалыюго кровоизлияния. Полученные результата даэт основания для вклотения oimioim-слительной терапии в комплексное лзчепи больных с ингравигреаяь-ннм кровоизлиянием различной этиологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

- установление кинетической закономерности развнтвд ¡ЮЛ в стекловидном тале, сетчатке при интрзвитреальном кровоизлиянии в зависимости от количества, места локализации излитой крови;

- установление, регуляция ПОЛ в стекловидном теле, сетчатке различными природными, синтетическим:! антиоксидантздш;

- выяснение механизма усиления ПОЛ при ннтравитреальном кровоизлиянии;

- установление коррелятивной связи между нарушением струк-турнсырушщионалыгой активности стекловидного тела и сетчатки и динамикой интенсификации переписного окисления липл^ов.

Апробация работы. Материалы диссертации доклада шшюь на: П конференции офтальмологов Закавказья. ¡' еваи, I97.tr.; ¡3 научной конференции арталь- vioros Грузии. Тбилиси, 1974г.; научной конференции, посвященной 100-летию со дня роаденпя акад.В.П.Филатова. Одесса, I975r., I съезде офтальмслогоз республик Закавказья. Тбилиси, 1976г.; П научной кон^оренц;!;:. i-auy, ГУГйг.; 6-ом съезде офтальмологов УССР. Одесса, 197ц.'.; 5-ом ^соссизио« съезде офтальмологов. Москва, 1979г.; 7-оМ республиканской конференции Литовской ССР, Каунас, 19Е0г.; 4-ом оссросз^.сдом сь с-rise офтальмологов. Москва, 1982г.; Международной конференция,

Одесса, 1965г.; Ш Всесоюзной конференции "Бкоантиоксиданты", Москва, 1989г.; Всесоюзном симпозиуме "Реконструкция, стабилизация и репарация мембран", Благовещенск, 1989г.; Ученом совете Института офтальмологии Минздрава Азерб.ССР, Баку, 1989г.; ' Ученом совете Института физиологии гол.А.И.Караева Азерб.ССР, Баку, 1989г.

Структура диаоертации. Работа состоит из введения, 4-х глав (-обзор литературы,- материал и методы исследований, результаты исследования, обсуждение полученных результатов), выводов, практических рекомендаций и списка использогэнной литературы.

Диссертация содержит 279 страниц машинописного текста, виилает 79 рисунков, 4 таблицы. Список литературы включает 390 источников, из которых 128 опубликовано в отечественных и 262 в зарубежных изданиях.

МАТЕРИМ И МНТ0ДЦ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общий план исследования. Исследования проводились на 62? кроликах породы шинзшша весом 2,5-3 кг. В качестве объектов исследования были использованы'стекловидное тело и сетчатка кролика, а также травмированного человеческого глаза.

Для создания внутриглазного кровоизлияния в стекловидное тело кролика вводилась кровь, взятая из ушной вены того же животного (Шимхович, 1960). Кровь в стекловидном теле локализировалась преретинально, ретрояэкталыго и интравигреально. Количество вводимой крови зависело от поставленной задачи и колебалось от 0,15 до 0,5 ши

Б ряде опытов инициирование ПОЛ- в стекловидном теле осуществляли введением в него перекиси кумола в концентрации 0,5"М. Для изучения механизма интенсификации ПОЛ при кровоизлиянии в стекловидное тело вводули отдельные компоненты крови: гемоглобин (24 мг/мл), раств'оры солей металлов переменной валентности - Го+<>, С^ЦО""1 М), фосфолипиды (1,2 глг/мл) как 1п т1хо , так и 1п уНм.

В работе было исследовано действие природных (¿-токофе-рол, таурин, глугатион) и синтетических антпоксидантов - ингибиторов свободзюрадикальшх реакции (^енозаи калия, оксипиридин-хяоргидрат - ОПХГ), агентов, тукадих образование радикальных

интермедиатов кислорода (оуперозссидаюмутаэа - СОД, маннитол), антиоксидантов - кошлексробразователей ионов металлов переменной валентности (Ре^> Си^) - трилон Б и диэтилцитиокарбомат натрия (ДДТК).

В наших опытах: антноисицантц -ингибигоры свободноради-калышх решений и тушители радакалышх интарыедиатов кислорода, вводились ретробульбарно (многократно), либо интраиитреально (о.днократно) совместно с вводимой аутокровью. Комплексообразо-ватели вводились только ретробульбарно (многократно).

Ретробульбарно - ОПХГ вводился по 8 мг, фенозан калия -по 8 и 4 глг, маннитол - по 3 мг в един глаз в 0,3 мл физиологического раствора, СОД - по 6,1 ЕД в 0,1 мл физиологического раствора на I, 7, II, 19, 29 я 44 дни кровоизлияния, а при иитрааитрзалыюм введении - фенозан калия - по 2 иг, ОПХГ -по 10 мг, маннитол - по 1,35 мг, СОД - по 6,1 ЕД в о,дин глаз. Комплексообразователи ретробульбарно вводились в следующих дозировках: трилон Б - 3 мг, ДДГК - 1,5 мг в один глаз в 0,3 ш физиологического раствора на-1, 2, 7, 10 и 15 дня, .

Окогракцим липидов проводили по методу Фолча в модификации ьлайя и Дайера {195Э). .

лкгоди псслшвлнш

Прозрачность стекловидного тела определяли на "Слекорде Ц-40" (ГДР) относительно прозрачности дистиллированной води при температуре Я!0°0. Вязкость определяли на горизонтальном вискозиметре по отношению к вязкости дистиллированной вода, измеряя ареия истечения пбд собственнш давлением одинаковых обьемов стекловидного тела и води в о,дном и том ;ка капиллярно« вискозиметре.

Эдекгроретииограмма глаза кроликов снималась о помощи» контактной линзи и фотографировалась с экрана осциллографа 01-69. Использовались усилители переменного тока УШ-2-03, Полоса пропускания частот усилителя устанавливалась от I до 50 Гц. Длительность световой вспышки составляла 150 мсек. Интенсивность световой вопшпки била равна 1,4 дх.

Содержание ацетилглюкозашна определялось по модифицированному методу Ал1олороц1эз вг а! (1965).

Содержание оксипролкна определяли методе Стегемана (1358). ■

Содержание йелка в исследуемых образцах определяли по Лоурк (1951).

Регистрацию хешлшииесценции стекловидного тела и сетчатки производили на фотометрической установке, пртцип работы.-которой описан в работе Тарусова (1361). В качестве детектора излучения применялся фотоумножитель ФЭУ-85.

Содержание малонового доальдегнда определяли по модифицированному методу 0«о1еп£г (1Э5Э).

Регистрация ИК-опектррз стекловидного тела и липидов, выделенных из него, проводилась в области 700-3200 см 1 при скорости пропускания спектров 160 мм/мин на спектрометре типа 1® -20 фирмы "Цейос",

Идентификацию радикальных интершцкатов кислорода ( 0% ) проводили по метода Пескина (1966).

Для изучения аоррологических изменений стекловидного тела и ретины на фоне экспериментального кровоизлияния после применения антиоксидантов извлеченную сотчатку из знуклекро-ванных глаз помечали в нейтральный формалин, затем, после

проводки в спиртах соответствующей крепости и заливки парафином, изготовлялись серийные гистологические срезы, которые окрашивались геглатокешшн-эоэинои по вал Газону и Писслю.

Полученные дан..ае обрабатывали статистически, достоверность различий оценивали по t -критерию Стьвдента (Роквдкий, 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ДОСЛЕДОВАНИИ

■ I. Особенности изменения интенсивности ПОЛ в стекловидном теле и еггчатке при экспериментальном внутриглазном кровоизлиянии

Известно, что тяхесть протекания кровоизлияшш и характер его осложнений в значительной г..ере определяется местом расположения кровоизлияния и количеством излившейся хсроьи (Гундорова и др., 1986; яоггев1;вг, ¿ее

Учитнвая это, кы начали свои исследования с изучения влияния месторасположения вводимой аутокрови на интенсивность

ПОЛ стекловидного тела и сетчатки»

Нами установлено, что кровоизлияние в стекловидное тело вызывает усиление интенсивности ПОЛ - увеличение содержания 1.Щ и интенсивности яемялимлнесценций (М). При этом усиление ПОЛ зависит от места локализации излившееся крови и ее количества. Кинетические кривые накопления ЫДА (рис.1) и изменения интенсивности ХЛ. при- всех трех изучаемых ;.ими расположениях (ретролентальком, интравитрзальноы и првретиналйюм) излившейся в стекловидное тело крови сходны. Тан, в первые'5-8 дней во всех случаях происходит увеличение накопления ГДДА и интенсивности ХЛ, после чего отмечается уменьшение обоих показателей с некоторым их повторным увеличение!.!, набяадаплиыоя через 30 дней после введения аугокрови. Яри этом наибольшая интенсивность ПОЛ наблюдалась при преретинальном расположении кровоизлияния. Так, например, если при прерзтпнальной локал-эации 0,5 мл введенной

ВроМ, ХМ

Рм.Х. Зшвноке сог»рх»шя ЩА • «том*«« ми при иирвтриб/цкм! рмвмммм хроммпим. Х-вр» «»«ИЩИ 0,15 НД 8^ЮКрС£Я г-Цш И5Л«Ш 0,5 «я еугокрсм 5-пр» шлеши 0,5 на «докрои.

аутокрови содержание МЦА и интенсивность ХЛ в максимумах были 0,42 нмоль/мг белка и 700 имп/сек,, то величины этих показателей при интраиитреалыюм расположении были соответственно 0,27 нмоль/мг белка и 525 имп/Ю сек., а при ретролентальном расположении - 0,18 нмоль/мг и 37,8 ими/10 сек.

Что касается зависимости интенсивности П01 от количества излившейся крови, то, как показали опыты, накопление ЬЩА и интенсивность ХЯ находятся в прямой зависимости от количества аутокрови при всех видах расположения кровоизлияния. 3 то же время, если при интравитреальном и преретиналыюм расположении кровоизлияния увеличение количества введенной аутокрови 0т 0,15 до 0,3 шг вызывало заметное увеличение накопления МЦА, то при ретролентальном•расположении достоверное увеличение этого показателя наблюдалось лишь при введении 0,5 мл аутокрови.

Интересным представляется вопрос о первичной роли введения аутокрови в стекловидное тело в. инициации процесса ПОЯ. Наши исследования в этом направлении показали, что после излияния крови в полость глаза интенсификация ПОЛ происходит сначала в сгустках крови, образующихся в стекловидном теле, после чего продукты липопереоксидации инициируют процесс ПОЛ, диффундируя в стекловидное тело.

При экспериментальной модели кровоизлияния усиление интенсивности липопереоксидации происходит не только в самом стекловидном теле, но и в контактирующих с шш структурах глаза, в частности, в сетчатке.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что внутриглазное кровоизлияние при всех видах расположения вызывает изменение интенсивности ПОЛ в сетчатке.

Характерно то, что при ретролентальном и интравитреальном расположениях вводимой аутокрови существенное изменение интенсивности ПОЛ отмечалось лишь при/введении 0,5 мл крови. Б от-.личие от этого, при првретииальном расположении все исследованные- количества крови приводили к достоверному изменению содержания ЫДА и интенсивности ХЛ. На рис. 2 и 3 приводится динамика изменений оодерпания МЦА и интенсивности ХЛ сетчатки при трех расположениях кровоизлияния в стекловидном теле при введении в него 0,5 мл аутокрови. Из этих рисунков видно, что кинетические кривые изменения интенсивности ПОЛ сетчатки сулественно отлича-

1,2 -

1.0

0,в

Г'6

4>

I 0.4

&

о

0,2 "

ю • ав эо

Время,

40

50

Ьга.г

Иамгнениэ содераакия да а еэтчатке при введения О,Б ш а}токрсви г стзиаоаицяоа ге»с

1 - рэтролбйтааьноа ращоясчекла

2 - гтровятрввиьяоа раепмосекве

3 - проретияаньиоэ распсчпхеяиа

топ от кинетических кра^нх, отрхсй'о изменение интенсивности ПОЛ стекловидного тела. В рашша сроки кровоизлияния скорость ПОЛ в сетчатке невысока, затем происходит непрерывное ее увеличение, и к концу опыта она достигает максимума.

Из анализа приведенных данных видно, что как в стекловидном теле, так и в сетчатке, болое заметное усиление ПОЛ наблюдалось при преретинальпои.расположении вводимой аутокрови.

Согласно даннш ЬеЕпаШг (1968, 1970), самопроизвольное кровоизлияние в стекловидном теле у людей по кинетика, алекгро^изиологических, морфологических и офтальмолога. .юких показателей сходно о экспериментальным кровоизлиянием у кроликов. Следовательно, при кровоизлиянии у людей также мохе! иметь

tmc.j Изменение интенсивности Н csiiatwi при

владении 0,6 ш аутокровя s сташсвздноз тело

1 - ратрскетяяьное расаояакениа

2 - ихтревгтреальное расположекле

3 - праре-кначьноа распопмкнле

место усиление интенсивности ПОЛ, что, возможно, и обусловливает нарушение функционального состояния стекловидного тела. Измерение интенсивности ПОЛ в стекловидном теле человеческих глаз после витрэктогяш при кровоизлиянии показало, что у людей развитие процесса ПОЛ протекает значительно интенсивнее, так как содержание МИД и интенсивность ХЯ увеличивались уже через 4-G дней после кровоизлияния.

Таким обра&лл, мояио сделать заклвчешш о том, что кровоизлияние' а стекловидное тело, как в эксперименте, так и у людей, сопровождается заметный усилением ЛОЛ. Причем характер и скорость развития процесса ПОЛ в стекловидном теле существенным образом зависят от количества изл*шзейся крови и места локализации кровоизлияния. Наиболее бистрое и резкое изменение интенсивности ЛШ1 в стекловидном геле наблоцается при преретинальном

расположении кровоизлияния. Интенсификация ПОЛ стекловидного тела способствует резкому развитии его и в сетчатке, что, в свою очередь, возможно, усугубляет перекясное повреждение в стекловидном т«ле, и это, по-вицимоыу, приобретает ватшое зна-чегаге в швартообразовании.

По литературным данным, при ретролентальном расположения кровоизлияния (Haul e"t ai 1ЭГ4), во-первых, не роегда происхо-дат полный фибрииолиз, во-вторых, в большинстве случаев сгусток, пршшпэя к хрусталику, вызывает катаракту и структурные изменения в передней части стекловидного тела (Гунцорова и цр. ,1986).

2. Влияние накопления продуктов ПОЛ на структурно-функциональное состояше стекловиздюго тела и сетчатки при внутриглазном кровоизлиянии

Кровоизлияние в стекловидное тело характеризуется разжижением гиалуроновой кислоты, нарушением мг~аболглма коллагено-вой системы, после чего следует помутнение стекловидного тела, организация соединительнотканных тяжей, повреждение сетчатки и, наконец, слепота (Гундорова и др., 1336). Нами установлено,что вышеуказанные функциональные нарушения в стекловидном теле при кровоизлиянии сопровождаются усилением процесса ПОЛ.

В связи с этим возникает необходимость выяснения характера участия продуктов ПОЯ в развитии функциональных нарушений стекловидного тела и сетчатки при интравитреалыюм кровоизлиянии. '

2.1. Изменение функционального состояния стекловидного тела и сетчатки при экспериментальном кровоиг»"ияшш

При введешш аутокрови в стекловидное тело происходит заметное изменение прозрачности изучаемого объекта. Сразу после введения аутокрови прозрачность стекловидного тела резко уменьшается, а через 8-10 дней после кровоизлияния, в связи с разложением излившейся крови, несколько увеличивается. Отаако, через 20 цней после гтедешгя аутокрови вновь отмечается уменьшение прозрачности.

Результаты опытов показали, что при »ведении аутокрови в стекловидное тело происходит существенное изменение » его вязкости. Начиная о 3-го дня опыта, величина нязкосгя отекло-

видного тела непрерывно уменьшается до 20 дня опыта. К этому сроку вязкость стекловидного тела достигает 1,2 ед., что в 1,5 раза ниже контрольного уровня (1,95-2,0 ед.). Начиная о 20-30 дня, вязкость стекловидного тела постепенно увеличивается, доходя к концу опыта до 1,45 ед.

Единичные факты (ыс cord et 1974) позволяют предположить, что активные формы кислорода и перекиси лкпидов, образующиеся в стекловидном теле при кровоизлиянии, могут заметно влиять на полимерную структуру гиалуроновой кигтоты, вызывая её деполимеризацию. Пля подтверждения этого ш изучали действие океанических перекисей на вязкость отекловидного тела, а также действие ангиоксадантов на изменение вязкости на фоне кровоизлияния.

Опыты показали, что, действительно, после введения в стекловидное тело органической перекиси кумола (изопропил-ббнзола) вязкость заметно уменьшается до 25-го дня опита, после чего, как и при кровоизлиянии, происходит увеличение вязкости и образование "бусин", представляющих собой цлотную массу, что, по-видимому, связано с образованием в стекловидном теле высокомолекулярных белковых агрегатов.

При введении ангяоксиданта фенозана калия уменьшение вязкости происходит значительно медленнее, чем при кровоизлиянии. После введения фенозана калия в первые 10 дней опыта почти не происходит уменьшение вязкости стекловидного тела, её значение при этом равняется 1,85 ед.

Результаты опытов показали, что, при введении аутокрови в стекловидное тело наблюдалось существенное изменение функциональной активности сетчатки. Начиная с 3 дня опыта, изменения ЭРГ коррелировали о изменением интенсивности ПОЛ в аналогичных условиях. '

При введении в стекловидное Тело 0,5 шх аутокрови в течение первых 10 дней опыта амплитуда "а"-волни снижалась на 12,5 ыкВ, а "в"-волны на 112,5 пкВ, после чего до 30 дня опыта ЭРГ животных с благополучным рассасывшгаем излившейся крови (35-45$) восстанавливалась по амплитуде, а временная характеристика оставалась измененной. -У животных, у которых не происходило рассасывание излившейся крови и образовывались соединительнотканные тага (30-55,?), к 30 дне опита ¿ГГ резко подавля-

лась. Введение 0,3 ил аутокрови в стекловидное тело называло аналогичные, но менее выраженные, изменения УРГ у всех животных (рис.4).

Рис,4 Муи&иаю» параметров улемтроретдиограы.'.ш (величина амилатусл "а" и "в"-20лн) при ¡.игреи,:ткровоизлеяшщ

1 - н: знеяке вшлэтхям "в'-волна ара йлаготакмом

»ечашя ^

2 - юиекмх» атзягуш "в"-аолм пот яе&мгоярмткш

гечениа

3 - аз«ан£ннв а&шигуда "в"-встш яря йлагапшигаол

гечешз

•1 - йэмеяание «мнлягудн "а"-Бзлны при нвблагопрдатиам течения

Введение в стекловидное тело инициаторов ИОЛ (солей железа и неди) тшсхе визшало сшиение ЭРГ с последующим её вос-становлегшеи, но изменение амплитуды отдельных волн ЭРГ в этом случае отличалось во времени. Если введение соли железа вызывало снижение алшштудо "а"-вол1Ш па 37,5 мкВ, а "в"-волш на 100 мкВ на 5-М день опыта, то при введении соли меди уменьшение амплитуда "а" -и "в"~волн соответственно на 35 мкВ и 162 мкВ наблюдали лишь на 15-й день. Соответственно отличались и сроки восстановления УРГ. При введении железа в стекловидное тело восстановление ЗРГ наблидали к 30-му дню опыта, а при ввергага

меди - лишь к 50-му даю опита. При предварительном введении ентиокоиданюв (фенозана калия, витамина Jä и ионола) в ходе интравитреального кровоизлияния параметры ЭРГ (амплитуды "а" и "в" волн) восстанавливались значительно быстрее (через 1520 дней), чем при введении аутокрови без антиокоидантов.

2.2. Физико-химические изменения гиалуроновой кислоты при экспериментальном кровоизлиянии

Одншд из наиболее характерных физико-химических изменений стекловидного тела при кровоизлияний являлось смещение значения pH, которое .непрерывно уменьшалось. Если в контроле величина pH колебалась в пределах 7,2-7,4 ед., то через 7 дней после введения аутокрови она уменьшилась до 6,88.

Изучая динамику изменения гиалуронг^азной активности на фоне экспериментального кровоизлияния, мы получили следующие результаты: на IU-* день опыта наблюдалось разжияение стекловидного тела; содержание гиалуроиидазы у контрольных животных было в пределах норды 120,0 ад.), а у опытных - повышалось до 25,1 ед. В дальнейшем, к 20-му дню, в опытном глазу гиалурони-даэная активность достигала 45,41 ед. На 45-Й день опыта, когда в стекловидном теле наблюдался довольно плотный волокнистый конгломерат, гиалуронидазная активность резко снижалась, достигая 23,42 ед. Видимо, одновременно'происходит отщепление гиалуроновой кислоты от ьэлкового комплекса и гидролиз гиалуроновой кислоты, которая■уяе не в состоянии удерживать количество воды, необходимое для нормального тургора глаза.

Подкислеше среды в процессе кровоизлияния может стать одной из причин изменения агрегатного состояния гиалуроновой кислоты с последующей активацией гиалуронидазы, приводящей к распаду гиалуроновой кислоты на ацетилглюкозамин и глюкуроно-вую кислоту. i

При кровоизлиянии в стекловидное тело существенным изменениям подвергается содержание ацетилглюкозашна (ATA). íj первые 7 дней опита содержание ЛГЛ в стекловидном теле повышается и превышает исходный уровень на 27%, после чего до 15-20-го дня опыта этот показатель непрерь. но уменьшается и становится в два раза ниже исходного. Уменьшение содержания АГА в стекловидном теле мояуг быть связано о ресороцией его в кровь, а так-

же и о тем, что определенная часть высвободившегося ацетил-глшозамина подвергается метаболизму.

Введение антионсиданта оксипиридинхлоргидрата (ШХГ) на фоне кровоизлитчия, незначительно влияя на увеличение ацетил-глюкозамина, существенно препятствует уменьшении его содержания.

Далее было установлено, что введение аутокрови в стекловидное тело сопровождается заметным изменением содержания окси-пролпна в нем. Опыты показали, что содержание оксипролигэ в стекловидном теле после введения в него аутокрови увеличивалось о 0,14 мнг/мл, достигая к 3-му .щш 0.G6 ыкг/мл, и к 25-му дню опыта превышало исходное значение в 12 раз.

Полученные нами данные согласуются с работой Proclcor (1965), исследовавшего гидроксилирование протоколлагена (меченного в анаэробных условиях по С^-цра.лна) и установившего, что образование оксипролина стимулируется чона/.г ¿-валентных металлов, из которых наиболее выраженный эффект оказывали ионы железа.

Исследование содержания оксипролина на фоне стабилизации ПОЛ алтиоксвдантом показало заметное его сшгаение в процессе экспериментального кровоизлияния. '

2.3. Изменение структуры составных компонентов стекловидного тела при экспериментальном кровоизлиянии

Целью дальнейшего исследования явилось выяснение структурных изменений стекловидного тела и уменьшения его прозрачности, обусловленных распадом шалу ромовом кислоты п увеличением синтеза коллагенов, связанных о развитием ПОД на фоне введения аутокрови. Решение этой задача OiJ.uo достигнуто исследованиями ИК-спектроь стекловидного тела в целом, а такяв выделенных из его липидов.

Исследование стекловидного тела показало, что его. ilKC имеют характерные полосы: JI4-Û37 сн~£, ответственные за -И и'-OU группы, аЫ-7-15 - за -Н и -GOii грушта, 3200 сы*А -за -Н и и H группы, 2&6-2t>53 cm"-1 - за и -ОН группа, 1650-1630 - за OCii, группу.

Б стекловидном теле наличие полосы ~Н и =00 свидетельствовало о существовании водородной связи между ацетиламингруп-паш и глюкуроновой кислотой в соседних цепях.

Полученные результаты показали, что до 5-го дня опыта в ИК-спекграх особых отличий от контроля не обнаруживается. В дальнейшем, в течение 30 дней происходит непрерывное уменьшение полосы поглощения, =00 и -Н при 1780-16.30 см-'1". Зто может быть объяснено разрывом водородных связей типа =00 и -Я и, вполне вероятно, деполяризацией гиалуроновой кислоты. Увеличение интенсивности полос при 1650-1630 см-'1', обусловленных группе'! -0СН3, указывает на распад гиалуроновой кислоты. Одновременно было отмечено увеличение содержания ацетилглюкозаминов после распада гиалуроновой кислоты, содержание которой, по данным ШО после 3-го дня опыта, резко уменьшается. В липидах ин-тактного стекловидного тела были обнаружены следующие характерные полосы: 1060 см-1, обусловленные Р-О-С: 1260 см-'*' (-Р=0), 1550 смт1^1У%). 16-30 см"1 (-СН3 и -П) и, наконец, 3100-3450 см~г обусловленные колебанием -ОН группы вода.

Анализ ИК-спектров липидов стекловидного тела при введе-шш аутокрови показал, что при этом происходит существенное изменение структуры липидов. шло установлено, что через 15 дней после введения аутокрови в ¿Ш-спекграх липидов появляется интенсивная полоса поглощения в области ъ70-ВУ0 см-1, возможно относящаяся к продуктам окисления липидов.

Из литературы известно, что полоса 870 см-'' в основном обусловливается алкилперекисями С-О-О-С связей.

При введении антиоксидапта (фенозана калия) на фоне экспериментального кровоизлияния уменьшается интенсивность полосы поглощения в области 870-ЗУ0 см-1. При введении антиоксиданта -оксишридшшюргидрата в течение 20-^5 дней весы,и незначительно изменяются полосы поглощения в области 16,50-1630 см""1, а также менее интенсивно идет усиление поглощения в области 884745 сн-1. Это свидетельствует о том, что введение антиоксиданта в определенной степени задергивает развитие процесса ПОЛ и накопление его продуктов, что в свою очередь стабилизирует полимерную структуру гиалуроновой кислоты.

2А. Изменение структуры и содержания белков при экспериментальном кровоизлиянии

Стекловидное тело по своему химическому составу является весьма сложной тканью, реашрувдей на изменения условий среды, в частности, на кровоизлияние. При этом происходит ряд последовательных, взаимосвязанных биохимических процессов, в результате которых орган зрения нередко теряет олов функциональную активность.

Судя по данным литературы, в процессе ресорбцин крови в стекловидном теле происходит гемолиз крови, усиление фагоцитоза и фябринолиза (Ромаденко, iiiVti; Forrester et а! 1ы76), что сопровождается децолшлеризацяе;; гнаяуроновои кислоты, а также нарушением структуры эластичных кодлагеновых волокон (Лазаренко и др., LJо-d).

Однако, в настоящее время не исследованы взашосвяь протекавших в стакловидаом теле биохимических процессов и их особенности при кровоизлиянии.

В связи с этим представляет интерес изучение динамики изменения содержания белков и их фракции при кровоизлиянии в зависимости от срока после введения аутокрови и расположения введенной крови

Полученные нами результаты свидетельствуют о тел, что, в зависимости от срока посла введения аутокрови, в стекловидном теле происходят последовательные нарушения метаболизма белков.

.{сходя нз полученных данных, кинетику изменения содержания банков при введении аутокрови г,кнпо условно разделить ла три периода. В первом периоде отчетливо видно повышение содержания общего белка, что, вероятно, связало с введением крова. bo втором периоде происходит интенсивный распад введенной аутокрови, усиление протеолиза, о чем свидетельствует заметное увеличение содержания аыинного азота и уменьшение содержания общего белка. Третий период в метаболизме белков при кровоизлияния характеризуется полным подавлением распада белков -уменьшением содержания ашнного азота и увеличением содержания общих белков.

Сравнивая содержание белка и шинного азота при различ-

- '¿г -

ншс расположениях кровоизлияния, мы установили, что при суб-ретиналъном расположении кровоизлияния биохимические процессы протекают более интенсивно: через 10 дней после введения ауто-крови содержание общих белков в стекловидном геле достигает 2,7 ыг/ыл, содержание шинного азота - 2,60 ыгу£, а при интра-витреалы-юм расположении кровоизлияния содержание общих белков составляло 1,5 их/т, содержание амшшого азота - ¿,ь ыг,2. При"' ретролентальном расположения кровоизлияния биототескы процессы протекали крайне вяло. По сути дела, при ретролентальном расположении кр ви исследуемые показатели ыс ились так ае, как и при шгаравятреальном расположении кровоизлияния, но с задержкой на 20 дней.

Интересные данные получеки при исследовании белковых фршсций стекловидного тела при экспериментальном кровоизлиянии.

■ В стекловидном теле здорового глаза имеются в основном .две фракции белка: глобулины и альбумины, прячем нам удалось обнаружить две гло'^линсвые фракции.

Совершенно иная картина белкового состава наблюдается при кровоизлиянии. После инъекции крОЕИ в стекловидное тело обнаруживаются основные сывороточные белки: альбумины, /С -3 и ^-глобулины. Прэтем количество альбуминов меньше, чем глобулинов, а среди глобулиновш: фракций и уЗ -глобулинов было больше, чем ^ -глобулинов.

Улектро&оретическое исследование белков показало, что по составу они соответствовали белкам сыворотки крови, введенной в стекловидное тело. Через 10 дней после кровоизлияния белки инъецированной крови не подвергались каким-либо серьезным изменениям. На 20-й день опыта в стекловидном геле оставались основные плазменные белка - альбумины, ¡/-,¿3- и /-глобулины. Однако, сравнение количественных соотношений белковых фршсций больного гла,за первого и второго срока показало, что содержание грубодасперсных белков и ^-глобулинов в процентном отношении несколько уменьшилось и в улектра$оре-грамме выражено нечетко. Ь связи с этим значительно уменьшилась суша глобулшювых фракций с относительным увеличением альбуминов. Следовителы.о, уяе че^ез 20 дней после кровоизлияния белки излитой крови начинает рассасываться. Разумеется, в этом процессе немаловашуа роль играют ферменты инъецированной кров;:.

На 40-й день эксперимента мн не сумели обнаружить плазменные белки, а и двух случаях в элекгроЬореграиме четко проявились арте-акты, мигрирующие впереди альбуминов. В остальных случаях, кшс правило, альбуцидов было ^олкле, чем глобулинов.

Таким образом, обобщал экспериментальный материал, ыомно сделать следующее заключение: введение аутокрови в стекловидное тело сопровождается рядом физпко-химнчиских изменений -смещением рП в кисдуа сторону, изменением обмена белков и усилением [ГОД, обусловлгаащих распад стегаокнщюго тела н структурные компоненты, усиление коллагекеза и молекулярные изменения в липидном компоненте.

Введение антпоксиданта на ¿юне кровоизлияния приводило к относительной стабилизации физико-химических характеристик стекловидного тела.

3. Коррекция ¡10Л в стекловидном теле гри э к с п е ршл ентал ы юм кровей злаяния

Мы установили, что введение в стекловидное тело аутокрови приводит к заметной интснси-икашш в нем процесса ПОЛ и, следовательно, в таких условиях мембранные структуры глаза находятся под постоянной угрозой повреждающего действия этого процесса, В результата усиления ПиЯ, накогиешю его ' продуктов может вызвать множество повреждений в биологических системах, таких, как агрегация колллгеновпх волокон, полимеризация белков, обуаяовливаощих потеря прозрачности и нарушение структурного состояния стекловидного тола при кровоизлиянии.

Однако, в существующих в настоящее время работах,,не предпринимались попытки выявления регулирущего действия анти-оксицантов на интенсивность ПОЛ в стекдов'тд/гом геле при кровоизлиянии.

В связи с этим, оольмой интерес представляет выясчетае возможностей коррекции НиЛ стекловидного тела прирощм.сг и синтетическими антиоксиданташ при экспериментальном кровоиз-лпянип. Мы изучили действие ндгиоиторов сшооднор-'.дикгльного окисления (.оксипдрпдинхлоргидртга - 01ЦГ, федоззна катил, тпурина, <Л-токо? ерола), различных помплекооноп металлов (традон Б и диэтйлдитиокароомат натрия - ДЦТК) и тушителей янте'ривдяа-

тов кислорода (маннитол и суперокоиддисмутаза - СОЦ) на интенсивность ПОЛ в стекловидном теле в зависшости от способа их введения (интравитреально и ретробульбарно). Столь широкий диапазон выбранных ангаокоидангов объясняется необходимостью коррекции процесса ПОЛ на его различных стадиях.

3.1. Коррекция процесса ПОЛ стекловидного тела анги-оксиданташ при экспериментальном кровоизлиянии

При интравитреальном введении антиоксидантов - фенозана калия и 01Ш? наблюдались изменения в содержании ЩА. Контролем служило изменение содержания ЫЦ в стекловидном, теле при введении аутокрови без антиоксидантов.

После введения антиоксидантов содержание МДЛ, постепенно увеличиваясь, достигает максимума на 20-й день после кровоизлияния. Уровень ¡»'¡ДА при этом, по сравнению с уровнем МЦА контрольной-группы животных, значительно пиле - в 1,55 (при .введении фенозана калия - 4 мг) ив 1,26 раза (ОПХГ).

При ретробульбарном введении фенозана калия и ООН* наблюдалась такая же закономерность изменения содержания МДА, как и при интравитреальном введении. При этом отмечается постепенное увеличение в стекловидном теле содержания МЦА, о максимумом на 20-й день опыта, но на уровне в 1,16 (ОПХГ) и 1,3 (фенозан калия) раза ниже, чем в контроле. Ретробульоарное введение вышеуказанных антиоксидантов сопровождается такяе уменьшением содержания гидроперекисей (Щ) в стекловидном теле. Здесь следует отметить, что изменение содержания Ш после введения ОПХГ и фенозана калия до 20-го дня опыта происходит по одинаковой кинетике, а затем, при введении фенозана калия (4 мг.в один глаз) наблюдается уменьшение содержания Ш до конца опыта, тогда как ретробульбарное введение ОПХГ приводило к резкому увеличению содержания гидроперекисей, максимум которого приходится на 30-й день опита. Увеличение концентрации фенозана кшхия (8 мг) введенного ретробульбарно на фоне экспериментального кровоизлияния, приводит к менее эффективному ингибирова-шю процесса ПОЛ (ряс.5).

Офтальмоскопическое исследование при экспериментальном кровоизлиянии показало полное отсутствие рефлекса с глазного дна. Лзучеше кинетической картины повлеченного после кровоизлияния стекдоз.щиого тела ( in vUro ) показало, что в

шол*/ш йелка 1.0 "

0,5

Изменение солдршния 1Т1 в стекяоеидноы аелз после ретробулгларяого Еъвяешн: 1.аугокрзвь (стекловияйое телэ,сгусток}-иситсаль 8.СШГ

3.феноэвд дьяцз (БмгЛ

4.<$екйз<ш кijrj.ii (4 кг)

период о о-го по дни происходило постепенное проац'шва-пие стешювидного тела кровьи, отмечаюсь большое количество крупных сгустков крови, и стекловидное тело приобретало темно-красную окраску (гемолиз эритроцитов). К 20-му дню опыта сг.у-стки крови, как бы соединяясь, образовашда1 кг ючки различных размеров (постепенная оргаШзашы сгустков). ¿( 30-45~цу .дням опыта, наряду с образованней сгустков я помутнением стекловидного тела, идут процессы дальнейшей организации крова в азотные соединительнотканные тжга.

ллиначеские исследования при интравитреальном введении 011Н' на фоне эх;спершдснталыюго кровоизлияния показали исчезновение рефлекса' с глазного дна уле с дня опыта, причем рефлекс не восстанавливался цо конца эксперимента. Действие этого антиоксиданта исследовалось и на модельной системе. Клиническая картина стеклогидцого тела при интравитреальном

- -¿о -

введении ОШГ показывала наличие сгустков крови к 3-цу даю эксперимента, а к ¿О-ыу дна стекловидное тело представляло собой серовато-белую творсшютув массу, У большинства животных, которым интравитреально вводился фенозан калия, на фоне кровоизлияния рефлекс с 1'лазного .дня исчезал к 3-;/.у дню опыта и появлялся (тусклый) лишь к ¿0-30-цу дням эксперимента. Наблюдения за изменением клинической картины стеклои-щного тела"" при введении ¿.енозана калия показали наличие с 3-го по Ь-й дни опыта сгустков крова различной величины. К 1^-му дна стекловидное тело приобретало тешо-краснцй ц: зт. На ¡¿С~и день эксперимента сгустков крови обнаружить'не удалось, стекловидное тело при этом приобретало сероватый оттенок.

Офтальмоскопическая картина стекловидного тела после ретробульбарного введения 01Ш' и (^енозана калия на фоне экспериментального кровоизлияния была неодинаковой. Так, при ретро-бульоарнои введении (ЛИГ появление едва прослеживающегося рефлекса с глазного дна отмечалось лишь к 20-30~цу д.ли опита. Прослеживая изменение клинической картины отекловицнох'о тела при ретробульбарном введении ОШГ, мы установшш наличие сгустков крови различной величины, начиная с 3-го епяоть до 20-го дня наблюдения. К 30-45-му дням эксперимента стекловидное тало приобретало светло-коричневую окраску, отмечалось наличие шояествевдых мелких сгустков крови.

Офтальмоскопическое исследование стекловидного тела при ретробульбарнок.введении фенозана калия в количестве 4 мг показало, что к 12-му дна после экспериментального кровоизлияния отмечалось появление тусклого рефлекса с глазного дна. В это время в отекловидноы теле обнаруживались меяие сгустки крови; к ¿¡О-ЗО-му дням опыта отмечалось полное восстановление рефлекса (красного цвета). При визуальном исследовании стекловидного тела, извлеченного из глаза, к 3-1,5у даю обнаружили наличие, в нем множественных мелких сгустков крови. К 1^-му дню стекловидное тело приобретало .келтоватыН оттенок с единичными точечными глцбка;л1; начиная с ¿0-го дня сгустков крови и помутнений практически обпаруки'х^ не удавалось, стекловидное тело восстанавливало свог прозрачность.

Таким образов, и штраБИтреаяыше, и ретробульбариос введение анмскоидаятов на доне эксперт-ентаяыюго внутриглаз-

ного кровоизлияния приводит к подавлению интенсивности НОЛ в стекловидном тела, №ля сравнивать эффективность этих двух антпоксидднтов, то из полученных данных следует, что фенозан калия, вводимый как ротрооульбарю, так и тштраЕИтреалыю, намного эффективнее подавляет накопление продуктов ДОЛ, чем 011ХГ, причем ретробульбарюе введение феиозана калия приводит к более сильному ингиОярованпю процесса ДО/1.

З.у. Коррекция процесса ПОЛ стекловидного тела различна.« но;.щлек..'опаш при экспериментальном кроноизлилши

Йзьсстно, что при шутрлглазнон кровоизлиянии в стекловидном тале повышается концентрация металлов переменной валентности, в частности, железа и меди, Еазыващих усиление ПОЛ, Это обусловливает целесообразность исследовании по изучению кинетики накопления продуктов 110л прл применении интяоксддан-тов-комш1бксонов, у;,:ень:наю.(их активность ионов металлов переменной валентности ~ таких, как тритон Б (комплексен мелеза) и диэтилдитиокарбомат натрия (комплексен меди).

Ь связи с этим ма исследования накопление МдД и ГПпри воздействия вшеуказшшых комплексонов металлов, вводимых ре-тробульбарпо как в отдельности, так и в комбинации с фенозаном калия.

Полученные результаты показывают, что комплексонн -трилон Ь и диэтидщгеиокарооиат натрия ОДО'К) заметно сникают скорость !ЮЛ в стекловидном теле при экспериментальном кровоизлиянии, причем более заметное стгаетше интенсивности ПОЛ наблюдается после введепия-трилона Ъ (рис.6 и 7).

Кинетика накопления МЦА после регрооульоарного введения Еомл'тексонов такая ;яе, как и в контроле, и характеризуется тем, что к 12-му дню после кровоизлияния содержание МДА уменьшается, а затем увеличивается и, достигая максимума к 20-му дню, вновь резко уменьшается к концу опыта (рис.6).

Кинетика накопления П1 после введения комплакоонов характеризуется постепенный увеличением их содержания до 20-го дня опыта, после которого к 30-ну дню уровень последних, увеличиваясь и достигая максимума, резко уменьшается к 45-му дню (рис.7), шесте с тем надо отметить, что после ретрооуль-

Бреия.даа

Ркг.б Измееваиа содержания 1Ш в стещгошыиои теле со огутааи «рзеа ара раграЯульЗариоа вмдзяи кошлекаоноа

1.гшп? роль-мала вмюпш 0,3 ия.алокрови

2.г.аедеш; »рияэвя Б

3. взвиваю шталдмяаяарбсиата ватр.м в.ввздевя» гршмаа Н г феаозеяа яалая 5,ввадаиав КйэяаладтиокйрСцмата штрад

к фрнозаиа калнд

барного введения трялопа Ь подавление интенсивности ПОЛ оолее выражено, чем при ретробульоарном Еведешш ЦЦТК,

Картина клинических изменений в стекловидном теле при ретробульоарном введении вышеуказанных коидяексонов на фоне экспериментального кровоизлияния была почти одинаковой. Отсут ствие рефлекса с глазного дна наблюдалось до 12 -го дня, а в некоторых случаям - вплоть до 20-го дня эксперимента. Появление тусклого ретлекса с глазного щи начинало прослеживаться к 20-30-му дням эксперимента; к этом^ времени в стекловидном теле обнаруживалось множество сгустков крови (в основном мелких) в виде взвеси из черных "точек" и "глцоок", мешащих офгалшоскопированно глазного детали которого просматривались сквозь туман. К концу опыта (45~й день) стекловидное тело оставалось мутным - в нем наблвдгллсь .диффузная взвесь плавающих помутнений.

ra

' тэЯЗ/т белка

Рм.7 праквкеияя.коиплэксопоэ нэ foHa ввутричтзногз яроэсяэлиянял.

1Л]ГЮИрэаЬ {QT1Klt0B8ZllO9 твло+огусгоя) - ronîfûj-i 2.Тгйлоп В

злят

4.Тгядаи В * Ьгпозт ииия (4мг) 5.ОТК + 4««озаи мтачг <4 го)

Ретробульбарное введение нсмплексонов в комбинации с фенозанои калия на фогте экспериментального кровоиз-тапия приводило к резкому-попавленип интенсивности ПОЛ в стекловидном теле во псе -сроки опита, причем наиболее заметное шггиоирова-иие ПОЛ оказывало ретрооулъоарноа введение трилона Б в° комбинации с ретрооулюарнш введением фенозана каяия.

Офтальмоскопическое исследование гл..з .тавотных с внутриглазным кровоизлиянием, которшл ретрооульоарио вводился ДД'ГК в комбинации о феноэаном калия, показало, что к З-гу дни после кровоизлияния у большинства животных полпостъп исчезал рефлекс с глазного дна, который едва прослетгвглся к 0~му шш опыта. При этом в стекловидном теле телись единичные больппто плавохлие в нем огустки крови. На 12-й день наблюдался слегка осмоленный реЬлекс о глазного .дна, сдтппгчныв почутие-

ния в вида черных "точек" и "гяноок", пот пли глазного гага яро-

сматривались сквозь туман. Полное восстановленпе рефлекса в основном наблюдалось к 20-ыу и, реяе, к 30-му дням опыта. К этому сроку в стекловидном теле обнаруживались единичные мелкие плавающие помутнения, уже не обнаруживаемые к 30-45 дням после кровоизлияния.

Наблюдения за изменением клинической картины стекловидного тела при ретробульбарном введении трилона Б и фенозана калия показали, что к 3-му дно все стекловидное тело было пропитано кровью, оно имело красный цвет о наличием множественных (больших п мелких) сгустков.

У животных, которым ретробульбарно вводился трилон Б и феноэан калия, рефлекс с глазного дна также проявлялся лишь к 8-му дню эксперимента. К этому сроку в стекловидном теле в проходящем свете обнаруживались единичные мелкие сгустки крови. На 12-й день отмечалось восстановление рефлекса о глазного дна. Глазное дао становилось видимым, однако в стекловидном теле отмечались мелкие темного цвета сгустки крови. К 20-му дню эксперимента сгустки крови обнаружить не удавалось.

Таким образом, вышепредставленные данные свидетельствуют о том, что свободяорадакалькые окислительные процессы при кровоизлиянии корректируются ретробульбарным введением комплексообра-зователей, Ретробульбарное введение их в комбинации с фенозаном калия (4 мг) приводит к более эффективному ингибировани» процесса ПОЯ в стекловидном теле и стабилизации его функционального сосгоя1шя.

3.3. Коррекция процесса ПОЛ стекловидного тела тушителями радикальных интермедаатов кислорода при экспериментальном внутриглазном кровоизлиянии

Одним из возможных путей инициирования ПОЯ при кровоизлиянии является генерация радикальных интермедиатов кислорода, оунерокмщанионрадикала (0^), дасмутация которого приводит к образовании гвдроксильных радикалов. Увеличение ковдентрации этих радикалов в среде, о одной стороны, усиливает ПОЛ, с другой - раачяяаот стекловидное тело.

Мы приводили результаты сравнительного изучения влияния туаштелэй оупероксицанионрадикала - супероксиддисмута зы (СОД)

и гидроксилышх радикален (маннитола) на интенсивность процесса ПОЛ в стекловидном теле при внутриглазном кровоизлиянии.

flai.ni установлено, что введение СОД, как ретробульбарно, тазе и иитравитреально, приводит к снижешш интенсивности ПОЛ в стекловидном теле. Наиболее заметное подавление процесса ПОЛ наблюдается при ннтравитреальном способа введения. Так, уровень МЦА при указанном способе введения бил в 2 раза ниже,чем при ретробульбарном введашт фермента.

Введение маннитола экспериментальным лгютннм сопровояда-лось снижением содержания МДА и ГП в стекловидном теле. Следует отметить отсутствие существенной разницы в содержании МДА в стекловидном теле после рзтробульбарного и интравитреально-го способа введения маннитола.

Введение СОД (ретробульбарно и иитравитреально) приводит к более заметному ингиб^овашго процесса ПС.1 в стекловидном тале, чем введение маннитола.

Далее, ш изучали влияние ннтравитреального введения СОД в сочетании с ретробулъбарным введением феиозана калия (4 иг) при кровоизлияния. Полученные данные свидетельствуют о том, что комбинация интравитреального введения СОЛ с ретробульбар-ннм введением фанозаиа калия (4 иг) усиливает антиоксидативный эффект СОД.

Офтальмоскопическое исследование стекловидного тела при комбинированном применении СОД (штравитреально) и фенозана калия (ретробульбарно) на фоне кровоизлияния показало, что ослабленный рефлекс с глазного дна прослеживается к 12-му дню эксперимента. Полное восстановление рефлекса с глазного дна в наших экспериментах отмечалось, в основном, к 20-му дню.

При наблюдении за состоянием стекловидного тела отмечалось наличие множественных мелких сгустков крови с 3-го по 8-й дни эксперимента, при этом стекловидное тело приобретало темно-красную окраску. К 12-ыу дню цвет стекловидного тела становился желтоватым, отмечались единичные мелкие сгустки крови, уже не обнаруживаемые на 20-45-й дни эксперимента.

Таким образок, применение СОД и маннитола сопровождается иигибированнем процесса ПОЯ в стекловидном теле при внутриглазном кровоизлиянии, причем наиболее заметный антиоксидативный эффект вызывает интравитреалыюе введете СОД в сочетании с

ретробульбарнш введением фенозана калия, сопровождающееся восстановлением функционального состояния стекловидного тела.

Обобщая полученные факты, можно заключить, что применение саышс различных актиоксядантов во всех случаях частично шш полностью снимало негативное влияние, которое было обусловлено фактом интенсификации ПОЛ. Ьместе с тем, терапевтический аффект тех шш иных антиоксидантов в значительной степени зависел от способа их введения.

4. Морфологические изменения в стекловидном теле и сетчатке при экспериментальном интравитреальном кровоизлиянии

Внутриглазные кровоизлияния, приводя к серьезным деструктивным изменениям стекловидного тела, сопоовсядаются также многообразными патогиотологическими (морфологическими) изменениями во всех оболочках глаза.

Как известнс из исследований последних лет, одной из причин нарушения функциональной активности различных тканей глаза является усиление в них процесса ПОД.

Шло показано также, что этот процесс поддается регуляции различными антиоксицантами, причем антаоксидантная терапия частично или полностью восстанавливает функциональную активность тканей. Б этой связи естественным выглядит вопрос о влиянии антиоксидантов морфологическое состояние тканей глаза ' при внутриглазном кровоизлиянии.

Провода гистологические исследования на 10-й день после кровоизлияния, в одшх случаях мы наблюдали, что излившаяся в стекловидное тело кровь состояла из распавшихся эритроцитов и нитей фибрина, в других случаях на месте сгустка крови отмечалось скопление фибробластов, стшулирувдих образование соединительной ткани. Спустя 10 дней после введения аутокрови обнаруживались темные пузырчатые образования и небольшие разрывы сетчатки, а в стекловидном теле - плавающие нити помутнении.

При отслойке сетчатки и помутнении стекловидного тела одновременно наблюдались отчетливые морфологические нарушения, которым сопутствовало изменение о ккнкх процессов.

Значительные изменения претерпевали места разрыва сетчатки, что сопровождалось гибель/) нейрональных элементов. Отме-

чалась глиальная пролиферация, особенно в области границы кровоизлияния. Пигментный эпителяй в области ретинального отверстия местами отсутствовал, что, по-видимому, было связано с мехшшчоским разрушением.

В сетчатой оболочке изменялся слой палочек и колбочек, которые вследствие отека бил и значительно раздвинуты. Капилляры сетчатки были расширены. На внутренней поверхности сетчатой оболочки обнаруяивалась парная фиброзная пленка с примесью эритроцитов, а также крутые клетки, в цитоплазме которых с^ло большое количество темных зерен.

Ткань сосудистого тракта состояла в основном из инъецированных сосудов. Кроме указанных изменений, наблюдались особые проявления со стороны цилиаркого эпителия. В очагах кровоизлияния, близко расположенных к области циляарного эпителия, последний находился в состоянии пролпфе^ цпи.

При впутрих'лазном кровоизлиянии в контрольной группе яи-вотных (без введешш антиокоидантов и номилексонов) происходили дистрофические изменения сетчатой оболочки.

На 20-й день после кровоизлияния наблюдалась следующая картина: распадался фоторецепторшй слой сетчатки, ядерные слои теряли четкость структуры и часто сливались мелду собой, слой ганглиозных клеток в результате отека выглядел набухшим, при окраске по Нйослю ядра ганглиозных клеток выглядели гипер-хромными, сосуда сетчатки были сильно расширены и переполнены эритроцитами. В слое нервных волокон обнаруживались участки утолщения отдельных волокон, которые, утрачивая свою компактность, становились рыхлыми. Отечная жидкость, проникая меяду нервными волокнами, расслаивала их на отдельные связка. Отек тагасе выявлялся и в наружном сетчатом слое. К 30-му дню после кровоизлияния отмечался дальнейший распад 'оторецепторных клеток, ядерный слой, находился в хаотическом состоянии. Во шогнх участках сетчатки отмечалось полное отсутствие нервных волокон. Ганглиозные клетки в значительной части выглядели удлиненными в результате их деформация.

Постепенное восстановление морфологической структуры сетчатой оболочки мы наблюдали при ретробульбарном введения антиокоидантов, в частности, фенозана калия в комбинация о тритоном и и ДЗТК натрия. К 20-му дно после кровоиэллягая сег-

чатка в основном сохра!шла свою структуру. К 30-му дню отмечалась четкал упорядоченность слоев, однако еще сохранялся отек в фоторецепторном слое и на ограниченных участках слоя нервных волопон, а также вакуолизация ганглиозных клеток. К 45-му дню опыта структура сетчатой оболочки в основном восстанавливалось, спадала отечность слоя нервных волокон. Однако, в некоторых случаях вое еще сохранялся перенуклеар-шй отек в отдельных ганглиозных клетках и вакуолизация отдельных нейронов.

При ретробульбарном введении фенозана калия и ЦДТК натрия к 20-му дню после кровоизлияния в сетчатке начинались процессы восстановления её структуры..

К 30-му дав опыта сохранялся отек фоторацепторного слоя и части ганглиозных клеток. Отечным выглядел такае и слой нервных волокон. К 45-му дне после кровоизлияния сетчатка об. ретала нормальное строение. Отмечались только явления разрушения дендритов единичных ганглиозных клеток при окраске по Нисслю.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что кровь, излившаяся в стекловидное тело, вызывает в нем определенные дистрофические изменения. Однако, ретробульбарное введение фенозана калия в комбинации с трялоном Б и ДЦТК натрия приводит к постепенной нормализации морфологической структуры сетчатки. Следует отметить, что наибольший эффект в восстановлении структуры оетчатки оказывает ретробульбарное введение фенозана калия в комбинации с трилоном Б.

При проведении гистохимических .йсоледований в первом периоде после кровоизлияния (через 10 дней) окрашивание на кислые мукополисахариды почти полностью отсутствовало. При окраске альцианоЕкм синим поврежденные участки сетчатой оболочки .и стекловидного .тела не скрашивались в голубой цвет, волокна и клетки не дифференцировались. Метахромазия сохранялась лишь в неповрежденных слоях сетчатой оболочки.

Результаты следующего периода исследования (через 30 дней после кровоизлияния) показата дальнейшее усиление цато-ыорфологических и гистохимических изменений.

Клеточные структуры сетчатой оболочки в значительной степени замещались разрастающимися глиальными элементами.

В очаге кровоизлияния были видны волокнистые структуры из белковых ыасо экссудата.

В стекловидном теле обнаруживались своеобразные единичные тязки, отличающиеся бесотруктурноотыо, По Ван-Гизону они окрашивались в желто-розовый цвет, по Машгори - в грязно-серый. В эти тяни мигрировали различные блуждающие клетки, фиб-робласты, плазматические клетки, что придавало им характер рыхлых и отечных тканевых образований. Эти гомогенные бесструктурные тяжи часто были тесно связаны о беспигментным эпителием цилиарного тела.

В период рубцевания в рыхлой строме кислые мукополиса-хариды выявлялись в виде глубок либо в виде нитевидных образований.

Реакция ыегахрамазии при различных значениях рН среды окрашивания, а также соответствующий фермекгативнай контроль указывали, что в ткани организующегося рубца накопление суль-фатированных мукополисахаридов {хавдроитиноерных кислот) превалирует по сравнении с несуяьфатировшшыми (гиалуроновая кислота) .

Изучение препаратов, полученных с помощью реакции тетра-зониевого сочетания, показывало некоторое накопление белков, включающих в окоп состав тирозин, триптофан и гисти.дин, которые выявлялись в рыхлой соединительнотканной структуры в виде мельчайших гранул или тонких фибриллярных структур.

После 24-часового бензилирования реакция тетразониевого сочетания полностью отсутствовала.

Гистохимические исследовашш повреаденнчх тканей через 2-3 месяца после кровоизлияния свидетельствовали о закономерном возрастании количества кислых сулв$атированншс и нейтральных мукополисахаридов, а также белков в пучках коллагеновнх волокон в процессе швартообразования. Формирование грубого соединительнотканного рубца ми констатировали у подопытных животных при большой давности повреждения (4 года).

Морфологические доследования показали, что источником разрастания шварт при внутриглазном кровоизлиянии является поврежденная сетчатка, а также измененное стекловидное -ело с выраженной, тенденцией к образованию тяжей, массивных полос и лент. Эти образования следует рассматривать как результат

огрубения стекловидного тела с последующей его коллагениза-дией.

Данные гистологических исследований, свидетельствующие о одвигах обменных процессов при швартообразовании, дают возможность выявить причины патолого-мо реологических изменений в очаге повреждений.

Изучение процесса образования шварт в стекловидном теле после введения аутокрови показало наличие изменений сетчатой оболочки и стекловидного тела, соответствующих изменениям бел-ковомукополиса"1ридного обмена, что позволяет говорить о заметной корреляции между этими процессами./

Процесс организации и развития соединительной ткани в стекловидном теле следует связывать как с нарушением его структуры, так и с физико-химическими превращениями. Наряду с этими изменениями, для возникновения соединительной ткани в стекловидном теле немаловажное значение имеет состояние окружающих его оболочек.

В наблюдениях более позднего срока {5-7 месяцев после кровоизлияния) приходилось констатировать факт организации соединительнотканных тяыей, когда излившаяся кровь соприкасалась с сетчаткой или диском зрительного нерва. Это подтверждается гистологическими исследованиями.

Проведенный морфологический анализ дает возможность предположить, что сакш ранним изменением формирующейся шварты является накопление цизкополимерызованншс мукополисахари-дов, которые стимулируют процесс огрубения и перехода волокнистых соединительнотканных структур шварты в необратамыа колла-геновые. Этому благоприятствует возрастающее накопление ШИК-положителышх веществ (нейтральных мукоцолисахаридов) и нарастание концентрации коллагена. .

Таким образом, кровоизлияние в стекловидное тело нередко вызывает отслойку сетчаток оболочки с последующей дистрофией ее слоев в зависимости от места, степени и объема кровоизлияния. Б результате кровоизлияния отмечаются пролиферация гли-альных элементов сетчатой оболочки и криологические изменения в структуре стеклоглдного тета, способствующие возникновение грубой соединительной ткани.

Период формирования рубца тесно связан с изменением

белковомукополисахаридного обмена в участке кровоизлияния. Полученные данные свицетел1>ствуют о качественных изменениях мукополисахарпдов и белка (коллагена), играющих ведущую роль в процессе образования соедиштельнотк-нного рубца.

В период образования шварты гиотохимически обнаруживается накопление значительного количества хонцроитинсулхфатов и коллагеновых белков'. Одновременно отмечается згметное снижение содержания белков, содержащих аминокислоты - тирозина, триптофана и гистидина.

Анализ морфогиотохимической картины и сопоставление мор-фол огических изменений в различные периоды формирования рубца позволяют более точно оценивать функциональное состояние травмированного глаза и имеют практическую ценность при оценке степени патологии стекловидного тела и сетчатки.

5. К вопросу о механизме усиления ПОЯ стекловидного тела при внутриглазном кровоизлиянии

Мы установили, что введение аутокрови в стекловидное тело сопровождается усилением интенсивности ПОЛ как в стекловидном теле, так и в сетчатке.

При внутриглазном кровоизлияния усиление ПОЛ и накопление его продуктов вызывало серьезные функциональные наруиения, .выратсагадиеся в уменьшении прозрачности и вязкости стекловидного тола и подавлений электрической активности сетчатки. Наряда с этими изменениями происходит образование фибрсбластов, отек гиалоидних пластинок, разрыв и отслойка сетчатки,гибель нейроналышх элементов.

Ьез выяснения конкретных механизмов усиления ПОЛ "в стекловидном теле нельзя разработать оптимальные способы лечения, предотвращающие осложнения после внутриглслного кровоизляния. В то же время из литературных данных известна роль компонентов крови, повреждакдих сетчатку и способствующих усилению ИОЛ в стекловидном теле при кровоизлиянии. В частности, в последние годы особое внимание уделялось металлам переменно;'! валентности (железо и медь), гемоглобину, липидам, содертаадшся в крови. С учетом этого наши эксперименты по выявлению возможного механизма усиления ПОЛ при кровоизлиянии включали в себя изучение инициирующего действия на ПОЛ стекловидного тела конов

железа, меда, гемоглобина, эмульсии фоофолипидов крови и органических перекисей. ■

После введения в стекловидное тело каядого прооксиданта в отдельности прослеживали изменения процесса ПОЛ в течение 50 дней.

При введении оернокислого железа в стекловидном теле количество МДА заметно увеличивается и к 7-му дню опыта достигает максимума, равного 0,50 нмоль/мг белка, затем рэзко падает к 14-му дню до исходного уровня (0,08 нмоль/мг белка), после чего до конца опыта постепенно снижается. Интенсивность ХЛ в данном случае изменяется по кинетике, аналогичной изменению количества МЦА.

Введение сернокислой меди в стекловидное тело также приводит к повышению содержания МДА и интенсивности ХЛ. Однако, в этом олучае изменение обоих параметров не было столь значительным, как при введении сернокислого железа и достигало максимума к 14-му дню опыта (0,19 нмоль/мг белка и 200 имп/10 сек),

Введение в стекловидное тело гемоглобина, так же, как и металлов переменной валентности, привопит к выявлению одного .максимума в кинетике изменений ПОЛ, который приходится на 3-й день опыта (0,3 нмоль/кг белка).

Аналогичную (с одним максимумом) кинетику изменений интенсивности ПОЛ наблюдали при введении в стекловидное тело эмульсии фоофолипидов. В то же время этот максимум. (Óv2 шоль/ мг белка) наблюдается на 12-й день опыта.

Таким образом, введение всех вышеперечисленных веществ (гемоглобина,.ионов железа и меди, фоофолипидов) сопровождается изменением интенсивности ПОЛ по схожей кинетике о максимумом соответственно на 3-й, 7-й и,12-й дни опыта.

Введение в стекловидное теле/ промоторов ПОЛ вызывает изменение содержания МДА и в сетчатке. Так, при введении оернокислого железа, меди и гемоглобина интенсивность ПОЛ в оетчатке достигает максимума к 5-му дню опыта, после чего наблюдается еа снижение с минимумом на 7-й день опыта.

При введении в стекловидное тело перекиси кумола также происходит уоиление интенсивности ПОЛ. При введении перекиси кумола интенсивность ПОЛ в максимуме значительно ниже по орав-

пению о введением аутокрови и достигает его позднее (на 15-й день). В отличие от введения аутокрови при индуцировании ПОЛ органическими перекисями интенсивность ПОЯ через 20 дней после введения остается на уровне более высоком, чем при введении аутокрови (рис,8).

& Время, дни

ч

о

° Изменение содержания МДА я стекловидном теле

1 - при. введении аутокрови Рис.8 2 - при введении переклей купола (0,5 Ю М)

В дальнейшем нагла било проведено исследование действия ' комбинированного введения промоторов ПОД в стекловидное тело. Данная серия опытов проводилась с целью установления возможного взаимодействия различных компонентов крови в процессе интенсификации НОЯ в стекловидном геле , при кровоизлиянии.

При сопоставлений изменения кинетики МДА при'комбинированном введении гемоглобина и эыульоин фосфолигшдов с изменением кинетики накопления продуктов ПОЛ при введении аутокрови обнаруживаются определенные различия.

При комбинированном введении сернокислого железа и эмульсии фоофолипйдов, кинетика накопления продуктов ПОЛ также отличалась от наблюдаемой наг,и кинетики накопления МДА и интенсивности ХЛ при введении аутокрови. Под действием сернокислого железа и эмульсии фосфолипидов в начальные срока отсутствовал латентный период, интенсивность ПОЛ резко усиливалась в

течение 5-7 дней.

' Далее мы изычалш действие промоторов ПОЛ на стекловидное тело в модельной системе ( ы vitro ). Результаты исследования показали, что после введения в изолированное стекловидное тело сернокислого железа, ме.ди и гемоглооина такяе происходит усиление процесса ПОЛ, о чем свидетельствует увеличе-^ ние содержания МДА и интенсивности ХЛ.

Характерно, что в модельной системе срок досишения максимума содеркакия проектов ПОЛ в значительной степени определяется агрегатным состоянием стекловидного тела. Так, при добавлении сернокислого железа, меди и гемоглобина к стекловидному телу, сохранивпему коллоидное состояние, содержание ¡ДА достигает максимума соответственно через 3-5 часов (рис.9) после гемогенизацшг стекловидного тела, из-за увеличения диффузия ионов металлов, доояжсеше максимума наблюдается через 30 минут. Повторное добавление металлов переменной валентности вызывает некоторое усиление ПОЛ. По-видимому, уменьшение интенсивности ПОЛ после достижения макоимука связано с отсутствием восстановителей, переводящих 3-валентное железо в 2-валентное и 2-валентнуа медь в I-валентную форму.

Гк.9

3

S 7

То-

го 14 !

Время, дни |

Иэииевве количесгва ЦМ стекловидного тела при введении различных катализаторов.

!Ш , :

I - 0,5 ид еуюхрова, 2 - Ю М оервоклалого яелзаа, 3 - серкогаалов меда,

1 - 'А ит/ил геиоглойлиа, 5-1,2 игЛл знупьоии фосф>лишщоо.

Таким образом, анализ представленных данных показывает, что компоненты крови, являющиеся промотораш ПОЛ, вызывают усиление процесса ПОЛ как ы vivo так и in ritro Наблюдаемое нами наибольшее усиление ПОЛ при введении ионов маталлов перемешюй валентности, возможно, связано с образованием проектов одно- и двухэлектронного восстановления кислорода -супероксидашонрадпкаяа тми гидроксильных радикалов.

Учитывая высокую интенсивность и быстроту развития процесса ПОЛ при действии металлов деремениоЛ валентности, усиление ПОЛ в стекловидном теле при кровоизлиянии ыояно связать о образованием гидроксилышх радикалов, которые с большой скоростью и эффек явно инициируют процесс ПОЛ ( ¡ioíTu&n, ЗоЬлиЬ 1930).

Генерация гидроксильных радикалов мозет быть описана схемой:

2Н* + íe2+ + 02 - SFe3*" + K¿02

¡L¿ 02 + Fe2+ -Ге3*" + ОН~ + ОН'

Однозлектронное восстановление молекулярного кислорода катализируется ионами 'металлов переменной валентности, что может привести к образованию суаероксиданионрадикала-

В результате распада или взаимодействия оупероксишитон-радакала с перекисью водорода или присутствия металлов переменной валентности генерируются гидроксильные радикалы!

Ге3!" + ~0'¿ -¥е2+ + 02

Гей+ + Н202 -но" + "ОН*

Инициация ПОЛ, происходящая главным .бразом в результате взаимодействия гидрокси.'-'ч-шх радикалов о непредельными лпппда-ми, приводит к образованию радикальных л;*аиднцх интсрмедиатов; их проявление в окисляющей системе, очевидно, вызывает чередование двух следующих друг за другом реакций:

"О; + "0? + 2Ü+ - 0, t- Н.,0.

¿ ¿ лес

~0¿ + ll¿Q.¿ - 0-¿ + Oil" + ОН ,

в которые вовлекаются все новые молекулы липидов.

Как показали наши исследования, в присутствии стекловидного тела введение железа и гемоглобина в инкубационную среду сопровождается повреждением высокомолекулярной ДНК, о чем свидетельствует злектрофореграмма, представленная на ■ рис. 10. ..........._. . __....._.. . ... ....

а

I

■I! ' /

МиЖТЙИПГ II ^ "-"I" '

I 2 3 4 5 в 1

Рис.10. Щелочной гель-электрофорез ядерной ДНК В опытах ДПК инкубировали с: I - интактнш.1 стекловидным телом: 2 стекловидным телом: +ге^+(100тМ) :3

8

интактнш

(400i.il) :4 - -"- + №2+(800мМ) :5 - +№2+(400мМ)+ + СОД (2 мг/мл) + катализа: 6.- -"- +ге2+(400мМ) +" + ЭДТА:7 - 4 Ре2+С4б0глГЛ) + ДТРА:'8 - ~"-4-Ро2+ ' (400мЫ) + СОД (2 мг/мл).

Как видно из рис.Ю, наибольшее повреждение молекулы ЦНК из трех испытанных концентраций зселеза (100, 400, 000 мДО вызывает концентрация 400 мМ.

Итак, в опытах по повреждению высокомолекулярной ДНК ми установили, что■ при кровоизлиянии в стекловидное тело под влиянием ионов железа происходит генерация супероксиданионрадика-ла, дисмутация которого приводит к образованию гкдроксильных радикалов. Генерация супероксиданионрацикала подтвердилась.и

.в опытах, в хоце которых добавление к препаратам стекловидного тела супероксидднсмутазы (СОД) предотвращало повреждение моле куля Д11К, причем наибольший защитный эффект наблюдался при совместном введении СОД и каталазц. Увеличение концентрации глдрокспльиых радикалов в среде, о одной стороны, усиливает ПОЛ, о другой стороны, разжижает стекловидное тело. Зги данные хорошо согласувтся с результатами эк перимента (Мс соЫ 1974), показавшими нарушение полимерной структуры гиалуроновой кислоты при действии 09.

Резюмируя вышецредотавланныь факты, можно сделать заключение о том, что усиление ¡101 при кровоизлиянии является мно-гофакторнш и ступенчатым процессом; по-видимому, свободные небелковосвязашше металлы, как например, пегеминовое железо, участвуют в инициации : катализировании П01 в стекловидном теле путем генерации радикальных интермедиатов кислорода, гидроксилышх радикалов, способных взаимодействовать с непредельными лшядами и приводящих к активации ПОЛ, Образующиеся в дальнейшем алкшшерекиси взаимодействуют как с гемоглобином и гемоснцерином, высвобоздаидимиоя после распада эритроцитов, так и с регенерированными ионами металлов переменной валентности {железо, медь). При этом за счет гемолитического распада гидроперекисей и разветвления цепей происходи.' само-ускореше реакции, и ПОЛ достигает максимума. По-видимому,это совпадает с периодом полного разжижения отекловидного тела. После достижения максимума, в силу истощения восстановителей и ионов 2-Еалентного железа, а такие и субстрата, ПОЛ идет на убыль. При этом радикалы, образувдиеоя при окислении липи-дов стекловидного тела, вызывает? соокиоление липпдов и излившейся крови, о чем свидетельствует появление второго максимума.

Результаты опытов показали, что добавление всех промоторов ПОЛ к изолированному стекловидному телу значительно ускоряло развитие ПОЛ, что макет быть объяснено быстротой раа'хиже-ния стекловидного тела вне организма.

\ В- Ы Ь 0 Ц Ь1

I. Экспериментальное внутриглазное кровоизлияние у кроликов вызывает усиление интенсивности процесса ПОЛ в стекловидном теле. При этом липоцереоксидация в стекловидное теле иццу-'

даруется продуктами ПОЛ, локализованными в сгустка введенной аутокрови.' Наиболее высокая скорость ПОЛ обнаруживается при преретинальном расположении аутокрови.

2. При введении аутокрови в стекловидное тело в сетчатке происходит усиление интенсивности ПОЯ по кинетике, отличающейся от таковой в стекловидном теле. В сетчатке ПОЛ развивается значительно медленнее и характеризуется одним максшдум^м.воз-шкамщим значительно позже, чем в стекловидном теле.

3. При внутриглазном кровоизлиянии интенсификация ПОЛ и накопление его про,дуктов способствуя? нарушению функции стекловидного тела и сетчатки, о чем свидетельствует изменение состояния гиалуроновой кислоты (уменьшение вязкости, прозрачности) , а такие нарушение электрической активности сетчатки.

4. Введение в стекловидное тело аутокрови обусловливает заметные морфологические изменения как в стекловидном теле, так к в сетчатке. :,Горфо- и гистохимические кзменею'ч в начальном периоде введения аутокрови в стекловидное тело характеризуются распадом форменных элементов крови, образованием фибре,-бластов, отеком гиалоиднах пластинок, некоторая уменьшением количества белков, содержащих тирозин, гистидин и триптофан, отсутствием коллагеновых волокон и реакция на мукополисаха-рццц. В более поздние сроки поело экспериментального внутриглазного кровоизлияния происходит увеличение количества муко-полисахаргдоз, отчетливое проявление коллагеновыХ- волокон и увеличение содержания общего белка.

При введении аутокроел ь стекловидное тело ослшнения обнаруживается и в сетчатке и выра^отоя в ее разрыве и отслойке, гибели не£'.рональных е>ло:.:'-ьгоь, глиаяьней пролифера-ш:и о образованием волокнистых структур, отеке фоторецепторов, дальнейшем их распаде, а ка-ле истончении различных слоев сетчатки.

5. Усилена. процесса СОЛ в стекловидно:.! теле при внутри глазиси кроЕОкзлшшиц обусловлено катализом гемоглобином и иошши аелеза и меда, при котором reír зируютоя радикальные интердедиагы кислорода и перекиси водород.и Накопление активных продуктов кислорода и послгду,одая интенсификация ПОЛ, нарушая колекулярпо-водороднае евдал, вызывает распад гиаяурож вой кислоты в стекловидном теле и усиление коллагенезя.

6. При введен™ ингибиторов свободно радикальных реакций, комплексообразозателеЯ и тушителей радикальных интермедиатов кислорода ¡ЮЛ стекловидного тела существенно замедляется. При непооредстг"нном введешш антиоксидантов в стекловидное тело более эффективными оказались природные антиоксиданты. При ре-тообульбарком введении развитие реакции ЛОЛ весьма эффективно пнгиоировалось как приро.щшма, так и синтетическими антиокси-дантами.

Наиболее заметное ингибнровалке обнаруживается при ретро-бульбарном способе введе!шя фенозана калия в сочетании ^ три-лоном Б.

7. Коррекция ПОЛ различили! апткоксиданташ, коглплексо-образовагеляма и тушителями радикальных про.дуктов кислорода сопровождается восстановлением функционально;} активности сте-кловвдного тела и сетчатки - приблкенпем прозрачности и вязкости и параметров ЭРГ к норме.

В. Введение антиоксидантов па фоне копер, ментального кровоизлияния привод/г к стабилизации морфологической структуры стекловидного тела и сетчатой оболочки. После действия антиокси-дантов обнаруживается восстановление состояния гиалоидшх пластинок, структура отдельных элементов сетчатки, предотвращение её разрывов, приближение строения фоторецепторных элементов к норме.

9. На основании экспериментальных данньсс и анализа литературы предлагается схема, иллюстрирувдая последовательность процессов, приводящих к усилению ПОЛ, накошгаию о-пслешнас продуктов и развитии структурно-функциональных нарушений при введении аутокрови.

10. Обобщение полученных результатов показывает, что при кровоизлиянии в стекловидное тело для коррекции наруиегшй его морфологически структур и функционально!» активности необходима стабилизация процесса ПОЛ. Это указывает на необходимость применения в офтальмологической практике различных антиоксидантов, предотвращающие развитие поздних осложнений и улучдаюцих функции пострадавшего глаза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты позволяют предложить следущив рекомендации дая включения в практику офтальмологических служб:

1. Включение антиокиолительной терапии в комплексное лечение больных о интравитреальным кровоизлиянием различной этиологии.

2. Включение комплексообразователей (трилон Б и диэтил-датиокарбомат) ионов металлов б лечение больных интравитреаль-гчм кровоизлиянием.

3. Проведение определения содержания малонового диальде-гида и гидроперекисей липидов и содержания эндогенных антиокси-дантов (витамин Е и активность глутатионпероксидазы) для оценки эффективности проводимой антиокиолительной терашш.

Список публикаций, отражающих основное содержание .диссертации

1. Контузионнне кровоизлияния и обменные процессы в стекловидном теле, - Баку, 1957. С.163

2. Белковый синтез стекловидного тела после введения аутосы-воротки.// Сборник научных трудов Азерб.НИИ офтальмологии. -

•Баку, 1970. -Т.5. - С.103-Ш. (соавт.Н.Д.Рзаев.Л.Л.Ьабаева).

3. Юшнико-биохишческие исследования в стекловидном теле при швартообразовашш в условиях экспериментального кровоизлияния.// Там же. - С.3-5

4. Динамика некоторых клшшко-биохишческих изменений в стекловидном теле при швартообразовашш в эксперименте.// Материалы 2 конференции офтальмологов 'Закавказья. Ереван,. 1371,

- С.297-300.

5. Изменение гиалуронидазной активности стекловидного тела пооле введения аутокрови в эксперименте.// Сборник научных трудов Аэерб.ИИИ офтальмологии. Баку, 1972. - Т.6, - С.14-

- 17.

6. О наличии свободных аминокислот в стекловидном теле.// Гам же. С.II—13 (ооавт. Н.А.Рзаев, Л.А.Бабаева).

7. Морфологические и гистохимические изменения при швартообра-зовании.// Там же. С. 14-17.

8. К вопросу о гиалуронидазной активности стекловидного тела после экспериментального введения аутосиворотки.// Азыед-журнал. - 1972. - Т.6. - J{ 2. - С.313-315.

9. Биохимические изменения в стекловидном теле при экспериментальном кровоизлиянии.// Известия Ш Азерб.ССР. - 1972.

а 4. Серия биологических наук. С.103-107.

10. К вопросу о механизме лизиса распада белков при кровоизлияниях и всасывания продуктов в стекловидное тело.// Сборник научных трудов Лзерб.НИИ офтальмологии. -Баку, 1973. - Т.7. -С.3-5.

11. Некоторые биохимические показатели стекловидного тела в норме и патологии (экспериментальное исследование).// Материалы 3 научной конференции офтальмологов Грузии. -Тбилиси, 1974. -С. 313-315. . ;

12. Патогенез ивартообразования в стекловидном теле при экспериментальном кровоизлиянии,// Тезисы докладов на научной конференции, посвященной IOO-летив со дня рождения акад. Б.П.Филатова. Одесса, 1975. -C.2I5-2I6.

13. Электрсфизиологические и морфологические исследования при экспериментальной .дистрофии сетчатки.// Известия АН Азерб. ССР. Серия биологических наук. - 1976. - S2. - C.II0-II4 (соавт.Г.Б.Абдуллаев, Н. А.Гаджиева, Г.Г.Гаджиева, П.С.Мелик-Асланова, С.А.Бадалов, А.И.Диитренко, С.А.Алекперова).

14. Pathobioohenistrjr of the vitreous bodj in experimental iieaorrnge.// l'heorj and practical probleas of eedicine// Materials of scientific confer. Baku. 1976. p.91-93.

15. Патогенез швартообразовашш в стекловидном теле при экспериментальной кровоизлиянии.// Материалы научной конференции, посвященной IOO-летив со дня рождения акад.В.П.Филатова. "Проблемы офтальмологии". -Киев, 1976. - С.215-216.

16, К вопросу механизма образования тканей в стекловидном тале после введения аутокрови.// Сборник научных трудов I съезда офтальмологов Республик Закавказья. -Тбилиси, 1976. -С. 82-85. {соавт.А.А.!1!ариф-заде),

17, Комплексное лечение постравматических внутриглазных кровоизлияний с применением фибринолиэина.// Актуальные проблемы офтальмологии, - Баку, 1977. - 1.2 - С.479-481. (соавт.

Л.А.Бабаева, А.А.Шаркф-заде).

18,-Лечение экспериментального кровоизлияния в стекловидное тело ярогеолитическиш ферментами на слабых буферных растворах.//Там же. С,477-478 (соват.А.А.Ьабаева, А.А.Шариф-заде).

19. К вопросу замещения отекловидного тела при проникающих склеральных ранениях.// Там ае. - С.474-476 .(ооавт.Л,А.Бабаева, А.А.Шариф-заде).

20. Роль фибриполиза в рассасывании интравитреальнпх геморрагий.// Тезисы докладов 6 съезда сфталшологов УССР. -Одесоа, 1978. -С.82. ( соэ.эт«Л • А,Бабаева).

21. Некоторые биохимические изменения стекловидного тела после фракционного введения в него аутокрови.// Труди Азерб.НШ офтальмологии "Актуальные проблемы офтальмологии". - Баку, 1978. -Т.8. -0.1-7.

22, Сочетанное применение близкофокушюй рентгенотерапии и ауто-сыворотки в терапии интравитреальных геморрагии.// Тезисы докладов 6 Всероссийского съезда офтальмологов. -Ы. 1982. -С.460-481. (соавт.В.Г.Гасымов, Л.А.Бабаева).

23. Морфологические и биофизические исследования экспериментального геиофтальма.// Вестник офтальмологии. - 1983. -2£1. -С.74-75.

24. Роль перекисного окисления липидоь в функциональной активно-оти тканей(препринт).// АН Азерб.ССР. Баку, 1985. -С.70 (соавт. А.И.Лдафаров).

25, Определение функциональной активности изолированных таньй.

' и трансплантатов по интенсивности перекисного окисления ли-пидов.// Методические рекомендации. -Баку, 1Э85, - 0,36, (соавт.В.М.Касумов, А.И.Ддафаров).

26, 0 возможных механизмах активизации реакции перекисного окисления липидов в стекловидном геле,// Гдахл.эксдерим. биол. и пец. 1987. -С,569-571. (соавт.И.К.Неймзпзаде, 3.1.1. Кулие1-.а, А .И. Джа^аров).

27. Особенности перекисного окисления липидов в стекловидном теле при кровоизлияниях.// Вестник офтальмологии, -1987. -]'• 4. -С.54г56, (соазт. Н.К.Нейманзаце, Э.Ы. :(улпева,

А.И.Дяафаров).

28, Сравнительный анализ клиники и исходов яитравитрэальных геморрагий при различных видах травм глаз у детей.// Сбор-1шк научных трудов Азерб.ШЛ офтальмологии "Диагностика

и лечение глазных заболеваний". -Баку, 1987. -С.10-13. (соавт.Л.А.Бабаева, Н.Ф.Гаиимова, X.Л.Бабаева).

29. Ингибирование перекисного окисления липидов антиоксицантами в стекловидном теле при кровоизлияниях.// Чал.эксперт, биол. и мед. - 1988. -С.291-292. (соавт.И.А.Заргар-ли, А.И.Дяафаров).

30. Коррекция перекисного окислеши липидов стекловидного тела при внутриглазных кровоизлияниях.// Вестник офтальмологии.-I9C8. -Т.104, -Л5. -С.67-69; (соавт.Л,И.Динаров, И.А.Зар-гарли).

31, Состав .для рассасывания крови из стекловидного тела при внутриглазных кровоизлияниях.// Авторское свидетельство на изобр. ¡i 44722512/14 (122975). - 1988.

32. Коррекция интенсивности перекисного окислешш липидов и функциональной активности стекловидного тела при Л:спери- ■ ментальном внутриглазном кровоизлиянии.// Материала Всесоюзного симпозиума "Реконструкция и репарация биомембран".-Благовецеиск, 1989. -С.91-95. (соавт.И.А.Заргарли, А.Й.Дяа-фаров, Н.К.Нейманзаце).

33, Влияние замещения стекловидного тела на интенсивность перекисного окислешш липидов и содер*анио гексоза>шюя при экспериментальном кровоизлиянии.// Сборник научных трудов Азерб.НЛЛ офтальмологии. -Баку, 19Э1. -С.3-10. (соавт.^.Г.Шашлова, И.Б.Самедова, З.М.Мурадова). .

34. Клиническое течение и исхода частичного замещения стекловидного тела при интравитреальных кровоизлияниях травматического генеза.// Там же. -0.11-14. (соавт.З.И.Алиева, М.М.Агаев).

35. Клиническая характеристика различных видов лечения травматических гемофтальмов у детей.// Там же. -0,14-18.

(ооавт.Л.А.Бабаева, Н.Ф.Гашмова, X.А,Бабаева).

36. Механизм усиления перекисного окисления липидов стекловидного тела при внутриглазных кровоизлияниях.// Там же.

-С.92-99. (соавт.М.Н.Гаджиева, А.И.Джафаров).