Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии

Рутковский, Аркадий Владимирович

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Рутковский, Аркадий Владимирович Санкт-Петербург 2008 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии

На правах рукописи

РУТКОВСКИЙ Аркадий Владимирович

РОЛЬ НАТРИЙ-КАЛЬЦИЕВОГО ОБМЕННИКА И АКВАПОРИНОВ В МЕХАНИЗМЕ ЗАЩИТЫ МИОКАРДА ПРИ ИШЕМИИ-РЕПЕРФУЗИИ (экспериментальное исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2008

003456467

Работа выполнена на кафедре Патофизиологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию и в Лаборатории Эндогегонной Клеточной Защиты (Laboratory of Endogenous Cell Defense) Института Экспериментальных Медицинских Исследолваний (Institute of Experimental Medical Research, IEMR) университета Осло, Норвегия.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор медицинских наук, профессор Власов Тимур Дмитриевич ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Николаев Валентин Иванович доктор медицинских наук, профессор Зайчик Альберт Шмульевич

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Военно-Медицинская академия им. С.М.Кирова

Защита диссертации состоится «19» декабря 2008 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д.208.090.03 Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова (197089, г. Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ГОУ ВПО «Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. акад. И.П. Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан «_» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета .

доктор медицинских наук, профессор^¡-^^и^с^Юеглм^ В.Ф. Митрейкин

БКХ

ИБС

ИПост

ИПК

ИРП

ОИМ

Aqp

ERK

GAPDH

HR JNK KBR LVSP

LVEDP

NCX АКТ

РКС PKG SD

ттс

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Буфер Кребса-Хенслейта Ишемическая болезнь сердца Ишемическое посткондиционирование Ишемическое прекондиционирование Ишемическое-реперфузионное поражение Острый инфаркт миокарда Aquaporin, белок аквапорин Extracellular regulated kinase, киназа, регулируемая внеклеточными сигналами Glyceraldegid 3-phosphate dehydrogenase, белок глицеральдегид 3-фосфат дегидрогеназы Heart Rate, частота сердечных сокращений Janus kinase, киназа Януса

KB-R7943, блокатор натрий-кальциевого обменника Left ventricular sistolic pressure, левожелудочковое систолическое давление

Left ventricular end-diastolic pressure, левожелудочковое

конечно- диастолическое давление

Na+/Ca2+ exchanger, белок Na+/Ca2+ обменник

Protein kinase В, альтернативное название

протеинкиназы В

Protein kinase С, Протеинкиназа С

Protein kinase G, Протеинкиназа G

Standart deviation, стандартное отклонение

Triphenyl tetrazolium chloride, Трифенил тетразолия

хлорид.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Сердечно-сосудистые заболевания занимают ведущее место в структуре общей заболеваемости и смертности в России и во всем мире (Levi et al, 2002). Острый инфаркт миокарда (ОИМ) - основная причина смертности больных с ИБС. Главным средством борьбы с развивающимся поражением миокарда при инфаркте служит реперфузия -восстановление кровотока в ишемизированном участке. В течение последних лет в экспериментах на животных удалось показать, что не только ишемия, но и реперфузия вносит весомый вклад в гибель кардиомиоцитов (D. Hausenloy, D. Yellon, 2008). Известно, что реперфузия вызывает оксидативный стресс, отек кардиомиоцитов, поступление в клетки избытка кальция, и, как следствие, нарушение митохонд-риальной проницаемости и гибель клетки (А. Halestrap et al, 2007). Основная роль в перегрузке клетки кальцием при реперфузии принадлежит натрий-кальциевому обменнику (NCX). Блокада «обратного режима» с помощью препарата KB-R7943 приводит к уменьшению размера некроза (Seki et al, 2000). Кроме того, существует ряд методик, позволяющих снизить ишемическое-реперфузионное повреждение. Одной из наиболее эффективных является ишемическое посткондиционирование (J.V.Johansen, 2006). Оно существенно снижает размер инфаркта и постишемическую сократительную дисфункцию. Механизмы защитного действия посткондиционирования активно изучаются, показано участие каскадов протеинкиназ (МАР-киназы, протеинкиназы С и В), что свидетельствует об активации эндогенных механизмы клеточной защиты. В ряде работ имеются данные о взаимосвязи между кальциевым метаболизмом и посткондици-онирование, однако природа ее не установлена.

Важным механизмом развития ишемического-реперфузионного повреждения является также интерстициальный и клеточный отек миокарда. Известно, что до трети водного транспорта в кардиомиоцитах осуществляется белками аквапоринами (Egan et al, 2006). Работ по исследованию роли аквапоринов в патофизиологии миокарда на данный момент не более десяти, в них было показано, что аквапорин-1 и аквапорин-4 (Aqp-1 и Aqp-4) экспрессируются в миокаде мыши и человека (Wakayama et al, 2007), причем Aqp-1 локализован преимущественно в эндотелии сосудов сердца, a Aqp-4 - на клеточной мембране кардиомиоцитов (Т. Butler et al, 2006). В 2007 году А. Warth и соавт. показали, что экспрессия Aqp-4 повышается под действием ишемии.

Таким образом, исследование молекулярных механизмов, участвующих в реализации ишемического и реперфузионного повреждения

миокарда является весьма актуальным, и может быть основанием для дальнейшей разработки способов защиты сердца от повреждения.

Цель исследования.

Изучить роль мембранных белков - обменника натрия и кальция (К'СХ) и водных каналов (аквапоринов) в механизмах формирования эндогенной устойчивости миокарда к ишемическому и реперфузионному повреждению (ИРП).

Задачи исследования.

1. Изучить эффективность посткондиционирования и исследовать его механизмы при экспериментальной ишемии/реперфузии на модели изолированного сердца мыши.

2. Оценить значение «обратного режима» работы МСХ в патогенезе ишемического-реперфузионного повреждения.

3. Определить возможность суммации эффектов посткондиционирования и блокады обратного режима КСХ в отношении эндогенной клеточной защиты.

4. Исследовать влияние экспрессии гена aqp4 на устойчивость миокарда к ИРП на модели изолированного сердца мышей, нокаутных по гену ард4.

5. Изучить экспрессию аквапоринов Aqp-l и Аяр-4 при ишемии-реперфузии миокарда на модели изолированного сердца мыши и при проведении операций на открытом сердце человека.

Научная новизна.

Впервые показано угнетение эндогенной клеточной защиты миокарда при комбинировании ишемического посткондиционирования с пре- и постишемическим введением блокатора обратного режима натрий-кальциевого обменника (МСХ) на модели изолированного сердца мыши.

Впервые получены данные об активации протеинкиназ ЕЯК и РКС в ходе сочетания блокатора МСХ с посткондиционированием, а также снижение активации протеинкиназы В (АКТ).

Впервые показана повышенная ишемическая толерантность миокарда мышей, генетически нокаутных по гену адр-4, что свидетельствует о значительной роли аквапоринов в патогенезе ишемического-реперфузионного поражения.

Впервые получены данные о снижении экспрессии аквапоринов Ас}р-1 и Адр-4 в миокарде человека в результате операции маммаро-коронарного шунтирования с применением аппарата искуственного кровообращения и комбинированной антеро- и ретроградной кардиоплегии.

Впервые получены данные о снижении экспрессии аквапоринов Ацр-1 и Aqp-4 в миокарде мыши под действием ретроградной перфузии по Лангендорфу.

Теоретическая и практическая значимость.

Данные, полученные в исследовании, расширяют представления о патофизиологии эндогенной кардиопротекции, в частности о молекулярных механизмах посткондиционирования. Полученные данные могут рассматриваться как теоретическая предпосылка использования посткон-диционирующих воздействий в клинической практике.

Представление о роли натрий-кальциевых каналов и водных каналов в патогенезе ишемического-реперфузионного повреждения миокарда являются теоретической основой для создания препаратов, активирующих эндогенные механизмы клеточной защиты, а также создают предпосылки для дальнейших углубленных исследований роли натрий-кальциевых и водных каналов в патофизиологии миокарда.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Реперфузия является важным компонентом повреждения миокарда в постишемический период, и реперфузионное повреждение может быть уменьшено при помощи дробной реперфузии (посткондиционирование).

2. В патогенезе ишемического и реперфузионного поражения важную роль играет натрий-кальциевый обменник, фармакологическая блокада которого уменьшает степень ишемического и реперфузионного повреждения.

3. Защитные механизмы посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника связаны с активацией различных киназ; при сочетании этих способов защиты их протективное действие взаимоисключается, приводя к «отмене» кардиопротективного действия каждого механизма.

4. В патогенезе ишемического и реперфузионного повреждения большое значение имеют белки-транспортеры воды - аквапорины.

Реализация работы.

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре патофизиологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова.

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе три статьи в журнале, входящем в список рекомендованных ВАК.

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались на ряде Российских и международных конференцияй и симпозиумов:

1. Февраль 2006, 2007, 2008 гг - Ежегодная конференция Скандинавского Общества Исследователей в области Кардиоторакальной Хирургии (Scandinavian Society for Research in Cardiothoracic surgery (SSRCTS) в Гейло, Норвегия.

2. Апрель 2007 г. - конференция молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" в Санкт-Петербурге.

3. Июнь 2007 г. - XIX Всемирный конгресс Международного Общества Исследователей в области Кардиологии (World congress of the International Society for Heart Research) в г. Болонья, Италия.

4. Октябрь 2007 г. — V ежегодный симпозиум Центра по изучению Сердечной Недостаточности (5th Annual Symposium of a Center for Heart Failure research (CHFR), в Осло, Норвегия.

5. Май 2008 г.- Российско-норвежский научный симпозиум «Защита миокарда: молекулярные, патофизиологические и клинические аспекты», Санкт-Петербург.

6. Июнь 2008 г. Заседание Европейской Секции Международного Общества Исследователей в области Кардиологии (World congress of the International Society for Heart Research) в г. Афины, Греция.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 40 отечественных и 190 иностранных источников. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 20 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве материала в работе использовались мыши-самцы, линии С57В16, вес 25±5 г (120 животных), а также гибридные мыши, гомозиготные нокауты по гену aqp4, самцы, весом 25±5 г (40 животных). Кроме того, исследовались биоптаты миокарда левого желудочка, взятые методом игольной биопсии у пациентов до и после операции коронарного шунтирования с использованием аппарата искусственного кровообращения и комбинированной ретро- и антероградной кардиоплегии.

Группы опытов

Серия 1. Исследование посткондиционирования и возможной роли натрий-кальциевого обменника в ишемическом-реперфузионном повреждении. Перфузия изолированного сердца мыши С57В16.

1.1 Контроль. (Стабилизация 20 мии., ишемия 35 мин., реперфузия 60 мин).

1.2 Посткондиционирование. (Стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин, посткондиционирование тремя эпизодами 10 - секундной ишемии, разделенных 10 - секундными эпизодами реперфузии, реперфузия 60 мин).

1.3 Преишемическая блокада ИСХ (Стабилизация 20 мин., перфузия КВ-117943 в течение 5 минут перед началом ишемии, ишемия 35 мин., реперфузия 60 мин.)

1.4 Преишемическая блокада ИСХ + Посткондиционирование (Стабилизация 20 мин., перфузия КВЯ7943 в течение 5 минут перед началом ишемии, ишемия 35, посткондиционирование как в 1.2, реперфузия 60 мин.)

1.5 Постишемическая блокада ЫСХ (Стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин., перфузия КВЯ7943 в течение первых 5 минут реперфузии, реперфузия 60 мин.)

1.6 Постишемическая блокада ЫСХ + Посткондиционирование (Стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин., перфузия КВЯ7943 в течение первых 5 минут реперфузии, посткондиционирование как в 1.2, реперфузия 60 мин.)

Серия 2. Значение аквапоринов в механизмах развития ишемического-ре-перфузионного повреждения миокарда. Перфузия изолированного

сердца гибридных (С57В16 х 129Б) мышей с генотипом Адр-А и Адр+/

2.1 Контроль (Адр+/+, стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин., реперфузия 120 мин.)

2.2 Нокауты по аквапорину-1 (АдрА, стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин., реперфузия 120 мин.)

Серия 3. Значение аквапоринов в механизмах развития повреждения миокарда, вызванного длительной перфузией раствором Кребса-Хенслейта и ишемией-реперфузией. Перфузия изолированного сердца мыши С57В16.

3.1 Контроль (перфузия в течение 30 секунд для удаления крови)

3.2 Перфузия (перфузия в течение 175 минут)

3.3 Ишемия/реперфузия (стабилизация 20 мин., ишемия 35 мин., реперфузия 120 мин.)

Серия 4. Исследование биоптатов миокарда пациентов кардиохирур-гического стационара, перенесших операцию малшаро-коронарпого шунтирования.

Использовались образцы миокарда левого желудочка пациентов со стабильной стенокардией, забранные до и после операции маммаро-коро-нарного шунтирования, проведенной с использованием аппарата искусственного кровообращения.

Перфузия изолированного сердца мыши. Животные анестезировались, сердца извлекались из грудной клетки, освобождались от посторонних тканей, аорта фиксировалась на канюле аппарата Лангендорфа. Сердце перфорировались при 37°С оксигенированным буфером Кребса-Хенс-лейта (БКХ) под давлением 70 мм рт ст. В левый желудочек помещался полиэтиленовый баллон для измерения внутрижелудочкового давления. Ишемия/реперфузия моделировалась остановкой насоса, подающего перфузионный раствор к сердцу, а затем его повторным запуском. С интервалом 20 минут регистрировались значения левожелудочкого систолического, конечно-диастолического давления и частоты сердечных сокращений.

Оценка размера инфаркта проводилась с помощью окраски три-фенилтетразолия хлоридом (TTC) с последующей компьютерной планиметрией. Содержания воды в ткани определялось в ходе взвешивания ткани до и после высушивания.

Забор биоптатов миокарда пациентов. У 20 пациентов университетского госпиталя Тампере, Финляндия, с диагнозом «ИБС, стабильная стенокардия» проводилось хирургическое вмешательство - мамма-ро-коронарное шунтирование. Образцы миокарда левого желудочка массой 15-20 мг забирались при помощи иглы типа tru-cut дважды - до и после операции. Образцы мгновенно замораживались в жидком азоте.

Иммуноблоттинг белковых экстрактов миокарда. Замороженные срезы миокарда гомогенизировались в лизирующем буфере, растворы центрифугировались. Затем приготовлялись пробы для электрофореза и наносились на полиакриламидный гель с SDS. Электрофорез проходил при постоянном напряжении 100 В в течение 75 минут. Разделенные электрофорезом белки переносились на мембрану Hybond-P (Amersham, Germany) методом влажного переноса при постоянном напряжении 150 В в течение 120 минут. После обработки антителами мембраны окрашивались реактивами для хемилюминесценции ECL+, фиксацию изображений получали при помощи фотобокса LAS-1000 (Fujifilm). Интенсивность сигнала оценивалась с помощью программы ImageQuant (Amersham).

Реверсно-транскриптазная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени. Образцы ткани миокарда измельчались в жидком азоте, затем РНК выделялась с помощью набора RNeasy Mini Kit. Синтез комплементарной ДНК производился с использованием ферментов Superscript II (Invitrogen) и RNasin (Promega). Для количественной оценки уровня экспрессии использовался метод стандартной кривой. В качестве контрольного гена был взят ген GAPDH (глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа).

Статистическая обработка результатов. Данные в тексте приведены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. Все данные анализировались с помощью пакета программ Graph Pad (Graph Pad Prism Software inc. San Diego, США) Для сравнения двух групп использовался t-test Стьюдента. Для анализа трех и более групп (ПЦР) использовалась ANOVA и пост-тест Бонферрони, для оценки функциональных параметров работы сердца использовалась ANO VA для повторных измерений и пост-тест Бонферрони. Разница считалась достоверной, если значение р было меньше или равно 0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Эффект посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на размер инфаркта в экспериментах на изолированном сердце мыши.

Методом планиметрического анализа срезов, окрашенных TTC нам удалось показать, что посткондиционирование существенно снижает размер зоны некроза по сравнению с контролем (см. Табл. 1). Блокада NCX до и после ишемии также оказывает выраженное инфаркт-лимити-рующее действие. В то же время, при комбинировании этих двух воздействий защитный эффект исчезает, и размер инфаркта не отличается от контрольного.

Табл. 1 Размер зоны повреждения миокарда при посткондици-онировани и блокаде МСХ в экспериментах на изолированном сердце мыши, Меап±5Р, *-р <0.05_

Группы опытов Контроль Постконд Пре-KB-R Прс-KB-R + Посткон Пост-KB-R Пост-KB-R + Посткон

Инф. % 47,4±9,0 23,5*±14,1 25,0*±8,4 42,5*± 14,7 32,5±17,6 39,4±9,1

2. Эффект посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на функциональные параметры сердечных сокращений

1) В контрольной группе было зафискировано значительное угнетение сократительной функции после ишемии/реперфузии, что выражалось в подъеме ЬУЕЭР и снижении пульсового давления. Между группами посткондиционирования и контрольной группой различий в функциональных параметрах не наблюдалось (Табл. 2А). Необ-

Табл. 2 Функциональные параметры сердечных сокращений при

а) посткондиционировании и

б) преишемическом применении блокатора ЫСХ (КВ-К 7943), Меап±БО, *-р<0.05

А. Ишемическое посткондиционированне

Группа, параметр Стабилизация реперфузия

LVSP 20' 0' 5' 10' 30' 60'

Контроль 92,±21,3 74,7±26,0 94,2±18,5 91,4±11,1 85,5±14,9 80,4±17,2

Ипост 93,8±21,0 56,7±26,1 77,9±27,4 76,8±25,8 67,1±18,5 63,6±18,5

LVEDP Стабилизация реперфузия

Контроль 16,3±26,3 55,1±26,7 76,4±29,3 72,5±24,7 59,5±18,3 49,6±14,7

Ипост 6,6±2,1 45,3±19,4 68,7±25,9 58,7±17,6 47,0± 16,3 34,0±17,4

Б. Преишемическое введение KB-R7943

Группа, параметр Стабилизация реперфузия

ЬУБР 20' 0' 5' 10' 30' 60'

Контроль 85,2±14,4 82,7±11,3 88,9±9,0 80,7±7,7 78,4±12,6 75,4±12,3

преишем. КВ-Я 110,8*±21,7 69,4±4,1 84,9±16,2 85,1±8,0 77,5±6,5 73,5±5,5

ЬУЕОР Стабилизация реперфузия

Контроль 6,6±0,7 52,2±19,1 67,9±15,1 69,2±7,3 58,6±9,7 51,7±10,2

преишем. КВ-Я 6,8±1,6 56,0±7,0 75,4±20,1 76,5±9,1 62,3±9,7 53,9±8,6

ходимо отметить, что не отмечалось снижения уровня конечно-диа-столического давления (ЬУЕОР), таким образом, посткондиционирование на данной модели уменьшает объем некроза, но не влияет на сократительную функцию миокарда. По-видимому, данный эффект был связан с феноменом «оглушения» миокарда, т.е. реперфузионной сократительной дисфункцией, и улучшение сократимости возможно наблюдать при удлинении времени реперфузии.

2) при введении КВ-117943 в преишемический период наблюдалось достоверное повышение ЬУБР по сравнению с контролем (Табл. 2Б). Таким образом, блокада ЫСХ оказывает положительное инотропное действие на интактный миокард. В то же время, в группе с блокадой 1ЧСХ в постишемический период улучшения физиологических показателей по сравнению с контролем не наблюдалось.

3) Постишемическая блокада 1ЧСХ введением КВ-117943 сопровождается достоверным снижением конечно-диастолического давления в репер-фузию (Табл. ЗА). Снижение данного показателя говорит о лучшем восстановлении сократительной функции миокарда по сравнению с контролем.

Табл. 3 Функциональные параметры сердечных сокращений при

а) постишемическом применении блокатора ИСХ (КВ-Я7943) и при

б) сочетании пре и постишемического введения КВ-Я 7943 с

посткондиционированием. Меап±БО, * -р <0.05

А. Постишемическое введение KB-R7943

Группа, параметр Стабилизация реперфузия

ЬУвР 20' 0' 5' 10' 30' 60'

Контроль 84,6±19,5 66,6±18,2 85,4±17,0 87,2±15,8 76,9±10,8 68,8±9,5

Постишем. КВЯ 98,9±19,7 70,3±19,2 89,2±19,5 78,4±20,1 69,6±21,5 62,6±24,5

ЬУЕРР Стабилизация реперфузи я

Контроль 6,8±1,8 51,2±16,4 71,2±16,1 72,9±10,7 63,4±12,2 53,3±11,6

Постишем. КВЯ 8,0±3,0 52,7±15,2 70,9±18,5 60,6*±17,9 47,6*±17,9 36,3*±18,9

Б. KB-R7943 + ишемическое посткондиционирование

Группа, параметр Стабилизация реперфузия

ЬУБР 20' 0' 5' 10' 30' 60'

Контроль 84,6±19,5 66,6± 18,2 85,4±17,0 87,2±15,8 76,9±10,8 68,8±9,5

Пре-КВЯ + ИПост 100,9±20,1 78,1±22,6 90,9±19,0 90,8±11,1 81,2±9,4 78,7±9,6

Пост-КВ11+ Ипост 100,5±17,6 72,3±17,9 100,1±16,0 92,4±10,6 85,6±12,9 78,9±13,9

ЬУЕОР Стабилизация реперфузия

Контроль 6,8±1,8 51,2±16,4 71,2±16,1 72,9±10,7 63,4±12,2 53,3±11,6

Пре-КВЯ + ИПост 6,5±1,6 56,8±11,9 76,7±21,3 81,3±10,2 68,8±8,7 59,8±9,1

Пост-КВЯ + Ипост 7,5=И,9 55,6±14,9 89,1±14,0 80,9±9,8 68,0±10,6 59,5±10,5

4) Комбинация ире- и постишемической блокады NCX с посткондиционированием не влияет на характер сократительной деятельности сердца по сравнению с контролем (Табл. ЗБ). В частности, снижение LVEDP, наблюдаемое в группе с постишемическим введением блокатора NCX, исчезало при сочетании с посткондиционированием, что свидетельствует о полном исчезновении защитного эффекта. Таким образом, так же, как и опытах по оценке размера инфаркта, мы наблюдали полное исчезновение защитного действия при комбинировании посткондиционирования с блокадой NCX.

3. Влияние посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на степень фосфорилирования защитных протеиикиназ

Чтобы объяснить исчезновение защитного эффекта при сочетании двух кардиопротетивных методик, мы провели серию экспериментов с образцами ткани миокарда для определения активности защитных протеинкиназ: протеинкиназы В (сигнальный белок АКТ), кина-зы, регулируемой внеклеточными сигналами (extracellular signalregulated kinase, ERK) и протеинкиназы С- эпсилон. Поскольку все три белка задействованы в киназных каскадах, об их активации можно судить по степени фосфорилирования. В соответствии с принятой теорией об участии защитных протеинкиназ в механизме ише-мического посткондиционирования, нам удалось зарегистрировать достоверное повышение фосфорилирования АКТ (72 ± 27%) в группе Ипост по сравнению с контрольной.

При этом не было выявлено изменения активности ERK и PKCepsilon. (Рис. 1А). В группе с изолированным преишемическим введением КВ-R7943 (Рис. 1Б) и с комбинацией преишемического введения KB-R7943 с посткондиционированием (Рис. 1В) изменений фосфорилирования ни одной из исследуемых киназ зарегистрировано не было. Однако в группе с постишемическим введением KB-R7943 и посткондиционированием (Рис. 1Г) было отмечено достоверное повышение фосфорилирования РКСе (68 ± 53%) и ERK1/2 (33 ± 21%).

Таким образом, введение блокатора NCX в реперфузию с одной стороны устраняет инфаркт-лимитирующее действие посткондиционирования, но в то же время стимулирует фосфорилирование защитных протеинкиназ PKCepsilon и ERK.

Представленные данные свидетельствуют, что ишемическое посткондиционирование уменьшает размер зоны некроза, при этом происходит фосфорилирование протеинкиназы В (АКТ). Блокада «обратного режима» NCX как в пре- так и в постишемический период также приводит к уменьшению зоны некроза, причем постишемическое введение блокатора NCX положительно влияет и на восстановление сократительной способности миокарда. При комбинировании ишемического

посткондиционирования и блокады «обратного режима» ЫСХ суммации защитного эфекта не происходит, напротив, имеет место полное исчезновение защитного действия. При этом не наблюдалось повышенного фосфорилирования АКТ, характерного для посткондиционирования, но происходило фосфорилирование белков РКС-ерзПоп и ЕШС.

Из полученных данных можно сделать вывод, что блокада натрий-кальциевого обменника каким-то образом блокирует передачу

сигнала посткондиционирования. Мы предполагаем, что кальций, поступающий в клетку посредством активации «обратного режима» 1ЧСХ, и каскады протеинкиназ, включающие РКВ, РКС-ервПоп, ЕЯК - это два

А. Посткондиционирование

Б. Преишемическая блокада 1ЧСХ

200

1 Я — 150

Я ТО о

8 О О

о га а.

100 50 0 -50 -100

р = 0.019

200 150 100 50 0 -50 -100

РКСе АКТ

Е!?К

РКСе АКТ Е1Ж

В. Преишеи. блокада 1ЧСХ + Посткон.

200

I й-150

га я о

1 100 50

0 О О

оя.Е

1 о - -50 а.

-100

РКСе АКТ

Г. Постишем. блокада 1ЧСХ + Посткон.

200 150 100 50 0 -50 -100

р = 0.01

р = 0.026

РКСе АКТ

Е(*К

Рис. 1 Результаты вестерн-блоттшга образцов ткани миокарда с использованием антител к белкам АКТ, ЕКК и РКС-еряНоп.

параллельных механизма, участвующих в реализации эндогенной клеточной защиты при посткондиционировании. Блокирование одного из этих механизмов ведет к компенсаторному усилению активности другого, что, в свою очередь, оказывает повреждающее действие на клетку.

4. Влияние экспрессии аквапорина Aqp-4 на размер инфаркта изолированного сердца мыши.

В экспериментах на изолированном сердце мыши с применением животных, нокаутных по гену адр4, были получены результаты, что дан-ная генетическая модификация повышает толерантность к ишемичес-кому/реперфузионному поражению (Рис. 2а). Размер зоны некроза в группе нокаутов составлял 26 ± 15 % против 44 ± 22 % в контроле. При этом содержание воды в ткани миокарда мышей, нокаутных по гену адр4, не отличалось от такового у контрольных животных. Это свиде-тельствует о том, что механизм защиты миокарда, который обес-печивается отсутствием Aqp-4, не связан с уменьшением общего тка-невого отека. Возможно, аквапорин-4, который, по данным литературы, содержится в ткани миокарда в весьма умеренном количестве, имеет до-полнительные функции, связанные не только с водным гомеостазом клетки. Так, в глиальных клетках головного мозга этот белок отвечает за компенсацию ионных сдвигов вблизи калиевых каналов возбудимых мембран. Также установлена его связь с белками цитоскелета и рядом сигнальных каскадов. Данный вопрос требует дальнейшего изучения.

а.Размер инфаркта

б.Содержание воды в ткани

Рис. 2. Размер инфаркта (а) и содержание воды (б) в миокарде мышей, нокаутных по гену адр4 в сравнении с адр4+/+ мышами, Меап^ББ, *-р<0.05

5. Влияние экспрессии аквапорнна Aqp-4 на функциональные параметры сердечных сокращений в ходе ишемии-реперфузии.

Уменьшение размера инфаркта в миокарде мышей, нокаутных по гену адр4, сопровождаелось улучшением функциональных показателей по сравнению с контрольной группой (Табл. 4). У нокаутных мышей наблюдалось достоверное снижение уровня ЬУЕБР, основного показателя, характеризующего степень восстановления сократимости в репер-фузионный период. Систолическое давление (ЬУБР) не отличалось от такового в контрольной группе.

Табл. 4 Функциональные параметры сокращений изолированного сердца мышей, нокаутных по гену ацр4, Меап±БЕМ, * -р <0.05

Стабилизация реперфузия

20' 0' 20' 40' 60 80 100' 120'

Контроль 127,9± 19,0 89,9± 18,9 86,4± 10,8 86,6± 9,2 84,4± 8,2 81,1± 9,3 77,9± 7,9 75,1± 7,9

Aqp4 -/- 126,3± 26,1 87,5± 20,5 78,6± 15,3 84,1± 9,2 85,9± 6,6 83,0± 4,6 80,6± 4,0 78,1± 4,0

ЬУЕЭР Стабилизация реперфузия

Копт-роль 9,0± 3,7 65,1± 13,3 59,5± 18,7 52,7± 18,0 49,3± 17,8 46,4± 15,8 45,0± 15,5 43,9± 15,0

Ацр4 -/- 6,7± 4,6 53,4*± 18,3 42,8*± 22,3 33,5*± 21,6 30,0*± 20,2 29,1*± 19,3 29,2*± 18,5 29,1*± 17,9

6. Экспрессия аквапоринов Aqp-l и Ас|р-4 в биоптатах миокарда левого желудочка пациентов со стабильной стенокардией в ходе операции маммаро-коронарного шунтирования, данные ПЦР.

Анализ биоптатов сердца показал, что экспрессия аквапорина Aqp-l снижалась после проведения хирургического вмешательства с перфузией сердца кардиоплегическим раствором (Р=0.043), подобная тенденция наблюдалась и в отношении экспрессии Ацр-4, хотя различия между группами были недостоверными (Табл. 5).

Табл. 5. Экспрессия мРНК аквапоринов-1 и-4 в биоптатах миокарда левого желудочка пациентов в ходе операции маммаро-коронарного шунтирования, число циклов С?, Меап±БР, * - р <0.05._

Группа Адр1Ш Лдр4/$1&

До операции 1.79±1.42 2.95±4.18

После операции 1.30±0.99* 2.17±1.79

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что аквапорины играют определенную роль в механизме ишемического-реперфузионного повреждения, и отсутствие в миокарде аквапорина-4 повышает его толерантность к ишемическому и реперфузионному повреждению. При длительной перфузии сердца буферными растворами происходит снижение миокардиальной экспрессии аквапоринов, что можно рассматривать как адаптацию клеток миокарда к измененному осмотическому и онкотическому давлению.

Таким образом, в данной работе нам удалось показать существенную роль натрий-калициевого обменника и аквапоринов в механизме ишемического-реперфузионного повреждения миокарда. Оба белка представляют собой пассивные переносчики, регулируемые трансмембранными градиентами - ионов, заряда и осмотического напряжения. Оба белка задействованы в механизме повреждения, и их блокада приводит к уменьшению объема некроза.

Мы предполагаем, что ток кальция через КСХ при посткондиционировании необходим для реализации его защитного действия, и при блокаде обменника происходит избыточная стимуляция традиционного для посткондиционирования пути, опосредуемого про-теинкиназами С и ЕЯК, что может вызвать оксидативный стресс и гибель клеток. Это предположение объясняет результаты вестерн-блоттинга, показывающего повышенную активацию данных белков в группе сочетания блокады ЫСХ и ИПост.

ВЫВОДЫ

1. Посткондиционирование проведенное по протоколу трех эпизодов ишемии (по 10 с), разделенных эпизодами реперфузии (по 10 с), вызывает уменьшение размера зоны некроза миокарда, однако не влияет на функциональные параметры сердечных сокращений в изолированном сердце мыши.

2. Защитный эффект ишемического посткондиционирования в сердце мыши опосредован активацией киназы АКТ в кардиомиоцитах.

3. Блокада обратного режима натрий-кальциевого обменника (МСХ) до начала ишемии вызывает уменьшение постишемического повреждения миокарда, что проявляется уменьшением размера зоны некроза без изменения сократительной функции сердца; блокада ИСХ в начале реперфузии вызывает как уменьшение зоны некроза, так и улучшение сократительной функции сердца.

4. Механизм кардиопротекции, вызванный блокадой 1ЧСХ до начала ишемии не связан с активацией протеинкиназ АКТ, Е11К1/2, РКСе; кардиопротекция, обусловленная блокадой ЫСХ в начала реперфузии сочетается с активацией ЕЛК и РКСе.

5. Сочетание блокады натрий-кальциевого обменника (NCX) и посткондиционирования приводит к исчезновению защитного эффекта, вероятно, за счет угнетения активации киназы АКТ.

6. Сердца мышей, нокаутных по гену аквапорина aqp4, более устойчивы к ишемическому-реперфузионному повреждению, что не связано с изменением общего содержания воды в миокарде.

7. Хирургическое вмешательство с использованием аппарата искусственного кровообращения и перфузии сердца кардиоплегическим раствором приводит к снижению уровня экспрессии аквапорина Aqp-1 в кардиомиоцитах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Ишемическое посткондиционирование и блокада «обратного режима» натрий-кальциевого обменника обладают мощным потенциалом по снижению размера инфаркта, и применение этим методов в клинике, возможно, снизит тяжесть последствий ОИМ, а также ишемического- реперфузионного повреждения, связанного с хирургическим вмешательством на сердце.

2. Ишемическое посткондиционирование не должно комбинироваться с блокадой NCX, так как защитный эффект обоих воздействий при этом исчезает.

3. Данные о повышенной ишемической толерантности мышей, нокаутных по гену аквапорина Aqp-4, являются предпосылкой для создания препаратов, блокирующих работу данного белка, которые в перспективе смогут уменьшить тяжесть ишемического - реперфузионного повреждения пациентов с ОИМ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Рутковский A.B. Роль натрий-кальциевого обменника в механизме за-щитного эффекта ишемического посткондиционирования. / Каль-юсто М-Л., Стенслоккен К-О., Вааге Я., Власов Т.Д. // Регионарное Кровообращение и Микроциркуляция. - 2007. - Т.6. - №3(23). - С. 78-85.

2. Рутковский A.B. Роль аквапоринов в патогенезе ишемического-репер-фузионного повреждения миокарда. / Стенслоккен К.О., Амин М., Амири-Могаддам М., Отгерсен О-П., Вален Г., Вааге Я., Власов Т.Д. // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2008. -Т.7. - №1(25). - С. 49-57.

3. Рутковский А.В. Операция коронарного шунтирования с использованием аппарата искусственного кровообращения вызывает снижение экспрессии аквапорина-1 в миокарде левого желудочка человека. / Стенслоккен К.О., Флатебо Т., Вален Г., Вааге Я., Власов Т.Д. // Регионарное кровообращение и микроциркуляция - 2008. - Т.7. -№1(25).-С. 93-94.

4. Rutkovsky A., Perfusion of isolated hearts phosphorylates the survival kinase pathway of pre- and postconditioning. / Stenslokken K.O., Kaljusto M-L., Hafstad A., Larsen Т., Vaage J. // Материалы Российско-норвеж-кого научного симпозиума «Защита миокарда: молекулярные, патофизиологические и клинические аспекты», Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2008. - Т.7. - №2(26). - С. 70-71.

5. Rutkovsky A., Is the isolated heart preconditioned? / Stenslokken K.O.,. Kaljusto M.-L, Dahl M.B., Vaage J. // Abstracts of the World congress of the International Society for Heart Research, Journal of Molecular and Cellular Cardiology. - 2007 - № 42 - P. S174-S175.

6. Rutkovsky A., Degree of phosphorylation of survival kinases in isolated mouse hearts depends on the mode of perfusion / Stenslokken K.O., Kaljusto M-L, Hafstad A., Larsen Т., Vaage J. // Abstracts of the World congress of the International "Society for Heart Research, Journal of Molecular and Cellular Cardiology. - 2008 - № 44 - P. 809 .

Лицензия ИД №00321 от 13.10.2008 Подписано в печать 13.11.2008, Формат 60x84 1/16. Печать цифровая. Тираж 100 экз. Заказ №089 197002, Санкт-Петербург, ул. Захарьевская, д. 13. лит.А, пом 4-Н

Оглавление диссертации Рутковский, Аркадий Владимирович :: 2008 :: Санкт-Петербург

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Патофизиология ишемического и репер фу знойного повреждения (ИРП) миокарда.

2.1.1 Тканевой отек.

2.1.2. Оксидативный стресс.

2.1.3. Контрактура кардиомиоцита.

2.1.4. Открытие митохондриальных каналов.

2.2. Современные подходы к снижению тяжести ишемического-реперфузионного повреждения миокарда.

2.2.1. Ишемическое прекондиционирование.

2.2.2. Ишемическое посткондиционирование.

2.3. Роль натрий-кальциевого обменника (NCX) в патофизиологии ишемического - реперфузионного повреждения.

2.3.1. Кальциевый метаболизм кардиомиоцитов краткое описание.

2.3.2. Строение NCX.

2.3.3. Регуляция работы NCX.

2.3.4. Функция NCX в норме.

2.3.5. Функция NCX при патологии.

2.3.6. Модуляторы активности NCX.

2.4. Роль Аквапорннов в патофизиологии ишемического -реперфузионного повреждения.

2.4.1. Молекулярная структура и регуляция работы аквапоринов

2.4.2. Физиологическая роль аквапоринов.

2.4.3. Экспрессия аквапоринов в миокарде.

2.4.4. Аквапорины в патофизиологии ИРП.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1 Экспериментальные исследования.

3.1.1 Перфузия изолированных мышиных сердец.

3.1.2 Мониторинг функциональных параметров.

3.1.3. Оценка размера инфаркта.

3.1.4. Измерение содержания воды в ткани.

3.1.5. Иммуноэлёктронная микроскопия (Immuno-Gold).

3.2 Исследования, выполненные на клиническом материале.

3.3 rtPCR в режиме реального времени.

3.4 Определение экспрессии и активации клеточных белков с помощью Вестерн-Блоттинга.

3.5 Статистическая обработка результатов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Влияние посткондиционнрования и блокады натрий-кальциевого обменника на степень ишемического и реперфузионного повреждения сердца мыши.

4.1.1. Влияние посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на размер инфаркта при экспериментальной ишемии-реперфузии миокарда.

4.1.2. Влияние посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на функциональные показатели работы сердца мыши при экспериментальной ишемии-реперфузии.

4.2. Влияние посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника на степень фосфорилирования защитных протеинкиназ.

4.3. Влияние экспрессии аквапорина Aqp-4 на ишемическое и реперфузионное повреждение сердца мыши.

4.3.1. Влияние экспрессии аквапорина Aqp-4 на размер инфаркта изолированного сердца мыши.

4.3.2. Влияние экспрессии аквапорина Aqp-4 на содержание воды в ткани миокарда, подвергшегося ишемии/реперфузии.

4.3.3. Влияние экспрессии аквапорина Aqp-4 на функциональные параметры сердечных сокращений в ходе ишемии-реперфузии.

4.4. Влияние долговременной перфузии и ишемии-реперфузии изолированного сердца мыши на экспрессию генов аквапоринов Aqp-4 и Aqp-1.!.

4.4.1. Оценка экспрессии генов Aqp-1 и Aqp-4 по данным полимеразной цепной реакции в реальном времени (rtPCR).

4.4.2. Оценка количества Aqp-1 и Aqp-4 по данным иммуноцитохимического исследования ImmunoGold.

4.5. Экспрессия аквапоринов Aqp-1 и Aqp-4 в биоптатах миокарда левого желудочка пациентов со стабильной стенокардией в ходе операции маммаро-коронарного шунтирования, данные PCR.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Рутковский, Аркадий Владимирович, автореферат

Актуальность проблемы.

Сердечно-сосудистые заболевания занимают ведущее место в структуре общей заболеваемости и смертности в России и во всем мире (Levi et al, 2002). Острый инфаркт миокарда (ОИМ) - основная причина смертности больных с ИБС. Главным средством борьбы с развивающимся поражением миокарда при инфаркте служит реперфузия - восстановление кровотока в ишемизированном участке. В течение последних лет в экспериментах на животных удалось показать, что не только ишемия, но и реперфузия вносят весомый вклад в гибель кардиомиоцитов (Hausenloy, 2008). Известно, что реперфузия вызывает оксидативный стресс, отек кардиомиоцитов, поступление в клетки избытка кальция и, как следствие, нарушение митохондриальной проницаемости и гибель клетки (Halestrap et al, 2007). Основная роль в перегрузке клетки кальцием при реперфузии принадлежит натрий-кальциевому обменнику (NCX). Блокада «обратного режима» с помощью препарата KB-R7943 приводит к уменьшению размера некроза (Seki et al, 2000). Кроме того, существует ряд методик, позволяющих снизить ишемическое-реперфузионпое повреждение (ИРП). Одной из наиболее эффективных является ишемическое посткондиционирование (V-Johansen, 2006). Оно существенно снижает размер инфаркта и постишемическую сократительную дисфункцию. Механизмы защитного действия посткондиционирования активно изучаются, показано участие каскадов протеинкиназ (МАР-киназы, протеинкиназы С и В), что свидетельствует об активации эндогенных механизмы клеточной защиты. В ряде работ имеются данные о взаимосвязи между кальциевым метаболизмом и посткондиционированием, однако природа ее не установлена.

Важным механизмом развития ишемического-реперфузионного повреждения является также интерстициальный и клеточный отек миокарда.

Известно, что до трети водного транспорта в кардиомиоцитах осуществляется белками аквапоринами (Egan et al, 2006). Работ по исследованию роли аквапоринов в патофизиологии миокарда на данный момент не более десяти, в них показано, что аквапорин-1 и аквапорин-4 (Aqp-1 и Aqp-4) экспрессируются в миокаде мыши и человека (Wakayama et al, 2007), причем Aqp-1 локализован преимущественно в эндотелии сосудов сердца, a Aqp-4 -на клеточной мембране кардиомиоцитов (Butler et al, 2006). В 2007 году А. Warth и соавт. показали, что экспрессия Aqp-4 повышается под действием ишемии.

Таким образом, исследование молекулярных механизмов, участвующих в реализации ишемического и реперфузионного повреждения миокарда, является весьма актуальным, и может быть основанием для дальнейшей разработки способов защиты сердца от повреждения.

Цель исследования.

Изучить роль мембранных белков - обменников натрия и кальция (NCX) и водных каналов (аквапоринов) в механизмах формирования эндогенной устойчивости миокарда к ишемическому - реперфузионному повреждению.

Задачи исследования.

2. Оценить значение «обратного режима» работы NCX в патогенезе ишемического-реперфузионного повреждения.

3. Определить возможность суммации эффектов посткондиционирования и блокады обратного режима NCX в отношении эндогенной клеточной защиты.

4. Исследовать влияние экспрессии гена aqp4 на устойчивость миокарда к ишемическому-реперфузионному повреждению на модели изолированного сердца мышей, нокаутных по гену apq4.

5. Изучить экспрессию аквапоринов Aqp-1 и Aqp-4 при ишемии-реперфузии миокарда на модели изолированного сердца мыши и при проведении операций на открытом сердце человека.

Научная новизна.

Впервые показано угнетение эндогенной клеточной защиты миокарда при комбинировании ишемического посткондиционирования с пре- и постишемическим введением блокатора обратного режима натрий-кальциевого обменника (NCX) на модели изолированного сердца мыши.

Впервые получены данные об активации протеинкиназ ERK и РКС в ходе сочетания блокатора NCX с посткондиционированием, а также снижение активации протеиикиназы В (АКТ).

Впервые показана повышенная ишемическая толерантность миокарда мышей, генетически нокаутных по гену aqp-4, что свидетельствует о значительной роли аквапоринов в патогенезе ишемического-реперфузионпого поражения.

Впервые получены данные о снижении экспрессии аквапоринов Aqp-1 и Aqp-4 в миокарде человека в результате операции маммаро-коронарного шунтирования с применением аппарата искусственного кровообращения и комбинированной антеро- и ретроградной кардиоплегии.

Впервые получены данные о снижении экспрессии аквапоринов Aqp-1 и Aqp-4 в миокарде мыши под действием ретроградной перфузии по Лангендорфу.

Теоретическая и практическая значимость.

Данные, полученные в исследовании, расширяют представления об эндогенной кардиопротекции, в частности о молекулярных механизмах посткондиционирования. Полученные данные могут рассматриваться как теоретическая предпосылка использования посткондицнонирующих воздействий в клинической практике.

Основные положения, выносимые на защиту.

2. В патогенезе ишемического и реперфузионного поражения важную роль играет натрий-кальциевый обменник, фармакологическая блокада которого уменьшает степень повреждения.

3. Защитные механизмы посткондиционирования и блокады натрий-кальциевого обменника связаны с активацией различных протеинкиназ; при сочетании этих способов защиты их протективное действие взаимоисключается, приводя к «отмене» кардиопротективного действия каждого механизма.

Реализация работы.

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

1. А.В. Рутковский, M-JI. Кальюсто, К-О. Стенслоккен, Я. Вааге, Т.Д. Власов. «Роль натрий-кальциевого обменника в механизме защитного эффекта ишемического посткондиционирования», // Регионарное Кровообращение и микроциркуляция, №3 (2007).

2. А.В. Рутковский, К.О. Стенслоккен, М. Амин, М. Амири-Могадцам, О-П. Оттерсен, Г. Вален, Я. Вааге, ТД Власов. «Роль аквапоринов в патогенезе ишемического-реперфузионного повреждения миокарда», // Регионарное кровообращение и микроциркуляция, №1 (2008).

3. А.В. Рутковский, К.О. Стенслоккен, Т. Флатебо, Г. Вален, Я. Вааге, Т.Д. Власов. «Операция коронарного шунтирования с использованием аппарата искусственного кровообращения вызывает снижение экспрессии аквапорина-1 в миокарде левого желудочка человека,» // Регионарное кровообращение и микроциркуляция, №1 (2008).

4. К.О. Stenslokken, A. Rutkovsky, M-L Kaljusto, A. Hafstad, Т. Larsen, J. Vaage. «Perfusion of isolated hearts phosphorylates the survival kinase pathway of pre-and postconditioning». Материалы Российско-норвежского научного симпозиума «Защита миокарда: молекулярные, патофизиологические и клинические аспекты» // Регионарное кровообращение и микроциркуляция, №2 (2008).

5. К.О. Stensbakken, M.-L. Kaljusto, М.В. Dahl, A. Rutkovsky, J. Vaage. «Is the isolated heart preconditioned?» Материалы XIX Всемирного конгресса Между народного Общества Исследователей в области Кардиологии

World congress of the International Society for Heart Research) Journal of Molecular and Cellular Cardiology, №42 (2007).

6. K.O. Stenslokken, A. Rutkovsky, M-L Kaljusto, A. Hafstad, T. Larsen, J. Vaage. «Degree of phosphorylation of survival kinases in isolated mouse hearts depends on the mode of perfusion,» Материалы Заседания Европейской Секции Международного Общества Исследователей в области Кардиологии (World congress of the International Society for Heart Research), // Journal of Molecular and Cellular Cardiology, № 44 (2008).

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались на ряде Российских и международных конференцияй и симпозиумов:

2. Апрель 2007 г. - конференция молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" в Санкт-Петербурге.

4. Октябрь 2007 г. - V ежегодный симпозиум Центра по изучению Сердечной Недостаточности (5th Annual Symposium of a Center for Heart Failure research (CHER), в Осло, Норвегия.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 38 отечественных и 161 иностранный источник. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 19 рисунками.

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии"

6. выводы

1. Посткондиционированис проведенное по протоколу трех эпизодов ишемии (по 10 с), разделенных эпизодами реперфузии (по 10 с), вызывает уменьшение размера зоны некроза миокарда, однако не влияет на функциональные параметры сердечных сокращений в изолированном сердце мыши.

3. Блокада обратного режима натрий-кальциевого обменника (NCX) до начала ишемии вызывает уменьшение постишемического повреждения миокарда, что проявляется уменьшением размера зоны некроза без изменения сократительной функции сердца; блокада NCX в начале реперфузии вызывает как уменьшение зоны некроза, так и улучшение сократительной функции сердца.

4. Механизм кардиопротекции, вызванный блокадой NCX, не связан с активацией протеинкиназ АКТ, ERK1/2, PKCepsilon.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Ишемическое посткондиционирование и блокада «обратного режима» натрий-кальциевого обменника обладают мощным потенциалом по снижению размера инфаркта, и применение этим методов в клинике, возможно, снизит тяжесть последствий ОИМ, а также ишемического-реперфузионного повреждения, связанного с хирургическим вмешательством на сердце.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Рутковский, Аркадий Владимирович

1. Список статей отечественных авторов.

2. Алабовский В. В., Винокуров А. А., Кобрин В. И., Олейников О. Д.

3. Предупреждение искусственным увеличением трансмембранного градиента натрия реперфузионных повреждений сердца при «кальциевом парадоксе» и постишемической реперфузии // Физиол. журнал. 1991. - Т. 37. - № 3. - С. 25-30.

4. Алабовский В. В., Хамбуров В. В., Винокуров А. А. Некоторыемеханизмы защитного действия аденозина при «кальциевом» парадоксе // Росс, физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 2004. - Т. 90. - № 7. - С. 889-901.

5. Александрова Е.А. Кальцийтранспортирующие системы и регуляцияконцентрации кальция в кардиомиоцитах // Успехи физиологических наук. 2001 - Т. 32 - № 3 - С. 40-48.

6. Биленко М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.

7. М.: Медицина, 1989. 368 с.

8. Блохин И.О., Власов Т.Д., Гала1удза М.М., Нифонтов Е.М., Петрищев

9. Н.Н. Роль натрий-кальциевого обменника в формировании устойчивости миокарда к ишемии и реперфузии // Российский физиологический журнал. 2008 - Т. 94 - № 3 - С. 284-292.

10. Братусь В.В., Плиска А.И., Безусько А.Г. Влияние различных режимовпостишемической реперфузии на восстановление функциональной активности миокарда // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. -1990 Т. 76 - № 8 -С. 1030-1035.

11. Бурашников А. Ю., Медвинский А. Б. Роль Са2+, входящего в клетку вовремя реперфузии, в механизме инициации и поддержанияреперфузионных аритмий // Биофизика. 1994. - Т. 39. - № 6. - С. 10581062.

12. Верхратскип А.Н., Проичук Н.Ф., Тепикии А.В. Влияние снижениявнеклеточной концентрации ионов натрия на внутриклеточную концентрацию ионов кальция в цитоплазме культивируемых кардиомиоцитов крыс // Физиологический журнал. 1989 - Т. 35 - № 6 -С. 45-49.

13. Турин А. В., Молош А. И., Сидоренко Г. И. Прерывистая ишемияуникальный адаптивный феномен. Перспектива новых путей фармакологического воздействия // Кардиология. 1997. - Т. 37. - № 6. -С. 45-52.

14. Иоселиани Д. Г., Элькпс И. С., Соловьев О. П. и др. Комбинацияэндоваскулярных процедур и догоспитальной системной тромболитической терапии при лечении больных острым инфарктом миокарда // Кардиология. 2005. - Т. 45. - № 3. - С. 4-10.

15. Каган-Пономарев М. Я., Самко А. Н., Ходеев Г. В. Влияет липредшествующая инфаркту мнокарда стенокардия на его размер, лечение и прогноз? Клинические аспекты феномена адаптации к ишемии // Кардиология. 1998. - Т. 38. - № 9. - С. 60-64.

16. Капелько В. И. Эволюция концепции и метаболическая основаишемической дисфункции миокарда // Кардиология. 2005. - Т. 45. - № 9.-С. 55-61.

17. Кузин В. В., Белоусов В. Е. Реперфузионные повреждения тканей и ихпатогенетическое лечение // Вести, хир. им. И. И. Грекова. 1993. - Т. 150.-№12.-С. 139-142.

18. Ланкин В. 3., Тихазе А. К., Беленков Ю. Н. Свободнорадикальныепроцессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. 2000. - Т. 40. - № 7. - С. 48-61.

19. Лаптев Б. И., Халиулин И. Г., Ущеко Д. В. Предупреждениереперфузиоппых повреждений сердца крыс с помощью предварительных кратковременных эпизодов ишемии различной длительности // Росс, физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1997. - Т. 83. -№ 9.-С. 69-73.

20. Ласукова Т.В., Реброва Т.Ю. Активация дельта-опиатных рецепторов иустойчивость кардиомиоцитов к свободнорадикальному повреждению // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2001 - № 2 -С. 15-17.

21. Литвицкий П. Ф. Общие механизмы повреждения и адаптации сердца приего ишемии и реперфузии (компоненты к построению общей теории патологии сердца) // Бюл. эксп. биол. и мед. 1994. - Т. 117. - № 1. - С. 11-22.

22. Петрищев Н.Н., Власов Т.Д., Галагудза М.М., Курапеев Д.И., Минасян

23. С.М. Феномен ишемического прекондиционирования миокарда: кратковременная ишемия приводит к переходу персистирующей реперфузионной фибриляции желудочков в синусовый ритм // Российский физиологический журнал. 2004 — Т. 90 - № 9 - С. 11381144.

24. Петрищев Н.Н., Шляхто Е.В., Цырлии В А., Власов Т.Д., Сыренский А.В.,

25. Галагудза М.М. Роль свободных радикалов кислорода в механизмах локального и дистантного ишемического прекондиционирования миокарда // Вестник российской академии медицинских наук. 2006 -№8 -С. 10-15

26. Писаренко О. И., Студнева И. М., Серебрякова JI. И. и др. Защитамиокарда крыс селективным ингибитором Ыа+/Н+-обмена и ишемическим прекондиционированием // Кардиология. 2005. - Т. 45. -№2.-С. 37-44.

27. Писарепко О.И. Ишемическое прекондиционирование: от теории кпрактике // Кардиология. 2005. - Т.45 - № 9 - С. 62-72.

28. Писаренко О.И., Студнева И.М., Шульженко B.C., Тимошин А.А.

29. Механизмы снижения повреждений ишемизированного сердца с помощью модифицированной реперфузии // Биомедицинская химия. -2007-Т.53- №3-С. 313-321.

30. Платонов А.А., Ласукова Т.В., Маслов Л.Н., Дауни Дж. М., Нагазе X.,

31. Овчинников М.В. Агонисты дельта-опиоидных рецепторов предупреждают появление необратимых повреждений кардиомиоцитов при ишемии-реперфузии изолированного сердца // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004 - Т. 67 - № 6 - С. 26-29.

32. Рыбакова М. Г., Кузнецова И. А. Роль апоптоза в ишемическомповреждении миокарда // Арх. патол. 2005. - Т. 67. - № 5. - С. 23-25.

33. Сидоренко Г. И., Гурин А. В. Феномен прерывистой ишемии у человека и , его роль в клинических проявлениях ишемнческой болезни сердца //

34. Кардиология. 1997. - Т. 37. - № 10. - С. 4-16.

35. Снигиревская Е.С., Комиссарчик Я.Ю. Аквапорины плазматическихмембран эпителиальных клеток // Цитология. 1999 - Т. 41 - № 10 - С. 864-70.

36. СоленковаН. В., Маслов JI. Н., Доуни Дж. М. АТФ-зависимые К+-каналыи регуляция устойчивости сердца к ишемическим и реперфузионным воздействиям // Патол. физиол. эксп. тер. 2006. - № 2. - С. 28-31.

37. Тимошин А.А., Лакомкин В.Л., Рууге Э.К. Влияние ишемичсскогопрекондиционирования на свободнорадикальные центры изолированного сердца крысы при ишемии и на ранней стадии реперфузии // Биофизика. 2000 -Т. 45 - № 1 - С. 112-118.

38. Тимошин А.А., Лакомкин В.Л., Рууге Э.К. Влияние сериикратковременных циклов ишемии и реперфузии на свободнорадикальные центры ткани изолированного миокарда крысы // Биофизика. 1998 - Т. 43 - №1-С. 134-138.

39. Хаткевич А. Н., Дворянцев С. Н., Капелько В. И., Рууге Э. К. Защитныйэффект ишемической предпосылки (прекондиционирования): влияние длительности ишемии // Кардиология. 1998. - Т. 38. - № 5. - С. 4-8.

40. Швилкин А. В., Левицкий Д. О., Серебрякова Л. И. и др. Методмоделирования окклюзионно-реперфузионного инфаркта миокарда и количественной оценки эффективности ограничения его размеров // Кардиология. 1990. - Т. 30. - № 7. - С. 88-91.

41. Шляхто Е.В., Галагудза М.М., Сыренский А.В., Нифонтов Е.М.

42. Кардиопротективные эффекты феномена ишемического посткондиционирования миокарда // Кардиология. 2005 - Т. 45 - № 7 - С. 44-48.

43. Шульженко B.C., Капелько В Ji. Влияние различных режимов реперфузиина восстановление сократительной функции миокарда после тотальнойишемии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1988 - Т. 106 - № 12 -С. 663-666.

44. Шульженко B.C., Кузьмин А.И., Капелько В.И. Восстановлениесократительной функции миокарда при градуальной реперфузии после тотальной ишемии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1989 - Т. 107 - № 4 - С. 407-409.

45. Шульженко B.C., Писаренко О.И., Студнева И.М., Капелько В.И.

46. Влияние градуальной реперфузии на восстановление насосной функции и энергетические запасы сердца после ишемии // Физиологический журнал. 1991 - Т. 37 - № 1 -С. 7-12.

47. Список статей зарубежных авторов и отечественных, индексированных для поиска в системе NLM PubMed, США.

48. Agre, P. Nobel Lecture. Aquaporin water channels. // Biosci Rep (2004).- № 3.-24. P. 127-63.

49. Ahlers, В. A., X. Q. Zhang, et al. Identification of an endogenous inhibitor of thecardiac Na-t/Ca2+exchanger, phospholemman. // J Biol Chem (2005).- № 20.-280. - P. 19875-82.

50. Aiello, E. A., M. C. Villa-Abrille, et al. Endothelin-1 stimulates the Na4/Ca2 +exchanger reverse mode through intracellular Na+ (Na 4i)-dependent and Na-Hi-independent pathways. // Hypertension (2005).- № 2. - 45. - P. 28893.

51. Akabas, M. H. Na-t/Ca2 +exchange inhibitors: potential drugs to mitigate theseverity of ischemic injury. // Mol Pharmacol (2004).- № 1.-66. - P. 810.

52. Aleksandrova, E. A. Calcium-transporting systems and calcium regulation incardiomyocytes. // Usp Fiziol Nauk (2001).- № 3. - 32. - P. 40-8.

53. Amiry-Moghaddam, M., Т. Otsuka, et al. An alpha-syntrophin-dependent pool of

54. AQP4 in astroglial end-feet confers bidirectional water flow between blood and brain. // Proc Natl Acad Sci U S A (2003).- № 4. - 100. - P. 2106-11.

55. An, J., S. S. Rhodes, et al. Anesthetic preconditioning enhances Ca2+handlingand mechanical and metabolic function elicited by Na-hCa2 + exchange inhibition in isolated hearts. // Anesthesiology (2006).- № 3. - 105. - P. 541-9.

56. Aon, M. A., S. Cortassa, et al. Mitochondrial criticality: a new concept at theturning point of life or death. // Biochim Biophys Acta (2006).- № 2. -1762. - P. 232-40.

57. Ardehali, H. Signaling mechanisms in ischemic preconditioning: interaction of

58. PKCepsilon and MitoK(ATP) in the inner membrane of mitochondria. // Circ Res (2006).- № 8. - 99. - P. 798-800.

59. Argaud, L., O. Gateau-Roesch, et al. Increased mitochondrial calcium coexistswith decreased reperfusion injury in postconditioned (but not preconditioned) hearts. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2008).- № 1. - 294. - P. H386-91.

60. Argaud, L., O. Gateau-Roesch, et al. Postconditioning inhibits mitochondrialpermeability transition. // Circulation (2005).- № 2. - 111. - P. 194-7.

61. Armoundas, A. A., I. A. Hobai, et al. Role of sodium-calcium exchanger inmodulating the action potential of ventricular myocytes from normal and failing hearts. // Circ Res (2003).- № 1. - 93. - P. 46-53.

62. Au, C. G., T. L. Butler, et al. Changes in skeletal muscle expression of AQP1and AQP4 in dystrophinopathy and dysferlinopathy patients. // Acta Neuropathol (2008).- № 3. - 116. - P. 235-46.

63. Au, C. G., S. T. Cooper, et al. Expression of aquaporin 1 in human cardiac andskeletal muscle. // J Mol Cell Cardiol (2004).- № 5. - 36. - P. 655-62.

64. Bai, C., N. Fukuda, et al. Lung fluid transport in aquaporin-1 and aquaporin-4knockout mice. // J Clin Invest (1999).- № 4. - 103. - P. 555-61.

65. Baines, С. P., С. X. Song, et al. Protein kinase Cepsilon interacts with andinhibits the permeability transition pore in cardiac mitochondria. // Circ Res -(2003).- № 8. 92. - P. 873-80.

66. Barnett, M. E., D. K. Madgwick, et al. Protein kinase С as a stress sensor. // Cell

67. Signal (2007).- № 9. - 19. - P. 1820-9.

68. Benga, G. Water channel proteins: from their discovery in Cluj-Napoca,

69. Romania in 1985, to the 2003 Nobel Prize in chemistry and their implications in molecular medicine. // Keio J Med (2006).- № 2. - 55. - P. 64-9.

70. Benga, G., O. Popescu, et al. p-(Chloromercuri)benzenesulfonate binding bymembrane proteins and the inhibition of water transport in human erythrocytes. // Biochemistiy (1986).- № 7. - 25. - P. 1535-8.

71. Bers, D. M. The beat goes on: diastolic noise that just won't quit. // Circ Res2006).- № 9. 99. - P. 921-3.

72. Birkeland, J. А., О. M. Sejersted, et al. EC-coupling in normal and failinghearts. // Scand Cardiovasc J (2005).- № 1-2. - 39. - P. 13-23.

73. Blokhin, I. О., T. D. Vlasov, et al. Role of sodium-calcium exchanger in themyocardial protection against ischemia-reperfusion injury. // Ross Fiziol Zh Im IM Sechenova (2008).- № 3. - 94. - P. 284-92.

74. Bouwman, R. A., K. Salic, et al. Cardioprotection via activation of proteinkinase C-delta depends on modulation of the reverse mode of the Na 4/Ca2 + exchanger. // Circulation (2006).- № 1 Suppl. - 114. - P. 1226-32.

75. Bratus, V. V., A. I. Pliska, et al. The effect of various regimens of postischemicreperfusion on the recovery of the functional activity of the myocardium. // Fiziol Zh SSSR Im IM Sechenova (1990).- № 8. - 76. - P. 1030-5.

76. Bru-Mercier, G., P. M. Hopkins, et al. Halothane and sevoflurane inhibit Na/Caexchange current in rat ventricular myocytes. // Br J Anaesth (2005).- № 3. - 95. - P. 305-9.

77. Budas, G. R., E. N. Churchill, et al. Cardioprotective mechanisms of PKCisozyme-selective activators and inhibitors in the treatment of ischemia-reperfusion injury. // Pharmacol Res (2007).- № 6. - 55. - P. 523-36.

78. Burley, D. S., P. Ferdinandy, et al. Cyclic GMP and protein kinase-G inmyocardial ischaemia-reperfusion: opportunities and obstacles for survival signaling. // Br J Pharmacol (2007).- № 6. - 152. - P. 855-69.

79. Butler, T. L., C. G. Au, et al. Cardiac aquaporin expression in humans, rats, andmice. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2006).- № 2. - 291. - P. H705-13.

80. Carson, L. D. and D. H. Korzick. Dose-dependent effects of acute exercise on

81. PKC levels in rat heart: is PKC the heart's prophylactic? // Acta Physiol Scand (2003).- № 2. - 178. - P. 97-106.

82. Churchill, E. N. and D. Mochly-Rosen. The roles of PKC-delta and epsilonisoenzymes in the regulation of myocardial ischaemia/reperfusion injury. // Biochem Soc Trans (2007).- № Pt 5. - 35. - P. 1040-2.

83. Darling, С. E., R. Jiang, et al. Postconditioning via stuttering reperfusion limitsmyocardial infarct size in rabbit hearts: role of ERK1/2. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 4. - 289. - P. H1618-26.

84. Darling, С. E., P. В. Solari, et al. Postconditioning' the human heart: multipleballoon inflations during primary angioplasty may confer cardioprotection. // Basic Res Cardiol (2007).- № 3. - 102. - P. 274-8.

85. Di Lisa, F. and P. Bernardi. Mitochondria and ischemia-reperfusion injury of theheart: fixing a hole. // Cardiovasc Res (2006).- № 2. - 70. - P. 191-9.

86. Duilio, C., G. Ambrosio, et al. Neutrophils are primary source of 02 radicalsduring reperfiision after prolonged myocardial ischemia. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2001).- № 6. - 280. - P. H2649-57.

87. Egan, J. R., T. L. Butler, et al. Myocardial water handling and the role ofaquaporins. // Biochim Biophys Acta (2006).- № 8. - 1758. - P. 1043-52.

88. Egger, M., H. Porzig, et al. Rapid turnover of the "functional" Na(-t)-Ca2 +exchanger in cardiac myocytes revealed by an antisense oligodeoxynucleotide approach. // Cell Calcium (2005).- № 3. - 37. - P. 233-43.

89. Eisner, D. A. and K. R. Sipido. Sodium calcium exchange in the heart: necessityor luxury? // Circ Res (2004).- № 6. - 95. - P. 549-51.

90. Fryer, R. M., Y. Wang, et al. Essential activation of PKC-delta in opioidinitiated cardioprotection. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2001).- № 3. -280. - P. H1346-53.

91. Fu, D. and M. Lu. The structural basis of water permeation and proton exclusionin aquaporins. // Mol Membr Biol (2007).- № 5-6. - 24. - P. 366-74.

92. Galagudza, M. M., I. O. Blokhin, et al. Reduction of myocardial ischemiareperfusion injury with pre- and postconditioning: molecular mechanisms and therapeutic targets. // Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets (2008).- № 1.-8. - P.47-65.

93. Garlid, K. D., P. Paucek, et al. Cardioprotective effect of diazoxide and itsinteraction with mitochondrial ATP-sensitive K+ channels. Possible mechanism of cardioprotection. // Circ Res (1997).- № 6. - 81. - P. 107282.

94. Gateau-Roesch, О., L. Argaud, et al. Mitochondrial permeability transition poreand postconditioning. // Cardiovasc Res (2006).- № 2. - 70. - P. 264-73.

95. Goto, M., Y. Liu, et al. Role of bradykinin in protection of ischemicpreconditioning in rabbit hearts. // Circ Res (1995).- № 3. - 77. - P. 61121.

96. Gross, G. J. and J. A. Auchampach. Reperfusion injury: does it exist? // J Mol

97. Cell Cardiol (2007).- № 1. - 42. - P. 12-8.

98. Hagihara, H., Y. Yoshikawa, et al. Na4/Ca2+exchange inhibition protects therat heart from ischemia-reperfusion injury by blocking energy-wasting processes. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 4. - 288. - P. HI699-707.

99. Halestrap, A. P., S. J. Clarke, et al. The role of mitochondria in protection of theheart by preconditioning. // Biochim Biophys Acta (2007).- № 8. - 1767. -P. 1007-31.

100. Halkos, M. E., F. Kerendi, et al. Myocardial protection with postconditioning isnot enhanced by ischemic preconditioning. // Ann Thorac Surg (2004).- № 3. - 78. - P. 961-9; discussion 969.

101. Hamilton, K. L. Antioxidants and cardioprotection. // Med Sci Sports Exerc2007).- № 9. 39. - P. 1544-53.

102. Han, Z., M. B. Wax, et al. Regulation of aquaporin-4 water channels by phorbolester-dependent protein phosphorylation. // J Biol Chem (1998).- № 11. -273. - P. 6001-4.

103. Harvey, R. D. Regulation of cardiac Na-Ca exchange activity by selectivetyrosine kinase inhibition. // Br J Pharmacol (2004).- № 8. - 143. - P. 92930.

104. Hausenloy, D. J., A. Tsang, et al. Ischemic preconditioning protects byactivating prosurvival kinases at reperfusion. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 2. - 288. - P. H971-6.

105. Hausenloy, D. J. and D. M. Yellon. Survival kinases in ischemicpreconditioning and postconditioning. // Cardiovasc Res (2006).- № 2. -70. - P. 240-53.

106. Hausenloy, D. J. and D. M. Yellon. Preconditioning and postconditioning:united at reperfusion. // Pharmacol Ther (2007).- № 2. - 116. - P. 173-91.

107. Henderson, S. A., J. I. Goldhaber, et al. Functional adult myocardium in theabsence of Na-bCa2+exchange: cardiac-specific knockout of NCX1. // Circ Res (2004).- № 6. - 95. - P. 604-11.

108. Hilgemann, D. W. New insights into the molecular and cellular workings of thecardiac Na4/Ca2+exchanger. // Am J Physiol Cell Physiol (2004).- № 5. -287.-P. CI 167-72.

109. Hiller, R., C. Shpak, et al. An unknown endogenous inhibitor of Na/Caexchange can enhance the cardiac muscle contractility. // Biochem Biophys Res Commun (2000).- № 1. - 277. - P. 138-46.

110. Hinata, M. and J. Kimura. Forefront of Na-t/Ca2+ exchanger studies:stoichiometry of cardiac Na-t/Ca2+ exchanger; 3:1 or 4:1? // J Pharmacol Sci (2004).- № 1.-96. - P. 15-8.

111. Hobai, I. A., C. Maack, et al. Partial inhibition of sodium/calcium exchangerestores cellular calcium handling in canine heart failure. // Circ Res -(2004).- № 3. 95. - P. 292-9.

112. Hobai, I. A. and B. ORourke. The potential of Na-f/Ca2+ exchange blockers inthe treatment of cardiac disease. // Expert Opin Investig Drugs (2004).- № 6.- 13. - P. 653-64.

113. Homma, N., M. S. Amran, et al. Topics on the Na-f/Ca2+ exchanger:involvement of Na-t/Ca2+exchange system in cardiac triggered activity. // J Pharmacol Sci (2006).- № 1. - 102. - P. 17-21.

114. Hudecova, S., P. Stefanik, et al. Retinoic acid increased expression of the

115. Na-t/Ca2+exchanger in the heart and brain. // Gen Physiol Biophys -(2004).- № 4. 23. - P. 417-22.

116. Hudecova, S., A. Tillinger, et al. Effect of 6-hydroxydopamine on the geneexpression of Na4/Ca2+ exchanger in the rat heart. // Gen Physiol Biophys 2004).- № 3. 23. - P. 307-13.

117. Hurtado, С., B. P. Ander, et al. Adenovirally delivered shRNA strongly inhibits

118. Na -KCa2 + exchanger expression but does not prevent contraction of neonatal cardiomyocytes. // J Mol Cell Cardiol (2005).- № 4. - 38. - P. 647-54.

119. Ikari, A., H. Sakai, et al. Protein kinase C-mediated up-regulation of Na-f/Ca2 -Ьexchanger in rat hepatocytes determined by a new Na-J/Ca2-bexchanger inhibitor, KB-R7943. // Eur J Pharmacol (1998).- № 1. - 360. - P. 91-8.

120. Inagaki, К., H. S. Hahn, et al. Additive protection of the ischemic heart ex vivoby combined treatment with delta-protein kinase С inhibitor and epsilon-protein kinase С activator. // Circulation (2003).- № 7. - 108. - P. 869-75.

121. Inserte, J., D. Garcia-Dorado, et al. Effect of inhibition of Na(-t)/Ca(2-f)exchanger at the time of myocardial reperfusion on hypercontmcture and cell death. // Cardiovasc Res (2002).- № 4. - 55. - P. 739-48.

122. Iwamoto, Т., Y. Pan, et al. Phosphorylation-dependent regulation of cardiac

123. Na4/Ca2 +exchanger via protein kinase C. // J Biol Chem (1996).- № 23. -271. - P. 13609-15.

124. Iwamoto, Т., Т. Watano, et al. A novel isothiourea derivative selectively inhibitsthe reverse mode of Na-f/Ca2+ exchange in cells expressing NCX1. // J Biol Chem (1996).- № 37. - 271. - P. 22391-7.

125. Jonker, S., L. E. Davis, et al. Anaemia stimulates aquaporin 1 expression in thefetal sheep heart. // Exp Physiol (2003).- № 6. - 88. - P. 691-8.

126. Kabir, A. M., J. E. Clark, et al. Cardioprotection initiated by reactive oxygenspecies is dependent on activation of PKCepsilon. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2006).- № 4. - 291. - P. H1893-9.

127. Katanosaka, Y., Y. Iwata, et al. Calcineurin inhibits Na-f/Ca2 + exchange inphenylephrine-treated hypertrophic cardiomyocytes. // J Biol Chem 2005).- № 7. 280. - P. 5764-72.

128. Kellen, M. R. and J. B. Bassingthwaighte. Transient transcapillary exchange ofwater driven by osmotic forces in the heart. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2003).- № 3. - 285. - P. H1317-31.

129. Keller, M., C. Pignier, et al. Mechanisms of Na-bCa2+exchange inhibition byamphiphiles in cardiac myocytes: importance of transbilayer movement. // J Membr Biol (2004).- № 3. - 198. - P. 159-75.

130. Kim, J. G., Y. J. Son, et al. Thyroid transcription factor-1 facilitatescerebrospinal fluid formation by regulating aquaporin-1 synthesis in the brain. // J Biol Chem (2007).- № 20. - 282. - P. 14923-31.

131. Kin, H., A. J. Zatta, et al. Postconditioning reduces infarct size via adenosinereceptor activation by endogenous adenosine. // Cardiovasc Res (2005).- № 1.-67. - P. 124-33.

132. King, L. S., M. Choi, et al. Defective urinary-concentrating ability due to acomplete deficiency of aquaporin-1. // N Engl J Med (2001).- № 3. - 345. - P. 175-9.

133. King, L. S., S. Nielsen, et al. Decreased pulmonary vascular permeability inaquaporin-1-null humans. // Proc Natl Acad Sci U S A (2002).- № 2. - 99. -P. 1059-63.

134. Komuro, I. and M. Ohtsuka. Forefront of Na4/Ca2+exchanger studies: role of

135. Na4/Ca2+ exchanger— lessons from knockout mice. // J Pharmacol Sci -(2004).-№ 1.-96. P. 23-6.

136. Kuchel, P. W. The story of the discovery of aquaporins: convergent evolution ofideas-but who got there first? // Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2006).-№ 7. - 52. - P. 2-5.

137. Laine, G. A. and S. J. Allen. Left ventricular myocardial edema. Lymph flow,interstitial fibrosis, and cardiac function. // Circ Res (1991).- № 6. - 68. -P. 1713-21.

138. Lasukova, Т. V. and Т. Rebrova. Activation of mu-opioid receptors andcardiomyocyte resistance to free radical damage. // Patol Fiziol Eksp Ter 2001).-№2.--P. 15-7.

139. Levi, F., F. Lucchini, et al. Trends in mortality from cardiovascular andcerebrovascular diseases in Europe and other areas of the world. // Heart 2002).- № 2. 88. - P. 119-24.

140. Li, L., Y. Watanabe, et al. Acidic Preconditioning Inhibits Na(4)/H(-t) and

141. Na(-}}/Ca(2-f) Exchanger Interaction via PKCepsilon in Guinea-Pig Ventricular Myocytes. // J Pharmacol Sci (2008).- № 3. - 107. - P. 309-16.

142. Li, S. Z., F. Wu, et al. Role of reverse mode Na4/Ca2+exchanger in thecardioprotection of metabolic inhibition preconditioning in rat ventricular myocytes. // Eur J Pharmacol (2007).- № 1-3. - 561. - P. 14-22.

143. Luo, W., B. Li, et al. Effect of ischemic postconditioning in adult valvereplacement. // Eur J Cardiothorac Surg (2008).- № 2. - 33. - P. 203-8.

144. Maeda, S., I. Matsuoka, et al. Down-regulation of Na-bCa2 + exchanger byfluvastatin in rat cardiomyoblast H9c2 cells: involvement of RhoB in Na-t/Ca2 +exchanger mRNA stability. // Mol Pharmacol (2005).- № 2. -68. - P. 414-20.

145. Magee, W. P., G. Deshmukh, et al. Differing cardioprotective efficacy of the

146. Na-t/Ca2 +exchanger inhibitors SEA0400 and KB-R7943. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2003).- № 3. - 284. - P. H903-10.

147. Matsuinoto, Т., Т. Miura, et al. Blockade of the Na-bCa2+exchanger is moreefficient than blockade of the Na-f-H+ exchanger for protection of the myocardium from lethal reperfusion injury. // Cardiovasc Drugs Ther -(2002).- № 4. 16. - P. 295-301.

148. Matsumoto, Т., Т. Miura, et al. Does enhanced expression of the Na-bCa2 +exchanger increase myocardial vulnerability to ischemia/reperfusion injury in rabbit hearts? // Mol Cell Biochem (2003).- № 1-2. - 248. - P. 141-7.

149. Matsuoka, S. Forefront of Na-f/Ca2+exchanger studies: regulation kinetics of

150. Na4/Ca2 +exchangers. // J Pharmacol Sci (2004).- № 1. - 96. - P. 12-4.

151. Mehlhorn, U., H. J. Geissler, et al. Myocardial fluid balance. // Eur J

152. Cardiothorac Surg (2001).- № 6. - 20. - P. 1220-30.

153. Miyamoto, S., A. L. Howes, et al. Ca2 + dysregulation induces mitochondrialdepolarization and apoptosis: role of Na 4/Ca2 +exchanger and АКТ. // J Biol Chem (2005).- № 46. - 280. - P. 38505-12.

154. Mukai, M., H. Terada, et al. Effects of a selective inhibitor of Na-f/Ca2 +exchange, KB-R7943, on reoxygenation-induced injuries in guinea pig papillary muscles. // J Cardiovasc Pharmacol (2000).- № 1. - 35. - P. 1218.

155. Murry, С. E., R. B. Jennings, et al. Preconditioning with ischemia: a delay oflethal cell injury in ischemic myocardium. // Circulation (1986).- № 5. -74.-P. 1124-36.

156. Maack, C., A. Ganesan, et al. Cardiac sodium-calcium exchanger is regulated byallosteric calcium and exchanger inhibitory peptide at distinct sites. // Circ Res (2005).- № 1. - 96. - P. 91-9.

157. Nakamura, A., K. Harada, et al. Effects of KB-R7943, a novel Na-f/Ca2 +exchange inhibitor, on myocardial ischemia/reperfusion injury. // Nippon Yakurigaku Zasshi (1998).- № 2. - 111. - P. 105-15.

158. Neely, J. D., В. M. Christensen, et al. Heterotetrameric composition of aquaporin-4 water channels. // Biochemistry (1999).- № 34. - 38. - P. 11156-63.

159. Nielsen, S., C. L. Chou, et al. Vasopressin increases water permeability ofkidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane. // Proc Natl Acad Sci U S A (1995).- № 4. -92. - P. 1013-7.

160. Nielsen, S., E. A. Nagelhus, et al. Specialized membrane domains for watertransport in glial cells: high-resolution immunogold cytochemistry of aquaporin-4 in rat brain. // J Neurosci (1997).- № 1. - 17. - P. 171-80.

161. Ogura, Т., S. Imanishi, et al. Osmometric and water-transporting properties ofguinea pig cardiac myocytes. // Jpn J Physiol (2002).- № 4. - 52. - P. 33342.

162. Ohtsuka, M., H. Takano, et al. Role of Na-bCa2 +exchanger in myocardialischemia/reperfusion injury: evaluation using a heterozygous Na+-Ca2 + exchanger knockout mouse model. // Biochem Biophys Res Commun 2004).- № 3. 314. - P. 849-53.

163. Okamura, Т., Т. Miura, et al. Ischemic preconditioning attenuates apoptosisthrough protein kinase С in rat hearts. // Am J Physiol (1999).- № 5 Pt 2. -277. - P. H1997-2001.

164. Omelchenko, A., R. Bouchard, et al. Frequency-dependent regulation of cardiac Na(4)/Ca(2-f) exchanger. // Am J Physiol Heart Circ Physiol2005).- № 4. 289. - P. H1594-603.

165. Ottolia, M., K. D. Philipson, et al. Conformational changes of the Ca(2-f)regulatory site of the Na( -f)-Ca(2 exchanger detected by FRET. // Biophys J (2004).- № 2. - 87. - P. 899-906.

166. Ovize, M., R. A. Kloner, et al. Coronary cyclic flow variations "precondition"ischemic myocardium. // Circulation (1992).- № 2. - 85. - P. 779-89.

167. Papadopoulos, M. C., G. T. Manley, et al. Aquaporin-4 facilitates reabsorptionof excess fluid in vasogenic brain edema. // Faseb J (2004).- № 11. - 18. -P. 1291-3.

168. Petrishchev, N. N., E. V. Shliakhto, et al. The role of oxygen free radicals inthe mechanisms of local and distant ischemic myocardial preconditioning. // Vestn Ross Akad Med Nauk (2006).- № 8. - - P. 10-5.

169. Piper, H. M., Y. Abdallah, et al. The first minutes of reperfusion: a window ofopportunity for cardioprotection. // Cardiovasc Res (2004).- № 3. - 61. - P. 365-71.

170. Pisarenko, О. I. Ischemic preconditioning: from theory to practice. // Kardiologiia (2005).- № 9. - 45. - P. 62-72.

171. Pisarenko, О. I., I. M. Studneva, et al. Mechanisms of ischemic heart injuryattenuation by means of a modified reperfusion. // Biomed Khim (2007).-№3.-53. - P. 313-21.

172. Platonov, А. А., Т. V. Lasukova, et al. Delta-opioid receptor agonists preventthe irreversible damage of cardiomyocytes in ischemized-reperfused isolated rat heart. // Eksp Klin Farmakol (2004).- № 6. - 67. - P. 26-9.

173. Pott, C., J. I. Goldhaber, et al. Genetic manipulation of cardiac Na4/Ca2 +exchange expression. // Biochem Biophys Res Commun (2004).- № 4. -322. - P. 1336-40.

174. Pott, С., K. D. Philipson, et al. Excitation-contraction coupling in Na-bCa2 +exchanger knockout mice: reduced transsarcolemmal Ca2+flux. // Circ Res -(2005).- № 12. 97. - P. 1288-95.

175. Pott, С., M. Yip, et al. Regulation of cardiac L-type Ca2 +current in Na-bCa2 +exchanger knockout mice: functional coupling of the Ca2 +channel and the Na-ЬСа2-(-exchanger. // Biophys J (2007).- № 4. - 92. - P. 1431-7.

176. Quednau, B. D., D. A. Nicoll, et al. Tissue specificity and alternative splicingof the Na 4/Ca2 + exchanger isoforms NCX1, NCX2, and NCX3 in rat. // Am J Physiol (1997).- № 4 Pt 1. - 272. - P. C1250-61.

177. Reeves, J. P. Na4/Ca2 +exchange and cellular Ca2+homeostasis. // J Bioenerg

178. Biomembr (1998).- № 2. - 30. - P. 151-60.

179. Reuter, H., Т. Han, et al. Mice overexpressing the cardiac sodium-calciumexchanger: defects in excitation-contraction coupling. // J Physiol (2004).-№Pt 3.-554. - P. 779-89.

180. Reuter, H., S. A. Henderson, et al. Cardiac excitation-contraction coupling inthe absence of Na(-t) Ca2-bexchange. // Cell Calcium - (2003).- № 1. - 34.- P. 19-26.

181. Reuter, H., S. A. Henderson, et al. The Na-f-Ca2 +exchanger is essential for theaction of cardiac glycosides. // Circ Res (2002).- № 3. - 90. - P. 305-8.

182. Rezkalla, S. H. and R. A. Kloner. Preconditioning in humans. // Heart Fail Rev- (2007).- № 3-4. 12. - P. 201-6.

183. Rock, P. and Z. Yao. Ischemia reperfusion injury, preconditioning and criticalillness. // Curr Opin Anaesthesiol (2002).- № 2. - 15. - P. 139-46.

184. Schafer, C., Y. Ladilov, et al. Role of the reverse mode of the Na4/Ca2 +exchanger in reoxygenation-induced cardiomyocyte injury. // Cardiovasc Res -(2001).-№2.-51. P. 241-50.

185. Schipke, J. D., F. Kerendi, et al. Postconditioning: a brief review. // Herz2006).- № 6. 31. - P. 600-6.

186. Schulze, D. H., S. K. Polumuri, et al. Functional regulation of alternativelyspliced Na-f/Ca2+ exchanger (NCX1) isoforms. // Ann N Y Acad Sci -(2002).- № 976. - P. 187-96.

187. Seehase, M., T. Quentin, et al. Gene expression of the Na-Ca2 + exchanger,

188. SERCA2a and calsequestrin after myocardial ischemia in the neonatal rabbit heart. // Biol Neonate (2006).- № 3. - 90. - P. 174-84.

189. Seki, S., M. Taniguchi, et al. Inhibition by KB-r7943 of the reverse mode ofthe Na4/Ca2 +exchanger reduces Ca2 4-overload in ischemic-reperfused rat hearts. // Circ J (2002).- № 4. - 66. - P. 390-6.

190. Shao, Q., B. Ren, et al. Modification of sarcolemmal Na-bK-bATPase and

191. Na4/Ca2+ exchanger expression in heart failure by blockade of reninangiotensin system. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 6. -288. - P. H2637-46.

192. Shigekawa, M., T. Iwamoto, et al. Probing ion binding sites in the Na-t/Ca2 +exchanger. // Ann N Y Acad Sci (2002).- № - 976. - P. 19-30.

193. Shliakhto, E. V., M. M. Galagudza, et al. Cardioprotective effects of ischemicpost-conditioning of the myocardium. // Kardiologiia (2005).- №7.-45. -P. 44-8.

194. Shpak, В., С. Shpak, et al. Inotropic and lusitropic effects induced by theinhibitory factor of the Na/Ca exchanger are not mediated by the beta-adrenergic activation. // J Cardiovasc Pharmacol (2004).- № 4. - 44. - P. 466-72.

195. Shul'zhenko, V. S. and V. I. KapelTco. Effect of various reperfusion regimenson the recovery of myocardial contractile function after total ischemia. // Biull Eksp Biol Med (1988).- № 12. - 106. - P. 663-6.

196. Shul'zhenko, V. S., A. I. Kuz'min, et al. Restoration of myocardial contractilefunction during gradual reperfusion after total ischemia. // Biull Eksp Biol Med (1989).-№ 4. - 107. - P. 407-9.

197. Shul'zhenko, V. S., О. I. Pisarenko, et al. Effect of gradual reperfusion on therestoration of the pump function and energy stores of the heart after ischemia. // Fiziol Zh (1991).- № 1. - 37. - P. 7-12.

198. Silberstein, C., R. Bouley, et al. Membrane organization and function of Mland M23 isoforms of aquaporin-4 in epithelial cells. // Am J Physiol Renal Physiol (2004).- № 3. - 287. - P. F501-11.

199. Simonis, G., S. P. Schoen, et al. Dual mechanism of auto regulation of proteinkinase С in myocardial ischemia. // Mol Cell Biochem (2007).- № 1-2. -295. - P. 121-8.

200. Simonis, G., C. Weinbrenner, et al. Ischemic preconditioning promotes a transient, but not sustained translocation of protein kinase С and sensitization of adenylyl cyclase. // Basic Res Cardiol (2003).- № 2. - 98. - P. 104-13.

201. Sipido, К. R., P. G. Volders, et al. Altered Na/Ca exchange activity in cardiachypertrophy and heart failure: a new target for therapy? // Cardiovasc Res -(2002).- № 4. 53. - P. 782-805.

202. Skyschally, A., R. Schulz, et al. Pathophysiology of Myocardial Infarction :

203. Protection by Ischemic Pre- and Postconditioning. // Herz (2008).- № 2. -33. - P. 88-100.

204. Smith, B. L., G. M. Preston, et al. Human red cell aquaporin CHIP. I. Molecular characterization of ABH and Colton blood group antigens. // J Clin Invest (1994).- № 3. - 94. - P. 1043-9.

205. Snigirevskaia, E. S. and I. Komissarchik. Aquaporins of plasma membranes ofepithelial cells., // Tsitologiia (1999).- № 10. - 41. - P. 864-70.

206. Solenkova, N. V., V. Solodushko, et al. Endogenous adenosine protects preconditioned heart during early minutes of reperfusion by activating Akt. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2006).- № 1. - 290. - P. H441-9.

207. Song, J., X. Q. Zhang, et al. Serine 68 of phospholemman is critical in modulation of contractility, Ca2-^i transients, and Na-t/Ca2+exchange in adult rat cardiac myocytes. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 5.-288. - P. H2342-54.

208. Song, L. S., S. Guatimosim, et al. Calcium biology of the transverse tubules inheart. // Ann N Y Acad Sci (2005).- № - 1047. - P. 99-111.

209. Sorbo, J. G., S. E. Мое, et al. The molecular composition of square arrays. //

210. Biochemistiy (2008).- № 8. - 47. - P. 2631-7.

211. Stagg, M. A., A. H. Malik, et al. The effects of overexpression of the Na4/Ca2 +exchanger on calcium regulation in hypertrophied mouse cardiac myocytes. // Cell Calcium (2004).- № 2. - 36. - P. 111-8.

212. Staat, P., G. Rioufol, et al. Postconditioning the human heart. // Circulation2005).- № 14. 112. - P. 2143-8.

213. Suleymanian, M. A. and С. M. Baumgarten. Osmotic gradient-induced waterpermeation across the sarcolemma of rabbit ventricular myocytes. // J Gen Physiol (1996).- № 4. - 107. - P. 503-14.

214. Sun, H. Y., N. P. Wang, et al. Hypoxic postconditioning reduces cardiomyocyte loss by inhibiting ROS generation and intracellular Ca2 + overload. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2005).- № 4. - 288. - P. H1900-8.

215. Takimoto, E., A. Yao, et al. Sodium calcium exchanger plays a key role inalteration of cardiac function in response to pressure overload. // Faseb J -(2002).-№3.-16.-P. 373-8.

216. Thomas, M. J., I. Sjaastad, et al. Localization and function of the Na-t/Ca2 -Ьexchanger in normal and detubulated rat cardiomyocytes. // J Mol Cell Cardiol (2003).- № 11. - 35. - P. 1325-37.

217. Timoshin, A. A., V. L. Lakomkin, et al. Effect of a series of brief cycles ofischemia and reperfusion on free radical centers of isolated rat myocardial tissue. // Biofizika (1998).- № 1. - 43. - P. 134-8.

218. Timoshin, A. A., V. L. Lakomkin, et al. Effect of ischemic preconditioning onfree radical centers of the isolated rat heart during ischemia and early reperfusion. // Biofizika (2000).- № 1. - 45. - P. 112-8.

219. Tsang, A., D. J. Hausenloy, et al. Postconditioning: a form of "modifiedreperfusion" protects the myocardium by activating the phosphatidylinositol 3-kinase-Akt pathway. // Circ Res (2004).- № 3. - 95. - P. 230-2.

220. Verkhratskii, A. N., N. F. Pronchuk, et al. Effect of reduced extracellular levelof sodium ions on the intracellular level of calcium ions in the cytoplasm of cultured rat cardiomyocytes. // Fiziol Zh (1989).- № 6. - 35. - P. 45-9.

221. Verkman, A. S. Physiological importance of aquaporins: lessons from knockout mice. // Curr Opin Nephrol Hypertens (2000).- № 5. - 9. - P. 517-22.

222. Verkman, A. S. and A. K. Mitra. Structure and function of aquaporin waterchannels. // Am J Physiol Renal Physiol (2000).- № 1. - 278. - P. F13-28.

223. Viatchenko-Karpinski, S., D. Terentyev, et al. Synergistic interactions between

224. Ca2 + entries through L-type Ca2 + channels and Na-t-Ca2+exchanger in normal and failing rat heart. // J Physiol (2005).- № Pt 2. - 567. - P. 493504.

225. Vinten-Johansen, J. Postconditioning: a mechanical maneuver that triggers biological and molecular cardioprotective responses to reperfusion. // Heart Fail Rev (2007).- № 3-4. - 12. - P. 235-44.

226. Wakayama, Y., T. Jimi, et al. Reduced aquaporin 4 expression in the muscleplasma membrane of patients with Duchenne muscular dystrophy. // Arch Neurol (2002).- № 3. - 59. - P. 431-7.

227. Wakayama, Y., J. Takahashi, et al. Generation of muscle aquaporin 4 overexpressing transgenic mouse: its characterization at RNA and protein levels including freeze-fracture study. // Micron (2007).- № 3. - 38. - P. 257-67.

228. Wakimoto, К., K. Kobayashi, et al. Targeted disruption of Na4/Ca2 + exchanger gene leads to cardiomyocyte apoptosis and defects in heartbeat. // J Biol Chem (2000).- № 47. - 275. - P. 36991-8.

229. Wang, J. К., С. C. Cui, et al. Heterogeneity of Na-I/Ca2+exchanger currentacross the left ventricular wall of rabbit. // Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban (2004).- № 4. - 35. - P. 496-9.

230. Wang, L., G. Cherednichenko, et al. Preconditioning limits mitochondrial

231. Ca(24) during ischemia in rat hearts: role of K(ATP) channels. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2001).- № 5. - 280. - P. H2321-8.

232. Warth, A., T. Eckle, et al. Upregulation of the water channel aquaporin-4 as apotential cause of postischemic cell swelling in a murine model of myocardial infarction. // Cardiology (2007).- № 4. - 107. - P. 402-10.

233. Watanabe, Y., Т. Iwamoto, et al. Effects of amiodarone on mutant Na4/Ca2 +exchangers expressed in CCL 39 cells. // Eur J Pharmacol (2004).- № 1-3. - 496. - P. 49-54.

234. Wolburg, H. Orthogonal arrays of intramembranous particles: a review withspecial reference to astrocytes. // J Hirnforsch (1995).- №2.-36. - P. 23958.

235. Wright, A. R. and S. A. Rees. Cardiac cell volume: crystal clear or murkywaters? A comparison with other cell types. // Pharmacol Ther (1998).- № 1.-80. - P. 89-121.

236. Xiao, Y. F., Q. Ke, et al. Inhibitory effect of n-3 fish oil fatty acids on cardiac

237. Na4/Ca2+ exchange currents in HEK293t cells. // Biochem Biophys Res Commun (2004).- № 1. - 321. - P. 116-23.

238. Xu, L., C. S. Kappler, et al. The role of p38 in the regulation of Na-bCa2 +exchanger expression in adult cardiomyocytes. // J Mol Cell Cardiol -(2005).- № 5. 38. - P. 735-43.

239. Xu, L., L. Renaud, et al. Regulation of Ncxl expression. Identification ofregulatory elements mediating cardiac-specific expression and up-regulation. // J Biol Chern (2006).- № 45. - 281. - P. 34430-40.

240. Yang, В., Т. Ma, et al. cDNA cloning, gene organization, and chromosomallocalization of a human mercurial insensitive water channel. Evidence for distinct transcriptional units. // J Biol Chem (1995).- № 39. - 270. - P. 22907-13.

241. Yang, F., Y. H. Liu, et al. Myocardial infarction and cardiac remodelling inmice. // Exp Physiol (2002).- № 5. - 87. - P. 547-55.

242. Yellon, D. M. and J. M. Downey. Preconditioning the myocardium: from cellular physiology to clinical cardiology. // Physiol Rev (2003).- № 4. -83. - P. 1113-51.

243. Yellon, D. M. and D. J. Hausenloy. Myocardial reperfusion injury. // N Engl J

244. Med (2007).-№ 11.-357. - P. 1121-35.

245. Yoshitomi, O., D. Akiyama, et al. Cardioprotective effects of KB-R7943, anovel inhibitor of Na 4/Ca2 + exchanger, on stunned myocardium in anesthetized dogs. // J Anesth (2005).- № 2. - 19. - P. 124-30.

246. Ytrehus, K., Y. Liu, et al. Preconditioning protects ischemic rabbit heart byprotein kinase С activation. // Am J Physiol (1994).- № 3 Pt 2. - 266. - P. HI 145-52.

247. Zatta, A. J., H. Kin, et al. Infarct-sparing effect of myocardial postconditioningis dependent on protein kinase С signalling. // Cardiovasc Res (2006).- № 2.-70. - P. 315-24.

248. Zhao, Z. Q., J. S. Corvera, et al. Inhibition of myocardial injury by ischemicpostconditioning during reperfusion: comparison with ischemic preconditioning. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (2003).- № 2. - 285. -P. H579-88.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии

Оглавление диссертации Рутковский, Аркадий Владимирович :: 2008 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Рутковский, Аркадий Владимирович, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль натрий-кальциевого обменника и аквапоринов в механизме защиты миокарда при ишемии-реперфузии"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Рутковский, Аркадий Владимирович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций