Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Роль мононуклеарных лейкоцитов в развитии гломерулосклероза при экспериментальных гломерулопатиях (регуляция клеточной пролиферации и продукции внеклеточного матрикса)

на правах рукописи

Л4

'Ч \

Б0Г0МА30ВА СВЕТЛАНА ЮРЬЕВНА

РОЛЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В РАЗВИТИИ ГЛ0МЕРУЛ0СКЛЕР03А ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ

ГЛОМЕРУЛОПАТИЯХ (РЕГУЛЯЦИЯ КЛЕТОЧНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ И ПРОДУКЦИИ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА)

(14.00.15.- патологическая анатомия)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1997

Работа выполнена в Московской Медицинской Академии имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор медицинских наук А.А.Иванов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ю.Л.Перов доктор медицинских наук, профессор А.Б.Шехтер

Ведущее учреждение - Институт морфологии человека РАМН

Защита состоится "_"_1997 года в_часов на заседак

диссертационного совета Д 074.05.05 при Московской Медицинской Академии им. И.М.Сеченова (119435, Москва, М.Трубецкая ул., д.8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им.И.М.Сечен (Зубовская площадь, д. 1).

Автореферат разослан "_"_1997 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук

профессор В.А.Варшавский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Механизмы повреждения структур почечного клубочка при гломерулонефритах и невоспалительных гломерулопатиях существенно различаются (Olson J.L. et al., 1988; Salant D.J., 1987). Тем не менее многие экспериментальные модели и морфологические формы хронического гломерулонефрита человека сопровождаются инфильтрацией почечного клубочка мононуклеарными лейкоцитами (МЛ) (Nahas El A.M., 1988). Использование моделей экспериментальных гломерулопатий с последующим получением культуры клеток почечного клубочка является одним из наиболее информативных методов исследования, позволяющим определить роль медиаторов, продуцируемых МЛ. Установлено, что ИЛ-1 и ФНОа, продуцируемые моноцитами, инициируют пролиферацию мезангиальных клеток (МК) в экспериментальных моделях гломерулонефрита (Diamond J.R. et al., 1991; Hoedemaeker P.l. et al., 1989). Использование различных приемов удаления МЛ (субтотальное облучение, антимоноцитарная сыворотка, метилпреднизолон) показали их ведущую роль не только в механизмах повреждения, но и клеточной репарации (Kovacs E.F., 1991). Моноциты являются источниками различных протеаз и основного фиброгенного фактора - ТФРр, регулирующего продукцию компонентов внеклеточного матрикса. Таким образом МЛ индуцируют накопление внеклеточного матрикса и способствуют его утилизации.

Однако, роль МЛ в каждом конкретном случае недостаточно определена, поскольку они способны продуцировать широкий спектр медиаторов, оказывающих как стимулирующее, так и супрессорное действие на различные клеточные процессы, в том числе на продукцию внеклеточного матрикса. Усиление синтеза компонентов экстрацеллюлярного матрикса и/или уменьшение их утилизации приводит к накоплению внеклеточного матрикса в почечном клубочке и, как следствие к гломерулосклерозу - исходу большинства заболеваний почечного клубочка (Sporn M.В.,1997).

Цель исследования. Изучить роль мононуклеарных лейкоцитов в развитии гломерулосклероза на экспериментальных моделях гломерулопатий с иммунными и неиммунными механизмами повреждения и сопоставить экспериментальные данные с морфологически близкими формами хронического гломерулонефрита человека.

Задачи исследования :

^Воспроизвести модель ускоренного нефротоксического нефрита и охарактеризовать медиаторы мононуклеарных лейкоцитов, регулирующие продукцию внеклеточного матрикса.

2.Охарактеризовать структуру внеклеточного матрикса в острой и хронической стадиях нефротоксического нефрита; выявить компоненты, усиливающие риск развития склероза.

3.Воспроизвести модель пуромицин-аминонуклеозидного нефроза и изучить медиаторы мононуклеарных лейкоцитов, регулирующие продукцию внеклеточного матрикса.

4.Дать оценку структуры внеклеточного матрикса в острой и хронической стадиях пуромицин-аминонуклеозидного нефроза; выявить компоненты, ведущие к развитию гломерулосклероза.

5.Сопоставить экспериментальные данные с морфологически близкими формами хронического гломерулонефрита человека.

Научная новизна - впервые продемонстрирована роль мононуклеарных лейкоцитов в регуляции накопления и деградации внеклеточного матрикса в экспериментальных гломерулопатиях, отражающих иммунные и неиммунные механизмы повреждения структур почечного клубочка; - подтверждено, что механизм повреждения определяет степень инфильтрации почечного клубочка, локализацию мононуклеарных лейкоцитов и спектр продуцируемых ими цитокинов; -впервые показано, что для нормальной регуляции метаболизма внеклеточного матрикса необходимо присутствие мононуклеарных лейкоцитов в зоне репарации. Отсутствие мононуклеарных лейкоцитов в зоне повреждения или их избыток могут вызывать извращенный синтез компонентов внеклеточного матрикса - появление интерстициальных коллагенов в мезангиальном матриксе, что усиливает риск развития склероза; - впервые отмечено, что при хронизации процесса, независимо от механизма первичного повреждения, в почечном клубочке появляются общие морфологические признаки склероза. Однако, скорость накопления внеклеточного матрикса и появление извращенного синтеза коллагена зависят от соотношения мононуклеарных лейкоцитов и мезангиальных клеток в почечном клубочке.

Практическая ценность. Экспериментальные данные и результаты морфологического исследования клинических биоптатов демонстрируют высокую

вероятность развития склероза у больных с выраженной инфильтрацией мезангия мононуклеарными лейкоцитами; - полученные данные свидетельствуют, что используемые методы лечения хронического гломерулонефрита являются часто неадекватными процессу, протекающему в почке. При выборе терапии больных хроническим гломерулонефритом следует учитывать данные исследования почечного биоптата; - экспериментальные данные о влиянии метилпреднизолона на мононуклеарные лейкоциты и регуляцию ими продукции внеклеточного матрикса могут служить показаниями для его использования при лечении хронического гломерулонефрита.

Реализация практических рекомендаций. Результаты исследований используются при лечении больных хроническим гломерулонефритом в клинике терапии и профзаболеваний ММА им.И.М.Сеченова и ряде нефрологических отделений г.Москвы, а также при чтении лекций на кафедре патологической анатомии ММА им.И.М.Сеченова

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 работы. Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедры патологической анатомии 1 л/ф и лаборатории клеточной и молекулярной патологии ММА им. И.М.Сеченова 19 июня 1997 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования и их обсуждения, заключения и выводов. Текст изложен на 96 стр. машинописного текста, иллюстрирован 5 таблицами и 36 рисунками, в том числе микрофотографиями и электроннограммами. Библиографический указатель включает 199 источников, из них 13 отечественных.

Положения, выносимые на защиту.

1 Инфильтрация почечных клубочков мононуклеарными лейкоцитами является характерной чертой острой стадии экспериментальных гломерулопатий с иммунными и неиммунными механизмами повреждения. Механизм повреждения определяет степень инфильтрации, локализацию мононуклеарных лейкоцитов в почечных клубочках и спектр продуцируемых ими цитокинов.

2.Метилпреднизолон предотвращает инфильтрацию почечных клубочков мононуклеарными лейкоцитами и вызывает изменения спектра продуцируемых цитокинов, что ведет к накоплению внеклеточного матрикса, усиливая риск развития склероза.

З.При хронизации экспериментальных гломерулопатий, независимо от механизма повреждения, в почечных клубочках появляются идентичные морфологические признаки развивающегося склероза.

¿.Особенности развития склероза в хронической стадии экспериментальных гломерулопатий с иммунным и неиммунным механизмами повреждения определяются наличием мононуклеарных лейкоцитов в зоне повреждения и спектром продуцируемых ими медиаторов.

5.Закономерности развития гломерулосклероза в эксперименте и в биоптатах почек больных хроническим гломерулонефритом свидетельствуют о ведущей роли мононуклеарных лейкоцитов в процессах повреждения и репарации гломерул.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Экспериментальные животные. В работе использованы 63 линейные крысы Wistar, самцы, весом 180-200г. Животные составили 7 групп: контрольная группа - 5 животных; острый НТН - 10 животных; острый НТН с МП - 8 животных; острый ПАН - 10 животных; острый ПАН с МП - 8 животных; хронический НТН - 10 животных; хронический ПАН - 10 животных.

Экспериментальные модели. Ускоренную модель нефротоксического нефрита (НТН) индуцировали путем преиммунизации нормальной кроличьей сывороткой с адъювантом Фрейнда и введением через 5 суток после преиммунизации нефротоксической сыворотки (НТС) из расчета 110мг/кг веса. Контрольным крысам вводили аналогичный объем физиологического раствора. Острую стадию НТН изучали на 14 сутки после введения НТС, на 40 сутки -хроническую стадию НТН. Для оценки почечной функции крыс помещали в метаболические клетки и собирали мочу за 24 часа до забоя. Исследование мочи проводили на анализаторе "Уротрон" (Boehringer, Австрия). Метилпреднизолон (МП) вводили внутриперитонеально ежедневно в дозе 14 мг/кг сразу после введения нефротоксической сыворотки и продолжали введение в течение развития острой стадии НТН. Луромицин-аминонуклеозидный нефроз (ПАН) индуцировали путем однократного внутривенного введения 5 мг/ЮОг пуромицин-аминонуклеозида (Sigma, США). Острую стадию ПАН изучали на 12-14 сутки, хроническую стадию - на 60-70 сутки. Для оценки почечной функции крыс помещали в метаболические клетки и собирали мочу за 24 часа до забоя. Мочу анализировали выше описанным

способом. МП вводили внутриперитонеально ежедневно в дозе 14 мг/кг сразу после введения пуромицин-аминонуклеозида

Культура гломерулярных клеток. Почечные клубочки выделяли при последовательном использовании медных сит с диаметром пор 110 мкм и 75 мкм. Полученная таким образом суспензия состояла на 90% из клубочков. Клубочки подвергали ферментативной обработке при 37°С и периодически встряхивали в течение 60 мин. до полного или частичного разрыхления ГБМ и разъединения клубочков на лобулярные фрагменты. Далее обработанные клубочки отмывали в буфере при 4°С и центрифугировали при 600-800 об/мин в течение 10 минут. Надосадочную жидкость удаляли, а клубочки ресуспензировали в 1 мл полной культуральной среды. Полная культуральная среда состояла из среды RPMI 1640 (Sigma, США), содержащей 20% эмбриональной телячьей сыворотки (Sigma, США) и содержала глютамин (2 мМ), пеницеллин (100 ед/мл), стрептомицин (100 мкг/мл). Для культивирования использовали 24-луночные плата (Coming, США). Культивирование проводили в СОг-инкубаторе при 37°С и 5% СОг в течение 2х недель. Контроль за ростом культуры осуществляли с помощью фазово-контрастной микроскопии каждые 2-3 дня. Оценка интенсивности пролиферации МК в культуре почек крыс определяли по интенсивности включения 3Н-тимидина в ДНК.

Морфологические исследования. Для светооптического исследования использовали полутонкие срезы и фиксированную охлажденным спиртом культуру МК. Полутонкие срезы и культуру мезангиальных окрашивали азуром 11-метиленовым синим-основным фуксином. Для электрономикроскопического исследования материал префиксировали в смеси глютаральдегида и параформальдегида по Карновскому, фиксировали OSO4, обезвоживали и заливали в аралдит по стандартной методике. Окрашенные уранилацетатом и цитратом свинца ультратонкие срезы просматривали под электронным микроскопом ЕМ 410 (Philips, Нидерланды ) и JEM 100В (Jeol, Япония). Для иммуногистохимического исследования использованы моноюганальные антитела к: Р-селектину (CD 62Р) и avßl-интегрину (Immunotech, Франция), коллагенам I, III, IV, V типов (Guartett, Германия), ламинину, тканевому и плазменному фибронектину, CD45R (Dako, Дания), тканевому ингибитору металлопротеиназ-1 (Pharmingen, США), биотинизированные вторичные антитела, стрептавидин-пероксидазу и вторичные антитела к Ig мыши и Ig кролика, меченные ФИТЦ (Dako, Дания). Использовали иммунопероксидазный (стрептоавидин-биотиновый) и иммунофлуоресцентный (непрямой) методы.

Иммуногистохимическое исследование проводили на криостатных срезах, толщиной 5 мкм и в лунках культуральных плат. Образцы фиксировали охлажденным ацетоном в течение 30 секунд и дальнейшую обработку проводили по стандартной методике. Результаты иммуногистохимического исследования оценивали полуколичественным методом.

Клинический материал. Для проведения сопоставления экспериментальных данных с результатами морфологических исследований биоптатов больных ХГН был использован архивный материал (с 1988 по 1995) и текущие биопсии, полученные из клиники терапии и профзаболеваний (зав. - чл.-корр. РАМН, проф. Мухин H.A.) и отдела нефрологии (зав. - чл.-корр. РАМН, проф. Тареева И.Е.). Всего в работе было проанализировано 25 биопсий больных, которые составили следующие группы: очаговый мезангио-пролиферативный гломерулонефрит (4), мезангио-пролиферативный гломерулонефрит, леченный преднизолоном в дозе 40-60 мг в сутки (5), мезангио-пролиферативный гломерулонефрит с начинающейся фибропластической трансформацией (5), минимальные изменения (липоидный нефроз) (1), минимальные изменения, леченные преднизолоном в дозе 40-75 мг в сутки (6), начинающийся фокально-сегментарный гиалиноз (4). Для корректного сопоставления экспериментальных данных с результатами исследования клинических биоптатов отбирались нелеченные больные со сроком течения всех форм ХГН не более 3-х месяцев, либо с длительностью лечения преднизолоном около 1 месяца в дозе 40-70 мг в сутки. Эти жесткие условия отбора ограничили группы морфологических вариантов ХГН и число наблюдений.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Острая стадия НТН и ПАН сопровождается инфильтрацией почечного клубочка МЛ, более выраженной при НТН. При светооптическом и электронномикроскопическом исследовании установлено, что свыше 90% МЛ имели признаки активированных моноцитов. Условия культивирования клеток почечного клубочка вызывали гибель единичных лимфоцитов. Таким образом в культуре клеток почечного клубочка МЛ представлены только активированными моноцитами и макрофагами.

Острая стадия нефротоксического нефрита. На 14 сутки НТН развивалась протеинурия - 600 мг белка в сутки. Почечные клубочки увеличены в размерах, капиллярные петли расширены. В просвете капиллярных петель

наблюдаются многочисленные МЛ, отложения фибрина, в отдельных капиллярных петлях - отслойка эндотелия. МЛ проникают под отслоившийся эндотелий, непосредственно контактируя с оголенной ГБМ. В базальной мембране отмечены участки истончения и утолщения за счет накопления мембраноподобного вещества в lamina rara extema. Зона мезангия увеличена за счет очаговой пролиферации МК, но не мезангиального матрикса. Морфологическая картина близка очаговому мезангио-пролиферативному гломерулонефриту человека. При иммуногистохимическом исследовании выявлено линейное отложение IgG кролика вдоль ГБМ, единичные субэндотелиальные депозиты, содержащие IgG крысы.

Культура гломерулярных клеток в острой стадии НТН представлена двумя популяциями клеток: МК и МЛ. В культуре отмечается выраженная пролиферативная активность МК. Пролиферативная активность МК при НТН коррелирует с большим количеством МЛ и повышением уровня ИЛ-ip, ФНОа на фоне понижения уровня ИЛ-1ра (рис.1). Понижение уровня ИЛ-1ра способствует повышению эффективности действия ИЛ-1, обеспечивающего, наряду с ФНОа, высокий уровень пролиферативной активности МК.

70л

23630

60'

■С

□мл

□ МК

контроль НТНостр. НТН+МП НТНхр.

Рис. 1. Пролиферация мезангиальных клеток (МК) в имп/мин. и количество мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) при нефротоксическом нефрите (НТН) в острой стадии, в острой стадии на фоне действия метилпреднизолона (МП) и в хронической стадии.

Рис.2. Продукция цитокинов мезангиальными клетками и мононуклеарными

лейкоцитами при нефротоксическом нефрите (НТН) в острую стадию, в острую стадию на фоне действия метилпреднизолона (МП) и в хроническую стадию.

Иммуногистохимическое исследование выявило активацию продукции компонентов ЭЦМ как in vivo, так и in vitro. В первую очередь увеличивается продукция ламинина, клеточно-ассоциированного фибронектина и коллагена IV типа.

Накопление ЭЦМ особенно выражено в культуре МК (таб.1).

компоненты внеклеточного матрикса контроль НТНостр. НТН+МП HTHxp.

in vivo ¡n vitro in vivo in vitro in vivo in vitro in vivo in vitro

коллаген I типа - - -+ - +- + +

III типа - +- - + + + +

IV типа ■1- ■h + ++ ++ + ++ +++

Утипа +- -+ + + ++ + + ++

ламинин + + ++ + ++ + ++ +

фибронектин (плазм.) - - + - + - + -

фибронектин (клет.) +- + + ++ ++ + + +++

ТИМП-1 -t" * + * + * ++ *

Табл.1 .Полуколичественный анализ распределения компонентов внеклеточного матрикса и экспрессии ингибитора металлопротеиназ (ТИМП-1) при НТН. Примечание: МП - метилпреднизолон, остр. - острая стадия, хр. - хроническая стадия; "-" - метка отсутствует; "-+" - слабая (в некоторых клубочках или ячейках культуральных плат); "+-" - слабая; "+" - четкая; "++" - усилена; "+++" - ярко выражена; "*" - не исследовали.

Острая стадия пуромицин-аминонуклеозидного нефроза. К 12

суткам ПАН развивалась протеинурия - 720-740 мг белка в сутки. При светооптическом исследовании ПАН существенные морфологические изменения практически отсутствуют. Лишь в ряде клубочков отмечено увеличение зоны мезангия. При электронномикроскопическом исследовании наблюдаются повреждения малых ножек подоцитов, выражающиеся в их сближении и слиянии, в результате чего подоциты как бы ложатся на ГБМ. В ряде капиллярных петель ножки подоцитов остаются волне сохранными. Базальная мембрана практически не изменена. В отличии от НТН, МЛ отсутствуют в просвете капиллярных петель. Отмечаются незначительные повреждения эндотелия и, в некоторых клубочках, слабая пролиферация МК. Иммуногистохимическое исследование с антителами к lgM,G,A и СЗ компоненту комплемента дало отрицательный результат. Данная морфологическая картина близка липоидному нефрозу человека, где также отмечается исчезновение малых ножек подоцитов и, как правило, отсутствие депозитов иммунных комплексов.

Культура гломерулярных клеток при ПАН представлена, как и в острой стадии НТН, двумя популяциями клеток: МК и МЛ. Появление в культуре МК при ПАН МЛ, на фоне их отсутствия в почечном клубочке, косвенно свидетельствует о том, что МЛ при ПАН являются составной частью популяции клеток мезангия.

Пролиферативная активность МК и количество МЛ в культуре намного ниже, чем в острой стадии НТН (рис.3). При ПАН пролиферативная активность поддерживается только относительно высоким уровнем ФНОа, основным продуцентом которого являются МЛ (рис.4). Уровень ИЛ-ф, в отличии от НТН, был ниже чем в контроле. Повышение уровня ИЛ-1ра свидетельствует о трансформации моноцитов в макрофаги в зоне мезангия (Sedor J.R. et al ., 1991).

Иммуногистохимическое исследование выявило активацию продукции компонентов ЭЦМ, особенно in vivo. В первую очередь увеличивается продукция ламинина и коллагена IV типа (табл.2). В отличии от НТН клеточно-ассоциированный фибронектин практически отсутствует, но увеличивается продукция плазменного фибронектина. Усиление отложения плазменного фибронектина является следствием цитотоксического действия пуромицин-аминонуклеозида на подоциты, в результате чего развивается плазматическое пропитывание зоны мезангия и ГБМ. Плазменный фибронектин служит хемоаттрактантом для МЛ и может способствовать их проникновению в мезангий. Клеточный фибронектин обеспечивает контроль

продукции цитокинов МК. Отсутствие клеточной формы фибронектина в острой стадии ПАН коррелирует с низким уровнем цитокинов (ИЛ-1а,[3, ТФРР).

35 30 25 20 15 10 5 0

461

1

1

1169 АЛ 1

1= 1

"7* 1

ОМА □МК

контроль ГТАНостр. ПАН+МП ПАНхр.

Рис. 3. Пролиферация мезангиальиых клеток (МК) в имп/мин. и количество

мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) при пуромицин- аминонуклеозидном нефрозе (ПАН) в острой стадии, в острой стадии на фоне действия метилпреднизолона (МП) и в хронической стадии.

котроль ПАНостр. ПАН+МП ПАНхр.

Рис.4. Продукция цитокинов мезангиальными клетками и мононуклеарными лейкоцитами при пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе (ПАН) в острую стадию, в острую стадию на фоне действия метилпреднизолона (МП) и в хроническую стадию.

Компоненты внеклеточного матрикса контроль ПАНостр. ПАН+МП ПАНхр.

in vivo in vitro in vivo in vitro in vivo in vitro in vivo in vitro

коллаген I типа -+ +- + +- - -+

III типа +- - +- + +- +-

IV типа + + ++ + ++ +- ++ +

V типа +- -+ +- +- +- +- + +

ламинин + + ++ ++ + +- ++ ++

фибронектин (плазм.) - - ++ - +- - +- -

фибронектин (клет.) +- + +- -+ +- - +- +

ТИМП-1 +- * + * + * + *

Табл.2. Полуколичественный анализ распределения компонентов внеклеточного

матрикса и экспрессии ингибитора металлопротеиназ (ТИМП-1) в почечном клубочке при ПАН.

Примечание: МП - метилпреднизолон, остр. - острая стадия, хр. - хроническая стадия; "-" - метка отсутствует; "-+" - слабая (в некоторых клубочках или ячейках культуральных плат);"+-" - слабая; "+" - четкая; "++" - усилена;"+++" - ярко выражена; "*" - не исследовали

В культуре МК, как при НТН, так и при ПАН повышается уровень TOPß -основного фиброгенного фактора (рис.2,4). Действие этого фактора объясняет накопление компонентов ЭЦМ как в почечном клубочке, так и в культуре МК. Несмотря на более высокий уровень ТФР(} in vitro при НТН, накопление ЭЦМ in vivo более выражено при ПАН. Очевидно продукция компонентов ЭЦМ на этой стадии НТН направлена в первую очередь на репарацию поврежденных мембран, то есть носит компенсаторный характер (Hoedemaeker P.l. et al., 1989), что обусловлено более тяжелым повреждением структур почечного клубочка в острой стадии НТН. В результате этого накопление ЭЦМ в почечном клубочке при НТН не выражено. Активная продукция компонентов ЭЦМ в культуре МК в острой стадии НТН косвенно подтверждает это предположение. Параллельно с повышением уровня TOPß усиливается экпрессия тканевого ингибитора металлопротеаз-1 (ТИМП-1) в почечных клубочках (табл.2), препятствующего процессу деградации ЭЦМ. Это свидетельствует о том, что накопление ЭЦМ происходит как за счет усиления синтеза ряда его компонентов, так и уменьшения их расщепления.

Степень инфильтрации почечного клубочка МЛ и уровень накопления ЭЦМ четко коррелирует с экспрессией адгезивных молекул (табл.3).

адгезивные контр. НТН НТН+ НТН ПАН ПАНЧ- ПАН

молекулы остр. МП хр. остр. МП хр.

CD-62P +- ++ +- + + - +-

avßl- + ++ + + ++ • +- +

интергин

Табл.3. Полуколичественный анализ экспрессии некоторых адгезивных .

молекул при экспериментальных гломерулопатиях. Примечание: НТН - нефротоксический нефрит; ПАН - пуромицин-аминонуклеозидный нефроз; МП - метилпреднизолон; остр. - острая стадия; хр. - хроническая стадия; "+-" - слабая; "+" - четкая; "++" - усиленная

Р-селектин - адгезивная молекула эндотелиальных клеток обычно экспрессируется не более 30 мин., обеспечивая первичный контакт ПЯЛ и МЛ с эндотелием. Длительная экспрессия Р-селектина наблюдается в очагах повреждения и поддерживается действием некоторых цитокинов, например ФНОа (Sporn М.В., 1997). Интересно, что, помимо эндотелиальных клеток, экспрессия Р-селектина при НТН и ПАН обнаружена в зоне мезангия, не имеющего прямого контакта с кровяным руслом. Роль Р-селектина в мезангии не ясна. Если при ПАН экспрессию Р-селектина на МК еще можно связать с проникновением МЛ в зону мезангия, то при НТН этот процесс отсутствует (Allard С. et al.,1992). Более низкий уровень экспрессии Р-селектина при ПАН очевидно компенсируется накоплением плазменного фибронектина в почечном клубочке, который выполняет роль хемоаттрактанта для МЛ. Иммуногистохимическое исследование с антителами к плазменной и клеточной формам фибронектина подтвердило это предположение (табл.2). Степень накопления фибронектина в клубочке коррелировала с экспрессией otvßl -интегрина - основного рецептора для фибронектина. При НТН клеточная форма фибронектина способствовала усилению продукции исследуемых цитокинов, в то время как плазменная форма фибронектина при ПАН не оказывала заметного влияния на продукцию этих цитокинов МК. Помимо этого, экспрессия avfH-интегрина коррелировала и со степенью накопления коллагена IV типа.

Острая стадия нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза на фоне введения метилпреднизолона. Введение МП подавляло экспрессию Р-селектина и avßl-интегрина в почечном

клубочке и, как следствие этого, инфильтрацию МЛ почечного клубочка как при НТН, так и ПАН. Слабая экспрессия Р-селектина в мезангии при отсутствии экспрессии Р-селектина на эндотелии капиллярных петель почечного клубочка свидетельствует, что в мезангии Р-селектин играет роль, не связанную с МЛ (табл.3). Уменьшение экспрессии avpi- интегрина на фоне усиления отложения коллагена IV типа, особенно при НТН, доказывает, что avpi- интегрин не играет рцли в адгезии МК к коллагену IV типа (Albelda S.M. et al., 1990). МП подавляет экспрессию и других адгезивных молекул, обеспечивающих контакт МЛ с эндотелием, например 1СДМ-1 (Roberts А.В. et al.. 1990).

Отсутствие МЛ при ПАН и их значительное уменьшение при НТН на фоне введения МП вызывало количественные и качественные изменения как в спектре продукции цитокинов, так и компонентов ЭЦМ.

При НТН и ПАН, на фоне введения МП, резко снижался уровень ФНОа и ТФРр. Это служит прямым доказательством, что основным продуцентом ФНОа и ТФРР являются МЛ. В то же время, при НТН, происходит усиление продукции ИЛ-1Р и снижение уровня ИЛ-pa, что должно стимулировать пролиферацию МК. Однако пролиферативная активность МК лишь немного выше, чем у интактных животных (рис.1). Это можно объяснить только тем, что МП, очевидно, вызывает интернализацию рецепторов для ИЛ-1 и продуцируемый ИЛ-ip не находит субстрата для связывания. Увеличение уровня ИЛ-ip на фоне уменьшения числа МЛ, вызванного действием МП, дает право предположить, что ИЛ-ip в острую стадию НТН продуцируется в основном МК.

При ПАН на фоне введения МП уровень ИЛ-1р слегка повышается, но остается ниже, чем в контроле (рис.4). Уровень ИЛ-1ра, в отличии от нефротоксического нефрита, также повышается. В результате пролиферативная активность МК значительно снижается (рис.3). Увеличение уровня продукции ИЛ-1 и ИЛ-1ра, при отсутствии МЛ, доказывает, что продуцентами этих цитокинов в острой стадии ПАН, как и при НТН, являются преимущественно МК. МП стимулирует продукцию ИЛ-1 и вызывает снижение уровня ТФРр в культуре МК как при НТН, так и при ПАН. Вследствие этого должна уменьшаться продукция компонентов ЭЦМ. Она действительно уменьшается, но только в культуре МК.

При иммуногистохимическом исследовании in vivo найдено усиление этложения компонентов ЭЦМ, особенно коллагена IV типа, в почечном клубочке [табл. 1,2). Кроме того, при ПАН, в почечном клубочке появляются атипичные

отложения коллагена I и III типов в мезангии. Подобный фиброгенный эффект очевидно обусловлен способностью Тфрр оказывать длиннодистанционное действие. В результате этого, ТФРР, продуцируемый МЛ и тромбоцитами за пределами почечного клубочка, способен индуцировать синтез компонентов ЭЦМ в клубочке.

При электронномикроскопическом исследовании острой стадии НТН и ПАН на фоне введения МП обнаружено существенное накопление мезангиального матрикса на фоне отсутствия МЛ. Единичные моноциты и лимфоциты встречаются только при НТН. При ПАН введение МП вызывало частичное восстановление ножек подоцитов, а при НТН - уменьшало отслойку эндотелия в капиллярных петлях почечных клубочков. В тоже время детальное исследование структуры мезангиального матрикса не выявило признаков интерстициальных коллагенов при ПАН, обнаруженных при иммуногистохимическом исследовании.

Уменьшение уровня Тфрр и продукции ЭЦМ в культуре МК в отсутствии МЛ позволяет предположить, что МЛ являются одним из основных источников ТФРр. В почечном клубочке, как при НТН, так и при ПАН, усиливается экспрессия ТИМП-1 (табл.1,2), что является косвенным подтверждением действия ТФРр. ТИМП-1 ингибируют утилизацию ЭЦМ, что способствует процессу его накопления. Полное отсутствие МЛ в зоне продукции ЭЦМ при ПАН на фоне действия МП приводит не только к накоплению ЭЦМ, но и вызывает процесс извращенного синтеза компонентов внеклеточного матрикса (по данным иммуногистохимического исследования), не характерных для почечного клубочка. В результате этого в почечном клубочке, в зоне мезангия, появляются интерстициальные коллагены I и III типов и усиливается риск развития гломерулосклероза. Очевидно, МЛ регулируют продукцию ЭЦМ и его утилизацию не только с помощью растворимых длиннодистанционных медиаторов, но и через прямой контакт, либо с помощью медиаторов, обладающих паракринным действием.

Хроническая стадия нефротоксического нефрита. При хронизации НТН и ПАН в почечных клубочках развиваются склеротические изменения. Протеинурия остается достаточно высокой - 350-400 мг белка в сутки. В хронической стадии НТН почечные клубочки увеличены в размерах, зона мезангия расширена как за счет его гиперклеточности (пролиферация МК и инфильтрация МЛ), так и накопления мезангиального матрикса. При электронномикроскопическом исследовании отмечено спадение отдельных капиллярных петель, участки утолщения

и истончения ГБМ. Участки истончения базальной мембраны сопровождаются отслойкой подоцитов. В мезангиальном матриксе появляются участки, содержащие фибриллярные структуры. Морфологическая картина близка мезангио-пролиферативному гломерулонефриту с фибропластической трансформацией у человека.

Инфильтрация почечного клубочка МЛ не только сохраняется, но и становится более выраженной, приобретая, в отличии от острой стадии, другую форму. Если в острой стадии почти все МЛ находились в просвете капиллярных петель, то в хронической стадии - в мезангии. Таким образом, отмечаемая гиперклеточность мезангия вызвана не только пролиферацией МК, но и инфильтрацией мезангия МЛ.

Исследования культуры МК подтверждают данные

электронномикроскопического исследования - число МЛ и уровень пролиферации УК в хронической стадии НТН значительно выше, чем острой стадии (рис.1). Изменение локализации МЛ приводило к изменению спектра продуцируемых дитокинов. В супернатанте культуры МК в хронической стадии НТН уровень ФНОа и /1Л-1ра ниже, чем в острой стадии, несмотря на большое число МЛ в культуре, /ровень ИЛ-ip повышался, что, совместно с снижением уровня ИЛ-1ра, и эбуславливало усиление пролиферативной активности МК (рис.2). Одновременно с «1Л-1Р повышался уровень ТфРр и экспрессия ТИМП-1, индуцирующие накопление ЭЦМ (табл. 2) и уменьшение его расщепления. Источником данных цитокинов могут :лужить как МЛ, так и МК. Уменьшение уровня ФНОа, основным источником соторого являются МЛ, позволяет предположить, что МЛ в мезангии активно 1родуцируют другие цитокины, в том числе ИЛ-1 [S и ТФРр.

Иммуногистохимическое исследование выявило активацию продукции :омпонентов ЭЦМ как in vivo, так и in vitro. В первую очередь увеличивается шкопление коллагена IV типа и клеточно-ассоциированного фиброненктина (табл.1). Томимо этого, в зоне мезангия почечных клубочков выявлены отложения жтерстициальных коллагенов I и III типов (табл.1). Увеличение накопления леточной формы фибронектина обеспечивает регуляцию продукции МК (сследуемых цитокинов (ИЛ-1 [} и ТФРР), что может быть одной из причин продукции жтерстициальных коллагенов.

Хроническая стадия пуромицин-аминонуклеозидного нефроза. 1ри ПАН в хронической стадии почечные клубочки слегка увеличены в размерах,

зона мезангия расширена преимущественно за счет накопления мезангиального матрикса. При злектронномикроскопическом исследовании выявлено спадение ряда капиллярных петель с накоплением в этих зонах ЭЦМ, в спавшихся капиллярных петлях отмечена гибель эндотелиальных клеток и отслойка подоцитов от ГБМ. Спадение капиллярных петель и отслойка подоцитов от базальной мембраны в хроническую стадию ПАН выражены гораздо интенсивнее, чем при НТН. В отдельных капиллярных петлях начинается формирование тромбов - появляются скопления тромбоцитов и выпадает фибрин. Подоциты частично восстанавливают свою структуру, но в ряде капиллярных петель малые ножки подоцитов отсутствуют и они распластываются на ГБМ. Развиваются морфологические изменения близкие фокально-сегментарному гломерулосклерозу у человека. Выраженная

пролиферация МК и МЛ в просвете капиллярных петель отсутствуют. Эти данные прямо коррелируют с результатами исследований в культуре МК.

Первичная культура гломерулярных клеток в хронической стадии ПАН представлена преимущественно МК и незначительным количеством МЛ. Количество МЛ уменьшается по сравнению с острой стадией и контролем (рис.3). Сопоставляя эти данные с результатами морфологического исследования ¡n vivo, можно заключить, что МЛ в хронической стадии ПАН, как и при НТН, локализованы только в мезангии. Однако их число, в отличии от хронической стадии НТН, значительно ниже. В результате этого, уровень всех цитокинов, за исключением ТФР|3, ниже, чем в контроле и острой стадии ПАН (рис.4). Уровень экспресии ТИМП-1 не изменялся по сравнению с острой стадией ПАН (табл.2). В результате этого пролиферативная активность МК ниже, чем в контрольной группе и накопление ЭЦМ не столь выраженно, как при хронической стадии НТН. По данным иммуногистохимического исследования накопление ЭЦМ ¡n vivo и ¡n viíro происходит преимущественно за счет коллагена IV типа и, частично, ламинина (табл.2). На основании этих данных можно предположить, что источником ТФРр в хронической стадии ПАН очевидно являются только МК.

Поскольку в хроническую стадию НТН и ПАН появляются общие морфологические признаки (спадение капиллярных петель, накопление мезангиального матрикса, отслойка подоцитов), можно предположить, что в хроническую стадию НТН основным источником ТФРр также являются МК, а не МЛ.

Если увеличение ЭЦМ при ПАН происходит преимущественно за счет коллагена IV типа, то при НТН, наряду с коллагеном IV типа, появляются атипичные

интерстициальные коллагены I и Ш типов (табл.1,2), усиливающие риск развития склероза. Подобный вариант развития гломерулосклероза напоминает фибропластическую трансформацию мезангио-пролиферативного и мезангио-капиллярного гломерулонефрита у человека.

Несмотря на интенсивную инфильтрацию почечного клубочка МЛ экспрессия Р-селектина и avpi-интегрина в хроническую стадию НТН ниже, чем в острую (табл.3). Очевидно эти адгезивные молекулы не играют в хронической стадии НТН значительной роли (AlbedaS.M., Buck С.А.,1990). Низкий уровень экспрессии этих молекул в хроническую стадию ПАН подтверждает это предположение.

Появление атипичных коллагенов на фоне интенсивной инфильтрации почечного клубочка МЛ свидетельствует о том, что избыток МЛ, как и их отсутствие в зоне повреждения, приводит к нарушению контроля за метаболизмом ЭЦМ (процессами синтеза и утилизации). Анализ супернатанта культуры МК при НТН позволяет предположить, что совместная продукция цитокинов однонаправленного действия МЛ и МК может способствовать извращенному синтезу компонентов экстрацеллюлярного матрикса и усиливать риск развития склероза (Tipping P.G. et al., 1985). Кроме того, нельзя исключить, что ведущая роль в регуляции ЭЦМ принадлежит не растворимым цитокинам длиннодистанционного действия, а мембраноассоциированным медиаторам. Это преположение может объяснить наличие МЛ в зонах повреждения и склероза.

Сопоставление экспериментальных данных с исследованием клинических биоптатов. Острая стадия НТН сопровождалась инфильтрацией капиллярных петель почечных клубочков МЛ, выраженной отслойкой эндотелия, очаговой пролифераций МК, отложениями мембраноподобного вещества в lamina гага externa, истончением lamina rara interna и характерным линейным отложением lg кролика вдоль ГБМ. При сопоставлении этих данных с морфологическими проявлениями очагового мезангио-пролиферативного гломерулонефрита отмечали отсутствие отслойки эндотелия, инфильтрацию капиллярных петель МЛ, очаговую пролиферацию МК. В отличии от острой стадии НТН инфильтрация капиллярных петель МЛ носила не столь выраженный характер. При мезангио-пролиферативном гломерулонефрите депозиты иммунных комплексов, содержащих lgG,A,M и СЗ, имели субэндотелиальную, парамезангиальную и мезангиальную локализацию, в отличии от линейного распределения lg вдоль ГБМ в острую стадию НТН. Таким образом сопоставление острой стадии НТН и очагового мезангио-пролиферативного

гломерулонефрита основано на общей морфологической картине, выражающейся инфильтрацией капиллярных петель почечных клубочков МЛ и пролиферацией МК (табл.4).

Острая стадия ПАН характеризовалась отсутствием МЛ в просвете капиллярных петель, слиянием и исчезновением малых ножек подоцитов, в результате чего подоциты распластывались на ГБМ. Отмечали очаговую пролиферация МК, деструкцию эндотелия капилляров почечных клубочков. Сопоставление этих данных с результатами исследования клинических биоптатов больных лмпоидным нефрозом показало, что при липоидном нефрозе, как и при ПАН исчезали малые ножки подоцитов, в результате чего подоциты "ложились" на ГБМ, наблюдалось утолщение ГБМ за счет lamina rara interna, аркадная формация на эндотелиальных клетках почечных клубочков, накопление липидов в интерстиции. Сопоставление острой стадии ПАН и липоидного нефроза человека основано на морфологической картине минимальных изменений в почечных клубочках, выражающихся преимущественно в исчезновении малых ножек подоцитов и сопровождающихся снижением заряда ГБМ и высоким уровнем протеинурии (Salant D.J. et al., 1987).

Введение МП в острую стадию НТН и ПАН вызывало расширение зоны мезангия за счет накопления мезангиального матрикса. При ПАН в мезангиальном матриксе, наряду с коллагеном IV типа, появлялись отложения интерстициальных коллагенов I и III типов, частично восстанавливалась структура малых ножек подоцитов. В НТН введение МП уменьшало отслойку эндотелия, пролиферацию МК. Использование предниэолона при мезангио-пролиферативном гломерулонефрите и липоидном нефрозе вызывало накопление мезангиального матрикса, уменьшение инфильтрации почечного клубочка при мезангио-пролиферативном гломерулонефрите и частичное восстановление малых ножек подоцитов при липоидном нефрозе. Несмотря на лечение преднизолоном, в отличии от эксперимента, гиперклеточность мезангия сохранялась. Накопление интерстициальных коллагенов в зоне мезангия при липоидном нефрозе не обнаружено ни при иммуногистохимическом, ни при электронномикроскопическом исследовании. Сопоставление результатов исследования экспериментальных моделей с данными изучения клинических биоптатов выявило усиление накопления мезангиального матрикса, индуцированное введением МП. у животных и преднизолона у человека (табл.4). Накопление мезангиального матрикса отмечено

при экспериментальных гломерулопатиях и различных морфологических формах ХГН, независимо от иммунной или неиммунной природы механизма повреждения структур почечных клубочков.

Таблица 4. Общие и индивидуальные черты экспериментальных гломерулопатий и

морфологически близких ва риантов ХГН.

НТН острая стадия очаговый МПГН

отслойка эндотелия, контакт МЛ с оголенной ГБМ, отложение мембраноподобного вещества в lamina rara externa, истончение lamina rara interna, линейный характер свечения при иммунофлуоресцентной микроскопии отслойка эндотелия отсутствует, очаговое утолщение ГБМ за счет lamina rara interna, субэндотелиальные и мезангиальные депозиты иммунных комплексов, содержащие IgG, М, А, СЗ, гранулярно-комковатый характер свечения

инфильтрация капиллярных петель почечных клубочков МЛ, пролиферация МК

ПАН острая стадия липоидный нефроз

деструкция эндотелиальных клеток утолщение ГБМ за счет lamina rara interna, аркадная формация на эндотелиальных клетках, накопление липидов в интерстиции

очаговая пролиферация МК, слияние малых ножек подоцитов, распластывание пОдоцитов на ГБМ

нтн+мп очаг. МПГН +МП

отслойка эндотелия в единичных капиллярных петлях пролиферация МК

накопление мезангиального матрикса, отсутствие МЛ, утолщение ГБМ

ПАН+МП липоидный нефроз + МП

интерстициальные коллагены в мезангии накопление липидов в интерстиции, утолщение ГБМ за счет lamina rara interna

накопление мезангиального матрикса

НТН хроническая стадия МПГН+ФТ

истончение ГБМ в отдельных капиллярных петлях, частичная отслойка подоцитов утолщение ГБМ, субэндотелиальные и мезангиальные депозиты иммунных комплексов, содержащие lqG,C3

инфильтрация зоны мезангия МЛ, пролиферация МК, спадение капиллярных петель, накопление мезангиального матрикса, интерстициальные коллагены в мезангии

ПАН хроническая стадия начинающийся ФСГС

отслойка подоцитов от ГБМ аркадная формация на эндотелиальных клетках, вакуолизация и липидизация подоцитов, виллезная трансформация, утолщение ГБМ счет lamina rara interna

спадение капиллярных петель, накопление мезангиального матрикса, выпадение фибрина и начало формирования тромба, появление зон фокального склероза

Хроническая стадия НТН характеризовалась расширением зоны мезангия за счет пролиферации МК, инфильтрации МЛ и накопления мезангиального

матрикса с появлением в нем интерстициальных коллагенов I и III типа. Отмечалос спадение ряда капиллярных петель, отслойка подоцитов в зонах истончения TEN При сопоставлении этих данных с результатами исследования клиническк биоптатов нелеченных больных с мезангио-пролиферативным гломерулонефритом фибропластической трансформацией выявлена сходная картина: зона мезангк расширена за счет пролиферации МК, инфильтрации МЛ и накоплена мезангиального матрикса. В мезангиальном матриксе обнаружены фибриллярны структуры с признаками интерстициальных коллагенов (в 2-х случаях из 5 Отмечается частичное спадение капиллярных петель, утолщение ГБМ, деструкцу подоцитов (повышение липидизации и вакуолизации).

Таким образом, при сопоставлении хронической стадии НТН с мезангио-пролиферативным гломерулонефритом с начинающейся фибропластическо трансформацией выявлены общие морфологические признаки: спадени капиллярных петель, пролиферация МК, инфильтрация мезангия МЛ, накоплени мезангиального матрикса, появление в нем интерстициальных коллагенов (табл.4 Появление атипичных коллагенов в зоне развития склероза как в эксперименте, тг и в клинике, коррелирует с инфильтрацией зоны повреждения МЛ. Эти данны позволяют предположить, что МЛ играют важную роль в регуляции синтеза утилизации внеклеточного матрикса. Важно отметить, что решающую роль в это регуляции очевидно играет не продукция МЛ тех или иных растворимых медиаторо! а количество МЛ в зоне повреждения, имеющих на поверхности клеток мембране ассоциированные медиаторы, контролирующих метаболизм внеклеточного матрикс;

Хроническая стадия ПАН характеризовалась выраженной отслойкс подоцитов и гибелью эндотелиальных клеток в зонах спадения капиллярных петел! накоплением мезангиального матрикса, выпадением фибрина в просвет капиллярных петель, началом формирования тромбов и зон развития фокальног склероза. При сопоставлении этих данных с результатами исследования клинически биоптатов нелеченных больных с начинающимся фокально-сегментарны гломерулосклерозом выявлено спадение ряда капиллярных петель с накоплением этих зонах мезангиального матрикса, слабая пролиферацию МК, утолщение ГБМ з счет lamina гага interna, аркадная формация эндотелия, виллезная трансформаци подоцитов. Инфильтрация почечного клубочка МЛ отсутствовала. В отдельнь капиллярных петлях появлялись признаки формирования тромбов - скоплени

тромбоцитов и выпадение фибрина. В отличии от эксперимента выраженная отслойка подоцитов от ГБМ отсутствовала.

Таким образом, при сопоставлении хронической стадии ПАН с начинающимся фокально-сегментарным гломерулосклерозом человека выявлены общие морфологические признаки: спадение капиллярных петель, накопление мезангиального матрикса, выпадение фибрина с образованием тромбов и зон фокального склероза (табл.4). Как в эксперименте, так и при исследовании клинических биоптатов отмечали единичные МЛ в зонах развития склероза.

Сопоставление экспериментальных данных с результатами исследования морфологически близких вариантов ХГН свидетельствует о ведущей роли МЛ в процессах повреждения и репарации гломерул.

ВЫВОДЫ.

1.Иммунные (нефротоксический нефрит) и неиммунные (пуромицин-аминонуклеозидный нефроз) повреждения гломерулярных структур сопровождаются инфильтрацией почечных клубочков мононуклеарными лейкоцитами. Степень инфильтрации почечных клубочков мононуклеарными лейкоцитами при нефротоксическом нефрите значительно выше, чем при пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе.

2.Мононуклеарные лейкоциты, в зависимости от локализации в почечных клубочках, продуцируют различный спектр цитокинов, регулирующих продукцию экстрацеллюлярного матрикса. Мононуклеарные лейкоциты, локализованные в просвете капиллярных петель (при нефротоксическом нефрите) продуцируют - ИЛ-1(3, ФНОа и ТФР[5, в то время как мононуклеарные лейкоциты, локализованные в мезангии (при пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе) - ИЛ-1ра', ФНОа и ТФРр.

3.Уменьшение количества мононукпеарных лейкоцитов в зоне повреждения, индуцированное метилпреднизолоном, приводит к изменению спектра продукции цитокинов и увеличению мезангиального матрикса за счет коллагена IV типа в обоих типах гломерулопатий. Отсутствие мононуклеарных лейкоцитов при пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе вызывает появление в мезангии, наряду с коллагеном IV типа, интерстициальных коллагенов I и III типа, усиливая риск развития склероза.

4.При хронизации процесса при нефротоксическом нефрите и пуромицин-аминонуклеозидном нефрозе появляются общие морфологические признаки склероза: спадение капиллярных петель, накопление мезангиального матрикса,

отслойка подоцитов от базальной мембраны в области спадения капиллярных петель.

5.Хроническая стадия нефротоксического нефрита и пуромицин-аминонуклеозидного нефроза сопровождаются выраженным накоплением мезангиального матрикса за счет коллагена IV типа и ламинина. Хроническая стадия нефротоксического нефрита, в отличии от хронической стадии пуромицин-аминонуклеозидного нефроза, сопровождается выраженной гиперклеточностью мезангия за счет пролиферации мезангиальных клеток и инфильтрации его мононуклеарными лейкоцитами. Избыток мононуклеарных лейкоцитов в мезангии приводит к появлению в мезангиальном матриксе, интерстициальных коллагенов I и III типа, усиливая риск развития склероза.

6.Сопоставление экспериментальных данных с результатами исследований клинических биоптатов показало, что в ряде случаев мезангио-пролиферативного гломерулонефрита с фибропластической трансформацией, как и в хронической стадии нефротоксического нефрита, избыток мононуклеарных лейкоцитов в мезангии приводил к появлению в мезангиальном матриксе, наряду с коллагеном IV типа, интерстициальных коллагенов.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОБУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Богомазова С.Ю., Гладских О.П., Иванов А.А. Структура внеклеточного матрикса при иммунных и неиммунных повреждениях структур почечного клубочка. // В сб. тезисов 1 съезда МСАП, 03-06 октября 1995 г., Москва, 1995, стр.23. 2.lvanov A., Bogomazova S., Gladskikh О. et al. Role of mononuclear leukocytes in

glomerulosclerosis. // Path.Int.,vol.46, suppll.1,1996, 691. 3.Paltsev M.,Bogomazova S..Gladskikh O. et al. Relationship of plasma and tissue fibronectin in the development of glomerulosclerosis. // Path.lnt, vol.46, suppl.1,1996, 723.