Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль клеток фагоцитарного ряда в патогенезе миомы матки

□03453904

На правах рукописи

Соснина Анна Евгеньевна

РОЛЬ КЛЕТОК ФАГОЦИТАРНОГО РЯДА В ПАТОГЕНЕЗЕ МИОМЫ МАТКИ

14.00.36. - аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

"О

и

Москва-2008

003453904

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Научный руководитель:

Заслуженный врач РФ,

доктор медицинских наук, профессор Наталья Юрьевна

Сотникова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Марина Александровна

Стенина

Российский государственный медицинский университет

доктор медицинских наук, профессор Людмила Ивановна Краснопрошина

ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Ведущая организация:

ФГУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени В.И.Кулакова-Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Защита диссертации состоится «/5>> Я^К-СМиХ- 200

в ■{Ь.С01асов на заседании диссертационного совета Д 208.072.05

при ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке

ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д. 1.

Автореферат разослан « тГ » Я-СШЙ- 200 Ь г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Т.Е. Кузнецова

Актуальность темы исследования

Миома матки - доброкачественная гормонально-зависимая опухоль, развивающаяся в миометрии в результате гипертрофии и пролиферации элементов мышечной и соединительной ткани [Вихляева Е.М., 1997; Савицкий Г. А., Савицкий А. Г., 2000; Сидорова И.С., 2002]. Миома матки традиционно считается наиболее распространенным гинекологическим заболеванием, частота встречаемости которого среди женщин старше 35 лет колеблется по данным разных авторов от 25% до 50% [Савицкий Г. А., Савицкий А. Г., 2000; Тихомиров А.Л., 2006; Sozen I., е.а., 2002; Flake G.P., е.а., 2003; Miura S., е.а., 2006]. Миома матки оказывает отрицательное влияние на менструальную и репродуктивную функции, общее состояние здоровья женщины [Flake G.P., е.а., 2003; Miura S., е.а., 2006].

Патогенез миомы матки до конца не установлен. Исследованиями последних лет показано, что развитие миомы матки ассоциировано со значительными иммунными нарушениями [Колганова И.А., 2006; Малышкина А.И., 2006; Корниенко Е.Б., с соавт., 2007; Сотникова Н.Ю., 2008; Hiycek А., е.а., 2000]. Установлено, что развитие миомы матки и ее рост сопровождаются выраженным повышением уровня ряда провоспалительных цитокинов и факторов роста в ткани самой миомы [Sozen I., е.а., 2002; Dixon D., е.а., 2002; Wolanska M., е.а., 2004]. Фагоциты являются основными продуцентами провоспалительных цитокинов [Ковальчук JI.B. с соавт, 2001]. Однако нет данных о том, в какой мере меняется продукция цитокинов фагоцитами при миоме матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.

Известно, что фагоцитарные клетки играют важную роль в поддержании клеточного гомеостаза и противоопухолевой защите, участвуя в регуляции процессов ангиогенеза, регенерации, дифференцировки и клеточной пролиферации [Wu R., е.а., 2004; Gordon I.O., 2006; Van Ginderachter J.A., 2008]. Имеющиеся работы свидетельствуют о значительных нарушениях экспрессии различного рода рецепторов и цитокинового профиля фагоцитов

при опухолевом росте [Sica А., е.а., 2007; Van Ginderachter J.A., 2008; Allavena Р., е.а., 2008; Ono M., 2008; Marconi С., е.а., 2008]. Получены данные, свидетельствующие о вовлечении toll-like рецепторов (TLR) в регуляцию фагоцитарными клетками опухолевого роста [West J., е.а., 2007; Allhorn S., е.а., 2008]. Так, по литературным данным экспрессия TLR3 и TLR4 связана с ростом аденокарциномы [Allhom S., е.а., 2008]. Известно, что этот класс рецепторов является мощным индуктором адаптивного иммунитета, проводит сигнал в клетку, запуская цитокиновый каскад при взаимодействии со своими специфическими лигандами [Симбирцев А.С., 2004; Ковальчук J1.B., с соавт., 2005; Akira S., 2003]. Однако отсутствуют данные о взаимосвязи между характером экспрессии TLRs, продукции цитокинов фагоцитарными клетками и ростом миомы матки.

Таким образом, определение роли фагоцитов в механизмах развития доброкачественного опухолевого роста у женщин с миомой матки является актуальной задачей современной клинической иммунологии, так как позволит уточнить иммунные механизмы, участвующие в развитии противоопухолевого ответа.

Цель исследования

На основании определения особенностей фенотипа и цитокинового профиля фагоцитов на системном и локальном уровне у женщин с миомой матки стабильно малых размеров и с быстрорастущей миомой матки, уточнить роль клеток фагоцитарного ряда в иммунных механизмах, определяющих темп и тип роста опухоли.

Задачи исследования

1. Установить закономерности изменения фенотипа клеток фагоцитарного ряда на системном и локальном уровне при миоме матки в зависимости от темпа и морфологического типа роста опухоли.

2. Определить особенности экспрессии сигнальных молекул ТЫ1-2 и ТЬЯ-4 на поверхности клеток фагоцитарного ряда у женщин с миомой матки с различным темпом и типом роста опухоли.

3. Выявить особенности синтеза и продукции синтеза цитокинов (1Ь-1р, 1Ь-12, ЮТу, 1Ь-8, 1Ь-10) фагоцитами периферической крови и эндометрия у женщин с миомой матки, в зависимости от темпа и типа роста опухоли.

4. Определить особенности содержания ряда цитокинов и уровень экспрессии генов цитокинов в миоматозных узлах у женщин с быстрорастущей миомой матки, в зависимости от типа роста опухоли.

5. На основании выявленных особенностей клеток фагоцитарного ряда женщин с миомой матки разработать иммунологические критерии темпа роста опухоли.

Научная новизна

Установлено, что миома матки вне зависимости от темпа роста опухоли характеризуются повышенным содержанием 1Ь-10+ моноцитов/макрофагов и ТТЛ14+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии и сниженным уровнем моноцитов, экспрессирующих НЬЛ-ОИ., СОНЬ и СО 16 молекулы.

Показано, что быстрый рост миомы матки происходит на фоне снижения уровня СБ11Ь+ макрофагов в эндометрии, увеличении количества фагоцитов крови и эндометрия, продуцирующих внутриклеточно провоспалительные цитокины, и повышенной экспрессии мРНК 1Ь-8 в ткани эндометрия.

Установлено, что нерастущая миома матки характеризуется высоким уровнем СБ 16+ и низким - НЬА-1Ж+ макрофагов в эндометрии, а также снижением уровня 1Ь-1р+ и 1Ь-8+ фагоцитов как на системном, так и на локальном уровне.

Показано, что отличительной чертой «истинного» типа роста миомы матки за счет усиления пролиферации является высокое содержание СБ 105+

нейтрофилов в периферической крови, а «ложного» типа роста за счет отека -низкое содержание СБ 105+ моноцитов, а также высокий уровень эндометриальных 1№у+ и 1Ь-12+ макрофагов, повышенное содержание 11,-8 и МСР-1 в экстрактах эндометрия при усиленной экспрессии мРНК 1Ь-8 в эндометрии.

Установлено, что в миоматозных узлах больших размеров отмечается высокое содержание 1Ь-1р и 1Ь-8 и усиленная экспрессия мРНК 1Ь-8 по сравнению с неизмененным миометрием; при «истинном» типе роста миомы матки характерно высокое содержание 1Ь-1р, 1Ь-8, МСР-1 в миоматозном узле и высокий уровень экспрессии мРНК 1Ь-8 в ткани опухоли, а при «ложном» -низкое содержание 1Ь-8 и м-РНК 11,-8 в ткани миоматозного узла.

Выявлены закономерности изменения содержания моноцитов, продуцирующих 1Ь-8, в зависимости от темпа роста миомы матки, на основании чего предложен новый прогностический критерий быстрого роста миомы матки.

Практическая значимость

Установлены новые патогенетические механизмы развития миомы матки, определяющие темп и тип ее роста.

Установлены новые иммунологические критерии, позволяющие оценить темп и тип роста миомы матки.

Разработан новый способ прогнозирования быстрого темпа роста опухоли, основанный на определении в периферической венозной крови содержания 1Ь8+ моноцитов (положительное решение о выдаче патента РФ от 15.05.2008 г.).

Реализация результатов работы

Результаты диссертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники и консультативно-диагностической поликлиники ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства

б

им. В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи».

Апробация работы

Диссертация прошла апробацию на совместной конференции сотрудников ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» 23 июня 2008 года. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2006» (Иваново, 2006), на X Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2007» в рамках областного фестиваля «Молодая наука - развитию Ивановской области (Иваново, 2007), на 2-й Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007), в областном конкурсе научных работ среди молодых ученых в номинации «Естественные науки» (Иваново, 2007); на XI Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007); в научных чтениях, посвященных памяти академика В.И. Кулакова (Москва, 2008), на конференции ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Росмедтехнологий» (Иваново, 2008), на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту

Развитие доброкачественной опухоли в миометрии ассоциировано с увеличением периферического и эндометриального пула М2 моноцитов/макрофагов при нарушении экспрессии на поверхности фагоцитов функциональных и сигнальных молекул. Быстрый рост миомы матки связан с усилением продукции цитокинов фагоцитами крови и эндометрия, определяющим повышение содержания провоспалительных цитокинов в

ткани опухоли. Пролиферативный тип роста миомы матки определяется высоким уровнем периферических нейтрофилов, экспрессиругощих эндоглип, и высокой локальной продукцией провоспалительных цитокинов в миоматозных узлах.

Повышение количества 1Ь8+ моноцитов в периферической крови ассоциируется с быстрым ростом миомы матки.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 13 печатных работ

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 105 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 22 таблицами. Список литературы включает 43 работы отечественных и 87 публикаций иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова Росмедтехнологий» (директор - Заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., проф. Л.В. Посисеева). Обследование больных осуществлялось в 1 гинекологическом отделении (зав. отделением - к.м.н. И.А.Колганова), исследования проводились в лаборатории клинической иммунологии (зав. лабораторией - Заслуженный врач РФ, д.м.н., проф. Н.Ю. Сотникова).

Всего было обследовано 110 женщин: 1. 25 женщин имели миому матки стабильно малых размеров (общие размеры матки не превышали 9-недельного срока беременности и в течение предшествующего года наблюдения не было отмечено роста опухоли) -первая клиническая группа;

2. 50 женщин имели быстрорастущую миому (общие размеры матки 12 недель и более и темпом роста 4-5 недель беременности и более за год наблюдения) - вторая клиническая группа;

3. 35 женщин, не имеющих гинекологической патологии на момент обследования, обратившихся в клинику для введения внутриматочных спиралей — контрольная группа.

В зависимости от типа опухолевого роста были сформированы 2 подгруппы:

1) 25 женщин с «истинным» типом роста опухоли (увеличение размеров миомы матки происходило преимущественно за счет усиления процессов клеточной пролиферации);

2) 21 женщина с «ложным» типом роста опухоли (увеличение размеров

миомы матки происходило преимущественно за счет отека миоматозных узлов).

Материалом для исследования служили: периферическая венозная кровь, биоптаты эндометрия, миометрия и миоматозных узлов.

Выделение обогащенный популяций мононуклеарных и гранулоцитарных клеток из периферической крови осуществляли стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-урографина (d=l,078, d= 1,114) (Upsala, Sweden). Мононуклеарные клетки из эндометрия выделяли безферментативным механическим методом [Chemyshov V.P., 1993].

Поверхностный фенотип и цитокиновый профиль моноцитов, нейтрофилов периферической крови и макрофагов эндометрия определяли с помощью моноклональных антител методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickincon, USA) с использованием программы «LYSYS II». При определении внутриклеточной продукции цитокинов фагоцитами предварительно проводили

пермеабилизацию их клеточной мембраны с помощью набора FIX & PERM (CALTAG Laboratories, USA).

Таблица 1.

Панель мАТ, использованных в исследовании_

№ п/п мАТ Фирма-производитель Флюорохромная метка

1. aiiTH-CD16 ООО «Сорбент», Москва FITC

2. анти-CDllb ООО «Сорбент», Москва FITC

3. анти-HLA-DR ООО «Сорбент», Москва PE

4. анти-СБ45 ООО «Сорбент», Москва FITC

5. анти-CDM ООО «Сорбент», Москва PE

6. aimt-TLR2 CALTAG Laboratories, USA FITC

7. aHTH-TLR4 CALTAG Laboratories, USA FITC

8. анти-СБ105 CALTAG Laboratories, USA PE

9. анти-IFNy CALTAG Laboratories, USA FITC

10. анти-IL-lO CALTAG Laboratories, USA PE

11. анти-1Ь-12 CALTAG Laboratories, USA PE

12. анти-IL-ip R&D, USA PE

13. анти-1Ь-8 R&D, USA PE

14. Мышиные IgGl Becton Dickinson, USA FIFC

15. Мышиные IgG2a Becton Dickinson, USA PE

FITC - флюоресцеинизотоицианат РЕ - фикоэритрин

В экстрактах эндометрия, миометрия, миоматозных узлов определяли концентрацию провоспалительных цитокинов IL-ip, МСР-1, IL-8 методом ИФА на микроплашетном ридере «Multiscan ЕХ» (Labsystetems, Finland). Тканевые экстракты получали путем 3-х кратного замораживания и размораживания измельченных образцов ткани в равном объеме фосфатного буфера [Фримель Г., 1987]. Концентрацию цитокинов определяли с помощью

тест-систем, характеристика которых представлена в таблице 2.

Таблица 2.

_Характеристика тест-систем для ИФА, использованных в работе_

Исследуемый показатель Фирма-производитель Чувствительность системы

IL-ip ООО «Цитокин», Россия > 6,3 пг/мл

IL-8 ООО «Цитокин», Россия > 9,8 пг/мл

MCP-1 BioSource International, США >1,7 пг/мл

Для количественной оценки экспрессии мРНК в ткани эндометрия, миометрия и миоматозных узлов использовали метод RT-PCR в режиме реального времени. Процедуру выделения тотальной РНК из ткани эндометрия проводили стандартным гуанидин-тиоцианат-фенол-хлороформным методом [Velden van V.H.J., е.а., 2003]. РНК переводили в комплементарную кДНК, используя коммерческий набор реагентов Онкоскрин RT (ООО «Генотехнология», Гематологический научный центр РАМН, лаборатория генной инженерии, Москва, Россия). Для оценки экспрессии в ткани эндометрия мРНК р2-микроглобулина и IL-8 использовались наборы праймеров, зондов и реагентов производства ООО «Генотехнология». ПЦР-амплификацию в режиме реального времени проводили на амплификаторе с оптической насадкой ¡Cycler iQ (BIO RAD, USA). Для определения количества копий пар кДНК в исследуемых образцах строили калибровочную кривую для р2-микроглобулина и IL-8 с использованием серии десятикратных разведений образцов контрольной кДНК и рассчитывали нормализованного значения количества копий гена IL-8. Полученные результаты представлены как нормализованное количество копий в образце х 104 на мкл.

Статистическая обработка данных проводилась с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического с использование программных компонентов пакета MS Office 2005. Достоверность различий показателей женщин с миомой матки по сравнению с контрольной группой определялась по t-критерию Стьюдента.

Результаты работы и их обсуждение

Для определения роли фагоцитарных клеток в механизмах, определяющих темп и тип роста миомы матки, нами была проведена оценка особенностей фенотипа и цитокинового профиля фагоцитарных клеток на системном и локальном уровнях в периферической крови и эндометрии пациенток с данным заболеванием.

Анализ данных, характеризующих экспрессию функциональных молекул фагоцитами, показал, что, независимо от темпа и типа роста опухоли, в периферической крови женщин с миомой матки отмечалось достоверное снижение уровня HLA-DR+, CDllb+ и CD16+ моноцитов по сравнению с аналогичными показателями у здоровых женщин (р<0,001 во всех случаях) (см. приложение).

Известно, что эти функциональные молекулы определяют участие фагоцитов в осуществлении цитотоксических реакций и фагоцитоза. Имеющиеся литературные данные свидетельствуют о непосредственном вовлечении этих рецепторов в осуществление противоопухолевого ответа фагоцитами. Показано, что опухолевая инвазия ассоциируется со снижением экспрессии МНС AT II класса клетками иммунной системы [Foukas P.G., е.а., 2001] и с угнетением реакций антитело-зависимой клеточной цитотоксичности, опосредованной CD 16+ моноцитами/макрофагами [Gordon I.O., Freedman R.S., 2006]. Вероятно, снижение экспрессии функциональных молекул периферическими моноцитами является одним из механизмов, определяющих нарушение противоопухолевой защиты и способствующих формирования доброкачественной опухоли в миометрии.

Изменения экспрессии сигнальных молекул TLR2 и TLR4, независимо от темпа роста опухоли, имели одинаковую направленность как у женщин с миомой матки стабильно малых размеров, так и у женщин с быстрорастущей миомой матки. Уровень периферических моноцитов и нейтрофилов, а также эндометриальных макрофагов, экспрессирующих на своей поверхности TLR4 молекулы был значительно повышен относительно показателей контрольной группы как у женщин со стабильно малой миомой (р<0,02, р<0,005 и р<0,001 соответственно), так и у женщин с быстрорастущей миомой матки (р<0,01, р<0,01 и р<0,05 соответственно). При этом мы не выявили каких-либо изменений экспрессии TLR2 молекул фагоцитами крови и эндометрия у женщин с миомой матки (р>0,05 во всех случаях).

Известно, что TLR4 молекулы определяют ответ фагоцитов на бактериальные токсины [Jiang D., е.а., 2006]. В последнее время было выдвинуто предположение, что в развитии миомы матки важную роль играет инфекционный фактор [Малышкина А.И., 2006]. Вероятно, выявленное нами увеличение уровня TLR4+ фагоцитов у всех женщин с миомой матки отражает вовлечение системы фагоцитарных клеток в ответ на инфекционные антигены.

Состояние фагоцитов эндометрия было ассоциировано с темпом роста миомы матки. Нами было установлено, что у женщин с нерастущей миомой матки стабильно малых размеров в эндометрии снижено содержание HLA-DR-позитивных макрофагов, но повышен уровень CD 16+ фагоцитов (р<0,05 и р<0,02 соответственно). Быстрое увеличение размеров опухоли сопровождалось снижением содержания CDllb+ эндометриальных макрофагов (р <0,001).

СВ16-позитивным фагоцитам принадлежит важная роль в развитии цитотоксических реакций в отношении трансформированных клеток [Ancuta Р., е.а., 2006], поэтому повышение содержания этой функционально активной популяции эндометриальных макрофагов у женщин с нерастущей миомой матки может свидетельствовать о достаточно высоком уровне цитотоксической активности макрофагов, определяющем отсутствие роста уже сформировавшейся миомы матки. CDllb молекулы, относящиеся к классу р2-интегринов, участвуют в осуществлении межклеточных взаимодействий по типу клетка-клетка и клетка-внеклеточный матрикс [Wu R., е.а., 2006], а интегрины, в свою очередь, играют важную роль в регуляции межклеточных взаимодействий при опухолевом росте [Brakebusch С., е.а., 2002]. По-видимому, нарушение взаимодействия эндометриальных макрофагов с другими клетками может приводить к снижению противоопухолевой защиты в ткани, непосредственно прилегающей к миометрию, провоцируя быстрый рост миомы матки.

При дифференцированном анализе данных, характеризующих экспрессию на поверхности фагоцитов функциональных и сигнальных молекул в зависимости от типа быстрого роста миомы нами было установлено, что повышение в периферической крови содержания нейтрофилов, экспрессирующих на своей поверхности рецептор к TGFßl -эндоглин (CD 105), было ассоциировано с «истинным» типом роста опухоли за счет усиления пролиферативных процессов в миометрии (р<0,002). В то же время для подгруппы женщин с «ложным» типом роста миомы матки было характерно сниженное содержание периферического пула моноцитов, экспрессирующих молекулы эндоглина (р<0,05).

Эндоглин является вспомогательным рецептором TGFßl [Wipff J., е.а., 2007] и регулирует ангиогенез [Hayrabedyan S., е.а., 2005; Duwel А., е.а., 2007], определяя реализацию биологического действия этого фактора роста при опухолевом росте. Известно, что TGFß ингибируют многие функции фагоцитарных клеток [Ковальчук JI.B., Ганковская Л.В. и соавт. 2007; Kuo Y. е.а., 2001]. Поэтому повышение уровня экспрессии эндоглина периферическими нейтрофилами может вести к угнетению функциональной активности данной клеточной популяции, что, по-видимому, связано с усилением процессов опухолевого роста у пациенток с миомой матки.

Известно, что в ткани миоматозных узлов значительно изменяется по сравнению с неизмененным миометрием содержание ряда провоспалительных цитокинов и факторов роста [Nowak R.A., е.а., 2000; Sozen I., е.а., 2002]. Принимая во внимание тот факт, что фагоциты являются одними из основных продуцентов цитокинов в организме, можно предположить, что изменения локального цитокинового фона в миоме матке связано с нарушением секреторной активности фагоцитов крови и эндометрия. В связи с этим мы оценили характер внутриклеточной продукции ряда провоспалительных цитокинов мононуклеарными и гранулоцитарными фагоцитами при миоме матки (см. приложение).

Независимо от темпа роста миомы матки в периферической крови и эндометрии было выявлено значительное повышение содержания мононуклеарных фагоцитов, продуцирующих внутриклеточно 1Ь-10 (см приложение). В последние годы получила широкое распространение теория о различной роли М1 и М2 макрофагов в регуляции опухолевого роста [Уап ИпёегасЫег 1А.,е.а.; 2006, МапЮуат А., е.а., 2004]. Считают, что М1 или «классически» активированные макрофаги продуцируют цитокины ТЫ типа и при активации участвуют в защите организма от опухолевых клеток. М2 клетки или «альтернативно» активированные макрофаги, активируются под воздействием ТЬ2 цитокинов ТЬ2 типа и могут влиять на поведение опухолевых клеток, изменяя опухолевое микроокружение и изменяя направленность противоопухолевого иммунного ответа, участвуя таким образом в росте и прогрессии опухоли [Уап Стс1егасЬ1ег 1.А., 2006]. Принадлежность к М2 популяции является высокая продукция 1Ь-10 и низкая - 1Ь-12 [МагПоуаш А., е.а., 2004]. Складывается впечатление, что в основе нарушений регуляции противоопухолевого ответа, ведущих к формированию миомы матки, является увеличение пула М2 фагоцитов как на системном, так и на локальном уровнях.

Темп роста опухоли, по нашим данным, был ассоциирован с различной направленностью изменений продукции провоспалительных цитокинов фагоцитарными клетками. У женщин с миомой матки стабильно малых размеров отмечалось достоверное снижение уровня моноцитов, нейтрофилов крови и эндометриальных макрофагов, экспрессирующих внутриклеточно 1Ь-1Р (р<0,05, р<0,05 и р<0,001 соответственно) и 1Ь-8 (р<0,01, р<0,05 и р<0,05 соответственно). Быстрый рост миомы матки, напротив, сопровождался резким увеличением уровня 1Ь-1р+ (р<0,01, р<0,02 и р<0,001 соответственно), 1Ы2+ (р<0,01, р<0,02 и р<0,001 соответственно), 1Ь-8+ (р<0,001 во всех случаях) и клеток (р<0,05, р<0,001 и р<0,001 соответственно) в

популяциях моноцитов и нейтрофилов периферической крови, а также в

популяции эндометриальных макрофагов. На основании выявленных закономерностей изменения содержания моноцитов, продуцирующих IL-8, в зависимости от темпа роста миомы матки, был предложен новый диагностический критерий быстрого роста миомы матки.

Связь между воспалением и канцерогенезом была установлена достаточно давно [Lin W.W.,e.a., 2007; Balkwill F., e.a., 2007]. На сегодня можно считать доказанным, что хроническое воспаление усиливает опухолевую прогрессию [Allavena Р., е.а., 2008]. В связи с этим, выявленное нами усиление продукции провоспалительных цитокинов периферическим и эндометриальными макрофагами только у женщин с быстрорастущей миомой матки представляется вполне логичным.

Характер продукции провоспалительных цитокинов также был связан и с типом быстрого роста миомы матки. Так, при «истинном» типе роста в эндометрии отмечалось более низкое содержание IL 12+ и IFNy+ клеток, чем при «ложном» типе роста (р<0,05 и р<0,005 соответственно) . Известно, что IL-12 может усиливать процессы элиминации опухолевых клеток в экспериментальных моделях, а экзогенное введение IL-12 приводило к уменьшению количества внутриопухолевых макрофагов, поддерживающих злокачественный рост, при одновременном повышении содержания макрофагов с выраженной противоопухолевой активностью [Watkins S.K., .е.а., 2007]. Можно предположить, что снижение уровня IL-12-позитивных макрофагов в эндометрии, ассоциированное с усилением пролиферативной активности в миометрии, отражает снижение функционально активных фагоцитов в эндометрии при «истинном» типе быстрого роста опухоли.

Изменение цитокинового профиля периферических и эндометриальных макрофагов, по нашим данным, было сопряжено с изменением содержания провоспалительных цитокинов непосредственно в опухолевой ткани. Так, мы выявили повышение концентрации IL-ip и IL-8 в экстрактах миоматозных узлов больших размеров по сравнению с аналогичными показателями в

неизмененном миометрии и в миоматозных узлах малых размеров (р<0,05 во всех случаях). Причем в резкое повышение провоспалительных цитокинов IL-lß и IL-8, а также МСР-1 было выявлено в опухолевых узлах, увеличение которых происходило за счет пролиферации (р<0,05 во всех случаях). Известно, что МСР-1 способствует развитию опухоли, регулируя количество и распределение макрофагов, ассоциированных с ней [Bailey С., е.а., 2007]. Следует также отметить, что в ткани миоматозных узлов с «истинным» типом опухолевого роста в максимальной степени было выражено повышение содержания IL-8 при одновременном усилении и экспрессии мРНК IL-8 (р<0,05 в обоих случаях). Как известно, IL-8 может способствовать опухолевому росту, являясь мощным ангиогенным фактором [Фрейдлин И.С., Тотолян A.A., 2001]. Можно предположить, что усиление продукции провоспалительных цитокинов фагоцитами лежит в основе механизмов, определяющих развитие быстрого роста миомы за счет пролиферации.

Таким образом, суммируя полученные нами данные можно заключить, что в основе механизмов, приводящих к формированию миомы матки лежат нарушения экспрессии функциональных и сигнальных молекул на поверхности фагоцитов при повышении в периферической крови и эндометрии пула М2 моноцитов/макрофагов. Темп роста опухоли связан преимущественно с функциональным состоянием эндометриальных макрофагов и уровнем продукции провоспалительных цитокинов фагоцитами крови и эндометрия. Тип быстрого роста миомы матки определяется характером рецепции TGFß периферическими нейтрофилами и моноцитами и уровнем продукции INFy+ и IL 12+. Изменение цитокинового профиля периферических и эндометриальных фагоцитов может лежать в основе механизмов, регулирующих содержание цитокинов в ткани миоматозного узла.

Выводы

1. Развитие миомы матки независимо от темпа роста опухоли ассоциируется с выраженным снижением по сравнению с показателями здоровых женщин количества моноцитов, экспрессирующих функциональные молекулы (НЬЛ-БЯ, СБПЬ, СВ1б), и повышением уровня ТЬЫ4+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии.

2. Увеличение уровня СБ105+ нейтрофилов в периферической крови и снижение количества СЭ11Ь+ макрофагов в эндометрии относительно аналогичных параметров здоровых женщин сочетается с быстрым ростом миомы матки, тогда как снижение содержания НЬАЛЖ+ макрофагов и повышение количества СВ1б-макрофагов в эндометрии характерно для женщин с миомой матки стабильно малых размеров.

3. «Истинный» тип быстрого роста миомы матки ассоциируется с повышенным количеством нейтрофилов периферической крови, экспрессирующих эндоглин, а «ложный» тип быстрого роста - со сниженным уровнем СВ105-позитивных моноцитов.

4. Независимо от темпа и типа роста для миомы матки характерно усиление внутриклеточного синтеза 1Ь-10 моноцитами. При миоме матки стабильно малых размеров отмечается снижение продукции 1Ь-1Р и 1Ь-8 фагоцитами крови и эндометрия, тогда как при быстром росте миомы матки - повышение спонтанной продукции провоспалительных цитокинов 1Ь-1р, 1Ь-8, ЮТу и 1Ь-12 периферическими фагоцитарными клетками. Отличительной чертой «ложного» типа быстрого роста опухоли является высокий уровень 1№у+ и 11Л2+ макрофагов в эндометрии.

5. В экстрактах эндометрия женщин с миомой матки стабильно малых размеров снижено по сравнению с показателями эндометрия здоровых женщин содержание 1Ь-1 р, а при быстрорастущей миоме матки содержание провоспалительных цитокинов в тканевых экстрактах

эндометриальной ткани не отличается от контрольных значений, но повышена экспрессия мРНК 1Ь-8. «Ложный» тип быстрого роста миомы матки ассоциируется с высоким содержанием 1Ь-8 и МСР-1 и повышенной экспрессией мРНК1Ь-8 в эндометрии.

6. В экстрактах опухолевых узлов больших размеров по сравнению с показателями неизмененного миометрия и миоматозных узлов малых размеров повышено содержание 1Ь-1р и 1Ь-8 и усилена экспрессия мРНК 1Ь-8. Высокое содержание 1Ь-1р, 1Ь-8 и МСР-1 в экстрактах миоматозных узлов и повышенная экспрессия мРНК 1Ь-8 в ткани опухоли сочетаются с «истинным» типом быстрого роста миомы, а сниженный уровень 1Ь-8 и мРНК 1Ь-8 в тканевых экстрактах узлов - с «ложным» типом роста опухоли.

7. Высокие значения показателя периферических моноцитов, экспрессирующих внутриклеточно 1Ь-8, являются прогностическим критерием развития быстрого роста миомы матки в течение года.

Практические рекомендации

Женщинам с миомой матки рекомендуется определять показатели функциональной активности периферических моноцитов и нейтрофилов с целью уточнения темпа и типа роста опухоли.

Женщинам с быстрорастущей миомой матки рекомендуется определять количество периферических моноцитов и нейтрофилов, экспрессирующих эндоглин, для дифференцировки «истинного» и «ложного» типа роста опухоли.

Для прогнозирования быстрого роста миомы матки рекомендуется определять относительный уровень 1Ь-8+ моноцитов, и при значении этого показателя равных или более 63% прогнозировать быстрый рост миомы матки в течение года с точностью 91,7%.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Соснина А.Е. Цитокиновый профиль лимфоцитов и макрофагов эндометрия у женщин с миомой матки различных темпов роста / Соснина А.Е., Малышкина А.И., Посисеева J1.B., Сотникова Н.Ю., Бойко О.М., Анциферова Ю.С. // Медицинская иммунология.- 2006. -Т. 8. - № 2-3. - С.314.

2. Соснина А.Е. Роль фагоцитов периферической крови в процессах, определяющих темп роста миомы матки / Соснина А.Е., Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю., Бойко О.М., Малышкина А.И. // Сборник материалов VIII Всероссийского научного форума «Мать и дитя».-

2006.- С.520.

3. Соснина А.Е., Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю., Малышкина А.И. Взаимосвязь изменений цитокинового профиля моноцитов периферической крови с темпом роста миомы матки / Соснина А.Е., Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю., Малышкина А.И. // Ж. Физиология и патология иммунной системы.- 2006,- №10 (приложение 1).-С. 58-59.

4. Соснина А.Е. Изменения цитокинового профиля зндометриальных макрофагов у женщин с лейомиомой матки в зависимости от темпов роста опухоли / Соснина А.Е. // Сборник материалов научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки - 2006» в рамках областного фестиваля «Молодая наука - развитию Ивановской области». - 2006. - С.81-83.

5. Соснина А.Е. Особенности цитокинового профиля мононуклеарных клеток эндометрия женщин с быстрорастущей миомой матки / Соснина А.Е., Сотникова Н.Ю., Малышкина А.И., Посисеева JI.B., Сотникова Н.Ю., Бойко О.М. // Сборник материалов международного конгресса «Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии». - 2006. - С.110-111.

6. Соснина А.Е. Особенности экспрессии TLR2 и TLR4 на клетках фагоцитарного ряда периферической крови и эндометрия у женщин с лейомиомой матки / Соснина А.Е., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Бойко О.М., Малышкина А.И. // Russian Journal of Immunology.-

2007.-V. 9, Suppl.4.- P.137-138.

7. Соснина А.Е. Взаимосвязь особенностей цитокинового профиля фагоцитарных клеток при миоме матки с темпом и типом роста опухоли / Соснина А.Е., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Бойко О.М., Перетятко Л.П. // Медицинская иммунология.- 2007. - Т 9. - № 2-3.-С.263.

8. Соснина А.Е. Изменение экспрессии м-РНК TGFP и IL-1P в ткани лейомиомы матки при быстром темпе роста опухоли / Соснина А.Е., Сотникова Н.Ю., Бойко О.М., Анциферова Ю.С., Малышкина А.И.// Сборник материалов VIII конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии»,- 2007.-№3, приложение 1.-С.257.

9. Соснина А.Е. Изменение экспрессии молекул TLR-2 и TLR-4 на клетках фагоцитарного ряда у женщин с лейомиомой матки / Соснина А.Е. // Сборник материалов научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки - 2007». - 2007. -С.80.

10. Соснина А. Е. Взаимосвязь активности пролиферативных процессов в миоматозном узле с системной и локальной продукцией IL-8 и TGFP / Соснина А. Е., Сотникова Н. Ю., Посисеева JI.B., Бойко О.М., Малышкина А.И., Анциферова Ю.С., Перетятко Л.П. // Сборник материалов IX Всероссийского научного форума «Мать и Дитя». -

2007. - С. 523-524.

11. Соснина А. Е. Роль IL-8 в патогенезе быстрого роста лейомиомы матки / Соснина А. Е., Сотникова Н. Ю., Посисеева Л.В., Бойко О.М., Малышкина А.И., Анциферова Ю.С., Перетятко Л.П. // Ж. Бюллетень Сибирского отделения Российской Академии медицинских наук. -

2008. - Приложение 1. - С. 64-68.

12. Соснина А.Е. Особенности экспрессии м-РНК IL-8 в эндометрии женщин с миомой матки / Соснина А.Е., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Бойко О.М., Малышкина А.И. // Russian Journal of Immunology.-2008.-T 2(11) №2-3-P.297.

13. Соснина A. E. Роль IL-1(3 в механизмах, определяющих различный темп и тип роста лейомиомы матки / Соснина А. Е., Сотникова Н. Ю., Анциферова Ю.С., Бойко О.М. // Ж. «Проблемы репродукции». - 2008. - Специальный выпуск: Технологии XXI века в гинекологии. - С.75-77.

Приложение.

Особенности фенотипа и цитокинового профиля фагоцитов периферической крови и эндометрия женщин с миомой матки

Показатель, % Контрольная группа (п= 35) Миома матки стабильно малых размеров (п=25) Быстрорастущая миома матки

«истинный» тип роста опухоли (п=25) «ложный» тип роста опухоли (п=21)

Моноциты периферической крови

СОИЬ+ 63,63+1,73 40,47+2,69, р<0,001 47,63+3,58, р<0,002 48,25+5,01, р<0,02

СБ 16+ 64,19±1,66 45,03+3,47, р<0,001 50,25+2,61, р<0,001 50,88+3,61, р<0,01

НШЖ+ 71,92+1,61 57,92+3,04, р<0,001 63,76+3,17, р<0,01 58,24+3,97, р<0,01

СОЮ5 + 34,11±4,04 37,19+3,21, р>0,05 32,93+3,01, р>0,05 24,22+2,65, р<0,05

тит 60,69+2,28 59,11+3,24, р>0,05 61,15+2,38, р>0,05 65,46+2,57, р>0,05

Ти14+ 45,91±1,89 60,31+5,16, р<0,02 69,85+1,28, р<0,001 71,51+3,51, р<0,001

нлр+ 48,79+3,19 39,23+2,03, р<0,05 59,66+2,73, р<0,01 57,09+2,50, р<0,01

1Ы2+ 55,17±2,88 51,43+3,58, р>0,05 69,26+3,14, р<0,01 67,93+3,15, р<0,01

1№+ 39,08±2,07 41,07+2,47, р>0,05 47,71+3,69, р<0,05 48,71+3,19, р<0,05

1Ь8+ 45,86±3,37 33,98+2,04, р<0,01 75,09+2,63, р<0,001 71,66+4,66, р<0,001

1П0+ 38,31+1,88 44,82+1,28, р<0,01 58,01+1,99, р<0,05 61,90+2,24, р<0,001

Нейтрофшш периферической крови

СО ПЬ+ 64,28+3,14 |58,97+3,09, р>0,05 69,65+2,87, р>0,05 65,53+7,33, р>0,05

С016+ 74,95+2,92 71,93+3,04, р>0,05 82,88+2,44, р>0,05 75,36+4,39, р>0,05

СОЮ5+ 26,39+2,68 30,50+4,07, р>0,05 42,25+2,92, р<0,002 27,09+3,95, р>0,05

ТЬК2+ 68,73+3,08 77,11+4,12, р>0,05 71,02+3,40, р>0,05 77,34+4,31, р>0,05

Т1,114+ 53,29+6,03 81,62+3,63, р<0,005 73,74+0,92, р<0,01 78,94+2,18, р<0,01

1ЫР+ 44,12+2,88 32,97+3,01, р<0,05 57,64+3,74, р<0,02 55,14+2,90, р<0,02

11Л2+ 46,79+2,51 39,45+3,35, р>0,05 57,24+6,68, р<0,05 58,20+3,64, р<0,02

ЮТ+ 39,33+2,08 33,10+3,17, р>0,05 57,27+3,93, р<0,001 57,50+2,16, р<0,001

1Ь8+ 45,05+1,47 35,68+3,46, р<0,05 70,14+2,30, р<0,001 71,21+5,23, р<0,001

11Л0+ 32,54+1,73 35,09+3,25, р>0,05 53,37+4,32, р<0,001 50,51+3,73, р<0,001

Макрофаги эндометрия

СЭ 11Ь+ 64,48+2,00 58,8+3,28, р>0,05 52,00+1,57, р<0,001 | 46,94+5,89, р<0,02

СО 16+ 63,87+1,82 70,44+1,89, р<0,02 59,76+2,58, р>0,05 64,97+4,00, р>0,05

НЬАВК+ 61,83+1,88 55,99+2,09, р<0,05 61,99+3,02, р>0,05 59,64+1,81, р>0,05

СШ05+ 38,47+5,05 43,48+2,34, р>0,05 38,28+2,09, р>0,05 36,39+2,39, р>0,05

1X1*2+ 66,71+1,90 70,39+3,09, р>0,05 63,36+1,24, р>0,05 66,36+4,12, р>0,05

ТЬЯ4+ 52,69+2,64 70,32+3,12, р<0,001 72,14+2,58, р<0,005 75,63+3,85, р<0,005

1ЫР+ 40,62+1,56 31,59+1,97, р<0,001 63,56+6,29, р<0,01 64,69+2,60, р<0,001

11Л2+ 53,36+4,55 42,08+3,64, р>0,05 66,73+1,78, р<0,02 74,88+2,62, р<0,001

ЮТ+ 35,33+1,60 35,41+2,91, р>0,05 43,72+2,68, р<0,02 62,33+4,25, р<0,001

1Ь8+ 43,66+3,98 30,59+3,39, р<0,05 66,91+3,31, р<0,001 70,38+2,94, р<0,001

ПЛ0+ 31,73+4,79 43,67+1,75, р<0,001 54,27+3,93, р<0,001 57,08+3,67, р<0,001

р - различия достоверны относительно показателя контрольной группы.

Подписано в печать 10.11 2008. Формат 60x84 1/16. Бумага писчая Усл. печ. л. 1,4. Уч -изд. л. 1,55. Тираж 100 экз. Заказ 1525

ГОУ ВПО Ивановский государственный химико-технологический университет

Отпечатано на полиграфическом оборудовании кафедры экономики и финансов ГОУ ВПО «ИГХТУ» 153000, г. Иваново, пр. Ф. Энгельса, 7

Актуальность темы исследования

Миома матки — доброкачественная гормонально-зависимая опухоль, развивающаяся в миометрии в результате гипертрофии и пролиферации элементов мышечной и соединительной ткани [5, 32, 34]. Миома матки традиционно считается наиболее распространенным гинекологическим заболеванием, частота встречаемости которого среди женщин старше 35 лет колеблется по данным разных авторов от 25% до 50% [32, 37, 111, 70, 95]. Миома матки оказывает отрицательное влияние на менструальную и репродуктивную функции, общее состояние здоровья женщины [70, 95].

Патогенез миомы матки до конца не установлен. Исследованиями последних лет показано, что развитие миомы матки ассоциировано со значительными иммунными нарушениями [13, 14, 20, 29, 82]. Установлено, что развитие миомы матки и ее рост сопровождаются выраженным повышением уровня ряда провоспалительных цитокинов и факторов роста в ткани самой миомы [67, 111, 124]. Фагоциты являются основными продуцентами провоспалительных цитокинов [11]. Однако нет данных о том, в какой мере меняется продукция цитокинов фагоцитами при миоме матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.

Известно, что фагоцитарные клетки играют важную роль в поддержании клеточного гомеостаза и противоопухолевой защите, участвуя в регуляции процессов ангиогенеза, регенерации, дифференцировки и клеточной пролиферации [77, 119, 124]. Имеющиеся работы свидетельствуют о значительных нарушениях экспрессии различного рода рецепторов и цитокинового профиля фагоцитов при опухолевом росте [51, 94, 98, 109, 119]. Получены данные, свидетельствующие о вовлечении toll-like рецепторов (TLR) в регуляцию фагоцитарными клетками опухолевого роста [45, 122]. Так, по литературным данным экспрессия TLR3 и TLR4 связана с ростом аденокарциномы [45]. Известно, что этот класс рецепторов является мощным индуктором адаптивного иммунитета, проводит сигнал в клетку, запуская цитокиновый каскад при взаимодействии со своими специфическими лигандами [12, 36, 50]. Однако отсутствуют данные о взаимосвязи между характером экспрессии ТЪЯб, продукции цитокинов фагоцитарными клетками и ростом миомы матки.

Таким образом, определение роли фагоцитов в механизмах развития доброкачественного опухолевого роста у женщин с миомой матки является актуальной задачей современной клинической иммунологии, так как позволит уточнить иммунные механизмы, участвующие в развитии противоопухолевого ответа.

Цель исследования

На основании определения особенностей фенотипа и цитокинового профиля фагоцитов на системном и локальном уровне у женщин с миомой матки стабильно малых размеров и с быстрорастущей миомой матки, уточнить роль клеток фагоцитарного ряда в иммунных механизмах, определяющих темп и тип роста опухоли.

Задачи исследования

1. Установить закономерности изменения фенотипа клеток фагоцитарного ряда на системном и локальном уровне при миоме матки в зависимости от темпа и морфологического типа роста опухоли.

2. Определить особенности экспрессии сигнальных молекул ТЫ1-2 и ТЬЯ-4 на поверхности клеток фагоцитарного ряда у женщин с миомой матки с различным темпом и типом роста опухоли.

3. Выявить особенности синтеза и продукции цитокинов (1Ь-1р, 1Ь-12, 1№у, 1Ь-8, 11.-10) фагоцитами периферической крови и эндометрия у женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.

4. Определить особенности содержания ряда цитокинов и уровень экспрессии генов цитокинов в миоматозных узлах у женщин с быстрорастущей миомой матки в зависимости от типа роста опухоли.

5. На основании выявленных особенностей клеток фагоцитарного ряда женщин с миомой матки разработать иммунологические критерии темпа роста опухоли.

Научная новизна

Установлено, что миома матки вне зависимости от темпа роста опухоли характеризуются повышенным содержанием IL-10+ моноцитов/макрофагов и TLR4+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии и сниженным уровнем моноцитов, экспрессирующих HLA-DR, CD lib и CD 16 молекулы.

Показано, что быстрый рост миомы матки происходит на фоне снижения уровня CDllb+ макрофагов в эндометрии, увеличении количества фагоцитов крови и эндометрия, продуцирующих внутриклеточно провоспалительные цитокины, и повышенной экспрессии мРНК IL-8 в ткани эндометрия.

Установлено, что нерастущая миома матки характеризуется высоким уровнем CD 16+ и низким - HLA-DR+ макрофагов в эндометрии, а также снижением уровня IL-1J3+ и IL-8+ фагоцитов как на системном, так и на локальном уровне.

Показано, что отличительной чертой «истинного» типа роста миомы матки за счет усиления пролиферации является высокое содержание CD 105+ нейтрофилов в периферической крови, а «ложного» типа роста за счет отека -низкое содержание CD105+ моноцитов, а также высокий уровень эндометриальных INFy+ и IL-12+ макрофагов, повышенное содержание IL-8 и МСР-1 в экстрактах эндометрия при усиленной экспрессии мРНК IL-8 в эндометрии.

Установлено, что в миоматозных узлах больших размеров отмечается высокое содержание IL-1J3 и IL-8 и усиленная экспрессия мРНК IL-8 по сравнению с неизмененным миометрием; при «истинном» типе роста миомы матки характерно высокое содержание IL-1J3, IL-8, МСР-1 в миоматозном узле и высокий уровень экспрессии мРНК IL-8 в ткани опухоли, а при «ложном» — низкое содержание IL-8 и м-РНК IL-8 в ткани миоматозного узла.

Выявлены закономерности изменения содержания моноцитов, продуцирующих IL-8, в зависимости от темпа роста миомы матки, на основании чего предложен новый прогностический критерий быстрого роста миомы матки.

Практическая значимость

Установлены новые патогенетические механизмы развития миомы матки, определяющие темп и тип ее роста.

Установлены новые иммунологические критерии, позволяющие оценить темп и тип роста миомы матки.

Разработан новый способ прогнозирования быстрого темпа роста опухоли, основанный на определении в периферической венозной крови содержания TL8+ моноцитов (положительное решение о выдаче патента РФ от 15.05.2008 г.).

Реализация результатов работы

Результаты диссертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники и консультативно-диагностической поликлиники ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи».

Апробация работы

Диссертация прошла апробацию на совместной конференции сотрудников ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» 23 июня 2008 года. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2006» (Иваново, 2006), на X Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт

Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2007» в рамках областного фестиваля «Молодая наука - развитию Ивановской области (Иваново, 2007), на 2-й Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007), в областном конкурсе научных работ среди молодых ученых в номинации «Естественные науки» (Иваново, 2007); на XI Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007); в научных чтениях, посвященных памяти академика В.И. Кулакова (Москва, 2008), на конференции ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Росмедтехнологий» (Иваново, 2008), на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту

Развитие доброкачественной опухоли в миометрии ассоциировано с увеличением периферического и эндометриального пула М2 моноцитов/макрофагов при нарушении экспрессии на поверхности фагоцитов функциональных и сигнальных молекул. Быстрый рост миомы матки связан с усилением продукции цитокинов фагоцитами крови и эндометрия, определяющим повышение содержания провоспалительных цитокинов в ткани опухоли. Пролиферативный тип роста миомы матки определяется высоким уровнем периферических нейтрофилов, экспрессирующих эндоглин, и высокой локальной продукцией провоспалительных цитокинов в миоматозных узлах.

Повышение количества 1Ь8+ моноцитов в периферической крови ассоциируется с быстрым ростом миомы матки.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 105 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 22 таблицами. Список литературы включает 130 источников, в том числе 87 публикаций иностранных авторов.

выводы

1. Развитие миомы матки независимо от темпа роста опухоли ассоциируется с выраженным снижением по сравнению с показателями здоровых женщин количества моноцитов, экспрессирующих функциональные молекулы (HLA-DR, CD lib, CD 16), и повышением уровня TLR4+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии.

2. Увеличение уровня CD 105+ нейтрофилов в периферической крови и снижение количества CDllb+ макрофагов в эндометрии относительно аналогичных параметров здоровых женщин сочетается с быстрым ростом миомы матки, тогда как снижение содержания HLA-DR+ макрофагов и повышение количества С016-макрофагов в эндометрии характерно для женщин с миомой матки стабильно малых размеров.

3. «Истинный» тип быстрого роста миомы матки ассоциируется с повышенным количеством нейтрофилов периферической крови, экспрессирующих эндоглин, а «ложный» тип быстрого роста — со сниженным уровнем СВ105-позитивных моноцитов.

4. Независимо от темпа и типа роста для миомы матки характерно усиление внутриклеточного синтеза IL-10 моноцитами. При миоме матки стабильно малых размеров отмечается снижение продукции IL-1P и IL-8 фагоцитами крови и эндометрия, тогда как при быстром росте миомы матки -повышение спонтанной продукции провоспалительных цитокинов IL-ip, IL-8, INFy и IL-12 периферическими фагоцитарными клетками. Отличительной чертой «ложного» типа быстрого роста опухоли является высокий уровень INFy+ и IL12+ макрофагов в эндометрии.

5. В экстрактах эндометрия женщин с миомой матки стабильно малых размеров снижено по сравнению с показателями эндометрия здоровых женщин содержание IL-1J3, а при быстрорастущей миоме матки содержание провоспалительных цитокинов в тканевых экстрактах эндометриальной ткани не отличается от контрольных значений, но повышена экспрессия мРНК 1Ъ-8. «Ложный» тип быстрого роста миомы матки ассоциируется с высоким содержанием 1Ь-8 и МСР-1 и повышенной экспрессией мРНК 1Ь-8 в эндометрии.

6. В экстрактах опухолевых узлов больших размеров по сравнению с показателями неизмененного миометрия и миоматозных узлов малых размеров повышено содержание 1Ь-1 (3 и 1Ь-8 и усилена экспрессия мРНК 1Ь-8. Высокое содержание 1Ь-1р, 1Ь-8 и МСР-1 в экстрактах миоматозных узлов и повышенная экспрессия мРНК 1Ь-8 в ткани опухоли сочетаются с «истинным» типом быстрого роста миомы, а сниженный уровень 1Ь-8 и мРНК 1Ь-8 в тканевых экстрактах узлов - с «ложным» типом роста опухоли.

7. Высокие значения показателя периферических моноцитов, экспрессирующих внутриклеточно 1Ь-8, являются прогностическим критерием развития быстрого роста миомы матки в течение года.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Женщинам с миомой матки рекомендуется определять показатели функциональной активности периферических моноцитов и нейтрофилов с целью уточнения темпа и типа роста опухоли.

Женщинам с быстрорастущей миомой матки рекомендуется определять количество периферических моноцитов и нейтрофилов, экспрессирующих эндоглин, для дифференцировки «истинного» и «ложного» типа роста опухоли.

Для прогнозирования быстрого роста миомы матки рекомендуется определять относительный уровень ТЬ-8+ моноцитов, и при значении этого показателя равных или более 63% прогнозировать быстрый рост миомы матки в течение года с точностью 91,7%.