Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Роль генетических полиморфизмов молекул IL-4 (C589T), IL-10 (C819T), IL-10 (G1082A) в патогенезе хронического генерализованного пародонтита у резидентов Забайкальского края

005003669

На правах рукописи

Доржиева Надежда Эдуардовна

РОЛЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОЛИ МОРФИЗМОВ МОЛЕКУЛ 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10(С819Т), 1Ь-10(С1082А) В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО ПАРОДОНТИТА У РЕЗИДЕНТОВ ЗАБАЙКАЛЬСКОГО КРАЯ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 НОЯ 2011

Чита - 2011

005003669

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук

Витковский Юрий Антонович

Пинелис Иосиф Семенович Герасимов Александр Александрович

Ведущая организация: ГБОУ ВПО "Иркутский государственный медицинский университет" Минздравсоцразвития России.

Защита диссертации состоится "_" декабря 2011 г. в 9-00 часов на

заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГБОУ ВПо]"Чиг тинская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России (672090, г. Чита, ул. Горького, 39а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан "_"__2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 208. 118. 01

д.м.н., профессор И.Н. Гаймоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди основных стоматологических заболеваний хронический генерализованный пародонтит (ХГП) занимает 2-е место по частоте после кариеса зубов (Шмидт Д.В., 2008). Воспалительно-деструктивные процессы в зубочелюстной системе и последующая потеря зубов вследствие ХГП ведут к снижению жевательной функции, психоэмоциональной неустойчивости пациентов, к нарушению секретор-но-сократительной функции желудочно-кишечного тракта, эндокринным, сердечно-сосудистым расстройствам и т.д. (Гильмияров Э.М. и соавт. | 2008; Грудянов А.И., Безрукова И.В., 2000; Грудянов А.И., Овчинникова В.В., 2007; Michel H., 2002; Scanapieco F.A., 2005).

Высокая распространенность пародонтита (ПТ) во всем мире, рост его заболеваемости, отрицательное влияние на качество жизни, сложность патогенеза, тяжесть и упорность течения, длительная реабилитация, серьезные медико-социальные последствия определяют значимость данной проблемы (Фабрикант Е.Г. и соавт., 2008).

Пародонтит, как и многие распространенные заболевания, относится к сложным мультифакторным болезням. Характерной чертой данной патологии является то, что в начале своего развития она имеет мало выраженную клиническую картину, медленно прогрессирует и со временем приобретает хроническое течение. Хотя в патогенезе ПТ основное внимание уделяется пародонтопатогенным бактериям и факторам окружающей среды (таким как курение, стресс и др.), однако роль генетических факторов очевидна (Michalowicz B.S. et al., 2000).

Каждый человек обладает индивидуальной ответной реакцией на бактериальное воздействие, которая определяет его восприимчивость к развитию болезни (Laine M.L. et al., 2010).

В настоящее время существует большое количество статей, посвященных роли генов и их полиморфизмов в ответной реакции организма при ПТ (Царев В.Н., Николаева Е.Н., 2007; Почтаренко В.А. и соавт., 2006; Sumer А.Р. et al., 2007). Перспективной группой генов-кандидатов, которые потенциально могут быть связаны с формированием риска ПТ, являются гены цитокинов, сравнительное исследование которых в разных популяциях мира признается весьма актуальным в стоматологии (Когашап K.S., di Giovine F.S., 1998; Laine M.L. et al., 2010). Генетические полиморфизмы могут в некоторых ситуациях вызывать изменения в белке или его экспрессии, что приводит к изменениям во врожденном и приобретенном иммунитете (Laine M.L. et al., 2010).

Полиморфизмы цитокинов могут быть связаны с восприимчивостью, степенью тяжести и клиническими исходами ХГП (Havemose-Poulsen A. et al., 2007).

Следует отметить, что в настоящее время нет сведений о достоверных маркерах для оценки предрасположенности человека к развитию ХГП и определения прогноза заболевания. Это затрудняет раннюю диагностику и, как следствие, эффективную своевременную профилактику и лечение. Также не в полной мере изучена эпидемиология, этническая и расовая принадлежность данной патологии, а имеющиеся данные о вкладе разных аллелей генов интерлейкинов в развитие ХГП остаются противоречивыми. В связи с этим, исследование роли генетических полиморфизмов цитокинов в развитии ПТ является актуальной задачей, решение которой позволит углубить представления о патогенезе и разработать новые эффективные методы прогнозирования и ранней диагностики заболевания.

Цель и задачи исследования. Основной целью исследования явилось изучение частоты аномальных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) и оценка их клинико-прогно-стического значения для развития хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести у лиц русской и бурятской этнических групп Забайкальского края.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Выявить и оценить частоту встречаемости аномальных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (С1082А), их сочетаний среди больных хроническим генерализованным пародон-титом средней степени тяжести и практически здоровых резидентов в русской и бурятской этнических группах.

2. Изучить клинические параметры у лиц с различными аллельными вариантами генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) и их комбинациями в этнических группах.

3. Сравнить содержание провоспалительных 1Ь-1р, ЮТа, 1Ь-8 и противовоспалительных цитокинов 1Ь-4, ГЬ-Ю в ротовой жидкости больных ХГП и здоровых лиц с учетом различных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (С1082А), их сочетаний в русской и бурятской этнических группах.

4. Определить концентрацию я^А, а-дефензинов (ШР 1-3), кателици-дина (ЬЬ-37) в ротовой жидкости резидентов русской и бурятской национальностей в зависимости от аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1И0 (С819Т), 1Ь-10 (в 1082А) и их комбинаций.

5. Оценить вклад изучаемых показателей в патогенез хронического генерализованного пародонтита.

Научная новизна. Впервые установлена частота встречаемости аномальных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т),

1Ь-10 (ОЮ82А) среди больных хроническим генерализованным паро-донтитом средней степени тяжести и здоровых резидентов, проживающих на территории Забайкальского края, отмечены этнические особенности носительства аномалий.

Выявлено, что сочетание полиморфизмов генов 1Ь-4 и 1Ь-Ш сопровождается повышенной продукцией 11,-10,11.-4,1Ь-1р, 1Ь-8, снижением содержания 518А, а-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости в большей степени у пациентов русской национальности, чем

V лиц бурятской национальности.

Впервые обнаружено, что присутствие полиморфного аллельного варианта гена 1Ь-10(01082А) у больных бурятской национальности обуславливает снижение уровня 1Ь-10 и увеличение - 51ёА, НИР 1-3,

ЬЬ-37 в ротовой жидкости.

Установлено, что генотипы А/А и О/А 1Ь-10(С1082А), Т/Т 1Ь-10(С819Т) играют важную роль в развитии пародонтита у русских. Гомозиготы по аномальной аллели 1Ь-10(С1082А), 1Ь-10(С819Т), курение вносят наибольший вклад в патогенез данного заболевания у бурят.

Теоретическая и практическая значимость работы. В ходе исследования установлены новые данные о распространенности различных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), НЛО (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) в Забайкальском крае, а также об их влиянии на развитие хронического генерализованного пародонтита средней степени в русской и бурятской этнических группах.

Полученные результаты могут послужить основой для разработки новых подходов к профилактике, прогнозированию и ранней диагностике этой патологии в регионе. Выявленные сведения о наличии полиморфизмов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) могут быть включены в генетический паспорт индивидуумов и совместно с другими полиморфизмами использоваться для оценки риска формирования ХГП.

Внедрение результатов работы. Теоретические положения, раскрываемые в диссертации, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии, хирургической стоматологии ГБОУ ШЮ Читинская государственная медицинская академия Мшсдравсоцразвигия РФ

Апробация диссертации. Результаты исследований доложены на VI Международной Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2011), заседании Читинского отделения физиологического общества имени И.П. Павлова (Чита, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией Минобрнауки РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 273 работы, из них - 141 отечественных и 132 зарубежных авторов, иллюстрирована 45 таблицами, 3 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распределение полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) у резидентов Забайкальского края имеет этнические особенности. Распространенность аномальных аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) и их сочетаний выше среди больных бурятской национальности, чем русской.

2. Содержание цитокинов в ротовой жидкости зависит от носительства аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G 1082А) и их сочетаний у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом в русской и бурятской этнических группах. На клинические показатели влияет наличие полиморфизма генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A), их комбинации.

3. Концентрация slgA, а-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости зависит от носительства полиморфных вариантов генов IL-4, IL-10 и их сочетаний в русской и бурятской этнических группах. Ведущими факторами патогенеза хронического пародонтита у русских являются генотипы А/А, G/A IL-10(G1082A), Т/Т IL-10(C819T), у бурят - гомозиготы А/А IL-10(G1082A), Т/Т 1L-10(C819T), курение.

Материалы и методы исследования В работе с обследуемыми людьми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской Декларацией Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki 1964,2000 ред.).

Методом сплошной выборки обследовано 250 больных от 35 до 62 лет, страдающих хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести, которые обратились по поводу лечения в стоматологическую клинику Читинской государственной медицинской академии и стоматологический кабинет "Денталь" (пос. Агинское) в период с 2008 по 2010 год.

С целью изучения этнического компонента все больные были разделены на 2 группы:

1. Первая группа - 150 больных пародонтитом (45 мужчин и 105 женщин) русской национальности;

2. Вторая группа - 100 больных пародонтитом (32 мужчины и 68 женщин) бурятской национальности.

Контрольную группу составили 250 человек в возрасте от 18 до 30 лет, не имеющие на момент исследования острых и хронических заболеваний пародонта, а также соматической патологии. Они также были разделены на 2 этнические группы:

1. Первая группа - 150 относительно здоровых лиц (40 мужчин и 110 женщин) русской национальности;

2. Вторая группа - 100 относительно здоровых лиц (35 мужчины и 65 женщин) бурятской национальности.

Больные хроническим генерализованным пародонтитом и здоровые индивидуумы прошли клиническое обследование: опрос (жалобы, анамнез заболевания и жизни), осмотр полости рта и дополнительные методы исследования.

Для определения состояния пародонта использовались обратимые индексы: пародонтальный индекс (PI) по Rüssel, папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс - РМА по Parma, упрощенный индекс гигиены полости рта (OHI-S) по Green-Wermillion.

У обследуемых лиц производили забор буккального эпителия и ротовой жидкости. Ротовую жидкость собирали утром натощак после обработки полости рта 10 мл физиологического раствора, замораживали, хранили в холодильнике при t-20°C для последующего определения содержания цитокинов, секреторного иммуноглобулина А, а-дефен-зинов, кателицидина. Буккальный эпителий переносили с помощью одноразовых стерильных зондов в пробирку с реагентом, перемешивали, зонд извлекали и плотно закрывали, замораживали и хранили в холодильнике для последующего выделения ДНК.

Молекулярно-генетическое исследование. Для выявления полиморфизмов генов были выбраны три точечные мутации: IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A). Для получения образцов ДНК использовался буккальный эпителий. Выделение ДНК осуществлялось при помощи набора реагентов для биологических проб (НПФ "Ли-тех", Россия, Москва). Выявление мутаций проводилось методом ПЦР с аллель-специфичными праймерами (НПФ "Литех", Россия, Москва). Амплификация выполнялась на термоциклере модели 110 (ООО "Био-ком", Москва). Детекция продуктов амплификации осуществлялась электрофоретическим способом.

Определение концентрации цитокинов. В ротовой жидкости пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом и здоровых лиц измеряли концентрацию провоспалительных (IL-Iß, TNFa, IL-8) и противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10) методом иммунофермент-ного анализа с применением тест-систем (ЗАО "Векгор-Бест", Новосибирск).

Определение уровня секреторного иммуноглобулина А, а-де-фензннов, кателнциднна. Секреторный иммуноглобулин A (slgA), а-дефензины (HNP 1-3), кателицидин (LL-37) в ротовой жидкости исследовали методом иммуноферментного анализа ("НВТ", Голландия).

Статистическая обработка. Полученные данные обработаны с применением программы STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc., США) и определением статистической значимости различий при р<0,05. При сравнении количественных показателей использовались непараметрические методы в связи с ненормальным распределением значений в вариационных рядах. Исследуемые параметры представлены в виде медианы (Me [25 й; 75й перцентшш]). Статистически значимые различия между группами по количественным признакам оценивались при помощи критерия Манна -Уитни (U-тест). Для сравнения групп по качественному бинарному признаку применялся критерий %2 (точный критерий Фишера). Для определения частот аллельных вариантов генов использовался закон Харди-Вайн-берга. Для проверки статистических гипотез при сравнении независимых выборок применяли непараметрический дисперсионный анализ Краске-ла-Уоллиса и медианный тест. Для построения математической модели прогноза развития хронического генерализованного пародонтита использовали пошаговую логистическую регрессию.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Распространенность полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т) в этнических группах Забайкальского края

Полиморфизм гена IL-4 (С589Т)

Выявлено, что нормальная аллель (С) преобладает у здоровых резидентов русской этнической группы - 83% по сравнению с бурятской группой - 69% ( х2 = 12,657, р<0,001). Наоборот, встречаемость аномальной аллели (Т) выше среди бурят - 31%, тогда как у русских -17% ( 2 = 12,657, р<0,001). Нормальные гомозиготы (С/С) чаще наблюдаются среди здоровых лиц русской национальности (х2=9,718, р=0,002), а патологические гомозиготы (Т/Т) - среди бурятской (%2 = 4,9, р=0,027) (Рис. 1).

В русской этнической группе встречаемость аллели С выше у здоровых (83%), чем у больных резидентов (68,7%) (х2=16,042, р<0,001). Распространенность Т-аллели превалирует у лиц с ХГП (31,3%) в отличие от лиц без ХГП (!7%) (х2 = 16,042, р<0,001). Генотип С/С чаще выявляется среди здоровых (%г = 15,08, р<0,001), а Т/Т - среди пациентов (х2 - 4,613, р=0,032) (Рис.1).

% 100 -г

80

0

Здоровые Больные Здоровые Больные

Русские Буряты

пп Нормальные гомозиготы ^ Гетерозиготы в Аномальные гомозиготы

Примечание: * - статистически значимые различия по сравнению с группой здоровых; ♦> - статистически значимые различия между русскими и бурятами.

Рис.1. Полиморфизм гена 11,-4 (С589Т) среди резидентов Забайкальского края.

В бурятской этнической группе нормальная аллель оказалась более распространенной среди здоровых (69%), чем больных лиц (41%) (X2 =30,556, р<0,001). В то время как аномальная аллель чаще наблюдается в группе пациентов с ХГП (59%) по сравнению с группой контроля (31%) (х2 =30,556, р<0,001). У больных полностью отсутствует генотип С/С в отличие от здоровых (х2 = 50,909, р<0,001). Т/Т гомозиготы преобладают у пациентов с ХГП (х2 =39,928, р<0,001) (Рис. 1).

Среди лиц, страдающих ХГП обеих национальностей гомозиготы С/С и аллель С чаще наблюдаются у русских (х2 =51,144, р<0,001; х2 = 36,486, р<0,001) , а гомозиготы Т/Т и аллель Т - у бурят (х2 = 49,721, р<0,001; х2 = 36,486, р<0,001 соответственно) (Рис. 1).

Таким образом, больные обеих этнических групп чаще являются носителями полиморфного варианта гена 1Ь-4, чем здоровые лица. Установлено, что нормальные аллельные варианты преобладают среди лиц без патологии пародонта в отличие от лиц, страдающих ХГП. Частота аномальных аллельных вариантов выше среди здоровых и боль-

ных резидентов бурятской национальности по сравнению с таковыми русской национальности.

Полиморфизм гена IL-19 (G1082A)

Не обнаружено различий в распределении аллельных вариантов гена IL-10 (G 1082А) среди здоровых лиц обеих национальностей. В русской этнической группе нормальная аллель (G) является более распространенной среди здоровых (70%), чем больных резидентов (56%) (X2 = 12,019, р<0,001). Частота аномальной аллели (А) выше у лиц с ХГП (44%) по сравнению с лицами без патологии пародонта (30%) (х2 = 12,019, р<0,001). Гомозиготы G/G превалируют среди здоровых (х2 = 6,889, р=0,009), в то время как гомозиготы А/А - среди пациентов с ХГП (X2 = 10,231, р=0,001) (Рис.2).

81

Примечание: * - статистически значимые различия по сравнению с группой здоровых; ♦>- статистически значимые различия между русскими и бурятами.

Рис.2. Полиморфизм гена IL-10(G1082A) среди резидентов Забайкальского края.

В бурятской этнической группе наблюдается аналогичная тенденция. Встречаемость G-аллели больше среди здоровых (76,5%), чем больных резидентов (50,5%) (х2 =28,055, р<0,001 ). Распространенность А-аллели выше у лиц, страдающих ХГП (49,5%) по сравнению с лицами, не имеющими ХГП (23,5%) (х2 =28,055, р<0,001). Генотип G/G чаще встречается среди здоровых (х2 = 45,489, р<0,001), а генотип А/ А - среди пациентов (х2 =14,858, р<0,001) (Рис.2). 10

Выявлено, что частота нормальных гомозигот выше у пациентов русской национальности (х2 =13,238, р<0,001), а гетерозигот - у бурят (X2 =4,437, р=0,035) (Рис. 2).

В итоге установлено, что у пациентов с ХГП обеих национальностей больше наблюдаются аномальные аллельные варианты гена IL-10 (G 1082А). Здоровые лица чаще являются носителями нормальных ал-лельных вариантов, чем больные в обеих этнических группах. Встречаемость генотипа G/G выше среди больных русской национальности, а генотипа G/T - среди пациентов бурятской национальности.

Полиморфизм IL-10 (С819Т)

Не обнаружено различий в распространенности аллельных вариантов гена IL-10 (С819Т) среди здоровых лиц обеих национальностей.

Выявлено, что в русской этнической группе нормальная аллель (С) больше распространена среди здоровых (83,3%), чем больных резидентов (76,3%) (х2 =4,141, р=0,042). Встречаемость патологической аллели (Т) выше у лиц с ХГП (23,7%) по сравнению с лицами без ХГП (16,7%) (х2 =4,141, р=0,042). С/С гомозиготы преобладают у здоровых представителей в отличие от больных русской национальности (X2 =4,322, р=0,038) (Рис. 3).

80

S0

40 20 0

ав Нормальные гомозиготы и Гетерозиготы § Аномальные гомозиготы

Примечание: * - статистически значимые различия по сравнению с группой здоровых; ♦> - статистически значимые различия между русскими и бурятами.

Рнс.З. Полиморфизм гена 1Ь-10(С819Т) среди резидентов Забайкальского края.

В бурятской этнической группе частота аллели С выше среди лиц без патологии пародонта (82,5%), чем среди лиц с наличием последней (63,5%) (X1 =17,364, р<0,001). В то время как распространенность аллели Т больше у больных (36,5%) по сравнению со здоровыми резидентами (17,5%) (X2 =17,364, р<0,001). Генотип С/С чаще встречается в группе контроля в отличие от группы пациентов (х2 =22,082, р<0,001) (Рис. 3).

Установлено, что в этническом аспекте нормальные гомозиготы и нормальная аллель больше распространены среди пациентов русской этнической группы (х2 =13,234, р<0,001; %г =9,022, р=0,003 соответственно), аномальная аллель - среди бурятской (х2 =9,022, р=0,003) (Рис. 3).

Таким образом, здоровые резиденты обеих наций чаще являются носителями нормальных аллельных вариантов гена IL-10 (С819Т), чем больные. Частота Т-аллели выше у лиц с ХГП в отличие от лиц без патологии пародонта в обеих этнических группах. Встречаемость аномальной аллели IL-10 (С819Т) больше среди больных бурятской национальности, чем русской.

Содержание цнтокинов и slgA, а-дефензинов, кателицидина

в ротовой жидкости больных ХГП и здоровых лиц русской и бурятской национальностей

Установлено, что у пациентов русской этнической группы уровень провоспалительных интерлейкинов выше (IL-lß, TNFa в 2 раза; IL-8 в 2,5 раза, р<0,001), а противовоспалительных - ниже (IL-4 в 1,6 раза, р<0,001; IL-10 в 1,2 раза, р=0,034), чем у здоровых резидентов.

У больных бурятской нации наблюдается такая же тенденция - повышение количества IL-lß в 1,9 раза (р=0,022), IL-8 в 1,7 раза (р=0,02), TNFa в 1,8 раза (р<0,001) и снижение IL-4 в 1,8 раза (р=0,027), ILIO в 1,6 раза (р=0,038) в отличие от лиц без патологии пародонта. Причем содержание IL-lß (р=0,041), IL-8 (р=0,047) больше среди пациентов бурятской национальности по сравнению с русскими.

Уровень slgA оказался в 1,3 раза (р=0,037), HNP 1-3 - в 2,2 раза (р<0,001), LL-37 - в 1,5 раза (р<0,001) выше в ротовой жидкости здоровых лиц, чем больных русской национальности.

У бурят отмечаются подобные различия: концентрация slgA в 1,4 раза (р=0,03), HNP 1-3 в 2 раза (р<0,001), LL-37 в 1,4 раза (р<0,001) больше у лиц без патологии пародонта в отличие от лиц с наличием последней. Более высокое содержание кателицидина выявлено у больных бурятской национальности, чем русской (р=0,044).

Следовательно, у пациентов с ХГП в обеих этнических группах установлена повышенная концентрация IL-lß, IL-8, TNFa и понижен-

ная - IL-4, IL-10, slgA, HNP 1-3, LL-37 по сравнению с показателями здоровых лиц.

Содержание цитокинов, slgA, а-дефеизппов, кателицидина в ротовой жццкостя и клинические показатели у больных ХГП в зависимости от аллельных вариантов гена IL-4 (С589Т)

В связи с тем, что у больных бурятской национальности отсутствовали лица, несущие нормальную аллель (С), нами не установлено различий в уровне цитокинов, иммуноглобулина и антимикробных пептидов (АМП), клинических показателях в зависимости от аллельных вариантов гена IL-4. У носителей полиморфной аллели (Т) IL-4 русской национальности выявлена большая концентрация провоспалительных цитокинов (IL-1(3 в 1,3 раза, р=0,047; IL-8 в 1,4 раза, р=0,045; TNFa в 1,3 раза, р=0,046) по сравнению с носителями нормальной аллели.

Нами не выявлено различий в клинических показателях между носителями вариантов аллелей IL-4 в обеих этнических группах.

В русской этнической группе содержание a-дефензинов в ротовой жидкости в 1,3 раза (р=0,009) ниже у больных, имеющих аномальную аллель, чем у лиц с отсутствием последней.

У пациентов, несущих полиморфную аллель гена IL-4 бурятской национальности, выявлено большее количество HNP 1-3, кателицидина по сравнению с таковыми русской национальности (р=0,039; р=0,037 соответственно).

Таким образом, носительство аномальной аллели IL-4 (С589Т) сопровождается увеличением количества провоспалительных цитокинов, снижением содержания a-дефензинов у больных русской национальности. В бурятской этнической группе уровень АМП выше у пациентов, которые несут полиморфный вариант аллели IL-4, в отличие от таковых русской группы.

Содержание цитокинов, slgA, a-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости и клинические показатели у больных ХГП в зависимости от аллельных вариантов гена IL-10 (G1082A)

В бурятской этнической группе индекс РМА выше в 1,25 раза у пациентов, несущих аномальную аллель (A) IL-10 (G 1082А) по сравнению с пациентами, несущими нормальную аллель (G) (р=0,042).

Установлено, что среди носителей G-аллели значения индекса гигиены OHI-S больше в 1,2 раза (р=0,045), а пародонтального индекса - в 1,5 раза (р—0,039) у больных бурятской национальности, чем русской.

пг/мп

Русские

и-1р 11-4

ОБ Нормальная алпепь

11-8 11.-10 ТНРо

Й2 Аномальная аллель

Примечание: * - статистически значимые различия между вариантами аллелей; •> - статистически значимые различия между русскими и бурятами.

Рис. 4. Уровень цитокинов в ротовой жидкости больных ХГП в зависимости от аллелей гена 1Ь-10 (ОЮ82А).

В группе больных ХГП русской национальности большее содержание в ротовой жидкости 1Ь-1р, 1Ь-8, ЮТа (в 2 раза, р<0,001), 1Ь-4 (в 2 раза, р=0,045), 1Ы0 (в 15 раз, р<0,001) выявлено у носителей полиморфной аллели, чем носителей нормальной аллели (Рис. 4).

У пациентов, имеющих полиморфизм гена 1Ь-10 бурятской национальности обнаружена более высокая концентрация ТОТа (в 1,2 раза, р=0,039) и низкая - 1Ь-10 (в 1,3 раза, р=0,011) по сравнению с лицами, не имеющими данного полиморфизма (Рис. 4).

Содержание в ротовой жидкости 1Ь-1Р, ТОТа в 2 раза (р<0,001), 11,-4 в 2,3 раза (р=0,037), 1Ь-10 в 12 раз (р<0,001) больше у бурят, которые несут (З-аллель, чем русских. Уровень 1Ь-10 выше в 1,6 раза у представителей европеоидной расы, которые имеют аномалию гена 1Ь-10 (в 1082А) в отличие от представителей монголоидной расы (р<0,001).

Концентрация а-дефензинов в 1,3 раза (р=0,023), кателицидина в 1,1 раза (р=0,042) выше у пациентов русской национальности, несущих нормальную аллель, чем мутантную.

В группе больных бурятской национальности содержание б^А, Н№ 1-3 в 1,2 раза (р=0,037, р=0,009 соответственно) ниже у носителей б-аллели гена 11.-10-1082, чем носителей А-аллели. Выявлено, что концентрация данных веществ выше в 1,3-1,5 раза (р=0,039, р<0,001) у лиц, которые несут полиморфные варианты гена 1Ь-10 (ОЮ82А) бурятской национальности по сравнению с русской.

В итоге, аномальная аллель гена 1Ь-10 (в 1082А) способствует повышению продукции 1Ь-10 у русских и его снижению - у бурят. При этом содержание в ротовой жидкости 1Ь-10 выше у пациентов русской национальности в отличие от пациентов бурятской национальности. Носительство полиморфизма 1Ь-10 сопровождается снижением концентрации а-дефензинов, кателицидина у русских и увеличением -б^А, НЫР 1 -3 у бурят. Более значительное содержание иммуноглобулина и АМП установлено у пациентов бурятской национальности, несущих аномальную аллель по сравнению с таковыми русской национальности.

Содержание цнтокннов, а-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости и клинические показатели у больных ХГП

в зависимости от аллельных вариантов гена ГЬ-10 (С819Т)

У пациентов бурятской национальности, несущих аномальную аллель (Т) 1Ь-10 (С819Т), индекс гигиены полости рта по Грину-Вермильону больше в 1,4 раза, чем у лиц, несущих нормальную аллель (С) (р--0,003). Данный показатель выше в 1,2 раза у русских носителей С-аллели по сравнению с бурятами (р=0,034).

В русской этнической группе уровень 1Ь-4 в 2,9 раза (р=0,022), 1Ь-10 в 3,3 раза (р<0,001) выше у лиц, которые несут полиморфную аллель в отличие от лиц, которые несут нормальную аллель. У пациентов, страдающих ХГП бурятской национальности концентрация ТОТа ниже в 1,3 раза у С-носителей, чем Т-носителей (р=0,031).

Установлено, что содержание 1Ь-8 больше в 1,4 раза у носителей патологической аллели монголоидной расы, чем европеоидной (р=0,048). Уровень 1Ь-4 выше в 3 раза (р=0,029), 1Ь-10 в 2 раза (р—0,028 ) у бурят, несущих нормальную аллель по сравнению с таковыми русскими.

В русской этнической группе а-дефензинов выявлено больше в 1,2 раза (р=0,046) у носителей С-аллели по сравнению с носителями Т-аллели. Аналогичная тенденция наблюдается в бурятской группе, где ШР 1-3 содержится больше в 1,2 раза (р=0,042) у лиц, которые имеют нормальную аллель, чем у лиц с аномальной аллелью.

Следовательно, в русской этнической группе аномальная аллель гена 1Ь-10 (С819Т) способствует повышению выработки 1Ь-10. У больных обеих национальностей уровень НИР 1-3 ниже у носителей полиморфной аллели по сравнению с носителями нормальной.

Сочетания полиморфных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С1082А), 1Ь-10 (С819Т) в русской и бурятской этнических группах

Частота сочетаний полиморфных вариантов трех генов (20%) выше среди больных, чем здоровых (7,3%) как в русской (х2=6,868, р=0,009), так и в бурятской этнических группах (51% и 13% соответственно; х2=16,263, р<0,001). А встречаемость комбинаций аномальных вариантов генов 11,-4,1Ь-10 больше у пациентов с ХГП бурятской национальности по сравнению с русской (х2=12,094, р<0,001).

11-10 11-4 11.-8 11-10 Т№а

¡Сочетание нормальных вариантов генов 0 Сочетание полиморфных вариантов генов

Примечание: * - статистически значимые различия между сочетаниями вариантов аллелей; •> - статистически значимые различия между русскими и бурятами.

Рис. 5. Уровень цитокинов в ротовой жидкости больных ХГП в зависимости от сочетания полиморфных вариантов генов 1Ь4 (С589Т), 1Ы0 №1082А), 1Ы0 (С819Т).

У больных ХГП русской национальности более высокие показатели цитокинов (IL-ip, TNFa в 2 раза, IL-4 в 6,4 раза, IL-10 в 3,5 раза) выявлены при сочетании полиморфных вариантов генов, чем нормальных (р<0,001) (Рис. 5).

В группе пациентов бурятской национальности уровни всех интер-лейкинов (IL-ip, IL-8, TNFa в 1,8-1,9 раз, IL-4 в 2,5 раза, IL-10 в 2,3 раза) также выше у лиц, несущих комбинации аномальных аллелей (р<0,001) (Рис.5).

Содержание в ротовой жидкости IL-10, IL-8, TNFa в 1,4 раза, IL-4 в 2 раза больше у носителей сочетаний нормальных вариантов генов монголоидной расы, чем европеоидной. Концентрация провоспалитель-ных цитокинов ниже в 1,2 раза у русских с комбинациями полиморфизмов, чем бурят. Однако, уровень IL-10 выше в ротовой жидкости лиц, которые несут сочетания аномальных аллелей генов IL-4, IL-10 русской национальности по сравнению с бурятской (р=0,030) (Рис. 5).

В группе больных русской национальности пародонтальный индекс больше в 1,36 раз у лиц с комбинацией полиморфных вариантов аллелей (р=0,022). У монголоидов папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс в 1,3 раза (р=0,009) и индекс гигиены полости рта в 1,4 раза (р=0,023) выше у носителей сочетанных полиморфизмов генов. Индексы РМА в 1,2 раза (р=0,047) и OHI-S в 1,36 раза (р=0,049) больше у русских, а PI в 1,3 раза (р=0,041) - у бурят, несущих комбинации нормальных аллелей.

У больных русской этнической группы уровень slgA в 1,2 раза (р=0,043), HNP 1-3 в 1,6 раза (р<0,001), LL-37 в 1,3 раза (р=0,024) выше у носителей комбинаций нормальных аллелей генов IL-4, IL-10, чем носителей комбинаций мутантных аллелей.

В бурятской этнической группе отмечается аналогичная тенденция: уровень slgA в 1,2 раза (р=0,034), a-дефензинов и кателицидина в 1,3 раза (р=0,007, р=0,004 соответственно) выше у пациентов, несущих сочетания нормальных вариантов генов по сравнению с несущими сочетания полиморфных вариантов.

В этническом плане концентрация данных пептидов выше у бурят, имеющих комбинации полиморфизмов генов, чем таковых русских. Более высокий уровень кателицидина установлен у носителей сочетаний нормальных аллелей бурятской национальности по сравнению с русской (р=0,045).

В итоге, при сочетании полиморфных вариантов генов у пациентов с ХГП обеих этнических групп наблюдается увеличение как про-, так и противовоспалительного пула цитокинов, причем провоспалитель-ных цитокинов больше у бурят, чем русских. Однако, содержание в

ротовой жидкости 1Ь-10 выше у больных русской национальности, имеющих комбинации полиморфизмов генов 1Ь-4, 1Ь-10 по сравнению с таковыми бурятской национальности.

В обеих этнических группах уровень иммуноглобулина, дефензинов, кателицидина ниже у лиц с сочетанием аномальных аллелей генов. При этом среди последних, концентрация данных веществ выше у бальных бурятской национальности в отличие от больных русской национальности.

Для оценки патогенетической роли изучаемых параметров в развитии хронического воспаления пародонта, мы провели многофакторный регрессионный анализ. В математическую модель были включены следующие показатели: пародонтальный индекс (Р1), генотипы 1Ь-4 (С589Т), 11.-10 (ОЮ82А), 1Ь-10 (С819Т), интерлейкины (1ЫР, 1Ь-8, 1Ь-4, 1Ь-10, ЮТа), секреторный иммуноглобулин А, антимикробные протеины (а-дефензины, кателицидин) курение, пол.

Выявлено, что в русской этнической группе ведущими факторами, способствующими развитию пародонтита являются наличие полиморфных гомозигот (35%) и гетерозигот (22%) гена 1Ь-10(01082А), генотип Т/Т (20%) 1Ь-10 (С819Т). В бурятской группе к таким факторам относят аномальные гомозиготы гена 1Ь-10 (01082А) (31%), 1Ы0 (С819Т) (20%), курение (17%) (Рис.6).

Русские Буряты

Генотип А/А !L-10(G1082A)

Генотип G/A IL-10 (G1092А) Генотип T/T IL-10 (C819T)

IL-10 HNP1-3

н Генотип А/А 11.-10 (31082А)

Генотип Т/Т 1Ы0{С819Т)

Курение

И-1Р

ННР1-3 И-37

-о,в

o,s

•ол

о,*

>-•-4 beta - регрессионный коэффициент

Рис. 6. Многофакторная модель прогнозирования развития ХГП.

Таким образом, наличие сочетания полиморфизмов генов IL-4 и IL-10 в наибольшей степени влияет на изменение иммунологических и клинических показателей. Установлено, что при комбинации полиморфных вариантов генов выработка IL-10 выше, a slgA, HNP 1-3, LL-37 ниже у пациентов русской национальности, чем бурятской. Генотипы А/А, G/A IL-10(G1082A) и Т/Т IL-10(C819T) играют важную патогенетическую роль в изменении иммунологической реактивности при ХГП у русских. В то время как гомозиготное носительство аномальной аллели гена IL-10 (G1082A), IL-10(C819T) вносит наибольший вклад в развитие данного заболевания у бурят. В итоге, полиморфизмы генов IL-10(C819T), IL-10(G1082A), сочетаний генов IL-4, IL-10 обуславливают снижение защитных функций полости рта в большей степени у представителей русской этнической группы, чем бурятской.

ВЫВОДЫ:

1. Больные хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести в обеих этнических группах чаще являются носителями полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С.819Т) и их комбинаций (24-59%), чем здоровые (17-31%).

2. Частота встречаемости аномальной аллели IL-4 (С589Т) в 1,9 раза, IL-10 (С819Т) в 1,5 раза, а также сочетаний полиморфных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т) в 1,5 раза выше среди больных ХГП бурятской национальности по сравнению с больными русской национальности.

3. У пациентов русской национальности с комбинацией полиморфных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т) па-родонтальный индекс больше в 1,4 раза, чем у лиц без указанных аномалий. Данный показатель выше у больных, несущих нормальную аллель IL-10 (G 1082А) в 1,5 раза и сочетания нормальных вариантов аллелей генов IL-4, IL-10 в 1,3 раза бурятской национальности по сравнению с русской.

4. У лиц, страдающих ХГП обеих этнических групп содержание про-воспалительных цитокинов выше в 1,7-2,5 раза, а противовоспалительных - ниже в 1,2-1,8 раз, чем у здоровых резидентов. Концентрация IL-10 в 2-3 раза, IL-4 в 3-15 раз больше в ротовой жидкости больных русской национальности, имеющих полиморфизмы молекул IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т). Носительство аномальной аллели IL-10 (G1Q82A) сопровождается снижением уровня IL-10 в 1,3 раза у пациентов бурятской национальности.

5. При сочетании полиморфных вариантов аллелей генов IL-4 (С589Т), IL-10 (Gl082А), IL-10 (С819Т) в ротовой жидкости пациентов обеих национальностей увеличивается концентрация про- и противовоспалительных цитокинов. При этом уровень IL-10 выше в 1,2 раза у

русских, чем у бурят.

6. У больных обеих наций содержание в ротовой жидкости slgA в 1,3-1,4 раза, а-дефензинов в 2-2,2 раза, кателицидина LL-37 в 1,4-1,5 раза ниже, чем у здоровых лиц. В обеих этнических группах при наличии нормальной аллели генов IL-4, IL-10 и их сочетаний отмечается более высокая концентрация данных веществ по сравнению с наличием полиморфных аллелей генов и их сочетаний. Носительство немутантной аллели IL-10 (G1082A) у пациентов монголоидной расы сопровождается снижением в 1,2 раза уровня данных белков в отличие от носи-тельства мутантной аллели. При комбинации полиморфных вариантов генов IL-4, IL-10 содержание slgA в 1,2 раза, HNP1-3 в 1,5 раза больше у пациентов бурятской национальности, чем русской.

7. Ведущими факторами развития хронического генерализованного па-родонтита у русских являются генотипы А/А (35%), G/A (22%) IL-10(G1082A), Т/Т 1L-10(C819T) (20%), у бурят - гомозиготы'А/А IL-10(G1082A) (31%), Т/Т IL-10(C819T) (20%), курение (17%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

С целью повышения ранней диагностики и прогнозирования ХГП следует включать исследование полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), ILIO (G1082A), IL-10 (С819Т) в алгоритм обследования больных с начальными проявлениями воспалительных процессов в тканях пародонта. Лицам с тяжелыми клиническими проявлениями данного заболевания рекомендуется проводить медико-генетическое консультирование.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Доржиева Н.Э. Полиморфизмы некоторых цитокинов при хроническом пародонтите в различных этнических группах / Н.Э. Доржиева, Ю.А. Витковский // Забайкальский медицинский вестник. - 2010.

- № 4. - С.30-35.

2. Доржиева Н.Э. Полиморфизм гена IL-10 (С819Т) у больных с воспалительными заболеваниями пародонта в Забайкалье / Н.Э. Доржиева, Ю.А. Витковский, Л.Р. Судакова // Вестник Российского государственного медицинского университета, Специальный выпуск.

- 2011. - №1. - С.176.

3. Полиморфизм гена 1Ь-10 (С819Т) у больных с воспалительными заболеваниями пародоита в Забайкальском крае [Электронный ресурс] / Н.Э. Доржнева, Ю.А. Внтковский, Л.Р. Суда-кова, О.Ф. Дагбаева // Забайкальский медицинский вестник. -2011. - №1. -С.44-48. - Режим доступа: http://medacadem.chita.ru/ 2шу (22 марта 2011).

4. Доржиева Н.Э. Полиморфизм гена 1Ь-4 (С589Т) у больных с воспалительными заболеваниями пародонта русской и бурятской национальностей в Забайкальском крае / Н.Э. Доржиева, Ю.А. Витковский // Врач-аспнрант. - 2011. - №3(46). - С.82-87.

5. Доржиева Н.Э. Аллельный полиморфизм гена 1Ь-4 (С589Т) у резидентов Забайкальского края с хроническим пародонтитом / Н.Э. Доржиева, Ю.А. Витковский, Л.Р. Судакова // Кубанский научный медицинский вестник. - 2011. - №3(126). - С.70-73.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

- антимикробные пептиды

- воспалительные заболевания пародонта

- дезоксирибонуклеиновая кислота

- пародонтит

- полимеразная цепная реакция

- хронический генерализованный пародонтит

- секреторный иммуноглобулин А

- интерлейкин

- а-дефензин

- кателицидин

- упрощенный индекс гигиены полости рта по Огееп-У/егппШоп

-пародонтальный индекс

- папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс

- Т-лимфоцит хелпер

- фактор некроза опухолей а

АМП ВЗП ДНК пт

ПЦР

хгп

Б^А 1Ь

НИР

1Х-37

ОШ-Б

Р1

РМА ТЬ

ЮТос

Лицензия ИД №03077 от 23.10.00. Подписано в печать 10.11.2011. Бумага офсетная. Гарнитура Times NewRoman Формат 60 х 84 7М. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100. Заказ № 179/2011.

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул. Горького, 39а.

Актуальность проблемы

Среди основных стоматологических заболеваний хронический генерализованный пародонтит (ХГП) занимает 2-е место по частоте после кариеса зубов [107]. Воспалительно-деструктивные процессы в зубочелюстной системе и последующая потеря зубов вследствие ХГП ведут к снижению жевательной функции, психоэмоциональной неустойчивости пациентов, к нарушению секреторно-сократительной функции желудочно-кишечного тракта, эндокринным, сердечно-сосудистым расстройствам и т.д. [26, 27, 54, 229]. Высокая распространенность пародонтита (ПТ) во всем мире, рост его заболеваемости, отрицательное влияние на качество жизни, сложность патогенеза, тяжесть и упорность течения, длительная реабилитация, серьезные медико-социальные последствия определяют значимость данной проблемы [111].

Пародонтит, как и многие распространенные заболевания, относится к сложным мультифакторным болезням. Характерной чертой данной патологии является то, что в начале своего развития она имеет мало выраженную клиническую картину, медленно прогрессирует и со временем приобретает хроническое течение. Хотя в патогенезе ПТ основное внимание уделяется пародонтопатогенным бактериям и факторам окружающей среды (таким как курение, стресс и др.), однако роль генетических факторов очевидна [228].

Взаимодействие между организмом и бактериями полости рта (РогрЬугошопаз АсйпоЬасШш асйпотусе1етсоткап8, Ва^егхнёеБ йзгзуЛш и др.) является важным для понимания патогенеза ПТ. Эти микроорганизмы инициируют и неоднократно воздействуют на ткани пародонта, приводя в конечном итоге к их деструкции и потере зубов. Однако в большинстве случаев наличие одних бактерий не приводит к пародонтальному разрушению. Следовательно, пародонтопатогены являются существенными факторами для начала развития заболевания, но их количество и типы недостаточны для объяснения различий в тяжести клинической проявлений [220]. Каждый человек имеет индивидуальную ответную реакцию на бактериальное воздействие, которая определяет его восприимчивость к развитию болезни. Некоторые лица резистентны к данной патологии и у них она не развивается [221]. .

В настоящее время существует большое количество статей, посвященных роли генов и их полиморфизмов в ответной реакции организма при ПТ [94, 121, 123, 153]. Генетические полиморфизмы могут в некоторых ситуациях вызывать изменения в белке или его экспрессии, что приводит к изменениям во врожденном и приобретенном иммунитете [221].

Перспективной группой генов-кандидатов, которые потенциально могут быть связаны с формированием риска ПТ, являются гены цитокинов, сравнительной исследование которых в разных популяциях мира признается весьма актуальным в стоматологии [220, 221].

Известно, что цитокины - ключевые факторы, запускающие воспалительные реакции. При наличии генетически обусловленных нарушений в иммунной системе человека происходит избыточный синтез интерлейкинов, воздействие которых приводит к чрезвычайно быстрому развитию воспалительного процесса в мягких и костных тканях пародонта даже при отсутствии в очаге воспаления пародонтопатогенов [221]. Полиморфизмы цитокинов могут быть связаны с восприимчивостью, степенью тяжести и клиническими исходами ПТ [239].

Следует отметить, что в настоящее время нет сведений о достоверных маркерах для оценки предрасположенности человека к развитию ХГП и определения прогноза заболевания. Это затрудняет раннюю диагностику, и как следствие, эффективную своевременную профилактику и лечение. Также не в полной мере изучена эпидемиология, этническая и расовая принадлежность данной патологии, а имеющиеся данные о вкладе разных аллелей генов интерлейкинов в развитие заболевания остаются противоречивыми. В связи с этим, исследование роли генетических полиморфизмов цитокинов в развитии ПТ является актуальной задачей, решение которой позволит углубить представления о патогенезе и разработать новые эффективные методы прогнозирования и ранней диагностики заболевания.

Цель и задачи исследования

Основной целью исследования явилось изучение частоты аномальных аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) и оценка их клинико-прогностического значения для развития хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести у лиц русской и бурятской этнических групп Забайкальского края.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Выявить и оценить частоту встречаемости аномальных аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082А), их сочетаний среди больных хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести и практически здоровых резидентов в русской и бурятской этнических группах.

2. Изучить клинические параметры у лиц с различными аллельными вариантами генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082А) и их комбинациями в этнических группах.

3. Сравнить содержание провоспалительных IL-ip, TNFa, IL-8 и противовоспалительных цитокинов IL-4, IL-10 в ротовой жидкости больных ХГП и здоровых лиц с учетом различных аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A), их сочетаний в русской и бурятской этнических группах.

4. Определить содержание slgA, a-дефензинов (HNP 1-3), кателицидина (LL-37) в ротовой жидкости резидентов русской и бурятской национальностей в зависимости от аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082А) и их комбинаций.

Научная новизна

Впервые установлена частота встречаемости аномальных аллельных вариантов генов 1Ь-4 (С589Т), 11.-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А) среди больных хроническим генерализованным пародонтитом средней степени и здоровых лиц, проживающих на территории Забайкальского края, отмечены этнические особенности носительства аномалий.

Выявлено, что сочетание полиморфизмов генов 1Ь-4 и 1Ь-10 сопровождается повышенной продукцией 1Ь-10, 1Ь-4, 1Ь-1(3, 1Ь-8, Т№а, снижением содержания э^А, а-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости в большей степени у пациентов русской национальности, чем у лиц бурятской национальности.

Впервые обнаружено, что присутствие полиморфного аллельного варианта гена 1Ь-10 (ОЮ82А) у больных бурятской национальности обуславливает снижение уровня 1Ь-10 и увеличение - б^А, НИР 1-3,1Х-37 в ротовой жидкости.

Установлено, что генотипы А/А и О/А 1Ь-10 (в 1082А), Т/Т 1Ь-10 (С819Т) играют важную роль в развитии пародонтита у русских. Гомозиготы по аномальной аллели 1Ь-10(01082А), 1Ь-10 (С819Т) вносят наибольший вклад в патогенез данного заболевания у бурят.

Теоретическая и практическая значимость работы

В ходе исследования установлены новые данные о распространенности различных аллельных вариантов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (С819Т), 1Ь-10 (01082А) в Забайкальском крае, а также об их влиянии на развитие хронического генерализованного пародонтита средней степени в русской и бурятской этнических группах.

Полученные результаты могут послужить основой для разработки новых подходов к профилактике, прогнозированию и ранней диагностике этой патологии в регионе. Выявленные сведения о наличии полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) могут быть включены в генетический паспорт индивидуумов и совместно с другими полиморфизмами использоваться для оценки риска формирования ХГП.

Внедрение результатов работы

Теоретические положения, раскрываемые в диссертации, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии, хирургической стоматологии ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия.

Апробация диссертации

Результаты исследований доложены на VI Международной Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2011), заседании Читинского отделения физиологического общества имени И.П. Павлова (Чита, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распределение полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), ILIO (G1082A) у резидентов Забайкальского края имеет этнические особенности. Распространенность аномальных аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) и их сочетаний выше среди больных бурятской национальности, чем русской.

2. Содержание цитокинов в ротовой жидкости зависит от носительства аллельных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (С819Т), IL-10 (G1082A) и их сочетаний у больных хроническим генерализованным пародонтитом в русской и бурятской этнических группах. На клинические показатели влияет наличие полиморфизма генов 11-4 (С589Т), ІЬ-10 (С819Т), 1Ь-10 (ОЮ82А), их комбинаций.

3. Концентрация б^А, а-дефензинов, кателицидина в ротовой жидкости зависит от носительства полиморфных вариантов генов ІЬ-4, 1Ь-10 и их сочетаний в русской и бурятской этнических группах. Ведущими факторами патогенеза хронического пародонтита у русских являются генотипы А/А, в/А ІЬ-10 (в1082А), Т/Т ІЬ-10 (С819Т), у бурят - гомозиготы А/А 1Ь-10 (в1082А), Т/Т ІЬ-10 (С819Т), курение.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 273 работы, из них - 141 отечественных и 132 зарубежных авторов, иллюстрирована 45 таблицами, 3 рисунками.

ВЫВОДЫ:

1. Больные хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести в обеих этнических группах чаще являются носителями полиморфизмов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т) и их комбинаций (24-59%), чем здоровые (17-31%).

2. Частота встречаемости аномальной аллели IL-4 (С589Т) в 1,9 раза, IL-10 (С819Т) в 1,5 раза, а также сочетаний полиморфных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (Gl082A), IL-10 (С819Т) в 1,5 раза выше среди больных ХГП бурятской национальности по сравнению с больными русской национальности.

3. У пациентов русской национальности с комбинацией полиморфных вариантов генов IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A), IL-10 (С819Т) пародонтальный индекс больше в 1,4 раза, чем у лиц без указанных аномалий. Данный показатель выше у больных, несущих нормальную аллель IL-10 (Gl082А) в 1,5 раза и сочетания нормальных вариантов аллелей генов IL-4, IL-10 в 1,3 раза бурятской национальности по сравнению с русской.

4. У лиц, страдающих ХГП обеих этнических групп содержание провоспалительных цитокинов выше в 1,7-2,5 раза, а противовоспалительных - ниже в 1,2-1,8 раз, чем у здоровых резидентов. о

Концентрация IL-10 в 2-3 раза, IL-4 в 3-15 раз больше в ротовой жидкости больных русской национальности, имеющих полиморфизмы молекул IL-10 (Gl082A), IL-10 (С819Т). Носительство аномальной аллели IL-10 (G1082A) сопровождается снижением уровня IL-10 в 1,3 раза у пациентов бурятской национальности.

5. При сочетании полиморфных вариантов аллелей генов IL-4 (С589Т), ILIO (G1082A), IL-10 (С819Т) в ротовой жидкости пациентов обеих национальностей увеличивается концентрация про- и противовоспалительных цитокинов. При этом уровень 1Ь-10 выше в 1,2 раза у русских, чем у бурят.

6. У больных обеих наций содержание в ротовой жидкости б^А в 1,3-1,4 раза, а-дефензинов в 2-2,2 раза, кателицидина ЬЬ-37 в 1,4-1,5 раза ниже, чем у здоровых лиц. В обеих этнических группах при наличии нормальной аллели генов 1Ь-4, 1Ь-10 и их сочетаний отмечается более высокая концентрация данных веществ по сравнению с наличием полиморфных аллелей генов и их сочетаний. Носительство немутантной аллели 1Ь-10 (ОЮ82А) у пациентов монголоидной расы сопровождается снижением в 1,2 раза уровня данных белков в отличие от носительства мутантной аллели. При комбинации полиморфных вариантов генов 1Ь-4, 1Ь-10 содержание б^А в 1,2 раза, НМР1-3 в 1,5 раза больше у пациентов бурятской национальности, чем русской.

7. Ведущими факторами развития хронического генерализованного пародонтита у русских являются генотипы А/А (35%), О/А (22%) 1Ь-10 (01082А), Т/Т 1Ь-10 (С819Т) (20%), у бурят - гомозиготы А/А 1Ь-10 (ОЮ82А) (31%), Т/Т 1Ь-10 (С819Т) (20%), курение (17%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью повышения ранней диагностики и прогнозирования ХГП следует включать исследование полиморфизмов генов 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (в1082А), 1Ь-10 (С819Т) в алгоритм обследования больных с начальными проявлениями воспалительных процессов в тканях пародонта. Лицам с тяжелыми клиническими проявлениями данного заболевания рекомендуется проводить медико-генетическое консультирование.