Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Ресурсная оценка лекарственных растений Республики Ингушетии

На правах рукописи

005007691

ДОБРИЕВА ЗАИРАУСМАНОВНА

РЕСУРСНАЯ ОЦЕНКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ РЕСПУБЛИКИ ИНГУШЕТИИ

Сп ециа ль но сть: 14.04.02 -фармацевтическая химия, фарш ко гнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 2 ЯНВ 2ь\2

Пятигорск, 2012

005007691

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Мелик-Гусейнов Валерий Владимирович

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор фармацевтических наук, профессор Коновалов Дмитрий Алексеевич

кандидат фармацевтических наук Козлова Виктория Вячеславовна

ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрав-соцразвйтия

Защита состоится 20.01.2012г. в 9° часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.069.01 при ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России, Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Автореферат разослан «20» декабря 2011г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета

Е.В. Компанцева

Актуальность темы. Всестороннее изучение мало исследованных флор отдельных регионов, в частности флоры Ингушетии, на современном этапе развития, когда человек вовлекает в производство все новые природные территории и объекты, представляется важной ботанико-географической и общеэкологической проблемой. Основной целью флористических исследований, наряду с получением возможно полных сведений о видовом составе растений и их естественных структурных признаках, должно быть выявление индивидуальных особенностей и тенденций изменения флоры. Такое изучение является основой рационального использования растительных ресурсов, решения многих хозяйственно важных проблем - выявления новых источников и ресурсов: пищевых, лекарственных, кормовых, декоративных и других полезных растений.

Флора Ингушетии отличается своим богатством, что обусловлено рядом причин: географическим положением, сложностью рельефа, разнообразием климата и почв. В ее составе, по сведениям некоторых авторов, насчитывается от 1500 до 2000 видов высших растений, из них свыше 400 - относят к лекарственным, 64 из которых применяются в научной медицине.

В народной медицине Ингушетии многие из этих растений входят в состав лечебных сборов и травяных ванн, применяемых при самых различных заболеваниях. Однако бесконтрольный сбор, а затем и реализация целебных растений наносит значительный урон флоре республики. В то же время грамотная организации этого процесса может способствовать решению проблем социально-экономического развития региона.

Актуальность предпринятого исследования обусловлена также ограниченностью проводимых ресурсоведческих работ за последнее время. На сегодняшний день отсутствуют аналитические сведения по запасам дикорастущих растений. Отдельные исследования, выполненные на территории бывшей ЧИАССР специалистами кафедры фармакогнозии Пятигорского фармацевтического института в 1975-1990гг., имели фрагментарный характер и в большей части относились к территории современной Чеченской республики. Ранее были изданы: «Лекарственная флора Кавказа» (А.И. Шретер, Д.А. Муравьева) и две монографии,

посвященные изучению флоры Чечено-Ингушской АССР (1960; 1982). В настоящее время некоторыми авторами были проведены исследования флоры отдельных районов Ингушетии.

Сегодня аптечная сеть и химико-фармацевтическая промышленность РФ, в том числе Республики Ингушетия, не удовлетворяют свои потребности в сырье многих культивируемых и дикорастущих лекарственных растений. Поэтому для решения задач, связанных с рациональным использованием и практической охраной растительных ресурсов, необходимы достоверные сведения о реальном состоянии видов природных популяций. В этой связи представляет особую значимость изучение сырьевой базы ЛРС всех четырёх районов республики, позволяющее оценить запасы, определить оптимальные объёмы заготовок, доброкачественность сырья, а также обеспечить природоохранные мероприятия при эксплуатации зарослей ценных лекарственных видов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась комплексная оценка ресурсов наиболее перспективных лекарственных растений (ЛР) Республики Ингушетия - горца почечуйного, крапивы двудомной, пустырника пятилопастного, тимьяна Маршалла, репейничка аптечного и 5 видов рода шиповник: ш. собачьего (обыкновенного), ш. щитконосного, ш. грузинского, ш. острозубого, ш. колючейшего, а также возможность использования в качестве нового вида отечественного сырья травы репейничка аптечного для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции ОАО «Флора Кавказа».

Для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

♦ обобщить и проанализировать литературные данные о современном состоянии лекарственной флоры Республики Ингушетия;

♦ провести изучение ресурсов пяти видов шиповника и пяти наиболее перспективных видов ЛР Назрановского, Сунженского, Малгобекского и Джейрах-ского районов Ингушетии, рассчитать биологический, эксплуатационный запасы и объём возможных ежегодных заготовок;

♦ составить рекомендации по рациональной эксплуатации зарослей исследуемых ЛР;

♦ на основе результатов качественного и количественного анализа биологически активных веществ дать комплексную оценку качества JIPC;

♦ составить карты-схемы расположения зарослей наиболее перспективных для заготовки JIP в четырёх районах республики;

♦ полученные результаты исследования ресурсов наиболее перспективных JIP представить в Министерство здравоохранения, Управление по охране окружающей среды, Министерство градостроительства и развития инфраструктуры республики Ингушетия для создания Кадастра дикорастущих ЛР;

♦ провести стандартизацию образцов сырья репейничка аптечного для разработки проекта фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Репейничка аптечного трава».

Научная новизна. Впервые проведён комплекс ресурсоведческих, фито-химических исследований для оценки состояния зарослей пяти видов шиповника и пяти перспективных для заготовки JIP в Назрановском, Сунженском, Малго-бекском и Джейрахском районах Республики Ингушетия.

Проведена таксация перспективных зарослей JIP, позволившая выявить потенциальные участки для проведения заготовок в промышленном масштабе.

Предложены основные критерии оценки качества и идентификации изучаемого сырья по показателям подлинности и доброкачественности.

Для растений рода Rosa L. определены три основных вида: R. canina L., R. corymbifera Borkh. и R. spinosissima L. (R. pimpinellifolia L.), перспективных для промышленной заготовки плодов шиповника.

Установлена динамика накопления биологически активных веществ (БАВ) - витамина С, каротиноидов и дубильных веществ в плодах шиповников, в зависимости от высоты их произрастания.

Предложены методики стандартизации сырья травы репейничка аптечного, позволяющие объективно оценивать его доброкачественность. Результаты исследований положены в основу проекта ФСП <сРепейничка аптечного трава».

Практическая значимость. Проведенные исследования позволили выявить запасы сырья в РИ и расширить сырьевую базу JIP для научной медицины.

Изученные растения включены в Кадастр дикорастущих растений, рекомендуемых для промышленной заготовки в четырёх районах Республики Ингушетия.

Обобщены сведения о распространении, биологическом и эксплуатационном запасах, а также об объёмах возможных ежегодных заготовок сырья: травы горца почечуйного, пустырника пятилопастного, репейничка аптечного, тимьяна Маршалла, листьев крапивы двудомной и плодов шиповника в РИ.

Составлены карты-схемы местонахождения зарослей шести наиболее перспективных ЛР для промышленной заготовки в Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрахском районах РИ.

Разработаны инструкции по заготовке и сушке сырья, а также даны рекомендации по рациональной эксплуатации дикорастущих зарослей изучаемых растений.

Внедрение результатов исследования. Разработанный проект ФСП «Репейничка аптечного трава» и пояснительная записка, позволяющие использовать траву репейничка аптечного как перспективный вид для расширения номенклатуры выпускаемой ОАО «Флора Кавказа» (Россия) продукции в качестве нового лекарственного растительного сырья, направлены для рассмотрения и утверждения в Управление регистрации лекарственных препаратов Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития.

Результаты исследования шести видов дикорастущих ЛР, сведения об объёмах возможных ежегодных заготовок в четырёх районах Ингушетии, а также рекомендации по их рациональному использованию представлены в Комитет по охране окружающей среды и экологии, а также в Министерство здравоохранения республики.

Результаты ресурсоведческого и фотохимического исследования внедрены и используются в учебном процессе биологического факультета Ингушского государственного университета.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом исследовательских работ кафедры фармации факультета ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая государственная академия Росздрава» (номер государственной

регистрации 01.2.00100455).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на I фитотерапевтическом съезде (Москва, 2008г.), XI и XII Международных конференциях «Биологическое разнообразие Кавказа» (Махачкала-Магас, 2009-2010гг.), научной конференции ПятГФА (2010г.). По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в их числе, 1 - монография и 2 статьи в журнале, рекомендованным ВАК.

Положения, выдвигаемые на защиту:

♦ результаты ресурсоведческих исследований горца почечуйного, пустырника пятилопастного, репейничка аптечного, тимьяна Маршалла, крапивы двудомной и шиповников в Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрах-ском районах Республики Ингушетия;

♦ данные о комплексной оценке растительного сырья, включающей фито-химический и микробиологический анализы всех изучаемых видов;

♦ рекомендации по их рациональному использованию в четырёх районах республики Ингушетия;

♦ материалы по разработке проекта фармакопейной статьи предприятия на репейничка аптечного траву.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части, включающей 5 глав, обсуждения результатов и выводов, списка литературы (181 источника, из них 35 на иностранном языке), приложения. Диссертация содержит 33 таблицы, 32 рисунка, 21 фотографию и 9 формул.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Ресурсоведческие исследования дикорастущей лекарственной флоры На-

зрановского, Сунженского, Малгобекского и Джейрахского районов республики проводились совместно с сотрудниками и студентами кафедры биологии Ингушского государственного университета (2007-2010 гг.).

Объектами исследования являлись фармакопейные виды ЛР, произрастающие на территории 4-х районов Ингушетии: горец почечуйный, крапива двудомная, пустырник пятилопастной, тимьян Маршалла (используется наравне с тимь-

7

яном ползучим), виды рода шиповник (ш. собачий, ш. щитконосный, ш. грузинский, ш. острозубый и ш. колгочейший), а также не официнапьное растение - ре-пейничек аптечный.

Собранное сырьё высушивали согласно инструкции по заготовке и использовали для оценки его доброкачественности и чистоты. Всего проанализировано 88 образцов ЛРС. Выявление массивов для возможных заготовок ЛР вели на основе изучения их фитоценотической приуроченности; сведений о местах их произрастания, имеющиеся у заготовителей, лесников и местного населения. В работе применялись административные и геоботанические карты районов РИ, планы лесонасаждений по лесхозам и лесничествам, таксационные описания лесов.

Определение запасов ЛРС проводили общепринятыми методами. Запас ЛРС на конкретных зарослях рассчитывали как произведение средней плотности запаса сырья на общую площадь заросли (биологический запас). Объем возможной ежегодной заготовки сырья рассчитывали делением эксплуатационного запаса сырья на оборот заготовки, включающий год заготовки и продолжительность периода восстановления заросли.

Анализ ЛРС на содержание влаги, золы, экстрактивных веществ, а также аскорбиновой кислоты, каротиноидов, дубильных веществ в плодах шиповника проводили по методикам ГФ XII издания.

Содержание флавоноидов в траве репейничка аптечного определяли с использованием дифференциальной спектрофотометрии, модифицированного нами для данного сырья. Оптическая плотность окрашенного комплекса, полученного по реакции флавоноидов с 2% раствором алюминия хлорида, измерялась с помощью спектрофотометра СФ-2000.

Определение микробиологической чистоты проводили по методике ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств».

Экологическую оценку сырья проводили по фармакопейной методике (ГФ XII) в зольном остатке после сжигания сырья, радионуклеиды определяли по естественному гамма-фону ЛРС. Количество тяжёлых металлов (цинк, свинец, кадмий, медь) определяли атомно-адсорбционным методом по ГОСТ 30178, мышья-

ка по ГОСТ 26930-86.

ФЛОРИСТИЧЕСКИЕ И РЕСУРСОВЕДЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЧЕТЫРЁХ РАЙОНОВ ИНГУШЕТИИ

Установление хозяйственно-продуктивных зарослей начали с изучения антропогенной нагрузки. Выявлено, что она в РИ идет по нескольким направлениям: в результате сельскохозяйственного воздействия около 40% всей площади степной зоны (Назрановский, Малгобекский и северная часть Сунженского районов) в настоящее время составляют пахотные земли. Огромные массивы вовлечены в действие животноводческого комплекса. Техногенное воздействие (нефте-и газопроводы, заводы химреагентов и т.д.) привело к трансформации природных экосистем. Участившиеся пожары и рекреационная зона также имеют значительные масштабы. Таким образом, можно констатировать, что в РИ сохранились нетронутыми ограниченные территории предгорной, внутренне горной и высокогорной частей. В целях охраны, ограничения эксплуатации растительных ресурсов и антропогенного влияния созданы государственные учреждения - Джейрах-ское, Малгобекское, Назрановское и Сунженское лесничества.

Ресурсное обследование изучаемых районов включало эколого-ценотическую характеристику территории, оценку урожайности, биологического и эксплуатационного запасов, влияние отдельных факторов местообитания на продуктивность зарослей.

Горец почечуйный (Polygonum persicaria L.) - встречается в РИ на увлажнённых лесных просеках и заболоченных выгонах, прилегающих к сельскохозяйственным постройкам. Плотность его произрастания варьирует, максимальная отмечена в чистых зарослях близ сельскохозяйственных построек, минимальная -в разнотравных ассоциациях. Общий объём возможных ежегодных заготовок воздушно-сухого сырья травы горца почечуйного с учётом восстановления зарослей в 2 года в РИ составил 5,3 т (таблица 1).

Крапива двудомная (Urtica dioica L.) распространена в РИ повсеместно -на выгонах, берегах рек, вырубах, опушках лесов. Она отмечена в оврагах, днищах мелких балок, в лесозащитных полосах вдоль дорог, а также в пойменных предгорных и горных лесах, от низменности до 2300 м над ур. м. В травостое

создаёт обычно основной фон. Наибольшая плотность запаса листьев крапивы двудомной отмечена в «чистых» зарослях на местах заброшенного жилья, в сильно увлажнённых оврагах и лощинах. Минимальная плотность обнаружена на участках вдоль лесозащитной полосы, на злаково-крапивных лугах.

Всего на территории республики в год можно заготавливать до 4,9 т воздушно-сухих листьев крапивы двудомной (таблица 1).

Таблица 1 • Сводные данные о зарослях изучаемых растений в различных районах РИ

№ п/п Район Общая площадь, га Эксплуат. запас (возд.-сух. сырье), кг Объем возм. ежегод. заготовок, кг

Горец почечуйный

1 Назрановский 76,91 6551 3 275

2 Сунженский . 23,74 2403 1201

3 Малгобекский 27,66 929 465

4 Джейрахский 8,7 148 74

Крапива двудомная

1 Назрановский 18,76 3675 1838

2 Сунженский 14,94 4977 2489

3 Малгобекский 11,12 830 415

4 Джейрахский 7,8 315 157

Пустырник пятилопастной

1 Назрановский 30,88 3166 1583

2 Сунженский 28,11 3617 1809

3 Малгобекский 20,09 1271 636

4 Джейрахский 6,51 181 90

Тимьян Маршалла

1 Назрановский 38,40 3071 1535

2 Сунженский 24,50 1776 888

3 Малгобекский 10,40 308 154

Репейничек аптечный

1 Назрановский 36,56 4 069 2 034

2 Сунженский 12,38 1055 528

3 Малгобекский 14,42 233 116

4 Джейрахский 9,53 106 53

Пустырник пятилопастной (Ьеопипк яитдие1оЬай15 вШЬ.) на территории республики образует небольшие по площади заросли, как рудеральный вид -распространён во всех обследованных районах. Произрастает в степной и лесостепной полосе, на пустырях близ населённых пунктов и хозяйственных постро-

ек, по днищам балок, в пойме рек, от низменности до высоты 2200 м над ур. м. Обнаружен в разнотравных ассоциациях в лощинах и на опушках мелколиственных лесов. Наибольшие заросли отмечены на выгонах близ жилья. При сборе J1PC возможна заготовка похожих видов: пустырника сизого (Leonurus glaucescens Bunge) и белокудренника черного (Ballota nigra L.), произрастающих на тех же территориях, что и официнальный вид.

Общий объем возможных ежегодных заготовок воздушно-сухого сырья травы пустырника пятилопастного в РИ составил свыше 4,0 т с учётом продолжительности восстановления зарослей 2 года (таблица 1).

Репейничек аптечный (Agrimonia eupatoria L.) - встречается в большинстве районов республики, кроме высокогорий; растет среди кустарников, на опушках лиственных лесов, в садах, вдоль дорог, берегов рек и ручьев. Растение в обилии обнаружено на дренированных почвах, травянистых склонах, суходольных пастбищах, полях и оврагах, приурочено к сухим возвышенным местам с легкими почвами (мелкотравным лугам). Плотность запасов сырья варьирует.

Общий объем возможных ежегодных заготовок воздушно-сухой травы ре-пейничка аптечного составил до 2,6 т (таблица 1).

Тимьян Маршалла (Thymus marschallianus Willd.) широко распространён на территории Назрановского, Малгобекского и Сунженского районов, встречается повсеместно в полупустынях, степях и на аридных склонах среднего-рий. Обнаружен на выходах известковых пород в поймах рек, осыпях, меловых обнажениях, а также опушках лиственных лесов в составе ксерофильного разнотравья. Максимальная плотность запаса отмечена на участках меловых обнажений близ рек, минимальная - на склонах оврагов. В среднегорном и горном поясах РИ встречаются близкие виды рода Thymus L., и в качестве примесей могут быть собраны: тимьян кавказский (Thymus caucasicus Willd.), т. дагестанский (Th. Daghestanicus) и т. монетный (Th. nummularius Bieb.).

Общий объем возможных ежегодных заготовок сырья с учётом продолжительности восстановления зарослей 2 года составил до 2,5 т воздушно-сухой травы тимьяна Маршалла. В Джейрахском районе исследования не проводились.

Результаты ресурсоведческих исследований показали, что в РИ имеется реальная возможность ежегодной заготовки пяти видов воздушно-сухого сырья: травы горца почечуйного, пустырника пятилопастного, репейничека аптечного, тимьяна Маршалла, листьев крапивы двудомной.

ИССЛЕДОВАНИЯ ШИПОВНИКОВ ФЛОРЫ ИНГУШЕТИИИ

Задачей исследования было определение мест произрастания шиповников в

Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрахском районах и установление наиболее распространённых видов. Из 15 видов шиповника, произрастающих в республике, нами изучались 5 видов наиболее перспективных по распространенности, доступности и ресурсной оценке: R. canina L. - ш. собачий (обыкновенный), R. corymbifera Borkh. - ш. щитконосный, R. ibérica Stev. ex Bieb. - ш. грузинский, R. oxyodon Boiss. - ш. острозубый и R. pimpinellifolia L. (Р. spinosissima L.) - ш. колючейший. Согласно ГОСТ 1994-93 (ОКП 93 7622 0191), все высушенные плоды указанных видов шиповника предназначены для использования в качестве ЛРС.

Шиповники встречаются в долинах под пологом тополевых и берёзовых лесов или образуют заросли - розарии. Запасы плодов шиповника учитывали на конкретных зарослях. В период работы уточняли их местонахождение в Джейрахском (склоны гор, пойма р. Армхи), Сунженском и Назрановском (долины и верховье р. Сунжа, окрестности селений Пседах, и Гази-Юрт и др.), Малгобекском районах. Под промысловыми зарослями понимали обособленные ресурсные участки (поля, луга, пойменные террасы) с эксплуатационным запасом ЛРС свыше 50 кг и расположенные на расстоянии не более 1,5 км от путей подъезда к ним автомобильного транспорта.

Урожайность плодов рассчитывали согласно методическим указаниям по общепринятой методике. Эксплуатационный запас рассчитывали по нижнему пределу. Как показало проведённое обследование, продуктивные заросли на территории республики образованы в основном тремя видами шиповника: Rosa canina L., R. corymbifera Borkh. и R. spinosissima L. (R. pimpinellifolia L.), остальные виды встречаются фрагментарно или в труднодоступных местах.

Поскольку все виды шиповника, произрастающие в Ингушетии, являются

12

витаминоносными (согласно требованию ГФ XI изд., содержание аскорбиновой кислоты должно быть не менее 0,2%) запасы их определялись без видовой дифференциации. Результаты исследования отражены в таблице 2.

Таблица 2 - Сводные банные о ресурсах и запасах плодов шиповника в 4-х административных районах РИ

№ уч-ка Растительное сообщество Общая площадь зарослей, га Средняя плотность запаса сырья, кг/га Эксплуат. запас сырья, кг Эксплуат. запас зозд.-сух. сырья, кг

Малгобекский район

1 Шиповниковое 6,4 562,6±85,0 2512,6 804,1

2 Полынно-злаковое 6,8 331,0±44,0 1652,4 528,8

3 Полынно-алаковое 7,9 196,0±30,0 1074,4 343,8

4 Злаюво-кустарниковое 1,9 652,0±93,0 885,9 283,5

ВСЕГО 23,0 6125,3 1960,2

Назрзновский район

5 Суходольный луг 3,1 208,0±35,0 427,8 136,9

6 Буково-грабовый лес 5,2 656,0±70,0 2683,2 858,6

7 Шиповниковое (предгорья) 7,6 530,0±65,0 3043,0 973,8

ВСЕГО 15,9 6154,0 1969,3

Сунженский район

8 Разнотравно-пол ынно-злаковое 1,8 680,0± 100,0 864,0 276,5

9 Буково-грабовое 5,2 620,0±90,0 2756,0 881,9

10 Буково-грабовое 3,4 216,0±36,0 435,2 139,3

11 Разнотравно-мятликовое 4,3 298,0±50,0 851,4 272,5

12 Злаково-осоковое 2,8 280,0+42,0 560,0 179,2

ВСЕГО 17,5 5466,6 1749,4

Джейрахский район

13 Ивняк, разнотравно-злаковый луг 4,2 347,0±33,0 1180,2 377,7

14 Комплексное (аридных котловин) 3,8 139,0,±23,0 353,4 113,1

ВСЕГО 8,0 1533,6 490,8

Установлено, что все участки 4-х районов РИ образуют промысловые заросли, но величина запаса сырья на них существенно различается. Наибольшие ЭЗ плодов шиповника сосредоточены в Назрановском и Малгобекском районах (1,9 т), а наименьшие - в Джейрахском районе (0,49 т). Общая площадь, занятая зарослями шиповника, составила 64 га. На обследованной территории выявлено 14 промысловых зарослей, суммарный ЭЗ сырых и воздушно-сухих плодов составил 19,3 и 6,2 т соответственно. По результатам исследования были составле-

ны карты-схемы.

Далее в 5-ти отобранных нами видах - R. canina L. - ш. собачий или обыкновенный, R. corymbifera Borkh. - ш. щитконосный, R. ibérica Stev. ex Bieb. - ш. грузинский, R. oxyodon Boiss. - ш. острозубый и R. pimpinellifolia L. (Р. spinosissima L.) - ш. колючейший - определялось количественное содержание аскорбиновой кислоты, каротиноидов и дубильных веществ в воздушно-сухих плодах с шестикратной повторностью при содержании влаги 11-13%. Сырье собиралось на разных высотных уровнях для определения корреляции между содержанием БАВ и высотностью произрастания. Результаты фотохимических исследований статистически обработаны.

R. canina L. - шиповник собачий или обыкновенный. Установлено, что на территории РИ этот вид произрастает в Назрановском, Сунженском и Малгобек-ском районах, в Джейрахском - встречается гораздо реже. Данные о количественном содержании аскорбиновой кислоты, каротиноидов и дубильных веществ в его плодах представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Содержание БАВ в плодах R. canina L на разных высотных уровнях

Место сбора сырья Высота над ур. и., и Аскорбиновая кислота, иг/100 г Суима каротиноидов, иг/100г Дубильные в-ва, %

Назрановский р-н, оф. с. Сурхахи 350 395,0±12Д 20,3=ь0,4 7,7±0,4

Сунженский р-н, окр. ст. Несте-ровская, пойма и террасы р. Асса 640 540,0±9,7 21,7±3,6 7,2±0,4

Джейрахский район (пойма р. Армхи) 850 740,0±14,8 22,8±0,8 6,7±0,2

Джейрахский район, с. Харп, заброшенное поселение 1200 905,0±19,2 24,б±0,9 6,3±0,2

Джейрахский район, с. Харп 1950 1060,0±22,7 33,5±1,0 5,8±0,1

Результаты анализа показали прямую зависимость содержания аскорбиновой кислоты и каротиноидов от высотности произрастания и обратную - у дубильных веществ. При этом содержание аскорбиновой кислоты у шиповников в высшей точке произрастания в 2,7 раза превышало ее содержание у плодов, собранных в самой низшей точке. Но необходимо отметить, что ее количество в вы-соковитаминоносных плодах после 6-ти месячного хранения значительно умень-

шилось (с 1060 мг до 850 мг/100 г возд.-сух. сырья).

Rosa corymbifera Borkh. - tu. щитконосный - является наиболее распространённым видом Ингушетии, встречается вместе с R. canina L. по всей территории, но тяготеет к более влажным условиям местообитания. Количественное содержание Б AB в плодах ш. щитконосного, собранного в различных районах республики представлено в таблице 4.

Таблица 4 - Содержание БАВ в плодах R. corymbifera Borkh., на разных высотных уровнях

Место сбора сырья Высота над ур. моря, м Аскорбиновая кислота, иг/100 г Сумма каротиноидов, иг/100г Дубильные в-ва, %

Назрановский р-н, окр. с. Гази-Юрт 450 565,0±12,1 19,3±0,5 7,3±0,4

Назрановский р-н, в 1,5 км от е. Барсуки 660 610ДЫ7.4 20,4±0,7 6,9±0,3

Малгобекский р-н, окр. & Пседах 850 730,0±22,9 21,7±1,0 6,4±0Д

Сунженский р-н, отрог Скалистого хр. Цорей-Лам 1100 870,0±26Д 24,5±0,9 6,0*0,2

Результаты исследования указывают на то, что с увеличением высоты произрастания количество аскорбиновой кислоты и каротиноидов в плодах ш. щитконосного также увеличивается, а содержание дубильных веществ - уменьшается.

R. ibérica Stev. ex Bieb. - ш. грузинский - встречается рассеянно преимущественно у верхней границы леса и после - в лесных лугах. Растёт на сухих каменистых и щебнистых склонах до высоты 1600 м над ур. м. Отмечен нами в Сунженском и Джейрахском районах, в степном поясе и поясе нагорных ксерофитов. Количественное содержание изучаемых веществ в плодах ш. грузинского представлено в таблице 5.

Таблица 5 - Содержание БАВ a R. ibérica Stev. ex Bieb. на разных высотных уровнях РИ

Место сбора сырья Высота над ур. моря, м Аскорбиновая кислота, мг/100 г Сумма каротиноидов, мгИООг Дубильные в-ва, %

Сунженский р-н, окр. с. Нижний Алкун 560 510,0±9,7 18,4±0,7 6,8±0Д

Сунженский р-н, окр.с. Даттых 850 570,0±12,1 19,5±0,8 6,3±0,3

Джейрахсий р-н, окр. с. Ляжги 1100 б20,0±17,4 21,1 ±0,9 6,1±0,2

Проведенное фитохимнческое исследование показало, что степень накопления аскорбиновой кислоты, каротиноидов и дубильных веществ в плодах ш. грузинского не имеет существенной зависимости от высоты произрастания, т.е. по содержанию БАВ его плоды, собранные на разных высотных уровнях, являются практически равнозначными.

А охуос1оп Вогзя. - ш. острозубый - встречается значительно чаще остальных видов шиповника в Сунженском и Джейрахском районах, в поясе нагорных ксерофитов. Это субальпийский вид, растёт на каменистых склонах до высоты 1200 - 2400 м над ур. м. Проявляет значительную изменчивость, образуя ряд разновидностей. Нами отмечены места его произрастания в Джейрахском районе (верховьях р. Армхи) и в окр. с. Верхний Алкун Сунженского района. Данные расчетов по содержанию БАВ представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Содержание БАВ в плодах Я охуос1оп ВоЬ5„ на разных высотных уровнях

Место сбора сырья Высота над ур. моря, м Аскорбиновая кислота, мг/100г Сумма каротиноидов, мг/100г Дубильные в-ва, %

Сунженский р-н, окр. с. Верхний Апкун 860 3160,0±24,2 17,7±0,7 7,5±0,3

Джейрахский р-н, вер-ховье р. Армхи 1150 3510,0±34,9 18,3±0,6 6,9±0,3

Джейрахский р-н, окр. с. Ольгети 1550 4380,0*45,8 20,4±0,7 6,7±0,2

Как показывают данные таблицы 6, плоды ш. острозубого являются самыми обогащенными витамином С, содержание которого, как и содержание каротиноидов также коррелирует с высотой произрастания. Дубильные вещества количественно уменьшались до 6,7% с увеличением высоты.

А ртртеШ/оНа (Р. зртоягззта Ь.) - ш. колючейший - встречается от степного до субальпийского пояса. Растёт на каменистых, мелкоземистых остеп-нённых склонах, лугах, среди невысоких кустарников, вдоль дорог. Отмечен во всех районах республики от 200 до 2300 м высоты над ур. м. Данные о количественном содержании БАВ в плодах ш. колючейшего отражены в таблице 7.

Таблица 7-Содержание биологически активных веществ в плодах /?. ртртШЫа I. _(Р- зрЫв/зэта I.) - ш. колючейшего на разных высотных уровнях

Место сбора сырья Высота над ур. моря, и Аскорбиновая кислота, мг/100г Сумма каротиноидов, игИООг Дубильные в-ва, %

Назрановский р-н, окр. с. Гази-Юрт 570 212,0±8,9 20,4±2,9 8,7±0,4

Назрановский р-н, окр. с. Али-Юрт 780 235,0±9,6 22,7±0,7 8,2±0,3

Сунженский р-н, окр.с. Мужичи 860 240,0±10,3 23,5±0,9 7,9±0,4

Джейрахский р-н, окр. а Джейрах 1350 244,0±9,2 28,3±1,0 7,5±0,3

По результатам проведенного исследования установлено, что в плодах ш. колючейшего, заготовленных на разных высотах, количественное содержание аскорбиновой кислоты практически не зависило от места произрастания, оно менялось незначительно и оставалось самым низким (212-244 мг/100г) по сравнению с предыдущими видами. Количество же каротиноидов росло, а содержание дубильных веществ уменьшалось с увеличением высоты.

Таким образом, установлено значительное влияние места произрастания шиповников на накопление БАВ и, в частности, аскорбиновой кислоты. Экземпляры, растущие в лесу или тени, содержат меньшее количество аскорбиновой кислоты, чем те, которые обнаружены на сухих, открытых, обогреваемых участках. Уровень содержания витаминов находится в прямой зависимости от высотности -это подтверждается тем, что самыми обогащенными витаминами являются плоды ш. острозубого (Я. охуос1оп Во^.), как наиболее высоко произрастающего кустарника. Наименее витаминоносным является ш. колючейший (Я. рипртеНШэНа Ь.).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СЫРЬЯ

Для эффективного использования ресурсно-сырьевого потенциала природных популяций, важна количественная оценка содержащихся в них БАВ, экстрактивных веществ и других товароведческих показателей.

Согласно фармакопейным статьям на исследуемое сырье определяли общие показатели: содержание влаги, золы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты. Для травы пустырника пятилопастного, репей-ничка аптечного и тимьяна Маршалла, кроме перечисленного - содержание экс-

трактивных веществ, для плодов шиповника - содержание аскорбиновой кислоты.

Результаты товароведческого и химического анализов сырья травы горца почечуйного, пустырника пятилопастного, тимьяна Маршалла, репейничка аптечного и листьев крапивы двудомной свидетельствуют о соответствии всех изучаемых образцов требованиям ГФ XI изд. Это характеризует обследованные заросли, как пригодные для заготовок доброкачественного сырья.

Сбор сырья исследуемых видов проводился в природных популяциях, при этом имелась вероятность антропогенного воздействия, что в свою очередь, увеличивало возможность присутствия в сырье тяжёлых металлов. Степень загрязнения определяли по методике ГФ XI. В результате проведённого исследования установлено, что все изучаемые объекты накапливают тяжёлые металлы, но их количество не превышает норм СанПиН 2.3.2.1078-01 (ред. СанПиН 2.3.2.1280-03 и СанПиН 42-123-4089-86) для растительного сырья.

Общий радиационный фон соответствовал нормам, установленным для РИ (6-13мкР/ч.), на основании чего можно сделать заключение о возможности заготовки сырья во всех обследованных районах.

Таким образом, проведённый анализ показал, что все заросли изучаемых дикорастущих видов, относятся к экологически чистым, что позволяет производить заготовку ЛРС для нужд фармацевтического производства.

РАЗРАБОТКА ПРОЕКТА ФАРМАКОПЕЙНОЙ СТАТЬИ ПРЕДПРИЯТИЯ НА РЕПЕЙНИЧКА АПТЕЧНОГО ТРАВУ

В основу разработки ФСП на траву репейничка аптечного положены требования ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Анализу подвергались 4 образца травы репейничка аптечного, собранных в Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрахском районах РИ.

Для подтверждения подлинности цельного и измельченного сырья проводили изучение анатомического строения травы репейничка аптечного, по результатам которого составлен раздел «Микроскопия» с описанием диагностических признаков, основными из них являются: многочисленные железистые волоски разнообразного строения, очень крупные одноклеточные толстостенные волоски с многоклеточной розеткой у основания и волоски с минерализованной оболоч-

кой; многочисленные секреторные клетки; друзы и одиночные кристаллы оксала-та кальция в стеблях, листьях, прилистниках и прицветниках, склеренхима вокруг проводящих пучков (рисунок 1).

V у^у-1'-

.'УТР.

А - верхний 1 ■ клетки эпидермиса; 2 - железистый волосок; 3-простой волосок с клетками эпидермальной розетки

\

Б - нижний 1-устьице; 2 - простой волосок; 3 - железистый волосок; 4 -клетки эпидермиса

Рисунок 1 - Эпидермис листа репейничка аптечного с поверхности

Качественный анализ. Результаты анализа флавоноидных соединений подтвердили наличие в траве репейничка аптечного кверцетина (ЯГ 0,30), рутина (М 0,64) и гиперозида (ЯГ 0,74).

Количественное определение флавоноидов в траве репейничка аптечного проводили по методике, описанной в ГФ XI (на плоды боярышника), в основу которой положен метод дифференциальной спектрофотометрии. Данные эксперимента по выбору экстрагента показали, что максимальное извлечение флавоноидов из сырья происходит спиртом этиловым 40% при дробной экстракции в течение одного часа.

На первоначальном этапе исследований установлено, что УФ-спектр извлечений не выявлял максимум светопоглощения флавоноидов сырья (кверцетин, ругин) в виду влияния сопутствующих соединений и находился в области 275±2 нм.

При реакции комплексообразования с алюминия хлоридом наблюдался ба-тохромный сдвиг полосы поглощения флавоноидов от 330-360 до 390-410 нм, что

дало возможность исключить влияние сопутствующих компонентов.

19

Для определения аналитической длины волны были изучены УФ - спектры спиртовых извлечений сырья репейничка и ГСО рутина (рисунок 2).

Рисунок 2- Дифференциальные спектры поглощения рутина (А) и извлечения из травы репейничка аптечного (Б) (40% этанол)

Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на PCO рутина в траве репейничка аптечного составило 1,66%±0,04%. Относительная погрешность - 2,43%.

Оценка показателей валидации (прецензиозности, правильности и линейности) проводилась методом добавки, позволяющего оценивать мультипликативную часть систематической погрешности методики анализа при незначительной погрешности измерения (таблица 8).

Таблица 8 - Определение правильности методики методом добавок

Результаты

Добавка рутина к 1,0 г навески сырья, г Расчетное содержание флавоноидов в сырье, % Найдено флавоноидов в сырье, % Отклонения, % 8 а: В л" н 8* Метрологические характеристики

0 1,663 1,663 0

0,0050 2,163 2,103 2,78 97,23

0,0060 2,263 2,320 2,63 102,52 R=99,95 RSD=2,14%

0,0075 2,413 2,451 1,77 101,57

0,0110 2,763 2,717 2,13 98,34

0,0130 2,963 2,937 1,22 99,12

0,0150 3,163 3,192 1,31 100,92

Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции. Установлено, что методика доступна, выявлены параметры линейности, прецензиоз-ности и правильности. Таким образом, разработанная методика позволяет объективно оценивать качество сырья травы репейника аптечного.

Для более объективной оценки качества сырья, при производстве из него различных лекарственных форм, рационально использование стандартизации сырья и по содержанию дубильных веществ. Результаты предварительного анализа свидетельствовали о том, что в траве репейничка аптечного присутствуют дубильные вещества преимущественно гидролизуемой группы. Количественное содержание дубильных веществ определяли фармакопейным перманганатометри-ческим методом, которое составило в различных образцах от 6,57 до 7,35%. Среднее содержание - 7,02±0,28%.

С целью стандартизации были определены числовые показатели и нормы качества сырья травы репейничка аптечного (таблица 9).

Таблица 9 - Нормы качества сырья репейничка аптечного

Показатель Норма

Содержание флавоноидов не менее 1,6 %

Содержание дубильных веществ не менее 6,5 %

Влажность не более 10 %

Зола общая не более 11 %

Зола, не растворимая в 10% НС1 не более 2 %

Экстрактивные вещества (спирт этил. 40%) не менее 24%

Органические примеси не более 1,5 %

Минеральные примеси не более 1%

Частицы, проходящие сквозь сито, б мм не более 3 %

Микробиологическая чистота В соотв. с ГФ XI

Для установления срока годности сырья были проведены исследования по изучению стабильности всех показателей качества. При этом учитывали исходное наименьшее содержание суммы флавоноидов и экстрактивных веществ в сырье и изменение их при хранении. Срок годности сырья травы репейничка аптечного равен 2 годам. По испытаниям на микробиологическую чистоту, трава репейничка аптечного соответствует требованиям ГФ XI изд.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате проведённых экспедиционных исследований на территории Республики Ингушетия была дана комплексная оценка ресурсов шести дикорастущих лекарственных растений, произрастающим в Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрахском районах.

2. Выявлены продуктивные заросли горца почечуйного, крапивы двудомной, пустырника пятилопасгного, тимьяна Маршалла, пяти видов шиповника, ре-пейничка аптечного, имеющих практическое значение для республики.

3. Впервые для республики определены: плотность запасов сырья, биологический, эксплуатационные запасы и объёмы возможных ежегодных заготовок. Установлено, что на территории республики ежегодно можно заготавливать свыше 5 т воздушно-сухого сырья травы горца почечуйного; до 5,0 т листьев крапивы двудомной; до 4,0 т травы пустырника гопилопастного; до 2,0 т травы репейничка аптечного; 2,5 т травы тимьяна; и 6,2 тонн плодов шиповника. Этих запасов достаточно для ведения ежегодных промышленных заготовок всех видов.

4. Составлены карты-схемы запасов сырья исследуемых видов дикорастущих лекарственных растений.

5. Изучено влияние факторов (высотности произрастания, плотности запаса сырья и фитоценоза) на продуктивность зарослей исследуемых растений. Определена корреляция между высотой произрастания шиповников и количественным содержанием основных БАВ в их плодах: прямая зависимость содержания аскорбиновой кислоты и каротиноидов от высоты произрастания и обратная - дубильных веществ.

6. Проведена оценка качества растительного сырья крапивы двудомной, пустырника пятилопасгного, тимьяна Маршалла, пяти видов шиповника, репейничка аптечного, которая показала его соответствие по основным показателям требованиям НД и пригодность обследованных зарослей для заготовки доброкачественного сырья.

7. Материалы о запасах изучаемых дикорастущих лекарственных растений, объёмах возможных ежегодных заготовок в Назрановском, Сунженском, Малгобекском и Джейрахском районах, рекомендации по рациональному использованию и охране представлены в Комитет по охране окружающей среды и экологии, а также в Министерство здравоохранения республики Ингушетия.

8. Предложена методика качественного и количественного определения флавоноидов в сырье репейничка аптечного и нормы качества, на основании которых разработан проект ФСП «Репейничка аптечного трава» и пояснительная записка к нему, позволяющие использовать в дальнейшем траву репейничка аптечного, как новый вид отечественного сырья для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции ОАО «Флора Кавказа» (Россия).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Добриева, З.У. Исследование биологической активности некоторых дикорастущих растений флоры Ингушетии (Сообщение 1) /З.У. Добриева, В.В. Ме-лик-Гусейнов // Фундаментальные исследования в биологии и медицине: сб. науч. тр.- Ставрополь: Изд-во СевКавГТУ, 2008. - Вып. 4. - С.54-55.

2. Добриева, З.У. Лекарственная флора Республики Ингушетия и её анализ /З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов // Материалы Рос. фитотерапевт, съезда 1416 марта 2008 г. - М.: Изд-во Федер. науч. клинико-экпериментального центра трад. методов диагностики и лечения Росздрава, 2008. - С. 273-274.

3. Мелик-Гусейнов, В.В. Ресурсные исследования некоторых дикорастущих лекарственных растений республики Ингушетия / В.В. Мелик-Гусейнов, З.У. Добриева // Вестник Московского государственного областного университета. Серия: Естественные науки.- 2009.- №3. - С.66-69.

4. Фотохимическая оценка некоторых дикорастущих видов флоры Ингушетии и Кабардино-Балкарии / Б.У. Баркинхоев, В.В. Мелик-Гусейнов, З.У. Добриева [и др.] // Биологическое разнообразие Кавказа: материалы Междунар. конф. -Назрань, 2009. - С. 65-69.

5. Добриева, З.У. Исследования Agrimonia eupatoria L., произрастающего на территории Ингушетии / З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов, Б.У. Баркинхоев,-Там же,- С. 88 - 90.

6. Обзор видов Rosa L. флоры Ингушетии / З.У. Добриева [и др.] // Вестник Ставропольского государственного университета. - 2009.- Вып.63 (4). - С. 114117.

7. Мелик-Гусейнов, В.В. Род Rosa L. флоры Ингушетии: распространение, ресурсы, химический состав, использование: монография /В.В. Мелик-Гусейнов, З.У. Добриева,- Пятигорск: ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава, 2010.-126 с.

8. Добриева, З.У. Фитохимические исследования шиповника щитконосного флоры Ингушетии / З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов // Фундаментальные науки и практика: сб. науч. тр. - Томск, 2010. - С.126.

9.Добриева, З.У. Идентификация и количественное определение флавонои-дов в траве репейничка аптечного /З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов; под ред. М.В. Гаврилина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: ПятигорскГФА. - 2010.- Вып. 65.- С. 34-36.

10. Добриева, З.У. Ресурсные и фитохимические исследования шиповников Ингушетии / З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов // Вестник Московского гос. ун-та. Серия: Естественные науки,- 2011.-№ 1.- С. 53-56.

11. Добриева, З.У. Фитохимическое исследование Rosa ibérica Stev. ex Bieb. флоры Ингушетия /З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов, Б.У. Баркинхоев.- Эрзи: тр. Гос. природ, заповедника,- Назрань: Пилигрим, 2010,-Вып. 2.- С.112-115.

12. Добриева, З.У. Динамика накопления основных биологически активных веществ в Rosa oxyodon Boiss. флоры Ингушетии / З.У. Добриева, В.В. Мелик-Гусейнов // Биологическое разнообразие Кавказа: материалы 12 Междунар. науч. конф. 4-7 ноя б. 2010г.- Махачкала: Ин-т приклад, экологии, 2010.- С.135-137.

ДОБРИЕВА ЗАИРА УСМАНОВНА

РЕСУРСНАЯ ОЦЕНКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ РЕСПУБЛИКИ ИНГУШЕТИИ

Специальность: 14.04.02 - фармацевтическая химиц фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ дассертаици на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати£&^ ^с^. ТУ Формат бумаги 60x841/16 Бумага книжн<>журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. п. 1,0. Заказ № -///У