Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Регенрация околощитовидных желез при частичной химической десимпатизации и различном функциональном состоянии бета-адренорецепторов

ил

и Л

I С

(¡ИТ

На правах рукописи

МИРО Татьяна Львовна

Регенерация околощнтовндных желез при частичкой химической деснмпатизащш и различном функциональном состоянии Р-адреиорецепторов

14.00.02 — анатомия человека

14.00.23 — гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских иаук

Ярославль— 1996

Работа выполнена в Ярославской государственной медицинской академии.

Научный руководитель — доктор медицинских наук профессор А. В. Павлов

Научный консультант — доктор медицинских наук профессор В. В. Шилкин

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор В. В. Банпн доктор медицинских наук профессор Ю. В. Погорелов

Ведущая организация — Тверская государственная

медицинская академия

Защита состоится « » 1996 г.

в ч. на заседании диссертационного совета К 084.32.02 в Ярославской государственной медицинской академии по адресу: 150000, Ярославль, ул. Революционная, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ярославской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан « » 1996 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

кандидат медицинских наук, доцент С. В. Иванов

Т-> П Г Г г tt Н Г* О О с. Д С. П Я Г.

Актуальность проблемы Выбор теш настоящей работы связан с необходимость» углубленного изучения механизмов регуляции восстановительных процессов в околощитовидных железах (ОЩЖ) - центральное звене системы зндокринной регуляции кальциегого обмена. В результате рзкее проведенных исследований на моделях повреждений, встречающихся в условиях клиники, установлена важная роль концентрации ионов кальция в периферической крови в регуляции регенерации? ор'га-да (Павлов, 1583,1990). Однако, учитывая высокую стабильность содержания кальция в крови, как важнейшей константы организма, более перспективным для этой цели представляется использование некальциеЕых модуляторов функции околощитовидных желез. Наиболее мощными из них являются адренергические регуляторы, играющие, по мнению многих исследователей (Brown,1982; Ковалев, 1991; Watson & Нал1еу,1993) существенную роль в полноценном обеспечении наратире-оидной функции: ойолощитовидные железы содержат многочисленные симпатические терминали на гладких миоцитах знутриорганных сосудов и в периваскулярных пространствах (Zavis-towski, 1965; Altenahr, 1972; Isono et al.,1990, Mortimer et al.,1990; Luts & Sondier,1994); на мембранах железистых клеток обнаружены ß-адренорецепторы (Brown et al.,1977; Авакян, 1'988) ;' хирургическая и химическая десимпатизация или фармакологическая модуляция (З-адреиорецепторов приводят, к отчетливы;.! изменениям секреции паратгорыона (Brom et aL,1977; Harney et al.,1976; Аиста, 1981; McGregor et al.,1983; Золоев и др. ,1987; Рящи-коз, 1989; Shearing et si.,1992).

. Однако влияние адренергическкх факторов на пролиферативные' процессы, убедительно продемонстрированное в работах Basergva et al.(1959); Волковой(1977);, Lewlnski et al.(1934); Андроновой (1984); Ря2цикова(1589);' Refsnes et al. (1992) для маопд железистых структур (щитовидная железа, аденогаюфиэ, печень, слюнные железы, поджелудочная железа), применительно к нормальным и регенерирующим ОПЩ продолжает оставаться практически неизученным. Целесообразность проведения углубленного исследования этого вопроса определяется как важным теоретическим значением изучения путей нейрогуморальной регуляции компенсаторно-приспособительных процессов в эндокринной системе, так и перспективой использования полученных данных' для разработки оригинальных методов регуляции гиперпластических процессов в пзратиреоидной паренхиме.

«т

- с

Цель и задачи исследования Цель настоящего исследования -изучение особенностей : ганной к тканевой регенерации ОК1 лоадто-видных желез в условии. Лчастичной.химической десимпатиэацки, фармакологической модуляции (Ьгдренорецепторов, гипокалъциемик и ги-

£

перкальциемии к проведение на этой основе сравнительного анализа влияния адренэргических и кальциевых регуляторов на выраженность восстановительных процессов в органе.

Для достижения указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Изучение особенностей пролиферации и гипертрофии пзрати-роцитов в ОЩЖ, регенерирующих ОЩЖ на фоне фармакологической стимуляции и блокады В-адренорецепторов.

2. Выявление влияния химшеской десимпатизации на восстановительные процессы в ОЩЖ.

3. Исследование органной топографии продкферативних процессов в условиях нарушенной адренэргической регуляции ОЩК.

4. Изучение эффекта агонистов и антагонистов б-адренорецеп-торов на секреторную активность популяции внутриорганных тканевых базофилов СШД.

5. Изучение, особенностей течения регенераторных процессов в: условиях экзогенной гипокальциемии и пшеркальци&мии.

6. Сравнительный анализ поеттравматкческой регенерации и компенсаторной гипертрофии ОПЩ в условиях измененной адренэргической регуляциии и нарушенного кальциевого обмена.

Научная новизна

Впервые в рамках одного исследования современны).« количественными методами проведено сравнительное изучение влияния фармакологической модуляции функции (5-адренсрецепторов, частотной химической десиыпатизац1ш» экзогенной гппо- и гипэркальциемии на Быраженость основных цитологических механизмов регенерации околощитовидных желез. '

Впервые. продемо. гркрован сходный по направленности эффект химической десим'патиз-дции и стимуляции А-адренорецепторов на временную динамику ¿..выраженность пролиферативней активности паратн-роцитоз в условиях посттравматичеслоп регенерации и компенсаторной гипертрофии околощптовщкьк ».елез. При это:-.-; покойно, что данные воздействия закономерно влияют на простр?.нсть.:-нно:' распре-.деление мптогов в рггс-к^рпрус^«'ойоло^'огзад-'г^: /.елемх.

о

- о ~

Получены оригинальные данные об угнетающем влиянии антагониста В-адренорецепторов пропранолола на митотическую активность паратироцитов з регенерирующих околошдтовидных делелах.

Установлено стимулирующее влияние згонистов и антагонистов В-адрекорецепторов на секреторную активность популяции внутриор--ганных тканевых базофилов ОЩЖ.

Научно-практическая значимость и рекомендации к использованию результатов работы

Полученные результаты дают новую информацию о влиянии адре-нэргкчеоких факторов (сшпатическая нервнал система и катехолами-ны крови) на пролиферацию и гипертрофию паратироцитов, которая может быть использована для дальнейшей разработки фундаментальной проблемы нейроэндокринной регуляции структуры и функции желез внутрэяней секреции.

Прикладное значение работы заключается в том, что на основе полученных данных могут быть разработаны способы целенаправленной коррекции пролиферативных процессов в регенерирующих и гиперплас-тически измененных окшопштовкдных железах.

Внедрение Результаты работы используется в учебном процессе при изложении материала на лекциях и .проведении практических занятий со студентами на кафедрах анатомии и гистологии Тверской государственной медицинской' академии, на кафедрах гистологии Оренбургской и Ивановской государственной медицинской академии, на кафедре анатомии и физиологии Ярославского государственного педагогического университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нарушенние адрэкэргической регуляции (фармакологическая модуляция б-адренорецепторов и частичная химическая десимпатиза-цил гуанетидином) закономерно влияет на выраженность процессов органной и тканевой регенерации околоиитовадных желез.

2. На тканевом уровне стимуляция й-адренорецептсров изопроте-ренолом и частичная химическая десимпатизация вызывают более позднее развитие пролифератизного ответа паратироцитов на механическую травматиэациа органа и гемипаратироидзктомш.

3. На органном уровне частичная химическая десимпатиззция. и стимуляция ß-адренорецепторов способствуют формированию очагового типа пролиферативной реакции в регенерирующих околощитовидных ке~ левах: при дозированном ранении делящиеся клетки группируется преимущественно вокруг зоны повреждения, при компенсаторной гипертрофии пролифериругщие паратироциты формируют очаги сгущения и разрежения при существенно меньсем уровне митотической активности в органе.

4. Адренэргические модуляторы околощитовидных желез оказывают сходное по направленности, однако более кратковременное и количественно, менее выраженное угветаящс-е ьлияние ка процессы пролиферации паратиропитоз в регенерирующем органе по сравнению с кальциевыми регуляторами пзратиреоидной функции.

Апробация работы Материалы диссертации доложены и обсуждены на 11 съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Смоленск,1392), 3 съезде анатомов, гистологов'и эмбриологов Российской Федерации (Тюмень,1994), 2 конгрессе ассоциации морфологов СНГ (Тюмень, 1934), научных конференциях • в БМА (Санкт-Петербург) "Морфология раневого процесса"(1992), "Критерии и методы оценки жизнеспособности тканей в раневой процессе"(1993), "Гистогенез и регенерация тканей"(1995),-3 Всеррссийокой научной конференции "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных"(Волгоград, 1995), заседании' Ярославского Отделения ВрНОАГЭ (19S6),

Публикации Основное содержание диссертации изложено в 8 печатных работах.

Структура и объем диссертации Диссертации состоит из взе-дения, главы "Материал и методы исследования3 глаз результатов собственных исследований, заключения, выеодов и указателя lymipo-ванцой литературы. Общий объем работы - 141 стр., в том числе 14 таблиц, 14 микрофотографий, 17 рисункоЕ и графиков (часть иллюстраций дана в виде монтажей). Литературный указатель содержит 173 источника, з tgm числе 67 на русской языке.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования Опыты выполнены нз 413 лабораторных белых крысах(самцы) массой 150-230 г., содержавшихся в стандартных условиях вивария. Для изучения регенерации ОИД использованы следующие стандартные модели (Павлов,1983а,б) : а) дозированное ранение ОЩЯ путем нанесения трехкратного укола каждой из двух желез глазным ножом-копьем; б) левосторонняя.гемипаратироидэктомия. Распределение животных по сериям опытов представлено в таблице.

Таблица

Характеристика изученного материала

Серия опытов, воздействие |Количество

I животных

1

1.Изучение регенерации ОЩЖ в условиях фармакологически

измененной функции й-адренорецепторов 188

2.Изучение регенерации ОЩЖ в условиях химической

десимпатизации 62

3.Изучение регенерации ОЩЖ на фоне нормо-, гипо-

и гиперкальциемии 90

4.Сравнительный анализ действия модуляторов

6-адренорецепторов и кальцийрегулирующих гормонов

на секреторную активность тканевых базофилов ОЩЯ 73

* ■* *

Методы модуляции функционального состояния ОШД

1. Адренэргические (некальциевые) модуляторы: а) .стимуляцию 8-адренорецепторов производили ежедневными однократными внутриб-ршинными инъекциями 2,0 мл IX водного раствора изопротеренола ("Ново'дрин", Германия), разовая доза составляла 100 мг/кг массы животного (КасЛеуДЭБ?; Золоев и др. ,1987); б) блокаду й-адренорецепторов производили инъекциями 2,5 мл О, IX еодного раствора пропранолола ("Обзидан", Германия) по той г.е схеме, разовая доза составляла 12,5 мт/кт массы животного (АндроноЕа,1984; Болеев и др.,1987); в) животным-с неизмененной функцией 8-адренорецептсров по той же схеме вводили 2,0 мл дистиллированной воды; г) химическую деснмпатизацию производили ежедневными вкутрибрюшинными шгь-

екциями воднсй суспензии гуан&тидина (препарат "Иаобзрин",' Югославия) в дозе 70 мг/кг массы в течение 30 сутск (Аккуратоз и др.,1995), операции проводили через 1 мес. после окончания курса инъекций. Для контроля аффекта десимлатизации через 1 мес. после окончания курса инъекций производили гистологическое исследование верхнего шейного симпатического ганглия: в наших опытах данная модель приводила к гибели около 907. симпатических нейронов.

2. Кальциевые модуляторы: а) хроническая гиперкальциемия -животные получали пищу с повышенным содержанием кальция и витамина Да (Swarup et al.,1979); б) хроническая гипокальциемия - животные получали пищу с повышенным содержанием неорганических фосфатов (Lever,1958; Whitaker,1971).

Гистологические методы Тиропаратиреоидный комплекс фиксировали по Кар ну а, Буэну и в 10?. формалине. После заливки е парафин изготовляли серийные срезы толщиной 3-5 мкм, которые окрашивали гематоксилином о эозином, метг-дгноным синим по Меллендорфу, по Ваа-Гизону, по Браше, по Мак-Манусу (ШИК-реакция). Для выявления тканевых базофилов исаользовапи окраску основным коршшевым по Шубичу(1958) и 0,12 толуидшюЕЫм синим при pH « 5,4-5,6.

Стереологическим методом "полей" (Автандилов и др.,1981) определяли средние площади сечения железистых клеток, их ядер и цитоплазмы, рассчитывали ядерно-цитсплазменные отношения.

Методы изучения пролиферативной активности клеток з) определение митотического индекса (Ш) паратироцитов из расчета 18-20 тысяч клеток у каждого животного; б) с целью оценки количества клеток, вступивших в митоз в стандартный период времени, хщвотным за 3 часа до забоя внутрибрвпшнно вводили 0,057. " водный раствор кол-' хицина в дозе 1мГ/кГ'МасСы (Дондуа, Ефремов,1974); индекс колхи-щшовых митозов''' (МИК) определяли так ле как Ш.

Методы изучения органной топографии процессов регенерации

а) Для количественной оценки степени однородности распределения пролиферируюда: клеток в ОШД применяли метод, описанный Кати-насом(1981) и адаптированны!! применительно к данному органу Павловым и Антипановой(1985).

б) Для визуального выявления очагов пролиферирувдих клеток ка фотографиях каждого второго серийного среза СЦЕ (увеличение 130 раз) отмечали митотически деляшеся клетки, переносили контуры органа и локализация фигур митоза на прозрачную подложу, после

—

чего производили объемную реконструкцию центральных сегментов железы толщиной 70-120 мкм (Туркевич,196?).

в) В СЩ после их дозированного ранения производили раздельный подсчет количества митотическп делящихся клеток непосредственно в прираневои зоне шириной 2-3 пзратироцита и в неповрежденных участках органа.

Изучение популяции тучных клеток а) по методике, предложенной Линдером и др.(1380) определяли индекс дегрануляции ТБ из расчета 200 клеток у животного; 5) для оценки плотности популяции ТБ ОЩК расчитывали среднее количество ТБ на единицу площади среза органа (20 квадратнах полей ?рения площадью 0.2 мм2 у животного о последующим пересчетом на 1 мм2).

Выбор сроков наблюдения производили исходя из имеющихся в литературе данных о динамике восстановительных процессов в ОШЖ кру.-; для анализа был выбраны первые две недели пссле операции -период, когда основные цитологические механизмы регенерации выражены наиболее отчетливо (Павлов,1983а,б;19886). На каждую временную точку изучали по 3-5 животных, для каждой группы- предварительно рассчитывали основные статистические параметры выборки. Значимость различий между группами оценивали по величине критерия Стгюдентз. При аначиге результатов использованы так>е методы сд-нофакторного дисперсионного и регрессионного (прямолинейная модель линейкой регрессии) анализов.

Статистическую обработку и графический анализ результатов производили на персональном компьютере IBM PC АТ/486 о использованием программ "Stadia" и "Harvard Graphics".

* * -м

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В ОШЖ неопер и рова иных животных ежедневные инъекции изспротеренола вызван! статистически значимый (р<0,05) подъем МИК на 5 и 8 сутки до 0.77 ± 0.15 и 0.81±0.17 7.о по сравнению с интзктными крысами, получавшими инъекции дистиллированной воды (0.45 i 0.07X0). Сходный эффект препарата на паренхиму неповрежденных органов описан для слюнных желез(Ватка,1957; Rad-1еу,19б7), фолликулярного эпителия ШД (Levnnski et ai., 1984), печени молодых крыс(6ег2еШ Зг Barini, 1976), эпителия почек и мочевого пузыря (Winter,1974). Стимуляция синтеза ДНК з культуре

бычьих паратироцитов при добавлении в среду иорадреналина продемонстрирована Brandi et al.(1986). Введение пропранолола не оказывало значимого влияния на пролиферативную активность железистых клеток(р>0,05), однако на все сроки прослеживалась тенденция к некоторое/ снижению числа митозов.

Гемипаратироидэктомия у крыс с неизмененной функцией Q-адренорецепторов вызвала выраженный подъем на 3, 5, 8 и 12 сутки в 3,5 - 5,9 раза по сравнению с контролем (Рис.1,Л). При стимуляции 6-адоенорецепторов динадасз Шк существенно изменена (Рис.1,6): подъем Шк на 3 сутки, наблюдаемый у животных 1 группы, отсутствовал; содержание колхициновых митозок на этот срок было в 3,6 раза ниже, чем в ОВД, регенерирующих условиях ненарушенной адренэргической регуляции (р<0,05). Возрастание МИК в дачной группе было более кратковременным (5-8 сутки) и, по сравнению с соответствующим контролем, количественно не столь выраженным - не более, чем в 1.9 - 2.2 раза.

В основе угнетающего дей: тЪия изопротерэнола на мчтотическузо активность в регенерирующих ОЩЖ в начальный , период регенерации могут лежать несколько механизмов .(или их сочетание); катехолами-ны способны тормозить вступление клеток в митов в Go фазе путем активации адреналин-нейлонового комплекса (Романов и др.,1984;1988; Антохин .и др.,1991); дополнительная функциональная стимуляция иаопротеренолом ' гиперзктквккх клеток регенерирующей ОЩД может вызвать конкуренцию метаболических путей, обеспечивают них специфические и пролиферативные синтеза (Бродский, Урывае-ва,1981). Известно, что при многократном введении б-агонистов развивается понижение чувствительности (десенситация, рефрактер-ность) 6-адренорецепторов (Авакян,1986), этим можно объяснить непродолжительность угнетающего эффекта изопротеренола на пролиферацию в регенерирующих СЩЙ.

В условиях блокады G-адренорецепторов пропранололом содержание колх1щиновых митоасв было повышено на 3, 5 и 8 сутки, однако пролкферативный ответ на удаление одной из двух основных ОВД: оказался ослабленным: величины МИ1: превышали уровень соответствующего контроля в 2,3 - 4,3 раза (Fko.1,С). Морфсметрические показатели строения паратироцитов не отличались от контрольных значений (р>0,05). Подобный эффект препарата хороло согласуется с опыташ Ггмбицксго с соавт.(1995), в которых описано ослабление синтеза

ДНК б культуре клеток асцитной карциномы Эрлиха в присутствии пропранолола и высказано предположение об аналогичном действии препарата на пролиферат ивные процессы е других с ? i с р. л я "и <у с л и растущих клеточных популяциях.

Частичная химическая десимпатизация крыс гуанетидином не оказывала значимого влияния на частоту делящихся паратирсцитов у неоперированных животных(р>0,05), однако, как и при введении изопротеренола, вызвала задержку пролиферзтивного ответа железистого эпителия на гемипаратирондэктомию (Рис 1,Е): на 4 день опыта подъем МКк, наблюдаемый у недесимпатпзированкых крыс., не зарегистрирован; возрастание в этой серии в 3,1 раза по сравнен™ с контролем обнаружено только на 7 день (р<0,05), на 12 сутга; величина этого показателя нормализовалась (р>0,05). Та же закономерность обнаружена и при дозированием ранении органа.

Необходимо подчеркнуть, что эффект частичной химической де-екмлэгпзлцни ка регенерацию СЕД оказался сходным с влиянием многократного введения изопротеренола. В основе этого могут лежать сходные механизмы влияния нарусенной адренэргическсй регуляции на регенерирующие ОШЖ. Компенсаторной реакцией ка вызванною гуанетидином массовую гибель симпатических ганглиев является развитие гипертрофии мозгового вещества надпочечников и выраженное повьчге-ние уровня кзтехоламиноз в периферической крови; на клетках-мизе-нлх увеличивается количество В-адренорецепторов и возрастает их чувствительность (Родионов и др.,1988; Авакян,1988). Следовательно, при химической десимпатизации -по отношению к катехолачина.; периферической крови воспроизводится ситуация, сходная с таковой при многократном введении изопротеренола.

Дозирован'ное ране н-и е ОЩЗК у крыс с ненару-аенной функцией (3-адренорецеяторов вызвало Еыраченный подъем на 3, 5 и 8 сути: соответственно в 12,6; 5,2 и 4,2 раза по сравнению с контролем (Рис.2,А). При стимуляции в-адргнорецепторез Ксопротереиолсм динамика изменена (В:с.2,Я): вырзй-знпыл подъем на 3 сутки, наблюдас-кьш у »иеотких 1 группы, сужст^кг ослаблен: содержание колхицпновых митозов на этот срск С:'ло в 2 раза нзие, чем в ГСуЯ, регенерирующих на фоне ненарушенной нэргической регуляции (р<0,05) и превышало соочвэтстзувций рол.ь не более, чем з 4,3 раза (р<0,С5). На 5 и 8 сут. величины МЛк в опыте достоверно не отличались от контроля (р>0,05).

Рис.1. Индекс колхициновых митозов паратироцитов в контроле (К) и на разные сроки после гемипаратироидэктомии в условиях различной функции й-адренорецепторов(Л -Функция А-адренорецелторов не нарушена, б-введение изопротеренола, С - введение пропранолола) и частичной химической десимпатизации (О-недесимпатизирован-ные, Е- десимпзтизированные крысы). По оси абсцисс -время после операции (сут.), по оси ординат - значения МИК (7.о), вертикальные отрезки - ошибка средней.

3

2

1

О

Рис.2. Индекс колхициновых митозов паратироцитов в контроле(К) и на разные срски после дозированного ранения ОВД в условиях различной функции й-адренорецепторов (А - функция й-адренорецепторов не нарушена, В-введение изопротерено-ла, С - введение пропранолола). Остальные обозначения те же, что на рис.1.

* *.*

В условиях угнетения- й-адренорецепторов пропраяололом содержание колхициновых митозоз в регенерирующих ОЩН было достоверно повышено на 3, 5 и 8 сутки, однако пролиферативный ответ на трав-матизацио органа оказался ослабленным(Рис.2,С): МИК на 3 день был в 2,1 раза ниже, чем на этот же срок у опытных животных 1 группы (р<0,05) и в 9,3 раза выше соответствующего контроля (р<0,05). На 5 и 8 день содержание митозов в опыте превышало в 1,8 и 2,6 раза контрольные показатели (р<0,05), однако было в 2,9 и 1,8 раза ниже, чем у оперированных животных с ненарупенной функцией 0-адре-норецепторов (р<0,05).

У десимпатизированных кивотных подьем каблзздаемый у не-десимпатиэ1фованных крыс на 3 день после операции, не зарегистрирован (р>0,05 по сравнении с соответствующим контролем), содержание делящихся клеток на этот срок было в 2,6 раза ниже, чем у но-десимапатизированных оперированных животных (р<0,05). Только на 5 день МИК в этой серии увеличивался в 3,5 раза но сравнению с контролем (р<0,05) до уровня соответствующего показателя у иеде-симпатизированных оперированных животных(р>0,05).

Кальциевые модуляторы функции околощитовидных желез оказывали выраженное влияние на процессы пролиферации и гипертрофии паа-тироцитов. У н е о п е р и р о в з п н ы х крыс, стимуляция 0S5K вызывает значимый подъем Ш! е 3,4 раза (р<0,05), при угнетении ОЩН обнаружено практически полное исчезновение митозое(р<0,05).

У гемипаратироидэктомированных животных в условиях стимуляции СЩЕ количество делящихся клеток в регенерирующем органе на все сроки значимо ке превышало уровень соответствующего контроля, угнетение 02£ также полностью подавляло пролиферативный ответ в оставшейся неудзленной железе (р>0,05).

При д о з и р о в а н к о м р а н е н и и 0С5Е у жиеотных с хронической гипокальциемией количество делящихся клеток в регенерирующем органе на я се сроки значимо не превышало уровень соответствующего кснтрглл (р>0,•?£•); при угнетении ОЦК содержание митозов незначительно ь.-зрагтало (дс О.бЪо) ка ? и 5 сутки (р'0,05 по сравнению с соответствующим контрэлем).

Таким образом, toccгановитмьны* процессы в СЦК, регенерирующие ка фоне гипер- и гипокальциемни оказываются существенно ослабленными или полностью подавленными. Е первом случае это может быть объяснено отсутствием функционального запроса, являющегося важнейшим стимулом ч рост,' эндокринных органов (Goss,l954), во втором - тем, что предел функциональной напряженности г.арати-роцитоЕ оказался, по Есей вероятности, достигнутым.

Для сравнительной сценки силы влияния .г,дгек?гиче:кнх и кальциевых регуляторов .фуккщп! CSH на процесгы их регенерации нспэль-зонан метод однефзкторного ди:г.ер~н.;нкг:-:: анализа. Обнаружено достоверное влияние всех вариантов воздействии на мнтотг^ескую активность паратир-оцитоЕ. причем кап?гльшеп с:лей влияния обладали кальциевые модуляторы QZZ (сС-ВС*. с С щей вариабельности показателя) и меньшей - модуляторы К-эдренорецепторов и десимлатиза-ция (40-50*); при зтом эффект химической десимпатизации проявлялся только на 3-4 день опыта, т.е. сказался более кратковременным.

При изучении регенерации 02?. на органном уровне установлено, ;то нарушение гдрензрпг-:еской регуляции OIS закономерно влияет ка •оясгрзф;и деляшихся паратироцитов. В условиях дозированного ра-ения пролиферзтпвкый ответ приобретает белее локальный характер: :ли у оперировании-: крыс с невг'-х-нонкей функцией с® около поло-

вшш делящихся клеток па 3-5 день после операции сконцентрированы по краям раны, а другая половина - вне ее, то при всех изученных вариантах воздействия прослеживается сходная тенденция : доля ми-тотииески делягзссся клеток в прир'аневой з.оне возрастает в среднем до 70Х, а на отдалении от раны - снижается до" уровня 302;. Этот феномен можно объяснить тем, что вследствие отсутствия или избыточности функционального запроса, в большей степени угнетается пролиферативная реакция железистых клеток, непосредственно не прилежащих к очагам гибели паренхима ("внутриорганная компенсаторная гипертрофия" по Диознеру,1980), и в меньшей - ,в прирзневой зоне с высокой концентрацией разнообразных стимуляторов клеточного деления, освобождающихся в счагах повреждения (Романова,1984).

У гемшшратироидэктомиронанных крыс проводили статистические сравнения распределения частот полей зрения с 1,2 и 3 митозами о распределением случайных событий (Пуассона). На 5-12 сутки после операции на фоне введения изопротеренола и десимпатизации у бсчь-иинства животных выявлены значимые отличия эмпирических распределений от теоретически рассчитанных: на 35-45Х реже встречались поля зрения с 1 делящейся клеткой и -в 3-5 раз чаще - с 2-3 митозами (Рис.3,а). Это свидетельствовало о появлении в гелезе очагов сгущения и разрежения делящихся клеток. Особенно наглядно подобную очаговость, выявляемую статистическими методами, можно визуально обнаружить на реконструированных центральных сегментах регенерирующих 01К (Рис.3,6).

Тот факт, что 'но всех группах повышенные значения критерия "хи-квадрат" зарегистрированы толысо в тех железах, для которых характерны достаточно высокие значения Шк, дает основания предположить о существовании определенного критического уровня проли-феративной активности, по достижении-которого диффузный тип распределения размножаятихся клеток сменяется ка очаговый. Во всех опытных группах с помощью методов регрессионного анализа проанализирован характер зависимости между величинами МИК и согласно проведенным расчетам, пролиферирующие железистые клетки начинают группироваться в очагк, когда содержание колхициновых митозов в органе повышается до 3,б*о (животные с ненарушенной адренэргической регуляцией); 1,6X0 (стимуляция 8-адренорецопторов) и 1,2"о (химическая десимпатизация).

Рис.3. Особенности органной топографии делящихся клеток в регенерирующих СПЩ. а - эмпирические СРЭ] и соответствующие теоретические (пуассоновские) [Рт3 распределения частот полей зрения с разнил содержанием митотически делящихся паратироцитов у крысы N 17/0 (7 суток после гемипарати-роидэктомии на фойе химической десимпатизации), по оси абсцисс - чиоло делящихся клеток в поле зрения, по оси ординат - частота полей зрения; б - локализация делящихся клеток в. реконструированном центральном сегменте ОЩН того' же животного (точки - митозы железистых клеток).

* А *

Следовательно, при компенсаторной гипертрофии ОШД стимуляция й-адренорецепторов и частичная химическая десимпатизации снижают в 2,3-3 раза критический уровень митотической активности, по достижении которого диффузный тип пролиферативной реакции сменяется на очаговый.

Б ОЩК взрослых крыс постоянно встречаются тканевые базофилы, плотность популяции составляет 41,2 ± 3,1 тучные клетки в расчете на 1 га2 площади среза органа. Большая их часть (66,3 ± 3,87.) располагается в капсуле, меньшая (33,7 ± 3,87.) - локализована в прослойках внутриорганЕсй соединительной ткани.

Однократная инъекция дистиллированной воды не сказала значимого рлияния на величины индексов дегрануляции ТБ ОЦЖ. В ответ на

инъекцию изопротеренола обнаружено двухфазное зозрзотание секреторной активности тучных клеток: через 24-60 мин. в среднем з 2,3 раза по сравнению с контролем (соответственно 36,4 ± 3,7?; и 15,8 ± 2,0%; р<0,05) и через 144-168 мик. в среднем до 31,9 ± ñ% (р <0,05 по сравнению с контролем). Инъекция пропранолола вызвала возрастание величины индекса дегрануляции ТБ ОЩЙ через 132-156 мин. в среднем на 51Z по сравнению с контролем (р<0,05).

Однократное введение пзратиреоидина(ПТГ) вызвало подъем индекса дегрануляции ТБ через 36-120 минут после инъекции в среднем на 78* по сравнения с контролем (соответственно 40,6 t 1.9% и 22,8 ± 2,3' ; p<0,0ñ). Инъекция кальцптонина(КТ) вызвага статистически значимый подъем секреторной активности ТБ через 24-84 минуты после инъекции гормона в среднем на 87-100% по сравнению с контролем(42,6 í 4,3%, р<0,05)..

В целом, по сравнения с эффектом введения кадъцийрегулирукщих гормонов (ПТГ и XT) возрастание секреторной активности тканевых базофилов под влиянием 8-адрензргических препаратов оказалось более кратковременным. В значительной мере это можно объяснить разнонаправленным действием препаратов на железистые и тучные клетки: с одной стороны, они стимулируют выделение в кровь ПТГ (изоп-ротеренол) и KT (пропранолол) - (Золоев и др. ,1987; Fishers-Blum,1980), с другой - ослабляют секреторную тканевых базофилов, индуцированную специфическими и неспецифическими дегрануляторая! (Malolepszy et al.,1980; Nasal et al.>1985; Undem et al.,1985).

Таким образом, " в ходе проведенного исследования показало, что состояние адренэргической регуляции является важным фактором, закономерно влкяхицим на выраженность процессов_посттравматической регенерации и компенсаторной гипертрофии €ПЩ на ткапэвом и органном уровнях. В условиях фармакологической модуляции й-адренор?-цэпторов и частичной химической десимпатизации существенно уменьшается роль основного клеточного механизма регенерации 0!ДЯГ - ми-тотического деления главных клеток, а на уровне 'органа отчетлк?о проявляется тенденция к развитию пролиферативной реакции не по диффузному, а по счагозому типу. При этом по сравнению о кальциевыми регуляторами парзтиреоиднсй функции, использованные модели нарушения адренэргической регулящга окззывают сходное по направленности, однако более кратковременное и количественно менее вы-ратаиое влияние на процессы регенерации околощитовидкых желез.

выводы

1. В паренхиме околощитовидных желез интактных крыс стимуляция 6-адренорецепторов ежедневными инъекциями иэрпротеренолз вызывает умеренное возрастание темпа вступления железистых клеток в митоз на 5-8 день опыта, блокада ¿-адренорецепторов ежедневными инъекциями пропранолола не оказывает значимого влияния на частоту делящихся паратироцитов.

2. В условиях ежедневной фармакологической модуляции 15-адре-норецепторов пролиферативный ответ паратироцитов нз гемипаратиро-идэктомию и дозированное ранение околощитовидных желез, по сравнению с животными с ненарушенной адренергической регуляцией, существенно ослаблен. При введении пропранолола это проявляется в снижении в 2-3 рзза содержания делящихся клеток при неизмененной общей продолжительности периода подъема митотической активности (3-8 сутки), при введении иэопретереьолз - в удлинении фазы пре-репликативной активации клеток и, как следствие зтого, б укорочении фазы усиленной пролиферации (5-8 сутки, без введения препзра-ратз - 3-12 сутки).

3. Частичная химическая десимпатизацкя крыс гуанетидином не оказывает значимого влияния нэ частоту делящихся паратироцитов у неоперированных животных, однако вызывает задержку пролиферзтив-нэго ответа железистого эпителия на дозированное ранение органа и гемипарзтироидэктомию (соответственно 5 и 7 сутки у десимлзтизи-рованных крыс по сравнению с 3 к 4 днем у недесимг.зтизироЕанных животных).

4. Нарушение адренэргической регуляции ОШК закономерно влияет на органную топографию делящихся пзратироцитов: пролиферативный ответ на " дозированное ранение органа прноСрс-тзет более локальный характер (преимущественно прирзневая зсна); при компенсаторной гипертрофии ОЩЖ стимуляция е-адренорецепторов и частичная химическая десимпатизация снижает в 2,3-3 раза критический уровень митотической активности, по достижении которого диффузный тип пролиферативкой реакции сменяется на очаговый.

5. Фармакологические модуляторы В-адренорецепторов закономерно влияют на секреторную активность внутриоргазгаых тканевых базофилов околощитовидных желез: однократное введение изопротере-нола вызывает органоспецифичное усиление дегрануляции тучных клеток через 24~60 мин. к 144-168 мин. после инъекции в среднем в

2,3 к 2 раза по сравнению с контролем, однократное введение лроп-ранолола вызывает возрастание индекса дегрануляцик тканевых Оаго-фнлов через 132-156 мин. в среднем на 51% по сравнению с контролем.

6. Кальциевые модуляторы функции околощитовидных желез (хроническая гипо- и гиперкальциемия) существенно ослабляют (пост-трзвмзтичесг-зя регенерация) или полностью подавляют (компенсаторная гипертрофия} развитие пролиферативного ответа на дозированное ранение органа и гемипаратироидэктомию.

7. По сравнению с кальциевыми регуляторами паратирэс.-дной функции, использованные модели нарушения адренэргической регуляции оказывают сходное по направленности, однако более кратковременное и количественно менее Еырачекпсе влияние на процессы пролиферации и гипертрофии паратироцитов в регенерирующих околсщпто-зидных железах. Предполагается, что в основе этого сходства лезхат общие мехгнкаш взаимоотноиений между специфической функцией паратироцитов и ILX способностью к пролиферации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Незлое A.B., ï.iiipo Т.Л. Посттравматическая регененерация око-дощтаоЕидных желез при ргрличком функциональном состоянии ß-адре-норецепторов// Морфология раневого- процесса.- Санкт-Петербург, 1992.- с. 31.

2. Павлов A.B., Миро Т.Л. Влияние новодрика и обзидана на секреторную активность тканевых базофилов щитовидной и окагодатовид-ных иелез//Проблемы зндокр:шологки.-1992.- т.32.-вып.2.- с.54-55.

3. Павлов Д.В..Запрягаев В.В.,Иванов C.B..Соколова М.М., Мкро Т.Л., Гуревич М.Ю. Клеточные и тканевые механизм постнатальнсго и адаптивного роста эндокринных желез // Тез.докл. 11 съезда анатомов, гистологов и эмбриологов. Полтава, 1992, с. 180.

4. Павлов A.B., Миро Т.Л. Рол^ тканевых базофилов в регуляции регенерации околощитойидннх пелез// Материалы научной конференции "Критерии и методы оценки жизнеспособности тканей в раненом процессе"." Сгикт-Петербург, 1993.- с.38. ■

5. Павлов A.B., Соколова М.М., Кемоклидзэ К.Г., Миро Т.Л. Клеточная гипертрофия и соматическая полиплоидия з яелеэах внутренней секреции // Тезксн докладов 1 конгресса ассоциации морфологов СНГ):- Морфология.-1993.- т.105.- вып.9-10.- с.125.

5. Павлов A.B., Соколова М.М., Миро Т.Л. и др. Роль тканевых базофилов в регуляции псстнатального и адаптивного роста эндокринных желез // Материалы 3 съезда анатомов, гистологов и эмбриологов Российской Федерации.- Тюмень,1994.- с.142-143.

7. Павлов A.B., Миро Т.Л. Влияние некальциевых регуляторов секреции пзратгормона на пролкферативные процессы в регенерирующих околощитовидных железах // Материалы 3-й Всероссийской научной конференции "Влияние антропогенюлх факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных". - Волгоград, 1935.- с.101.

8. Миро Т.Л. Компенсаторная гипертрофия околощитовидных кэлез в условиях химической десимпатиэации // Гистогенез и регенерация тканей.- Санкт-Петербург,1995,- с.91.