Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Пути оптимизации иммунного ответа при вакцинопрофилактике чумы, брюшного тифа и бруцеллеза у животных в условиях острой интоксикации фосфорорганическими соединениями

Миюютерсзгес 8драаосурш«гш СИР

ос&огоша ордщ\ трудаго красшш ж«еш шучш-ксзэдо^ямшсй протиззчушшя инштэт "шэтов*

На правах руксакси

РасклкЗ Нягоаай&кч

пки 0ICKSÎ3U5ZÎ 12сшюгг CTLXÏÂ. ПРИ

Bmvmi&mmi&'m mm, этаьго mi, и вядаквд s ееюгнчх з jojssk ояш шгскедащи

ЖСАОГ-ОРШЗ^^ШП! (ШДПНШШ 14.00.30 - елжоргодогця и плсупадог,:?

А в 7 о р 8 ф " i a ï

та еаискевЕз учгвой згесени кандидата ¡едац:«гккз кадк

саг«оз - às-9t

Работа выполнена на кафедре военной эпидемиологии и военной гигиены военно-недицвнского факультета пря Саратовской медицинском институте. . .

Научный руководитель! доктор медицинских наук Л.Н.ШАНИНА..

Официальное оппонента?" доктор медицинских наук, профессор Мохин Константин Максимович;' кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Адамова Палина ВлаДимйровна.

Ведущая организация - Ставропольский НИЩИ Кавказа и Закавказья. •

Защита состоится " и'М/СЯ 1991 гс-а в ча-

сов ка заседании специализированного совета К 074.32.01 при Всесоюзном научно-исследовательском противочумном институте "Микроб" (410071, г.Саратов, ул.Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИПЧИ "Микроб".

Автореферат разослан " " 1991 года.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник г З.Л.Девдариани

ОБЩАЯ ХАРЖГЕРШТЖА РАБОТЫ

■ Вакцинные препараты, используемые в настоящее время для специфической профилактики чуш, брэшного тифа и бруцеллеза на в полной мере обеспечивают защиту вакцинируемых от заболеваний (Карпухин Т.М. с соавт., 1979; Вершилова П.А., с соавт., 1385; Желудков Э.И,, 1985). Этим определяется важность изучения оптимизации иммунного ответа вакцинопрофилактики умы, брюшного ти£а и бруцеллеза, т.к. весьма серьезны социально-экономические осложнения, которые имеют место в случае возникновения эпидемий.

Особую важность приобретает эти исследования в условиях имеющегося иммунодефицита организма, вызванного интоксикацией. Дело в том, что загрязнение лоздуиних бассейнов промыпленных городов в результате деятельности химических предприятий, широкое использование препаратов химии в быту создает реальнул угрозу для возникновения вгорччного иммунодефицита за счет интоксикации организма химическими веществами, что в своо очередь сопровождается угнетением ентителогенеза и неспецифической резистентности организма (Олифер А.И., 1978; Еелоскурская Г.!'., ЕргесСпев К.Е.,3986; Забродский П.Ф., 1987). Аварии на химических предприятиях, отравления фосфорорганическими веществами такяе увеличивавт возможность создания больших контингентов людей с признаками острого вторичного иммунодефицита.

Актуальность подобных исследования диктуется также и тем, что в арсенале химического оруяия имеется большая груша отравляющих веществ фосфорорганического происхогщения (Туманян М.А., 1987; Лужников Е.Л. с соавт., 1969), что в случае их использования повлечет за собой резкое изменение реактивности организма в сторону ее ослабления. Сказанное выше выдвигает проблему изучения вторичного постинтоксикационного иммунодефицита в ранг первостепенных проблем при вакцинальных процессах.

В последние годы с целью повышения естественной резистентности организма против возбудителей инфекционных заболеваний, повышения защитных свойств слабоиммуюгенных вакцин предложены различные типы иммуностимуляторов (Земсков A.M., 1975; Исупов И.В. с соавт., 1983; Лазарева Д.Н., Алехин В.К., 1985, 198?; Егеаег М.К., 19»Jj Irenae J.J. et el., ). Однако при вакцинопрофилактике чу-

мы, брюшного тифа и бруцеллеза роль иммуностимуляторов изучена недостаточно.

Поэтому выяснение закономерностей течения вакцинальных процессов в условиях острой интоксикации фосфорорганическили соединениями (ФСС), поиск фармакологических средств с идаукомодуяирующимн свойствами с целью коррекции и оптимизации иммунного ответа имеет большое научио-практ,#ческое значение. Необходимо отметить, что эти важные в практическом и теоретической отношении вопросы не изучались на моделях вакцинации против чумы, брэяшого тифа и бруцеллеза.

ЦЕЛЬ настоящего исследования заключалась в поиске способа коррекции и оптимизации поствакцинального иммуногенеза при вакцинации против чукы, брюшного тифа и бруцеллеза на фоне острой интоксикации ФОС.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить в эксперименте влияние отимизола, феназепама, аце-клидина на шааункый ответ при вакцинации чумной, бруцеллезной и брюшнотифозными вакцинаии.

2. Определить оптимальные дозы и сроки введения ишуностиыули- . рующих препаратов.

3. Разработать экспериментальную модель для изучения повреждающего действия §0С,

4. Исследовать имыуносупрзсошгае действие 5ОС на гуморальные и клеточные показатели гашуюгает... ври введении изучаемых вакцин.

б. Определить возиойнооть совместного применения отшизола, феназепама и ацеклидияа с чумной, бруцеллезной и брюшнотифозной вакцинами для снижения гащунодепрессивного действия ФОС и оптимизации вакцинального процесса в условиях острой интоксикации.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Вне; ¡не изучены иммуномодулирующие свойства фармакопейных препаратов этюшола, ацеклидина и феназепама на модели чумного, брюшнотифозного и бруцеллезного вакцинальных процессов. Устанс лены новые закономерности течения вакцинальных процессов под влиянием изучаемых иммуностимуляторов, выражающиеся в сокращении индуктивной фазы иммунного ответа, увеличении соответствующих показателей специфического и неспецифического иммунитета. , '

Впервые Показано, что введение ФОС животным, привитых живыми чумной и бруцеллезной, а также брюшнотифозной вакцинами, сопровождается подавлением иммунологической защиты, четко проявляющейся - косвенных критериях специфической и неспецифической резистент-

ности (уменьшении титра специфических антител, снижения показателей РГЧ, содержания лизоцииа в сыворотке крови и НСТ-тесте), и в прямом опыте заражения ¡аааунизировакных мышей вирулентным брюшнотифозным штампом. Это свидетельствует о развитии вторичного иммунодефицита при вакцинации в условиях интоксикации ФОС.

Представлены новые данныз о фармакологической коррекции эти-мизолоа, фенаэепаыом и ацеклидшом вторичной иммунологической несостоятельности изучаемых вакци: льадх процессов ь условиях острой интоксикации 4ОС. Введение препаратов стабилизирует измененную реактивность организма, отменяет иммунодэпрессивное действие 20С й приводит к оптимизации вакцинального процесса.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Разработана экспериментальная модель для изучения острого с равления 5ОС, что позволяет проводить иммунологический мониторинг при различных постинтоксикацпонных состояниях.

Определены яозы и с хеш введения фармакопейных препаратов -этимизола, феназепама и ацеклидина, позволяйте повышать иммунологическую эффективность чумных, бруцеллезных и брюшнотифозных вакцин в эксперименте.

Экспериментально обоснована и показана принципиальная возможность отмены иммуиодепрессивного действия ФСС при вакцинации против чумы, бруцеллеза а брюшного тифа с помощи фармакологических средств, что является основой для коррекции иммунитета и проведения вакцинации в услозкях псврекдаоа;эго действия ФОС.

ВНЭДРЕНИЕ. Результаты диссертационной работы используются в исследовательской и производственной практике института биоорганической химии АН БССР в процзссе получения антисывороток к гормонам; в учебных процессах при чтении лекций и проведении семинарских занятий на кафедра обв\еЙ и военной ¡эпидемиологии Военно-ме-дицииской академии имени С.М.Кирова и кафедра военной эпидемиологии и военной гигиены Военно-медицинского факультета при Саратовском медицинской институте, о чем имепгся соответствующие акты внедрения.,

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзной научной конференции "Проблемы донозодогичаской гигиенической диагностики (г.Ленинград, 23-25 мая 1989 г.), научной конференции ВНИПЧИ "Микроб" (г.Саратов, 21-23 апреля 1988 г., заседании Саратовского отделения Всесоюзного общества токсиколо-

гов (г.Саратов, 28 января 1988 г.), заседании кафедр военной епидеыиояогии и военной гигиеш и токсикологии медицинской защиты Военно-медицинского факультета при СМИ (г.Саратов, 2 ноября 1990 г.).

ПУБЛИКАЦИЙ. По материалам диссертации опубликовано 12 работ, внедрено 13 рационализаторских предложений.

0БШ1 И (ЯЕШУРА РАБОТЫ. ДиссврФацня изложена на Î82 страницах машинописного текста и содержит: введение, материалы и методы, пять глав, ааклочение, выводы, и библиографический список, который вклвчает 192 отечественных и 64 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 20 рисунками и <£ таблицами.

. ОСНОВШЕ ПСЙШШЙ, ШКОСШЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Введение чуетай, бруцеллезной и бркяанотифозной вакцин совместно с зтимлзолоы, фенапепамем и ацеклидином приводит к повышение эффективности вакцккации, о чей свидетельствуют соответствующие показатели гуморального и клеточного ииыунитета.

2. в условиях острой шлоакиации значительно снижается эффективность вакцинального процесса против чума, бруцеллеза и брюшного- тифа, что подтверждал; кссвежиа и прямые критерии иммунодеп-рессивного действия ФСС.

3. Для получения {¡ффвктшшого специфического иммунитета против чумы, бруцеллеза и брюаного тифа в условиях действия ФОС могут быть рекомендована коррег»фусг^1а фармакологические препарату эти-мизол и феказепаы, уселотиважг^е иьшунологкчзскув эффективность вакцин и приводите а ептвдизацки вакцинального процесса.

содбшшщ шин.

I. liasepaasa в ызтоды

Исследования проведены на беспородных гзтотиых двух видов: белые мыши массой - 18-И) г (Î700 1'олов) я белые крысы - массой 200250 г (700 голов), которые получали из вивария СМИ, ВШШ "Микроб" и станции"Столбовая* Московской области. Перечисленные ниже фармакопейные препараты были изучены как стимуляторы иммунитета! и неспецифической резистентности организма в сочетании с вакцинами.

В работе использованы, относящиеся к различным классам соединений, отечественные: фармакопейные препараты: - г-чмиэол, ацеклидин

и феназепаы. Этимиэол (этилнорантифеин) откосится к группе биологических веществ актифеиноа. Стимулирует систему гипофиз - кора надпочечников и обладает широким фармакологическим действием, Феназепаы относится к группе транквилизаторов бензодиазепинового ряда. Основной точкой воздействия на организм является ГАМК - ер-гическая система. Ацеклидин является х^лкномиметическим веществом, стимулирующим преимущественно м-холинореактивные системы организма. При введении в организм г бывает усиление функции органов, имеющих холинергическую иннервация. Влияние этих препаратов на уровень специфических и [»специфических факторов иммунитета на введение живой чумной вакцины, химической сорбированной брюшнотифозной вакцины, живой бруцеллезной вакцины оценивали при их введении как раздельно так и а комбинации.

В качестве токсического препарата ФСС было использовано вещество ВИ-икс - третичный тиохолиновый эфир кетилоясиэгилфосфаната. Относится к гр. tine ядов нервно-паралитического действия. В даннуя группу, как известно, входят вещества йюсфорорганической-природы (ФОБ), фосфорорганические инсектициды (56Ш), ядохимикаты на основе карбоминовой кислоты, фосфорорганические лекарственные средства.

Уровень специфического гуморального иммунитета оценивали по титрам,антител к фракции I (01) чумного микроба, которые определяли в системе реакция Н1ГА - РНАг в мигротитраторе системы "Та-качи" согласно "Инструкции по применению серологических методов диагностики при эпизоотологичзскои обследовании природных очагов чумы" (1974) с использованием коммерческих эритроцитарных диагно-стикумов, изготовленных в Среднеазиатском 1НИ. Титры специфических антител на введение бруцеллезной и бряпшотифозной вакцин определяли в РПГА с испо^зовакием коммерческих диагностинумов согласно наставлений по их применению. Показатели клеточного иммунитета оценивали по реакции гиперчувотвительности к 51 чумного микроба и стандартного бруцеллина по методика, предложенной ВНИПЧИ "Микроб" (Методические рекомендации по косвенному определению чувствительности диких грызунов к возбудителю чумы, Саратов (1981).

Очищенный антиген 81 чумного микроба получен по методу Baker в.в. et ai. (1947) из атоксичного бескепсульного штамма 358/12 и любезно предоставлен институтом "Микроб".

Напряженность иммунитета у мышей, привитых брюшнотифозной вакциной определяли в опытах прямого заражения иммунизированных животных' вирулентным штаммом возбудителя брюшного тифа Ту9 4446. Учет гибели мышей в опыте и контроле производили в течение трех дней. Количественную оценку эффективности различных ЮС осуществляли путем определения индекса эффективности иммунитета (защиты) (Карпухин Г.Й. с соавт«, 1979).

Дня оценки влияния иммуностимуляторов «а клеточные факторы неспецифической резистентности организма определяли кислородза-висимую функции полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПЯЛ) периферической крови, вшшляемуа в спонтанном НСТ-тесте. ЩТ-тест является одним из показателей иеспецифической перестройки организма (Голу-бинский Е.П., 1984). Он позволяет оценивать бактерицидный потенциал полинуклеаргах лейкоцитоз Шаяиский А.Н., Виксман Ы.Е. с соавт., 1977; Нагоев B.C., Еубич й.Г., 1981; Маянский А.Н., Маян-ский Д.Н., 1983). Спонтанный НСТ-тест ставили п^ методу В.н.Park (1971). На основании просмотра в мазках 100 нейтрофильных лейкоцитов устанавливали процентное содержание даформазанположительных клеток, способ«« восстанавливать НОТ и содержащих в цитоплазме отложения глыбок и гранул темно-синего формазана,

Лазоциы сыворотки крови определяли по методу П. Idad (1985). Известно, что лизоцим, является од.ли из ведущих факторов неспецифической резистентности в организма Д.Э.Плецитный о соавт.(1962, 1965).

В качестве вакцинных препаратов были использованы коммерческий препарат сухой айвой чумной вакцины (ЖЧВ) сЛ8 К.Р 678 и сДЭЭ К.К= 88S, приготовленный Г ШИ Кавказа и Закавказья, живой бруцеллезной вакцины (ЕБрВ) с.40-1 К.» 601 Омского НИИ природноочаговых инфекций, химической сорбированной брюшнотифозной вакциной (БТВ) с.321-8 К.» £81" и с.413-5 К.» 1074 Ташкентского НИИ вакцин и сывороток. "•■■,-.■■

Для обработки полученных данных использованы методы статистического анализа (Ашмарин И.П. с соевт., 1962; Урбах В.Ю., 1975).

2, Результаты исследований

Исследования проводились в три этапа. Первый вклочал изучение в~чяния этимизола, феназепэма и ацеклидина на иммунный ответ при введении изучаемых вакцин. I& исходили из того, в литературе

имеются данные о действии этих фармакопейных препаратов на выработку интерлейккна I, активность макрофагов, показатели гиперчувствительности з«недленного типа и прочее, что свидетельствует об их иммунотропной активности (Заводская Н.С. с соавт., 1982; ЬепЛзпг и. «г а!., 1985), Однако подобные исследования не проводились на модели вакцинального про"есса против чумы, бртаиного тифа и бруцеллеза. На втором этапе изучали действие фосфорор-ганических соединений (ФОС) на ант 'елогенез при иммунизации исследуемыми вакцинами. Ранее в работах А.И.Олифер (1978), Р.А.Зем-скова с соавт. (1983), О.Р.Оаза1е (1983), А,*яевП а1. (1985) было показано угнетающее влияние ФОС на антитеяогенез и неспецкфическуя резистентность организма при введении тимусзави-симых и тимуснеэавискж -с антигенов. На заключительном этапе были определены способы фармакологической коррекции иммунного ответа при введении КЧВ, НТВ и КБрВ, в условиях интоксикации ФОС,

Проведенные исследования первого этапа показали, что этимизол, феназепем и ацеклидин обладают выраженной, но га равнозначной иммунологической активность*}. Наивысшей стимулирующей активность» обладал этимизол, который при двукратном введении значительно повышал уровень специфического гуморального ответа у животных. Так, титры антител к Ф1 у животных, получивших этимизол совместно с чумной вакциной, по сравнении с контрольной группой (вакцина), увеличивались з 2-4 раза (Р < 0,001). Аналогичные результаты получены и при исследовании химической сорбированной брюшнотифозной вакцины (рис.1).

Необходимо также отметить, что под действием этимизола происходило сокращение индуктивной фазы иммунного ответа. Это выражалось в том, что антитела в опытной группе (ЖЧВ + этимизол или БТВ + этимизол) вивотнык начинали выявляться уяе на первые сутки после иммунизации, в то время, как в контрольной группе (вакцина) - только к концу четвертых-пятых суток. Более того, под действием этимизола отмечается и удлинение (до 50 сут) сроков обнаружения диагностических титров антител при использовании чумной и брюшнотифозной вакцин. Менее демонстративно влиял этимизол на выработку антител при введении живой бруцеллезной вакцины, хотя и в этом случае отмечено достоверное (Р <. 0,05) повдаение выработки специфических противобруцеллезных антител.

* 4/т N

Л

Рис.1, Влияние этйыиэояа, фенозепаыа, вцеклидина на датчику выработки антител к чумной вакцине у белых майей.

По оси абсцисс - время исследования ловле иммунизации, сут. По оси ординат - 1е титра антител к фракции I чумного микроба.

1 - животные получившие вакцину ЕВ (контроль);

2 - животные получившие вакцину ЕВ и ацеклидин;

3 - животные цодучигше вакцину ЕВ и феназепан;

4 - животные получившие вакцину'ЕВ, феназепаы и ацеялидин;

5 - животные получившие вакцину £Г и этимизол;

к - достоверность различий с контролем (Р< 0,05).

Не менее важными представлял?ся данные, что под влиянием зти-миэола наряду с повтшением гуморального иммунного ответа значительно активизируются и клеточное механизмы иммунитета. Так, на восьмые сутки после иммунизацст у животных, получивших ЕЧВ, прирост толщины лел[ки в РГЧ составил 24 % (Р < 0,05) и 45-53 % -у получивших ЖБрВ.Отмеченная закономерность сохранялась до 14 сут. Это, вероятно, связано с тем, что втимизол способствует накоплению в иммунокомпетентных клетках ц' лит а кого аденсзинмонофосфа-та (ЦШБ) (Сапронов Н.С., 1979; Заводская Н.С. с соавт., 1982), который является универсальным шздукторсм инициации клеточных реакций, посредником между гормонами различных групп и клеточной системой энергетического обмена (Биряков А.В. с соавт., 1965). Поэтому введение этими?"ша в индуктивную фазу иммунного ответа способствует увеличения ЦШ£ в результате чего усиливаются процессы клеточной дифференцировки, что способствует более выраженному накоплен^' пула антителообразуюцих клеток (Фролов Б.А. с соавт., 19©) и усиления выработки антител.

Однократное введение феназепама животным в дозе 2,5 «г/кг достоверно повышало синтез антител к Ф1 чумного микроба пра введении ЙЧВ и 0- и VI -брюшнотифозных антител, при введении БТВ. Начиная с пятых суток после иммунизации ¡ИВ и БТВ вакцинами совместно с феназепамом и вплоть до 18 суток показатели титров антител достоверно (Р < 0,05) были в 1,6-2,0 раяд меньпе, чем в контрольной группе животных, иммунизированных только вакциной. Изучение Р1Ч у животных, получивших феназепам, выявило также значительную) стимуляции клеточного иммунитета на введение КЧЗ.

Механизм повышения гуморального иммунного ответа под влиянием феназепама моют быть связан с наличием на мембране макрофагов, перерабатывающих и представляющих ентиген Т-хелперам, участков фиксации бензодиазепинов (ЪепТапЬ И. вг а!., 1985). Феназепам, проявляя афинность к бензодиазепиновыи связывающим участкам макрофагов, модулирует гуморальный имцушшь ответ, вероятно, оказывая влияние на представление антигенной информации Т-клеткамя. Не исключено такне, что под влиянием феназепама происходит изменение синтеза макрофагами интерлейкина I. Механизм иммуностимулирующего эффекта данного соединения моязт быть связан такзе о его индуцирующим действием на активность монооксидазных энзимоз иммунокомпетентных клеток (Саприн А.Н. с соавт., 1985). При атом увеличение активности ферментов, мзтаболиЗярующих ксенобиотики

в лимфоцитах, оказывает иммуностимулирующий эффект. Повышение татра антител к vi -антигену под влиянием феназепама, видимо, связано с его действием на В-лимфоциты.

В то же время у белых крыс не удалось выявить стимулирующего воздействия феназепада-.на В-систему, при совместном его введении с живой бруцеллезной вакциной. Однако РГЧ у животных, получивших феназепаи, показало дсстовер!!ую стимуляцию клеточного иммунитета. Прирост толщины лапки у животных опытной группы (вакцина + фена-зепам) на 8 сут после введения ваншш на 45 % превысил аналогичные данные контрольных животных.

Несколько отличнш бнло действие ецзклидина, введение которого приводило лишь к незначительному н кратковременному усилению выработки а кип ей » пераш 2-3 дня после вакцинации. Однако уже к 8 сут исследования различий в уровнях титров антител в опытных и контрольных группах животных.не наблюдалось.

- Синергкчное действие иммуностимуляторов Cl-ло отмечено при введении с ЖЧВ феназепама: и вцеклвдина, когда получили максимальный эффект стимуляции специфических гуморальных факторов иммунитета. При этом однократное введение феназепама в дезе 2,5 иг/к г в день иммунизации и 4,0 ыг/кг 'аце:;лвдинз на следующий день обеспечивало значительное повышение выработки специфических антител к Ф1, титр которых по сравнена» с контролем (ЖЧВ) увеличивался в 2,26,0 раз. Причем достоверное (Р < 0,05) повышение содержания антител сохранялось в течение всего периода наблюдения (22 сут). Отмечается также значительное сокращение индуктивной фазы иммунного ответе. Это, вероятно, связано с двухэтапшм воздействием препаратов на иммунояош. рентные клетки. Феназепаа, видимо, активирует процессы переработки и представления антигена, а ацеклидин оказывает стиыулирувщее влияние на Т-хелперы вследствие действия на Ы-холино!.активные структуры данных клеток, что приводит к увеличена) уровня цГШ (Strom Т.Е. et «I., 197^1 Eichaaa p.p., Iraasoa B.C.У.» 1979 }. В результате увелтивается синтез ДНК в клетках, активизируются пролиферативные процессы ( Нас Ыапиз J.P. et в1. 1975 )• Холинергические егонисты способны повышать функциональную активность не только Т-клеток ( Stroa Т.В. et el., 1974; Мао Шшus J.P. et el., 19?5j Eichmaa D.P. et al., 1979 ), но и В-лшлфоцитсв (Адо А.Д. с соавт., 1985).

Изучение влияния этишзола, феназепама и ацеклидина на показатели неспецифической резистентности у -и!вот.о;х, иммунизирован-

пых живой чумной вакциной, позволило установить, что в зтсм случае происходит снижение переваривающей активности клеток в ÜCT-тесте, вплоть до 0 сут наблюдения. Аналогичные результаты отмечены и при введении )i!SpB.

Вероятно, ото связано с ингибированием фагопитарьой реакции иейтрофилов периферической крови у яивотных на этапе уничтожения микроорганизмов вследствие участия энзимов нейтрофилов в переработка иммунных комплексов. Результатом этого и является замедление процессов восстановления нитроспнзго тетразолия (Исин K.M., 1985; Забродский П.Ф., 1988).

У животных, иммунизированных живой чумной вагиной и живой бруцеллезной вакцине", под влиянием этимизолэ и фзназе ма уровень лиооцима в сыворотке крови достоверна (Р <. 0,05) также повышался по сравнению с животными, получившими только вакцину. Различил сохранялись вплоть до 8 сут исследования. Что касается яипотных, иммунизированных брюшнотифозной вакциной, то нужно отметить отсутствие различий (Р> 0,05) в показателях функциональной активности нейтрофилов э НСТ-тесте и сывороточной активности лизоцима периферической крови как у животных получивших шмуно-модуляторы, так и животных контрольной группы.

В опытах прямого заражения мышей вирулентным штаммом !Т,ур4446), вакцинированных БТЕ, ЕТВ + зтимизол и БТЗ + феназепам было также подтверждено, что иммуностимуляторы значительно повышают устойчивость животных к заражения.

Таблица

Сравнительная характеристика влияния зтимизола и фенаэепэма на эффективность хк кческой сорбированной брюшнотифозной вакцины при заражении беттх мышей возбудителем брэпного тиф а

№![" : Группы . : Количество:^ них .'Средний титр антител, Т пп ¡животных ¡животных в:выжило:-

:_: группе : : О-антиген : У» -антиген

1 Интактные

(контроль) 15 0 0 0

2 БТВ 15 26,6* 2,1+0,1 2,4+0,12

3 БТВ+этимнзол 15 93,3х 3,2+0,12 2,9+0,11

4 БТБ+феназепам 15 00,0К ' 4,1+0,15 3,1+РД4 Примечания; 1) титры антител выражены в логарифмах титра;

2) х - различия по отношению к контроля достоверны при Р< 0,001.

- и -

При этом иммунизация милей только вакциной брюшного тифа зачищала ш отных от последующего заражения вирулентным шташом брюшного тифа в 26,6 % случаев, в то время как введение этимизо-ла увеличивало процент вьяшввих животных до 93,3 % (Р < 0,001). Введение феназепака обеспечивало 80 % защиты мышей от смертельной дозы инфекций <Р< 0,01). Уровни титров антител в этом случае также достоверно различались у опытной и контрольной труп., животных. У мышей, получивших иммуностимуляторы и вакцину, они были в 2-4 раза вшле, чем у животных, иммунизированных ЕТБ. Следовательно, используемые иммуномодудаторы при совместном применении с вакциной не только значительно стимулируют гуморальный иммунитет, но также существенно повышает устойчивость жизотных зараженных вирулентным возбудителем. Отмечается наличие корреляции ыек-ду уровнем антител в сывор -тке крови и напряженносгою защиты к возбудителю. Это, по-видимому, связано с особенностями функциони-. рования генотипа макроорганизма, т.е. с отношением к антигенным структурам брюшнотифозной вакцины главного комплекса тканевой совместимости клеток иммунной системы белой крысы (Рацззей, Ь'оге, 1979). При этом речь идет о только гуморальном ответе ыэкрсорганизыа.

Исхода из вышеизложенного можно считать, что использованные кммуномодуляторы оказывают значительное влияние на иммунный го-месстаз кивотных, вакцинированных чумой, бруцеллезной, брюшнотифозной вакцинами, что выражается в нарастании уровня специфических антител и повышении их концентрации в исследуемых сыворотках крови, усилении Т-клеточного иммунитета и напряженности иммунного ответа. Наиболее сильное воздействие на антителогенез оказало применение этимиэояа» а уакке комбинации препаратов феназепам + ацеклидин, которая приводила к потенцирующему аффекту в выработке, антител на введение вакцины. Как правило, под влиянием изучаемое препаратов активизируются и неспецифические факторы защиты организма.

В оо дачу иасчедования входило изучение влияния острой интоксикации, вызванной препаратом фосфорорганической природы - Ви-икс, не показатели неспецифичзской и иммунологической резистентности при иммунизации животных живой чумной и бруцеллезной, а также химической бролнотифозной вакцинами.

Как показали исследования, предварительное, перед иммунизацией введение животным препарата Ви-икс в дозе 1,0 ДП^ приводило к угнетению, независимо от вводимой вакцины, «шунологических показателей (рис.2 и 3). Гак. уже на пятые сутки после вакцинации продукция специфических антител была достоверно енияеш (Р < 0,09 в группе животных, которые получили Ви-икс и вакцину а 2-2,2 раза по сравнению с контрольной (вакцина) группой . Супрессивное действие Ви-икс на В-факторы иммунитета было значимым до 18 суток наблюдения. Наиболее глубокое угнетение выработки антител приходное. на 7-14 сутки исследования. Результаты коадой аллергической реактивности, которая определялась постановг"й FF4 на 8-е и 14-е сутки после имм; газации показали, что на протяжеш всего периода эксперимента прирост толщины, лапк« у животных, получивиих вакцину на фоне острой интоксикации"Ви-икс, были в 1,5-2 раза ниже , чем у животных, получивших только вакцину. Изучение динамики показателей неспецифической резистентности тэ'те выявило супрессивное действие Ви-икс на гсмеостзэ у животных. Достоверное (Р < 0,05) снижение уровня лизоциыа в сыворотке крови животных, получивших Ви-икс и вакцину, сохранялось до 14-18 суток наблюдения. Угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов оказалось не таким длительным. Бри введении бруцеллезной вакцины снижение показателей 1ЮТ-теста наблюдалось до 5-х суток, при введении чумкой и брюшнотифозной вакцин - до 8-х суток исследования.

Причины такого подавления иммунологической и неспецифической резистентности организма производными ФСС, вероятно, связано с химическим стрессом (Casale С.?, et Rl., 1984). В результате чего происходит возбужу ,ние гипоталамо-гипофизарно-надпочечнико-вой и симпато-адреналовой с чтем, нарушение обмена серотонина, эндорфинов, медиаторов иммунного ответа, лростагландиноз и .'•тугих иммуномодулирующих факторов (Корнеева Е.А., Шхинек К., 1985; Garoroy Ы.Н. et al., 1975), <500 уменьшают, вследствие ингиби-рованин энзимов полиморфноядерных лейкоцитов, их подвижность и хемотаксис (Vfoodia A.U. et al., 1973), а повышение содержания ацетилхолина в циркулирующей крови может приводить и к снижен;® гуморального иммунного ответа (Норнева Е.А. с соавт., 1978).

Вышеизложенное свидетельствует о том, что в период острой интоксикации Ви-икс предварительно вакцинированный организм оказывается практически беззащитным против возможной инфекции из-за развившегося вторичного иммунодефицита, в условиях которого вакцинальный процесс оказывается несостоятельным.

Рис.2. Елияниэ этимизола и феназепаыа на динамику выработки

антител к 01 чумного микроба и О-антигену брюшнотифозной вакцины у белых мышей, подвергнутых острой интоксикации Ви-икс.

По оси абсцисс - время исследования после иммунизации, сут.

По оси ординпт - уровень антител к фракции I чумного микроба, %.

1 - животные, получившие вакцину ЕВ или БГВ (контроль),

2 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ЕВ;

3 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ВТВ;

4 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ЕВ + этимизол;

5 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ЕВ + феназепам;

6 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ВТВ + этимизол;

-7 - животные, получившие Ви-икс ч вакцину БГВ + феназепем;

к - достоверность различий с контролем (Р< 0,05).

» ^ ^

Рис.3. Влияние этимизола и феназепама на показатели реакции гиперчувствительности (прирост толщины лапки) у белых мышей, получивших живу» чумнуяз вакцину после острой интоксикации ^и-ико.

По оси абсцисс - время исследования, час.

По оси ординат - прирост толщины лапки, %.

1 - животные, получивпие вакцину ЕВ (контроль);

2 - животно , получившие Ви-икс + вакцину ЕВ;

3 - животные, получивпие Ви-икс + вакцину ЕВ + этимизол;

4 - животные, получившие Ви-икс + вакцину ЕВ + фенаэепам;

х - достоверность различий с контролем (Р< 0,05).

Установив ранее позитивный эффект этимизола и феназепама на иммунный г «еостаз вакцинированных противочумной, брюшнотифозной и бруцеллезной вакцинами животных, логически было выяснить способность этих препаратов снимать супрессивное действие Ви-икс при вакцинации и пути коррекции иммунитета.

Результаты исследования показали, что введение исследуемых фармакологических препаратов позволило значительно ослабит»- супрессии иммунитета, вызванную Ви-икс, а в большинстве случаев -отучнить ее. Так, у животных, у которых обработка Ви-икс и иммунизация ШВ, НТВ, ХБрВ сопровождалась введением препаратов этимизола и феназепама, выработка специфических антител значительно превышала уровень аналогичных показателей у животных, обработанных только Ви-икс и вакциной, и в ряде случаев приближалась к величинам антител контрольн 1 группы (вакцина). Уровень титров антител у животных, получивших чумнух» и брюшнотифозную вакцины на фоне интоксикации и подвергшиеся коррекции феназепамом, на 7 сутки после иммунизации оказался на 21-25 % выше (Р < 0,05), чем у животных, получивших только вакцину без интоксикации Ви-икс, Причины такого воздействия, видимо, связаны с двухэтапной активацией иммуногенеза, которую мы наблюдали при введении животным ацеклидина и феназепама в комбинации. Так как ацеклидин и Ви-икс относятся к одной груше холинэргических веществ, то к механизм воздействия на щшуногекез у этих веществ, вероятно, идентичный.

Показатели кожной аллергической реакции у животных в условиях интоксикации, но получивших этимаэол или феназепам, также свиде-тельствузвт о значительном восстановлении Т-клеточного иммунитете у иммунизированных на фоне супрессии. Замедленный компонент РГЧ в группе животных, получивших Би-икс + феназепам или этимизол достоверно (Р< 0,05) превысил в 1,5-3 раза показатели кожных реакций в группе, обработанных только Ви-икс + вакцина. Достоверные различия в уровнях показателей сохранялись в течение 72 ч.

Аналогичная положительная коррекция имелась также и в показателях неспецифичэской резистентности. В условиях развившейся острой интоксикации этимизол и феназепам способствовали нормализации кислородзависимого метаболизма полиморфно-ядерных лейкоцитов в Ю-тесте ухе к 5 сут. То есть использование иммуномодуляторов, фактически, отменяют иммуносупрессис показателей функциональной активности нзйтрофидов, выэваннув введением Ви-икс. Аналогичные

результаты мы получили изучая динамику показателей сывороточной активности лизоцима.

Несколько иными оказались данные влияния используемых нами препаратов на показатели . ¿специфической резистентности организма при иммунизации ЯЧВ в условиях острой интоксикации Вя-икс. Из двух использованных для этих целей веществ, только этимизол оказался активным в отношении повышения переваривапщей способности нейтрофилов. У животных, которые получили феназепам, показатели неспецифической резистентности (.уровень лизоцима в сыворотке крови, функциональная активность нейтрофилов) остались неизменными.

Следовательно, использованные препараты кор\ ктируюг и оптимизируют развитие вак шального процесса у животных, получивших оструга интоксикация Ви-инс. й, если, введенйе этнмизола или фена-зепама стимулировало выработку специфических антител у животных, получивших Ви-икс до контрольных уровней, то показатели кожной аллергической реактивности у животных, лолу^-чших иммуномодуля-торн, значительно превыиаяя аналогичные показатели контрольной группы животтгых (вакцина).

Также эффективным.оказалось влияние препаратов на показатели неспецифиче.ской резистентности организма в условиях схемы Ви-икс* вакцина + имыуномодулятор. Их использование оказало влияние на нормализации функциональной активности нейтрофилов в НЗТ-тесте и сывороточной активнг"Тя лизоциыа крови. Таким образом, установлена способность фармакологически активных препаратов при самостоятельном их применении или в сочетании восстанавливать до исходных уровней иммуногенность вакцин против чумы, бруцеллеза, бряшного тифа.

Полученные нами данные ,кже подтверждают положение, высказанное в работах (Арестов И.Г., 1968; Белоснурская Г.И. с соаг , 1968; Ананченко В.Г. с соавт., 1987) согласно которому в условиях мирного я военного времени воздействие $0И и <ЮС, будет приводить к формир^ванип у населения, личного состава войск иымуноде-фицитного состояния, в коррекции которого значение ИМС будет бесспорным.

Таким образом в настоящем исследовании экспериментально обоснована возможность применения ИЖ для повышения эффективности вакцин против чуш, бруцеллеза, б ротного тифа, а также показана целесообразность использования этих препаратов для коррекции т-мунодефицитных состояний вызванных отравчениями, 00С.

ш<щ

1. Впервые экспериментально измены даыунсмодулирующие свойства фармакопейных препаратов этюдасла, ецеклидииа и феназепама на модели чумного, брюшнотифозного и бруцеллезного вакцинальных процессов. Определены дозы и схемы введения фармакологических препаратов, позволяйте повышать кинологическую эффективность акции.

2. Установлены новые закономерности течения изучаемых ващтадь-ных процессов под влиянием фармакологических средств, выражающиеся * сокращении индуктивной фазы иммунного ответа, увеличении титра специфических антител и показателей гиперчувствительности замедленного типа, а также повышении уровней факторов неспецифической защиты (лизсциы и НСТ-тест).

3. Динамика величины количественных-показателей соответствующего специфического (гуморальные и клеточные факторы) и неспецифического иммунитета зависили от вида использованной вакцины к фармакологического препарата. Наиболее высокие иммунологические показатели отмечены при введении ЖЧВ и препарата этимизол, или сочетанного введения ацеклидин + феназепам + ЖЧВ. Затем следует броинотифозкая вакцина при совместном введении с этимизолом или в комбинации с пцеклидином и феиазепамоы. Менее выражено влияние этих препаратов юшукодогкчзскую эффективность бруцеллезной вакцины.

4. Впервые установлено, что введение ФОС животным, привитым живой чумной и бруцеллезной, в также химической бршнотифозной вакцинами сопровождается подавлением иммунологической защиты, четко проявляющейся в косвенных критериях специфической и неспецифической резистентности (уменьшении титра специфических антител, снижении показателей РГЧ, НОТ-теста, содержании лизоцима)

и в прямом опыте заражения иммунизированных мыоей В15рулентным брюшнотифозным штаммом. Это свидетельствует о развитии вторичного иммунодефицита при вакцинации б условиях интоксикации ФОС.

5. Впервые показана возможность фармакологической коррекции откмпзолом, ацеклидинок и феназепамом кинологической несостоятельности вакцинальных процессов при чуме, бруцеллезе, брюшном тифе в условиях острой интоксикации ФОС. Раздельное или комбинированное введение препаратов по разработанной нами схеме стабили-оирует измененную реактивность организма, отменяет иммунодепрес-сивноо действие ДОС, что приводит к оптимизации вакцинального процесса.

б. Данные установленные в модельных экспериментах ин виво и ин витро, могут явиться основой для проведения вакцинации и коррекции иммунитета к чуме, бруцеллезу и брюшному тифу в условиях повреждающего действия äOC что может иметь место в особый период.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Барастов Ю.В., Казаков В.Н. Поствакфшальные изменения функционального состояния организма лядей, иммунизированных химической сорбированной брюшнотифозной вакциной //Некоторые актуальные проблемы сохранения здоровья военнослужащих,- Куйбышев, 1987.- С.26-27.

2. Дрозд В.М., Казаков В.Н. Влияние различных стрессовых факторов на некоторые показатели ГАМК-эргической системы //Актуальные вопроса клинической и профилактической медицины.- Саратов, 19®.- С.ГО-90.

. 3. Забродский П.Ф., Казаков В.Н. Влияние вцеклидина я фбназе-пама на показатели гуморального иммунитета я неспецифической резистентности организма после иммунизации химической брюшнотифозной вакциной /Дурн,микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1988.- № 2.- С.32-36.

■ 4. Казаков В.Н. Влияние М-холиномиыетинов на гуморальный иммунный ответ и основныь неспецифические факторы защиты организма //Острыз и хронические интоксикации чужеродными химическими соединениями (патогенез, клиника, терапия и профилактика). - Саратов, 1987.- С.63-65.

5. Казаков В.Н. Влияние феназепама на иммунологическую реактивность //Сб.научных работ.- Куйбышев, 1988.- Вот.Ш.- С.96-97.

6. Казаков В.Н. Динамика активности нейтрофилов в НСТ-те^ге у животных, иммунизированных айвой чумной вакциной //Сб.научных трудов.- Куйб! 'вв, 1990.- Вып.ХХШ,- С Л88-189.

7. Казаков В.Н., Барастов В.В. Влияние этиыизола на гуморальный иммунный ответ после иммунизации химической сорбированной брюшнотифозной вакциной //Некоторые актуальные проблемы сохранения здоровья военнослужащих.- Куйбышев, 1987.- С.15-16.

8. Казаков В.Н., Шанина JI.H. Влияние фосфорорганических пестицидов на иммунный статус //Проблемы докозологической гигиеничес-

кой диагностики. Матер.Всесоозн.научной конференции. Ленинград, 23-25 мая ""980.- Ленинград, 1989.- С. 122.

9. Казаков В.Н., Шанина Л.К. Иммуносупрессивный эффект фос-форорганических соединений при противочумной вакцинации и его коррекции эги&изолом //Совериенствование эпидемиологического «ад-вора за чумой, холерой, сибирской язвой и другими опасными инфекциями. Матер.научной конференции. Саратов, 21-23 апреля 19^.

10. Краснов С.И., Казаков В.Н. Использование теста активной защити мышей для оценки иммунитета при брюшном тифе //Актуальные вопросы клинической и профилактической,медицины.- Саратов, 1989.-С.90-91.

11. Шанине Л.Н., Белякова Н.Й., Казаков В.Н., Петляев И.М., Тихомирова I.A. Механизм протективного действия этимизола при инфекционных заболеваниях /.'Об.научных работ,- Саратов, 1990. -Вып.П.- С.153-155.

12. Шанина Л.Н., Казаков В.Н., Белякова Н.И., Сдадкова Н.В. Оптимизация чумного вакцинального процесса етимизолом при отравлении организма фосфорорганическими соединениями в эксперимента //Сб.научных работ,- Саратов, 1990.- Вып.П.- С.I5I-I53.

Тилогр*фм N9 6 л-с „Полиграфист"