Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Противовоспалительное действие диуретиков

РГ8 ОД

1 9 ДПР 1903

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ЗВЕРЕВ ЯКОВ ФЕДОРОВИЧ

ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ ДИУРЕТИКОВ

14.00.25— Фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Волгоград — 1993

Работа выполнена на кафедре фармакологии Алтайского государственного медицинского института.

Научный консультант: доктор медицинских наук

профессор В. М. БРЮХАНОВ.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор А. А. СПАСОВ;

доктор медицинских наук, профессор А. Б. МАТВЕЕВ;

доктор медицинских наук, профессор Г. Д. АНИКИН.

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт

фармакологии Томского научного центра РАМН.

Защита диссертации состоится «.

в-часов на заседании Специализированного ученого совета Д. 084. 54. 01 при Волгоградском медицинском институте (400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан — 1оа~3 г.

Ученый секретарь Специализированного

совета доцент Ю. К. Филимонова.

ениля хлглктшжчиа РЛКОТМ

¿ктуод:л?осг;-. ъаш Пзспалзиие. icarc о.цы пг гтиов. йтво'шс:! даяшпа органигт;я на лоБроздстто, яшшатея слогякч птюгокомпо-:о!ггпим процессом, иомрчЛ дюз» в основа мьспсх бсдаапвЯ, и грпдс'гявляот собой одну шгнш: згроЗлсм уксшфи),«октальной и '..т.япгюской 1.тздащп.гл (И'.А.Ъ'рюхнн и еэавт., 1939). Поэтому поиск г изучение декарстгояшх средств, юзволйяйих осуирстплять <{<эр-•акологачосад» рогуляцк» восшышсш - сжоотеЯпал и актуальная 1адача, стоящая парод псслодопатолячи (Ф.П.Тринус и соэвт.,

975).

Диуретики, кок нзеостно. "находят ягарсксо пржеггание в ¡ике Енутрэшшх болезней в лочвшя отетацх. состояний, conpoBos;-J ioracix сердечную недостаточное^., гшшртоинчашда Оолемг., цир-:оз почеш, neipoKv-rocKiiil стгдром. При этом их, оЗфзктиБиость ю'условлбна угьэтавй$ш влияшгам на транеэютелюлышк перепое, голов в почках. в первую очарэдь иатрпя л хлора, и вода-

Учитывая, что транспорт электролитов играет ваитую роль но ■олько в эпителии почечных хинальцэв, но практически во всех ■кянях, и наруиошт этого транспорта могут шзиеогь пзмзыонил . даадеошрокашя различных органов и систэы,. появляются ввоокив рзДГГОС!Ш01 ДЛЗ ВОГМСШМГО расширения 1шнпг18сксг0 применения куротшю». Общеизвестной, например, яйлясгся тераигйЕтическая ффоктивность диакароа при глаукома к эпилзлеии. На так давно налэгйчшю свойства'обнаружен« у фурос<=.мида (Ala-ad et а1.,

976). Благодаря исследованиям ВЛ'.Яэшштекого (iSdl) ряд диуре-кков продло&ан в качеств« эЭДчжптвшк ерздета в комплексном лчошад злокачественных новообразований. Имеется иолозхтолыш.Ч пыт нршонепия мочогоюшх препаратов в лапании язрснпой болоз-'1 2-злудка и двенадцатиперстной ктд.та (А.Н.Бакурадзе, Н.Я.Чмхо-ля, 1983). Наконец, ссесом недавно поднялись работа о целасо-бразности применения' дпуретикав в вядо кпгаляций нрн оронхн-лыюй астме (Chung. Вагнсз. 1090; Venimrca et а1., 1Л>0). tic-г-'шелотпшо факты оэгтдгляит обратить прлгташюо шимзмио ич •дурвткки, как препарат, ouocoonuc ыкняяться в патопшез вое 1ЛКТ'>гьйРй po-.:t;;v!:i. йаигзию, что гжсгудаи'.галя фзня г'осяал.--

-г -

ния характеризуется формированием локальных отеков, что сопровождается изменениями трансмет,-бранного пероноса йодов (Ф.П.Три-нус и соавт., 1975). Способность диуретиков влиять на ионный , транспорт и за счет этого, возможно, ослаблять процесс образования воспалительного отека представляет значительный как практический, так и теоретический интерес.

С практической тачсхп зрения быявлэниэ У диуретиков противовоспалительных свойств позволяет, во-первых, расширить круг лекарственных препаратов, нржаыяющихся для .лечения воспалительных заболеваний, за счет имэющдхся средств, сокращая затраты на синтез, скрининг и углубленное изучение новых препаратов. Во-вторых.использование диуретиков в условиях комплексного воздействия на воспалительный процесс дает возможность уменьшить дозировку известных нестороидшх противовоспалительных средств, которым присущ ряд серьезных побочных эффектов, таких как уль-церогенный,' угнетение гемопоэза, нофротоксичность и др. (Я.А;Сигвдш и.соавт., 1988).

С теоретических: позиций исследование представляет интерес, поскольку расширяет представления о фармакологии важной группы лекарственных средств, каковыми являются диуретики, дает новую' информацию об их механизме действия и точках,приложения в организма, увеличивает возможность их дальнейшего изучения. Кроме того, исследование противовоспалительной эффективности диурети--ков моют пополнить сведения относительно патогенеза воспалительного процесса. . •

Цель работа Учитывая актуальность вопроса и его современное состояние, была определена цель настоящего исследования:

Теоретически обосновать возможность применения современных диуретиков в качестве противовоспалительных средств, предварительно изучив механизмы их антифлогистического аффекта. '

Задачи исследования Б соответствии с намеченной целью были поставл'еш следующие задачи:

1. Изучить влияние диуретиков на развитие воспалительного отека и пролиферативное воспаление, выявить препараты, облада-

вдие наиболоэ рыра:шшюй анп-флогистичасксй активностью;

2. Определить на.ипгто аттдъгаакругдагс- и онтмтротичоского действия у диуротисов;

3. Шясиить роль роналыгото диурезичаского эффекта в реализации противовоспалительного дс^гзтвил диуретиков;

• 4-. Исследовать влияние диуретиков на сосудистую проницаемое?!. и прапицэемэсть кЛеточних жмСраи;

5. Изучить влияний диуретиков ка активность калликреин-ки-щшовой еаето>ш, простагландгдов и циклических нуклеотидов в очаго экспериментального поспалошзя;

6. Определить функциональную активность лейкоцитов в йчаге экспериментального воспаления под влиянием диуретиков:

7. Исследовать влили» наиболео э'йЕмктивных диуретиков на течение адъювантной болезни я экспериментального гломерулоиоф-рита; '

а. Сравнить противовоспалительную эффективность диуретиков и известных иестероидных ггротиЕОвосшлитзльшх препаратов нэ моделях экспериментального воспаления.

Научная новизна работа Впервые выявлена противовоспалительная активность дихлотиазида, фуросемвда и этакриновой кислоты на Моделях декстранового и овомукоидного отеков. Показана способность этакриновой кислоты ингябировать тагам ' развитиз кэррагенинового, гисташшового, формалинового и каолинового воспалительного отеков.

'.Установлена способность диуретиков отакриновоЛ кислоты, дихлотиазида, фуроссшда, оксодолша в условиях рэзорбтиююго действия ослаблять иррл1«5ератиБное восналошго. Выяснено, что наибольшей анти^шогастичоской активностью обладает этакриновая кислота.

Впервые показано антипиретическое и анальгезируацео действия диуретикон.

Выяснено, что мохашгам протйвовоспол11тельног».'*Дй1|с1,1ви>?^й-уретиков не ппалент от их мочогошюго р^^окта,* а■ ■■■ обуелоьл».-!! ВМИОЧСЧПЫ!.»» причинами:,

Устанскв-шо, что оьоооЗплсть днур.тл;ов ослаблять ыхтим • .

талышй процесс -связана с их угштащим влиянием на сосудистую проницаемость. Этот эффект обусловлен ингябирующиы влиянием наученных препаратов на кшшшгопез н содержание простэгланда-,нов в-очаге экспериментального воспаления.

Епервко ештсноно, что диуретики ослабляют функциональную активность лейкоцитов в очаге экспериментального воспаления, что, по-видимому, связано с их стабилизирующий влиянием на проницаемость клеточных мембран нейгрофилов и макрофагов.

Подтверждено, что антмфлогистическое действие этакриновой кислоты зависит от ев способности взаимодействовать с сульфгад-. ркльныш группировками ферментов.

\ Вшрвке показан« терапевтическая эффективность этакриновой кислоты в условиях адъюшнтной болезни и экспериментального г-ломерулоиефрита.

• Ваяспено, что по степени противовоспалительного действия у крис этькршйзрая кислота провосходит бутадион и сопоставима с кндом&тацином и. ортофаном. Комбинированное лримэненне этакрино-^ вой кислоты с двумя последами препаратами.оказывает действие, превшаюцее аффект каадого нз использованных средств.

'БперЕЫб установлено, что при совместном применении этзкри-ковпя кислота уменьшает выделение индометацина из организма крис. .

Научная и практическая значимость работы Основное значение работы заключается в вкявлошш повил свойств у широко известной групп;: фаршколэгпчоских веществ диуретиков. Это обусловливает практическое значение работы, поскольку позволяет, с одной сто-Г-'.-л:, ушлч-доъ количество во;цйстб, применяемых в комплексной ?ерапки Еоспалитолыйгх ¡заболеваний, с другой стороны - р&сяиратд» показания к применена» диуретиков.

Високая таране с.-шчеекая зОййктлййюсть атэкрнновой кислота и усишдо ее »ротпктеоеталкгельиого действ,ьр» сов;,ватном пршзиэния с ш-дештаяаюн и ортсфакы шзьеллал? считать цело-сообразним ее использование ь комбинат« с некоторыми современными ШВС, что дает, поомэгаэсть уменьшить дозировку последних.

С теоретической 7045:11 зрения ва:кшкп являются цолучешшс

доказательства того, что противовоспалительная активность да-уретпсов не зависит от их мочегонного эффекта, а обусловлена экстраренальшми причинами. Это позволяет расширить прэдставле-яие о даурета-сах как о преп&ратах, не ограшггавзюших свои активность влиянием на .функцию почек и водно-солевой обмен и соз-' дает предпосылки для дальнейшего исследования ншзшче<шого действия диуретиков. Кроме того, появляется вовмоязюсгь объяснить ряд клинических наблюдений, касающихся проявлений внепочечного действия диуретиков, с точки зрения выявленного и исследованного наш противовоспалительного действия. Щюнеденное исследова-яио позволяет также создать экспериментальную основу для получения новых комбинированных лекарственных средств противовоспалительного действия.

Основные положения; выносимые на защиту

1. Диуретики, особенно этакрнновал кислота, обладают ан-тифлогистическим действием, обусловленным вкепочечнкми механизмами.

2. Дихлотиазяд, фуросемид и этакршювзя кислота оказывают доза-зависимые анальгеэирукщий и антилиретичаскай эффекты.

, 3. Противовоспалительное действие диуретиков обусловлено та угнетающим влиянием на сосудистую проницаемость и связано с ослаблением активности простагландшгов и кининообразования в очаге экспериментального воспаления.

4. Диуретики ослабляют функциональную активность лейкоцитов в очага экспериментального воспаления,. что связано с их мембраноо'габилизирующим эффектом.

5. Противовоспалительное действие этакриловой кислоты связано со способностью диуретика взаимодействовать с сульфгид-рильными группировками <®ерментов', участвующих в развитии воспалительного процесса.

6. Этакриновая кислота в рпытах на крысах по степени противовоспалительного эффекта не уступает современным ностероид-иым противовоспалительным- средствам и облегчает течение адъювантной болезни и экспериментального глоиорулонефрита.

7. При совместном применении с отакриноьой кислотой умс-нь-

шаотся выделение• швдомотацина с мочой, что могет бить связано с конкуренцией этих веществ за почечный секреторный транспорт в проксимальных отделах канальцев.

Апробация материалов диссертации Материалы диссертации - догадывались на YII Всесоюзной конференции по физиологии почэк и водно-солевого обмена (Чернигов, 1986). YI Всесоюзном съезда ..фармакологов (Ташкент, 1988), YI съезде терапевтов Алтайского края»(Барнаул, 1989), II-III Всероссийских научных конференциях по фармакологии почек (Куйбышев, 1985; Барнаул, 1990), Пленума Сибирского объединения фармакологов (Томск, 1991), заседании Алтайского общества фармакологов (февраль,.1987).

\ Публикации Основные материалы диссертации опубликованы в 22-работах.

Объем и структура работы Диссертация состоит.из введения, обзора литературы, посвященного взможности противовоспалительного действия диуретиков, методики исследования, глав, отражающих результаты экспериментальных исследований, заключения, вы-' • водов и библиографического указателя. Работа изложена на 231 стр., иллюстрирована 14 таблицами и 48 рисунками. Библиография включает 237 источников. ■

• • ЗКСПЕРМЛЕНТАШШ1 ЧАСТЬ

1. Методика исследования"

В основу моделирования воспалительного процесса в наших экспериментах были положены классические методы, обобщенные и проанализированные в монографии Ф.'К.Тринуса и соавт. (1975) и предложенные Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению нестероадшх противовоспалительных фармакологических веществ U3 СССР (1983). ' '

Воспглительный отек конечностей крыс воспроизводили суб-плантаршм введением флогогенных агентов (декстран, овальбумин, гис'тамин, каррагенин, каолин, формалин). Объем лап измеряли с помощью плегизыометра. Для оценки степени развития отека использовали величину среднего увеличения объема отечной конеч-

ности. Диуретики дахлотиазкд, фуросемид, этаяриновую кислоту вводили внутрь и подкожно в дозах 5-10-20-50 мг/кг и рассчитывали противовоспалительную активность препаратов. Экссудативный компонент воспаления оценивал;! такие по степени накопления жидкости в грудной я бршной полостях через сутки после введения в эти полости скипидара, во втором случае параллельно Исследовали функциональную активность лейкоцитов в очаге экспериментального воспаления. Дл». этого, используя разработанный наш метод, после внутрибрютшного впрыскивания микробной взвеси определяли , показатели фагоцитоза, подсчитывали количеество лейкоцитов и производили определение содержания дизоцшла в очаго.

Для оценки эффективности антиэкссудативного _ действия диуретиков определяли их влияние на реактивность капилляров кожй крыс и проницаемость сосудов брючной полости шлей. Реактивность капилляров коки оценивали по времени появления синего окрашивания кожной папулы. Папулу образовывали киутрикожным введением декстрана через 10 мин после внутривенной инъекции красителя. Проницаемость сосудов бржной полости определяли после внутркбрюшишюго введения раствора уксусной кислоты и последующей внутривеннош впрыскивания красителя. Фотометрически определяли окраску пэритонеального экссудата.

Пролвферативное- воспаление моделировали с помощь« известных методик "ватной" ("хлопчатобумажной") и "карманной" грану- ' лем. В первом случае крцеач подкожно вшивали стерильные хлопчз-тобумгтзд» рулончики массой 20-30 мг. Чэроз 7 дней рулончики извлекали вместе со сформировавшейся вокруг них грануляционной тканью, взвешивали, высупивзяи до постоянной массы а вновь пзЕешивали." О пролифаративном компоненте воспаления судили па рознице между массой шсушенной грануле¡.:н и массой рулончика, об экссудативном - по разница а массе влажной и высушенной гранулем. Во втором случая крысам подкожно вводили воздух и затем в образовавшийся воздушный йешк инъецировали раствор скипидара. Через 7 суток отсенпровнвали грануляциошшй мешок и производили то же процедуры, что и в отштпх с хлопчатобумажной гранулемой.

• Моделирование воспалительны?, заболеваний

Противовоспалительную эффективность диуретиков изучали на .моделях, адъшштной болезни и экспериментального гломерулоиеф--' рита. Адъюсантыая болезнь является одной из наиболае адекватных моделей коллагенсзов человека. (А.С.Саратиков и соавт., 1983). В основе - реакция гидарчувствительдасти замедленного типа с вовлечением аутоиммунных механизмов. Воспроизводили адъквантную болезнь с помощью субплаитарного введения ь правую заднюю ко-нбчность сомцов крнс полного здъювантэ Фрейнда. Наблюдал! животных на протяжении 25 дней, периодически определяя массу тела;, об-ьем обоих задних конечностей, величину угла разгибания лап в голаностошшх суставах и число вовлеченных в патологический процесс суставов. . - .

• Гломерулонефрпт вызывали по известному, методу ' fíasugi (1934). При' этом у амвотшх развивается диффузный невротический глсмеруланефрит наиболее ' близкий к .клиническим формам тяжелого нефрита человека (З.Т.Самойлова и соавт., 1973). Крысам вводили нефротоксическую сиворотку, полученную по методике Н.В.Никифоровой и соавт.(1935). В течение всего опыта (27 дней) у крыс рэ-гистряровали суточный диурез, почечную экскреции белка,, натрия, калия, креатинша, определяли в .крови содержание мочевины и уровень орщего белка./ Проводили гистологическое исследование-почек по общепринятой мотодике. Срезы, окрашивали геыатокси-лин-эозшгом, при мйкроскопировании обращали'внимание на состояние всех отделов'нефрона. •

Диуретик зтакриновую кислоту вводили в дозе 10 мг/кг в сутки в первом случае на протяжении 20, во втором - 15 дней эксперимента.

• • ' ' j

Исследование анальгевиру щего и антширетического ' действия . . .

• Об анальгезирующей активности диуретиков судили по изменению под их влиянием порога болевой чувствительности у мышей в условиях применения химического'и теплового болевого раздраке-

гош. В кэчэстаа химического раздражителя использовали внутриб-ршннноо введшие раствора уксусной кислоты, что приводило к развитию "корчей" - судорожного оскря1у>лия бршшх.шшц,. сопровождающегося вытягиванием садню: конечностей и прогибанием сплин. По дочитывали количество корчей аа 20 мин..

• В качества теплового раздракитсля применялась 'стеклянная пласпшка нагребая до температуры 65°С. О появлении болевой ре- ■ гшши судили по времени начала облизывания задних конечностей в контроле и через 60 мин после введении живоишм изучаемых препаратов.

Диуретики бродили подкожно в дозах 1,56-6,25-25 -100 №'/кг.

лнтипирстичзское действие исследовали в условиях экспериментальной гжертермии, вызываемой внутривенным вкздениом зсры-сам кирогеналэ в дезе 500 КПД/кг. Тсгятеротуру измеряли г проной ккзкэ каждый час и на галсе лихорадки (чераз 2 часа посла инъекции трогеналэ) вводили диуретики в догах .10 к 50 ' сяУкт пойло (

чего продолжали измерение температуры па протяжении 3 часов, Плутрншо результаты сращивали с.показаталлуи животных, которым диуретики не вводились.- . '

Эксперименты с иефрэктошей п эдреналэктомиай ''

Дашам опиты стопились в процессе изучения механизмов про-тивовоспэлитодшсго действия диуретиков: 3 части опытов у крнс производили двухсторонних» нйфрзктеш1), через I час субплантарно ееодили фясгястик 'л далее проролпл: акспоримент как' ошюкко кл-ше при моделирования воспалительного о?»кз.

В других опытах производили одоокеллн'тнув дпухсторсш-тм адрчиалэктомаз по методике, описанной М.Д.Жуковым и 960). Чораа 7 дпап поело операции окисашшм кжо способом вызывали оора^.о- . спав восшшгге-лыюго отека задних конечностей.

Определен:« ойолегачоеки яктнышх ьлдостп в. нлэсме хроп:

Ллй аостиляю указанной ц-!ли кригам п«>(>ся 60 !«ш пэ.'Д«

ПОДКЛ'КНОГО ППОДОи^:! Д!1У['Г:Т1!1СС1: В ДО.П: .-'и Г.'.Г'Ш' !> СО.! :ШДНИ?' л ■■

нечдасти суохшантарко вводили раствор каррагенина. Через 3 часа из здцней полой еэны брали кровь, в которой определяли интересующие нас вещества. При этом зшвотше, как правило, были раз-.деленн на 3 группы: '• - •

. ' 1 - контрольная груша интактицх живйтшпс,

2 - крысп с экспериментальным воспалешим,

3 - крысы с воспалением, которым вводились диуретики.

Циклические нуклеотиды (цАМФ и цГМСБ) определял!! радаоимму-

нологическим методом с помощью набора реактивов йроизвдства ЧОХР (Institute Гог Research Production and Applications oi Radioisotopes). Принцип матода основан на иммунологической реакции'- мэзду веществом, которое определяется (антиген), и. специфическим антителом. Величина радиоактивного связанного комплекса антиген-антитело снижается, если величина немеченного антигенз возрастает. Таким образом, концентрация радиоактивности комплекса антиген-антитело обратно пропорциональна добавленным величинам намеченного антигена. .Радиоактивность определяли с помощью гамма-счетчика, содержание цАМФ и ЦГМФ определяли по стандартным калибровочным кривим.

Кортикостерон в плазме крови определяли с применением того же метода с помощью отечественного-набора реактивов РКН-В-ЭД н последующим использованием бета-сштчика.

• В хоц& радатошмунологжгаеского определения простагланда^а ' S'íi( применяли набор реактивов' производства Венгрии (Институт изотопов Венгерской-академии наук): Суммарное определение прос-таглавдинов группы' Е производили с использованием реактивов фирма "Baxter Travenol Diagnostics,Inc." (США). Радиоактивность определял;! на бета-счетчика.

Для оценки активности калликреин-кишшовой системы плазмы крови определяла'содержание кининогена по методу Diniz, Carval-ho (1963). Прекалликреин, спонтанную эстеразную активность плазмы крсзи и ингибиторов колликреина - по мотоду . Colman (1969) в модификации О.А.Гомазкова и соавт. (1972). Принцип метода определение кшшногена заключается в том, что при температурной обработке плазш крови происходит инактивация кинннораз- ' руашквдпс ферментов, каллшсроина/ингибиторов трипсина. Кишшо-

- и ~

ron при этом но разругается. Обработанная плазма после инкубации с трипсином обладает кяшногелазшм действием. Под действием трипсина высвобождается брадгасшшн, количество которого пропорционально содержании ктвпгагенс в плазме. Содержание образовавшегося брадякишшя определяли матодои биологического тести-' рования на изолированном poro катки крнсы.

В основу определения прекалликреина, ингибиторов калли-креина и спонтанной эстеразной активности положено образование калликреша и прекзлликроинэ при активации нативной плазмы контактом с каолином, измерение эргиншг-зстеразной активности tro расщеплешпа субстрата, измерение остаточной активности , ка'лли-креияа после частичного 'блокирования ее ингибиторам кзлликреина. В качества субстрата использовали Оекзоиларгининметиловый зфир (БАЮ).

Исследование влияния диуретиков на резистентность эритроцитов

Данное исследование производилось с целью выяснения палц- . чин у диуретиков влияния на клеточные мембраны.

Осмотическая*резистентность эритроцитов определялась по. методу Н. Л.Василевской (1955) с использованием растворов'убывающее осмотических концентраций хлорида натрия от 190 до 100 мосм/л. Тагам образом, захватывались зона концентраций' солевого раствора, в пределах которых начинается'и заканчивается гемолиз эритроцитов. Рассчитывали процент гемолиза в каждой пробирке, прирост гемолиза и среднюю резистентность эритроцитов.

Перекидная резистентность эритроцитов оценивалось но методике А.А.Покрозекого, А.А.Абрарова (1964). сущность которой сводится к определению процента эритроцитов, гемолизирувдихся в стандартах условиях под влиянием перекиси водорода.-

Кислотную резистентность эритроцитов определяли по методу МЛ.Гнтользоно, И.А.Тйрскова . (1959) в модификации .Г.П.Григорьева, В. ¡.'.Дегтярева (1965) при непрерывной графической записи гемолиза. Крппцкп штода заклвд;;ется в сле,цугс;ем. Если ь?иосъ зритроцптог. г; «ь.'люгппгюскин растворе пома стать п пьо-•rou-Я »уток и ы<йста ¡5 кос г^нолитак (соляияя. кислота), то н

результате гемолиза олтотеская плотность взвеси уменьшается, и уменьшение ее за определеаное время, пропорционально количеству распавшихся за это же время эритроцитов.

• Диуретики дихлотиязвд. фуросемид и этакриновую кислоту применяли в концентрациях .1 • 10^, 5.10-1, 1 • 10-зМ.

' .

Определение индометацина в моче крыс

*

Для решения втого вопроса нами была разработана оригинальная методика, суть которой заключается в следующем.' С помощью н-гексапа проводили трехкратну» экстракцию мочи, собранной у крыс через сутки после введения им индометацина в доза 10 иг/кг. Хроматографнровали выделенный индометацш против пятен стандартных растворов этого же препарата в система хлоро-. форм-гексан-этанол-диатиламш. Определяли площадь полученных пятен и строили график установленной нами зависимости квадратного "корня из пло'дади плтна ов десятичного логарифма количества индометацина в исследуемых пробах. Содержание препарата определяли после расчета"величины потерь при хроматогрзфнровании и злшровашет. " ' -

2. Результаты исследования < • -

2.1. Выявление противовоспалительного действия диуретиков

Влияние длуретиков на формирование воспалительного отека было изучено на фона •дейстшя разданных флогнетиков, но в качестве основного флегогешого фактора для углубленного кеследо-вьгг. я использовался каррагенкн. Выяснилось,-что диуретики дах-лотлазкд, фуросемид и зтакрановая кислот;; вызывали значительное доза-зависимое ослабление развития* шепглятедького отека. При этом проз -шовюп^лпт'-'льнал эф^ктлшость дахлечааззда нарастала при увокпеаик дозкровкк от 14.5 (¡0 мг/кг) до '(0% (50 мг/кг). До'за Й5, для дахлоскозвАЗ "составила 3? мг/кг, ЕД,; - и кг/кг. Фуросемид ирся^-л более ьцразынпую огшг^яогйстачоскую актив-кость, которая проявилась, начиная с дозы в мг/кг к достигала

жсимума в дозо 50 мг/кг (противовоспалительный э^феют - 832). ш фуросемлда доза составила 18 мг/кг, ЕД«, - 7 мг/кг. По-)бно фуросемзду проявила себя этакрикевая ю$слота, вызывавшая давление развития воспалительного отека в дозе 50 мг/кг на >3. % для этого препарата равнялась 21 мг/кг, Щ» - а,5 мг/кг^ >чественно сходным образом действовали все три диуретика-и при ма¡знании других флогкстйков. Так, изучаемые препараты ослабши развитие декстранового. овомукеидного, гистпминового, као-шового, формалинового отеков, причем в последнем случае была [явлена антифлагистичаскоя активность (наиболее выраженная этакршовой кислоты) как в условиях однократного, так и'при шторных введениях диуретиков.

Так}ш образом, в опытах с экспериментальным воспалительным'' реком, вызванным различными флогистиками, все исшльгоагшныа 1уретзжи (дихлотиазид, фуросемид, этжршювая кислота) в "те-зпевтичоских" дозах проявили выраженную. противовоспалительную давность вне зависимости от характера воспалительного отека.. >лее эффективными оказались фуросемид и этакршювая кислота.

В результата длительного Еведекия диуретиков (7 дней по 25 п/кг), как видно-из рисунка 1, было обнаружено угнетающее вли-. да-на разштие грануляционной ткани в условиях хронического септического воспаления. Дихлотиазид существенно уменьшал су-¡га массу образовавшейся гранулемы (с 43,2*1,21 до 29,9*2,33 г; р< 0,001). Фуросемид и оксодолии сийкаии' к тому жо и влая-/ю маису гранулемы, я также разность ыевду показателями влаж-зй и сухой массы. Эксперименты с этакриловой кислотой проде-энстрарювали ее несомненное преимущество перед другими диуре-иками по степени воздействия на хронический воспалительный роцесс. Так, на фоне существенного снижения влажной массы гра-улемы (с 234*7,2 до 161*8,0 мг; р< 0,001) она вызывала утлень-егаю сухой массы практически в 2 раза: с 35,9*1.50 до 8,3*1,53 мг (р< 0,001).

Учитывая высокую антикролифератквную активность зтокрино-ой кислоты, было реаеко исслодевать ее влиятгс также на модь-ли ашанной гранулемы. Выяснилось, что и в этих условиях диуротш; рояышат значительное ярот^ажовосргиттсльиоз действие. При.

Рисунок 1

Влияние диуретиков на образование хлопчатобумажной гранулемы

По вертикальной оси - масса гранулемы в % от показателей контрольной группы животных; по горизонтальной,- 1- дихлотиазид, 2 фуроседад, 3 - оксодолин, 4 - этакринбвая кислота. Светлые столбики - влашая масса гранулема, темные - сухая масса грану -лет. Звездочками помечены достоверные изменения по стнбшению к контрольной груше.

уменьшите общей массы гранулемы (на 4255) происходило за счет снюканил как пролифаративного {на 33%), так н зксоудатистюго (на 42%) компонентов. '

Тогаш обрезом, эксперименты с изучением влияния диуретиков аа процессы образования воспотагаельной гранулемц шявшга их вы-' сокув аятяпролифарагавиую активность. Наибольшим аффектом-обладала этанриновад кислота,"оказавшая кэчестшшю сходное действие на- моделях ватной и карманной гранулем..

2.2. Анальгезирущео и антипйретическоэ действия диуретиков

На модели химического болевого раздробим,, виииваемого внутрнбрюапшныы введением раствора уксусной кислоты, дихлоти-азид в дозах 1,56-6,25-25-100 от/кг проявил виряжешую пнальге-зируюкцгю активность. Уже в' минимальной дозе он уменьшал количество "корчей" с 52*2,1 в контроле до 34,6.5,25 (р< 0,01). В. дальнейшем наблюдался четкий доза-завиоимнй эффект. Доза И» для дахлотиззвда составила 6,2 мг/кг. При применении фуросешда сходное последовательно нзраставдеа действие проявлялось вплоть до дози 25 мг/кг •(количество "корчой" 15,4+3,66; р< 0,00})., Дальнейшее увеличение дозировки не приводило к усилении '¡эффекта, Определенная грпфичзски доза Ид, для этого препарата составила 5,9 мг/кг. Эксперименты с этакриношй' кислотой также продемонстрировали доза-зависимый апальгезирущий эффект г от 37,4+2,13 "корчей" в минимальной дозе (р< 0,01) до 2,8+0,94 в дозе 100 мг/кг (р< 0,001). Лоза И» для этакриновой кислоты -12 мг/кг.'

В ог.ит.ох с использованием модели контактно-тенлопого Солевого раздражения дохлотиазид и фуросешд проявили анальгвамру-шую активность лишь в дозе 1Ш кг/кг (удлинение времени появления Сюловнх ощущений на 32 -37%). При применешш этакриновой кислоти наблюдалось более 'сукествонное пнальгозируюцсв действие, которое проявлялось ужу в дозе 6,25 мг/кг (15,9i!,36 сек; в контроле - 12,1 <0,64 сок; р< С».05), а при введении т-ytv'TOKn г. дззл i 00 мг, кг сьяоккпемл! покчготель уполичикллоя до V!>'\04 сок ip'. и,00' ). !',ovo угг-.крш'М'О'Л нг'члоти. .уд.яиняг-:-1^-"!

время появления- болевой реакции На 502, составила 9,5 мг/кг т.е, • примерно соответствовала дозе И», определенной в сери опитов с уксусными "корчами".

Тагам образом, на мимах впервые- показано анальгбзирувщв действие диуретиков. При этом на модели химического раздражали изученные препарата проявили , примерно одинаковую, достаточп йысокую доза-зависимую активность. В ' экспериментах с контак тногтешювш! Солевым раздражением существенную анальгезирущу. Б'^фективность проявила лиыь этакршювая кислота.-

Лнкширатшэскоа действие исследовано на модели пирогана лоеой лихорадки. Введение дихлотиэзида в дозе 10 мг/кг- на т пике приводило к-быстрому развитию, жаропонижающего эффекта I нормализацией тешературн тела к концу периода наблюдения, тогда как у 1сонтрольшх крыс поваленная температура к этому времени сохраняласьИз рисунка 2 видно, что при применении ' фуросе-ыида в такой ко дозе антипирэтичесхое действие, было выражено 1 значительно большей степени. Узка через 1 час после введения диуретика температура тела резко снижалась: на 1,5 градуса ниже "пиковой" и даже на 0,4аС ниже исходной. В дальнейшем температура' вплоть до окончания периода наблюдения оставалась- пониженной, так и не возвращаясь к исходным.значениям: исходный уровень - 27,5;0,13°С, через 2 часа-после введения фуросешда -ЗТ,0±0,12°С; р< 0,05),- Примерно такая же картина наблюдалась и при введении этакриновой кислоты.

Увеличение дозировки препаратов в Б раз не повлияло существенно на выраженность жаропонижающего аффекта дихлотиазида к лтакрнповей кислоты. Что касается фурасемида, его введение в доза 50 иг/кг приводило к значительному усилению антипиретичае-кого действия (см.ряс.2). Через 1 час после инъекции препарата температура тела падала на 2,5°С по сравнению с "пиковым" значением и была на 1,2°С ниже исходной- температуры. Интересно, что и к юнцу периода наблюдения (3 часа после введения фурасемида) температура тела оставалась пониженной по сравнению с ис-хойюй и разнялась 36.6+0,21°С (исходный уровень - 37,2+0,18°С; р< 0,05).

Таким образом, в опытах-на*крысах впервые установлено вы-

Рисунок 2

Влияние фуросемида на пирогеналовую лихорадку у крыс ' •

По горизонтальной оси - время наблюдения, час: по вертика -льной - изменения температуры, град. О. - исходный уровень температуры тела. I - контроль, II - доза 10 мг/кг, III - доза 50 мг/кг. Звездочками помечены достоверные изменеш!Я по отношению к исходному уровню температуры.

раженное -антюшретическоэ действие диуретиков в условиях пиро-генрловой лихорадки. Наибольшим, жаропонижающим доза-зависимым эффектом обладая фуросэыид.

'2.3. Механизм противовоспалительного действия-диуретиков

Внапочачный характер противовоспалительного действия диуретиков

Первый вопрос, который предстояло решить при изучении ан-тифдогистического эффекта диуретиков, заключался в выяснении возможного вклада мочегонного действия в эго реализацию. Поскольку мочегонный эффект, обаотачивающийся влиянием на пачки, мог помешать развитию локального воспалительного отака (например, лапы крыс), было решено выяснить наличие у диуретиков противовоспалительного действия в условиях двухсторонней нефрэкто-мии. " »

"Предварительные эксперименты показали, что сама двухсто- . ронняя нефрэктомия существенно на влияла на формирование воспалительного отека конечностей крыс в первые часы после операции, 'Введение диуретиков сразу после нефрэктомии, как и в опытах на интактных животных,. приводило к задержке развития воспалительного отека. При этом максимальный эффект фуросемида проявлялся ч,ерэз 60 мин после введения флогистика, дихлотиазида -через 120 мин. Этакриновая кислота оказывала последовательно нарастающее влияние а к концу периода наблюдения ослабляла развитие воспалительного отека на 83Й.

Полученные результаты указывают на отсутствие связи между противовоспалительным и мочегонным действием диуретиков и дают возможность предположить, что в основе юг антифпогистического

ьффокта лежат шеяочэчные механизмы. * *

' ч ■ ' !

. Рол1 надгхочечшшов в реализации противовоспалительного действия диуретиков

Как и в опытах с нефрэктомией, предварительные эксперименты позволили выяснить, что на 8~ой день после удаления надпо-

чачников формирование воспалительного отека происходило практи- ' тески так же, как у 'интактных животных. Следовательно, сама ад-реналэктомия но влияла на ход развития воспалительного-отека.

В процесса исследования' выяснилось, что дихлотиазид по разному влиял на развитие воспаления у интактных и адренэлэкто-' мированвых крыс. Значительное противоотечное действие* у животных с сохраненными надпочечниками- на фоне адредалэктошш было ослаблено, сохраняясь лишь в виде тенденции. Фуросемзд достоверно ослаблял развитие воспаления у ояреналзктомкрованннх крыс лишь к концу периода наблюдения; тогда как у интактных животных эффект проявлялся значительно раыыка к в большей степени. ■ Наиболее вырзженным противовоспалительным действие^ в условиях адренолэктомии обладала этакриновая кислота, ослаблявшая -формя-^ рованиа отека на протяжении всего эксперимента, что било сопоставимо с результатами опытов на крысах с сохраненными надпочечниками.

Полученные результаты, указывающие на возможное вовлечение надпочечников в реализацию противовоспалительного" действия ряда диуретиков, побудили провести прямое определение глюкойортико-идной функции надпочечников в этих условиях.

. У контрольных животных через 2 часа посла развития ' Карра-гешгаового воспаления содержание кортикостерова уменьшалось почти в 2 раза. При предварительном введении дахлотиазида и фу-росемида (40 мг/кг) концентрация горюна Оказалась выше по сравнению с показателем у контрольных животных, хотя и не достигала величин содержания кортикостерона в плазме интактных крыс. При'введении этакриновой' кислоты в той же дозе содержание гормона практически но менялось по сравнению с показателями контрольной группы и было значительно нижа чем у интактных крыс (р< 0,01). •

Таким образом, в результате серии экспериментов на адренал-октомнроваюшх животных получеры данные, указывают» на то, что противовоспалительное действие дахлотиазида и фуросемида частично реализуется через стимуляцию глюокортикоидной функции надпочечников. Противовоспалительное действие этакргаювой кислота, видимо, не зависит от функции надпочечников и обусловлено

иными причинами.

Влияние диуретиков на сосудистую проницаемость '

В 30 контрольных опытах выяснилось, что окрашивание кожной рапули происходят в среднем через 4,1+0,24 мин после инъекции "декстрана.

Ч При подкожном введении в дозе 50 мг/кг за 60 мин до образования папулы фуросемид незначительно замедлял появление синего окрашивания. Дихлотиазид обладал более выраженным действием, удлиняя этот показатель примерно на 37%. ,Этакршюван кислота в наибольшей степени замедляла появление синего окрашивания папулы в-ответ на ^ведение декстрана (на 61%).

Качественйо -сходные результаты были получены и при исследовании влияния диуретиков на проницаемость сосудов брюшной полости у мышей, Введение диуретиков в дозе 10% от ДЦдд значительно уменьшало-интенсивность окраски экссудата, получаемого из бршной полости. Наиболее сильным действием, как и в предыдущей серия экспериментов, обладала этакриновая кислота, снижавшая интенсивность окраски экссудата на 58,6%.

Таким образом, все использованные диуретики (дихлотиазид, фуросемид, этакриновая кислота). обладают способностью значительно урнетать усиленную декстраном и уксусной кислотой сосудистую проницаемость. Наибольшей активностью обладала этакриновая кислота. Полученные результаты могут иметь значение в механизме антифлотистического действия диуретиков.'

Влияние диуретиков на активность калликреин-киншовой системы и простагландинов плазмы крови крыс с экспериментальной патологией

Учитывая важную роль кининов и простагландинов (ЦТ) в развитии воспалительной реакции,- было исследовано влияние диуретиков на их активность в условиях экспериментального воспаления. Выяснилось, что при воспалительном отеке. задних конечностей крыс в плазме крови, взятой из*задней полой вены, имеет место

совокупность изменений, которая монет быть оценена как выраженная активация кияинообразозания. На ото указывает значительное снижение содержания прекалликреша (на 24%) и кинкногена (в 2 раза) на фоне повышения спонтанной эстераэясй активности плазмы "крови и уменьшзная активности ингибиторов кзлликргкка. ' .

Предварительное введение диуретиков (60 кг/кг) ослзбляло или дате предотвращало активацию кшпшогешза. При атом наиболее эффективным препаратом оказалась этакриновзя кислота. В условиях применения отого диуретика практически отсутствовал! признаки активации кинтазгепаза, лаблздавциеся при воспалении.

Тагам образом, установлено» что фуросшид, дахлотпазид и, особенно, этакршовая кислота тормозят активацию кгашюобрззо-. ваши в крови крыс, возишеакщуй при зкеперимзнатальном воспалении.

Вогкокно, наблюдавшееся нами угнетение активности -кгашно-оо'разавапия в крови лод влиянием диуретиков имеет прямее отношение к их противовоспалительному действии, поскольку известно, что именно интенсивность кзшиногзнзвз в значительной степени -определяет уровень сосудистой проницаемости (И.А.Ойвин, П.Я.Га-пошок, 1969).

Многочисленные зксперимснтальнне_ наблюдения подтверждают важную мадиаторную роль простзг'лпндшюв в развитии воспалишя. Способность простагландулов (особенно ПРЕ) влиять на .просвет капилляров и вецул, повышенна ил!, сосудистой проницаемости и миграции клеток, сопровождающееся высвобождением так называемых медиаторов воспаления* говорит о нзеошэкком участии ряда ИТ в развитии и поддержании воспаления (К.С.Дпаш, 1973).

Перед начало!.! исследования сашия диуретиков на уровень яростоглсндипов на фона экспериментального воспаления выяснили, что в наших условиях (воспалительный отек обеда, задних ко-"нечностей с забором крови из задней полой венн) наблюдается существенное увеличение плазменного содержания ПГЕ при отсутствии -значительных изменений со стороны ¿оицецтрзцяи ТШВЫ.

Введение диуретиков в дозе 50 мг/кг. приводило к значительному снижению содержания простагландиков группы Б в плазме. При ' этом концентрация ПГЕ .была ниже не только уровня, характерного

для экспериментального воспаления, но и нижа такового у интакт-ш крыс. Так, у ингактшх животных исследуемый показатель составлял 938^85 пг/мл; при воспалении - 1628+142 пг/мл (р< 0,001); при применении дахлотиазида 391 *80 пг/мл; фуросемида - 282*68 пг/мл, отакриновой кислоты - 34-1*93 пг/мл.

Интересно, что Подобное влалша было выявлено и по отноща-низа к плазменному содержании ПГР^,' тасштря на то, что уровень атого ПГ, как отмечалось выше, не изменялся в _ условиях контрольного воспаления. •

Таким образом, в опытах на крысах обнаружено снижение уровня простагландинов групп К и? в крови, оттекающей от очага экспериментального воспаления. Причем снижение было характерно как для простегланданов, содержание которых в данных экспериментальных условиях повышалось (ПГЕ), так и для простагланди- * < нов, концентрация которое при воспалительном отеке существенно не изменялась (ПГР^). .

Влияние диуретиков на функциональную активность лейкоцитов в очаге экспериментального воспаления

Основные результате исследования представлены в таблице 1. Как видно кз таблицы, все использованные диуретики существенно уменьшали объем жидкости, подученной из бршаой полости крыс в ответ на введение скипидара, т.е. ослабляли , фазу экссудации • военшжгвлыюго процесса. : .

¿фи исследовании фагоцитоза в очага воспаления выяснилось, что диуретики ослабляли интенсивность фагоцитоза полиморфноядер-ными лейкоцитами, а этакриновая кислота, к тому же, значительно уменьшала количество микробов и в макрофагах. Кроме того,только этакриновая кислота достоверно изменяла показатели фагоцитарной активности, уменьшая количество как талиморфноядерных лейкоцитов, так и макрофагов, участвующих в фагоцитозе.

Одновременно выяснилось, что все три диуретика уменьшали содержание лизощма в воспалительном экссудатечто бцло связано, в первую очередь, со снижением объема образовавшегося экссудата. Аналогичнш образом уггоньшалось и общее количество

Таблица I

Влияние диуретиков на показатели фагоцитоза и содержание лазоцигла в очаге воспаления

я Пр»парат . Объем эксудата, нл . тя Макрофаги Интенсивность фагици-гоэа, количество пог-лошемных микробных тел Фагоиитарна я X активность Я и з э и И м |

I .ПИЯ Пакрофаги ПНЯ Макрофаги пня Игисрофагн 1

я Контроль 2,3+0,20 1,б+О,40 11,2+0,89 7,8+0,52 94,9+0,59 87,9+2,32 14,5+0,45 39,0+2,98 | 1.

1 ДиЖЛОТиа- 1 айв * 1,7+0,18 1,3+0,22 • * -7,7+0,57 69,9+2,77 86,1+2,92 15,4+0,42 26,3+2,65 N ! 00 1

[ Фуросемид " ' . * 2,0+0,29 * X,6+0,30 * 6,5+0,87 5,8+0,83 91,3+1",65 82,1+2,17 14,2+0,59 * 29,1+2,66

I Этвкрнно-I ва» 1сис-I лота * 1,6+0,24 1,4+0,40 * 6,7+1,06 * 4,1+0,92 * 84,4+2,54 * 75,8+3,72 12,9+0,97 • * 20,8+2,32 \

Примечание: ИМЯ - полиморфноядерные лейкоциты; зваздочкаш помечены достоверные изменения.

- - ■ . -

лейкоцитов в очаге воспаления. 2о есть, первичным эффектом, по-видимому, следует считать угнетеннее влияние дауретикоЕ на процесс . экссудат®, что 15 приводит к снижению обцего содержания лейкоцитов и лизоцзмзв месте Есспаления.

-В результате серум экспериментов по изучению функциональной активности лейкоцитов выяснилось, что диуретики, и в парвун очередь этакриновая кислота, ослабляют фагоцитоз, уменьшают общее содержание лейкоцитов и лизоцшла в очаге экспериментального ' воспаления. Этот факт может иметь отноаение к механизму противовоспалительного действия мочегонных препаратов.■

Влияние диуретиков на'проницаемость мембран эритроцитов

При исследовании влия;шя диуретиков в концентрации 1.1 Симона показатели осмотического гемол1:за . эритроцитов выяснилось, что, как видно из таблицы 2, примененные препзраты<'существенно повышали резистентность эритроцитов по отношению к растворам натрия хлорида убывающих концентраций. При этом наибольший эффект проявил дихлотиазид, ослаблявший гемолиз в широком диапазоне разведений натрия хлорида от 190 до 140 мосм/л. При увеличении концентрации препаратов в 5 раз были получены качественно сходные результаты.

Эксперименты с перехкенкм гемолизом эритроцитов показали, что дихлотиазид и фуросеияд (5.104.0. в отличие от этакриновой • кислоты, существенно увеличивали резистентность эритроцитов к литич^скому воздейстЕ1Ю перекиси водорода.

Другие результаты получены при изучении влияния диуретиков на устойчивость эритроцитов в условиях кислотного гемолиза. Предварительная инкубация крови с растворами всех трех диуретиков в концентрациях 1.1044 и ЫСНМ существенно не отразилась на динамике гемолитического процесса, хотя показатель суммарной' резистентности эритроцитов проявил тенденцию к увеличению,' особенно при применении этакриновой кислоты.

Таким обраьом, в опытах с использованием модели осмотического гемолиза дихпотиазид, фуросемид и этакриновая кислота повышали резистентность эритроцитов крис^ к воздействию гипотони-

- •"'.'. Таблица 2

Влияние диуретиков (1'1(Г%) на показатели осмотического гемолиза эритроцитов крыс

| Концентрация 1 натрия няорк- | па, носп/л Контроль ■ 1 Дпхжгшазид вурссеиид ' Зтакринааая кислота 1

X гемолиза Прирост геяолиза X X гемолиза Прирост гемолиза, 2 „ X гемолиза Прирост гемолиза, X X гемолиза Прирост | гемолиза, X]

190 12,7+1,61 * 7,3+1,44 # 9,5+2,56 * 15,5+3,72 * 27,7+4,26 * 34,1+6,02 10,7+1,86- .11,4+2,20

1ЕО 170 160 1"Ч) 16,3+1,90 26,4*1,77 57,9+3,47 69,3+3,56 3,6+1,09 9,5+1,69 31,5+2,97 11,4+1,47. 2,0+0,66 4,7+1,35 * 12,6+3,56 11,3+3,12 11,4+1,43 * 17,9+2,74 * 36,0+3,83 ьа,з+4,ез 1,3+0,55 6,3+2,31 * 20,0+3,49 * 23,6+3,42 12,5+1,61 * 18,9+2,85 « 38,5+3,37 * 54,6+3,79 1,0+0,63 6,9+2,05 | 20,8+2,74 | 15,5+4,34 |

140 В£>,0+3,29 17,2+3,25 66,6+3,14 23,7+4,36 77,6+4,69 11,4+4,16 80,5+3,99 24,5+3,03

130 93,11-2,19 ¿,4+2,41 89,9+2,23 23,7+4,В4 90,3+2,47 11,4+3,73 <92,1+3,80 11,6+2,48

120 97,3+1,00 4,5»2,05 94,0+2,75 4,7+1,60 93,9+2,40 3,6+1,19 95,6+2,23 3,5+1,19

110 99,1+0,63 1,6+0,63 97,0+1,63 3,0+1,02 96,1+2,25 2,3+0,83 97,0+2,37 1,4+0,67

100 100 1,0+0,35 100 • 2,7+0,03 100 . 3,9+1,22 100 • . •3,0+1,02

Примечание: звездочками помечены достоверные изменения по сравнения) с контрольными значениями.

четких растворов натрия хлорида. Эти данные, как и способность дихлогиаакда и фуросемида ослаблять перэкиский.гемолиз эритроцитов, свидетельствуют о наличии у диуретиков стабилизирующего влияния на клеточные шмбраш. Кислотная резистентность эритроцитов под влиянием диуретиков в наших опытах не изменялась.

Роль взаимодестзия с тшзлоаыш ферментами в реализации протишвэспаяитальноро действия диуретиков

Известно, что в патогенезе воспалительной реакции шдика роль сульфгидрилышх Формантов, особенно в обеспечении процесса пролиферации, характеризующегося активацией синтетических реакций (Oroneky et al., 1969). Haut интерес к данной проблема Оил^' связан с там, что в механизма действия ряда диуретиков, особенно этакринзвой кислоты, определенную рохъ играет способность взаимодействовать с тиоловы:,ы группировками некоторых ферментов в ночках (Д..А.Лебедев, 1934).

Поэтому била исследована противовоспалительная активность зтакршовзй кислоты-при совместном применении с унитиолом, известным донатором сульфгидрклыплс группировок.

Сочгтайное лрик&кешэ атакриаовой кислота (10 мг/кг) с унитиолом (50 мг/кг) на протяжении Т дней у крыс.с хроническим воспалением приводило к образованию 'воспалительной гранулемы, масса которой мало отличалась от таковой, полученной у- иитак-тш/ аквотянх (сухая масса - 66,3+2,8 № и бЗ,си'/",1 мг соответственно). То есть, совместное применение этакриновой кислоты и уштиола существенно не повлияло на развитие грануляционной ткани. Напомнш, что использование одной этакриновой кислоты приводило к значительному уменьшению масса образовавшейся гра-кулематозной ткани, причем в первую очередь, зз счет уменьшения сухой кассы гранулемы,

Таким образом, длительное црмылтние упитиода практически предтнрэдало противовоспалительное дчйствиз »такршювзй кисло-тк. Получении» ровультоти даяат еог.мсжпость считать, что способность rirai.piiHOKi.'t каедоаи ослаблять ргк«ыл ко врояг^ритигширо roriiaj.r-i.Hii у кг.по зависит от ее с ci<j';

нши группировками (Лермонтов.

Влияние диуретиков-на уровень плазменного содержания . циклических нуклэотидов у крыс с экспоршеяталышм всспапытом

Данное исслодовшша проведено в связи с известной модулирующей ролью циклических нуклеотлдов в развитии воспа^лтелы-оН реакции.

Ошга покагалл, что у крыс с экспершионталыо-м воспаленном наблюдается существенное изманенйе' плазменного содержания хиас-лических нуклестидов по сравнению с хштзктными живо тиши:. При этом концентрация иД!й возрастала на 48%, а цГШ - снижалась более чем в 2 рьза. При хграмаионш диуретмкоп оодержазшо цДКФ несколько снижалось, хотя и сохранялось на уровне, проЕышзда-м отот показатель у интакишх крпс,- и не/дестОБорно отличалось от . величин, получошшх у жякшшх с экешркмонталышм воспален:??:,!. В то же врзмя дауротики значительно увеличивали содеркаш:5 цГ,МГ> по сравнению с условия:.« зкеперкшиатального воспаления (дтало-тназвд -а 2 раза, фуросемид - на 54%, этзкритовая кислота - на . 365).

Интересные результаты силя юлучззш при росчэте соотяоше-1шя циклических нуклеотидов (цАМФ/цГМФ). Оказалось, что в условиях воспаления отот показатель резко возрастал: с 2,8*0,34 до 10,6+1,84*, ,р< 0,001). Применение диуретиков приводило к измене-■ нию соотношешш в сторону нормализации: дахлотиазид - А,9*0,72; фуросемид - 7,5*1,13; этэкрнновая кислота - 5,1+0,60.1

Из приведенных результатов взднр,, что при использовании • диуретиков отмочаотсп "тенденция, к нормализации сотношешм плазменного содержанием циклических нуклеотидов, измененного в условиях воспалительного процесса. Этот аффект обусловлен в основном плишшем на содержание ЦГМФ и может шеть значение в механизме противовоспалительного действия диуретиков.

2.4, Фармакотерапия воспалительных заболеваний с применением

' диуретиков

Влияние диуретиков на развитие экспериментального плеврита

Из подученная результатов следует, что у интактшх крыс при внутрш1яа:вра!£ьнсвд' введении скипидара ^орез сутки из плов-ралькой подаатк удается получить в среднем 0,3310,04 мл экссудата.

• В результате введения дихлотваззда выявилась тендонция к уменьшению количества экссудата, получаемого из плевральной полости, хотя различия были статистически недостоверны. Введение фуросеыада вызывало однонаправленный достоверный аффект, закла-^ . чавшайся в значительном снижении объема получаемого экссудата, г' При применении этакриювой кислоты было выявлено мацноо антиэк-ссудативнэа действие. Через сутки после введения скипидара ни у -'одной из 9 крыс, получиваах зтакриновую кислоту, экссудат не был получен.

Таким обрззогл,-выяснено, что все диуретики ослабляют, а. этакриновая кислота предотвращает развитие экспериментального экссудативного плеврита у крыс.

Влияние этакриковой кислоты на течение адъюваятной болезни

Нч£водаша за крысами контрольной группы показало, что развитие отека лапы, в которую был введен вдъювант, характеризовалось »максимальным приростом конечности через 3 дня после его введения (прирост - 130%). Затем наблэдалось некоторое снижений отека и стабилизация его величины вплоть до окончания эксперимента (25 дней) на уровне прироста 103-112Ж.

У леченной группы крыс (20 дней по 10 мг/кг) аналогичная динамка развитая болезни протекала на фона гораздо моноо выра- . кенного отека конечности. Степень угнетения воспаления на протяжения всех дней эксперимента составляла в среднем 28-332.

Положительная динамика зафиксирована и в отношении влияния диуретика на вовлечение в патологический процесс суставов и, в

первую очередь, голеностопных. В контрольной группа крыс к 12-13 дняи их подйгсхпость резко снизилась (уровень разгибания -28,9*2,72" .при исходном- уровно - 57,9*2,50"; р< 0,001). Длительное введение этакриновой кислоты облегчало тзченио артрита,' что выразилось в большей по днию с ти голеж.стосидх о уставов. "К .12-13 дням, например, этот показатель у леченной, группы крыс составил 44,44.1,91° (р< 0,05 по отношению к группе контролышх животных). Наибольший эф&экт проявлялся з период с 12-13 по 20-21 дни.

Тагам образом, длительное применение этанрияовей кислоты ослабляло основные проявления адыовантиого артрита, облегчая его течение.

Влияние .этакриновой киелты на 'течение цитотоксичэского гломерулонофрита у,крыс

У контрольной группы 'животных, начиная с первых дней поело введения не-фротоксичеекой сыворотки (НТС), развивалась типичная картина острого гломерулонофрита. При этом у крыс появлялась массивная протаинурия: с 0,9*0,11 мг/сутки в исходном периоде до 73,6*12,8 мг/сутки к. концу периода наблюдения (27 дней после введения НТО). Протаинурия приводила к сникеиио уровня общего болка пл&эин: на 16% к 5 дню заболевания и на 52% к концу опыта. Значительно увеличивалось и содержание мочевины крови: с 7,8+0,55 до '10,5+0,84 ммоль/л (р< 0,05). При исследовании экскреторной функции почек выяснилось, что, начиная с 12 дня опыта, наблюдалась тенденция к увеличению суточных показателей мочеотдп.чекия и экскреции кр^атшшна. Значительно возрастало вкдвлоипо калия при отсутствии, изменений1 со сторона экскреции натрия'с мочей. При морфологическом исследовании почек ухо ' через 5 дней поело введения НТО были выявлены изменения, характерные для развития гломерулонофрита, наиболее выраженные в прсксикг-льном отделе кефрсна.

У группы крыс, которым вводил;! этакрииовую кислоа'у ■ (15 доек го Ю мг/кг), течение гломерулонофрита существенно отлича-лост. от контрольной группы. Протеипурия'была выражена в ' значи-

Рисунок 3

Влияние 8гакриловой кислоты на суточную зкскроцша Салка у "крас с гломерулонефритом

ш

По горизонтальной оси - время наблюдения, дай; по вертина -лыюй ~ экскреция белка, ыг/сутки. К - исходный уровень. I- контрольные' животные, II - этакриновая кислота, стрелками помечено начало и окончание введения диурзтика.

• ~ аг-

тольно меньшей степени: с 0,9*0,09 до 10,3*3,51 мг/сутка (р< 0,05) в першо дни ошта и до 18,5*5,22 мг/сутки к моменту прекращения введения препарата. Затем экскреция белка увеличивалась.к концу периода наблюдения до 46,8*11,5 мг/сутки, что,' впрочем, было значительно ниже показателе! группы контрольных '.животных (см.рис.З). Отметим, что у 5 крыс из 12 протеинурия к моменту отмены препарата была выражена незначительно или отсутствовала, а у 3 животных не развивалась и после прекращения введения диуретика. Содержание общего белка плазмы снижалось в меньшей степени (на 36% к концу периода наблюдения), концентрация мочевины в крови не изменилась. Изменения со стороны экскреторной функции почек были выражены значительно меньше чем в контрольной группе. Здесь следует отметить,- что хотя этакри-новая .кислота является диуретиком, известно, что у крыс этот препарат в терапевтических дозах значительного мочегонного действия, как правило, но вызывает (Л.А.Лебедев, 1984).

Тагам образом, в группе животных, которым вводился препарат, выраженность изменений, характерных для развития почечной патологии, была значительно меньшей. Это утберадение подтверждается и результатами морфологического исследования почек крыс опытной серии, особенно к' концу периода наблюдения и, в первую очередь, с точки зрения степени выраженности изменений.

2.'5. Совместное применение диуретиков с другими противовоспалительными средствами в условиях экспериментального воспаления

Естественный вопрос, на который предстояло ответить, заключался в сравнении степени выраженности антифлогистического действия диуретиков я ' нестероидных противовоспалительных средств. Кроме того, интерес'вызвала возможность усиления противовоспалительного действия диуретиков и классических противовоспалительных препаратов в условиях их .совместного применения.

Выяснилось, что атакриновая кислота . (40 мг/кг) в значительно больней степени ослабляла развитие декстранового отека лап чем один из наиболее эффективных антифлогистиков гшразоло-

нового ряда бутадкон (50 кг/кг),' а дкхлатиззвд <40 мг/кг) ока зал эффект подобный бутадиену. Совместное применение этакрино вой кислогш и бутадкэна вызывало значительное.•противовоспали тельное действие, сопоставимое с влиянием одаой этакртюво: кислоты.

В опытах со сравнительным изученном ллшшия препаратов к; пролифэратиБиоо воспаление выяснилось, что длительное введена этаярииоЕой кислоты (7 дней.но 10 ну/Кг) приводило к значительно более виракешым полакнтелькш изменениям по сравнению с бу-тадаоном (25 мг/кг) п другим диуретином оксодолшюм (10 мг/кг), Как и з предыдущей серии опытов,. коыбитфование бутадконз 1 Етакриновой кислотой приводило к действию, сходному с . эффекте» одной этакрановой кислоты.

Таблица ;

Вляяниз этакриновей кислоты, индомотацина и ортофоиа . . на образовало воспалительной гранулеш у. крис

Препарат или ком- - ! бкнация . 1 ■ : • ! . Влажная масса ! . ! 1 Сухая.масса 1 ! 1 ! ! Разность !

.;-эль' ; 22-1,10,2 ' '35,8*2,13 188,9,3

Кндомвтацин 161,9,2 18,2,2. 12 ИЗ /Г, 9 '

Ор'ГСфЭН '. 136,11 ,2 14,011 ,26 122,9,5

Этакривовая кислота 142,3,7 15,8*1 ,93 125,7,3

Зтакркновая кислота +

индометацкк .130*9,8 - 12,2+0/36 . 117,7,3

Этакриновая кислота +

ортофен :22,5 ,7 9,9,1.02 112.6,Т

Примечание: масса вкрад-ена в мг; собственная масса нартой -22 иг; нее хш*ру опита достоверно очйгаатсд <уг шзгро.-,) гш.

При сравнешш ЕлияпПя на прелявраткениб ьйсзал.пшо с-тда-•ринотя кпзлотп, хг:шл'.кгзцшш (5 мг/кг), уртс.,) :.',".- ^

также их комбинаций окопалось, что, ¡рк пгдпо аз •»••¡олрц:; 3, :г>1*

использованные препараты вызывали существенное ослабление образования грануляционной ткани. При этом 'эффект зтакриновой кислоты бил' сопоставим с антипролифератпвиым действием- ортофена. При совместном применении этакршювой кислоты с индолатацином, ■ и особенно с ортофеном, наблюдались качественно сходные изменения, превосходящие действие каждого из препаратов, взятого в отдельности (в условиях комбинированного введения использовались половинные дозы препаратов)'. Особенно это касается влияния на • показатели сухой.массы гранулемы. .

Таким образом , в результате - сравнения противовоспалительной активности ряда нестероидных антифлогистических' средств и диуретиков выяснилось, что дахлотлазид по степени противоотеч-ного действия соответствует бутадиону, а этакриновая кислота значительно его превосходит.. По способности ослаблять образование воспалительной гранулемы бутадиен, примерно равен оксодолшу и уступает этакршювой кислота, которая оказывзот эффект, сопоставимый с действием, индометацина и ортофена.

Совместное применение диуретиков с бутадиеном не приводит к усилению противовоспалительного- эффекта■в условиях экссуда-тивного и пролиферативного воспаления. Комбинирование зтакриновой кислоты с индометацином и ортсфаном ослабляет развитие пролиферативного воспаления в большей степени чем каждый из этих препаратов в отдельности. .

Влияние этакршювой кислоты на почечную экскрецию индометацина

Как было' описано вше, комбинированное применение ата'кри-новой кислоты и индометацина приводило к усилению противовоспалительной активности. Этот-факт может быть следствием различных причин, в том числе и возможным взаимным влиянием на процесс; элиминации указанных препаратов. Такая возможность представлялась вполне реальной, если учесть, что для обоих препаратов характерна почечная секреция в пределах системы транспорта органических кислот, внутри которой часто имеют место конкурентные взаимоотношения мааду секретируемыш веществами, связанные с

Таблица 4

Влияние этакрзновой. "/.тутоты на суточнуи экскреции аадометацина у кркс'

Диурез мл/сутки

ИНДОНЕТАЦИН

«кг

Ю Р

1СГ

п, мсг

19 Ч

Е,

мкг/суткм

Е с по-

терь, мкг/сут

Стандартна приЗы

| йз&аекиз I »«¡юкэтгщмг

|| бгеление гта-| криноаой кис-| гати + имдо -Л натащи

4,1+0,60

3,0+0,49

> 0,5

5 0,70

10 1,00

20 1,30

30 1,4а

5,35+0,23 ¿,50+0,<3

7,49+0,«

40,1+5,47 19,8+2,76

< 0,05

1,54+0,03 1,24+0,06

< 0,05

8,6+1,62 4,1+0,55

< 0,02

10,9+2,03 5,1+0,72

< 0,02

Примечание: ч - хтэтестзо ивдометацина з пятнах стандартных проб; - количество индо-■метащша в пятнах ксслз.зуе?Я£х проб; Е - эк&грецяя с мочой; г - площадь пятна, гдг. • •

СО •

■

конкуренцией за переносчик.

В наших экспериментах, результаты которых представлены в таблице'4, выяснилось что за сутки в неизмененном виде выделяется около 11 мкг ивдометацкна, что примерно соответствует ли-тературннм данным (С1агке et а!., 1986). При совместном ввэде-',,'нии с этокриновой кислотой этот показатель значительно сливался 'и составлял лишь 5,1+0,72 мкг. При этом уровень мочеотдолешгя существенно не изменялся, хотя имелась некоторая тенденция к его снижению- Так что уменьшение экскреции гагдомэтакина при его комбинированном применении с этакржювой кислотой было связано в основном с уменьшением его концентрации з моче примерно б 2 раза. -

Из приведенных результатов следует, что совместное ввэде-ние этакриновой кислоты и ивдомагацина крысам приводит к значительному уменьшению экскреции последнего, "¡то указывает на возможность конкуренции на путях почечного транспорта и мокет > вести к увеличению содержания лндометацзжа в организме.

в" Ы В О Д Ы

1. В опытах на крысах диуретики дахлотиазид, фуросемид и атакриновая кислота оказывают • противовоспалительное действие, ослабляя фазы экссудации и пролиферации воспалительного процесса. Зтакриновая кислота проявляет наиболее выраженную антифло-гястическую активность.

2. Противовоспалительное действие диуретиков не зависит от их мочегонного эффекта и обусловлено- влиянием на экотрзреналь-ные механизмы.

3. Изученные диуретики, подобно классическим НПВС, обладают ан&льгозирувдим и антшшретическим эффектом. Первый из них в наибольшей степени присущ этакриновой кислоте, второй - фуросе-миду.

4. Противовоспалительное действие диуретиков обусловлено снижением сосудистой проницаемости, что может быть связано с угнетающим влиянием на активность калликреин-кининовой системы, и простарланданов в очаге воспаления. •

5. Введение диуретиков вызывает ослабление функциональной активности лейкоцитов в очаге экспериментального воспаления, обусловленное, по-видимому', выявленным мамбраностабилизируюшим действием препаратов;

6. Противовоспалительний эффект, дахлотиазида и фуросемида части-то реализуется шреэ усилакка глюкокортикоидиой функции надпочечников.

7. Лнтифлогистическая активность эт&криновой' кислоты в значительной степени определяется ее способностью к взаимодействию с сульфгидрильнвми'группировками ферментов, участвующих в развитии воспалительной реакции.

8. При применении диуретиков имеет место нормализация соотношения между циклическими нуклеотидами в очаге экспериментального воспаления. ''..'•-.

9. Этакрнновоя кислота обладает-выраженной терапевтической эффективностью на моделях эксперимон т а лыгого гломерулонафрита и адъювантного артрита.

Ю. По степени противовоспалительного действия.этакриновая кислота превосходит.бутадион и сопоставима с индометацином и орто£еном. Совместное применение этакршювой кислоты с индометацином и ортофеном . усиливает . внтифлогястическую активность каждого из препаратов. • , •

' 1. Этакриновая кислота уменьшает почечную экскреции индо-у крыс, что позволяет считать данную комбинацию рациональной в комплексном лечении воспалительных заболеваний.

12. Диуретики представляют группу фармакологических препаратов, перспективных для испытания в составе комбинированных лекарственных средств в лечении заболеваний воспалительного характера.

■ СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ . ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние диуретиков на развитие-экспериментального воспалительного отека у крис // Фармакол. и токсикол. - 1984. -К 4. - С. 86-88 (совместно с В.Г.Беломестных).

2. Влияние диуретиков и бутэдиона на г.рода^ратиг.аос вое-

- ь?

палош-й укрчс // Фармакология почек: Тез» докл. обл. явучн. конф. - КуСбиазв, 1935. - С. 19.

3. 'Влиянно диуротга<ов кя ахсспер'.даептзлькиа вослалитадьккЛ сток // Тез. докл. VII Всесоюзн. кайф. по <|;лэкологии ночек и водно-солевого обмена. - Чернигов, 1935. - С. Р.4.

Влияние доурзтиков на -сосудистую проницаемость и проли-фзра^ивное воспалекхте у крыс // Зармжол. я токсшгал. - 19£5. -Л б. - С. 47-48 (ссекэскю с И.В.Шелембэ. В.Г.Беломестшх).

,5. Об антигастамзтом дейстзии зтзкринсьсй кислоты // Про-Олош ангиологии и патологии Гемостаза: Тез. докл. кра&асИ научяо-практ. .ког1ф. малодьгс ученых л специалистов. - Бприяул, 1935. - С.' 145-146 (савгхотт с В.В.Воронцозкм).

6. К механизму противовоспалительного действия диуретиков // Проблем! ангиологии п патологии гешстаза: Тегз. докл. краевой 11пучио-практ. кон'ф. колодах ученнх н специалистов. - Барнаул, 1935. - С. 143-145.

7. Сравнительная эффэкглшость протаьовослалитёльнсго действия диуретиков и бутадпона в эксперименте // Фарг.акол. п ток-еккол. - 1986. - N 2. - С. 62-63.

8. Влияние диуретиков'на активность кадликрвии-кинпновой системы крови в условиях акснерм витального воспаления /У Фар-макол. и токешюл. - 1986. - Я 4. - С. 84-35 (совмеска? с Э.Л.Соколовым).

9. Влияние этокриновой кислота на течение . Бкссудатигного плеврита и адъквантного артрита у крно // Регуляция функции почек и водно-солевого обмена.,- Барнаул, 1937. - Вып. VII. - с. 70-73 (совместно с Е.Б.Скосир&вым)

10. К методике изучения кембранного действия дзурвтаков с ислольаованиом различных видов гемолиза ■ эритроцитов // Ангиология и 'гемостаз . - Барнаул, 1933. - С. 57-58 (совместно с В .Л. Цемахср.!ггам). '

11 - К кехвшзму противовоепшателыгаго действия диуретиков // Сг.'.рпкол-гия л 1юучно-твхпнчес.ла1 прогресс: Тез. докл. VI Вс&ес.:;зн. съезда фармакологов. - Таскент, 1983. - 0. 139-ио.

12. 05 апельгбзирущом и каропоиккашцем действии доуре тиков // Дел. ВИНИМ. - 1983. N 149 л-В (совместно с В.Г.Агеепкм).

13. Метод изучения фагоцитоза in vivo в условиях экспериментального воспаления брхашой полости у крыс //. Изобретатель-стео и рационализация в Алтайском государственном медицинском институте. - Барнаул, 1988. - С. 105-106 (совместно с Г.В.Чэр-

*

кшазшм).

14. Влияние диуретиков па резистентность эритроцитов крыс // Деп. ВИНИТИ. - 19(32." - К U9S-B (совместно с вГд.Цемохови-чем).

15. Влияние урегита на состояние желудочной секрета! у больных с дуоденальными язвами // Диагностика, лечеше, реабилитация, профилактика терапевтических заболеваний в первичном звено здравоохранения. Новыа'методы диагностики и лечения: Тез. докл. VI съезда терапевтов Алтайского крал. - Барнаул, <989. - 'i С. 129-131 (совместно с Н.Э.Кожевниковой, Í.Г.Досовской, ' \ Т.Г.Лубянской). ". ' . ■

16. Экстрарональноэ 'действие диуретиков // Фармакология почек: Toa. докл. III Всероссийской научн. конф. - Барнаул,. 1990. - С. 21-23 (совместно с В.М.Брюхановым, В.В.Воронцовым, А.В.Фидиркиным).

17. Влияние диуретиков на содержание циклических нуклеоти-дов б плазма крови крыс с экспериментальным воспалением // Фармакология почек: Тез. докл. III Всероссийской научн. конф. -Барнаул, 1990. - С.45-46. '

13. К вопросу влияния диуретиков на калликревд-кшашовую систему // Роль кининов в регуляции гомеостаза в норме и пато- ■ логии. - Томск, 1990, - С. 53-55 (совместно с В.В.Воронцовым). , -

19. Влияние диуретиков на функциональную активность лейкоцитов в очаге экспериментального воспаления // Деп. ВИНИТИ. -1990. - N 5446-В (совместно с Г.В.Черкашиным).

20. Фармакологическое дейсгьиэ диуретиков на воспалительные реакции // Материалы пленума Сибирского объединения фармакологов. - Томск, 1991. - С. 3-6 (совместно с В.М.Брюханошм).

21. Новые подхода к экспериментальной терапии цитотокси-ческого гломзрулонефрита // Проблема норма и патологии. - Барнаул, 1991. - С. 6-Ю (совместно с ¡¿.¿¡.Сркосашиш. Л.В.Ллад::;:^-вым, В.М.Елкишм).

{

22. Влиякиа этакриновой кислоты на экскрецию индометащша с мочой крыс // Механизма адаптации физиологических функций организма. - Барнаул, 1991-. - С_. - 38-4-0 (совместно с "В.Л.Карта-до вым, И.Б.Елкивой).

з.