Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Противовоспалительная и анальгетическая активности производных 3,3-диалкил-3,4-дигидроизохинолинов и фенэтиламидов

На правахрукописи

Вихарев Юрий Борисович

Противовоспалительная и анальгетическая активности производных 3,3-диалкил-3,4-дигидроизохинолинов и фенэтиламидов

14.00.25 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск -2005

Работа выполнена в лаборатории асимметрического синтеза и биологически активных веществ ГУ Института технической химии УрО РАН

Научный руководитель:

Кандидат биологических наук Аникина Лада Владимировна

Научный консультант:

Доктор химических наук Шкляев Юрий Владимирович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Зуева Елена Петровна

Кандидат медицинских наук Ваизова Ольга Евгеньевна

Ведущая организация: ГОУВПО «Пермская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертационной работы состоится «_»_2005 г.

в_часов на заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при ГУ НИИ

фармакологии Томского научного центра СО РАМН, по адресу: 624028, г. Томск, пр. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (624028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

Автореферат разослан 2005 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Медицина и фармакология в настоящее время располагают широким спектром противовоспалительных и анальгетических препаратов. Однако они наделены целым рядом побочных эффектов, существенно ограничивающих их длительное применение. В отношении противовоспалительных препаратов это антипролиферативное, тератогенное, ульцерогенное, гепатотоксическое и нефротоксическое действие (Хомулло Г.В., 1972; Сюбаев и др., 1985; Дроговоз СМ., 1989; Климнюк Е.В., 1989; Насонов Е.Л., 1996), которые связаны с угнетением активности циклооксигеназы-1 (Vane J.R. et а1., 1998). В отношении наркотических анальгетиков непреодолимым барьером для их широкого применения является наркогенный потенциал. Представители группы ненаркотических анальгетиков обладают нефро- и гепатотоксичностью, способны угнетать кроветворение при длительном применении, а также, в основном, малоактивны. Таким образом, создание новых ненаркотических анальгетиков и противовоспалительных препаратов с высокой активностью и минимумом побочных эффектов является весьма актуальной задачей. В последние годы появляется интерес к противовоспалительным агентам, реализующим свое действие не через регуляцию активности циклооксигеназ. Так, существуют данные о противовоспалительном и анальгетическом действии лигандов аденозиновых и серотониновых рецепторов (Аринова А.А. с соавт., 1994; Sajjadi F.G. et а1., 1996; Bouma G.M. et а1., 1997; Haskd G. et а1., 1998; Szabo et а1., 1998; Bгoussas M. et а1., 1999; Когсетеи^ка^иЫса I., Plaznik А., 1999). Высокую активность в отношении аденозин-, серотонин-, дофамин- и адренергических систем проявляют производные изохинолина ^ао У. et а1., 1988; Glusa Е. et а1., 1990; Baгa1di P.G. et а1. 2001). Известно также наличие у них анальгетических и противовоспалительных свойств (Вгауе Е. et а1., 1974). В связи с этим представляет интерес исследование противовоспалительной и анальгетической активностей у производных изохинолина и родственных им замещенных

фенэтиламидов, синтезированных в лаборатории синтеза активных реагентов Института технической химии УрО РАН, Пермь (завлаб. - д.х.н. Ю.В.Шкляев).

Работа выполнена в рамках плановых исследований Института технической химии УрО РАН, проведенных в соответствии с темами «Тандемная и каскадные гетероциклизации ароматических соединений» (№ гос.регистрации 01.20.00.314772) и «Синтез, поиск и доклиническое исследование перспективных лекарственных препаратов. Исследование биологической активности продуктов синтеза» (№ гос.регистрации 01.20.03.01055), а также при поддержке Гранта РФФИ № 01-03-96473а Урал, Гранта РФФИ № 04-03-96045а Урал, Гранта Президента РФ для поддержки ведущих научных школ № НШ-2020.2003, Программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине» (Гос. контракт №04/21 «К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-6'-аминокапроновая кислота - новый ненаркотический анальгетик», 2004), Программы Президиума РАН «Направленный синтез веществ с заданными свойствами и создание функциональных материалов на их основе» 2003-2004 годы, Программы сотрудничества между учеными СО РАН и УрО РАН «Синтез биологически активных соединений на основе трансформации аминокислот, высших терпеноидов и азотсодержащих гетероциклов» - 2003-2004 годы.

Цель работы - поиск среди производных изохинолина и замещенных фенэтиламидов соединений, обладающих противовоспалительным и анальгетическим действием, сочетающимся с минимумом побочных эффектов. Задачи исследования:

1) исследовать противовоспалительную и анальгетическую активности и острую токсичность замещенных фенэтиламидов, 3,4-дигидроизохинолонов и изохинолиламинокислот;

2) выявить потенциальные противовоспалительные средства и анальгетики и оценить спектр их фармакологического действия;

3) оценить степень безопасности активных соединений, наличие возможных побочных действий, влияние на функции печени и гемопоэз.

Научная новизна. Впервые исследована противовоспалительная, анальгетическая активности и острая токсичность новых производных 3,4-дигидроизохинолина и замещенных фенэтиламидов. Установлено, что одиннадцать соединений имеют противовоспалительное действие, сопоставимое с известными НПВС. У трех наиболее активных соединений исследована гастротоксичность, гепатотоксичность и влияние на кроветворение. Выявлен потенциальный анальгетик, превосходящий по силе действия аналоги, что позволило получить Патент РФ №2223764 от 20.02.2004 «Анальгезирующее средство».

Практическая ценность работы. Соединение Г-104, превосходящее современные ненаркотические анальгетики по анальгетической активности и безопасности применения, может быть рекомендовано для дальнейшего исследования как анальгетический препарат.

Положения, выносимые на защиту:

1. Исследованные производные 3,4-дигидроизохинолина и замещенные фенэтиламиды малотоксичны и обладают противовоспалительной и анальгетической активностью.

2. Соединения, обладающие наиболее выраженным противовоспалительным действием, не проявляют характерных для традиционных нестероидных противовоспалительных препаратов токсических эффектов: гастротоксичности, гепатотоксичности и угнетения кроветворения.

3. Соединение Г-104 (К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-е-аминокапроновая кислота) обладает высокой анальгетической активностью, низкой токсичностью, большой широтой фармакологического действия, отсутствием ульцерогенного действия.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены на Международной научной конференции «Фундаментальная наука в интересах развития химической и химико-фармацевтической промышленности» (Пермь, 2004). Диссертация апробирована на научном семинаре Института технической

химии УрО РАН (Пермь, 2004) и рекомендована к защите. По теме диссертации опубликовано 2 статьи, получен патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования (3 главы), обсуждения, выводов. Список литературы включает 188 наименований (86 отечественных и 102 иностранных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования служило 51 соединение, синтезированное в лаборатории синтеза активных реагентов Института технической химии УрО РАН, гЛермь.

Соединения объединены по химическому строению в три группы: замещенные фенэтиламиды, 3,4-дигидроизохинолоны и

изохинолиламинокислоты. 3,4-Дигидроизохинолоны привлекли наше внимание как аналоги наиболее вероятных продуктов биогенного гидролиза изохинолиламинокислот. Группа изохинолиламинокислот представляет собой конъюгаты трех наиболее простых изохинолонов с девятью различными аминокислотами: глицин, кислота,

аминокапроновая кислота, DL-лейцин, L-метионин, L-фенилаланин, D-триптофан.

Соединения вводили в виде суспензии в 2% крахмальной слизи. Каждая опытная группа включала 6-10 животных.

Опыты проведены на 910 белых беспородных мышах обоего пола массой 18-22 г и 515 белых беспородных крысах обоего пола массой 180-220 г, находящихся на стандартном рационе питания.

Острую токсичность соединений с вычислением ЛД50 определяли на мышах по экспресс-методике В.Б.Прозоровского (1978) при внутрибрюшинном способе введения. Характеристику токсичности соединений проводилась в соответствии с классификацией К.К.Сидорова (1973).

Противовоспалительную активность изучали на крысах в каррагениновом тесте (Winter С.А. et al., 1962). Соединения вводили внутрибрюшинно за час до введения флогогена в дозе 50 мг/кг, препарат сравнения диклофенак натрия в дозе 8 мг/кг (ED50).

Анальгетическую активность соединений изучали на мышах на модели «горячей пластинки» (Eddi N.B., Leimbach D., 1953) при внутрибрюшинном и пероральном введении, на модели «уксусных корчей» (Koster R. et al., 1959) и модели «каолиновых корчей» (Fujiyoshi Т. et al., 1989) при пероральном введении. Исследуемые вещества вводили в дозе 50 мг/кг, препарат сравнения анальгин на модели «горячей пластинки» - 93 мг/кг (ED50), на модели «уксусных корчей» - 55 мг/кг (ED5o), на модели «каолиновых корчей» - 50 мг/кг.

Определение EDso по методу Литчфилда и Уилкоксона (Беленький М.Л., 1963) проводили для соединений АО-83, Г-174 на модели каррагенинового отека при внутрибрюшинном способе введения и соединения Г-104 на моделях «уксусные корчи» и «каолиновые корчи» при пероральном введении и «горячая пластинка» при пероральном и внутрибрюшинном способах введения соединений.

Гастротоксичность соединений АО-83, Г-174 и Г-104 исследовали на крысах при пероральном и внутрибрюшинном способах введения (с целью исключить прямое раздражающее действие на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки). Соединения вводили в течение 4 дней один раз в сутки АО-83, Г-174 в дозах 50 мг/кг, Г-104 в дозе 7 мг/кг при внутрибрюшинном способе введения и все соединения в дозе 100 мг/кг при пероральном способе введения, препарат сравнения индометацин - в дозе 10 мг/кг. Ульцерогенный эффект оценивали по общему количеству язв в группе, проценту животных с язвами, степени изъязвления (число повреждений, приходящихся на 1 животное в группе), индексу Паулса (степень изъязвления, умноженная на процент животных с язвами и деленная на 100). Параллельно

общепринятыми методами были сняты показатели общего и биохимического анализа крови.

Терапевтическое действие на развившееся воспаление в динамике

соединений АО-83, Г-174 и Г-104 исследовалось на крысах в формалиновом тесте (Методические рекомендации..., 1982). Соединения ставили в дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно ежедневно на протяжении 4-х дней опыта, препарат сравнения индометацин - в дозе 10 мг/кг.

Жаропонижающее действие соединения Г-104 изучали на крысах-самцах на модели «пирогеналовой лихорадки» (Методические рекомендации..., 1982). Соединение вводили внутрибрюшинно в 2% крахмальной слизи в дозе 10 мг/кг, препарат сравнения анальгин - в дозе 100 мг/кг.

Влияние соединения Г-104 на свертывание крови исследовалось на крысах методом определения свертывания крови в капилляре (Лабораторные методы..., 1987). Соединение вводили в течение 4 дней один раз в сутки в дозе 10 мг/кг.

Влияние соединения Г-104 на центральную нервную систему

исследовалось на мышах в тесте «открытое поле» (Bossier I.R. et al., 1964). Соединение вводили за час до опыта в дозе 50 мг/кг, препарат сравнения кофеин-бензоат натрия в дозе 30 мг/кг (1/10 ЛД50).

Антидепрессантная активность соединения Г-104 была определена в тесте «принудительного плавания» (Porsolt R.D. et al., 1977) на крысах-самцах. Соединение вводили внутрибрюшинно за 1 час до опыта в дозе 50 мг/кг, препараты сравнения кофеин-бензоат натрия - в дозе 30 мг/кг, амитриптилин -в дозе 5 мг/кг.

В общей сложности использовали 18 методик. Все экспериментальные данные обрабатывались статистически с использованием критерия Стьюдента (Беленький М.Л., 1963). Различие считали достоверным при уровне вероятности р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Проведены скрининговые исследования всех 51 соединения на противовоспалительную активность в каррагениновом тесте и на анальгетическую активность на модели «горячая пластинка». В группах замещенных фенэтиламидов, изохинолонов и у соединений группы изохинолиламинокислот, наиболее активных в каррагениновом тесте и на модели «горячая пластинка», исследована анальгетическая активность на модели «уксусные корчи». В результате проведенных исследований во всех трех группах найдены активные соединения. Всего из 51 исследованного соединения достоверную противовоспалительную активность проявили 20, а анальгетическую 12 соединений. Наиболее активными оказались соединения АО-83 из группы замещенные фенэтиламиды и Г-174, Г-104 из группы

изохинолиламинокислоты (рис. 1,табл. 1,2,3).

АО-83 Г-174 . Г-104

Рис.1. Соединения, проявившие наибольшую противовоспалительную (АО-83 и Г-174) и анальгетическую (Г-104) активности в скрининговых исследованиях.

Таблица 1

Противовоспалительная активность и острая токсичность наиболее активных _соединений_

Соединение Противовоспалительная активность ДДзо, мг/кг

Прирост отека стопы, % Торможение, %

Контроль 71,34±8,14 - -

Диклофенак натрия 36,74±6,50* 48,8 118

АО-83 32,35±3,03* 54,7 >3000

Г-174 25,52±1,52* 64,2 >3000

Г-104 53,85±10,44 24,5 890

* - р<0,05 по отношению к контролю.

Таблица 2

Анальгетическая активность наиболее активных соединений на модели _«горячая пластинка»_

Соединение Время наступления оборонительного рефлекса, с.

Исходное Через 30 мин. Через 60 мин. Через 120 мин.

Анальгин 10,67±1,28 24,42±4,14* 26,75±5,20* 27,17±5,03*

АО-83 14,00±4,37 14,92±2,14 15,62±1,61 10,83±0,92

Г-174 11,50±0,79 8,08±0,84* 19,83±2,36* 19,08±3,86

Г-104 9,67±0,42 10,88±0,54 20,58±2,03* 19,17±3,52*

* . р<0,05 по отношению к исходному значению.

Таблица 3

Анальгетическая активность наиболее активных соединений на модели _«уксусные корчи»_

Соединение Количество корчей Торможение количества корчей, %

Контроль-1 22,50±2,54 -

Анальгин 9,00±4,59* 59,4

АО-83 7,83±2,40* 64,7

Контроль-2 27,90±1,55 -

Г-174 9,67±5,14** 65,3

Г-104 8,33±3,68** 70,1

* - р<0,05 по отношению к контролю-1,

• • - р<0,05 по отношению к контролю-2.

В группе изохинолонов также были активные соединения, но по различным параметрам они уступали соединениям АО-83, Г-174 и Г-104. Так, высокая противовоспалительная активность Ш-4 (60,6% торможения отека, р<0,01) дополняется высокой токсичностью этого соединения, его ЛД50 составляет 282 мг/кг. Малотоксичное соединение Ш-10 проявило высокую анальгетическую активность только при химическом раздражении (73,3% торможения количества корчей, р<0,05) и не было активным при использовании термического раздражителя.

В группе изохинолиламинокислот введение в структуру изохинолина аминокислот в целом приводило к снижению токсичности соединений по отношению к исходным изохинолонам, что согласуется как с исследованиями, ранее проведенными в нашей лаборатории (Аникина Л.В., 2003), так и с исследованиями, проводимыми во всем мире (Мелик-Оганджанян Р.Г. с соавт., 1985; Ватуллина Г.Г. с соавт., 1997). Однако стабильное снижение токсичности

обнаружено только в отношении глицина. Введение глицина в молекулу одного из изохинолонов вызвало увеличение противовоспалительной активности в два раза (соединение Г-174). Анальгетический эффект изохинолонов при присоединении к ним аминокислот как достоверно повышался (соединение Г-104), так и снижался.

В группе замещенных фенэтиламидов наблюдалась зависимость проявления противовоспалительных и анальгетических свойств от одного единственного атома. Эта зависимость проявилась в соединениях АО-47, АО-83, АО-115, которые отличаются друг от друга атомом галогена в пара-положении фенильного радикала. В случае АО-47 - это фтор, АО-83 - хлор, АО-115 - бром. Активностью обладало только соединение АО-83 (рис.1).

Для того чтобы выбранные для дальнейшего изучения соединения АО-83, Г-174 Г-104 можно было сравнивать по активности и безопасности с известными препаратами, необходимо было установить их ED5o на моделях, отражающих их свойства. Для соединений АО-83 и Г-174 этой моделью служил коррагениновый тест, а для соединения Г-104 - «уксусные корчи». Однако установить ED50 для соединений АО-83 и Г-174 не было возможности, так как их эффект оказался не дозозависим (рис.2).

60 50 40 30

70 60 50 40 30

Рис.2. Изменение противовоспалительной активности соединений АО-83 (А) и Г-174 (Б) в зависимости от дозы при внутрибрюшинном способе введения. По оси абсцисс отмечены дозы в мг/кг, а по оси ординат процент торможение отека стопы по отношению к контролю.

Е^о соединения Г-104 на «уксусных корчах», рассчитанное по методу Личфолда-Уилкоксона, составляет 7,0 (6,0+8,1) мг/кг, что значительно ниже, чем ЕВ5о анальгина на этой модели, которое составляет 55 мг/кг (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985).

Анальгетическое действие, как известно, может быть обусловлено влиянием на локальные механизмы развития боли или изменением афферентной иннервации на уровне центральной нервной системы. Для того чтобы оценить по какому пути реализуется анальгетическое действие соединения Г-104, была установлена его ЕВ5о на модели «горячая пластинка», отражающей преимущественно центральное действие, и на модели «каолиновые корчи», которые, как считается, обусловлены активацией калликреин-кининовой системы (ГцДуовЫ Т. Ы а1., 1989). На «горячей пластинке» ЕВ50 установлена при пероральном и, так как данная модель это позволяет, при внутрибрюшинном пути введения, и составляет 135,0 (80,4+226,8) и 13,5 (9,5-5-19,2) мг/кг соответственно. Таким образом, соединение Г-104 не уступает анальгину на этой модели, так как ЕГ>50 анальгина при внутрибрюшинном введении составляет 93 мг/кг (Сюбаев Р.Д. с соавт., 1985). Высокая активность Г-104 на «горячей пластинке» указывает на центральный характер его действия. Однако соединение Г-104 проявляет высокую активность и на модели «каолиновых корчей», его ЕГ>50 составляет 14,0 (7,6+25,9) мг/кг, что указывает на влияние соединения Г-104 также и на локальные реакции, обусловливающие болевую чувствительность.

Большое количество исследований, посвященных изучению болевой чувствительности, указывают на развитие анальгезии при раздражении серотониновых и опиоидных рецепторов (Брагин Е.О., 1991). В последние годы появились исследования, демонстрирующие реализацию анальгетического действия химических препаратов через серотонинергическую и опиоидную системы (Аринова А.А. с соавт., 1994; Koгzeniewska-Rubica I. Ы а1., 1999). В связи с этим, а также учитывая, что высокая активность Г-104 на «горячей пластинке» обнаружила задействованость в реализации его анальгетического

эффекта центральных механизмов, мы попытались оценить значение состояния опиоидной и серотонинергической систем на выраженность действия данного соединения. Для этой цели был использован опыт с нагрузкой в виде предварительного введения (за 30 минут до Г-104) неселективного антагониста серотониновых рецепторов ципрогептадина (4 мг/кг перорально) или полного блокатора опиоидных рецепторов налоксона (1 мг/кг п/к). Проведенный эксперимент обнаружил исчезновение анальгетического эффекта Г-104 при блокаде серотонинэргической системы. Блокада опиоидных рецепторов налоксоном приводила также к значительному снижению активности Г-104. Это указывает на задействованность серотониновых и опиоидных рецепторов в реализации анальгетического эффекта Г-104 (табл.4).

Таблица 4

Анальгетическая активность соединения Г-104 методом «горячей пластинки» с _предварительным введением налоксона и ципрогептадина_

Соединение Время наступления оборонительного рефлекса, с

Исходное Через 30 мин. Через 60 мин. Через 120 мин.

Г-104 (50 мг/кг) 9,67±0,42 10,88±0,54 20,58±2,03* 19,17±3,52*

Напоксон + Г-104 (50 мг/кг, в/б) 10,88*0,69 10,69±0,34 10,13±1,18 9,75±0,55

Напоксон + Г-104 (25 мг/кг, в/б) 9,25±0,53 11,25±1,07 14,38±1,69* 12,00±0,99*

Ципрогептадин + Г-104 (50 мг/кг, в/б) 10,50±0,73 11,58±1,5б 12,50±0,79 11,92±0,78

Ципрогептадин + Г-104 (25 мг/кг, в/б) 11,31±0,53 12,25±1,22 9,44±0,84 12,38±2,28

Налоксон+физ.р-р. 10,57±0,85 10,86±0,53 13,50±1,43 11,21±0,83

Ципрогептадин + физ.р-р. 8,79±0,68 9,93±0,77 11,07±1,34 11,50±1,44

*- р<0,05 по отношению к исходным данным.

В связи с тем, что проведенные исследования указывают на участие опиоидной системы в реализации анальгетического эффекта Г-104, мы оценили влияние Г-104 на психоэмоциональное состояние животных, так как известно, что наркотические анальгетики существенно изменяют поведение животных, в

частности, снижают двигательную и, особенно, исследовательскую активность мышей (Барков Н.К., Закусов В.В., 1973). Установлено, что в тесте «открытое поле» Г-104 не влияет на исследовательскую активность животных и повышает двигательную активность на уровне психостимулятора кофеин-бензоата натрия (табл.5). Таким образом, у Г-104 отсутствует характерное для наркотических анальгетиков угнетающее влияние на поведение животных.

Таблица 5

Влияние соединения Г-104 на двигательную и исследовательскую активность в тесте «открытое поле»

Соединение Двигательная активность Исследовательская активность

Количество пересеченных квадратов Увеличение показателя по отношению к контролю, % Количество исследованных отверстий Увеличение показателя по отношению к контролю, %

Контроль 67,00±4,21 - 25,20±3,34 -

Кофеин- бензоат натрия 84,30±5,02* 25,8 44,00±3,63* 74,6

Г-104, 50 мг/кг 84,00±4,45* 25,4 23,30±2,03 7,5

*_ р<0,05 по отношению к контролю.

Полученные по Г-104 данные: отсутствие противовоспалительного действия и наличие анальгетического, зависимость анальгетической активности от серотонинэргической и опиоидной систем, - указывают на сходство Г-104 с серотонинпозитивными антидепрессантами, которые обладают аналогичными свойствами (Аринова А.А. с соавт., 1994; Koгzeniewska-Rubica I., Plainik А, 1999). Тем не менее исследование антидепрессантных свойств Г-104 в дозе 50 мг/кг показало отсутствие активности Г-104 на модели «принудительного плавания» (табл.6).

Таким образом, были определены принадлежность к фармакологической группе, а также системы, задействованные в реализации анальгетического действия соединения Г-104.

Таблица 6

Антидепрессантная активность соединения Г-104 в тесте «принудительного

плавания»

Соединение Время иммобилизации, с Уменьшение показателя по отношению к контролю, %

Контроль 426,83±10,92 -

Кофеин-бензоат натрия 226,40± 10,71* 47,0

Амитриптилин 279,67±29,55* 34,5

Г-104 396,83*24,64 7,0

* . р<0,05 по отношению к контролю.

Поскольку применяемые в практике НПВС обладают рядом побочных эффектов, нами изучены и оценены наиболее вероятные дополнительные эффекты соединения Г-104. Для анальгетиков типа анальгина, обладающих весьма низким противовоспалительным действием, характерно жаропонижающее действие. Другой анальгетик - кеторолак - снижает свертываемость крови. В отношении этих наиболее характерных для ненаркотических анальгетиков эффектов также наблюдаются существенные отличия у соединения Г-104. Во-первых, отличия проявляются отсутствием у Г-104 жаропонижающего действия на модели пирогеналовой лихорадки (табл.7).

Таблица 7

Жаропонижающая активность соединения Г-104 на модели «пирогеналовой ___лихорадки»_

Соединение Исходная температура, °С Температура через 2 часа после введения пирогена-ла,°С Температура после введения соединений, °С

Через 1 час Через 2 часа Через 3 часа

Контроль 37,13±0,29 37,95±0,14 38,05±0,21 37,97±0,13 37,99±0,22

Анальгин 37,15±0,22 37,97±0,17 36,86±0,09* 36,24±0,19* 36,94±0,30*

Г-104 36,81 ±0,20 37,84±0,17 38,11±0,20 38,04±0,24 38,38±0,20

- р<0,05 по отношению к контролю.

Во-вторых, от соединения Г-104 можно было ожидать как повышения времени свертывания крови, характерного для анальгетиков, так и понижения,

так как в состав молекулы Г-104 входит s-аминокапроновая кислота, которая сама является антифибринолитическим препаратом (Машковский М.Д., 1993). Однако исследование свертывания крови в капилляре показало отсутствие у соединения Г-104 влияния на время свертывания крови. Время свертывания крови в группе животных, на протяжении четырех дней получавших по 10 мг/кг соединения Г-104, составило 168,33±19,49 секунд против 165,00±14,54 секунд в контроле (р>0,5 по отношению к контролю, в каждой группе было по 6 крыс).

Важным параметром безопасности применения соединения является величина условной широты фармакологического действия (УШФД), представляющая собой деление значения ЛД50 соединения на значение его ED50. В таблице 8 приведены условные широты фармакологического действия основных препаратов, применяющихся как анальгетики, за ED5o взята доза, полученная на модели «уксусных корчей». Как видно из таблицы, соединение Г-104 значительно превосходит по безопасности все остальные анальгетики.

Таблица 8

Сравнительные фармакологич еские характеристики анальгетиков

Соединение Л&о, мг/кг ЕЭзо, мг/кг Гастроток-сичность Условная широта фармакологического действия

Аспирин 1600* 155* + 10,3

Анальгин 1630 55* - 29,6

Ибупрофен 708 170* + 4,2

Напроксен 547 63* + 8,7

Индометацин 274 11* + 24,9

Ортофен 118 5* + 23,6

Г-104 890 7 - 127,1

* - по данным Сюбаева Р.Д. с соавт. (1985)

Так как кроме выявления потенциального анальгетика в данной работе были обнаружены соединения, обладающие противовоспалительными свойствами, нашей задачей было исследовать их терапевтическое действие на фоне хронического воспаления. Для этих целей был выбран формалиновый тест. При исследовании соединений Г-104, АО-83 и Г-174 в формалиновом

тесте было обнаружено противовоспалительное действие на протяжении всего эксперимента у соединений АО-83 и Г-174. Соединение Г-104, хотя и не проявило активности в каррагениновом тесте, в формалиновом тесте вызвало достоверное противовоспалительное действие на протяжении первых трех суток (табл.9).

Таблица 9

Противовоспалительная активность соединений Г-104, Г-174 и АО-83 в ____формалиновом тесте_

Соединение Прирост отека (%) по отношению к исходным данным через

24 часа 48 часов 72 часа 96 часов

Контроль 89,99±4,65 79,12±7,99 77,18±6,77 80,55±8,13

Индометацин 32,72±5,46* 41,36±7,12* 24,44±5,59* 44,22± 12,02*

Торможение отека (%) по отношению к контролю

63,64 47,72 68,33 45,10

Г-104 48,16±8,06* 42,75±8,19* 39,75±5,50* 56,49±8,88

Торможение отека (%) по отношению к контролю

46,48 45,97 48,50 29,87

Г-174 62,48±5,72* 42,21±5,70* 39,67±4,03* 57,19±4,09*

Торможение отека (%) по отношению к контролю

30,57 46,65 48,60 29,00

АО-83 45,45±5,84* 39,50±6,60* 30,87±5,79* 46,60*5,71*

Торможение отека (%) по отношению к контролю

49,49 50,08 60,00 42,15

* - р<0,05 по отношению к контролю.

Чаще всего противовоспалительное действие нестероидных препаратов реализуется через ингибирование продукции простагландинов. С нарушением продукции простагландинов, обусловленной ингибированием циклооксигеназы, связывают токсическое действие индометацина и других нестероидных противовоспалительных соединений (НПВС) на печень, проявляющееся повышением активности аминотрансфераз в крови (Дроговоз СМ. с соавт., 1989; Климнюк Е.В., 1989; Schmitz G., 1994; Trechot P. et al., 1996). Угнетением активности циклооксигеназы объясняется и гастротоксичность НПВС (Vane J.R. et al., 1998). Кроме того, индометацин и анальгин при многократном применении вызывают патологические изменения картины крови, снижая количество гранулоцитов (Машковский М.Д., 1993).

Как известно, циклооксигеназа (ЦОГ) существует как минимум в двух изоформах. Считается, что именно ингибирование первой изоформы ЦОГ приводит к негативным последствиям применения НПВС - гастротоксичности, угнетении агрегации тромбоцитов, гепатотоксичности и др. При исследовании гастротоксичности соединения АО-83, Г-174 и Г-104 продемонстрировали отсутствие ульцерогенного эффекта как при пероральном, так и при внутрибрюшинном четырехдневном введении (табл. 10).

Таблица 10

Соединение Доза Общее Процент Степень Индекс

мг/кг количество язв в группе животных с язвами изъязвления Паулса

Пероральное введение

Контроль - 0 0 0±0,00 0

Индометацин 10 19 87,50 2,38±0,71* 2,08

АО-83 100 0 0 0±0,00 0

Г-174 100 0 0 0±0,00 0

Г-104 100 3 22,22 0,33±0,24 0,07

Внутрибрюшинное введение

Контроль - 0 0 0±0,00 0

Индометацин 10 49 100 6,13±1,06* 6,13

АО-83 50 1 16,67 0,17+0,17 0,03

Г-174 50 0 0 0+0,00 0

Г-104 7 0 0 0±0,00 0

* . р<0,05 по отношению к контролю.

Таким образом, отсутствие гастротоксичности у исследуемых соединений указывает на то, что их противовоспалительная активность не связана с ингибированием, по крайней мере, первой изоформы ЦОГ.

Параллельно с постановкой гастротоксичности при внутрибрюшинном введении было исследовано влияние соединений на показатели общего и биохимического анализа крови (табл.11,12).

Влияние соединений анализа крови

Таблица 11

Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели биохимического на пятый день внутрибрюшинного введения_

Соединение

Показатели биохимического анализа крови

Общий белок, г/л

АлАТ, мккат/л

АсАТ, мккат/л

Контроль-1

51,64±3,47

0,32±0,01

0,36+0,01

Г-104, (7 мг/кг)

54,1313,57

0,31±0,00

0,3б±0,00

Г-174, (50 мг/кг)

58,91±3,72

0,3110,00

0,36±0,02

Контроль-2

59,83±1,33

0,38±0,03

0,52±0,03

АО-83, (50 мг/кг)

55,83±1,35

0,39±0,05

0,60±0,05

Контроль-3

66,10±2,03

0,22±0,00

0,04*0,01

Индометацин, (10 мг/кг)

53,76±1,84*

0,24±0,01

0,07±0,01

* . р$0,05 по отношению к контролю-3.

Таблица 12

Влияние соединений Г-104, Г-174 и АО-83 на показатели периферической _крови на пятый день внутрибрюшинного введения_

Соединение

Показатели периферической крови

Гемоглобин, г/л Эритроциты, млн/мкл Лейкоциты, тыс/мкл

Контроль-1 200,6718,04 8,46±0,82 25,67±4,79

Г-104, (7 мг/кг) 196,33±9,17 11,53±0,98* 22,67±3,15

Г-174, (50 мг/кг) 191,33+13,30 7,69±0,55 18,5013,19

Контроль-2 169,50±8,61 12,50±0,41 15,60±0,79

АО-83, (50 мг/кг) 140,17± 10,24 9,05±0,41** 15,43±1,02

Контроль-3 159,00±5,89 9,69±0,68 6,23±1,41

Индометацин, (10 мг/кг) 129,75±9,95*** 8,14±0,29 5,88±1,03

* - р50,05 по отношению к контролю-1,

** - р<0,05 по отношению к контролю-2,

*** - р<0,05 по отношению к контролю-3.

Общий и биохимический анализ крови показал, что введение Г-104, АО-83 и Г-174 в течение четырех дней не приводит к изменению активности аминотрансфераз и концентрации общего белка, что указывает на отсутствие токсического действия на печень. Не обнаружено также изменения других параметров. Исключение составляет снижение количества эритроцитов, сопровождающееся тенденцией к снижению концентрации гемоглобина, под действием соединения АО-83. В случае АО-83 также наблюдается уменьшение в 2 раза абсолютного и относительного количества моноцитов. Данные по

соединениям Г-174 и Г-104 выгодно отличаются от препарата сравнения -индометацина. Индометацин вызывал массивное язвообразование при обоих способах введения (19 язв на восемь животных при пероральном способе введения и 49 на 8 крыс при внугрибрюшинном введении). Влияние четырехдневного введения индометацина на показатели общего и биохимического анализа крови заключалось в снижении концентрации общего белка и концентрации гемоглобина. Снижение концентрации гемоглобина с тенденцией к снижению количества эритроцитов и лейкоцитов в этом случае можно объяснить вызванной язвами кровопотерей.

Таким образом, в результате выполненной работы из 51 исследованного соединения выявлены соединения АО-83 и Г-174, проявляющие высокую противовоспалительную активность и гораздо меньшую, чем у известных НПВС, острую токсичность. Соединения АО-83 и Г-174 выгодно отличаются от традиционных НПВС отсутствием гастротоксичности. Вероятно, механизм их действия не связан с ингибированием циклооксигеназы-1.

Важнейшим результатом выполненной работы является разработка нового ненаркотического анальгетика - К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил- 1)-6-аминокапроновоЙ кислоты (соединение Г-104), -анальгетический эффект которого, вероятно, опосредуется через серотонинергическую систему:

Данное соединение обладает рядом преимуществ над имеющимися аналогами:

- низкая токсичность - соединение Г-104 относится к классу малотоксичных веществ;

- высокая анальгетическая активность, превышающая активность анальгина, индометацина и других ненаркотических анальгетиков. Его ББ50 методом «уксусных корчей» составляет 7,0 (6,0-8,1) мг/кг, методом «горячей пластинки» -13,5 (9,5-19,2) мг/кг, методом «каолиновых корчей» -14,0 (7,6-25,9) мг/кг;

- легкая растворимость в воде, что делает возможным его парентеральное применение и повышает ценность его как анальгетика - препарата скорой помощи;

- высокое значение УШФД, превосходящее значение всех современных ненаркотических анальгетиков;

- отсутствие противовоспалительной и жаропонижающей активности и гастротоксичности, свойственной аспирину, индометацину и другим нестероидным противовоспалительным средствам, также соединение Г-104 не влияет на время свертывания крови в капилляре;

- отсутствие влияния на показатели общего и биохимического анализа крови при четырехдневном применении;

- отсутствие угнетающего влияния на двигательную и исследовательскую активность в тесте «открытое поле», что выгодно отличает Г-104 от наркотических анальгетиков.

ВЫВОДЫ

1. Из 51 исследованного синтетического алкалоида производного изохинолина и фенэтиламида 20 соединений показывают достоверный противовоспалительный эффект, 12 соединений - анальгетический. Все соединения малотоксичны.

2. Установлено, что модификация производных 3,4-дигидроизохинолина природными аминокислотами приводит к проявлению данными соединениями противовоспалительной и анальгетической активности, достоверно отличающейся от активности исходных изохинолонов.

3. Наиболее активные соединения АО-83 и Г-174 не обладают характерными для нестероидных противовоспалительных средств токсическими эффектами: гастротоксичностью, гепатотоксичностью, угнетением кроветворения.

4. К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1 )-е-амияокапрОНОвая кислота (соединение Г-104), легко растворима в воде, обладает высокой

анальгетической активностью, низкой токсичностью, и не обладает основными побочными эффектами, характерными для НПВС.

5. Анальгетический эффект соединения Г-104 исчезает при блокаде серотониновых рецепторов ципрогептадином.

6. Анальгетический эффект соединения Г-104 исчезает при блокаде опиоидных рецепторов налоксоном.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Глушков В.А., Аушева О.Г., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., Сафин ВА., Шкляев Ю.В. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность эфиров и гидразидов К-[2-(п-гидроксифенил)-1,1-диалкилэтил]малонамовой кислоты // Хим.-фарм. журнал. - 2001. - №7. - С. 12-16.

2. Горбунов А.А., Шкляев Ю.В., Вихарев Ю.Б., Аникина Л.В., Сафин В.А. Поиск веществ, сочетающих противовоспалительную и анальгетическую активности, в ряду К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-аминокислот // Тезисы докладов Первой Международной конференции «Азотистые гетероциклы и алкалоиды». - Т.2. - Москва. - 2001. - С. 108.

3. Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., Сафин В.А., Горбунов А.А., Шкляев Ю.В., Карманов В.И. Противовоспалительная и анальгетическая активность N (3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)аминокислот // Хим.-фарм. журнал. -2002.-№2.-С. 19-23.

4. Аушева О.Г., Глушков В.А., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., Сафин В.А., Шкляев Ю.В. л-Гидроксифенилэтиламиды диалкиламиноуксусных кислот // Тезисы докладов V Молодежной научной школы-конференции по органической химии. 22-26 апреля 2002 г. - Екатеринбург. - 2002. - С.71.

5. Вихарев Ю.Б., Аникина Л.В., Устинова О.Ю., Глушков В.А., Стряпунина О.Г., Колла В.Э. Изучение биологической активности производных гидразида малонамовой кислоты // Сборник тезисов 2-го Съезда фармакологов 21-25 апреля 2003 г. «Фундаментальные проблемы фармакологии», 4.1. -Москва.-С.310.

6. Шкляев Ю.В., Вихарев Ю.В., Аникина Л.В., Толстиков А.Г. Пути стабилизации нитрилиевого иона и биологическая активность продуктов // Проблемы создания новых лекарственных средств. - Уфа: Гилем. - 2003. -С.42-43.

7. Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б., Сафин В.А., Горбунов А.А., Шкляев Ю.В. Анальгезирующее средство // Патент РФ №2223764 от 20.02.2004.

8. Вихарев Ю.Б., Шкляев Ю.В., Аникина Л.В., Колла В.Э., Толстиков А.Г. Противовоспалительное и анальгетическое действие производных гидрированных изохинолинов, не связанное с ингибированием циклооксигеназы-1 // Материалы XI Российского национального Конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2004. - С.773.

9. Вихарев Ю.Б., Аникина Л.В., Горбунов А.А., Шкляев Ю.В., Колла В.Э. М-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил- 1)-6'-аминокапроновая кислота новый ненаркотический анальгетик // Тезисы докладов II Конференции «Фундаментальная наука в интересах развития химической и химико-фармацевтической промышленности». - Пермь. - 2004. - С. 174.

Лицензия ПД-11-0002 от 15.12.99

Подписано в печать 08.04.2005. Набор компьютерный. Бумага ВХИ. Формат 60X90/16. Усл. печ. л. 1,38. Заказ № 416/2005. Тираж 100 экз.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614000, г. Пермь, Комсомольский пр., 29, к.113, т.(3422) 198-033

\ ■ '

Актуальность проблемы.

Воспаление как типовой патологический процесс лежит в основе большинства соматических заболеваний человека, таких как коллагенозы, инфекционные болезни, бронхиальная астма, атеросклероз, при которых наблюдаются такие проявления воспалительного процесса как отек, деструкция тканей. Особое место при воспалении занимает болевая реакция. Этими проявлениями воспалительной реакции обусловлено одно из основных направлений патогенетической и симптоматической терапии -широкое применение противовоспалительных и анальгетических препаратов. Медицина и фармакология, в частности, в настоящее время располагает широким спектром препаратов данного типа. Однако они наделены целым рядом побочных эффектов, существенно ограничивающих их длительное применение. Такими побочными действиями выступают антипролиферативное, тератогенное, ульцерогенное, гепатотоксическое, нейро- и нефротоксическое и т.д. (Хомулло Г.В., 1972; Сюбаев и др., 1985; Дроговоз С.М., 1989; Климнюк Е.В., 1989; Насонов E.JL, 1996). В основном, эти неприятные последствия применения нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) связывают с угнетением ими активности циклооксогеназы-1 (ЦОГ-1) (Vane J.R. et al., 1998). Одним из способов решения этой проблемы является поиск веществ, устраняющих воспаление, не влияя на ЦОГ-1. Такими соединениями можно считать селективные ингибиторы ЦОГ-2, однако и они вызывают нежелательные последствия, хотя и иного характера. Таким образом, остается актуальной задача поиска веществ, оказывающих противовоспалительное действие с минимумом негативных последствий, реализующееся через ингибирование ЦОГ-2 или через некий иной механизм, не связанный с изменением активности циклооксигеназ.

В отношении анальгетических препаратов максимально надежно и продолжительно снимают боль любой этиологии наркотические анальгетики растительной и синтетической природы. Однако их механизм действия — активация опиоидной системы и, как следствие, наркогенный потенциал — является непреодолимым барьером для их широкого применения. Более безопасный препарат трамадол сочетает два механизма действия — активацию опиоидной системы и ингибирование обратного захвата моноаминов, но при длительном применении он также может вызывать зависимость. Группа ненаркотических анальгетиков имеет свои недостатки. Так, новый сильнодействующий препарат кеторолак не оправдал возлагавшихся на него надежд, так как обладает высокой нефротоксичностью и в ряде стран (Германия, Дания) уже запрещен к применению. Анальгин при длительном применении может угнетать кроветворение вплоть до полного агранулоцитоза и также в большинстве стран мира запрещен к безрецептурному отпуску. Парацетамол наиболее часто используется для снятия тривиальных болей и входит в большинство комбинированных болеутоляющих средств, но он эффективен только при слабых болевых синдромах и не может применяться больными с заболеваниями печени в анамнезе. Аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты малоактивны и обладают большинством побочных эффектов противовоспалительных препаратов. Поэтому создание новых ненаркотических анальгетиков и противовоспалительных препаратов с высокой активностью и минимумом побочных эффектов является весьма актуальной проблемой.

В последние годы появляются данные о реализации противовоспалительного действия химическими агентами, минуя непосредственное влияние на ключевые ферменты синтеза простагландинов. Так, за последние годы появился ряд работ о возможности влияния на процесс воспаления через аденозиновые рецепторы. Показано, что различные воздействия на аденозиновые рецепторы приводят к угнетению дегрануляции нейтрофилов, снижению активности моноцитов-макрофагов, ингибированию продукции таких провоспалительных медиаторов, как фактор некроза опухолей-ос, МПМа, интерлейкин-12, интерферон-у и оксид азота (Sajjadi F.G. et al., 1996; Bouma G.M. et al., 1997; Hasko G. et al., 1998; Szabo et al., 1998; Broussas M. et al., 1999). Появляются также данные об анальгетическом действии серотонинпозитивных антидепрессантов, реализуемом через серотонинергическую систему (Аринова А.А. с соавт., 1994; Korzeniewska-Rubica I., Plaznik А., 1999).

Производные изохинолина проявляют высокую активность в отношении аденозин-, серотонин-, дофамин- и адренергических систем (Gao Y. et al., 1988; Glusa E. et al., 1990; Baraldi P.G. et al. 2001). Известно также наличие у них анальгетических и противовоспалительных свойств (Вгауе Е. et al., 1974).

В лаборатории синтеза активных реагентов Института технической химии УрО РАН (г.Пермь) синтезированы производные изохинолина и замещенные фенэтиламиды, которые в связи с изложенным выше привлекли наше внимание с точки зрения поиска среди них высокоэффективных потенциальных анальгетических и противовоспалительных препаратов.

Работа выполнена в рамках плановых исследований Института технической химии УрО РАН, проведенных в соответствии с темой «Тандемная и каскадные гетероциклизации ароматических соединений» (№ гос.регистрации 01.2.00 314772) и «Синтез, поиск и доклиническое исследование перспективных лекарственных препаратов. Исследование биологической активности продуктов синтеза» (№ гос.регистрации 01.20.03.01055), а также при поддержке Гранта РФФИ № 01-03-96473а урал, Гранта РФФИ № 04-03-96045а урал, Гранта Президента РФ для поддержки ведущих научных школ № НШ-2020.2003, Программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине» (Гос. контракта № 04/21 «N-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-6'-аминокапроновая кислота - новый ненаркотический анальгетик», 2004), Программы Президиума РАН

Направленный синтез веществ с заданными свойствами и создание функциональных материалов на их основе» 2003-2004 годы, Программы сотрудничества между учеными СО РАН и УрО РАН «Синтез биологически активных соединений на основе трансформации аминокислот, высших терпеноидов и азотсодержащих гетероциклов» - 2003-2004 годы.

Цель и задачи исследования

Цель: поиск среди производных изохинолина и замещенных фенэтиламидов соединений, обладающих противовоспалительным и анальгетическим действием, сочетающимся с минимумом побочных эффектов.

Задачи исследования:

1) исследовать противовоспалительную и анальгетическую активности и острую токсичность замещенных фенэтиламидов, 3,4-дигидроизохинолонов и изохинолиламинокислот;

2) выявить потенциальные противовоспалительные средства и анальгетики и оценить спектр их фармакологического действия;

3) оценить степень безопасности активных соединений, наличие возможных побочных действий, влияние на функции печени и гемопоэз.

Научная новизна.

Впервые исследована противовоспалительная, анальгетическая активности и острая токсичность новых производных 3,4-дигидроизохинолина и замещенных фенэтиламидов. Установлено, что одиннадцать соединений имеют противовоспалительное действие, сопоставимое с известными НПВС. У трех наиболее активных соединений исследована гастротоксичность, гепатотоксичность и влияние на кроветворение. Выявлен потенциальный анальгетик, превосходящий по силе действия аналоги, что позволило получить Патент РФ №2223764 от 20.02.2004 «Анальгезирующее средство».

Практическая ценность работы

Соединение Г-104, превосходящее современные ненаркотические анальгетики по анальгетической активности и безопасности применения, может быть рекомендовано для дальнейшего исследования как анальгетический препарат.

Положения, выносимые на защиту

1. Исследованные производные 3,4-дигидроизохинолина и замещенные фенэтиламиды малотоксичны и обладают противовоспалительной и анальгетической активностью.

2. Соединения, обладающие наиболее выраженным противовоспалительным действием, не проявляют характерных для традиционных нестероидных противовоспалительных препаратов токсических эффектов: гастротоксичности, гепатотоксичности и угнетения кроветворения.

3. Соединение Г-104 (К-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1)-в-аминокапроновая кислота) обладает высокой анальгетической активностью, низкой токсичностью, большой широтой фармакологического действия, отсутствием ульцерогенного действия.

выводы

1. Из 51 исследованного синтетического алкалоида производного изохинолина и фенэтиламида 20 соединений показывают достоверный противовоспалительный эффект, а 12 - анальгетический. Все соединения малотоксичны.

2. Установлено, что модификация производных 3,4-дигидроизохинолина природными аминокислотами приводит к проявлению данными соединениями противовоспалительной и анальгетической активности, достоверно отличающейся от активности исходных изохинолонов.

3. Наиболее активные соединения АО-83 и Г-174 не обладают характерными для нестероидных противовоспалительных средств токсическими эффектами: гастротоксичностью, гепатотоксичностью, угнетением кроветворения.

4. N-(3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолил-1 )-е-аминокапроновая кислота (соединение Г-104), легко растворима в воде, обладает , высокой анальгетической активностью, низкой токсичностью, и не обладает основными побочными эффектами, характерными для НПВС.

5. Анальгетический эффект соединения Г-104 исчезает при блокаде серотониновых рецепторов ципрогептадином.

6. Анальгетический эффект соединения Г-104 исчезает при блокаде опиоидных рецепторов налоксоном.