Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:Профилактическое действие сахарозаменителей в полости рта и особенности их метаболизма

004616031

На правах рукописи

ЗУБЦОВ Валерий Александрович

ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ САХАРОЗАМЕНИТЕЛЕЙ В ПОЛОСТИ РТА И ОСОБЕННОСТИ ИХ МЕТАБОЛИЗМА

(Экспериментальное исследование)

Специальность 14.01.14- стоматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

03.01.04 - биохимия

Тверь-2010

- 2 псН ?010

004616081

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия» Федерального агенства здравоохранению и социальному развитию» на кафедрах пародонтологии и биохимии, в ГОУ ВПО «Московский государственный медицинский стоматологический университет» Росздрава по здравоохранению и социальному развитию» на кафедре биохимии и в ГНУ ВНИИМЛ Россельхозакадемии.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Румянцев Виталий Анатольевич заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Петрович Юрий Александрович

Официальные оппоненты:

Академик РАМН, доктор медицинских

наук, профессор Леонтьев Валерий Константинович

Доктор медицинских наук, профессор Терёхина Наталья Александровна Доктор медицинских наук, профессор Петрикас Арнольд Жакович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова » Росздрава.

Защита состоится «7» «декабря» 2010 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 20 8.099.01 при ГОУ ВПО Тверская ГМА Росздрава по адресу: 170100, Тверь, ул. Советская, д.4

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тверской

государственной медицинской академии и на сайте www.tvergma.ru

Автореферат разослан « 6_» ноября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Мурга В.В.

Список сокращений АТФ - аденозишрифосфорная кислота БЖ - биологическая жидкость ГИ - гангивальный индекс Г-6-ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа ДЖ - десневая жидкость ЗК - зубной кариес ЗН- зубной налег

КОР - кислотно-основное равновесие

КСИ - ксшштол

ЛДГ - лактатдегидрогеваза

МБК - морфологический белок кости

МДГ - малатдегидрогеназа

МК - молочная кислота

ПВК — пировиноградная кислота

РЖ - ротовая жидкость

РП - ротовая полость

САХ - сахароза

СДГ - сорбитолдегидрогеназа

СЗ - сахарозам с I плели

СОПР - слизистая оболочка полости рта

СОР - сорбишл

СуДГ - сукцинатдегцдрогеназа

ЩК - цикл трикарбоновых кислот (цитратный, Кребса) М - средняя арифметическая

ш - сраднеквадратическая ошибка средней арифметической п - число исследований

р - вероятность статистической значимости отличий

рН - отрицательный логарифм концентрации водородных ионов

I - критерий Стъюдента

рН, - начальное значение рН (ед. рН);

рН„ - минимальное значение рН (едрН)

Ть - длительность снижения рН мин

Т - длительность повышения рН мин

А - амилитуда кривой рН от. Ед. рН

Кь- угловой коэффициент катакроты ед. рН/ мин

К,- угловой коэффициент анакроты ед. рН /мин

К,,-коэффициентасимметрии усл. ед.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность научного исследования

Кариес зубов - одна из основных проблем стоматологии, не только медицинская, но и социальная (Е.В.Боровский, В. К. Леонтьев, 2003; В. К. Леонтьев, Г.Н.Пахомов, 2006; В.В. Корчагина, 2008; Э.М.Кузьмина и др., 2009; Larmas, 2010). Значение проблемы выходит за пределы стоматологии. Пищевые сахарозаменители (СЗ) широко применяют для профилактики кариеса зубов, в профилактике и терапии сахарного диабета, ожирения, атеросклероза, а также у здоровых людей дм коррекции фигуры (В.В.Корпачев, 2004). Последствия кариеса серьезно сказываются на здоровье людей.

Пораженносгь кариесом населения зависит от особенностей питания (В.К. Леонтьев, 2000), гигиены полости рта, прогивокариозной профилактики (О.Г. Авраамова, 2005) и других факторов. Замена части углеводов, ферментируемых в полости рта, снижает пораженность кариесом (Б.Н.Давыдов, Ю.ИБоринский, В.А.Румянцев, 2008; Л.К. Губина и др., 2008; Э.М. Кузьмина и др., 2009). Высокие значения ЮТУ, в России можно объяснить невыполнением правил гигиены полости рта, недостаточным применением СЗ и избытком легко ферментируемых пищевых углеводов. Стимуляция секреции слюны, повышение её защитных свойств увеличивают нейтрализующий и минерализующий потенциал слюны, что способствует восстановлению в зубной бляшке концентрации ионизированного кальция и рН, измененных под влиянием сахарозной нагрузки.

В полости рта углеводы, в первую очередь сахароза (САХ) и глюкоза, ферментируемые сахаразой и энзимами гликолиза микроорганизмов, содержащихся главным образом в зубном налете (ЗН) и меньше в смешанной слюне (СС), превращаются в пировиноградную, молочную и другие органические кислоты, деминерализующие эмаль зуба. В процессах окислительного декарбоксилирования пировиноградной кислоты и ивермедиатов цикла трикарбоновых кислот (ЦТК) выделяются молекулы СО2, участвующие в синтезе карбонатапатита Са„(Р04)5С0з и карбонатгидроксиапатита Ca„(PO<i)i СОз(ОН)г, еще более растворимого я органических кислотах, чем гидроксиапатит (Ю.А. Петрович, Р.П. Подорожная, С.М. Киченко, 2004).

Из глюкозы и фруктозы, образующихся при гидролизе сахарозы сахаразой микроорганизмов ротовой полости (РП), с помощью гликозшпрансферазы сшггезируются липкие полисахариды зубного налета - глюканы и фруктаны, способствующие задержке микроорганизмов в ЗН и адгезии ЗН на поверхности эмали зуба и дальнейшему развитию кариеса. Однако локальными факторами нельзя ограничить все многообразие этиологии и патогенеза кариеса зубов.

Хотя роль слюны, ЗН, микроорганизмов и химического состава эмали зуба в развитии кариеса занимает важное место (И.А. Бегельмаи, 1964; Ю.А. Петрович, 1966; В.К. Леонтьев, 1999; Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев, 2002; Ю.М Максимовский и др., 2007; П.А. Леус, 2008), в диссертации рассматриваются и другие аспекты применения СЗ в стоматологии.

Избыток рафинированных углеводов, преимущественно САХ, в пище человека привел в последнее десятилетия к росту заболеваемости кариесом, атеросклерозом, ожирением, панкреатическим диабетом. В молодом возрасте у людей большая предрасположенность к развшию кариеса, чем в старшем. Четко это видно у крыс, служащих экспериментальной моделью кариеса.

В раде случаев профилактика и терапия кариеса недостаточно эффективны (В.А. Румянцев, 1999). В связи с этим углубленное изучение особенностей патогенеза кариеса зубов, получение новых фактов, поясняющих неизвестные стороны его развития, на основе которых разрабатываются методы профилактики и лечения, в том числе с использованием СЗ, в особенности растительных, весьма актуально и перспективно.

Однако остается неизученным влияние СОР и КСИ различной концентрацией в корме животных в хронобиологическом аспекте, изменение массы тела и печени, содержание белка, активность-ферментов и изоферменгов, содержание лактага, пирувата и АТФ в слюне, сыворотке крови, слизистой оболочке полости рта (СОПР), печени. Неизвестно как влияют сахароза, сорбитол и ксилитол на остеоиндуктивнуго активность нижнечелюстпой кости. В этой связи становится понятной необходимость изучения перечисленных биохимических показателей, а также изменения таких физико-химических показателей характеризующих свойства слюны, как рН, вязкость, скорость слюноотделения. Полученные новые сведения будут полезным для теории и практики стоматологии. В связи с изложе[шым были поставлены цель и задачи диссертационного исследования.

Цель исследования: Изучить особенности метаболизма наиболее распространенных СЗ в экспериментальном и клшшко-лабораторном исследованиях. Разработать способы получения СЗ из растения Стевии и оценить его профилактическое действие в полости рта. На основе полученных данных повысить эффективность использования СЗ.

Задачи исследования:

1. Изучить в эксперименте на белых крысах месячного возраста влияние разных пероральиых доз САХ, СОР, КСИ и стевиозида на активность ферментов, содержание метаболитов углеводного обмена и цикла Кребса (ЦТК) в разные сезоны года.

2. Определить в динамике влияние различных доз САХ и СЗ на активность ферментов углеводного и энергетического обменов, а также на содержание лактата, пирувата, уровень АТФ в тканях, слюне, и в крови животных.

3. В ходе эксперимента изучить влияние САХ и СЗ на остсоиндуктивную активность нижнечелюстной кости белых крыс.

4. Разработать новую технологию выделения СЗ «стевиозид - Сгевикс» из теплолюбивого растения Йеуг'а геЬашИапа ВеПот, выращенного в средней климатической зоне России.

5. Разработать новый способ получения казаминовых кислот - стимулятора роста для районирования бразильского растения Стевии и повышения его урожайности.

6. Оценить влияние САХ и СОР, КСИ и стевиозида на физико-химические и биохимические свойства СС добровольцев.

7. Разработать рецептуру нового зубного эликсира с стевиозидом, для профилактики кариеса зубов и воспалительных заболеваний пародонта, оценить его эффективность.

8. Разработать новую рецептуру жевательной резинки «Сила и Блеск» для повышения эффективности профилактики кариеса зубов и заболеваний пародонта, оценить ее эффективность.

Научная новизна.

1. Впервые получены новые факты, отражающие участие САХ и СЗ в нарушении углеводного обмена у крыс и поддержании слюной гомеостаза в ротовой полости.

2. Впервые изучены сезонные изменения активности ферментов: ЛДГ, Г-6-ФДГ, СДГ и влияния на них СЗ сорбитола, кеилитола и дитерпеновых гликозидов - «стевиозид» после полоскания в полоста рта в течение 30 с 15 мл раствора.

3. Разработан новый способ получения го казеина молока казаминовых кислот, стимулирующих рост растений, в том числе стимулировал рост Стевии (Патент РФ № 2264412, 2005г). На Первом международном салоне инноваций и инвестиций ( Москва, 2001) жюри наградила его большой Золотой медалью.

4. Разработан новый способ, получети стевиозида из листьев субтропического растения Стевия, выращенного в средней полосе России. Патент РФ № 2111969 от 1998 г. На Первом международном салоне инноваций и инвестиций (Москва, 2001 г) жюри наградило разработку большой Бронзовой медалью.

5. Разработана рецептура зубного эликсира для профилактики заболевапий полости рта, содержащего стевиозид Патент РФ № 2263499 от 2005 г.

6. Впервые получены новые данные, доказывающие влияние САХ и СЗ на остеоиндуктивцую активность нижнечелюсгной кости и ее способность к регенерации.

7. Впервые показано, что дитерненовые гликознды оказывают быстрое восстановление рН слюны после применения раствора сахарозы, вызвавшего длительный ацидоз, что говорит о возможности использования дигерпеновых гликозидов в профилактике кариеса зубов.

8. Впервые получены новые данные о положительном профилактическом действии при кариесе комплекса солевых смесей в сочетании с растительным СЗ стевиозидом, полученным из стевии, выращенной в средней полосы России.

9. Получены новые данные о лечебио-профилактическом эффективном действии предлагаемого нами зубного эликсира со стевиозидом..

10. Впервые предложена жевательная резинка «Сила и Блеск» с дитерпеновыми гликозидами (разработанная по нашему патенту) и получены положительные результаты по восстановлению КОР в смешанной слоне.

11. Указаны наряду с хорошим лечебным эффектом сахароспиртов, и отрицательные стороны их действия на организм. Производители и стоматологи обычно не указывают отрицательные стороны их действия.

Теоретическая ценность работы.

1. Впервые изучены особенности влияния СЗ на общее состояние: массу тела и печени, содержание белка, активность ферментов и уровень метаболитов углеводного обмена в полости рта у животных, получавших в разное время кариссогешюсть САХ корму с разным процентным соотношением СОР и КСИ в разные сезоны года.

2. Выявлена зависимость между пищевыми рационами, сезонами и активностью ферментов и уровнем метаболитов на развитие кариеса у крыс. Показаны особенности влияния различных доз СЗ на углеводный обмен животных или после ее отмены.

3. Впервые сопоставлены параметры биохимических изменений при пероральном введении САХ, КСИ, СОР, дигерпеновых гликозидов.

4. Созданы рецептуры зубного эликсира и жевательной резинки с дитерпеновыми гликозидами, показавшие кариеспрофилактический эффект па животных н на студентах -добровольцах.

5. Впервые комплексно изучены изменения рН и многих других физико-химические изменения ротовой жидкости после приёма САХ, КСИ и дигерпеновых гликозидов.

Практическая значимость работы

1. Впервые в экспериме1гге на основе биохимических данных изучены особенности влияния современных СЗ на массу тела, печени и содержание белка, активность ферментов

ЛДГ, СДГ, Г-6-ФДГ, МДГ, СуДГ и содержание метаболитов ПВК, МК и АТФ у животных, получавших в разное время кариесо генную диету в комплексе с разным соотношением СЗ в разные сезоны года.

2. Выявлена зависимость между пищевыми рационами, сезонами, активностью ферментов, уровнем метаболитов и влияния различных доз сахарозаменителей (сорбитол, ксилитол) на углеводный обмен у животных, находящихся па диете или после ей отмены

3. Разработана технология получения казаминовых кислот - нового стимулятора роста растений (патент РФ № 22644]2 от2005 г.), рекомендована для внедрения в практику.

4. Усовершенствован способ получения нового отечественного СЗ из растения Я1еу1а геЬаийапа Вейош (патент РФ № 2111969 от 1998 г.), в конце сладкой еды и сладкого питья, с целью профилактики кариеса и улучшения гигиены полости рта.

5. Разработана рецептура профилактического зубного эликсира для полости рта (патент РФ № 2264499, 2005 г) рекомендована для внедрения в практику в целях повышения эффективной профилактики кариеса зубов и пародонтита.

6. Разработанная рецептура жевательной резинки «Сила и блеск» для профилактики нарушений КОР после приема легкоусвояемых углеводов для взрослых и детей.

7. Изменения активности ферментов в эксперименте у крыс и физико-химических показателей у добровольцев под действием СЗ углубляют представления о патогенезе кариеса, о значении различных доз САХ и СЗ.

Положения, выносимые па защиту

1. Взаимосвязь между состоянием активности ферментов и содержанием метаболитов углеводного обмена ЛДГ, СДГ, Г-6-ФДГ, МДГ, СуДГ, ПВК, МК и АТФ в слюне, крови, СОПР, массы тела и печени и питанием различными квотами САХ и СЗ (от 10 до 54%) в эксперименте в хронобиологическом аспекте и через 3 месяца после отмены диеты и переводом крыс на обычный рацион вивария.

2. Индуктивный механизмы активации фермента СДГ печени и сыворотки крови под влиянием различных доз его субстрата СОР в корме от 10 до 54%.

3. Факторы риска, воздействующие на остеоиндуктивную активность нижнечелюстной кости крыс под влиянием различных до САХ и СЗ, используемых в эксперименте.

4. Новая технология выделения дигерненовых гликозидов из растительного сырья.

5. Новая технология выделения казаминовых кислот.

6. Рецептура нового эффективного зубного эликсира для профилактики кариеса зубов, пародонтита и воспалительных заболеваний СОПР.

Внедрение результатов исследования

1. Предложенный нами усовершенствованный способ получешм ростстимулятора-казаминовые кислоты внедрен в практику семеноводства и льноводства.

2. Материалы диссертации используются на кафедрах терапевтической стоматологам и пародонтологии ТГМЛ, патофизиологии, биохимии МГМСУ при чтении лекций по биохимии студентам стоматологического факультета, а также при переподготовке специалистов высшей квалификации и слушателям факультета повышения квалификации для преподавателей стоматологических факультетов Российской Федерации.

3.Издано в соавторстве учебное пособие для студентов медицинских ВУЗов -«Основы стоматологической биохимии» - М., 2000. Выпущены методические пособия: «Краткое руководство по уходу за нетрадиционным растением Стевия» (Тверь, 1998), «Рекомендации по использованию казаминовых кислот - нового ростстимулятора» (Тверь, 2004),

Связь исследований с научной программой

Запланированные исследования выполнены по научной программе, утвержденной 19 мая 1996 г. Ученым Советом Московского медицинского стоматологического института и переутвержденной 29 мая 2006 г. Ученым Советом ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на: Международном конгрессе по клинической энзимологии (Кембридж, Великобритания,! 996); Международной конференции «Пищевые добавки-96» (Москва, 1996); XVII Международном конгрессе по клинической химии и лабораторной диагностике (Флоренция, Италия, 1999); XVI Международной конференции по проблемам оральной биологии (Шантелли, США, 2000); 2-ой Международной научно-практической конференции «Земледельческая механика в растениеводстве».- М.: ВИМ, 2003; На 2-ом кошрессе надатехнологий, М., 2009; На XV Международной конференции челюстно-лицевых хирургов и стоматологов, Санкт-Петербург. -17-19 мая, 2010.

Официальная апробация результатов исследования проведена на совместном заседании сотрудников кафедры кафедры биохимии, пародонтологии, терапевтической стоматологии, детской стоматологии стоматологического факультета ГОУ ВПО «Тверской государственной медицинской академии» Росздрава 22 июня 2010 г., на которой диссертация на соискание ученой степени доктора мед. наук В.А. Зубцова рекомендована к защите.

Публикации

По результатам исследований опубликовано 49 работ, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК для защиты докторских диссертаций - 7, за рубежом ~ 5, издаш,] монография, учебное пособие для студентов медицинских ВУЗов, выпущены 2 методических пособия. Получено 3 патента РФ и авторское свидетельство на изобретение.

Структура а объем диссертации

Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста, б глав: введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 3-х глав с результатами собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы из 697 источников, из них отечественных - 242, иностранных - 455 приложения. Работа иллюстрирована 29 рисунками, содержиг 60 таблиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Экспериментальные исследования паживотпых

Материалы и методы исследования. Для достижения поставленной цели опыты проводили на 681 белой крысе, разделенных на группы в зависимости от содержания в их корме сахарозы и сахарозамешггелей сорбитола, ксилитола и их смеси, вводимых с пищей в течение одного месяца и через 3 месяца после отмены экспериментальных кормов. 1) обычная пшца вивария (контроль), 2) 54% СОР, 3) 54% САХ, 4) 27% СОР + 27% САХ, 5) 54% КСИ, 6) 27% КСИ+27% САХ, 7) 10% СОР + 44% САХ, 8) 10% КСИ + 44% САХ.

В корме всех опытных групп от 2-й до 8-й содержалось:18,5% казеина, 18,5% пшеничного хлеба и 2% солевой смеси с поливитаминным комплексом. Объектом исследования служили кровь (или сыворотка), печень, слизистая оболочка полости рта (СОПР), смешанная слюна (СС), твердые ткани пародонта нижней челюсти.

Кровь получали путем пункции бедренной вены, сыворотку при центрифугировании после оседания форменных элементов и коагуляции, СС получали накануне эксперимента при стимулировании секреции пилокарпином по В.К. Леонтьеву и Ю, А Петровичу (1976).

После взятия крови при обезболивании декапитировали. Выделяли печень и слизистую оболочку десны, которые гомогенизировались на холоде в 0,25 М растворе сахарозы. СДГ определяли по Оег1асЬ (1957), Г-6-ФДГ- по КогпЬсг& Ноггескег (1970), ЛДГ - по \УгоЫей-з1су, ЪаОие (1956), СуДГ - по Ещенко и Вольскому (1982), МДГ - по Ве^теуег, Вепй (1974). Концентрацию лактата определяли по НосЬоге< (1974). Активность гистидазы и уроканиазы - по ТаЬот, МеЫег (1965) в модификации В.А. Буробина (1967).

Для определения ПВК и АТФ гомогенизацию тканей осуществляли в 0,6 н растворе хлорной кислоты (1:4), отделяли центрифугированием, а в супернантанте определяли содержание ПВК по Czok, Lamprecht (1970). АТФ по методу Adam (1962). Определение белка в сыворотке крови в гомогенатах проводили но Lowry и др. (1951).

Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с помощью t - критерия Стьюдента, параметров М ± m и р.

После забоя животных выделяли фрагменты кортикальной пластины нижнечелюстной кости с обеих сторон в области зубного ряда, включая альвеолярный отросток. Очищали от мягких тканей, отмывали от крови в 0,9% растворе NaCI, проводили деминерализацию в 0,5 н растворе HCl (0,25 мл на 1 мг массы кости) 24 часа при 4°С. Деминерализованный матрикс отмывали от НС 1 в 0,9% растворе NaC 1.

Исследовали остеоиндуктивную активность по методу Д.Д. Сумарокова (1987). Под эфирным наркозом у белых беспородпых крыс-самцов массой 140-160 г рассекали кожу на груд» над большими грудными мышцами и на внутренней стороне бедер. Раздвигали мышцы, в образовавшиеся "мышечные карманы" помещали по одному транешшггату.

Чтобы избежать особенностей влияния условии воспринимающего ложа на результат, трансплантаты каждой группы, по очереди помещали во все 4 точки трансплантации в следующем порядке: правое бедро, правая большая грудаая мышца, левая большая грудная мышца, левое бедро. Каждый реципиент получал транешхаш'аты 4-х разных ipynn.

После забоя реципиентов извлекали транешшггаты и оценивали визуально их состояние в сравнении с исходным матриксом по 3 критериям плотности (П), васкуляризации (В), шероховатости (Ш) по 5-бальной шкале (0, 1, 2, 3 и 4 балла). Ткань взвешивали, деминерализовали в 1 н растворе HCl 24 часа при комнатной температуре (в 0,5 мл 1 мг ткани). Деминерализовашый матрикс отмывали от HCl в 10 мл 0,9% раствора NaCI (10 мл), помещали в смесь этанола с эфиром (1:1) из расчета 0,2 мл на 1 мг матрикса. Через 24 часа обезжиренный матрикс взвешивали (Мщт), помещали на 48 часов в термостат при 100°С, затем опять взвешивали (М^,). Разность Мювл - И,*, деленная на МИШ1 и умноженная на 100% представляет собой критерий К„к (кислотоизвлекаемый компонент). В солянокислых экстрактах проводили определение Ca и Р. На основании полученных результатов вычисляли показатели: Са/Р-молярный коэффициент по формуле: Сса ' Мр

Са/Р-м.к. =------, (1)

СР " Мса

где: С - обозначение концентрации,

М - молекулярной массы элемента и коэффициент зрелости по формуле:

Со, + CF

Кз=----. (2)

Кик

Таким образом, формировали 9 показателей, характеризующих извлекаемую ткань: М%, Кик, Р, Са, Са/Р-молярный коэффициент, Кз, П, В, Ш. Полученные цифровые дшшые обрабатывали методом вариационной статистики. Статистический анализ результатов исследований проводили с помощью t - критерия Стьюдента, параметров М, ± ш, р. \

Общее состояпие животных

Таблица 1

Сводная таблица по изучению экспериментального кариеса на белых крысах, находившихся па различных диетах и разное время

Группы крыс Ферменты, метаболиты, АТФ Всего

Гл-6-ФДГ СДГ СуДГ лдг мдг МК ПВК АТФ

1. Контроль 28 29 25 25 27 25 25 22 206

2. Сорбитол 54% 25 22 20 25 25 22 22 20 181

3. Сахароза 54% 22 21 28 22 22 24 22 29 190

4. Сорбитол 27% + сахароза 27% 21 22 20 29 29 29 28 28 235

5. Ксилитол 54% 22 24 22 24 25 23 22 21 183

6. Ксилитол 27% + сахароза 27% 22 22 29 28 28 28 29 29 215

7. Ксилитол 10% + сахароза 44% 20 22 20 22 22 29 29 28 192

8. Сорбитол 10% + сахароза 44% 20 28 20 24 20 29 28 28 197

Всего: 180 190 184 199 198 209 205 205 1599

Число животных, участвующих в эксперименте по взвешиванию массы тела и печени, находящихся на различных диетах и различные сроки 120

Примечание: Животные содержались на диетах в течение 1 мес и 3 мес после отмены диеты и перевода на обычный рацион вивария. Перед забоем животных взвешивали, производили забор крови. Определение проводили в слюне, сыворотке крови, слизистой оболочке полости рта, печет. Перед забоем производили забор слюны. При определении активности ферментов, метаболитов и АТФ в различные периоды года в эксперименте было от 8 до 29 животных.

Масса тела и печени. После пребывания животных в течение 1 мес на разных кормах их внешний ввд и поведение значительно различалась. При сравнении с показателями контрольных крыс 1 группы самой низкой оказалась масса тела и печени крыс, получавших корм с 54% СОР и 54% КСИ (рис. 1 и 2).

Рис. I. Масса тела крыс (М±т). На этом и рис. 2 - крысы, получавшие летом 1 мес. с месячного возраста разные корма: сахарозу (СЛХ), сорбитол (СОР), ксшштол (КСИ) и их смеси

Рис.2 Масса печени крыс (М±ш)

Содержащиеся на корме с 54% сорбитола и с 27% сорбитола с 27% сахарозы, в отличие от чистьгх и упитанных животных на обычном корме и 54% сахарозы, были возбуждены. Они отставали в развитии, шерсть у них 1рязная, мокрая, слипшаяся, стояла торчком, теряли вес, диарея. Крысы легко реагировали на звуковой и на световой раздражитель. Изменения при 27% СОР и 27% КСИ были менее выражены.

Самая большая потеря массы тела установлена у крыс, получавших корм с 54% сахарозаменителей, меньшая - при 54% сахарозы, летом даже отмечено превышение над уровнем 1-й контрольной группы (рис.1).

Сезонные изменения массы печени двухмесячных крыс, получавших 1 мес экспериментальный корм, напоминали изменения массы тела (рис.2).

Масса тела и печени крыс, получаших корм с 54% сорбитола и 54% ксилитола летом была значительно ниже, чем в контроле и при 54% сахарозы (рис.1 и рис.2). По мере снижения концентрации сахарозаменителей до 27% и особенно до 10%, масса тела и печени увеличивалась. Цвет прямоугольников на рис.1 и 2 отражает содержание в них сахарозаменителей. Черным цветом изображен корм, содержащий 54% сорбитола и 54% ксилитола. Темно-серые столбики показывают содержание 27% ксилитола и сорбитола. Светло-серые столбики демонстрируют низкое содержание сахарозаменителей ксилитола и сорбитола, равное 10%. Белым цветом представлены крысы, питавшиеся обычной пищей вивария без прибавления сахарозаменителей и сахарозы. Прямоугольник белого цвета с буквой К (контроль) отражает 100% концентрацию обычной пищи вивария.

Масса печени крыс, питавшихся диетой с 54% сорбитола, как и масса тела, была статистически достоверно ниже в сроки исследования, включая срок 3 месяца после отмены диеты.

Осенью и зимой масса печени была ниже, чем весной и летом, при всех режимах питания. Особенно четко это видно при обобщении показателей четырех сезонов в два полугодия - осенне-зимнее и весенне-летнее - у животных, получавших в течение 1 мес разный корм. Отличие видно даже через 3 мес после отмены экспериментального корма. В связи с хорошо выраженным различием при сопоставлении массы печени за два полугодия удельную активность ферментов представили и за два полугодия из расчета на 1 мг белка.

Содержание белка в сыворотке крови, печени, слюне и слизистой оболочке полости рта практически не отличалось от нормы в группах 2,3,4,7 и 8, но в группах 5-й с 54% КСИ и 6-й с 27% КСИ + 27% САХ было ниже, чем в контрольной группе.

Активность дегидрогеназ печени, крови при обычном корме и при избытке сахарозаменителей.

Мы предложили новый способ описания биохимических изменений, при многофакторных воздействиях, в том числе в печени и сыворотке крови при воздействии СЗ и САХ. Новый способ основан на одновременной регистрации изменения направления по отношению к контролю либо к любому виду корма с указанием достоверности отличия цифровых величин. Такие таблицы могут быть предназначены для рассмотрения одного из сезонов либо могут облегчить сравнение 4 сезонов.

Таблица 2

Преимущественное снижение активности глюкозо-6-фосфатдегндрогеиазы (Г-6-ФДГ) и сукцинатдегидрогеназы (СуД1') и содержания белка двухмесячных крыс, получавших с месячного возраста летом 1 мес корм с разным количеством сахарозаменителсй сахарозы (САХ) либо обычный корм внварня (контроль). Вероятность отличия (р) по отношению к контролю (1 группа), сорбитола (СОР),

\Параметры Группа \ Содержание белка (г/л) сыворотки крови Ферменты (мкмоль/мипт"1)

Г-6-ФДГ Судг

1. Контроль 70,2 ±2,5 1,1 ±0,1 147Д±2,2

2Сорбитол 54% 60.5±5,0 * 0,5±0,1 NN 137.0±2,0 V

З.Сахароза 54% 74,8±2,8 0.7±0,004 142,0±2,2 ч

4.Сорбитол 27% +сахароза27% 69,2±4,5 0,8±0Г2 ч 146,0±1,5

5.Ксш1игол 54% 53,1 ±2,0 1,1 ±0,1 128,0±9,0

б.Ксилитол 27% +сахароза27% 53,6 ±2,3 и* 1,4 ±0,1 * 129,8±9,2

7.Ксилито10% +сахароза 44% 65.4± ЗД \ - -

8. Сорбитол 10% +сахароза44% 58,5 ±2,8 \\

Примечание: вероятность отличия (р) вычислена по отношению к контрольной группы. На этой и следующей таблице сплошные стрелки ^ достоверные отличия от контроля; и стрелки.....> тенденция к увеличению или к снижению активности

Достоверные отличия отмечают сплошными стрелками, причем одна сплошная стрелка означает вероятность отличия р<0,05, 2 сплошные стрелки р<0,01 и 3 стрелки р<0,00]. Прерывистая штриховая стрелка свидетельствует об имеющейся тенденции к изменению активности в сторону повышения, если стрелка направлена вверх. Если стрелка направлена вниз, это говорит об изменении в сторону понижения. Знак равенство показывает, что отличия сравниваемых показателей не превышают ошибки опыта (5%).

На таблице 2 приведен пример преимущественного снижения биохимических показателей сыворотки крови крыс под влиянием разных концентраций СОР, КСИ, САХ и их смесей.

На таблице 2 показано преимущественное снижение активности ферментов. При 54% содержании СОР в корме активность Г-6-ФДГ достоверно снижена более чем в 2 раза, СуДГ также достоверно уменьшилась. При корме с 27% СОР +27% САХ имеется тенденция к снижению активности Г-6-ФДГ, а СуДГ не отличается от контроля, как и корм с 54% КСИ при определении Г-б-ФДГ. При корме с 54% КСИ имеется тенденции к уменьшению активности СуДГ.

При 54% СОР корме есть тенденция к снижению количества белка в сыворотке, а при 27% СОР +27% САХ нет отличия от контроля. При корме с 54% и 27% КСИ+ 27%САХ содержание бежа достоверно снижено, как и при 10% корм с СОР.

Корм с содержанием ксилитола 54% не вызывает изменений, существенно отличающихся от коттгроля СуДГ. Корм с 54% ксилитола имеет тенденцию к снижению.

У корма, содержащего 54% СОР, есть тенденция к снижению, а 27% СОР не приводит к отличию от котггроля. При концентрации корма 54% КСИ и при корме 27% КСИ видно достоверное снижение содержание белка, как и 10 % корме с сорбитолом.

Корм с 27% СОР +27% САХ вызывает тенденцию к сшгжению Г-б-ФДГ, и не влияет на аюивносль СуДГ так как она равна. Зато корм с 54% концентрацией ксилитола полностью равен контролю при определении активности Г-б-ФДГ, а активность СуДГ имеет тенденцию к снижению.

На таблице 10 показано достоверное снижение Г-б-ФДГ, СуДГ под влияние пищи с содержанием 54% СОР. При корме с 10% СОР достоверное снижение белка сыворотки крови и как и у крыс, содержавшихся на кормес 27% КСИ.

Дальнейшие эксперименты показали, что определение активности только летом не дает представления об изменении активности этих ферментов в другие сезоны. При проверке выяснилось, что активность Г-б-ФДГ осенью не отличается от контрольного уровня, а весной в отличии от летнего активность Г-б-ФДГ падает. Весной в отличие тенденции к повышению активности летом имеет выраженное достоверное повышение активности фермента Г-б-ФДГ (табл. 3). Так же активность ЛДГ достоверно повышающаяся летом практически весной не отличается от контроля (табл. 4).

Таким образом по данным одного сезона нельзя судить об изменениях о других сезонах.

Таблица 3

Активность глюкозо-6-фосфатдсгидрогеиазы (Г-6-ФДГ)(мкмоль/мип-мгткани) в печени двухмесячных крыс, получавших 1 месяц корм, содержавший разное количество сахарозаменителеи и сахарозы в разные сезоны года_

Корм осень зима весна лето

1. Контроль 1,7 ±0,3 1,1 ±0,1 1,0 ±0,1 1,1 ±0,1

2.Сорбитол 54% 1,8 ±0,2 1,5 ±0,2 0,5±0,1 0,5±0,1

Р| и \ #

Рз л

Р4 \\ "•А.

3. Сахароза 54% 2,2 ± 0,2 2,7 ± 0,2 0,6 ±0,08 0,7 ±0,04

Р) \

Р4 //

4.Ксилитол 54% - - 1,4 ±0,06 1,4 ±0,04

Р) -ж4 =

Таблица 4

Активность лактатдегидрогсназы (ДДГ) (мкмоль/мшгл'1) сыворотки крови двухмесячных крыс, находившихся 1 месяц в разные сезопы па разных диетах

Грушш осень зима весна лето

1. Контроль 620,0 ±80.2 742,2 ± 58.5 1900,0 ± 76.3 589,0 ± 136,0

2.Сорбитол 54% Р1 Рз Р4 658,0±116,8 1143, (>±133,2 1930,5±116,2 "'Л '4. 1100,0±155,0 У *

3. Сахароза 54% Р1 Р4 777,0 ±45,9 1703,0 ±56,7 1493,0 ±171,3 1060,0± 247,2 .1 'ч

4.Кеилитол 54% PJ 1451,0 ±189,3 752,0 ±93,3

На таблице 5 при воздействии корма с концентрацией 54% СОР показано преимущественное и достоверное повышение активности СДГ в сыворотки крови в 36 раз по сравнению с контролем, и в печени в 2,3 раза. При воздействии корма с концентрацией 27% СОР превышение снизилось с 36 до 6 раз по сравнению с контролем. Если при 54% КСИ в корме воздействие превышало по сравнению с контролем 1,4 раза, то при приеме 27% КСИ уже не было отличия от контроля. Содержание бежа в печени крыс имело тенденцию к повышению при корме с 54% СОР и 54% КСИ, а также при 10% СОР и 10% КСИ.

Таблица 5

Преимущественное повышение активности СДГ, ЛДГ, МДГ (мкмоль/мип ■ г"1 иечепв или микромолъ/мин-г'1 белка)сывороткв крови и белок печени (мг/г) двухмесячных крыс, получавших с месячного возраста в течение одного летпего месяца корм с разным количеством сахарозы (САХ) в сахарозаменителей сорбитола (СОР) и ксилитол (КСИ) либо обычный корм виварня (контроль).

\^>ермснты Группы Сорбитол дегидроген аза сыворотки крови Сорбитол-дегидроге-наза печени ЛДГ сыворотки крови МДГ печени Белок печени

I. Контроль 0,13± 0,14 1,8 ±0,4 589,0± 36,0 399,9 ±33,7 139,2 ±0,4

2.Сорбитол 54% 4,7 ± 0,5 /// 4,1±0,5 // 110,0±155,0 / 163,0±17,4 *

3.Сахароза 54% 0,4+ 0,13 f 2,3 ± 0,3 1060,0±247,0 * 461,4±40,0 * 124,0±8,5 *

4,Сорбитол 27% + сахароза 27% 0,8 ±0,4 2,5 ± 0,3 ц 934,0 ±132,0 ч 366,3±76,4 Ч 116,8±4,2 \

5.Ксилитол 54% 0,82±0,09 2,5 ± 0,5 < 752,0 ±93,0 « 486,0± 17,5 / 151,2±17,0

б.Ксилнтол 27% +сахароза 27% 0,5±0,05 1,7 ± 0,3 493, ± 136,0 433,2± 26,7 < 146,0±6,8

7-Ксилигол 10% +сахароза 44% 0,4±,08 f 2,4±0,3 4 437,0±93,0 524,8±20,0 / 151,2±8,1

8.Сорбитол 10% +сахароза 44% 0,5±0,08 ц 2,3 ± 0,2 А 411,0 ±70,0 482,0± 29,4 f 149,6±8,1

Содержание молочной кислоты

Концентрация МК определялась в крови, печени, СОПР. Концентрация лактата в крови у животных 2-й группы осенью - зимой практически не отличалась ог контрольной группы, но летом снизилась и была ииже, чем во всех "ксилитольиых" (5,6,7) труппах.

В слизистой оболочке полости рта содержание МК у крыс 2,3 и 4-ой групп было более высоким зимой, чем осенью и весной. Наиболее высоким содержанием МК было у 3 и 4-ой группы животных.

Содержание пировиноградной кислоты. В сыворотке крови крыс, получавших корм с 54% сахарозы, концентрация IIBK имела тенденцию к увеличению, а при 54% сорбитола снижалась. В печени содержание ПВК было сшшсно на сорбитольной диете. После отмены всех диет содержание ПВК мало отличалось от данных контрольных групп животных, что говорит о компенсаторных реакциях организма живопшх после отмены всех квот сахароспиртов в рационе питания.

Влияние различных диет па активность ферментов ЦТК и содержания ЛТФ.

Содержание АТФ определялось в крови, печени и слизистой оболочке полости рта.

Впервые показано изменение содержание АТФ у крыс, содержавшихся на экспериментальном корме и после отмены их через 3 мес.

Впервые установленные нами сезонные биоритмы массы тела и активности ферментов печени и сыворотки крыс вызываются комплексом факторов. Среди них основным является циркадные ритмы фотопериодизма, питания и температуры окружающей среды.

Ведущим пейсмекером (водителем ритма) циркадианным ритмов является фотопериодизм под воздействием света и темноты на рецепторы сетчатки и далее не через зрительный нерв, а через ретинотюталамический тракт на супрахиазматические ядра (СХЯ) гипоталамуса [А. М. Алпатов,2000; И.И. Дедов, В.И. Дедов, 1992; Ikonomov О.С.,1994], т.е. через оптико-вегетативную систему академика Г.Н. Маркелова (194S).

Выяснили роль эпифизарного гормона мелатонина, участвующего в обшей системе совместно с СХЯ гипоталамуса в осуществлении циркадиашшх ритмов, мелатонин не депонируется в эпифизе и быстро секретируется в соответствии с циркадианным циклом смены светлого и темного времени суток. Мелатонин доносит информацию о ритмах, генерируемых СХЯ, до органов и тканей. При освещении глаза синтез мелатонин прекращается. Большая часть мелатонин из микросом печени, конъюгируясь с сульфатом и глюкуронатом и выводится с мочой.

В наших опытах сезонные колебания зависели от ряда факторов, в том числе от продолжительности светового дня. В осеннее-зимнее полугодие (октябрь-февраль) световой день намного короче, чем в весеннее - летнее (март - июль).

Чтобы приблизить эксперимент к условиям природного существования, крысы получали корм, состав которого изменялся в разные сезоны года. Стандартный корм без изменения состава во всех контрольных опытах не позволил бы обнаружить роль хронобиологического фактора природных сезонных изменений состава пищи.

Учтена и температура среды обитания. Опыты проводили в помещении, в котором, несмотря на отопление, в осенне-зимний период в среднем было прохладнее, чем в весенне - летний.

По-ввдимому, наши исследования могут оказаться полезными при углубленном изучении механизма действия избытка сахарозамепителей и возникающих при этом патологических изменений в разные время года.

Физиологические и патологические биоритмы УА ферментов в основном отражают результаты адаптации молекулярных механизмов организма, в том числе закрепленных на генетическом уровне, к изменяющимся условиям среды обитания.

Опыты с ферментами тоже можно объединить в два полугодия. Корм с 54% сорбитола повысил более, чем в 30 раз активность СДГ в сыворотке осенне-зимнее полугодие и тоже в 20 раз - в весенне-летнее по сравнению с обычным кормом. Рацион крыс 5-й группы увеличил ее почти в 4 и 3 раза соответственно, а 2-й - существенно не повысил, как и 4-й и 6-й. Диета 3-й группы увеличивала удельную активность СДГ печени почти в 4 раза в оба полугодия, 5-й - на 30 и 50%, меньше влияла на удельную активность СДГ пища с 54% сахарозы. При всех диетах активность СДГ сыворотки обоих полугодий достоверно не различалась.

Результаты табл.1 и 2 демонстрируют повышение активности СДГ в печени при кормлении в течение месяца рационом с 54% сорбитола, 54% сахарозы или смесью 27% сорбитола с 27% сахарозы. Больше всего повышала активность СДГ пища с 54% сорбитола и меньше всего с 54% сахарозы. Промежуточное положение заняла смесь сорбитола с сахарозой. В активации СДГ пищевым рационом с 54% сорбитола и смесью 27% сорбитола с 27% сахарозы можно предположить участие двух механизмов. Во-первых, можно допустить повреждение избытком сорбитола, как происходит при диабетической катаракте хрусталика. Можно предположить, что сорбитол повреждает мембраны гепатоцитов с последующим выходом СДГ из печени в кровь. В отличие от удельной активности СДГ не было достоверного превышения удельной активности ЛДГ в печени при сравнении данных 2-4-й групп с контролем, в здоровых особях активность СДГ в гепатоцигах оказалась в

сотни и тысячи раз выше, чем в сыворотке. Как известно, повреждение мембраны геиатоцитов сопровождается выходом ряда ферментов в кровь, в том числе оршюснсцифических гистидазы и уроканиназы.

На этом основании предложены биохимические тесты, выявляющие повреждение клеток печени. Более точно характеризуется повреждение печени гистидаза, урокапиназа и изоферменты ЛДГ4 и ЛДГ5 .Общая активность ЛДГ не отличается органоспецифичностью и поэтому имеет меньшее значение как тест повреждения гепатоцитов.

Во - вторых, можно предположить, что повышетю активности СДГ в сыворотке крови отражает адаптивную индукцию фермента печени, вызванную избыточным поступлением сорбитола при продолжительном питании крыс рационом, содержащим 54 или 27% сорбитола.

Анализ наших исследований позволяет отдать предпочтешь второму предположению. В пользу того, что повреждение гепатоцитов не служит главной причиной роста активности СДГ, свидетельствуют результаты опытов.

Повышение активности СДГ в сыворотке крови и в печени при питании диетой с 54% и 275 сахарозы можно объяснить ее гидролизом ферментами полости рта и кишечника на D - глюкозу и D - фруктозу, с последующим образованием из 1шх сорбитола, который активирует СДГ по индуктивному механизму.

Нами впервые установлено колоссальное повышение активности СДГ в сыворотке крови и печени под влиянием избытка сахарозамснителя сорбитола в пище и показан его индуктивный механизм. Неожиданным оказалось сравнительно небольшое увеличение аюивности СДГ в сыворотке и печени при избытке сахарозы в пище.

Из двух похожих сахароспиртов индуктором СДГ оказался только сорбитол, хотя ксилитол несколько повышал удельную активность СДГ, но намного меньше, чем сорбитол. К тому же при 10% ксилитола повышение было более выражено, чем при 27%, а при 27% ксилитола - больше, чем при 54%. Значит, под влиянием ксилитола не было прямой дозозависимости, типичной для остеоиндукцшт.

Вместе с тем на массу тела и на удельную активность ЛДГ сорбитол и ксилитол влияли почти одинаково. Результаты свидетельствуют об индуктивном типе повышения активности СДГ, что вызвано увеличением количества субстрата, как и других ферментов с таким же механизмом действия. Так как другой сладкий сахароспирт ксилитол препятствует индукции СДГ, нецелесообразно комбинировать одновременное применение сорбитола и ксилитола.

Резкое повышение активности СДГ под влиянием сорбитола, обнаруженное нами и объясненное как результат индукции, по-видимому имеет адшгшвно-защкгаое значение,

так как избыток сорбитола может вызвать уролитиаз, диарею, повреждение хрусталика и сетчатки глаза [Мштеу й а1., 2000] и другие пагологаи.

Следует указать на то, что для доказательства индукции фермента еще необходима прямая зависимость между увеличением содержания субстрата и повышением активности фермента.

Изменения удельной активности (УА) Гл-6-ФДГ и СуДГ не соответствовали соотношениям между СДГ и сорбитолом, так как УА СДГ в печени повысилась более чем в 2 раза при рационе 54% сорбитола, по сравнению с кормом, содержавшим 27% сорбитола+27% сахарозы, в оба полугодия не превышала удельную активность ферментов при пищевом рационе со 100% обычного корма. А в этих условиях в 2 раза снизилась активность Гл-6-ФДГ в осенне-зимнее полугодие и СуДГ в весенне - летнее. Представляемые новые отрицательные результаты, полученные при изучении трех дегидрогеназ, служат еще одним аргументом в пользу индукционного механизма повышения активности СДГ.

Обнаруженные нами сезонные биоритмы массы тела и активности ферментов печени крыс вызываются комплексном факторов. Среди них основным является цир-кадианные ритмы фотопериодизма, питания и температуры окружающей среды.

В наших опытах фотопериодизм выражался сезонными колебаниями продолжительности светового дня. В осенне - зимнее полугодие (октябрь-февраль) световой день намного короче, чем в весешю-летнее (март-июль).

Чтобы приблизить эксперимент к условиям природного существования крысы получали корм, состав которого изменяли в соответствии с сезонами года. Стандартный корм без изменения состава во всех контрольных опытах не позволил бы обнаружить роль хронобиологического фактора природных сезонных изменений состава пищи.

На основании проведенной работы следует считать, что большие дозы сорбитола в пище (54%, 27%) оказывают неблаготворный эффект на организм в целом и на биохимические параметры тканей и жидкостей полости рта. Поэтому такие квоты сахароспирта в шпце не стоит рекомендовать для многомесячной профилактики кариеса зубов. Квоты в 10% сорбитола и 10% ксюштола в этом плане предпочтительнее.

Следовательно, для профилактики стоматологических заболеваний сахароспирта следует применять в пищевом рационе в невысоких квотах и с известной осторожностью. Так как сладкий сахароспирт КСИ, препятствует индукции СДГ, нецелесообразно комбинировать одновременное применение сорбитола и ксилитола.

Определение остеоиндуктивпой активности по методу Д.Д. Сумарокова при использовании сахарозаменителсй может осветить механизм 1гх влияния па костную систему в целом, и па кости челюстей в частности.

Показатели Кз, Са, Р и Са/Р - молярный коэффициент равны нулю подсаживаемого деминерализованного матрикса, т.к. он состоит из коллагена и неколлагеновых кислотоустойчивых белков. Показатель М% равен 20%, а Кж - около 10% (в данном случае это НгО, связываемая матриксом). Показатели В, Ш в это время нулевые, а показатель П в пей равен единице.

В "мышечном кармане" матрикс атакуют макрофаги и он постепенно рассасывается. Почти одновременно со стороны воспринимающего ложа врастают сосуды, которые постепенно прорастают ткань саженца и приносят клетки-мишени для костиых морфогепов (перициты). Если в этот момент саженец извлечь, то по сравнению с исходным матриксом у него изменяется показатель В (появилась васкуляризация), показатель П может иметь нулевую оценку, а показатель М% может быть меньше 20% вследствие рассасывания матрикса

На следующем этапе, выделяющиеся из подсаженной ткани морфогены, вызывают дифференцировку перицитов в скелетогенпые клетки. Интенсивность этого процесса зависит от степени васкуляризации ткани и от количества в ней морфогенов. При полном отсутствии морфогенов подсажешшй матрикс в 25% случаев подвергается полной резорбции в течение 6 недель. Новообразованные скелетогенные клетки достаточно быстро преобразуются в остеобласты, а те - в остеоциты, т.е. идет процесс остеогенеза. Так как васкуляризация идет с периферии, то и остеогенез идет тоже с периферии. Извлеченная на этой стадии ткань представляет конгломерат из подсаженной ткани и новообразуемой кости. Это значат, что плотность саженца начнет увеличиваться, и начнет расти показатель М%.

На следующем этапе процессы остеогенеза усиливаются и начинаются процессы минерализации новообразуемого матрикса При этом извлекаемая ткань не только уплотняется, но на ее поверхности видны невооруженным глазом зоны оссификации в виде неравномерных напластований (показатель Ш больше нуля). Так как в ткали появляются Са и Р, то соответственно критерий Кик, Кз, Са и Р увеличиваются, и тем больше, чем активнее процесс. Однако следует помнить, что Са и Р приходят из крови реципиента. За счет очень активного метаболизма ткани Р в это время находится в ней не только в минеральной фазе, но и в виде других соединений. Минеральный компонент на этой стадии еще слабо организован и нормальное соотношение аморфной и кристаллической форм в виде

фосфатов кальция еще не установилось. Следовательно, Са/Р - молярный коэффициент существенно ниже характерных для апатитов значений - 0,9.

По мере созревания костной ткани увеличивается величина Са/Р - молярного коэффициента и превышает характерный для апатитов уровень 1,33. По мере замещения ткани саженца, остальные показатели также растут. Однако через 6 недель, т.е. к концу эксперимента полного замещения матрикса еще не происходит и извлекаемая ткань представляет собой конгломерат из ткани саженца и из новообразованной костной ткани. Т.е. ни один из показателей не достигает возможных для него максимальных значений, но стремится к этому.

При описании биологической значимости исследуемых критериев, чем согласованнее их рост, тем лучше идет процесс. Для этого используется критерий "интервал согласованности", представляющий собой разность между самым большим и самым малым значениями нормированных критериев, характеризующих данный объект. Например, если из 9 критериев максимальное значение имеет критерий М% (0,6), а минимальное - критерий Кз (0,1), то "интервал согласованности" будет равен 0,5. Чем меньше этот интервал, тем согласованнее процесс, а, следовательно, все биоактивные белки матрикса находятся в эквивалентных количествах. Естественно, что активность белков-регуляторов из матрикса подчиняется закону вариационных рядов. Этому же закону подчиняется чувствительность реципиента к этим белкам. В результате каждый критерий имеет пределы вариационных изменений, зависящие как от состава донорской ткани, так и от состояния реципиента. Известно, что в ряде случаев внешнее воздействие, не меняя положения центра вариационного ряда (так называемого М), меняет его границы, сужая га или расширяя. Для выявления такого эффекта применяются различные статистические методы, но самый простой вариант - вычисление длины вариационного ряда. Для этого из максимального значения показателя вычитают минимальное. У животных, получавших нагрузку сорбитолом, показатель находился в классе "удовлетворительно" и через месяц нагрузки и через 3 месяца, т.е. адаптации к сорбитолу не произошло. При нагрузке ксилитолом в течение месяца регенераторные потенции кости существенно снижаются. Из 13 подсаженных трансплантантов рассосались 6, еще 1 исключен из математической обработки, т.к. в извлекаемой ткани не обнаружены Ca и Р, а следовательно, остеогенез не произошел. Оставшиеся 6 саженцев замещались костью, но с оценкой не более чем "удовлетворительно". Причем общее снижение оценки определялось преимущественно показателями Ca, Р, Кз и III, т.е. были ослаблены процессы минерализации. В то же время интервал согласованности увеличивался в этой группе статистически недостоверно. Во всех случаях введения смеси сорбитола с сахарозой остеогенез по суммарному критерию

оценивался как хороший. В случаях введения смсси ксилитола с сахарозой остеогенез оценивался как удовлетворительный. Сопоставление «интервалов согласованности» не выявило различий между группами.

Вариабельность показателей в вариационных рядах отличалась в разных фуппах опытов. Введение сорбитола или ксилитола влияло на характер распределения. Во всех случаях, когда животные получали сорбитол в течение месяца, резко возрастала широта вариационного ряда показателя КВ1[ (более чем вдвое). Но в обеих этих группах снижалась длина вариационного ряда для показателя Са. Кроме того, в одном случае сужались границы ряда для показателя Кз, а в другом - для Са/Р-моляриого коэффициента. Сужение границ ряда для показателя Са наблюдалось и когда в пище содержится 27% сорбитола с 27% сахарозы, хотя и слабее выраженное. При введении сорбитола в течение 3 месяцев и по этому критерию наблюдалась адаптация.

При сведении ксилитола уменьшалась вариабельность всех показателей минерального обмена (Са, Р, Кз, Са/Р-молярный коэффициент). Причем для последнего показателя она осталась небольшой и при введении 27% ксилитола в смеси с 27% сахарозы.

Уменьшение вариабельности трудно оценить качественно (хорошо или плохо). Можно говорить о том, что введение таких заменителей сахарозы, как сорбитол и ксилитол, влияет на характер стадии минерализации при эктопическом остеогснезе. Сахарозамешпели не безразличны для регенераторных процессов в костях, а так как снижен показатель, то можно считать, что они подавляют остсоиндуктивный механизм регенерации кости. Например, при костной травме или при атрофичсском процессе в альвеолярном отростке при пародонтите. Однако на основании данных по трехмесячной нагрузке сорбитолом с последующей ее трехмесячной отменой, можно предполагать, что со временем организм адаптируется к введению этого сахарозамснителя и его регенераторные потенции восстанавливаются.

Экспериментальное исследование па студентах - добровольцах

Результаты исследований и их обсуждение. Так как сахарозаменители широко применяются при лечении сахарного диабета, ожирения, атеросклероза, то врачам -стоматологам и другим специалистам необходимо знать положительные стороны и особенно недостатки, свойственные конкретным сахарозамешггелям. Кроме того, сахарозаменители широко применяются в пищевой промышленности для изготовления кондитерских изделий, напитков, а также они используются в лекарствах, зубных пастах и тому подобное. Нередко средства массовой информации рекламируют вредные для здоровья сахарозаменители, которые бесконтрольно продаются в ларьках, магазинах и даже

в аптеках. С этой целыо мы впервые критически обобщили разрозненные сведения о биохимических механизмах отдельных сахарозаменителей в профилактике кариеса (Ю.А. Петрович, В.А. Зубцов и др., 1991).

С целыо получения устойчивых урожаев стевии в средней полосе России с высоким содержанием в листьях детерпеновых гликозидов нами были поставлены дополнительные цели. Необходимо было разработать новую технологию получения отечественного ростового стимулятора, который бы с успехом применялся в биохимии, биотехнологии, а также и в растениеводстве.

Мы разработали новую технологию получения отечественного стимулятора -казаминовые кислоты. За разработку технологии получения казаминовых кислот на Первом Международном Салопе инноваций и инвестиций (г. Москва 7-10 февраля 2001) международное жюри отметило данную разработку большой Золотой Медалью. Технология получения казаминовых кислот включает следующие стадии: кислотный гидролиз, гель-фильтрацию, концентрирование, сушку и упаковку готового продукта. Для оптимизации процесса выделения активной фракции гидролизата казеина - казаминовых кислот нами разработана установка, состоящая из дозирующей камеры, хроматографиической колонки, коллектора фракций, спектрофотометра СФ-46, потенциометра с самописцем. С целью автоматизации процесса нанесения и разделения на фракции применяли дозирующую камеру специальной конструкции. Хроматографическое разделение гидролизата казеина осуществляли методом гель-фильтрации на сефадексе 0-25 и Б-Ю. Используемый метод гель-фильтрации для хроматографического разделения гидролизата казеина позволил установить молекулярную массу - казаминовых кислот. Ростостимулирующая активность казаминовых кислот определяется низкомолекулярными пептидами с молекулярной массой в пределах 1200-2200 Да. Выпущены методические рекомендации по использованию казаминовых кислот (В.А. Зубцов, Л.Л. Осипова, 2004).

Таблица 6

Характеристика групп обследовании* людей - добровольце»

^В скобках общее Ч. число исслс- Число людей Пол обследованных Возраст обследованных

хлонаний Клннико- ^ч лабораторное N. исследование \ добровольцев мужчин женщин размах

1 2 3 4 5

1. Активность нзофермептов ЛДГ в смешанной слюне добровольцев под влиянием сахарозаменитслей

(150) 50 25 ... 25 18-26

2. Характер слюноотделения и свойств смешанной слюны (показатели кривых рН, буферная емкость, вязкость, скорость слюноотделения)

(100) 25 11 14 20-26

3. Оценка ацидогешюн и уреазной активности смешанной микрофлоры полости рта под действием дитерпеповых гликозидов

(60) 10 5 5 20-26

4. Измснепие происхождения КОР под действием сахарозаменителей растительного

(84) 42 18 24 20-26

5. Исследование КОР под действием сахарозаменцтелей синтетического происхождения

(196) 60 32 28 18-26

6. Исследование кислотно-основного равновесия контрольных групп

(150) 50 25 25 20-28

7. Клиническо-лабораторное исследование зубного эликсира

(309) 23 и 12 20-28

8. Клиническо-лабораторное исследование жевательной резинки

(252) 126 68 58 18-25

Всею: (1051) 386 195 191 18-26

Мы определили ростостимулирущую активность казаминовые кислоты при возделывании растения 81с\ча геЬаи&апа Вег1.огп. Листья центрально-американского растения являются источником перспективного сахарозамеш-теля - дитерненовых гликозидов.

Сопоставили действия растворов стевиозида, ксилигола и сорбитола на изоферментный спектр ЛДГ смешанной слюны студентов, а также состояние КОР в полости рта, характер слюпоотделения и свойств смешанной слюны: параметры изменений рН, скорость слюноотделения.

Исследование состояло из трех серия Первая серия исследований проведена на 50 добровольцах (25 мужчин и 25 женщин) 18-26 лет - практически здоровых студентах стоматологического факультета Тверской государственной медицинской академии. Эта серия проведена при участии к.м.н. Подгорного Г.Н. на базе ТГМА. Рот отнократно ополаскивали 15 мл изучаемого раствора 30 сек.

Таблица 7

Влияние сахарозаменителей на распределение нзоферментов ЛДГ (в %) смешанной слюны, практически здоровых людей

п/п Группы добровольцев ДДГ. лдг2 ЛДГ3 ДДГ4 лдг5

1. Контроль 5,5±0,2 35,3±0,2 15,6±0,7 22,7±1,2 20,9±2,5

2. Сахароза 10% 4,2±4,2 14,01-0,7 6,9±0,8 24,2±2,7 49,7±3,5

3. Сгевиозид0,2% 5,7±0,2 8,6±0,4 32,2±0,9: 37,9±1,2 15,6±0,7

4. СорбитолЮ % 5,0±0,3 12,3±2,1 23,6+3,7 39,9±3,3 19,2±1,7

Примечание: в эксперименте участвовали студенты, давшие согласие на участие в эксперименте. В 4 группах участвовало 50 студентов 1 -2 курсов Тверской государственной медицинской академии.

После чего определяли рН смешанной слюны. Слюну собирали в пробирку и охлаждали до 4°С. Электрофорез проводили в 7% полиакриламидпом геле трисглициновом буфере (рН 8,0) в течение 90 мин. При силе тока 1,5-2 мА на каждую электрфоретическую трубку (Ornstein,1964; Maurer,1971), Денсинограммы снимали на приборе SK: madzu corporation chart 200 - 91527. Средние данные по влиянию сахарозаменителей на изоферментный спектр фермента лактатдегидрогеназы в смешанной слюне добровольцев после полоскания 30' (табл.1). Одновременно изучали рН смешанной добровольцев. У добровольцев обнаружено 5 изоферментов ЛДГ (ЛДГ1-ЛДГ5) в смешанной слюне. Выявлено значительное и достоверное снижение анаэробного гликолиза по увеличению анаэробных фракций ЛДГ4 и ЛДГ5 у обследуемых. Наибольшее снижение анаэробного гликолиза наблюдали при 0,2% растворе стевиозида ЛДГ у добровольцев - студентов Тверской государственной медицинской академии.

Изоферменты ЛДГ4 и ЛДГ5 - субъединицы M типа, которые избыточно катализируют превращение пирувата в лактат, способствуя тем самым инициальной деминерализации поверхностных слоев эмали.

Во второй серии исследования проведем на 25 добровольцах обоего пола в возрасте

от 18 до 26 лет на кафедре терапевтической стоматологии ТГМА совместно с д.м.и. В.А.Румянцевым к сотрудницей РНИЛ по БАВ «ФАВИС» М.Н.Ивановой. Сравнивали влияние полоскания рга растворами стевиозида, ксилитола, сорбитола и сахарозы на состояние КОР в полости рта (рН, буферная емкость, вязкость, скорость слюноотделения). Проводили по 4 исследования у каждого пациента с перечисленными растворами (всего 100 определений).

7,4

7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 5,8

Р.н_....... ......................... _ _ ................ . .................. ....... ,

А •"♦"»Сахароза 10%

<

Ксилитол 10%

—1,-Сорбитол 10%

-Ш. Стевиозид 0,2%

5 10 15 20 25 30 35 40 45

Рис.3 Влияние сахарозы и ее заменителей на рН смешанной шпоны после однократного полоскания рта 15 мл в течение 30 сек Также оценивали органолептические свойства сахарозаменителей, включая длительность сохранения вкуса во рту. Кроме того брали образцы смешанной слюны для последующего биохимического анализа. Анализируя результаты по водородному показателю установлено, что все изученные сахарозаменитеяи вызывали в смешанной слюне физиологическое смещение КОР в щелочную сторону. Время смещения находилось в пределах 20-30 мин. Однако расгвор сахарозы вызывал длительный и стойкий ацидоз. В ротовой жидкости амплитуда кривой рН под влиянием раствора стевиозида была в 1,4 раза больше, чем СОР. После изменения рН смешанной слюне (по Кк) под влиянием раствора сахарозы. Длительность смещения рН в смешанной слюне до начала проявления восстановительных и компенсаторных процессов наиболее выражена у сахарозаменителей стевиозида и ксилитола. Этот показатель при их сравнении был очень близок.

Обнаружены статистически достоверные отличия во влиянии растворов стевиозида

на буферную емкость в сравнении с изучаемыми сахарозаменителями. После применения

раствора стевиозида на предмет изучения длительности сохранения вкусовых ощущений

(по методу С.М.Будылиной. Н.С.Зайко,1985) она была более 4 мин, что больше в 2 раза,

29

чем у других исследуемых сахарозаменителей (КСИ, СОР). В этой серии экспериментов использовали 10% водные растворы сахарозы, сорбитола и ксилитола, а также водный 0,2% раствор дитерпеновых гликозидов (стевиозид). В исследовании использовали двойной слепой метод.

□ Стевиозид 0,2 % а Сахароза 10%

□ Ксилитол 10%

□ Сорбитол 10%

0,2 % 10% 10% 10%

Рис. 4 Угловой коэффициент кривых изменений pH. смешанной слюны после однократного полоскания рта 15 мл в течение 30 сек растворами сахарозы и ее заменителей (М±т)

pH/мин

Стевиозид Сахароза Ксилитол Сорбитол

мин

а Стевиозид 0,2 %

@ Сахароза 10%

□ Ксилитол 10%

Стевиозид Сахароза Ксилитол Сорбитол 0,2 % 10% 10% 10%

а Сорбитол 10%

Рис. 5 Длительность сохранения вкуса после однократного полоскания рта 15 мл в течение 30 сек растворами сахарозы и ее заменителей (М±т)

120 100 80 60 40 20 0

¡3 Стевиозид 0,2% В Сахароза 10% □Ксилитол10% Ш Сорбитол 10%

Рис. 6 Влияние однократных полосканий рта раствором сахарозы и сахарозаменителей на буферную ёмкость смешанной слюны студентов-добровольцев (М±ш)

Таблица 8

Влияние однократных полосканий рта растворами сахарозы и сахарозаменителей на некоторые показатели слюны и слюноотделения (М±т)

Раствор для полоскания рта (15 мл в течение 30 сек) Максимальные изменения показателей смешанной слюны под влиянием полосканий полости рта

Буферная, емкость, мэкв/л вязкость, сПз скорость слюноотделения, мл/мин

по кислоте по щелочи

1 .Стевиозид 0,2% Ь40,81± 5,26 +108,83±10,41 1,11+0,12 1,43± 0,128

2.Сахароза 10% Н3,15±4,19 +103,24 ±13,24 0,34± 0,16 1,57± 0,143

З.Ксилигол 10% +2],44±5,66 +86,33± 8,38 0,86± 0,10 0,94± 0,102

4.Сорбитол ¡0% +26,92±6,27 ' 80.02.; 7,68 0,93± 0,09 1,06± 0,094

PJ-2 <0,001 >0,5 <0,001 >0,5

PJ - 3 <0,01 >0,1 <0,05 <0,05

PI ~ 4 <0,05 <0,05 <0,05 <0,05

По кислоте По

основанию

В третьей серии экспериментов на 10 добровольцах изучали влияние сахарозамснителей на функциональную активность ротовой микрофлоры. Активность квслотопродуцирующей микрофлоры оценивали путем сравнения амплитуд двух тестовых кривых Стефана в смешанной слюне. Первую тестовую кривую (контрольную) получали после полоскания рта 15 мл 54% раствора САХ в течение 30 сек (тестовый раствор). Вторую (опытную) тестовую кривую рН получали, применив 54% раствор сахарозы после полоскания.

Всего проведено 60 исследований в тех же условиях водными растворами поочередно, одним из сахарозамснителей. Таким же образом определили изменение аммиакобразуклдей активности находящейся микрофлоры в полости рта под влиянием использованных растворов сахарозамснителей, за исключением тестового раствора сахарозы, 15 мл ОДМ тестовый раствор карбамида использовали в течение 30 сек. Нами обнаружено, что все используемые сахарозаменители в полости рта обладают хотя и слабым, но подавляющим общее микробное кислотообразующее действие (по методу Л.М.Гаврикова, В.А.Храмов,1992).

Выделенный нами стевиозид в 2,1 раза превосходил КСИ и в 1,3 раза сорбитол (Р<0,05) по влиянию на амплитуду тестовых кривых рН Стефана (рис.1). Этот указывает на предпочтительность использования стевиозида перед широко известными и давно выпускаемыми сахарозаменителями, такими как КСИ и СОР, как добавление вместо САХ в пищевые продукты, нагитки. Из-за высокой сладости (в 150-300 раз) стевиозвд используют в продуктах питания в меньшем количестве, чем известные сахароспирты СОР и КСИ. Обнаружено, что дитерпеновый гликозид - стевиозид подавляет микробную кислотообразующую продукцию в полости рта в несколько раз превосходящая способность чем СОР и КСИ.. Это позволяет считать его перспективным профилактическим средством в плане снижения карисогенности пищи. К тому же стевиозид не ферментируется ацидогениой и уреазопозитивной микрофлорой полости рта. .'Этот факт подтверждается тем, что не выявлено значительное (Р>0,05) влияние используемых сахарозаменителсй на амплитуду тестовых кривых рН в смешанной слюне добровольцев, полученных при стимуляции в течение 30 сек. 15 мл 0,1М раствором карбамида. Возможно, незначительное уменьшение этих амплитуд может быть отдельным незначительным подавляющим действием сахарозаменителей на микрофлору, использующих в качестве субстрата мочевину. Нельзя оставить без внимания и подавляющее действие стевиозида на ацидогенную микрофлору полости рта, повышение буферных свойств слюны и слюноотделения. Стевиозид превосходит КСИ и СОР и по длительности сохранения во рту вкусовых ощущений.

Резюмируя на основе клинико-лабораторных исследований, установлено, что выделанный по нашей технологии дитерпеновый гликозид из листьев стевки, выращенной на Тверской земле, является высоко эффективным сахарозаменителем, превосходящим по действию в полости рта традиционно используемые сахароспирты: ксилитол и сорбитол.

Клинико-лабораторное изучение эффективности предложенного зубного эликсира

Зубной эликсир обладает хорошими дезодорирующим, освежающим, очищающим свойствами. Для достижения максимального эффекта не следует принимать пищу в течение 30-60 мин после полоскания.

Очищающие свойства эликсира изучали путем определения гигиенического индекса OHI-S, компонента ЗН индекса PHP. Для оценки исходного пародонтальвого статуса использовали индекс CPI (E.H. Иванова, A.M. Петрова, 2007).

рн

7,25 7, 00 6,75

6.50 6,25

6.00

Рис.7 Влияние ротовых ванночек (30 с 15 мл) с профилактическим эликсиром для полости рта или раствором сахарозы на рН смешанной слюны у добровольцев.

Очищающее действие. При первоначальном осмотре добровольцев, участников эксперимента, было выбрано 23 человека, разделенных на две группы «А» - 12 человек и В - 11 человек. «А» - была контрольная группа, а «В» - профилактическая.

Выявлено, что, сравнивая исходные значения индекса контрольной и профилактической групп, достоверных различий не обнаружено. Величина компонента ЗН составила 1,54±0,06 в группе «В» - профилактической и 1,66±0,05 в группе «А» -кошрольной. Уровень оценки гигиены полости рта у добровольцев - участников

33

исследования соответствовал удовлетворительному критерию по величине компонента ЗН. Осмотр, проведенный через 15 дней от начала исследования по этому критерию, продемонстрировал достоверное (р<0,001) уменьшение показателя ЗН в профилактической группе до 1,25±0,06, тогда как в контрольной группе за этот же период наметилась лишь тенденция к снижению (1,58±0,06).Эти значения соотвегствовали удовлетворительному критерию оценки уровня гигиены полости рта у людей - добровольцев - участников исследования.

Дальнейшие осмотры через 30 и 60 дней выявили дальнейшее снижение величины компонента ЗН в профилактической группе до значений равных 1,11±0,02 (р<0,001) и 1,01±0,03 (р<0,001). За этот период в контрольной группе через 30 дней наблюдалось уменьшение показателя ЗН лишь до 1,45±0,06 (р<0,001), а через два месяца, то есть к концу исследования отмечено незначительное его увеличение до 1,51±0,05 (р<0,01). Между тем, следует отметить, что при использовании эликсира у участников эксперимента в контрольной и профилактической группах оценочный критерий уровня гипиены полости рта оставался удовлетворительным. Эффективность от использования эликсира по компоненту ЗН индекса ОШ-Й за весь период эксперимента (60 дней) составил 34,4%, чгго в 3,8 раза больше, чем в контрольной группе.

Таблица 9

Динамика индекса гингивита при использовании эликсира

Исходное Через р (по срав- Через Р (по Через р (по срав

Группы ;остояние 15 нению 30 срав- 60 -нению с

(М±га) дней с Дней нениюс дней исход.)

(М±т) исходным) (М±т) исход (М±т)

ным)

Профилак 1,01 0,81 р< 0,02 0,55 р<0,00.1 0,24 р<0,001

тическая ±0,08 ±0,07 ±0,05 ±0,04

Контроль- 1,07 0,89 р< 0,05 р<0,001 0,78 р< ,001

ная ±0,05 ±0,07 ±0,06 ±0,07

Гигиенический индекс. Нами не выявлено при изучении изменений индекса PHP достоверных различий между исходными значениями применяемого индекса среди контрольной и профилактической групп. Эти показатели были в контрольной группе 2,75±0,12 и у лиц профилактической группы - до 2,35±0,08 (р<0,02). В обеих группах в

34

дальнейшем наблюдалась также тенденция через 30 дней значение индекса в контрольной группе 2,18±0,05 (р<0,00!) и в профилактической 2,05±0,06. В конце исследования в контрольной - 2,04±0,04 (р <0,001) и профилактической 1,89±0,05 (р<0,001).

Однако изменений уровня гигиены полости рта среди добровольцев не наблюдалось, эффективность от использования зубного эликсира в качестве дополнительного средства по индексу PHP составила около 34,2%, ио сравнению с контрольной группой (25,8%).

Противовоспалительное действие. Сравнительный анализ состояния тканей пародонта перед экспериментом не показал достоверных различий менеду фуппами. Индекс гингивита в контрольной группе составил 1,07±0,05 (р>0,05) и в профилактической ],01±0,08 (табл.4). Оценивая исходный пародонтальный статус использо-ванием индекса CPI у лиц контрольной группе, определялись в среднем 1,83±0,22 интактных сектантов пародонта, 1,27±0,19 - секстантов с кровоточивостью и секстанта с зубным камнем 3,05±0,42, В профилактической группе эта показатели составили соответственно 1,11±0,23, 1,47±0,24, 3,48±0.28. Через 15 дней в профилактической группе индекс гингивита уменьшился (с 1,01±0,08 до 0,81±0,07) на 24,7,5%, а в контрольной - на 20,2%.

1 15 30 60 дни

□ Профилактическая группа Ш Контрольная группа

Рис. 8 Динамика индекса гингивита при использовании зубного эликсира (М±щ).

В 2,3 раза уменьшилось среднее количество сектантов пародонта с зубным камнем у яиц в профилактической группе и контрольной - в 2,1 раза. Такому улучшению состояния тканей пародонта у лиц обеих исследуемых групп способствовало проведение профессиональной

гигиены полости рта в начале исследования, в результате в 2,3 раза возросло количество секстантов о кровоточивостью, а в профилактической группе на 12% увеличилось число интактных секстантов.

Через 30 дней от начала исследования оценка противовоспалительного действия зубного эликсира показало, что в профилактической группе отмечено достоверное (р <0,001) снижение индекса гингивита 0,81±0,007 до 0,55 ± 0,05 (на 47,2%), а также увеличение числа интактных секстантов пародолта в 2,7 раза за счет уменьшения количества секстантов кровоточивостью.

В то же время резко не изменялось число секстантов пародоита с зубным камнем (0,33%). Обнаружено достоверное снижение величины гигиенического

1 15 30 60 дни

[ BOHI-S nOHl-S(3W DPHP

Рис.9 Изменения показателей гигиенических индексов при применении зубного эликсира (М±т) в контрольной группе «А».

1 ИОШ-S DOHl-SQHl DPHP

Рис. 10 Изменения показателей гигиенических индексов при применении зубного эликсира (М±т) в профилактической группе «В».

индекса у лиц контрольной группы от 2,39±0,12 и у лиц профилактической группы - до 2,35±0,08 (р<0,02). В обеих группах в дальнейшем наблюдалась также тенденция через 30 дней значение индекса в контрольной ipynne 2,18±0,05 (р<0,001) и в профилактической 2,05±0,06. В конце исследования в контрольной - 2,04±0,04 (р<0,001) и профилактической 1,89±0,05 (р<0,001). Однако изменений уровня гигиены полости рта среди добровольцев не наблюдалось.

Оценка противовоспалительной эффективности зубного эликсира через 60 суток от начала эксперимента показала, что в профилактической группе наблюдалось дальнейшее улучшение состояния тканей народонта. На 72,1% индекс гингивита снизился, а количество интактных секстантов увеличилось (с 1,10±0,23 до 4,05±0,12) в 3,6 раза, на фоне снижения числа секстантов с кровоточивостью (3,48±0,28 до 0,48±0,12) в 7,3 раза. В контрольной группе показатель индекса гингивита снижался и к концу окончания эксперимента был равен 0,78±0,07 (р<0,001). Одновременно в 1,4 раза увеличилось коли-чество интактяых секстантов пародонта.

Таким образом, проведенные исследования показали эффективность от использования зубного эликсира в качестве дополнительного средства по индексу PHP составила около 34,2%, по сравнению с контрольной группой (25,8%) и по компоненту 3Н индекса OHI-S за весь период эксперимента (60 дней) составил 34,4%, что в 3,8 раза больше, чем в контрольной группе.

Также предложили жевательную резинку «Блеск и Сила» с дитерпеновыми гликозидами, выделенными по нашему nareirry из районированного в Тверской области растения Стевии. Состав жевательной резинки соответствовал по традиционной рецептуре КСИ и СОР. Кроме того включен сахарозамеиитель сгевиозид «Стевикс», состоящий из стевиозида и ребаудиозвда А различной концентрации: 1,25 и 2,50.г.

Целью исследования явилось клинико-лабораторное сравнительное контролируемое изучение двойным слепым методом влияния однократного применения ряда жевательных резинок и конфет, содержащих сахарозаменители, в том числе - стевиозид, на кислотно-щелочное равновесие в полости рта у добровольцев.

К участию в исследовании привлекли 126 студентов-добровольцев медицинской академии (68 мужчин и 58 женщин) в возрасте от 18 до 25 лет. Индекс КПУ у них не превышал 10, они не пользовались зубными протезами, не находились на ортодонтическом лечении, не имели сопутствующей соматической патологии. Все добровольцы привычно ухаживали за полостью рта.

Оценивали действие в полости рта 5 видов жевательных резинок разных производителей, среди которых преобладали производители Южной Кореи, и конфет дм жевания R.O.C.S. Кроме того, для исследования подготовили два вида жевательной резинки, в состав которых вошли основа для резинки (поливинилацетат) и стевиозид в двух разных концентрациях. В качестве контроля использовали основу для резинки без каких-либо добавок (placebo). Тестовые продукты доя жевания раскладывали в бумажные пакеты, которые произвольно нумеровались. Масса каждого продукта для жевания составляла 10 г. Таким образом, исследуемые и исследователи не знали, какой именно продукт используется. Результаты исследования обрабатывались на компьютере сторонним пользователем.

Все пациенты были поровну произвольно разделены на 2 группы: «А» и «В». У испытуемых группы «А» определяли рН сплюнутой смешанной слюны (начальное значение). Затем они в течете 10 минут жевали один из предназначенных для этого продуктов. Исследование в группе «В» отличалось только тем, что после определения начального значения рН смешанной слюны добровольцы проводили стимуляцию ротовой кислотопродуцирующей микрофлоры путем полоскания рта в течение 30 с 15 мл 47% раствора сахарозы. В результате получали начальную часть тестовой кривой рН Стефана в смешанной слюне. Спустя 10 мин. после полоскаиия рта сахарозой они так же, как и в группе «А», на протяжении 10 мин. жевали один из продуктов. По полученным кривым изменения рН смешанной слюны для группы «А» рассчитывали их амплитуды как разность между начальным и экстремальным (максимальным или минимальным) значениями рН.

Кроме того, для группы «В» рассчитывали угловой коэффициент восходящей части кривой (анакроты) по формуле:

К, = А/t х 10000, где: К, - угловой коэффициент анакроты; А - амплитуда кривой рН (ед. рП); t-длительность анакроты (мин); 10000 - условный коэффициент.

Измерение рН ротовой жидкости проводили с интервалом в 5 мил. с помощью рН-метра «Jenco» (США) и стандартных стеклянных электродов в микрокювете объемом 5-10 мкл. Каждое исследование длилось 30 мин. Все исследования проводили в утренние часы, спустя не менее 1 часа после последнего приема пищи, в спокойном состоянии испытуемых. Всего было проведено 160 исследований, по 20 с каждым продуктом. В группе исследуемых «А», где добровольцы не использовали стимуляцию раствором сахарозы, а только пережевывали резинку или конфету в течение 10 минут, оказалось, что все исследованные продукты, кроме резинки «Color», вызывали в разной степени выраженное смещение реакции смешанной слюны в щелочную сторону. Судя по средней величине амплитуд кривых рН, наибольшие такие изменения вызывало употребление

Таблица 10

Расчетные показатели кривых изменения рП смешанной слюны, спровоцированного разжевыванием жевательных резниок в конфет (М±т, ед. pH)

Название продуктов для жевания Доступная информация о содержании сахарозы и сахарозаменителсй Амплитуда (группа «А») Угловой коэффициент анакроты (группа «В»)

«Color» («Lotte», Южная Корея) сахароза, глюкоза, сорбитол -1,12± 0,153 715 ±42

«Dirol» мятная («Dirol Kadbery», Россия) сорбитол, аспартам + 0,10± 0,018 1010± 64

«Xylitol» сладкая мята («Lotte», Южная Корея) ксилитол 74%, сахароза + 0,47 ±0,022 1480 ±78

«Xylitol» «Lotte», Южная Корея) ксилитол 36% + сорбитол} 1 % + 0,45 ±0,021 465 ± 38

Жевательные конфеты «R.O.C.S.» со вкусом ананаса (WDS) КС1ШГГОЛ+ сорбитол+ стевиозид + 0,74 ± 0,035 770 ± 54

Основа со стевиозидом 1 стевиозид 1,25% + 0,62 ±0,036 790 ±55

Основа со стевиозидом 2 стевиозид 2,5% + 0,84 ± 0,047 910 ± 61

Основа (placebo) - + 0,12 ±0,013 560 ±43

резинок со стевиозидом, а также жевательных конфет «R.O.C.S.». Наименьшие -жевательные резинки, содержащие ксилитол и сорбитол, а также чистая основа для резинки (placebo). Жевательные резинки «Color» провоцировали изменение рН смешанной слюны в кислую сторону с выраженной отрицательной амплитудой кривой (р<0,001). Таким образом, сахаросодержащие резинки (как, например, «Color») нельзя признать полезными, так как они провоцируют изменение кислотно-щелочного баланса в полости рта в кислую сторону, что при наличии других предрасполагающих факторов может быть рискованным в отношении развития кариеса зубов.

В группе «В» (табл.10), где пережевыванию исследуемых продуктов предшествовала стимуляция ацидогенпой микрофлоры полости рта тестовым раствором сахарозы, нас в большей степени интересовала скорость ликвидации микробного ацидоза в смешанной слюне. Ее наиболее точно отражает угловой коэффициент анакроты кривой рН. Судя по его величине, после сахарозной нагрузки реакция смешанной слюны наиболее быстро возвращается к начальным значениям под влиянием жевательных резинок «Xylitol» и «Dirol», что мы связываем с наличием в их составе мятной отдушки. В то же время резинки со стевиозидом и жевательные конфеты «R.O.C.S.», несмотря на то, что они не содержали такой отдушки, также достаточно быстро ликвидировали ацидоз в1 смешанной слюне добровольцев. Не исключено, что это действие также обусловлено присутствием стсвиозида в рецептуре конфет «R.O.C.S.». Наиболее медленно восстанавливалось значение рН под влиянием резинки «Xylitol» с 36% ксилитола и 11% сорбитола, а также placebo. Исследования в обеих группах показали, что сахарозаменитель стевиозид, содержащийся в жевательных резинках в небольшом количестве (1,25 - 2,5%), способствует выраженному смещению рН смешанной слюны и его быстрому восстановлению после сахарозной стимуляции микробной кислотопродукции. Эти показатели статистически достоверно превосходят аналогичные, полученные с другими жевательными резинками и placebo. По нашему мнению, именно выраженный сладкий вкус стсвиозида способствует количественному и качественному изменению состава секретируемой слюны во время жевания. Таким образом, сахарозаменитель стевиозид может являться полезной альтернативой ксилитолу, сорбитолу и другим известным сахарозаменигелям, наиболее популярным в настоящее время в составе жевательных резинок.

Исследование показало, что жевательные резинки и конфеты с сахарозаменителями па протяжении 10 минут жевания способствуют смещению реакции смешанной слюны в щелочную сторону и ликвидации микробного ацидоза, вызванного употреблением ферментируемых углеводов. Жевательные резинки с сахарозой потенциально опасны для

зубов. В то же время использование стевиозида в составе жевательной резинки позволяет при сохранении се положительных действий в полости рта существенно уменьшить (в 30 -40 раз) концентращпо сахарозаменителя и, следовательно, его побочное действие на организм.

Основные выводы

1. У крыс, получавших обычный корм вивария, обнаружены в печени и в слизистой оболочке десны сезонные изменения таких биохимических параметров, как активность Г-6-ФДГ, ЛДГ, МДГ и СуДГ, содержание лактата. Особенности сезонных колебаний отмеченных при питании рационом с 54% сорбитша или 54% сахарозы либо смесью из 27% сорбитола с 27% сахарозы, что отражает влияние сахароспиртов на метаболизм углеводов и ферментов цикла Кребса.

2. Впервые показано, что диета с 54% сорбитола, даваемая с месячного возраста в течение 1 месяца, повышает активность СДГ в десятки раз в сыворотке крови и в несколько раз в печени. В основе такого неожиданного роста активности СДГ лежит феномен индукции активности фермента субстратом. При диете с 27% сорбитола и 27% сахарозы рост активности СДГ был значительно слабее.

3. Кормление крыс кариесогенной диетой с 54% сахарозы увеличивало содержание лактата в слизистой оболочке десны и в печени.

4. Диета с 54% сорбитола либо 54% ксилитола, даваемая с месячного возраста в течение одного месяца вызывала диарею, снижала массу тела и печени крыс, несколько уменьшала осгеоиндуктивные потенции альвеолярного отростка нижней челюсти. Диета с 27% сорбитола + 27% сахарозы меньше снижала массу тела. Диета с 10% сорбитола не оказывала существенного влияния на изучаемые параметры, резко повышала активность сорбитоддегидрогеназы в сыворотке крови и печени.

5. Отмена месячного 54% сорбитолыюго рациона и последующее трехмесячное кормление обычной виварийной пищей не приводило к полной нормализации массы тела и активности сорбитоддегидрогеназы сыворотки крови. Масса тела оставалась более низкой, а активность сорбитоддегидрогеназы более высокой, чем в контрольной группе крыс, питавшихся обычной пищей вивария.

6. Длительное кормление пищей с высоким содержанием сорбитола или ксилитола не следует рекомендовать для предупреждения кариеса зубов из-за вызываемых этими пищевыми рационами неблагоприятных изменений как в организме вообще, так и в тканях и жидкостях полости рта. Более благоприятной оценки в этом плане заслуживает диета с 10% ксилитола или 10% сорбитола, хотя некоторое ослабление остсо индуктивных потенций кости альвеолярного отростка челюсти выявлено при 10% ксилитолыгай диете,

что может иметь значение в направлении усиления атрофии кости альвеолярного отростка при пародонтите.

7. Разработаны новые отечественные технологии получения дитерпеновых гликозидов - перспективных сахарозаменителей и ростстимулятора - казаминовых кислот, имеющих также большие перспективы по их использованию. Обе технологии защищены патентами и награждены золотой и бронзовой медалью в Москве на первом международном салоне инноваций и инвестиций.

8. Разработана новая отечественная технология получения зубного эликсира, превосходящая ныне существующие по поддержанию баланса КОР в полости рта, обладающая положительными бактерицидными свойствами. Технология защищена патентом.

9. Установлена зависимость биохимических свойств слюны у людей - добровольцев в эксперименте под влиянием полосканий рта сахароспиртами различной концентрации и нового отечественного сахарозам спите ля - стевиозида в предложенной жевательной резинки «Блеск и сила».

ПРАКПГЧГЕСКПЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для выделения современного сахарозамеиителя - дитерпенового гликозвда стевиозида из листьев растения Стевии разработана и может использоваться новая технология, включающая в себя этапы: подгоговку сырья, экстракцию, хроматографическую очистку, концентрирование, сушку, измельчение и просеивание, расфасовку и упаковку.

2. Сахарозаменители, широко используемые в пищевой и фармацевтической промышленности, имеют существенные недостатки: ксилитол снижает остеоиндуктивные потенции костной ткани пародонта, чем может способствовать развитию пародоптита, а сорбитол - инициирует диарею и образование мочевых конкрементов. Эти побочные действия проявляются при регулярном употреблении в пищу продуктов с содержанием указанных сахарозаменителей, превышающим 10%.

3. Из известных сахарозаменителей наиболее оптимальными для использования в ншпевой и фармацевтической промышленности являются стевиозид и ребаудиозид А -дитерпеповые гликозиды растительного происхождения, которые в 150 - 300 раз слаще сахарозы и лишены целого ряда недостатков, присущих другим сахарозамешггелям.

4. Применение современных, не ферментируемых в полости рта сахарозаменителей стевиозида и ребаудиозида А в виде ротовых ванночек их растворами способствует быстрому восстановлению в полости рта кислотно-основного равновесия, нарушенного

метаболической активностью ацидогснной микрофлоры, что позволяет рекомендовать их для профилактики кариеса зубов.

5. Разработанный новый профилактический эликсир и жевательная резиика для полости рта, содержаний в своем составе сахарозамсшггсль стевиозид, может способствовать нормализации кислотно-основного равновесия в полости рта и профилактике кариеса зубов и заболеваний пародонта.

6. Выявленные сезонные колебания активности ряда ферментов в печени, крови и слизистой оболочке десны у лабораторных крыс в эксперименте указывают на необходимость учета времени года при планировании и реализации кариеспрофилактических программ и мероприятий у людей.

7. Для стимуляции роста растений, в том числе Стевии, выращиваемых в условиях Центрального Нечерноземья, разработала новая технология получения отечественного стимулятора роста «казаминовые кислоты». Этот стимулятор способствует ускорешюму росту корней, повышению доли сухих веществ в растешш, существенно увеличивают его массу.

Список работ, опубликованных по теме диссертации на русском языке

1. Петрович Ю.А., Зубцов В.А. Дегидрогеназы и их изоферменты в слюне при изменении диеты в разном возрасте / В кн.: Окислительные ферменты животной клетки и регуляция их активности. Тезисы Всесоюзного симпозиума. - Горький. - 1978. - С. 142 -143.

2. Зубцов В.А. Влияние сахарозной кариесогснной днеты на нмфермепты ЛДГ и МДГ

слюны крыс II Стоматология. -1978. -Т. 57.- № 5. - С. 13 -16.

3. Зубцов В.А., Петрович Ю.А., Подорожная Р.П. Влияние сахарозной диеты па активность ферментов и содержание метаболитов углеводного обмена в слюне крыс разного возраста // Вопросы питания. -1979. - № 2. - С. 47 - 49.

4. Зубцов В.А., Трусова Н.Ф., Бобылева В.Р. с соавт. Влияние сахарозной и других диет на обмен углеводов и липидов // Тезисы научных сообщений ГУ Всесоюзного биохимического съезда. М.: Наука, 1979. - Т. 2. - С. 261 - 262.

5. Зубцов В.А., Петрович Ю.А., Подорожная Р.П. Влияние сахарозной диеты на углеводный обмен и некоторые патологические процессы в полости рта / Материалы

Всесоюзной конференции, посвященной 50-летаю Института Питания АМН СССР «Теоретические и практические аспекты питания человека». - М., 1980. - Т. 1-е. 67.

6. Петрович Ю.А., Зубцов В.А., Вавилова Т.П. с соавт. Влияние сахарозы и сахарозаменителей на здоровье и углеводный обмен / Материалы научной конференции с международным участием «Питание: здоровье и болезнь». - М., 1990. - с. 159.

7. Петрович Ю.А., Зубцов ВА., Трусова Н.Ф. е соавт. Сахарозаменители и профилактика кариеса (факты, перспективы, недостатки) // Стоматология, 1991. Т. 70, №3.-С. 76-80.

8. Зубцов В.А., Плетнева С.Г., Осипова Л.Л. с соавт. Возможность применения компонентов Стевии в качестве контрацептивов / Шестое совещание по химическим реактивам. - Уфа-Баку, 1993. - С.90.

9. Зубцов В.А., Осипова Л.Л., Плетнева С.Г. с соавт. Влияние метаболической активности

на мутагенность стевиола и его производных - сладких гликозидов Стевии / Там же. — Уфа-Баку, 1993. - С. 90.

10. Зубцов В.А., Осипова Л.Л., Плетнева С.Г. Метод выделения смеси дитерпеновых гликозидов из растения Яеу/а геЬаиЖапа / Там же. - Уфа-Баку, 1993. - С. 89.

11. Зубцов В.А, Осипова Л.Л., Плетнева С.Г. Стевиозид - дитерпеновый гликозид из растения Стевия, его структура и биологическая роль / Там же. - Уфа-Баку, 1993. - С. 88.

12. Зубцов В.А., Милородова Е.И., Осипова Л.Л. Технология получеши препарата Стевикса - смеси дитерпеновых гликозидов из листьев геЪашкапа I 7 Международное совещание по химическим реактивам. - Уфа, 1994. - с. 26.

13. Зубцов В.А., Зенюк В.И., Иванова М.Н. Способы выращивания в условиях Нечерноземья сырья дтя производства натуральных подсластителей // Тезисы Второго Международного симпозиума «Питание и здоровье: биологически активные добавки к пище». - Москва, 1996. - С. 55- 56.

14. Зубцов В.А., Осипова Л.Л., Панкова В.П. с соавт. Технология получения биологически активного препарата - казаминовые кислоты / Восьмая международная конференция по химическим реактивам «Реакшв-95». - Уфа «Реактив», 1995. - с. 121.

15. Зубцов В.А. Влияние высокоуглеводной (кариесогенной) диеты на ферменты углеводного обмена и цикл Кребса крови и тканей животных в хронологическом аспекте / Восьмая международная конференция по химическим реактивам «Реактив- 95». - Уфа «Реактив», 1995. - с. 124.

16. Зубцов В.А., Кураков Г.А. К вопросу о синтезе подслащивающих веществ // Тезисы VIII Международной конференции по химичссским реактивам « Реактив-95».- Уфа, 1995.-е. 119.

17. Зубцов В.А., Милородова Е.И., Рясснский С.С. с соавт. Новый высокотехнологичный способ получения препарата стсвиозид / Восьмая международная конференция по химическим реактивам Реактив-95. - Уфа - Реактив, 1995.-е. 122.

18. Зубцов В.А., Зстох В.И., Иванова М.Н. Способ выращивания в условиях Нечерноземья сырья для производства натуральных подсластителей / Тезисы второго международного симпозиума «Питание и здоровье: биологически активные добавки к пище». - М.,1996. -С. 55 - 56.

19. Зубцов В.А., Милородова Е.И., Юрова Е.Ю. с соавт. Дитерпеновые гликозиды -перспективная биологически активная добавка к пище, используемая для коррекции питания // Тезисы Второго Международного симпозиума «Питание и здоровье: биологически активные добавки к тише». - Москва, 1996. - с. 56.

20. Зубцов В.А., Румянцев В.А., Петрович Ю.А. с соавт. Новый сахарозамешггель стевиозид. Изучение действия в полости рта И Вестник стоматологии. - 1998. - № 4 (61).-С. 22-23.

21. Зубцов В.А. Стевия. Тверь, 1998. - 100с.

22. Петрович Ю.А., Зубцов В.А. Молекулярные механизмы профилактики кариеса // Тезисы Международной конференции «Современные аспекты профилактики и лечения стоматологических заболеваний». - М., 2000, - с. 173.

23. Петрович Ю.А., Зубцов В.А., Трусова Н.Ф. Сахарозамснители. Биохимический механизм действия. Примечешь в стоматологии / Учебное пособие для студентов медицинских ВУЗов «Основы стоматологической биохимии». Изд 2. - М., 2000. - С. 125 - 137.

24. Зубцов В.А. Влияние сахарозы и натуральных сахарозаменителей стевиозида и сорбитола на изоферментный спектр лактатдегирогеназы слюны / Материалы Российского научного Форума с междунадным участием «Стоматология нового тысячелетия». -М, 2002. - С. 148-149.

25. Зубцов В.А., Осипова Л.Л., Лебедева Т.И. с соавт. Стевия - лекарственное и пищевое растение / Материалы 1-ой Международной научно-практической конференции «Растительные ресурсы для здоровья человека (возделывание, переработка, маркетинг)», Москва - Сергиев-Посад, 2002. - С. 356 - 358.

26. Зубцов В.А. Земледельческая механика выращивания южпоамериканского растения Стевия в северных районах РФ на примере Тверской области и его применение в

качестве источника сахарозаменителей // Материалы 2-ой Международной научно -практической конференции «Земледельческая механика в растениеводстве» - М.: ВИМ. -2003.-С. 121-126.

27. Зубцов В.А., Трусова Н.Ф., Сумароков Д.Д. с соавт. Оценка мехапизма биохимического действия пищевых сахарозаменителей / Материалы VII Всероссийского конгресса «Здоровье, питание населения России». - М., 2003. - С. 197 -198.

28. Зубцов В.А. Перспективы использования сахарозаменителей и продуктов из инулинсодержащих растений / В.А Зубцов // Топинамбур и другие инулинсодержащих растений. Проблемы возделывания и использования. Материал VI-ой международной научно-практической конференции, Москва, 2006. - С. 108 -111.

29. Зубцов В. А. Концепция по использованию сахарозаменителей для профилактики кариеса зубов и заболеваний слизистой оболочки полости pía / Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практич. конф. «Инновационные технологии как основа развития аграрного образования и АПК региона». - Тверь, «Агросфера», 2010. -С. 212-215.

30. Зубцов В. А. Влияние казаминовых кислот - нового ростстимулятора на рост и развитие Stevia rebaudiana Bertoni 1В матер, науч. - практ. конференции (ВНИИ льна - 80 лет) «Научные достижения - льноводству», Тверь, 2010. - С. 414-418.

31. Зубцов В А. Влияние сахарозы и сахарозаменителей на осгеоиндуктивную активность минерализованных тканей./ В матер, науч. - практ. конференции (ВНИИ льна - 80 лет) «Научные достижения - льноводству», Тверь, 2010.-С.418 - 427.

32. Петрович Ю.А, Подорожная Р.П., Вавилова Т.П., с соавт. Влияние пищевого рациона, возраста, пародонтоза, перелома костей на активность ферментов и распределение селена между биологическими жидкостями и минерализованными тканями / Материалы VII Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России».-М. -2003.-С. 401-402.

33. Зубцов В.А., Осипова Л.Л. Казаминовые кислоты. Новый отечественный ростстимулятор, его получение и применение / Методические рекомендации. - М., Тверь,- 2004. -13 с.

34. Зубцов В.А Антипова Н.В. Осипова Л.Л. Влияние сахарозаменителей на патофизиологические и биохимические механизмы / Топинамбур и другие инулинсодержащих растений. Проблемы возделывания и использования. Материалы 6-ой международной научно-практической конференции. Тверь, 2006. - С. 115 - 119.

35. Зубцов, В.Л. Влияние сахарозаменителей на активность ферментов углеводного обмена и АТФ/ Матер. Международной науч.- практ. конф. 6-8 июня 2006 года «Научное обеспечение национального проекта «Развитие АПК». - Тверь. - 2006. - С.229 -233.

36. Зубцов В.А., Киченко С.М., Петрович Ю.А. Новые сведения о механизме действия, пользе и вреде сахарозаменителей П Рос. етомат. жури. - 2006. - № 3. - С. 35 - 37.

37. Петрович ЮЛ., Воложин А.И., Зубцов В.А., Киченко СМ. Биоритмы активности дегидрогепаз печени, крови и изменение массы тела крыс при обычном корме и при избытке сахарозаменителей // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. - 2007. - Т. 144. - № 12. - С 686 - 689.

38. Петрович Ю.А., Воложин А.И., Зубцов В.АП Трусова Н.Ф., Киченко СМ. К механизму повышения активности сорбитолдегидрогеназы в сыворотке крови и печени крыс при избытке сахарозаменителя сорбитола в пнще II Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 2007. - №1. - С. 4 - 6.

39. Петрович, Ю.Л. Воложин , А.И. Зубцов В.А. с соавт. Влияние повышенного количества сорбитола и сахарозы в пище на активность ферментов и массу печени крыс в разные сезоны года // Патол. фнзнол. и эксперим. терапия. - 2007. -№2.-0.14-16.

40. Петрович, Ю.А. Воложин, А.И., Зубцов, В.А. Трусова И.Ф. Влияние сахарозы и сахарозаменителей сорбитола и ксилитола на активность сорбитолдегидрогеназы в сыворотке крови и в печени крысIIXII международная конференция челюстно- лицевых хирургов и стоматологов в стоматологии. Россия,Санкт-Петербург, 2007. - с. 163.

41. Зубцов, В.А. Петрович, Ю.А., Воложин А.И. Влияние сахарозы и сахарозаменителя сорбитола на активность дегидрогепаз печени в сыворотке крыс в хронобиологическом аспекте / Конференция эколого-физиологических проблем адаптации. Материалы. XII Международного симпозиума, 2007. - С. 121 - 123.

42. Зубцов, В.А. Петрович, Ю.А., Румянцев В.А. Механизм действия, польза и вред сахарозаменителей и подсластителей / Сб. науч. трудов по материалам межд. научно -практической конференции. Часть 1. Тверь. - «Агросфера», 2009. - С. 117 - 123.

43. Зубцов В.А. Концепция по использованию сахарозаменителей для профилактики кариеса зубов и заболеваний слизистой оболочки полости //Научно- практическая конференция «Инновационные технологии как основа развития аграрного образования и АПК региона». - Тверь, 1-3 июня 2010. - Тверь, 2010. - С. 268 - 271.

44. Зубцов В.А., Румянцев В.А., Есаян Л.К., Нечаева Н.Р. Противокариозное действие минерального нанокластерного комплекса с сахарозаменителем «стевиозид»

(экспериментальное исследование) / XV международная конференция челюстно-лицевых хирургов и стоматологов. Санкт-Петербург, 2010. - С. 82 - 83.

Список работ по теме диссертации, опубликованных за рубежом на английском языке

1. Petrovch Yu.A., Vavilova Т.Р., Marokko I.N. et al., Diagnostic value of proteinases, glycosidases and dehydrogenases of saliva / International Congress of Clinical Enzymology . Cambridge, U.K. 1996. - P.33.(S8/P10).

2. Zubcov V.A., Sumarokov D.D., Tnisova N.F. et al. Action of natural sugar substitutes on osteoinduction activity of sorbitoldehydrogenase, level of insulin and production of ammonia inhuman and animal saliva // 17th International and 13thEuropean Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. Firenze, Italy // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. - 1999.-Vol.37. Special Supplement-S. 512.

3. Petrovich Yu.A., Zubzov V.A., Podorozhnaya R.P. et al. Effect of Cariogenic Diet on Components of Rats Saliva //16lh International Conference on Oral Biology./Saliva in Health and disease. - Westfields Marriott Chantilly, Virginia USA-2000.-P. 24.

4. Zubcov V. A., Petrovich Yu. A., Trusova N.F., et al. Molecular mechanism of sugar substitutes and carbamide in preventive dentistry/ IADR 79th general Session exhibition, 2001. - Chiba, Japan //J. of dent. Res. 2001. Vol.80. Special Issue (IADR Abstracts). - P.587.

5. Petrovich Yu.,Volozhin A.I. Zubcov V.F. et al. Biorhythms of Activities of Liver and Blood Dehydrogenases and Changes in Body Weight of the Rats Feeding Normal Diet or Excess of Sugar Substitutes // Experimental Biology.2007- Vol. 144. - No.6. - P.835 - 839.

Авторское свидетельство и патенты по теме диссертации:

1. А.С. 314534 СССР. Прибор для плоского вертикального электрофореза в гелях I Зубцов В.А, Петухов М.И. (СССР). Заявлено 26.5.69; Опубл. 21.9.71. Бюл. № 28.

2. Патент 2111969. Способ получения стевиозвда / Зубцов В.А., Милородова Е.И., Юрова

Е.Ю., Рясенский С.С. Заявл. 08.11.95; Опубл. 27.05.98. Бюл. № 15.

3. Патент 2264412. Способ получения казаминовых кислот. / Зубцов В А - Опубл. 20.11.05. Бюл. № 32.

4. Патент 2265499. Зубной эликсир / Зубцов В.А. Заявл. 11.10.04.; Опубл. 10.11.05. Бюлл. №31.

Изготовитель: ООО «Документ центр» г. Тверь, б-р Радищева 29, тел (4822) 32-26-20

Бумага офсетная, тираж 100 экз. Отпечатано методом оперативной полиграфии