Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Получение и оценка иммунологической активности антитоксической антисинегнойной плазмы

На правах рукописи

БОДРОВА Галина Николаевна

ПОЛУЧЕНИЕ И ОЦЕНКА ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИТОКСИЧЕСКОЙ АНТИСИНЕГНОЙНОЙ ПЛАЗМЫ.

14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Москва - 1997

Работа выполнена в Московском городском НИИ скорой помощ! им.Н.В.Склифосовского.

Научный руководители ■ доктор медицинских наук, профессор В.Б.Хватов доктор медицинских наук Н.А.Михайлова

Официальные оппоненты ■ Доктор медицинских наук, профессо{ Л.И.Краснопрошиш Доктор химических наук, профессо{

В.П.Паноз

Ведущее учреждение - Государственный Институт Стандартизации и Контроля им. Л.А.Тарасевича,

Защита состоится "_" _ 1997 г. в_часов на заседанш

диссертационного совета К 084.18.02 в Московском НИИ эпидемиологии I микробиологии им. Г.Н.Габричевского по адресу:

125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д.10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МНИЙЭМ им.Г.Н.Габричевского

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук Новикова Л.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ------------

Актуальность проблемы.

Одной из актуальных проблем современной медицины является лечение гнойно-воспалительных заболеваний, так как количество гнойных осложнений после операций и травм существенно возрастает (Л.М.Свирская, 1986; К.И.Мышкин, 1991; М.Л.Лившиц, 1992; В.А.Девятов, 1994; Y.Zou,1994). При этом грамотрицателыше микроорганизмы в основном определяют увеличение количества гнойно-септических осложнений, особенно в стационарах скорой медицинской помощи (S.И.Стручков, 1987, 3.С.Савельев, 1990). Показано значительное повышение роли синегнойной палочки в этиологии госпитальных инфекций ожоговых, хирургических и травматологических стационаров (И.И.Колкер, Е.С.Станиславский, 1982, А.Ф.Мороз, Л.И.Герасимова, 1988; В.Д.Беляков, 1990, Г.В.Залогуева, 1995; J.Kieger, L.Xander et al., 1990). Летальность от осложнений, вызываемых синегнойной палочкой, варьирует от 7 до 15 I, а при сине-гнойном сепсисе достигает 914 (В.В.Вельский, 1989; Danielsen, 1996).

Трудности борьбы с синегнойной инфекцией связаны с наличием у возбудителя многочисленных факторов патогенности; с его природной и приобретенной резистентностью к воздействию различных антибактериальных препаратов, с увеличением количества больных с вторичными иммуно-дефицитами, развивающимися в условиях ухудшения экологической ситуации, в результате хирургических вмешательств, травм, онкологических процессов, а также нерационального использования антибиотиков.

Поэтому для профилактики и лечения заболеваний синегнойной этиологии используются биологически активные средства для создания специфического иммунитета. (Б.Б.Пинегин, 1981, Е.С.Станиславский, А.Ф.Мороз, 1985). Среди гомологичных препаратов для пассивной иммунотерапии наиболее перспективным является иммунная плазма, полученная путем иммунизации доноров вакцинами и методом скрининг-теста, а также выделенный из нее специфический иммуноглобулин. (С.В.Скуркович, М.А.Да-ватдарова, М.А.Крохина; 1980; Л.В.Чекан, М.Н.Янишевская, 1983; А.Н.Мороз, Т.И.Титова, 1985; Е.С.Станиславский, И.А.Гришина, 1986, Г.А.Пафомов и сотр., 1985-88, М.М.Абакумов, А.А.Погодина, 1991, Б.Б.Хватов и сотр., 1993-97).

Применение иммунной антисинегнойной плазмы при токсической форме синегнойной инфекции менее эффективно из-за отсутствия в препарате антител к экзотоксину А, так как для ее получения используются синег-нойные вакцины, не содержащие ряд факторов патогенности этого микроорганизма. В этой связи перспективно создание иммунобиологического средства, содержащего протективные антигены трех основных факторов патогенности синегнойной палочки - экзотоксин А, экстрацеллюлярнкй липополисахарид и щелочная протеаза. Такой препарат - анатоксин си-

негнойной палочки адсорбированный жидкий - был получен в 1990 г. в лаборатории анатоксинов Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова под руководством д.м.н. Михайловой H.A. Проведены испытания препарата на донорах-добровольцах, показана его безвредность и высокая иммуногенность, он рекомендован для профилактики и лечения синегнойной инфекции (Приказ МЗ РФ № 353 от 29.12.92). Обоснованы возможности получения антитоксической антисинегнойной плазмы (Н.А.Михайлова и сотр., 1992).

Цель работы!

Разработать условия получения и оценить иммунологическую активность антитоксической антисинегнойной плазмы (ААП).

Задачи исследования;

1. Экспериментально обосновать значимость использования ААП для профилактики и лечения синегнойной инфекции.

2. Оценить иммунобиологическую активность анатоксина синегнойной палочки при иммунизации доноров-добровольцев и выбрать оптимальные схемы иммунизации.

3. Разработать способ получения ААП у доноров-добровольцев и представить методы ее контроля.

4. Представить и утвердить в МЗ РФ медико-технические условия на производство ААП человека.

5. Оценить состояние компонентов системы иммунитета у доноров, иммунизированных анатоксином синегнойной палочки.

6. Оценить иммунотерапевтическую и профилактическую активность ААП у хирургических больных.

Научная новизна работы.

Экспериментально обоснованы и показаны доза-эффект протективного и лечебного действия ААП на модели синегнойного сепсиса у животных.

Разработана оптимальная двукратная схема иммунизации анатоксином синегнойной палочки, обеспечивающая повышенный титр специфических антител в сыворотке крови привитых в течение 1,5-2,0 лет.

Выявлены изменения в иммунной системе привитых в процессе иммунизации, включающие активацию B-лимфоцитов, усиление поглотительной активности нейтрофилов, увеличение иммуноглобулинов за счет повышения концентрации субпопуляций lgG2.

Разработана и внедрена медицинская технология производства и контроля в условиях отделения переливания крови нового иммунобиологического специфического средства - антитоксической антисинегнойной плазмы, обладающей высокой иммунотерапевтической активностью.

Разработаны показания, дозировки, иммунологический контроль, по-----

следовательность применения ААП при лечении пострадавших с множественной, сочетанной и термической травмой, осложненной гнойно-воспалительным процессом синегнойной этиологии, обеспечивающие высокую лечебную эффективность.

Разработан эффективный способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений синегнойной этиологии у пострадавших с открытыми множественными переломами конечностей, обширными ранами.

Практическая значимость работы.

Разработаны и внедрены:

«Нормативная медико-техническая документация на производство в условиях отделения переливания крови новой иммунобиологически активной трансфузионной среды - антитоксической антисинегнойной плазмы»; «Инструкция по применению анатоксина синегнойной палочки, адсорбированного жидкого (anatoxin™ Pseudomonas aeruginosa adsorbtum liqi-dum)», утверждена МЗ РФ, M., 1992; «Инструкция по применению плазмы антисинегнойной антитоксической человека (Plasma antipseudomonas antitoxicum human)», утверждена МЗ РФ, М., 1992, 2 стр.; «Временная фармакопейная статья ВФС 42-362 ВС-92, Фармакопейная статья ФС 423366-97 "Плазма антитоксическая антисинегнойная человека" (Plasma antipseudomonas antitoxicum human)», МЗ РФ, М,, 1992, 1997; «Методические рекомендации № 20/03-Д-375 "Получение и применение иммунной плазмы для терапии гнойно-септических осложнений, вызванных Ps.aeru-ginosae."» МЗ РФ, М., 1992.

Разработаны, апробированы и внедрены в практику инфузионно-трансфузионной терапии показания применения ААП, обеспечивающие высокую эффективность при гнойно-воспалительных осложнениях синегнойной этиологии, - наличие возбудителя синегнойной палочки в биологических средах больного, интоксикация, гипертермия, отсутствие эффективности антибактериальной терапии, иммунодепрессия клеточного и гуморального звена иммунитета. Определены средние курсовые дозы ААП: 9 мл на 1 кг массы пострадавшим с травмой опорно-двигательного аппарата; 13 мл - с сочетанной травмой; 15 мл - с термической травмой.

Разработан способ профилактики гнойно-септических осложнений синегнойной этиологии у пострадавших с открытыми множественными переломами конечностей, обширными ранами, включающий двукратное внутривенное введение в среднем 250 мл ААП в первые 2-е суток после травмы.

Работа выполнена в рамках Союзной программы С-23 "Разработать и внедрить в практику здравоохранения эффективные меры борьбы и профилактики внутрибольничных инфекций и сепсиса" (1989).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анатоксин синегнойной палочки адсорбированный жидкий является высокоиммуногенным, безопасным, ареактогенным препаратом, эффективным для получения ААП.

2. Оптимальная двукратная схема иммунизации анатоксином синегнойной палочки, методы контроля за состоянием здоровья доноров и медико-технические условия проведения аппаратного плазмафереза в отделениях переливания крови обеспечивают безвредность процедуры и гарантируют получение стандартного иммунологически активного средства.

3. В процессе иммунизации анатоксином синегнойной палочки у доноров происходит активация компонентов системы иммунитета, включающая увеличение количества В-розеткообразующих лимфоцитов, титра специфических антител на фоне перераспределения иммуноглобулинов сыворотки крови за счет повышения концентрации субкласса 1дБ2, усиление поглотительной активности нейтрофилов.

4. Антитоксическая антисинегнойная плазма в курсовой дозе 9-15 мл на кг массы больного с титром специфических антител 1:128 и выше проявляет лечебное действие в комплексной терапии пострадавших с множественной, сочетанной и термической травмой, осложненной гнойно-воспалительным процессом синегнойной этиологии.

5. Двукратное внутривенное введение в первые 2-е суток после травмы антитоксической антисинегнойной плазмы в дозе 125-375 мл пострадавшим с открытыми множественными переломами конечностей и обширными ранами обеспечивает профилактику развития гнойно-воспалительных осложнений синегнойной этиологии.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на Международном симпозиуме, посвященном 150-летию со дня рождения И.И.Мечникова и 90-летию Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова НПО "Иммунопрепарат", 1995; на I Белорусском международном конгрессе хирургов, 1996; на Международном конгрессе по химиотерапии, Греция, 1996; на конференции "Госпитальная инфекция в реанимации и интенсивной терапии", Уфа, 1996; на VII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов, Москва, 1997; на научно-практической конференции "Новое в травматологии и ортопедии", Ижевск, 1997; на Московском городском обществе гематологов и трансфузиологов, 1997; на Межрегиональном совещании работников службы крови, посвященном производству новых транс-фузионных и биологически активных сред, Москва, 1996, 1997.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 28 печатных работ в отечественной и зарубежной печати.

Объем и структура писсертадии__________

Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы", 5 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа содержит 22 таблицы, 6 рисунков. Библиографический указатель включает 163 источника отечественных и 104 зарубежных авторов.

Соавторы работы;

К.м.н. Булава Г.В., д.м.н. Бялик И.Ф., профессор Герасимова Л.И., к.м.н. Здановская Л.К., к.м.н. Клюквин И.Ю., к.м.н. Кунягнка О.В., д.м.н. Меньшиков Д.Д., д.м.н. Михайлова H.A., профессор Мороз А.Ф., профессор Охотский В.П., к.м.н. Потемкина Н.Г., д.м.н. Смирнов С. В., профессор Хватов В. Б., академик Шабалин В.Н.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1.1. Объектом исследования служила плазма крови: экспериментальных животных - 125; доноров-добровольцев - 650, больных - 2775. Всего обследовано 34S0 образцов крови. Проведено более 5000 исследований.

1.2. Анатоксин синегнойной палочки адсорбированный, жидкий, (ВФС-42-2843-97 ЭПР 404-92), сконструированный коллективом авторов Уфимского НИИВС им.И.М.Мечникова НПО "Иммунопрепарат". Продуценты экзотоксина А; международный штамм РА-ЮЗ из коллекции ГНИИСК имени Л.А.Тарасевича и штамм РА-7, полученный в НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи.

1.3. Получение специфической кроличьей антитоксической анти-синегнойной сыворотки (КААСС). Для исследования иммуногенной активности анатоксина и выбора оптимальной схемы иммунизации проведено изучение иммунного ответа у кроликов породы "Шиншилла". Вакцинацию производили путем трехкратного подкожного введения анатоксина в дозе 30 мкг с интервалом 14 дней. От 20 кроликов массой 2,5±0,5 кг получена иммунная сыворотка с титром антител i:128-512.

1.4. Оценку лечебной эффективности КААСС проводили на модели си-негнойного сепсиса у кроликов. Животных заражали однократным внутривенным введением 6-7 доз LD50 суточной культуры синегнойной палочки (РА-7). Микробный штамм относится к 011 серотипу схемы Habs. Контрольную группу составили 10 кроликов, которых подвергали заражению и обследованию; опытную - 10 животных, которых подвергали заражению, обследованию и лечению КААСС с титром антител 1:256, которую вводили ежедневно, внутривенно, однократно в течение 5 суток в дозе 3-4 мл на 1 кг веса.

1.5. Определение протективных свойств ААП человека. Для исследования протективных свойств ААП человека, полученной от иммунизирован-

ных доноров, использовали тест пассивной защиты белых мышей. Подопытным животным массой 14-16 г за 2 часа до внутрибрюшинного заражения суточной культурой синегнойной палочки (0,2 мл легальными дозами 1530 Ь0/50) вводили 0,2 мл ААП человека. Контролем служили 2 группы мышей: 1 - получавшие свежезамороженную плазму; 2 - 0,9% раствор ЫаС1. Учет результатов проводили по выживаемости животных, после чего рассчитывали Ы)/50 культуры (по формуле Ван дер Вардена).

1.6. Отбор доноров для иммунизации и контроль за их состоянием в процессе вакцинации. Обследовано 55 доноров-мужчин в возрасте 20-40 лет, иммунизированных подкожно в подлопаточную область. Подбор доноров и иммунизация проводились согласно: "Инструкции по применению анатоксина синегнойной палочки адсорбированного жидкого", МЗ РФ, 1992, "Инструкции по медицинскому освидетельствованию доноров крови, плазмы, клеток крови", МЗ.РФ, 29.05.95.

Медицинский контроль за состоянием здоровья доноров проводился в соответствии с требованиями и с применением унифицированных методов, предусмотренных приказами МЗ СССР № 380 от 16.04.72 и № 960 от 15.10.74, и "Единой системой медицинского контроля состояния организма доноров в процессе иммунизации и плазмафереза в целях получения иммуноактивных препаратов" (Демидова Н.В.,1979).

1.6.1. Условия проведения иммунизации.

Анатоксин вводили подкожно в область нижнего угла лопатки по трем схемам. Первая инъекция включала 15 мкг препарата, а последующие 30 мкг. Интервал между иммунизациями составлял 7, 14 суток. Максимальное количество инъекций - 3.

1.6.2. Клинико-лабораторные исследования.

Оценку переносимости анатоксина синегнойной палочки донорами проводили с учетом непосредственной реакции на прививку, через 6, 12, 24, 48 и 72 часа после каждой инъекции. Клинико-лабораторные исследования проводили до иммунизации, через 7 дней после каждой инъекции и через месяц после курса иммунизации, а также перед каждой операцией плазмафереза.

1.6.3. Исследование реакций защитных систем у доноров и больных.

Для характеристики защитных систем организма доноров и больных в

процессе активной и пассивной иммунизации в динамике определяли методом розеткообразования относительное количество Т-лимфоцитов с эритроцитами барана, В-лимфоцитов с эритроцитами мыши, уровня иммуноглобулинов классов А,М,С и субклассов 01-64 методом иммунодиффузии по Манчини, фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с использованием частиц латекса, проводили определение функциональной активности компонентов комплемента С1-С5 (Козлов Л.В., Вавилова Л.М., Голосова Т.В., 1985), определение активности внутриклеточных бактерицидных

ферментов-в тесте восстановления нитрссинего тетразолия г спонтанном и активированном латексом варианте. Специфическую активность сывороток иммунных доноров изучали в реакции пассивной гедагглютинации (РПГА) со специально приготовленным эритроцитарным диагностикумом (НИИ вакцин и сывороток им. И.М.Мечникова, г. Уфа).

1.7. Получение и применение ААП.

Плазму от доноров получали методом двукратного плазмафереза, начиная с 14 дня после курса иммунизации, используя аппаратуру и оборудование, предусмотренные "Инструкцией по проведению донорского плазмафереза", утвержденной МЗ РФ 29,05.95, и "Временной инструкцией по проведению донорского плазмафереза на аппарате типа Hamonetic PCS-2 Система получения плазмы", утвержденной МЗ РФ 16.01.97.

Плазма антисинегнойная антитоксическая человека, ФС-3366-97, представляет собой препарат, получаемый из крови доноров, иммунизированных анатоксином синегнойной палочки адсорбированным жидким, содержащим антитоксические антитела в титре более чем 1:128. Переливание ААП производили согласно правилам, предусмотренным "Инструкцией по технике переливания крови, сыворотки (плазмы), эритроцитарной массы", утвержденной 1-53 СССР 03. 12.88.

ААП применили в комплексном лечении 216 больным с гнойно-септическими осложнениями синегнойной этиологии, из них 106 больных с открытой травмой опорно-двигательного аппарата; 45 - с сочетанной и 65 - с термической травмой.

Для профилактики развития гнойно-воспалительных процессов синегнойной этиологии использованы иммуноактивнке препараты, в зависимости от их вида 60 пострадавших с травмой опорно-двигательного аппарата были разделены на три равные и сопоставимые по тяжести поражения группы.

1-я группа - основная - в комплекс лечения включена ААП с титром антител 1:128-1:2048, которую вводили на 1-2 сутки после травмы в дозе 125 мл в течение 2-3 суток - курсовая доза варьировала от 250 до 375 мл.

2-я группа - контрольная № 1 - в комплекс лечения включена свежезамороженная донорская плазма с титром специфических антител 1:32, которую вводили в тот же период в аналогичной разовой и курсовой дозе.

3-я группа - контрольная № 2 - в комплекс лечения включена иммунизация анатоксином синегнойной палочки, который вводили подкожно двукратно с интервалом в 7 дней в дозе 0,5 мл и 1,0 мл с 1-2 суток после травмы.

1.8. Статистическая обработка полученных данных проводилась согласно И.П.Ашмарин, А.А.Воробьев, 1962; Ю.Урбах, 1964.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Оценка лечебной эффективности КЛАСС на модели синег-нойного сепсиса у кроликов.

Заражение животных осуществляли однократным внутривенным введением 100 млн микробных клеток суточной культуры РА-7 синегнойной палочки, что соответствовало 6-7 дозам Ы)/50.

Результаты бактериологического и патоморфологического исследования, а также наличие выраженной токсической зернистости нейтрофилов на фоне лейкоцитоза подтвердили, что модель полученного экспериментального синегнойного сепсиса является адекватной.

0,9% раствор №С1 и КААСС вводили ежедневно (через сутки после заражения), однократно, внутривенно в течение 5 суток в дозе 3-4 мл на 1 кг массы тела. Курсовые дозы составили в среднем 30±5 мл 0,9% ИаС1 и 38±4 мл КААСС на одно животное, соответственно.

В процессе наблюдения (10 суток) в контрольной группе к 5 суткам погибло 604, а х 10 суткам после заражения - 90% животных. В опытной группе уже через 3 суток после заражения на фоне внутривенных инъекций иммунобиологического препарата (КААСС) температура тела и токсическая зернистость нейтрофилов крови снизились и бактериемия выявилась только у 20% животных, тогда как в контрольной группе явления интоксикации и бактериемии нарастали.

Введение КААСС приводило на 5 сутки после заражения к нормализации количества лейкоцитов и температуры тела животных; отсутствовала токсемия. На 10 сутки все животные опытной группы были живы и активны. Таким образом, на модели экспериментального синегнойного сепсиса показана высокая лечебная эффективность КААСС.

2.2. Оценка протективного эффекта ААП человека в тесте пассивной защиты мышей.

Проведенный эксперимент теста пассивной защиты мышей показал высокую протективную активность иммунных плазм в отношении синегнойной палочки РА-7. Способность защищать мышей от смертельных доз микроорганизмов возрастала при повышении титра антитоксинов в донорских плазмах.

Наибольшая эффективность плазмы отмечалась при введении заражающей дозы 125 млн. микробных клеток, что соответствовало 81Л50> Так, в контрольной группе (К1) выжило в среднем 25,7% мышей, а при введении иммунной, плазмы, начиная с титра 1:32 до 1:256, выживаемость мышей увеличивалась от 60,0% до 91,4% соответственно. В группах мышей, получавших антитоксическую антисинегнойную плазму в титре 1:128 и выше, выжило от 85,7% до 91,4%. При этом в группе мышей, не получавших плазму (К2), зарегистрирована 100% гибель животных.

При введении культуры-в-дозе 250 млн.микр.к-к- (15 1Д50) в первой контрольной группе выжило только 5,71 мышей, как и в опытной группе животных, получивших плазму с титром 1:32. Выраженную протективную активность при этой дозе заражения имели плазмы с титром 1:256-1:512. Выживаемость мышей соответственно составила 51,41 и 54,31.

При заражении 500 млн. микробных клеток (30ь050) все животные первой контрольной группы и 3-х опытных групп погибали, и только при применении плазмы с титром 1:256-1:512 выжило 8,5% мышей.

Поскольку не было выявлено статистически значимых различий средних величин показателей процента выживаемости животных и Ь05о культуры заражающего штамма в группах мышей, получивших плазму с титром 1:128 и 1:256, мы сочли возможным предложить титр 1:128 в качестве условно-защитного (рис.1).

Обратный титр антител к Р, aeruginosa в МП gji;;^ 250 млн. к-к - 15 LD/50 125 млн. к-к - 8 LD/50

Рис.1. Защитный эффект ААП при синегнойной инфекции у мышей.

Таким образом, на экспериментальной модели доказана протективная активность МП человека, эффективность которой зависит от количества специфических антител (доза-эффект).

2.3. Реактогенность и переносимость анатоксина синегнойной

палочки.

Подкожное введение анатоксина донорам и пострадавшим с травмой опорно-двигательного аппарата, сочетанной и термической травмой в дозировке 0,5-1,0 мл с интервалом 7,14 суток не вызывало местных и общих реакций, что свидетельствует о его хорошей переносимости. Только у 2 доноров через 6-8 часов после второй инъекции анатоксина температура повысилась до 37.3°С. Через 12 часов температура нормализовалась без дополнительных лечебных мероприятий. Субъективные нарушения общего состояния привитых (недомогание, головная боль, головокружение) не отмечены.

2.4. Оценка безвредности анатоксина синегнойной палочки.

Результаты клинико-лабораторного обследования не выявили отрицательного влияния иммунизации на функциональную активность костного мозга, печени, почек привитых. Состояние почек до и после иммунизации, по лабораторно-клиническим данным, было в пределах физиологических параметров.

Таким образом, анатоксин синегнойной палочки ареактогенен, безопасен и безвреден.

2.5. Оценка иммуногенных свойств анатоксина синегнойной палочки. На 7 сутки после введения анатоксина титр антитоксинов в крови увеличился в среднем в 6-7 раз по сравнению с таковым до иммунизации (обратный титр 26,б±3,0), что указывает на высокую иммуногенность препарата. На 14 сутки после двукратной иммунизации титр антител увеличивался в 22-55 раз. У 3 доноров иммунный ответ отсутствовал (обратный титр был лишь 64).

Таким образом, анатоксин синегнойной палочки обладает выраженной иммуногенной активностью и может быть использован для иммунизации и доноров с целью получения иммунной специфической плазмы, и больных для профилактики гнойно-воспалительных процессов синегнойной этиологии,

2.6. Выбор схемы иммунизации доноров анатоксином синегнойной палочки.

В процессе работы были апробированы 3 схемы иммунизации доноров (табл.1). При анализе результатов применения этих схем выявлено, что наилучшие результаты - увеличение титра антител в среднем в 55 раз -зарегистрированы при использовании третьей схемы иммунизации (двукратно через 14 суток) (рис.2).

Таблица К 1

_Схема иммунизации доноров анатоксином синегнойной палочки

Схемы Последовательность введения Интервал

дозы (мл) (сутки)

I 0,5 1,0 1,0 7

II 0,5 1,0 - 7

III 0,5 1,0 - 14

1 мл = 30 мкг белка анатоксина

У привитых после проведения 5 операций плазмафереза уровень содержания специфических антитоксинов в крови статистически значимо не отличался от такового до плазмафереза. Последующие операции оказывали воздействие на сохранность иммунного ответа. При иммунизации доноров по схемам № 1 и № 2 после 10 операций плазмафереза концентрация специфических антител в сыворотке крови снижалась в среднем на 55% и 68% соответственно, тогда как у привитых по схеме № 3 титр антитоксина

и

сохранялся.на.уровне-после курса иммунизации (рис,2). Это свидетельствует о высокой эффективности предложенной схемы иммунизации, позволяющей сохранять напряженность гуморального звена иммунитета достаточно длительно.

Время наблюдения

Рис.2. Обратный титр антител к Р.aeruginosa у доноров, привитых CA.

2,5. Динамика иммунологических показателей крови доноров в процессе иммунизации анатоксином синегнойной палочки.

Анализ показателей иммунной системы доноров в процессе иммунизации не выявил изменений общей популяции Т-лимфоцитов, тогда как количество B-РОЛ достоверно возрастало, причем до вакцинации 8 доноров имели сниженное содержание B-РОЛ, а после курса иммунизации их осталось только двое.

Статистически значимое повышение на 48% концентрации IgG выявлено только у доноров, иммунизированных по схеме № 3, при этом повышение уровня IgG в определенной степени зависело от исходного уровня.

Выявлено изменение в процессе иммунизации субпопуляций IgG (G1-G2-G3-G4) в сыворотках крови доноров. Так, концентрации субклассов G1-G3-G4 после первой инъекции снизились соответственно на 11%, 33% и 201, в то время как содержание IgG2 увеличилось на 40% по сравнению с уровнем до введения анатоксина. После курса иммунизации синегкойным анатоксином содержание IgG3-G4 соответственно снизилось на 15% и 20%, IgGl - практически не изменилось, а содержание IgG2 увеличилось на 70% по сравнению с уровнем до иммунизации. Анализ фагоцитарной активности нейтрофилов свидетельствует о достоверном увеличении поглоти-, тельной активности нейтрофилов (латекс-тест). Активность бактерицидных ферментов, выявляемая в спонтанном и активированном НСТ-тестах,

не изменялась в процессе иммунизации и оставалась на уровне нормальных значений.

Установлено, что общая активность комплемента под влиянием иммунизации в среднем увеличивается после 1 инъекции на 381, а после курса активность сохраняется повышенной (на 20-401) по сравнению с исходным уровнем. Гемолитическая активность компонентов комплемента С1-С5 в процессе иммунизации также повышается: С1 компонент после первой инъекции увеличился на 371, а после курса иммунизации повышался на 25-39%. Активность остальных компонентов комплемента также усиливалась - в среднем на 20%.

На основании проведенных исследований разработан и внедрен в практическую деятельность лаборатории иммунного плазмафереза (зав. Е.Н.Кобзева) НИИСП им.Н.В.Склифосовского комплексный метод получения клинической формы новой иммунологически активной среды - антитоксической антисинегнойной плазмы. Плазма представляет собой препарат, полученный из крови доноров, иммунизированных анатоксином синегнойной палочки адсорбированным жидким по ВФС 42-2843-97, содержащий антитоксические антитела в титре более чем 1:128.

Весь технологический процесс выполняется в соответствии с:

«Приказом МЗ РФ от 29/ХП-92 "О разрешении применения в практике здравоохранения новых медицинских иммунобиологических препаратов"»; «Временной фармакопейной статьей ВФС 42-360 ВС-92; ВФС-42-2843-97 "Анатоксин синегнойной палочки адсорбированный жидкий"»; «ВФС 42-362 ВС-92, ФС-42-3366-97 "Плазма антисинегнойная антитоксическая человека"»; «ВФС 42-361 ВС-92; ВФС-42-2842-97 "Диагностикум эритроцитарный синегнойный антигенный сухой"»; «Инструкцией по проведению донорского плазмафереза, утвержденной МЗ РФ 29 мая 1995 г.»

2.6. Оценка лечебной эффективности ААП.

В соответствии с разработанными и утвержденными нормативными документами в НИИСП им.Н.В.Склифосовского в лаборатории иммунного плазмафереза за период с 1991 по 1997 гг. налажено производство и получено 720 л антитоксической антисинегнойной плазмы, которую использовали в комплексной инфузионно-трансфузионной терапии больных и пострадавших с неотложными состояниями.

Обоснованием к переливанию такой плазмы явились наличие синегнойной палочки в ранах и крови, тяжелое клиническое состояние больного, сопровождающееся нарушениями в иммунной системе, и неэффективность антибактериальной терапии.

В зависимости от начала проведения специфической иммунотерапии 106 пострадавших с травмой опорно-двигательного аппарата были разделены на 3 группы:

- 1 группа - 52 больных. Введение плазмы осуществляли в первые 6 суток после травмы.

2 группа - 27 больных, получивших плазму на 7-12 сутки после травмы.

3 группа - 27 больных с хроническими гнойно-воспалительными процессами синегнойной этиологии. Введение плазмы осуществляли в пред- и послеоперационном периодах.

Группа сравнения состояла из 30 пострадавших с аналогичными состояниями, в комплексной терапии которых не использовалась ААП.

В первые 3-6 суток после травмы в I группе на фоне сохраняющейся анемии (гемоглобин 88±10 г/л), эритроцитопении (2,6±0,1х10п/л) и гипо-протеинемии (общий белок 53±3 г/л) выявлено повышенное содержание лейкоцитов (12,0±1,0х10'/л) с небольшим сдвигом влево и лимфопения (14±3).

Клинически имели место гипертермия, выраженные явления интоксикации, наличие послеоперационных гнойных осложнений (у 43% пациентов высевалась синегнойная палочка), В этот период выявлен иммунодефицит в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета (табл.2). Так, относительное содержание Т-РОЛ и B-РОЛ, IgG и IgM соответственно на 35% и, 25%, 31% и 33% были ниже таковых у здоровых людей, выявлены низкая поглотительная активность нейтрофилов (в латекс-тесте) и высокое (увеличено в 3 раза) продуцирование метаболитов кислорода (в НСТ-тесте).

Это определило включение в комплексную инфузионно-трансфузионную терапию МП, которую вводили внутривенно по 125 мл в течение 3-4 суток; в среднем 375+15 мл на курс, что составило 4-5 мл на 1 кг массы тела пациента.

После окончания курса введения ААП выявлено положительное её воздействие на состояние компонентов системы иммунитета (табл.2). Относительное содержание Т-РОЛ и B-РОЛ, IgG увеличилось соответственно на 23%, 67%, 56% по сравнению с таковым до введения ААП. Уровень иммуноглобулина G в сыворотке крови повышался в среднем на 56% и достигал такового у здоровых людей. Титр специфических антител в среднем в 4,4 раза превышал таковой у здоровых людей и в 2,1 раза до введения ААП. На этом фоне имело место снижение лейкоцитов (до 7,8+0,7х10'/л), восстановление относительного количества лимфоцитов (22%±2%).

Высеваемость синегнойной палочки в ранах резко снизилась (на 65%), и микроорганизм идентифицирован лишь у 15% пострадавших. Клинически: исчезли явления интоксикации, воспаления в области ран, нормализовалась температура тела, появился сон и аппетит, на 30-35 сутки после травмы клинико-лабораторные параметры пострадавших находились в пределах физиологических колебаний, Ps.aeruginosa не обнаруживалась.

Таблица К 2

Влияние МП на клйнико-лабораторные параметры. травматологических больных 1-ой группы.

Параметры Здоровые люди До После введения ААП

время обследования после травмы (сутки)

п=20 3-6 Д% (2-1)/1 7-9 Д % (4-2)/2 30-35 Д % (6-2)/2

1 2 3 4 5 6 7

Общий' белок,г/л 75±3 53±3 -29* 68±4 +28" ' 7815 +47**

Гемоглобин г/л 154±10 80±8 -48* 11515 +44" 128±12 +60"

Эритроциты • 4,7±0,3 2,6±0,1 -45* 3,8±0,2 +46" 4,2±0,2 +61"

Лейкоциты 5,5±0,6 12,0±1,0 +119* 7,810,7 -35** 7,5±0,6 -37**

п/я,% 3,110,3 6,610,4 +113* 3,210,5 -52" 2,8±0,5 -58**

с/я,% 6113 73±3 +20 66±3 -10 65±2 -11

эозинофилы,% 2,810,6 1,210,3 -57* 1,8±0,4 +50" 2,3±0,9 +92"

лимфоциты,% 32±2 1413 -56* 22±2 +57** 2812 +100"

моноциты,% 5,3±0,5 6,0±1,0 +13 311 -50" 5,1±0,9 -15

Т-РОЛ,% 54±3 35±2 -35* 43±3 +23 56±4 +60**

В-РОЛ,% 12±1 9±2 -25* 15±2 +66** 17±2 +87**

1дА,г/л 2,210,2 2,0±0,3 -9 1,6±0,2 -20 2,110,1 +5

1дМ,г/л 1,5±0,1 1,0±0,1 ■33* 1,110,1 +10 1,4±0,2 +40"

1дй,г/л 12,1±0,9 8,410,8 -31* 13,1±1,1 +56** 13,4±1,0 +59"

латекс-гест, % 45±2 33±2 -27* 44±2 +33** 48±3 +45**

НСТ,% 9±2 28±3 +211* 18±2 -36" 14±1 -50**

акт-НСТ,% 35±12 3513 0 29±2 -17 26±4 -26**

Обр,титр АТ. 26±4 55±18 +112* 115±11 +109** 101±15 +84**

Рз.аегидцэане отс. 43% — 15% -65** не обнар. -100"

(% больных)

* отличия от уровня нормы достоверны (Р<0,05)

** отличия от исходного уровня достоверны {Р<0,05)

Таким образом, включение МП в комплексную терапию пострадавшим с открытой травмой опорно-двигательного аппарата с гнойными осложнениями синегнойной этиологии в раннем послеоперационном периоде обусловило стабилизацию и активацию системы иммунитета, что определило выраженный противовоспалительный эффект.

У больных 2 группы на фоне гипертермии, явлений интоксикации были выявлены умеренная анемия, гипопротеинемия, выраженный лейкоцитоз и лимфопения. иммунодефицитное состояние у этих больных формировалось в результате гипоксии, вследствие кровопотери, бактериемии и эн-дотоксемии. На 7-12 сутки выявлено подавление активности клеточного звена, иммунитета. Так, относительное содержание Т-РОЛ и В-РОЛ соответственно на 441 и 421.(Р<0.01) ниже таковых у здоровых людей. Уровень иммуноглобулинов 6,М,А был снижен соответственно на 34%, 47% и 36% (Р<0.01). Об угнетении фагоцитарного звена иммунитета свидетель-

ствовали подавление на""29%поглотительной активности нейтрофилов и увеличение в 4,2 раза количества НСТ-положительных клеток по сравнению с таковыми у здоровых людей. Титр специфических антител сыворотки крови в этот период увеличился в 3 раза по сравнению с исходным.

МП включали в комплекс трансфузионно-инфузионной терапии в дозе 250 мл в течение 3-4 суток; в среднем 650±23 мл на курс, что составило 9-13 мл на 1 кг массы тела больного.

После окончания курса лечения МП (на 13-14 сутки после травмы) у больных уменьшились признаки интоксикации, активность воспалительного процесса в области переломов, нормализовалась температура тела. Удельный вес больных,. имеющих синегнойную палочку в микробиологических исследованиях раневого отделяемого, снизился на 64%, и только у 201 пострадавших микроорганизм высевался из отделяемого ран. Активизировались компоненты системы иммунитета. Так, относительное содержание Т-РОЛ и B-РОЛ, концентрация igG увеличились соответственно на 60%, 86%, и 58% (Р<0.01), фагоцитарная активность нейтрофилов повысилась на 50% (РС0.01). Титр специфических антител превышал в 5 раз таковой у здоровых людей и в 2 раза - до введения ААП. На 45-50 сутки после травмы все клинико-лабораторные показатели больных были в пределах физиологических колебаний, Ps.aeruginosa не обнаруживалась.

Таким образом, включение ААП в период эндотоксемии и синегнойной бактериемии в комплексную терапию пострадавшим с открытой травмой опорно-двигательного аппарата определило терапевтический эффект. Активация системы иммунитета способствовала выраженному антитоксическому и противовоспалительному эффекту.

Клиническое состояние пострадавших III группы было средней тяжести, на фоне незначительной гипертермии rwmm процесс носил хронический характер с явлениями интоксикации (потеря аппетита, истощение, депрессия). В момент обследования у пациентов выявлен умеренный лейкоцитоз (10,8±1,4 хЮ'/л), лимфопения (15,5±4,6%), анемия (гемоглобин 101+12 г/л, эритроцитопения (3,3±0,3 х1012/л), гипопротеинемия (общий белок - 63±3 г/л), снижение уровня иммуноглобулинов класса М (0,7+0,1 г/л) и класса G (7.2+0,7 г/л). У 69% пациентов в отделяемом ран идентифицировалась синегкойная палочка.

В комплексную инфузионно-трансфузионную терапию пострадавшим 3-й группы была включена ААП, которую вводили в послеоперационном периоде в дозе 250 мл в течение нескольких дней. Средняя курсовая доза составила 915±35 мл, что соответственно в 2,5 и 1,4 раза больше, чем у пациентов 1-й и 2-й группы.

После курса введения ААП у пострадавших выявлено усиление иммунологической резистентности: уровень лимфоцитов повысился в 2 раза, иммуноглобулинов М - в 2,7 раза, IgG - на 69%, титр специфических ан-

тител - на 391 на фоне усиления поглотительной активности нейтрофи-лов. Количество больных, в бактериологических исследованиях которых выявлялась синегнойная палочка, снизилось с 69% до 33%, а спустя 1015 суток- Ps.aeruginosa не обнаруживалась. На этом фоне нормализовалась температура тела, снизился лейкоцитоз, активировались репаратив-ные процессы (ускорилась очищение ран и полостей от гноя и фибринозных наложений, появилась краевая эпителизация и полноценные очаги грануляции).

Оценка лечебной эффективности антитоксической антисинегной-ной плазмы проведена у 45 пострадавших сочетанной травмой (открытая травма ОДА и ЧМТ) в возрасте от 20 до 65 лет на фоне развившихся на 10-14 сутки после травмы гнойно-септических осложнений синегнойной этиологии. В зависимости от тяжести состояния пациенты разделены на 2-е подгруппы: 1-я (15 больных) - выраженная интоксикация, гипертермия, лейкоцитоз, истощение, 30-50% дефицит компонентов клеточного и гуморального звеньев иммунитета, бактериемия; 11-я (30 больных) - умеренно выраженная интоксикация, лимфо-моноцитопения на фоне относительной стабильности клеточного звена иммунитета. Синегнойная палочка обнаруживалась только в отделяемом из ран и полостей.

Курсовая доза ААП в 1-ой подгруппе варьировала от 1000 мл до 2500 мл, препарат вводили внутривенно капельно по 250 мл ежедневно в течение 4-10 дней. Во 11-ой подгруппе доза ААП была меньше - 3-5 ин-фузий по 250 мл.

ААП оказывала выраженный положительный клинический эффект: в первые 2-3-е суток после введения у пациентов снижалась интоксикация, улучшался аппетит, сон, уменьшалось количество сегментоядерных ней-трофилов, активизировались репаративные процессы, появились грануляции на фоне очищения ран и полостей от гноя. После курса лечения ААП у больных I и II подгрупп снизилась антигенемия синегнойной палочки -соответственно на 55% (с 31,6±2,7 мкг/мл до 14,2±1,2 мкг/мл - р<0,01) и на 38% (с 13,6±1,5 мкг/мл до 8,4±0,9 мкг/мл - р<0,01) на фоне нарастания в 2,3 и 1,4 раза титра специфических антител. Высеваемость Ps.aeruginosa снизилась с 60% до 9% пострадавших. При этом влияние ААП на показатели гуморального и клеточного иммунитета у больных с выраженной интоксикацией и иммунодефицитом было более значительным. Так, в 1-ой подгруппе больных после курса введения ААП относительное содержание T-POJI и В-РОЛ, концентрации IgM и IgG повысились соответственно на 28% и 66%, 133% и 49% (Р<0,01), тогда как таковые параметры у больных 11-ой подгруппы статистически значимо превышали исходный уровень лишь на 14%, 16%, 36% и 27% соответственно. Такой эффект можно связать как с дозой вводимого ААП, так и с состоянием звеньев системы иммунитета у пострадавших на момент начала введения препарата.

2.7. - Оценка - профилактической эффективности антитоксической антисинегнойной плазмы.

Проведена у 20 пострадавших с травмой опорно-двигательного аппарата в возрасте от 20 до 60 лет, имевших открытые переломы, обширные раны, закрытые переломы с риском развития гнойных осложнений. Контролем служили 2 аналогичные группы (по 20 больных) которым в комплекс профилактических мероприятий в первые сутки после травмы вводилась свежезамороженная плазма (внутривенно, ежедневно, двукратно в дозе 125 мл) и анатоксин синегнойной палочки (подкожно, двукратно через 7 дней) соответственно.

В первые сутки после травмы у больных всех 3 групп отмечались идентичные изменения в клинико-лабораторных данных: анемия (гемоглобин 81-86 г/л, эритроциты 2,9-3,3 х 1012/л), лейкоцитоз (11,3-14,9 х 109/л) с палочкоядерным сдвигом, лимфопения (17,5-20,0%). Исследование иммунологического статуса указывало на формирование иммунодефицита у 45-55% больных: количество Т-РОЛ и В-РОЛ было снижено на 33,344,4% и 21,6-38,3% соответственно, концентрация иммуноглобулинов класса 5 и Н уменьшена на 20,8-26,7% и 40-67% соответственно по сравнению с уровнем у здоровых людей. У всех пациентов выявлена активация кислородного метаболизма нейтрофило'в, что выражалось в увеличении в 3,2-3,8 раз количества НСТ-позитивных нейтрофилов.

После курса профилактического введения МП на фоне проводимой комплексной терапии уже на 7 сутки после травмы у больных основной группы отмечалась активация иммунной системы (рис.3). Так, количество В-лимфоцитов, содержание иммуноглобулинов класса М, С увеличилось на 59%, 140%, 42% соответственно (рис. 3 А,Б,В).

Титр антитоксических антисинегнойных антител увеличился в 2 раза (рис.3 С). Общее состояние больных улучшилось, снизились интоксикация и температура тела, уменьшился лейкоцитоз с 14,9±1,1 до 7,1±0,5 х 109/л, увеличилось на 30% содержание общего белка и на 107% количество лимфоцитов. Синегнойная палочка в ранах была обнаружена у 20% больных.

После введения свежезамороженной плазмы (СЗП) (контрольная группа №1) на 7 сутки после травмы у пострадавших выявлена тенденция к активации системы иммунитета: на 15% увеличивается количество В-РОЛ, на 26% - и на 11% - 1дМ при отсутствии специфических антител к синегнойной палочке (рис.3). Синегнойная палочка в ранах обнаружена у 35% больных.

На 14 сутки после травмы показатели иммунного статуса в основной группе больных увеличивались. Количество 1дМ выросло в 3 раза, Гдв на 25%, В-РОЛ на 82%, тнтр специфических антител на 153% по сравнению с показателями до введения ААП. В ранах 5% больных идентифицирована

+д%

В-РОЛ %

150 100 50

о

ТЯЯЫ .— , П ,

и

21

сутки после травмы

+д%

1дМ

250 200 150 100 50 О -50

Л -т- мЩщшЛ-'-1- -и- —21-

сутки после травмы

В

сутки после травмы

;+Дс/о 800

600

400

200 ■

О

Обратный титр специфических антител

14

21

сутки после травмы

Рис.3. Изменение некоторых параметров иммунитета у травматологических больных после профилактического введения иммунобиологических препаратов.

Отклонение после введения препаратов А - содержания В-РОЛ % Б - содержания (дМ г/л В - содержания 1дЭ г/л С - содержания антител Рз.аегидтеза (обратный титр)

ШШш Основная группа (МП) ШШ Контрольная № 1 (СЗП) | | Контрольная № 2 (СА)

синегнойная палочка. В группе Больных с введением свежезамороженной плазмы (на 14 сутки) достоверной активации иммунной системы не наблюдали (рис.3). Титр специфических антител не увеличился и оставался на уровне 39+15. Ps.aeruginosa выделена из ран у 604 больных.

На 21 сутки все клинико-иммунологические показатели пострадавших основной группы находились в пределах нормы. В микробиологических исследованиях ран синегнойная палочка отсутствовала. На 21 сутки показатели иммунного статуса больных контрольной группы № 1 достоверно не изменились, иммунодефицит сохранялся. У 754 больных в ранах обнаружена синегнойная палочка.

При сравнительном анализе профилактического действия синегнойно-го анатоксина выявлено, что препарат активирует иммунную систему на 14-21 сутки после травмы. Увеличивается содержание B-POJ1 на 34% и 56%, IgM на 42% и 42%, IgG на 38% и 36% соответственно. При этом в первые 7 дней иммунодефицит у больных сохраняется. При пассивной иммунизации защитный титр сыворотки больных выявлен уже на 7 сутки после травмы, тогда как при активной иммунизации он достигал максимальных значений только на 14-21 сутки и был значительно выше (в 4-5 раз), чем в группах с пассивной иммунизацией. Синегнойная палочка выделена из ран у больных с активной иммунизацией на 7 сутки у 25%, а на 14 сутки у 10% больных.

Сравнительные клинические результаты групп с введением МП и свежезамороженной плазмы указывают на положительный профилактический эффект иммунной специфической плазмы (рис.4).

% больных

801

полное заживление

50 80

ш

ч.

гранулирующие раны 30

15

20

Контрольная группа

(введение свежезамороженной плазмы)

Основная группа (введение ААП)

остеомиелит

5

Рис.4, Сравнительный клинический эффект введения ААП при профилактике синегнойной инфекции у травматологических больных.

Таким образом, полученная донорская антитоксическая антисинег-нойная плазма с титром антител 1:128 и выше является дополнительным эффективным препаратом выбора из арсенала пассивных иммуномодуляторов для профилактики осложнений, обусловленных синегнойной палочкой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Для получения антитоксической антисинегнойной плазмы с титром специфических антител 1:128 целесообразно проводить иммунизацию доноров анатоксином синегнойной палочки подкожно, двукратно с интервалом 14 дней в дозе 15 и 30 мкг, что обеспечивает высокий специфический иммунный ответ в течение 1,5-2 лет без ревакцинации.

Для оценки степени адаптационно-компенсаторных процессов у доноров в процессе иммунизации и операций аппаратного плазмафереза показано проведение исследований гуморального и клеточного звеньев иммунитета. (Т-РОЛ 1, в-РОЛ %, иммуноглобулины А,М,С, фагоцитарная активность нейтрофилов.)

Пострадавшие с открытой травмой опорно-двигательного аппарата, имеющие при поступлении иммунодефицит более 301 клеточного и гуморального звеньев иммунитета, неспецифической резистентности, относятся к группе риска по развитию гнойно-воспалительных осложнений синегнойной этиологии. Этим больным показано для профилактики синегнойной инфекции проведение курса ААП в первые сутки после травмы в дозе 125 мл в течение 2-3 дней.

Включение ААП в комплекс лечения больных с гнойно-воспалительным процессом синегнойной этиологии в дозе 125 мл в течение 3-5 дней способствует элиминации возбудителя из очага поражения, ликвидации вторичного иммунодефицитного состояния, коррекции факторов неспецифической резистентности, улучшению клинического течения заболевания.

В процессе лечения и профилактики синегнойной инфекции пострадавших необходимо проводить оценку иммунного статуса 1-го уровня для прогнозирования развития инфекции и для оценки эффективности лечения.

ВЫВОДЫ.

1. Анатоксин синегнойной палочки адсорбированный жидкий обладает выраженными иммуногенными свойствами, ареактогенен и безопасен для здоровья доноров-добровольцев при получении антитоксической антисинегнойной плазмы.

2. Разработана оптимальная схема иммунизации, включающая двукратное подкожное введение анатоксина синегнойной палочки в дозе 15 и 30 мкг с интервалом в 14 суток, обеспечивающая многократное увеличение титра специфических антител в плазме крови привитых в течение 1,5-2 лет без ревакцинации.

3. Разработана на базе отделения переливания крови медицинская технология получения антитоксической антисинегнойной плазмы с титром 1:128 и более, включающая обследование доноров, их иммунизацию анатоксином синегнойной палочки и проведение операции аппаратного плазмафереза.

4.- В процессе"иммунизации доноров анатоксином синегнойной палочки происходит активация компонентов системы иммунитета: увеличение содержания В-розеткообразующих лимфоцитов и титра специфических антител, усиление поглотительной активности нейтрофилов и комплементарной активности в сыворотке крови на фоне повышения концентрации иммуноглобулинов, за счет субклассов lgG2.

5. Установлена протективная и лечебная эффективность антитоксической антисинегнойной плазмы с титром 1:128-1024 на модели синегной-ного сепсиса у животных.

6. Установлена лечебная эффективность применения антитоксической антисинегнойной плазмы (в курсовой дозе 6-21 мл на кг массы больного) с титром 1:128 и более в комплексном лечении пострадавших множественной, сочетанной и термической травмой с гнойно-воспалительными осложнениями синегнойной этиологии, выраженной интоксикацией, иммунодефицитом клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

7. Разработан эффективный способ профилактики развития гнойно-воспалительных осложнений синегнойной этиологии, включающий двукратное введение антитоксической антисинегнойной плазмы по 125 мл в первые 2 суток после травмы пострадавшим с открытыми и закрытыми множественными переломами конечностей, с обширными ранами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Багдатьев В.Е., Хватов В.Б., Булава Г.В., Дорфман А.Г., Горячева Н.В., Бодрова Г.Н., Никулина В.П., Маркова O.A., Ермаков С.Е. Коррекция нарушений иммунного статуса при огнестрельных ранениях. //Оказание специализированной помощи при неотложных состояниях.-Тез. докл. Пленума Межведомственного научного совета по проблемам скорой медицинской помощи. - Челябинск, 1995.- С.157-159.

2. Бодрова Г.Н., Садыкова А.Ф., Кунягина O.A., Михайлова H.A., Хватов В.Б, Экспериментальное обоснование терапевтической эффективности антитоксической антисинегнойной плазмы.//Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер, межд. симп., посвящ. 150-летию со дня рождения И.И.Мечникова и 90-летию Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова НПО "Иммунопрепарат". 13-15.06.95. С. 149-153 .

3.Бодрова Г.Н., Хватов В.Б., Кобзева E.H., Сахарова Е.А., Булава Г.В., Меньшиков Д.Д., Смирнов C.B., Бялик И.Ф., Герасимова Л.И., Михайлова H.A., Здановская Л.К. Иммунная антитоксическая противо-синегнойная плазма. Способ получения и опыт клинического использования.// Новое в трансфузиологии, 1995, вып. 11, С.19-26.

4. Бодрова Г.Н., Кобзева E.H., Клюквин И.Ю. Получение и клиническое использование антитоксической противосинегнойной плазмы. //Сб. матер. научной конференции молодых ученых к 50-летию института хирургии им.А.В.Вишневского, М., 1995, С.35.

5. Бодрова Г.Н., Клюквин И.Ю., Кобзева E.H., Хватов В.Б., Михайлова H.A. Использование антитоксической противосинегнойной плазмы для профилактики гнойных осложнений у больных с открытыми переломами конечностей. //Сб. тезисов конференции "Госпитальная инфекция в реанимации и интенсивной терапии". Уфа. 1996. С.59-60.

6. Бодрова Г.Н., Бялик И.Ф., Клюквин И.Ю., Меньшиков Д.Д., Хватов В.Б. Применение антитоксической противосинегнойной плазмы для специфической иммунопрофилактики гнойных осложнений у травматологических больных.//Матер. VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. М. 1997. С.78-79.

7. Бодрова Г.Н., Хватов В.Б., Михайлова H.A., Клюквин И.Ю., Залогуева Г.В. Активная иммунопрофилактика синегнойной инфекции у травматологических больных//Новое в трансфузиологии, 1997, № 17, С.69-73.

З.Бодрова Г.Н., Хватов В.Б., Клюквин И.Ю. Пассивная иммунопрофилактика у больных с тяжелой открытой травмой конечностей. //Сб. тезисов научно-практ. конф. "Новое в травматологии и ортопедии." Ижевск, 1997, С.28-29.

9. Бодрова Г.Н., Хватов В.Б., Клюквин И.Ю. Использование антитоксической противосинегнойной плазмы у травматологических больных. //Сб. тезисов научно-практ. конф. посвященной 75-летию кафедры травматологии и ортопедии Казанской Медицинской академии, 1997, С.101-102.

Ю.Бодрова Г.Н., Биткова Е.Е., Хватов В.Б., Герасимова Л.И., Меньшиков Д.Д., Спиридонова Т.Г., Ветошкин А.И., Михайлова H.A. Активная иммунопрофилактика синегнойной инфекции у пострадавших с термической травмой. //Сборник материалов научно-практической конференции "Новые медицинские технологии в лечении тяжелообожженных". М., 1997, С.37-41.

11.Булава Г.В., Горячева Н.В., Бодрова Г.Н., Никулина В.П., Маркова O.A., Дорфман А.Г., Багдатьев В.Е., Хватов В. Б. Инфузионно-трансфузионное пособие и иммунотерапия у больных с огнестрельными ранениями, осложненными массивной кровопотерей. // Новое в трансфузиологии, 1995, № 9, стр. 12-16.

12.Булава Г.В., Бодрова Г.Н., Горячева Н.В., Никулина В.п., Маркова O.A. Использование антибактериальных плазм в комплексном лечении больных с сочетанной травмой.// Актуал. вопросы службы крови и трансфузиологии.- Тез.докл.республ.конф. - Спб., 1995. - С.345-347.

13.Булава" Г.В., Бодрова Г.Н., Михайлова H.A., Клюквин И.Ю., Зданов-ская Л.к., Хватов В.Б. Специфическая профилактика и лечение синег-нойных осложнений при тяжелой травме конечностей.// Оказание специализированной помощи при неотложных состояниях.- Тез. докл. Пленума Межведомственного научного совета по проблемам скорой медицинской помощи. - Челябинск, 1995.- С.194-196.

14.Булава Г.В., Годков М.А., Маркова O.A., Бодрова Г.Н., Биткова Е.Е. Нарушение белкового гомеостаза при сочетанной травме, осложненной массивной кровопотерей. //Сб. научных трудов конф. "Оказание помощи при сочетанной травме", Ярославль, 1997, Т.108, С.127-131.

15.Клюквин И.Ю., Бодрова Г.Н., Бялик И.Ф., Звездина М.В. Профилактика гнойных осложнений при острой открытой травме конечностей.//Сб. тезисов Международного конгресса по химиотерапии. Греция, 1996. С.80. Prevention of immunity deficit during treatment acute open extremity fracture.//4th Scientific Meeting of the European Society of Chemotherapy (ESC), May 23-25, 1996, Athens, Greece, p.80.

16.Клюквин И.Ю., Бодрова Т.Н., Хватов В.Б., Бялик И.Ф. Новый способ активной иммунопрофилактики синегнойной инфекции при открытых диа-физарных переломах конечностей. //IV Международный форум "Стратегия здоровья-97", Турция, 1997.

17.Клюквин И.Ю., Бодрова Г.Н., Хватов В.Б., Здановская Л.К., Михайлова H.A. Способ активной иммунопрофилактики синегнойной инфекции у травматологических больных.//Заявка на изобретение № 97108316/14 МПК А 61 К 39/02, приоритетная справка от 20.05.97.

18.Кунягина О.В., Михайлова H.A., Магазов Р.Ш., Грабарь Ю.М., Михайлов A.A., Здановская Л.К., Бодрова Г.Н., Хватов В.Б. Стафило-про-тейно-синегнойная вакцина - новый препарат для профилактики гнойно-септических заболеваний и осложнений.//Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер, межд. симп., посвящ. 150-летию со дня рождения И.И.Мечникова и 90-летию Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова НПО "Иммунопрепарат". 13-15.06.95. - С.131-138.

19.Михайлова H.A., Кунягина О.В., Бродинова Н.С., Бодрова Г.Н. Изучение безопасности, реактогенности и антигенной активности анатоксина синегнойной палочки на ограниченном контингенте добровольцев.// ЖМЭИ, 1995, № 3, С.89-92.

20.Охотский В.П., Бялик И.Ф., Клюквин И.Ю., Бодрова Г.Н. Первичный остеосинтез открытых переломов у пострадавших в экстремальном состоянии. //Сб. тезисов Республ. конф. "Оказание помощи больным в экстренном состоянии". Саранск, 1996. С.11.

21.Спиридонова Т.Г., Булава Г.В., Смирнов C.B., Бодрова Г.Н., Биткова Е.Е., Годков М.А., Кондрикова Е.С. Влияние ранних и отсроченных

некрэктомий на состояние иммунного статуса тяжелообожженных. //Сб. тезисов VI Всероссийского съезда травматологов-ортопедов. Н-Новго-род, 1997. С.145.

22.Хватов В.Б., Рябова С.С., Бурыкина И.А., Маркова O.A., Бурдыга Ф.А., Бялик И.Ф., Бодрова Г.Н. Состояние системы гемореологии и гемостаза у больных с огнестрельными диафизарными переломами конечностей.// Оказание специализированной помощи при неотложных состояниях./ Тез. докл. Пленума Межведомственного научного совета по проблемам скорой медицинской помощи,- Челябинск, 1995. С.227-228.

23.Хватов В.Б., Бодрова Г.Н., Бялик И.Ф., Клюквин И.Ю. Профилактика и лечение гнойных осложнений у пострадавших с тяжелой открытой травмой конечностей. //Сб. матер. I Белорус, междунар. конгресса хирургов, 1996. С.340-342.

24.Хватов В.Б., Герасимова Л.И., Здановская Л.К., Бодрова Г.Н., Михайлова H.A. Инструкция по применению анатоксина синегнойной палочки адсорбированного жидкого (anatoxin™ Pseudomonas aeruginosa adsorbtum ligidum). M3 РФ, M.,1992. 3 с.

25.Хватов В.Б., Здановская Л.К., Бодрова Г.Н. Инструкция по применению плазмы антисинегнойной антитоксической человека (Plasma anti-pseudomonas antitoxicum human). M3 РФ, M., 1992. 2 с.

26.Хватов В.Б., Михайлова H.A., Здановская Л.К., Бодрова Г.Н. Временная фармакопейная статья ВФС 42-362 ВС-92, Фармакопейная статья ФС 42-3366-97 "Плазма антитоксическая противосинегнойная человека" (Plasma antipseudomonas antitoxicum human). МЗ РФ, М., 1992-97. 7 с.

27.Шабалин В.Н., Мороз А.Ф., Михайлова H.A., Здановская Л.К., Кривцова И.В., Бодрова Г.Н. Методические рекомендации № 20/03-Д-375 Получение и применение иммунной плазмы для терапии гнойно-септических осложнений, вызванных Ps.aeruginosae. МЗ РФ, М., 1992. 15 с.

28.Michailova N.A., Kunyagina O.V., Bodrova G.N. Antitoxic antipseudomonas plasma: production and application.//Fourth International Symposium on Clinical Immunology. Amsterdam, 1997-7, p.36.