Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Поиск и изучение механизма действия производных ксантина, проявляющих гемореологические свойства

Актуальность темы. Реологическое поведение крови - один из главных механизмов, определяющих характер внутрисосудистой микроциркуляции (Катюхин Л.Н., 1996; Сторожок С.А., 1997; Петрищев H.H., 2001; Викулов А.Д. и др., 2001). Реологические свойства крови в норме и при патологии определяются функционально структурным состоянием эритроцитарной мембраны и составом плазмы крови, определяющих вязкость крови и плазмы, деформационные и агрегационные свойства клеточных элементов (Викулов А.Д. и др., 2003; Baskurt O.K. et. al., 2003). Расстройства микроциркуляторной гемодинамики и связанные с ними нарушения регионарного кровообращения неблагоприятно отражаются на функциях всех органов и систем, что отягощает течение основного заболевания. (Смирнова Т.А., 1998; Лиховецкая З.М. и др., 1996; Long D.S. et al, 2004). Именно на уровне сосудов микроциркуляторного русла происходит транскапиллярный обмен кислорода, углекислого газа, субстратов и продуктов метаболизма, ионов, биологически активных веществ (Коркушко О.В. и др., 2002; Викулов А.Д. и др. 2003; Baskurt O.K. et al., 2003). Реологические показатели нарушаются при ишемической болезни сердца (Алиев О.Б., 2004; Н.Л. Цапаева и др., 1999), артериальной гипертензии (Медведев И.Н. и др., 2003; Белоусов Ю.Б. и др., 2001; Шабанов В.А. и др., 2001), нарушении мозгового кровообращения (Вознюк И.А. и др., 2003; Мирзоян P.C. и др., 2000), сахарном диабете (Балаболкин М.И. и др., 2005; Колосова М.В. и др., 2001; Максимов Г.В. и др., 2005) аутоиммунных состояниях, воспалительных заболеваниях (Фирсов H.H. и др., 2003; Богомолов В.П. и др., 2001), при разных типах ожирения (Потемкин В. В. и др., 2006) и многих других патологических состояниях. Изменения реологических свойств крови возникают в сравнительно ранние сроки. На сегодняшний день гемореологическая терапия является общепринятой и неотъемлемой частью фармакотерапии многих заболеваний.

Современными препаратами, которые назначаются для коррекции нарушений реологических свойств крови являются: антиагреганты -блокаторы Р2У-рецепторов - тиклопидин, клопидогрел; вазоактивные препараты - пентоксифиллин, дипиридамол, угнетающие активность фосфодиэстеразы (приводя к увеличению внутриклеточной концентрации цАМФ); биофлавоноиды ~ диквертин, танакан, механизмом гемореологического действия которых является защита мембранных липидов от перекисного окисления; антагонисты кальция, оказывающие мембраностабилизирующее (повышение эластичности мембраны эритроцитов) и антигемолитическое действие. Однако, недостаточная эффективность и наличие нежелательных эффектов (диспепсические явления, кишечные кровотечения, кожные геморрагии, лейкопения, тромбоцитопения, агранулоцитоз) ограничивают их применение (Петров В.И., 1996; Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003).

С целью создания гемореологически активных средств, ведутся исследования ингибиторов протеинкиназ (Tsuchiya М. et al., 2002), средств улучшающих микровязкостные свойства мембран (ТА-993 и МВЗ) (Katoh М. et al., 2001). Известно, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения могут быть перспективными источниками для разработки гемореологических средств (Плотников М.Б. и др., 2003). В настоящее время установлено, что коррекция «синдрома повышенной вязкости крови» асковертином, связана со способностью ограничивать патологические изменения в липидном бислое мембран эритроцитов при перекисном окислении (Плотников М.Б., 2005). Противомигренозный препарат, антагонист серотониновых рецепторов (5-НТ2) тропоксин оказывает влияние на агрегационную способность тромбоцитов. Антиагрегантные свойства также обнаружены у тромоседана (дибазол) (Rusu G., Danila G., and Nechifor M., 1993), антигельминтного препарата нокодазола (Yung S.M., 1981), этомерзола (5-этокси-2-этилтиобензимидазола) (Плотников М.Б., 1994). Для производного имидазобензимидазола - препарата эноксифол установлено корректирующее влияние на реологические свойства крови при состояниях, сопровождающихся развитием «синдрома повышенной вязкости крови» (Спасов A.A. и др., 2002). Гемореологическая активность также отмечена у препаратов обладающих антиоксидантной активностью (Шилов В.В. и др., 2000; Кармен Н.Б., 2004; Медведев И.Н., 2000).

Интерес к препаратам, улучшающим реологические свойства крови, постоянно возрастает. Это обусловлено тем, что большинство заболеваний сопровождается нарушениями в системе микроциркуляторного русла. И именно эти нарушения замыкают порочный круг, усугубляющий течение и прогноз основного заболевания.

Однако, число лекарственных препаратов используемых в клинической практике весьма ограничено и на сегодняшний день лидирующие положение в терапии гемореологических нарушений занимает пентоксифиллин (Зудин A.M. и др., 2004), относящийся к производным ксантина. Это определяет большой интерес к поиску корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов для коррекции нарушений гемореологии и микроциркуляции, превосходящих пентоксифиллин. Тема является составной частью научного плана НИР Волгоградского Государственного медицинского университета и утверждена на заседании Специализированного Совета (протокол №5 от 19.01.2005).

Целью исследования является поиск и экспериментальное изучение гемореологических свойств новых производных ксантина.

Для достижения указанной цели представляется необходимым решение следующих задач:

1. Поиск веществ, обладающих высоким уровнем гемореологической активности, среди различных производных ксантина на модели экспериментального «синдрома повышенной вязкости» крови in vitro.

2. Анализ зависимости гемореологической активности от структуры и физико-химических свойств изучаемых соединений.

3. Исследование влияния наиболее активных веществ на вязкость образцов крови доноров и больных сахарным диабетом.

4. Изучение влияния наиболее активного соединения и препарата сравнения на гемореологические параметры крови при экспериментальном моделировании «синдрома повышенной вязкость крови» (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктомизированные собаки, адъювантный артрит).

5. -Изучение влияния наиболее активного вещества на скорость локального кровотока в головном мозге крыс в норме и при глобальной ишемии мозга.

6. Исследование механизмов гемореологического действия наиболее активных соединений (влияние на агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформабельность, заряд мембраны красных клеток крови и ее микровязкость, а так же влияние на процессы адгезии лейкоцитов).

Научная новизна. Впервые проведено исследование гемореологической активности 7,8 замещенных производных ксантина. Наиболее активными, п среди исследованных веществ, оказались N -тиетанил замещенные производные ксантина, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель. Установлено, что соединения, у которых имеются окси-группы в тиетанильном радикале, проявили наибольшую реологическую активность.

В ходе работы впервые получены данные о влиянии соединения С-83 на вязкость образцов крови доноров и больных с «синдромом повышенной вязкости крови», а так же на гемореологические показатели животных с экспериментальной патологией. Изучено влияние данных веществ на вязкость крови, агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформируемость и заряд мембраны эритроцитов, осмотическую и кислотную резистентность красных клеток крови, адгезию лейкоцитов, коагулографические параметры. Продемонстрирована мембранотропная активность соединения С-83, которая проявляется в изменении микровязкости и заряда мембраны эритроцитов, что приводит к улучшению деформабельности и снижению агрегации красных клеток крови.

Научно-практическая ценность. Установленные закономерности между структурой, физико-химическими свойствами и гемореологической активностью соединений являются основой для целенаправленного поиска и оптимизации синтеза новых производных ксантина с заданной структурой и уровнем гемореологической активности.

Выраженные реологические эффекты соединения С-83, превосходящие по активности препарат сравнения - пентоксифиллин, определяют перспективность проведения дальнейших фармакологических и токсикологических исследований данного вещества с целью создания на его основе нового высокоэффективного корректора гемореологических нарушений.

Реализация результатов исследования. Выявленные закономерности между структурой, физико-химическими свойствами и гемореологической активностью производных ксантина учитываются при синтезе новых соединений на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета. Результаты работы используются в лекционных курсах на кафедре фармакологии, кафедре фармакологии и биофармации ФУВ, кафедре фармацевтической химии Волгоградского государственного медицинского университета, а также на кафедре фармакологии Пятигорской Государственной фармацевтической академии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Из всех изученных производных ксантина наиболее гемореологически активными соединениями являются Ы7-тиетанил замещенные ксантина, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель.

2. Соединение С-83 обладает выраженной гемореологической активностью, что проявляется в снижении вязкости крови, ингибировании процессов агрегации эритроцитов, повышении осмотической и кислотной резистентности красных клеток крови, увеличении деформабельности и заряда мембраны эритроцитов, а также в снижении адгезии лейкоцитов ■при патологических состояниях, сопровождающихся «синдромом повышенной вязкости». 3. В основе механизма гемореологического действия соединения С-83 лежит влияние на деформабельность и агрегацию форменных элементов крови, которые определяются мембранотропными эффектами соединений (изменение заряда и микровязкости мембраны).

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на: 1 международной Пироговской конференции, Москва, 2006; 60-й итоговой научной конференции молодых ученых, Ростов-на-Дону, 2006; Всероссийской конференции (с международным участием) «Новые информационные технологии в медицине», Волгоград, 2006; IX—X Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области, 2004 - 2005 гг.; 62,64 итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета, Волгоград 2004, 2006 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 186 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 рисунками, 28 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы (глава I), экспериментальной части (глава П-У1), обсуждения результатов (глава VII), выводов и списка литературы, включающего 93 отечественных и 96 зарубежных источников.

выводы

1. Ns С8-замещенные производные ксантина, а именно 1чГ7-тиетанил и п

N -оксипропилзамещенные ксантина, обладают гемореологическая активностью. Наиболее выраженное ингибирующее действие на агрегацию эритроцитов оказывали ]\Г7-тиетанил замещенные производные 3-метил ксантина.

2. Высокий уровень гемореологической активности определяется наличием, тиетанильного радикала в N7 и тиогидразидного о заместителя в С положение. Введение в тиетанильный радикал окси-групп повышает выраженность данного вида активности. у

3. Наибольшее ингибирование агрегации эритроцитов среди N -оксипропилзамещенных проявило соединение, имеющее в оксипропильном радикале амино-группу. Наличие у N7о оксипропилзамещенных соединений в С положении аминоэтиламинового заместителя, а так же атома Вг приводит к инверсии эффекта - от, антиагрегантного к проагрегантному.

4. Соединение С-83 првышало» пентоксифиллин по показателю гемобиологической активности (ЕС20) в 4,58 раза. Кроме того, соединение С-83 оказалось наименее токсичным, а по широте терапевтического действия в 4,5 раз превосходило пентоксифиллин.

5. В исследованиях in.vitro на модели сформировавшегося «синдрома повышенной' вязкости крови», а так же в образцах крови больных сахарным диабетом соединение С-83 снижает вязкость крови во всем диапазоне скоростей сдвига, оказывая корректирующее действие как на агрегационный, так и* на деформационный компоненты показателя.

6. На моделях экспериментальной- патологии, сопровождающихся развитием синдрома «повышенной вязкости- крови» (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктомизированные собаки, адъювантный артрит), соединение С-83 оказывает выраженное терапевтическое действие на весь спектр показателей гемореологического статуса животных (вязкость крови, агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформабельность эритроцитов, их резистентность к кислотному гемолизу, показатели свертывания крови) как при однократном, так и при курсовом введение.

7. Соединение С-83 вызывает повышение уровня локального мозгового кровотока у крыс, превосходя по активности пентоксифиллин, как в условиях нормы, так и при патологии, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий.

8. Соединение С-83 оказывает выраженное ингибирующее действие на агрегацию эритроцитов, влияя как «мостиковый» (фибриноген нативная плазма) так и на «истощающий» (алциан-индуцированная агрегация) механизмы агрегации.

9. Соединение С-83 достоверно улучшает деформабельность эритроцитов, проявляющуюся в дозозависимом снижение вязкости взвеси отмытых эритроцитов и увеличение скорости их фильтрации.

10. В условиях in vitro на модели «синдрома повышенной вязкости крови» соединение С-83 достоверно подавляет повышенный уровень адгезии лейкоцитов.

11. Соединение С-83 дозозависимо снижает микровязкость мембраны и увеличивает поверхностный отрицательный заряд мембраны эритроцитов. По влиянию на микровязкость мембраны в различных концентрациях соединение С-83 несколько уступает, а по влиянию на электроотрицательность превосходит препарат сравнения пентоксифиллин в концентрации 10 и 100 мкМоль/л.

165

6.8. Заключение

В результате изучения действия соединения С-83 и пентоксифиллина на основные реологические параметры (агрегация форменных элементов

Влияние соединений С-83 и пентоксифиллина в концентрации 100 мкМоль/л на параметры АДФ-индуцированной (5 мкМ) агрегации тромбоцитов крови кроликов (М±ш).

Соединение Параметры агрегации тромбоцитов

ИАТ ИДТ МН

Контроль 7,10±2,45 40,46±5,62 18,63±6,01

Соединение С-83 3,28±0,64 44,36+3,58 13,27±4,37

Пентоксифиллин 5,71±0,67 44,81±14,14 23,40±12,07

Обозначения: ИАТ - индекс агрегации тромбоцитов, ИДТ - индекс дезагрегации тромбоцитов, МН - максимальный наклон агрегатограммы крови, деформабельность, микровязкость и заряд мембран эритроцитов, адгезию лейкоцитов) обнаружены следующие закономерности.

При микроскопии выявлено, что соединение С-83 снижает скорость образования эритроцитарных агрегатов в образцах крови, подвергшихся тепловому воздействию. Это может свидетельствовать о влиянии соединения на «мостиковый» механизм агрегации. Однако соединение С-83 достоверно превосходит препарат сравнения лишь на первой минуте, а на 5 и 7 минутах исследования соединение С-83 уступает препарату сравнения (данные не достоверны). Далее было изучено влияние соединений на агрегацию эритроцитов, индуцированную алциановым голубым, который, обладает положительным зарядом и при взаимодействие с отрицательно заряженными эритроцитами вызывает их агрегацию по «истощающему» механизму (ОВгет е1 а1, 1996; Булегенов К.Е. и др, 1993). Так наибольшую активность исследуемые соединения продемонстрировали в концентрации 1x10"4 моль/л. При этом наблюдалась четкая зависимость величины антиагрегантного эффекта от концентрации веществ.

Также было выявлено выраженное влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на деформируемость красных клеток крови. Соединение С-83 достоверно увеличивает скорость фильтрации взвеси эритроцитов, что в свою очередь свидетельствует о повышение деформабельности эритроцитов. Подтверждением этого является снижение вязкости взвеси отмытых эритроцитов при всех скоростях сдвига. При этом более выраженное влияние на данный показатель соединение С-83 оказывает при низких скоростях сдвига, что может свидетельствовать о влиянии на вязкость самой мембраны эритроцитов. Следует отметить, что снижение концентрации соединения приводило к снижению их эффективности.

Соединение С-83 и пентоксифиллин уменьшали показатель анизотропии флуоресценции зонда ДСП-6 в суспензии эритроцитов. Подтверждением наличия антиагрегантного эффекта у исследуемых соединений является достоверное влияние на интенсивность флуоресценциции зонда ДСМ, что в свою очередь может свидетельствовать об увеличении электроотрицательности мембран эритроцитов.

В результате проведенного исследования установлено антиагрегантное влияние соединения С-83 и пентоксифиллина в отношении тромбоцитов. Однако полученные данные как для исследуемого соединения так и для препарата сравнения статистически не значимы

Известно, что лейкоциты при патологических состояниях могут нарушать нормальное структурирование кровотока в микрососудах и создавать значительное сопротивление кровотоку, приводящее к его замедлению и даже полной остановке (Мчедлишвили Г.И., 1996). Изучаемые соединения приводили к снижению адгезии лейкоцитов при экспериментальном синдроме повышенной вязкости крови.

Таким образом, по результатом проведенного исследования можно сделать заключение, что соединение С-83 преимущественно оказывает влияние на эритроцитарный компонент реологии крови.

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Реологическое поведение крови - один из главных механизмов, определяющих характер внутрисосудистой микроциркуляции (Петрищев

H.H., 2001; Сторожок С.А., 1997; Катюхин JI.H. и др., 1996). Реологические свойства крови в норме и при патологии определяются функциональноструктурным состоянием эритроцитарной мембраны и составом плазмы t крови, обуславливающих вязкость крови и плазмы, деформационные и агрегационные свойства клеточных элементов крови (Michiels J.J. et.al., 2004; Мельников A.A. и др., 2004). Изменение гемореологического статуса является одним из патогенетических факторов, определяющих тяжесть заболевания, его течение, а иногда исход (Habón Т.,2001). Имеются многочисленные экспериментальные, а также клинические данные о наличие микроциркуляторных расстройств при сахарном диабете (Балаболкин М.И. и др., 2005; Колосова М.В. и др., 2001; Максимов Г.В. и др., 2005), гипертонической болезни (Медведев И.Н. и др, 2003; Белоусов Ю.Б. и др., 2001; Шабанов В.А. и др., 2001), ишемической болезни сердца (Алиев О.Б., 2004; H.JI. Цапаева и др., 1999), нарушении мозгового кровообращения (Вознюк И.А. и др., 2003; Мирзоян P.C. и др., 2000) аутоиммунных остояниях (Фирсов Н.Н.и др ,2003; Богомолов В.П. и др., 2001) и других патологических состояниях. Изменения реологических свойств крови возникают сравнительно в ранние сроки. На сегодняшний день гемореологическая терапия является общепринятой в мире и неотъемлемой частью фармакотерапии многих заболеваний.

Концепцией фармакотерапии гемореологических нарушений является улучшение реологических свойств эритроцитов, а в первую очередь снижение агрегации эритроцитов. Препаратов селективного механизма действия, изолированно снижающих процесс агрегации эритроцитов на сегодняшний день нет. Современными препаратами, которые назначаются при нарушениях микроциркуляции являются: антиагреганты - блокаторы Р2У-рецепторов тиклопидин, клопидогрел; еазоактивные препараты - пентоксифиллин, дипиридамол, угнетающие активность фосфодиэстеразы (приводят к увеличению внутриклеточной концентрации цАМФ); биофлавоноиды - диквертин, танакан, механизмом гемореологического действия которых является защита мембранных липидов от перекисного окисления; антагонисты кальция, оказывающие мембраностабилизирующее (повышение эластичности мембраны эритроцитов) и антигемолитическое действие. Однако недостаточная эффективность и наличие нежелательных эффектов (диспептические явления, кишечные кровотечения, кожные геморрагии, лейкопения, тромбоцитопения, агранулоцитоз) ограничивают их применение (Петров В.И., 1996; Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003).

С целью создания гемореологически активных средств, ведутся исследования ингибиторов протеинкиназ (Tsuchiya М. et al., 2002), средств улучшающих микровязкостные свойства мембран (ТА-993 и МВЗ) (Katoh М. et al., 2001). Известно, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения могут быть перспективными источниками для разработки гемореологических средств (Плотников М.Б. и др., 2003). В настоящее время установлено, что коррекция «синдрома повышенной вязкости крови» асковертином, связанна со способностью ограничивать патологические изменения в липидном бислое мембран эритроцитов при перекисном окислении (Плотников М.Б., 2005). Противомигренозный препарат, антагонист серотониновых рецепторов (5-НТ2) тропоксин оказывает влияние на агрегационную способность тромбоцитов. Антиагрегантные свойства также обнаружены у тромоседана (Rusu G., Danila G., and Nechifor M., 1993), антигельминтного препарата нокодазола (Yung S.M., 1981), этомерзола (5-этокси-2-этилтиобензимидазола) (Плотников М.Б., 1994). Гемореологическая активность также отмечена у препаратов обладающих антиоксидантной активностью (Шилов В.В. и др., 2000; Кармен Н.Б., 2004; Медведев И.Н., 2000).

Интерес к препаратам, улучшающим реологические свойства крови, постоянно возрастает. Однако, число лекарственных препаратов используемых в клинической практике весьма ограничено и на сегодняшний день лидирующие положение в терапии гемореологических нарушений занимает пентоксифиллин (Зудин A.M. и др., 2004), относящийся к производным ксантина. Это определяет большой интерес к поиску корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов для коррекции нарушений гемореологии и микроциркуляции, превосходящих пентоксифиллин. Настоящая работа является продолжением« ранее проведенных исследований по поиску гемореологически активных средств среди гетероциклических соединений.

На первом этапе исследования был произведен скрининг 20 веществ, относящихся к производным ксантина. Для скрининга соединений, обладающих влиянием на гемореологический статус, использовалсяметод воспроизведения нарушений реологических свойств крови in vitro (Плотников М.Б. и др., 1996), заключающийся в инкубировании крови при 42,5 °С в течение 60 минут. Термостатирование проб крови приводит к выраженному сдвигу реологических свойств крови: увеличению агрегационнойл способности эритроцитов и значительному повышению вязкости крови. Длительное воздействие повышенной температуры in vitro ухудшает микрореологические свойства эритроцитов в связи с уменьшением в них уровня» АТФ и дефосфорилированным состоянием спектрина.

В результате проведенного скрининга среди производных ксантина выявлено, что наиболее эффективными являются соединения под лабораторными шифрами С-83 и С-82.

Для данных соединений была изучена зависимость реологического эффекта от доз веществ, экспериментально определен токсикологический показатель LD50, а так же произведен расчет условного терапевтического индекса. Полученные результаты позволили определить для дальнейшего углубленного изучения наиболее эффективное соединение под лабораторным шифром - С-83, т.к. по показателю ЕС2о данное соединение превосходило пентоксифиллин в 4,58 раза. Кроме того, соединение С-83 оказалось наименее токсичным, а по широте терапевтического действия в 4,5 раза превосходило пентоксифиллин.

Гемореологические свойства (ЕС20), показатели острой токсичности (ЬИ^о) и условного терапевтического индекса наиболее активных соединений.

Лабораторный шифр соединения ес2о (ммоль/л) 1л)5о (мМоль/кг) Крысы в/в УТИ= ЬБ5о / ЕС20

С-83 0,043 0,380 8,80

С-82 0,069 0,404 5,83

Пентоксифиллин 0,197 0,379 1,92

Анализ взаимосвязи между структурой и гемореологической активностью производных ксантина позволил определить, что для проявления данного вида биологической активности имеет значение п строение заместителей у N и в 8 положении. Наиболее активными, среди исследованных веществ оказались ТчГ7-тиетанил замещенных производные ксантина С-83 и С-82, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель. Причем введение окси-групп в тиетанильный радикал у соединения С-83 повышает выраженность данного вида активности.

В результате проведенного анализа зависимости гемореологической активности производных ксантина от их физико-химических характеристик построена классическая регрессионная модель Хэнча. Статистические характеристики полученного регрессионного уравнения показывают, что оно с высокой достоверностью описывает зависимость гемореологической активности производных ксантина от их физикохимических параметров. Это дает возможность утверждать, что с помощью полученной зависимости можно с достаточной точностью, на основании структурной формулы, производить расчетную оценку гемореологической активности новых, в том числе планируемых к синтезу, производных ксантина с целью оптимизации поиска высокоактивных веществ этого ряда:

Анализ полученного регрессионного уравнения свидетельствует о том, что значительную вклад в проявление гемореологической активности соединений вносят электронные и липофильные параметры, в то время как стерические не имеют значения.

Проведенный подсчет уровня гемореологической активности на основании полученного регрессионного уравнения показал, что для соединения С-83 расчетная оценка совпадает с экспериментально полученными величинами.

Таким образом, в результате поиска потенциальных' корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди изучаемых соединений самым активным оказалось соединение С-83:

8-ацетогидразид-3-метил-7-( 1,1 диоксотиетанил-3)ксантин

Известно, что вязкость крови - один из наиболее информативных и доступных для исследования гемореологических параметров (Плотников М.Б., 2003; Ройтман Е.В. и др., 2000). Вязкость крови обусловливается, с одной стороны, взаимодействием между компонентами, составляющими суспензионную среду и твердую фазу крови, и с другой - внутренним трением между составными элементами крови в процессе течения (Мищук О

И.И., 1993). Оценка вязкостных свойств чрезвычайно важна при выборе фармакотерапии с использованием препаратов влияющих на реологические свойства крови (Добровольский Н.А. и др., 1988).

Соединение С-83 при исследованиях на крови кроликов с экспериментально смоделированным синдромом «повышенной вязкости крови», в концентрациях 10 мкМ, 50 мкМ и 100 мкМ, приводило к снижению показателя вязкости крови. При этом соединение С-83 превосходило по активности препарат сравнения как по влиянию на вязкость крови, так и по величине показателя ЕСзо- Следует отметить, что данные соединения преимущественно снижают вязкость крови при низких скоростях сдвига. В свою очередь, это может свидетельствовать об их влиянии преимущественно на агрегацию эритроцитов. Полученные данные подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов под действием изучаемых веществ (соединение С-83 достоверно превосходит препарат сравнения).

При действии изученных веществ на вязкость образцов крови доноров не было выявлено достоверных отличий от контроля.

У больных сахарным диабетом, выявлено увеличение вязкости крови во всем диапазоне изучаемых скоростей сдвига по сравнению с вязкостью крови доноров. Многими исследователями убедительно доказано изменение структурно-функциональных характеристик эритроцитов при сахарном диабете, большинство из которых особенно выражены при течении болезни, осложненном микро- и макро-васкулярными нарушениями (Балаболкин М.И., 2005; Vague Р. et. al, 2004; Galeone., 1998; Дедов И.И. и др., 2000; Балашова Т.С. и др., 1996). Усиление адгезивных и агрегационных свойств эритроцитов, изменение фосфолипидного состава, усиление процессов перекисного окисления липидов мембран, нарушение ионного транспорта через мембрану красных клеток крови усугубляет течение заболевания.

Соединение С-83, при добавление в образцы крови больных сахарным диабетом, нормализует вязкость крови во всем диапазоне скоростей сдвига, не уступая по активности препарату сравнения. Это свидетельствует о влиянии соединений, как на процессы агрегации, так и на пластические свойства эритроцитов. Также следует отметить, что наибольшую активность соединение С-83 и пентоксифиллин демонстрируют в концентрации 100 мкМ. При этом наблюдается четкая зависимость величины эффекта от его концентрации в пробах. Полученные данные также подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов. Однако, по влиянию на данный показатель, в образцах крови больных сахарным диабетом, соединение С-83 практически не отличается по активности от препарата сравнения.

Таким образом, в результате изучения влияния соединения С-83 in vitro на вязкость крови кроликов с «синдромом повышенной вязкостью крови», доноров и больных сахарным диабетом, показали наличие у него гемореологической активности. Учитывая этот факт, представилось целесообразным изучение влияния соединения С-83 и пентоксифиллина (в качестве препарата сравнения) на реологические свойства крови в условиях целостного организма при синдроме повышенной вязкости крови (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктломизированные собаки, адъювантный артрит).

Моделирование тяжелой формы стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета (содержание глюкозы в крови более 17 ммоль/л) на крысах, а так же удаление поджелудочной железы у собак позволило выявить выраженные нарушения реологических свойств крови по отношению к интактным животным. Стрептозотоциновый сахарный диабет проявляется снижением или полным отсутсутствием I фазы секреции инсулина, которая характеризует в основном способность организма утилизировать глюкозу (Баранов В.Г., 1983). Исследования на панкреатэктомизированных собаках проводили на 7 день после операции, когда концентрация глюкозы в крови собак достигала 23-26 ммоль/л, так как по данным Power С. (1964), инсулин исчезает из крови оперированных животных после удаления поджелудочной железы не сразу и определяется в крови еще в течение 3-4 дней после операции. Также, выраженные гемореологические нарушения наблюдаются и при адъювантном артрите. Многими исследователями доказано появление тяжелых нарушений микрореологических свойств крови при аутоиммунных заболеваниях (Фирсов Н.Н.и др., 2003; Носков С.М. и др., 1999).

При исследовании гемореологического статуса у крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом (СД), панкреатэктомизированных собак (ПЭС) и крыс с адъювантным артритом (АА) был выявлен ряд изменений. Так, показатель вязкости крови достоверно возрастал во всем диапазоне скоростей сдвига. Повышение вязкости крови при высоких скоростях на 35% (СД), 39,9% (ПЭС) и на 7,25% (АА), а при низких скоростях на 58,6% (СД), на 71,44% (ПЭС) и на 21,6% (АА) по сравнению с интактными животными (р<0,05), что по-видимому связано со снижением деформируемости эритроцитов и повышением их внутрисосудистой агрегации. Это подтверждается увеличением индекса агрегации как у животных с сахарным диабетом, так и с адъювантным артритом.

Деформируемость эритроцитов - одно из главных свойств, определяющих их нормальное функционирование и продолжительность жизни. Деформируемость обеспечивается структурой мембраны эритроцитов (Апсатаров Э.А. и др., 1994). В данном исследовании установленное снижение деформируемости эритроцитов также было выявлено вискозимитрическим и фильтрационным методами у крыс с сахарным диабетом и адъювантным артритом. Так при скоростях сдвига 300 с"1 наблюдается достоверное увеличение вязкости взвеси эритроцитов по отношению к контрольной группе на 6,31% (СД) и на 35,1% (АА). При низких скоростях сдвига данный показатель составил 22,07% (СД) и 38,3% (АА), что в свою очередь может свидетельствовать о снижении вязкостноэластических свойств мембраны эритроцитов. Также было < выявлено достоверное снижение скорости фильтрации эритроцитов на

68,6% при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете и на 39,6% при адъювантном артрите (р<0.05). Данные изменения могут приводить к уменьшению доставки кислорода в ткани, что и подтверждается достоверным уменьшением индекса доставки кислорода в ткани на 19,02% \ у животных с адъювантным артритом.

В настоящем исследование установлено выраженное изменение механическихг свойств красных клеток крови. Так показатели осмотической И' кислотной резистентности достоверно, по отношению к 1 интактным животным, снижались у крыс с сахарным диабетом на 25,6% и

21,4% соответственно, а у крыс с адъювантным артритом на 17,9% и I

19,0%. Известно, что снижение отрицательного заряда эритроцитов и как

• следствие, электрофоретической подвижности эритроцитов свидетельствует об изменение реологических свойств крови, определяя повышение агрегабельности эритроцитов и тромбообразования (Крылов В.Н. и др., 2005; ЗШкэ .ГЛ7. е1. а1., 1991). Так, у крыс больных сахарным диабетом и адъювантным артритом выявлено достоверное снижение заряда мембран эритроцитов, определяющего силу их взаимного отталкивания, на 45,4% и 28,5%, соответственно (р<0.05).

Хорошо известно, что свойство эритроцитов образовывать агрегаты внутри сосудов связано не столько с изменениями в мембранах самих эритроцитов, сколько с концентрацией в плазме высокомолекулярных белков, в первую' очередь фибриногена, а также некоторых глобулинов (Б^раИ Ь. Е1 а1.,2003; МаЛоп Ъ. е1 а1., 2001; Гущин А.Г." и др. 2000;

МчедлишвилиТ.И., 1991).

В формирование сосудистых осложнений- при сахарном диабете может вносить вклад нарушение функции тромбоцитов. Повышение внутриклеточного кальция в тромбоцитах больных сахарным диабетом является одной из причин повышенной активности тромбоцитов, которая сохраняется и при компенсации углеводного обмена (Кубатиев A.A. и др., 1995).Так, у крыс с сахарным диабетом, при использовании в каческтве индуктора АДФ (5 мкМ), выявлено значительное повышение индекса агрегации тромбоцитов, а так же скорости агрегациштромбоцитов.

Формирование сахарного диабета и адъювантного артрита приводило к изменению показателей свертывания крови. Так, отмечается достоверное повышение содержания фибриногена в плазме на 65,2% (СД) и 41,5% (АА), что дает возможность предположить о возникновение агрегации эритроцитов преимущественно по «мостиковому» типу. Тромбиновое время уменьшалось на 38,4% (СД) и 17,1% (АА) (данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс), а величина растворимых фибрин-мономерных комплексов увеличивалась на 89% (СД) и 76% (АА). Все это может свидетельствовать о повышение свертываемости крови у экспериментальных животных.

Таким образом, наличие выраженных микроциркуляторных нарушений при экспериментально моделируемом сахарном диабете и адъювантном артрите подтверждается достоверными изменениями всех изучаемых реологических параметров.

Чтобы изучить влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на реологические показатели крови, у животных с сахарным диабетом, было проведено две серии экспериментов. В первой сери изучаемые соединения вводили однократно внутривенно крысам со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом, а во второй серии панкреатэктомизированным собакам. Крысы с адъювантным артритом были разделены на две группы. Первой группе животных соединения вводились однократно внутривенно, а второй группе проводилось курсовое введение (двукратное ежедневное введение в течение 7 суток).

У крыс с развившимся сахарным диабетом по сравнению с интактными животными уровень глюкозы был выше в 4,3 раза. Исследуемые соединения при однократном внутривенном введении приводили к некоторому снижению уровня гипергликимии. Так, соединение С- 83 снижало уровень глюкозы на 24,74%, а пентоксифиллин на 20,44% (данные достоверны по отношению к диабетическому контролю).

Соединение С-83 приводило к снижению вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига. Так, при скорости сдвига 300 с"1 снижало вязкость крови на 2,14%, а препарат сравнения на 1,36%. Следует отметить, что при высокой скорости сдвига, данные не носили достоверный характер. При низких скоростях сдвига соединение С-83 достоверно снижает вязкость крови на 13,1%, превосходя по активности пентоксифиллин на 3%. Полученные данные подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов под действием соединения С-83 на 9,17%.

Соединение С-83, вводимое внутривенно, улучшает реологические свойства крови у панкреатэктомизированных собак при всех скоростях сдвига. Уже через 30 минут после введения соединения С-83 панкреатэктомизированным собакам наблюдается достоверное снижение вязкости крови при высоких скоростях сдвига на 39,9%, а при низких скоростях сдвига - на 71,44%. Пентоксифиллин снижал вязкость крови в данном диапазоне скоростей сдвига на 36,6% и 67,97%. Наиболее эффективное снижение показателей вязкости крови для соединения С-83 наблюдается к первому часу исследования. При этом пентоксифиллин уступал по активности исследуемому соединению на 13,3% (300 с"1) и 4,25% (3 с"1). Затем наблюдалась стабилизация вязкости крови, которая находилась на стабильном уровне вплоть до 8 часа исследования. На 8 часу исследование у панкреатэктомизированных собак получавших соединение С-83, по сравнению с шестым часом, наблюдается статистически недостоверное повышение вязкости крови при всех скоростях сдвига на 33,3% при скорости 300 с"1, 50% при скорости 30 с"1, 50,5% при скорости 3 с"1. Пентоксифиллин к 8 часу исследования снижал вязкость крови достоверно лишь при, низкой скорости сдвига (Зс"1); на 47,2%.

Также, исследуемые соединения проявили значительное влияние на показатели вязкости крови у крыс с:, адъювантным артритом. Так соединение С-83', вводимое однократно, статистически не достоверно снижало вязкость крови при высоких скоростях, сдвига- на 6,28%), а при низких скоростях сдвига на 8,39% (р<0.05). Соединение С-83, вводимое в течение 7 дней, также снижает вязкость крови во всем диапазоне скоростей ■ сдвига: При; высокой" скорости сдвига исследуемое соединение снижало вязкость крови на 3,5% не уступая по'активности пентоксифиллину (2,39%). При; низких скоростях сдвига соединения* С-83 достоверно снижало вязкость: крови на 17,4%, при этом по активности превосходя препарат сравнения на 4,7%. Кроме того, под действием соединения С-83 и пентоксифиллина отмечается снижение индекса агрегации эритроцитов при^ однократном введение на 9,17%, а при курсовом введение на 14,25%). Следует отметить, что при курсовом введение наблюдается- повышение реологической" активности соединения С-83, а так же его превосходство, по влиянию на показатели вязкости крови, над пентоксифиллипом.

Таким образом; исследуемое соединение С-83 снижало вязкость крови при всех скоростях сдвига у животных с экспериментальной патологией; оказывая: воздействие, как на деформационный так и на агрегационный компоненты показателя: Следует отметить, что наиболее выраженное1 влияние на показатели; вязкости крови соединение С-83 демонстрирует при курсовом введении. .

Улучшение деформируемости эритроцитов установлено также вискозиметрическим и фильтрационным методами. Так, соединение.С-83, у крыс со стрептозотоцингиндуцированном сахарном диабетом;- при скорости сдвига 300' с"1 снижало вязкость взвеси: эритроцитов на 3,6%, . пентоксифиллин при: данной скорости практически не оказывал реологического эффекта (р>0.05). Наибольшую эффективность исследуемое соединение продемонстрировало при низкой скорости сдвига (3 с'1) - 19,7%, превосходя при этом препарат сравнения на 10,2% (р<0.05). Также соединение С-83' достоверно повышает скорость фильтрации взвеси эритроцитов в 2 раза, при этом на 6,4%, превосходя по активности препарат сравнения.

Изучаемое соединение препятствовало развитию структурно функциональных изменению мембран эритроцитов ^ крыс с адъювантным артритом: Следует отметить, что; соединение^ С-83, вводимое в течение недели, оказывает более: выраженное: влияние на данные процессы; Так, при скорости 300 с"', соединение С-83 и пентоксифиллин снижали вязкость взвеси эритроцитов на^ 4% и 2,47% (р>0,05). При: низкой скорости сдвига соединение: С-83 снижало вязкость, взвеси' эритроцитов на 14,8%, не уступая' по активности пентоксифиллину (р<0,05). Скорость фильтрации эритроцитов достоверно; увеличивалась, на 67% (С-83) и 61,3% (пеитокси ф ил л и н) :

При стрептозотоцин-иидуцированиом сахарном диабете соединение С-83 проявило выраженное влияние на механические свойства эритроцитов. Так, исследуемое соединение достоверно? увеличивало, осмотическую резистентность эритроцитов 24,29%, практически не уступая по активности препарату сравнения (24,82%). Устойчивость эритроцитов к действию соляной кислоты увеличивалась на 7,45% под действием соединения С-83, при этом активность пентоксифиллина составила лишь 2,16% (данные статистически, не значимы). Интенсивность флуоресценции; соединение С-83 повышало на 32,3%, уступая по активность пентоксифиллину на 6,2% (р<0,05),

Изучаемое соединение, вводимое внутривенно, в течение 7 дней крысам с адъювантным; артритом, наиболее выражено, по сравнению с однократным введением, увеличивало; электроотрицательность заряда мембран, эритроцитов на 78,6%, превосходя по ; активности пентоксифиллин на 13.9%. Соединение 0-83 приводило к достоверному увеличению осмотической резистентности эритроцитов на 14,95%, превосходя по активности пентоксифиллин на 3,36%. Устойчивость к действию соляной кислоты соединение С-83 и пентоксифиллин повышали на 23,3% и 22,1% соответственно (р<0,05). Однако наиболее выраженное влияние на данные показатели соединение С-83 проявило при однократном введение.

Снижение степени гемолиза, под влиянием соединений, может свидетельствовать об увеличении степени торрои дальности, т.е уменьшения соотношения площади и объема клетки, с образованием кренированных и кап-форм эритроцитов (Катюхин Л.Н, 2000; Сторожок С.А, 1997). Повышение интенсивности флюоресценции зонда ДСМ4", может свидетельствовать о увеличение электроотрицательность заряда мембран эритроцитов, что в свою очередь также определяет устойчивость эритроцитов к неблагоприятным воздействиям (Крылов В.Н. и др, 2005; Креницкий А.П, 2001).

Соединение С-83 оказывало корректирующее влияние на состояние гиперагрегации тромбоцитов при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете у крыс. Так исследуемое соединение достоверно по отношению к группе крыс с сахарным диабетом ингибировало процесс агрегации на 67,7%, превосходя по активности пентоксифиллин на 52,4%. Скорость агрегации тромбоцитов1 под действием соединения С-83 снижается на 80,4%, при этом препарат сравнения уступал по эффективности на 46,2% (р<0.05). Индекс дезагрегации, характеризующий параметры разрушения образовавшихся агрегатов, для соединения С-84 составил 77,35%, а для пентоксифиллина 21,42% (данные статистически не достоверны).

При экспериментальном сахарном диабете и адъювантном артрите соединение С-83 оказывало выраженное влияние на коагуляционный статус. На активность факторов свертывания внутреннего и внешнего путей активации у крыс с сахарным диабетом соединение С-83 оказывало относительно нормализующее действие. Однако, нормализуя показатели коагулограммы при адъювантном артрите, данное соединение практически не превышает по эффективности препарат сравнения.

Острое нарушение кровотока является результатом критического снижения кровотока в<микроциркуляторной системе головного мозга, что часто связано с поражением артерий крупного и среднего диаметра и всегда сопровождается существенным ухудшением реологических параметров крови (Мирзоян P.C. и др., 2000; Вознюк И.А. и др., 2003). Поэтому следующим этапом исследований было изучение действия соединения С-83 на изменение локального мозгового кровотока при глобальной преходящей ишемии мозга у крыс.

Соединение С-83 и пентоксифиллин усиливают мозговой кровоток в условиях нормы и патологии вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий. Физиологический раствор, вводимый внутривенно контрольной группе животных, не взывал изменение кровотока в проекции среднемозговой артерии. Исследуемое соединение вызывало повышение скорости мозгового кровотока от исходного уровня в среднем на 84.6% (р<0.05). Пентоксифиллин вызывал менее выраженное увеличение скорости кровотока на 58,7% (данные достоверны по отношению к исходным показателям).

Перевязка общих сонных артерий и снижение артериального давления, во всех экспериментальных группах животных, приводила к уменьшению мозгового кровотока в теменной области. Изменения данного показателя после окклюзии регистрировались в течение часа. Так в контрольной группе животных (физиологический раствор) выявлено наиболее сильное достоверное снижение мозгового кровотока на 61,17%, при этом данные изменения являются необратимыми.

Исследуемое соединение после перевязки общих сонных артерий с 5 минуты достоверно увеличивает скорость мозгового кровотока на 92%. При этом в первые 10 минут от начала ишемии данный параметр увеличивается практически в два раза, а начиная с 15 минуты постепенно снижается до уровня кровотока не ишемизированных животных, после введения соединения С-83, при этом соединение С-83 статистически достоверно^ превосходит препарат сравнения. Следует отметить, что пентоксифиллин постепенно, начиная с 5 минуты исследования увеличивает скорость локального мозгового- кровотока и к 60 минуте восстанавливает, его до исходного уровня не ишемизированных животных.

Таким образом, соединение С-83 проявило выраженное корректирующее влияние на гемореологичексий профиль у животных с экспериментальной патологией. Поэтому представляется целесообразным детальное изучения механизмов гемореологической активности исследуемых соединений.

С целью изучения механизма- действия соединения С-83 и• пентоксифиллина было исследовано их влияние на агрегацию и деформируемость эритроцитов-заряды мембраны и вязкостноэластические свойства красных„ клеток крови; а также влияние * на- процессы- адгезии лейкоцитов и агрегации тромбоцитов.

Известно, что скорость агрегации эритроцитов пропорциональна числу связей с молекулами фибриногена и иммуноглобулинов (Катюхин Л.Н., 2001).

При- микроскопическом- исследование выявлено, что соединение С-831 снижало скорость агрегации эритроцитов в образцах крови кроликов подвергшихся тепловому воздействию:

На следующем этапе изучалось влияние соединений на параметры алциан-индуцированной агрегации эритроцитов прогретых образцов крови кроликов в концентрациях 1х10-4; 1хЮ"5 и 1><106. В исследованиях Булегенова К.Е. и др.(1993) показано, что алциановый голубой-зависимая агрегация эритроцитов происходит с участием электростатических сил и совокупно зависит от фракционного, состава эритроцитов1 различного' возраста, а также изменений содержания холестерина в мембранах эритроцитов. Соединение С-83 проявило- наибольшую1 активность в концентрации 1x10"4 моль/л, достоверно снижая индекс агрегации эритроцитов на 49,82 %. Следует отметить, что снижение скорости агрегации эритроцитов и увеличение индекса дезагрегации эритроцитов под влиянием исследуемых соединений, не носили достоверный характер.

Большое значение в процессе агрегации имеет величина заряда эритроцита (Сторожок С.А. и др., 1999). Влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на интенсивность флуоресценции зонда ДСМ* в суспензии эритроцитов изучали в концентрациях 10 мкМоль/л; 100 мкМоль/л; 1000 мкМоль/л. Применение флуоресцентного зонда ДСМ4" выявило увеличение поверхностного заряда эритроцитов под действием как соединения С-83, так и пентоксифиллина. Так соединение С-83 в концентрации 10 мкМоль/л достоверно превосходит по активности пентоксифиллин на 30,7%. В концентрации 100 мкМоль/л соединение С-83 и пентоксифиллин увеличивали данный показатель на 74,2% и 46,6%, соответственно (данные достоверны по отношению к контролю для соединения С-83). Следует отметить, что при увеличении концентрации до 1000 мкМоль/л интенсивность флуоресценции возрастала у обоих соединений, при этом соединение С-83 по активности не превосходило пентоксифиллин. Полученные данные могут свидетельствовать об увеличении электроотрицательности мембран эритроцитов, под влиянием изучаемых соединений, что может обуславливаться Са" зависимой агрегацией основного белка мембранного цитоскелета эритроцитов -спектрина, которая приводит к переориентации мембранных протеинов (МимЫ С. В., 2002).

Снижение деформируемости эритроцитов и повышение их агрегации происходят при участие различных механизмов (Ганелина И. Е. и др, 2000). Нарушение деформируемости эритроцитов, в немалой степени, зависит от эластичности мембраны эритроцитов, первичную роль в которой играет спектрин, и микровязкостью мембраны, которая характеризует сопротивление скорости деформации (Нагс1етапМ.К. е1.а1., 2003; Катюхин Л.Н., 1995; МищукИ.И. и др., 1993).

В результате проведенного исследования выявлено, что соединение С-83» достоверно, по отношению к прогретым образцам крови кроликов, увеличивет скорость фильтрации эритроцитов на 24,82%. Пентоксифиллин повышал способность эритроцитов к деформации на 20,91% (р<0,05). В свою очередь это свидетельствует о повышение деформабельности эритроцитов.

Установление механизма влияния исследуемых соединений на деформабельность эритроцитов методом вискозиметрией взвеси отмытых эритроцитов позволило определить следующее. Так, при добавлении исследуемых соединений^ в прогретые образцы крови кроликов в концентрациях 1хЮ"4, 1хЮ"5, Iх 10"6 моль/л наблюдается снижение вязкости при различных скоростях сдвига. Вискозиметрические методики с использованием ротационных вискозиметров позволяют выделить отдельно участие клеточной поверхности и внутреннего содержимого эритроцитов в их деформируемости, (Катюхин Л.Н., 1995). Наибольшее влияние на данный показатель соединения оказывают при низких скоростях сдвига, где главными определяющими являются вязкость самой мембраны и клеточная геометрия. Также, выявлена зависимость реологического эффекта от концентрации соединений.

Исследуемое соединение оказывало выраженное влияние на показатель анизотропии флуоресценции - оптический эквивалент вязкости мембраны в концентрации 1x10"4, 1x10"5, 1 х Ю"6. Однако соединение С-83 оказывало достоверное, по отношению к контрольным образцам, влияние на данный показатель лишь в концентрации 1хЮ"4, а в концентрации-1х 10" 5 и 1хЮ"6 уступало по активности пентоксифиллину (р>0.05).

Не менее важное значение в нарушении внутрисосудистого гомеостаза играет и функциональное состояние тромбоцитов центрального звена гемокоагуляции (Баркаган З.С., 2001; 1ез1у 5. оХ. а1., 2003). Соединение С-83 снижало.индекс агрегации тромбоцитов на 43,5%, превосходя пентоксифиллин на 42,5% (р<0.05). Индекс дезагрегации исследуемые соединения в равной степени повышали на 9,63%. Скорость агрегации тромбоцитов снижалась на 27,7% для соединения С-83, а для пентоксифиллина повышалась на 25,6%.

Лейкоциты также могут нарушать нормальный кровоток в микрососудах капиллярного и венозного ranai в следствие закупорки микрососудов (Петрищев H.H. и др.,2003; Sutton D.W. et. al., 1992; Мчедлишвили Г.И., 1991).

В данном исследовании выявлено, что изучаемые соединений приводили к снижению индекса адгезии лейкоцитов в образцах крови кроликов с «синдромом повышенной, вязкости» крови, смоделированным методом теплового воздействия.

Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что все изученные вещества, относящиеся к 7,8-замещенным производным ксантина, проявили гемореологическую активность различной степени выраженности. Реологическая активность соединений в значительной степени зависит от их химической» структуры. Так, высокий уровень гемореологической активности определяется! наличием- тиетанильного радикала- в N и тиогидразидного заместителя1 в 8 положение, а наиболее активно ингибировало агрегацию эритроцитов соединение C-83j что в свою очередь связано с введением окси-групп в тиетанильный радикал. У данного соединения наличие высокой эффективности сочетается с низкой токсичностью. При этом по широте терапевтического действия данное соединение превосходит пентоксифиллин.

В результате проведенного анализа зависимости гемореологической активности производных ксантина от их физико-химических характеристик было выявлено, что данным видом активности будут обладать достаточно полярные соединения. Так же, для проявления реологической активности соединениям необходимо обладать определенной степенью липофильности, чтобы взаимодействовать с мембранами эритроцитов. Рассчитанная и экспериментально проверенная классическая зависимость гемореологической активности производных ксантина от их физикохимических параметров может являться основой для поиска и оптимизации синтеза новых производных ксантина с заданной структурой и уровнем гемореологической активности.

В исследованиях in vitro на модели сформировавшегося «синдрома повышенной вязкости крови», а также в образцах крови больных сахарным диабетом соединения С-83 по влиянию на вязкостные характеристики крови проявило выраженную гемореологическую активность.

Исследования, проведенные на экспериментальных моделях, определили наличие выраженного гемореологического эффекта у соединения С-83. При изучении механизмов гемореологических эффектов, было выявлено, что в основе действия соединения С-83 лежит его мембранотропная активность (повышение электроотрицательности мембраны, увеличению деформируемости мембран эритроцитов).

Таким образом, гемореологическая активность, проявленная соединением С-83, позволяет предположить перспективность дальнейшего изучения фармакологических свойств этого соединения с целью создания на его основе нового препарата, превосходящего по активности известный препарат пентоксифиллин.