Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Поиск и изучение лекарственных средств, влияющих на воспалительный процесс

ООЗОВ7271

На правах рукописи

СБРГИБНКО Аэлита Валерьевна

ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС

14.00.25 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

МОСКВА -2006

На правах рукописи

СЕРГИЕНКО Аэлита Валерьевна

ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС

14.00.25 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА -2006

Работа выполнена:

- в Институте клинической кардиологии им. АЛ. Мясникова ФГУ РКНПК Росздрава, г. Москва,

- в ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава, г. Пятигорск.

доктор медицинских наук, профессор

ИВАШЕВ Михаил Николаевич

доктор медицинских наук, профессор КОЗЛОВ Иван Генрихович доктор медицинских наук, профессор МИРЗОЯН Рубен Симонович доктор биологических наук, профессор МАКСИМЕНКО Александр Васильевич Московский государственный университет им. М.ВЛомоносова

Зашита состоится ОрА^А^ЛЛЛШ г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 001.024.01 при ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН, по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8

С диссертацией можно ознакомиться в ученой части ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.

Автореферат разослан «М2006г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор медицинских наук Е.А. ВАЛЬДМАН

Научный консультант

Официальные оппоненты

Ведущая организация

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Социальная значимость воспалительных заболеваний растет во всем мире, что связано с особенностями жизни современного человека. Острые воспалительные процессы чаще, чем прежде принимают затяжное течение, но наряду с этим возрастает и число истинно хронических воспалительных заболеваний. Воспаление является поливалентным, весьма динамичным процессом с множеством альтернативных и перекрещивающихся связей. Сложность воспалительного процесса состоит в том, что симптомы воспаления являются отражением комбинации функций разных клеток, находящихся в определенных промежутках времени в разном функциональном состоянии. В развитии воспаления принимают участие различные медиаторы, имеющие разные концентрационные и диффузные характеристики. Очевидно, что понимание четкой характеристики участвующих в реакции различных типов клеток и медиаторов при разных формах воспаления необходимо для целенаправленного поиска лекарственных средств, влияющих на определенные его стадии. (И,С.Гущин 1998г, S.A. Doggell 2005).

Воспаление - это типовой физиологический процесс, который развивается в васкуляризованных органах и тканях в ответ на повреждение (А.Д.Адо, 1994). Как аутохтонный процесс, воспаление самопроизвольно заканчивается при устранении причинного агента. Однако, если флогогенный агент является неметаболизируемым (инородные тела), персистирующим в тканях (некоторые микроорганизмы), либо не может быть радикально устранен (аутоантиген), то создаются условия для продолжения альтерации и экссудации на фоне развернувшихся пролиферативных процессов (Т. Ando, 2000). .При

-3-

хроническом воспалении происходит изменение структуры органов вследствие неполной регенерации, фиброплазии и некроза, которые всегда присутствуют в очагах хронического воспаления (J.M. David" son, 2003). В результате этого, в органе могут образовываться полости, окруженные пиогенными капсулами - абсцессы, возникнуть образования соединительной ткани, с нарушением органной микроархи-текгуры. Репаративные процессы разворачиваются по мере затухания острой фазы воспаления и сводятся к регенерации и фиброплазии (G.Barsh, 1997). Если полное количественное восстановление клеток невозможно, что наблюдается при потере клеточных элементов, либо при недостаточной регенерации, то происходит восполнение дефекта соединительной тканью или фиброплазия, т.е. репарация по типу субституции. Формируется молодая, богатая регенерирующими, высокопроницаемыми сосудами грануляционная ткань, затем переходящая в соединительную ткань, оставляющую рубец, (пример - очаг кардиосклероза после инфаркта миокарда, глиоз после энцефалитов и при эпилепсии) (Г.А. Лапий, 2001, S.J. McPhee, 1997).

Пролиферация происходит в очаге воспаления все время, но главным условием успешного хода репаративного процесса при воспалении служит затухание острых альтеративных и экссудативных изменений. Это достижимо лишь при условии полной деструкции или устранения флогогенного агента. В противном случае, воспаление может стать хроническим и не приведет к полной реституции. В настоящее время фармакотерапия воспалительного процесса независимо от его стадии и топографии, сводится к подавлению отдельных симптомов, либо реакции в целом (Sh. Kery, Н. Li, 2000). Данное обстоятельство не отражает принцип комплементарной реактивности

биологических систем. Широко применяемые препараты для терапии

-4-

воспалительного процесса не всегда имеют только положительные фармакодинамические характеристики. Стероидные и нестероидные противовоспалительные средства, влияющие на неиммунные формы острого и хронического воспаления, а также на некоторые типы иммунного воспаления, обладают различным, но выраженным токсическим действием, особенно при длительном применении. Такие препараты при длительном применении понижают резистентность к инфекциям, провоцируют эндоэкологический дисбаланс, нарушают обмен углеводов, жиров и белков, подавляют активность системы гипоталамус - гипофиз - надпочечники. Поэтому актуальной задачей является поиск и фармакологическое изучение лекарственных средств с оптимальным влиянием на воспаление с учетом различных его стадий, у которых указанные отрицательные свойства отсутствуют.

Для идентификации воспаления на ранних стадиях необходимы препараты с радиоактивными изотопами (Р.О.СатЫ, 1996). С применением радионуклидных препаратов процесс диагностики воспалительного процесса может быть безболезненным и безопасным. Это определяет перспективность поиска средств и методов визуализации воспаления. В клинической практике диагностика воспалительного процесса базируется на общих изменениях периферической крови: количественные и качественные характеристики лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов, при хронических воспалительных процессах уровень С - реактивного белка, сиаловых кислот, сдвиг белковых фракций, уровня провоспалительных цитокинов: 1Ь -I, -6, -8 (Н.М Бережная, 2004; О.Ь.Мас1Шуге, 2001; .1. ОетЫпБ!«, 2003). Однако, эти клинические и биохимические тесты носят неспецифический и не направленный характер, что затрудняет определение топографии

и стадии воспалительной реакции. Цитокиновый регулятор неспеци-

-5-

фического воспалительного процесса модифицирует микроокружение в очаге поражения. Именно этот факт является основополагающим для поиска диагностического субстрата визуализации стадий воспаления. Создание, тестирование и клиническое применение визуализации воспаления в диагностических и в лечебных целях может способствовать точной диагностике патологического процесса на ранних этапах. Дальнейший прогресс радионуклидной диагностики и терапии связан с разработкой радиологических препаратов с оптимальным включением в очаг воспаления. Отработка на животных различных моделей воспаления, максимально приближенных к таковым в клинической практике и отбор оптимального радиофармацевтического препарата, безопасного и эффективного в применении, создание, тестирование препаратов для визуализации воспаления, будет способствовать рациональной фармакотерапии воспалительного процесса в клинической практике.

Цель работы

Разработка методологии поиска и изучения новых комплексных препаратов для фармакологической разнонаправленной регуляции воспалительного процесса.

Задачи исследования

1. Провести систематическое изучение известных и новых фармакологически активных соединений минерального, биологического и синтетического происхождения, влияющих на процесс воспаления.

2. Изучить общетоксическое и фармакологическое действие нового гастропротекторного препарата с противовоспалительным компонентом действия - гастробиол ЦД.

3. Провести углубленное экспериментальное изучение лекарст-

венных форм микробиологического Р-каротина - олеогеля и препаратов, аппретированных на волокнистых материалах, влияющих на воспалительный процесс.

4. Определить общетоксическое действие и фармакологическую активность нового противовоспалительного хондропротекторного комплексного препарата - суппозиториев глюкозамина с индомета-цином.

5. Разработать метод визуализации воспалительного процесса посредством радионуклидной диагностики.

Научная новизна работы

Впервые проведено систематическое изучение влияния 75 новых и известных соединений на воспалительный процесс. Выявлена закономерность между влиянием на воспаление и составом препаратов. Предложена систематизация средств, влияющих на воспаление.

Впервые изучена и предложена композиция облепихового масла с витамином и и магния оксидом (гастробиол ЦД), которая обеспечивает противовоспалительную и гастропротекторную активность, накопление препарата в очаге воспаления и возможность длительного применения комплекса.

Выявлена противовоспалительная и репаративная активность комплекса, содержащего микробиологический (3-каротин и полиненасыщенные жирные кислоты (олеогель). Изучено и предложено сочетание Р-каротина с хлоргексидином, обладающее выраженным противоожоговым и антимикробным действием (тканевые аппреты)-

Установлена эффективность композиции, содержащей глюкоза-мина гидрохлорид с индометацином в суппозиториях при остром и хроническом воспалении с хондропротекторным действием.

Разработана методология визуализации воспалительного процесса с использованием радиоизотопных препаратов """Гс. Выявлена способность метронидазола максимально накапливаться в воспалительном очаге, что позволяет предложить его в качестве маркера воспаления.

Научно- практическое значение работы

Проведенное изучение соединений минерального, биологического и синтетического происхождения на различных моделях воспаления и предлагаемая систематизация этих средств, создает основу для направленного поиска потенциальных препаратов, влияющих на воспалительный процесс.

Выявленное впервые антиульцерогенное, противовоспалительное, регенеративное и спазмолитическое действие комплекса обле-пихового масла с витамином и и магния оксидом (гастробиол ЦЦ), который не влияет на желудочную секрецию, обладает антиокси-дантной и мембраностабилизирующей активностью, позволяет рекомендовать эту композицию для клинического изучения в качестве противоязвенного препарата.

Результаты проведенного фармакологического изучения препаратов микробиологического Р-каротина - мази (олеогель) и тканевых аппретов, свидетельствующие о выраженном их противоожоговом и антимикробном действии, указывают на перспективность их применения в терапии воспалительных заболеваний в дерматологии и хирургии.

Доказанная эффективность сочетания синтетического противовоспалительного препарата индометацина с хондропротекторным средством глюкозамином при ректальном способе введения в качест-

ве корректора нежелательных эффектов индометацина может быть рекомендовано для терапии воспалительно-дегенеративных процессов опорно-двигательного аппарата.

Разработанная методология визуализации воспаления с использованием радиоактивного технеция и способность метронидазола накапливаться в зоне воспаления, дает возможность использовать его в медицинской практике, как с целью диагностики, так и мониторинга терапии воспалительных процессов.

Результаты диссертационного исследования внедрены в научно-исследовательскую работу лаборатории экспериментальной фармакологии отдела радиологических исследований НИИ кардиологии им. А.Л.Мясникова и учебный процесс кафедр фармакологии ПятГ-ФА, Ставропольской государственной медицинской академии.

Связь диссертационного исследования с научно-исследовательскими программами

Диссертационная работа выполнена в НИИ клинической кардиологии им. А.Л. Мясникова Российского кардиологического научно-производственного комплекса, в Пятигорской государственной фармацевтической академии в соответствии с планами научно-исследовательских работ. (№ госрегистрации 01.2.00 312721).

Объем и структура диссертации

Работа выполнена на 330 стр. текста компьютерного набора, иллюстрирована 86 таблицами, 28 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, общего заключения и выводов. Список цитируемой литературы содержит 439 источника, включая 197 иностранных источников.

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены на VI, VII, VIII, IX, X, XI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", (г. Москва, 1999-2005гг.), на 54-59 ежегодной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 1999-2004гг), на республиканской научно-практической конференции "Здоровье и болезнь как состояния человека", г. Ставрополь, 2000г. Клиническая фармакология (г. Москва; 2001-2003гг.); Международном симпозиуме по аллергологии (г. Сочи, 2003), Конгрессе иммунологов (г. Санкт-Петербург, 2003г.). На X Конгрессе иммунологии и аллергологии (г.Москва 2006г.).

Публикации

По теме докторской диссертации опубликовано 46 научных работ, 2 патента РФ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Дизайн исследования

Работа выполнялась стандартными и модифицированными методами in vitro, in situ, in vivo на куриных эмбрионах, изолированной трахее, изолированном кишечнике, эритроцитах, микроорганизмах, на белых крысах, белых мышах, кроликах, морских свинках, собаках, содержащихся на стандартном режиме вивария. Для решения поставленных задач использовался комплекс современных и модифицированных методик, что позволило исследовать влияние изучаемых веществ на различные звенья системы репарации в норме и при патологии, получить количественные и динамические характеристики. Разработка новых методологических подходов базировалась на данных

экспериментальной фармакологии и радиофармацевтики с использо-

-10-

ванием адекватных экспериментальных моделей. Применяли функциональные методы для оценки динамики воспалительного процесса.

Моделировали экспериментальную патологию животных: воспаление кожи (имплантация инородного тела, отек, травма, ожог, раздражение); воспаление печени (гепатопатия, индуцированная химическим ядом — тетрахлорметан - и лекарственными препаратами -индометацин, парацетамол); воспаление слизистой оболочки желудка методом создания преднизолоновой, алкогольной, гистаминовой, стрессорной язвы, ишемия привратника; воспаление суставов: скарификация головки бедренной кости, введение адьюванта Фрейнда.

Изучали свойство различных объектов уменьшать образование фиброзно-грануляционной ткани в воспалительном очаге, формирующемся в месте имплантации под кожу инородного тела. Разнообразные параметры, характеризующие развитие гранулемы, позволяли судить о влиянии изучаемых объектов на отдельные фазы воспалительного процесса, возникающего при имплантации инородного субстрата. Критериями выраженности воспалительной реакции служили время и степень появления васкуляризации, гиперемии и экссудации.

Материалы исследования

В экспериментах использовались субстанции препаратов и их лекарственные формы, а также субстанции вспомогательных веществ, полученные с заводов-изготовителей с соответствующими протоколами анализа по требованиям НД (ГФ СССР X и XI изд., отдельных ВФС и ФС, ГОСТ, ОСТ и ТУ). Опытные группы животных получали изучаемую субстанцию, таблетки, суппозитории, растворы, мази, тканевые аппреты, растительные сборы. Контрольные группы получали эквиобъемно раствор физиологический, Рингера-Локка,

placebo. Группы животных сравнения получали зарегистрированные препараты: Алфлутоп 10 mg\l ml (Biotechnos S.A. Румыния) Серия № 08,02,0113; Индометацин 25 mg (Balcanpharma, Болгария), серия 57.98.01; в дозировке 12мг/кг мышам и бмг/кг крысам; Анальгин 500 mg Дальхимфарм, 20 мг/кг; Пирогенап отечественный «Предприятие по производству бак препаратов НИИЭМ», г. Москва, Серия 946,4 К №6388. Дибазол таблетки 20 мг "Фармакон", г.С-Петербург, Р.70.421.16 1мг/кг, Преднизолон таблетки 5 мг "Щелковский витаминный завод", г.Москва, Р.71.609.43 20 мг/кг. Твердую субстанцию (порошок, таблетки, гранулы) доводили до состояния гомогенной массы и полученную суспензию использовали в опытах: для нанесения на хорион-аллантоисную оболочку, слизистую оболочку конъюнктивы морских свинок, кроликов, per os мышам, крысам, смешивания с пищей собакам.

Жидкую субстанцию разводили соответствующим растворителем (очищенная вода, физиологический раствор, глицерин, растительное масло) и применяли аналогично, либо инъекционно внутри-брюшинно, внутривенно (в хвостовую вену крысам, в ушную вену кроликам), подкожно, внутримышечно (мышам, крысам), внутрисер-дечно морским свинкам. Растительные сборы готовили согласно аннотации ex tempore и использовали в эксперименте в виде настоев. Мази и кремы наносили на эпилированные участки кожи спины крыс, мышей. Тканевые аппреты фиксировали кроликам с помощью бинтовой повязки, либо лейкопластыря. Суппозитории готовили в лабораторных условиях, отливали в формы d=6 mm, вводили крысам per rectum в дозе, соответствующей коэффициенту межвидового переноса доз с интервалом 12 часов 2 раза в сутки. Местно: на слизистой оболочке глаза морских свинок, закапывая под верхнее веко в

-12-

объеме 0,3мл. Крыс запаивали per os методом принудительного зондирования с помощью металлического зонда с оливой в теплом (37,0±0,1 °С) виде. Собакам субстанцию закладывали на корень языка в смеси с небольшим количеством пищи. При введении инъекционным способом: внутрибрюшинно мышам, крысам, морским свинкам, внутривенно (в хвостовую вену крысам, мышам, в ушную вену кроликам), в яремную вену крысам, внутрисердечно морским свинкам.

Лабораторные животные, клетки и ткани

Неимбредные мыши ш20±2г (852), собаки m 15±2кг (36). Крысы Wistar, ш 210±10г(754), August m 200±10г(72). Куриные эмбрионы Leggron 9-10 сут 458шт, морские свинки m 350-400г(72). Животные выращены в питомнике РКНПК МЗ РФ (г. Москва), филиале НИИ биоорганической химии (г. Пущино), ПятГФА, (г. Пятигорск), содержались на типовом режиме вивария: t° воздуха 22±2 °С, 12-часовой синхронизированный световой режим, комбинированный корм и вода ad libitum. В эксперименте использовались изолированный кишечник, трахея, эритроциты, микроорганизмы.

Методы определения безопасности применения

Раздражающее действие оценивали тестом на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона, НЕТ - САМ test, на конъюнктиве морских свинок и кроликов (П. Михайлов, 1985г.). Острую и субхроническую токсичность, ульцерогенное действие изучали согласно "Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" (В.П. Фисенко, 2000) с атрибутом LD50. Для характеристики степени повреждающего действия объектов в разных дозах избрали 6-ти недельный срок наблюдения за состоянием крыс и собак.

-13-

Методы изучения специфической активности

Опыты in vivo ставили моделированием патологических состояний экспериментальных животных (JI.H. Сернов, 2000, В.В. Гацура, 1974). Определяли влияние субстанций и препаратов на процесс воспаления на моделях острого экссудативного и пролиферативного воспаления, экспериментальной гипертермии крыс Wislar, хронического аутоиммунного воспаления крыс August. Определяли порог болевой чувствительности раздражением электрическим током крыс. Длительность кровотечения находили скарификацией подъязычной вены крыс. Репаративную активность устанавливали на модели термического повреждения кожи крыс контактным способом, линейной кожной раны и острого пролиферативного воспаления.

Гастропротекторный эффект изучали моделированием стероидной (преднизолон 20 мг/кг), этаноловой (80% 8 мл/кг), гистаминовой (0,1% раствора бмг/кг), стрессорной (фиксирование на спине 60 мин) язвы желудка крыс (Н.Б.Зупанец, 1993). Использовали метод 7-ми часового лигирования привратника собак по H.Shay (1945). Для определения спазмолитического эффекта моделировали спазм гладкой мускулатуры кишечника гистамином и ацетилхолином. Измерение и фиксирование размеров и площади язв производили с помощью компьютерной программы Intel(R) Play<tra) QX3(tm) Computer Microscope.

Параклинические и биохимические показатели мочи, сыворотки определяли стандартными методами. Влияние на стабильность биомембран и антиоксидантную активность определяли накоплением активных продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, степенью спонтанного гемолиза эритроцитов in vitro, кислотно - индуцированным и щелочным гемолизом эритроцитов in vivo (Л.И. Андреева, 1988).

Проводили радиологическое исследование с использованием радиоизотопных препаратов "тТс, для чего модель острого экссуда-тивного и пролиферативного воспаления интегрировали с сцинти-графией крыс и прямой радиометрией (M.Welling, 2000).

Статистическая обработка результатов исследования

Статистическую обработку опытов проводили с использованием t-критерия Стьюдента для независимых рядов (Р.Б. Стрелков, 1986). Изменение исследуемых показателей считали статистически значимыми при р< 0,05. Расчёты результатов проводили в пакете компьютерной программы Microsoft Excel Ver 9,2000 (H.B. Макарова, 2002).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Средства, влияющие на развитие воспалительного процесса

Проведено систематическое изучение влияния 75 новых и из-J вестных соединений различного состава и происхождения по поиску! наиболее активных соединений на воспалительный процесс. Установлено, что на воспаление оказывают влияние препараты из разных фармакологических групп. Выделены соединения различной структуры с оптимальным воздействием на воспалительный процесс, способствующие репаративной регенерации тканей, утраченных в результате первичного альтеративного воздействия и вторичной ауто-альтерации. Предпринята попытка решить проблему терапии воспалительных процессов препаратами с разным механизмом действия в зависимости от стадии и характеристики воспалительного процесса. Систематизированы препараты, влияющие на процесс воспаления: флогогены (индукторы воспаления), флоголитики (ингибиторы воспалительного процесса) и флогомодуляторы - средства,

поддерживающие некоторые стадии воспалительного процесса при ингибировании других (от латинского тосМайо-мерность, размерность). Такой методологический подход к модуляции воспалительного процесса основан на проведенных теоретических и экспериментальных изысканиях в данной области.

Фармакологическая коррекция первичной альтерации не представляется возможной, но все остальные стадии процесса воспаления могут быть подвергать терапии. Стадию вторичной аутоальтерации и экссудации следует блокировать (ингибировать), стадию пролифера-тивного воспаления необходимо пролонгировать.

Снижают вторичную аутоальтерацию иммунокорректоры, анестетики, стероидные препараты. Традиционно применяемая тактика в лечении воспалительных заболеваний противовоспалительная, в результате чего продуктивная стадия пролиферативного воспаления с последующей репаративной регенерацией так же оказываются блокированными.

Систематическое изучение фармакологических средств по влиянию на воспалительную реакцию различного характера и стадии позволил предположить следующую закономерность: влияние на воспаление должно быть многосторонним и поливалентным. Именно такой подход к модуляции воспалительного процесса с учетом различных его стадий отражает принцип комплементарной реактивности биологических систем и позволит завершиться воспалению наиболее продуктивно и оптимально. В этой связи для наиболее эффективного течения воспалительного процесса как защитной реакции организма предлагается чрезмерно сильное антиэкссудативное воздействие препаратов снизить, но при этом контролируемо индуцировать про-

лиферативную стадию воспалительной реакции.

-16-

Средства, модулирующие воспаление

Ш1ДУКТОРЫ ВОСПАЛЕНИЯ

- (флогохньп

Фтич, хцмичоскнг,

биологически»;, ««дняторы, яды пче/т, змей, прижигающие,

СГИМулЯНфЫ афферентной ииисрвзинп. алкалоиды. сп.щ Ме

■ S■ , ' ■

ШШОШ ВОСПАЛЕНИЯ-

(флогомодуликры)

ИНГИБИТОРИ ВОСПАЛЕНИЙ

: (фДОГОЛИП1КИ)

я ммув омодуляте ры, аитн- к лроовдщанты, ср. метав олкч et кой

коррекции, ней ро протекторы, . витамины, алигоэлемевты

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ: КПВС, стероидные,

ферменты, а и тифе рентные препараты НЕСПЕЦНФИЧЕСКИЕ: транквилизаторы, антидепреесанты, анестетики, антибиотики, ' . ■ - им мут* одеа ресеа иты, и а ркозйые л с.

Рисунок I СИСТЕМАТИЗАЦИЯ ПРЕПАРАТОВ ВЛИЯЮЩИХ НА ВОСПАЛЕНИЕ

Средства с разным механизмом действия влияют на воспаление по-разному с учетом его стадии и степени; воспалительным процессом можно и нужно управлять для достижения восстановления нормально функционирующих клеток взамен утраченных и (или) поврежденных. Создание и изучение лекарственных препаратов с полимодальным механизмом действия для оптимального воздействия на воспаление актуально, перспективно и своевременно. Применение комплексных многокомпонентных лекарственных фор и позволяет использовать фармакологическое в !аимодействие разных компонентов, входящих в препарат - потенцированный синергизм. Это позволит оказывать многостороннее воздействие на патологический про-

-17-

цесс, снизить дозу препаратов, следовательно, и лекарственную нагрузку на организм, что особенно важно в случае длительного лечения хронического воспаления. Классические стимуляторы воспаления (абсолютные флогогены) целесообразны и необходимы при вялотекущих хронических воспалительных процессах. Препараты с резко выраженным ингибирующим действием на все стадии воспалительного процесса (флоголитики) целесообразны при острых экс-судативных воспалительных реакциях, при неконтролируемом и системном действии медиаторов воспаления (аллергические реакции немедленного типа, общая интоксикация организма). Препараты с выраженным потенцированием одних стадий воспаления при блокировании других, так называемые флогомодуляторы - модуляторы процесса воспаления необходимы при поливалентной регуляции де-компенсированных длительных воспалительных проявлениях.

Фармакологическое изучение противоязвенного противовоспалительного препарата

Воспаление не является органо-специфичным процессом и сопровождает многие патологические состояния, в том числе, органов ЖКТ. Язвенно-эрозивное поражение желудка и 12-перстной кишки в виде самостоятельного и сопутствующего заболевания, как отрицательный токсический побочный эффект лекарственных средств, затрагивает все слои населения. Длительная противоязвенная тройная или квадротерапия, как правило, направлена на подавление кислотности, что приводит к атрофическим изменениям слизистой оболочки желудка, кампилобакгерному гастроэнтериту, колонизации нехе-ликобактерных микроорганизмов, нарушениям динамического равновесия микрофлоры. Кроме того, возникают проблемы переносимо-

сти, взаимодействия, противопоказаний лекарственных препаратов. Именно поэтому в фармакотерапии воспалительного поражения слизистой оболочки желудка и кишечника большое значение придается средствам, повышающим резистентность и регенеративную способность слизистой оболочки желудка и кишечника растительного, либо комбинированного состава во избежание побочных токсических эффектов. Более быстрое восстановление поврежденной ткани могут индуцировать каротиноиды, способность которых нивелировать недостаток пролиферации и эпителизации, давно и хорошо изучен. Каротины играют важную роль в формировании эпителиальной ткани, снижают проницаемость слизистой оболочки пищеварительного тракта для токсических веществ. Витамин U - метилметионин суль-фоний, способствует регенерации клеток эпителия. Микроэлемент Mg - физиологический природный антагонист кальция, принимает участие в сопряжении процессов возбуждения и сокращения мышечных клеток, влияет на различные ферментные системы, что позволяет принимать его в качестве лекарственного препарата. Входит в состав многокомпонентных препаратов, применяемых при патологии ЖКТ. Поскольку лекарственные формы облепихового масла с витамином U и магнием отсутствуют, фармакологическое изучение композиции, содержащей указанные компоненты актуально и своевременно. Комплексу лиофилизата облепихового масла с витамином U и магния окисью, патентное наименование гастробиол ЦЦ посвящено отдельное углубленное исследование, с целью довести композицию до препарата. Актуальность исследований связана с необходимостью производства отечественных антиульцерогенных препаратов. По Hodge и Sterner и классификации Сидорова субстанция для наполнения капсул относится к практически нетоксичным веществам, LD50 >

-19-

5000 мг/кг, при длительном применении не оказала общетокснческо-то и раздражающего действия на органы и ткани морских свинок, мышей, крыс и собак. Гастробиол объединил в себе положительные стороны влияния на саногенез язвенной болезни желудка, значительно снижая процесс язвообразования как в фундзльном, так и, особенно, в пилоричесном отделе желудка. См. Таблица 1, рисунок 3 .

Таблица I - СРЕДНЯЯ ПЛОЩАДЬ ЯЗВЕННО-ЭРОЗИВНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ НА ВЕСЬ ЖЕЛУДОК {ММ2)

Показатели М±т Р». %

группы ЖИВОТНЫХ, П"8 Р;

Животные, получившие раствор Ршггери-Локкв 8,9+1,9 100

Животные, получнншие гастробиол 1,4«,02 <0,001 <0,01 15,7

Животные, получившие иблепн*овос масло 53±0,64 <0.05 66Л

Животные, получившие метилурацил 5,8 ±1,43 <0,05 73,4

' : ' - . ■ Л г т Ч ' 1.'" |

I - к^Щт 1

/л.. ■■■■. ■.'-■■

Ринге ра-Локка ко II по ЭНЦ и мЦ+М ф табл.ьвтилурацнпа облелихоцее

число

РИСУНОК 2 - СРЕДНЯЯ ПЛОЩАДЬ ЯЗВЕННО-ЭРОЗИВНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ ПО ОТДЕЛАМ ЖЕЛУДКА (ММ!)

Противоязвенное действие гастробиола на модели стероидно-этаноловой (преднизалон 20 мг/кг, в 80% е объеме 8 мл/кг), гистами-новой (0,1% раствора 6мг/кг) и стрессорной (фиксация на спине 60

мин) язвы желудка крыс оценивали по общему количеству язв и их средней площади по отделам желудка. Слизистая оболочка желудка животных, получивших гастробиол, была слегка окрашена в оранжевый цвет, что обеспечивалось суммой каротиноидов гастробиол а и не является проявлением токсических побочных эффектов. При изучении влияния на секрецию и степень повреждения слизистой оболочки желудка иа модели ишемии привратника желудка по Shay Н. установлено, что гастробиол обладает выраженной гастропротекторной активностью. См. рисунок 4.

Рннгбра-Аокхэ рмг гЬо облепнховое

квело

РИСУНОК 3 - ВЛИЯНИЕ ГАСТРОБИОЛ А ИА СЕКРЕЦИЮ ЖЕЛУДКА СОБАК (H.SHAY) 1, р-р Рингсра-Локка (контроль), 2. гастробиол, 3. placebo. 4.06; г en и хо в ос масле жидкое (сравнение)

Учитывая полученные данные, можно предположить, что гас-

троттротейивный -эффект гастробиола связан со стимуляцией метаболических процессов в СОЖ, возможно, с активацией «местных» защитных механизмов (стимуляция секреции слизи и синтеза про-

сгагландинов, улучшение микроциркуляции) без снижения секреции. Гастробиол снимает спазмы, индуцированные ацетилхолином и гнетам ином, поэтому применение композиции данного состава целесообразно при состояниях, сопровождающихся гипертонусом гладкой мускулатуры кишечника. Этот компонент действия обеспечивает магний - физиологический природный антагонист кальция, принимающий участие в сопряжении процессов возбуждения и сокращения мышечных клеток, с влиянием на различные ферментные системы, входящий в состав многокомпонентных препаратов, применяемых при патологии ЖКТ (РЛС Энциклопедия лекарств, 2006). См. рисунок 5.

РИСУНОК 4 - ВЛИЯНИЕ ГАСГРОБИОЛА НА ТОНУС ГЛАДКОЙ МУСКУЛАТУРЫ КИШКИ Применение гастробиола понижало экссудативное и проли-

феративное воспаление. На стадию пролиферации, в ходе которого происходит формирование утраченных и восстановление поврежденных клеток, наиболее благоприятное влияние оказала именно субстанция облепихового масла с витамином и и магния окевдом. Этот эффект способен оказывать благоприятный эффект на репарацию раневой поверхности при длительном при-

-22-

менении, что очень важно при фармакотерапии хронической язвы желудка и 12-перстной кишки. Данные. См. Таблица 2.

Таблица 2 - ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ

Показатели Экссудация, мг Пролиферация, мг

группы М±га Р1 % М±т %

животных Р2 Гг

контроль, в = 10 83,8±8Д 100,0 37,4±3,8 100Д

гастробпол, в=6 643±5Д <0,05 >0,05 71,6 23,3*3,31 <0,05 >0,05 62,3

нндомстацин, п = 10 48,5±2,6 <0,05 57,9 23,0±1,5 <0,05

Поскольку язвенная болезнь - это повреждение эпители-

ального слоя, с последующим развитием воспалительного процесса, было целесообразно изучить влияние гастробиола ва ре-паративную регенерацию. Данные см. Таблица 3.

Таблица 3 - ВЛИЯНИЕ ГАСТРОБИОЛА НА ОЖОГОВУЮ РАНУ

Показатели группы животных Площадь раны в весовых единицах, г

2* сутки 8£ сутки

М±ш Р % М±ш Р %

физраствор п=10 гасгробиол, п=10 метилурацнл (таблетки), п=10 0,52*0,021 0,4510,046 0,37±0,029 Р[>0,05 Р1<0,05 Р,<0,05 100,0 86,5 71,2 0,341±0,01 0,14*0,035 0,19±0,017 Рг<0,01 Рг<0,«5 Р1<0,01 100,» 41,2 55,9

Примечание: п - количество животных; Р| - вероятность различия к контрольным животным; Рз — вероятность различия к животным, получившим таблетки метилурацила.

Композиция облепихового масла понижала уровень пере-кисного окисления липидов (ПОЛ). Это свидетельствует об умеренном антиоксидантном действии композиции облепихового масла с витамином и и М{*0. См. Таблица 4.

Таблица 4 - ВЛИЯНИЕ ГАСТРОБИОЛА НА УРОВЕНЬ ПОЛ

группы животных, п=6 Уровень ПОЛ Р %

Гасгробиол однократно 56,65 <0,05 65,71

Гастробнол длительно 45,63 <0,05 52,93

Тетрахлорметан, (контроль) 86,2 100

Примечание: Р -показатель достоверности к контрольным животным; Данные радиологического исследования свидетельствуют

о фиксации гастробиола и действии именно в очаге воспаления,

-23-

вследствие чего побочные эффекты на остальные органы и ткани будут проявляться в меньшей степени. В интегральном отношении композиция облепихового масла с витамином и и М§0 представляет собой наиболее, удачную комбинацию средств растительного и синтетического происхождения. Согласно предлагаемой классификации, гастробиол является комплексным противоязвенным лекарственным средством с флоголитическим компонентом действия. На гастробиол ЦЦ получен патент. Препарат включен в план 2006 г освоения новых видов продукции на предприятии Алтайвитамины, г.Бийск.

Фармакологическое изучение ранозаживляющего противовоспалительного средства

Следующим комплексным средством с оптимальным воздействием на воспалительный процесс, которое определили посредством скрининга - это препараты на основе микробиологического р-каротина. Каротиноиды - наиболее многочисленная и широко распространенная группа микробных пигментов. Рациональных и.комфортных лекарственных форм отечественного производства для Р-каротина нет. В связи с этим, было целесообразно изучение новых лекарственных форм биотехнологического Р-каротина и фармакологическое обоснование их использования для коррекции воспаления. Разработаны и Промышленным способом апробированы наружные лекарственные формы Р-каротина: олеогель 0,01% и аппретированные на тканях лекарственные формы, пропитанные Каролином и хлоргексидином.

Изучена их способность стимуляции репаративных процессов.

-24-

Ранотензиометрически установлено большая активность олеоге-ля по сравнению с облепиховым маслом жидким, что выразилось в увеличении прочности рубца по отношению к контролю, и этот результат в 1,13 раза превосходил препарат сравнения.

Таблица 5 - ВЛИЯНИЕ ОЛЕОГЕЛЯ С ^-КАРОТИНОМ НА ПРОЧНОСТЬ РУБЦА, (Ньютон) N=6_

Группы животных М±ш Р %

Контрольные животные, 4,0±0,34 100,0

олеогель 0,01%, 5,1±0,29 Р,<0,05,Рг>0,05 1273

облепиховое масло 4,510,5 Pi>0,05 1123

Примечание: Р| - вероятность различия к контрольным животным; Рг -вероятность различия к животным, получившим облепиховое масло.

Применение олеогеля биотехнологического р-каротина уменьшило площадь ожогового повреждения на 2-е и на 8-е сутки по сравнению с контролем. При этом, противоожоговый эффект олеогеля превосходил действие мази метилурациловой 10% как в ранние, так и в более поздние сроки. Таблица 6.

Таблица 6 - ВЛИЯНИЕ ОЛЕОГЕЛЯ С р-КАРОТИНОМ НА ПРОЦЕСС ЗАЖИВЛЕНИЯ ОЖОГОВОЙ РАНЫ, (те), N=6 _

Группы животвых 2{ сутки 8® сутки

М±га Р % М±т Р %

Контроль 100,0 2Д±0Д5 100,0

Олеогель placebo, п=6 l,7i0,15 Р,<0,01 60,7 1,4±0,34 Р,<0,05 56,0

олеогель с р-каротином М±0,15 Р(<0,05 Pj<0,05 Рэ<0,05 46,4 0,7±Я,04 Р,<0,01 Ргс0,01 Рз<0,05 36,0

мазь метилурацнловая 1,6±0Д7 Р,<0,05 57,1 1,Ш,12 Р,<0,05 44,0

Примечание: п - количество животных; Р| - вероятность различия к контролю; Рг - вероятность различия к животным, получившим основу; Рз— вероятность различия к животным, получившим метилурациловую мазь.

При определении противовоспалительной активности олеогеля установлено его выраженное влияние на воспалительный процесс в равной мере с индометациновой мазью. Определена экспериментальным путем оптимальная концентрация р-каротина в мазевой композиции - 0,01%. См. таблица 7.

Таблица 7 - ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ОЛЕОГЕЛЯ С Р-КАРОТИНОМ, N=8__

Группы животных Экссудация, мг Пролиферация, мг

М±т Р % М±т Р %

Контроль 46,7±2,9 100,0 9Л±03 100,0

олеогель placebo, 40,0±3,8 Р,>0,05 85,7 И,0±0,4 Р,<0,05 118,3

олеогель с Р-каротииом 36,7±23 Pi<0,05 Рг>0,05 Pi>0,05 78,6 7,0±0,8 Р,<0,05 Р2<0,05 Рэ>0,05 753

мазь индометацяна 10%, 37Д±0,8 Р,<0,05 79,7 7,3±0,5 Pi<0,05 78,5

Примечание: Pi -вероятность различия к контролю; Р2-вероятность различия к placebo; Рз -вероятность различия к опытам с индомегацином;

Были исследованы каротинсодержащие аппретированные лекарственные формы на наличие ранозаживляющей активности на модели термического повреждения кожи кроликов и установлено их выраженное влияние на саногенез ожогового повреждения кожи, превосходящее по действию мазь метилурациловой в ранние и более поздние сроки. См. таблица 8.

Таблица 8 - ВЛИЯНИЕ ТКАНЕВЫХ АППРЕТОВ С р-КАРОТИНОМ НА ИНВОЛЮЦИЮ ОЖОГОВОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ (та), N=6_

Группы ЖИВОТНЫХ 2£ сутки 8* сутки

М±т Р % М±т Р %

Контроль 2,48±0Д0 100,0 1,98±0,15 100,0

аппрет с Каролииом и хлоргексидином 2,09±0,18 Pi>0,05 Pi>0,05 84,3 1,12±0,08 Pi<0,05 РгХ),05 56,6

аппрет с мазью метилурациловой 2Л0±0Д7 Р,>0,05 92,7 1,10±0,12 Р,<0,05 55,5

Примечание: л - количество животных; Р1 - достоверность различий к не-лечениым животным; Р2 - достоверность различий к препарату сравнения; Тканевые аппреты обладали антимикробной активностью в

отношении таких патогенных микроорганизмов, как стафилококк, бациллы и бактерии кишечной группы. Все вышеизложенное дает основания предложить разработанные наружные лекарственные формы с р-каротином в качестве дополнительного лекарственного средства при раневой, ожоговой патологии кожи и воспалительных процессах в ней, различной этиологии, удачно сочетая противовоспалительный эффект, антимикробное действие и влияние на репара-

-26-

тивные процессы в коже. Соответственно предлагаемой классификации, мазь Р-каротина и тканевые аппреты с Р-каротином и хлор-гексидином относятся к группе ранозаживляющих средств с фло-голмодулирующим действием. Портативность, стабильность и технологичность лекарственных форм обеспечат их комфортность и перспективность. Лекарственные формы с Р-каротином тканевые аппреты и мазь внедрены на ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар, 2000г).

Фармакологическое изучение хондропротекторного противовоспалительного препарата

Средством с оптимальным воздействием на воспалительный процесс, которое определили посредством скрининга - это комплекс, полученный на основе биологически активных компонентов животного происхождения - глюкозамина гидрохлорид с индометацияом." В настоящее время выпускается раствор глюкозамина и таблетки глюкозамина в качестве хондропротекторных средств. Индометацин

- дженерик отечественного производства, так же выпускается в нашей стране в виде монопрепарата. Уменьшить побочное действие популярных классических противовоспалительных средств, возможно изменив их путь поступления в организм. В этом плане заслуживает особое внимание ректальный способ введения. Возможность сочетания противовоспалительных препаратов и средств, воздействующих на метаболические процессы в хондроцитах и синовиоцитах

- актуальная и социально значимая проблема.

Глюкозамина гидрохлорид получают при переработке морских организмов из вторичного сырья хитозана. Широкое распространение, многосторонняя физиологическая активность глюкозамина, сочетающаяся с низкой токсичностью, объясняет не снижающуюся ин-

тенсивность поиска новых лекарственных форм на его основе и изучения их фармакологических свойств. Для изучения фармакологической активности суппозиториев была вначале определена степень безопасности в условиях острого и субхронического эксперимента. Выявлено дозозависимое влияние О-глюкозамина гидрохлорида на острое экссудатавное воспаление, пролиферативное и хроническое неспецифическое воспаление. Установлено выраженное флогомоду-лирующее действие глюкозамина гидрохлорида: малые дозы ингиби-руют процесс воспаления, большие стимулируют. Это согласуется данными литературы о том, что глюкозамин является медиатором воспаления группы гликозаминогликанов. Стимуляция и обострение хронического и вялотекущего воспалительного процесса проявит благотворное влияние на адаптационно-приспособительные реакции местного и системного характера. Кроме того, будет предотвращаться развитие склерозированных рубцовых изменений в органах и тканях, что является положительным прогностическим признаком в плане восстановления поврежденных, либо утраченных клеток. В данном случае находит отражение полимодальное влияние на отдельные стадии воспаления, и фармакотерапия согласуется с принципом комплементарной реактивности воспалительного процесса с применением разработанного лекарственного средства - суппозиториев глюкозамина с индометацином.

Установлена оптимальная доза, оказывающая выраженный противовоспалительный эффект - 10 мг/кг. Глюкозамина гидрохлорид в этой дозе способствовал нормализации температурного режима, понижая как реактивную и воспалительную гипертермию, так и компенсаторную гипотермию. Данные представлены на рисунках 6, 7.

объема лапки

РИСУНОК 5

ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОЗА МИНА ГИДРОХЛОРИДА НА ВОСПАЛЕНИЕ

исх 1 час 2иаме|те«ив3"ре<ип4рату|б1ис 16 час 24 часа

РИСУНОК 6 -

ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОЗАМИ НА НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНУЮ ГИПЕРТЕРМИЮ КРЫС

Учитывая, что глюкозами н относится к группе биогенных аминов, не является противовоспалительным средством, но проявляет ингибирующее действие на стадию экссудации и пролиферации, его можно считать весьма перспективным препаратом для терапии воспаления. Суппозитории обладали выраженной анальгэтической активностью, А и ти к о агул я и и он ная активность глюкозам и на с индоме-тацнном в сравнении с монопрепаратом - индометацином, согласно проведенным опытам, была выражена в меньшей степени, что позволяет прогнозировать минимальную вероятность кровотечений при длительном применении суппозиториев глюкозамина с индометацином и блокирование ульцерогенного действия индометацина.

контроль ____опьггГ _____опыт Г+И ______плацебо сравнение

□ экссудация ■ пролиферация РИСУНОК7 -

ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОЗ АМИН А НА СТАДИИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА

Примечание: * - достоверность различи® к контролю Н - достоверность различий к препарату сравнения (инломстацин).

При изучении влияния глюкозамина на хроническое воспаление,

индуцированное введением адью ванта Фрейнда, установлено, что эффект вторичной альтерации протекал более мягко на фоне действия именно суппозиториев глюкозамина. См. таблица 9, рис. 9, 10,

-30-

Таблица 9 - РЕЗУЛЬТАТЫ А НА ЛЬГ ЕЗИРУЮЩЕ Й АКТИВНОСТИ СУППОЗИТОРИЕВ H H ДО M Е ТА ЦП! 1А С ГЛЮКОЗ АМИНОМ, N g 8

Показатели Группы животи ых НАПРЯЖЕНИЕ, ПРИ КОТОРОМ ВОЗНИКАЕТ

тремор хвоста вокализация моторная реакция

М±ГО г% М±т % 3±па % !

Фнз. раствор 2U.0±Î,33 100 28.33±1,66 100 39,17*3^31 !00

СупN03ИТ, ИН- дометай» на с глюКОЗам ином 33.33±6,62 166,65 * 59,17± 13,24 208,86 *• 73,5=t 14,89 187,64

Табжгтки а налынна 25,R3±5,6Î 129.15 * 44,11*4,97 155,91 * 54,17*531 138,29 *

Примечание: 1 - достоверность различий к контролю | - достоверность различий к препарату сравнения, л - количество животных.

исход Зсутхи 5 сутки 9 сутки 12 14 15 17 20 31

__. _Су1КИ _С£ГКИ____сутки .. сутки сутки сут>;и

Нгабл левая Гтабл пра&ая * Гсупп левая

Гсупп правая Г+И левая —~ Г+И левая

РИСУНОК 8

ВЛИЯНИЕ ГЛЮКОЗА МИ »А НА ДИНАМИКУ АДЪЮВАНТ-ИИДУЦНРОВАИНОГО АРТРИТА КРЫС Примечание к рисункам 9,10,11:

ГтаЕл - глюкозам нн в таблетках (сравнение), Г супп — глюкозам ич в суппозиториях. И+Г - суппозитории нилометанииа с гдао козам ином

Следует пригнать целесообразность комбинирования глюкоза-

мина с иидометацином для усиления противовоспалительных

свойств н коррекции нежелательных побочных эффектов последнего.

На препарат суппозитории глкжозамина с индометацином проводена

патентная зашита с промышленным внедрением на предприятии в г.

Мурманск. Получен патент на противовоспалительное хондропротекторное средство - суппозитории индометацина с глюкозамином.

Суппозитории глюкозамина с нндометацином стабилизируют изменения температурного режима, стимулируют адаптационно-приспособительные реакции на фоне хронического адъювант-индуциро в энного воспаления (см. рисунки 10, И). Глюкозамина гидрохлорид и его комбинация с нндометацином положительно влияет на динамику первичного и вторичного хронического артрита, обладает аиальгезирующей активностью, что установлено опытным путем. Суппозитории индометацина с глюкозамином -. новое перспективное противовоспалительное, анальгетическое и жаропонижающее хондропротекторное средство.

РИСУНОК 9

МОНИТОРИНГ ТЕМПЕРАТУРЫ КРЫС ПРИ АДЫОВАНТНОМ АРТРИТЕ

исходная 7 сутки 14 сутки 21 сутки

--*— Г та6л г супп И+Г —к— контроль

Рисунок 10

ДИНАМИКА МАССЫ ТЕЛА КРЫС ПРИ АДЪЮВАНТОМ АРТРИТЕ

Полученные экспериментальные данные позволяют предложить сочетание индометацина с глюкозам ином в качестве оптимального средства при хронических дегенеративно-воспалительных заболсва-| ниях костно-мышечной системы с учетом приоритетности ректаль-' кого способа применения. В соответствии с классификацией, суппозитории глюкозам я на и индометацина принадлежат к группе хон-дропротекторов с флотом одулирующим действием.

Разработка метода визуализации воспаления с применением радионуклидов

Данный раздел диссертационной работы выполнен под руководством руководителя отдела радиологических методов исследования НИИ клинической кардиологии ИМ. А.Л. Мясникова докт-ора мединице ких наук, профессора Сергиенко Владимира Борисовича. Автор выражает глубокую признательность и благодарность В.Б.Сергиенко.

В свете предлагаемой классификации, для фармакологической модуляции воспаления важно определить стадию патологического процесса. Очаги воспаления могут быть выявлены на ранних этапах их развития, когда еще не сформировался классический абсцесс с помощью радионуклидных методов. Практически все методы визуализации, применяемые в ядерной медицине, являются информативными, точными и обладают высокой разрешающей способностью, так как базируются на функциональных (физиологических и'или биохимических) изменениях органов и тканей на ранней стадии и на клеточном уровне. С другой стороны, развитие ядерной (радиационной) медицины неразрывно связано с разработкой новых эффективных фармацевтических препаратов, меченных радиоактивными изотопами, с созданием и совершенствованием специальной радиодиагностической аппаратуры. Экспериментально выбран препарат, проникающий в зону воспаления и фиксирующийся в ней: радиоактивный технеций пирофосфат - Тс 99т (далее по тексту технеций). После имплантации ватного шарика на 8-е сутки эксперимента происходило образование вокруг инородного тела пролиферативной грануля-ционно-фиброзной капсулы. Крыс наркотизировали этаминалом натрия, изымали ватный шарик с образовавшейся капсулой. Прямую радиометрию фиброзной капсулы проводили на приборе «Малая гамма-лаборатория» (Венгрия). Субплантарное введение каолина дорсовентрально животным вызвало острый экссудативный воспалительный процесс с гипертермией. При внутривенном введении 18,5 МБк технеция через 1,5ч активности в зоне воспаления, превышающей фон, обнаружено не было. Однако, количество радиоактивности в пораженной конечности значимо превышало таковую в здоровой на

21,7% у самцов и 11,5% у самок. Включение технеция в зону воспа-

-34-

ления было визуализировано и в количественном выражении составило 116 ед.(самцы), 83 ед. (самки). В интактной конечности этот показатель составлял 26 ед. и 25 ед. соответственно. Разница между данными здоровой конечности и пораженной составил у самцов в 4,46 раза (+ 77,59% р< 0,001), у самок в 3,32 раза (+ 69,88% р< 0,001). Данные представлены в таблице. См. таблица.10

Таблица 10 - РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗМЕРЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЗОН ИНТЕРЕСА НА СЦИНТИГРАММАХ КРЫС НА МОДЕЛИ КАОЛИНОВОГО ОТЕКА ("* Тс, ПИРОФОСФАТ)_

Зона Min Мах Средняя Всего

Импульсов Ячеек

А 1 316 Ш 12579 108

В 0 74 26 2814 108

С 1 64 25 2798 108

D 9 165 83 9021 108

Примечание:

А - здоровая конечность, самцы. В - поврежденная конечность, самцы, С — здоровая конечность, самки, D - поврежденная конечность, самки

Имплантация под кожу инородного стерильного тела (модель

cotton pellet) вызвала асептическое воспаление у крыс, экссудатив-ный компонент которого составил 149,33±8,3мг у самцов и 147,83±6,3мг у самок, а пролиферативный компонент 40,31±7,1мг и 46,28±2,9мг соответственно. На 8-е сутки эксперимента животным внутривенно вводили радиоизотопные препараты технеция. После проведения сцинтиграфии, ватный шарик с образовавшейся капсулой изымали, взвешивали, измеряли радиоактивность фиброзной капсулы по у-излучению. С контралатеральной стороны изымали соединительную ткань соответствующего веса и аналогично проводили подсчет радиоактивности на пересчетном устройстве. Фиброзная ткань, образовавшаяся в ответ на внедрение инородного тела, показала степень накопления у-лучей. Находили коэффициент накопления у-лучей в воспаленной и нормальной ткани. Обнаружена достоверно

различная способность к накоплению радионуклидов воспаленной и невоспаленной тканью. См. таблица 11.

Таблица 11 - РЕЗУЛЬТАТЫ ПРЯМОЙ РАДИОМЕТРИИ ОЧАГА ВОСПАЛЕНИЯ НА МОДЕЛИ АСЕПТИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ

показатели Группы животных Излучение воспаленной ткани Излучение нормальной ткани

фон Ед, имп Ед-/г ткани фон Ед, имп ЕдУг ткани

Самцы, п = 6 77 413,75 2,25 60 155 0,79

Самки, п = 6 60 310,33 1,69 62 16833 0,88

Проведенные эксперименты позволили установить оптимальный режим воспаления и оптимальный ультра короткоживущий препарат радиоактивного меченого технеция для визуализации воспаления. Результаты свидетельствуют о перспективности метода, о возможности использования в медицинской практике с целью диагностики и мониторинга терапии и о целесообразности проведения дальнейших экспериментальных изысканий в этом направлении. Влияние на течение воспалительного процесса официнальных лекарственных препаратов нашло отражение в показаниях прибора, что подтверждает адекватность модели со способом радиодиагностики.

Радиологическое изучение 24 лекарственных средств из разных фармакологических групп, показало, что антипротозойное средство метронидазол избирательно скапливается в очаге воспаления, что может стать основой для получения радиофармацевтического препарата (присоединения радиоактивной метки к этому препарату). Данное обстоятельство может эффективно сказаться на последующих изысканиях в данной области и послужить новым направлением в радиологической фармакологии для разработки радиофармацевтического маркера воспаления.

выводы

1. В результате анализа механизма действия известных и новых соединений (минеральных, биологических и синтетических) на воспалительный процесс выявлена закономерность в их действии на различные стадии воспаления и предложена классификация средств, регулирующих воспаление. Выявлены средства не только угнетающие воспалительную реакцию (флоголитики), но и стимулирущие (флогогены) или модулирующие (флогомоду-ляторы) различные стадии воспаление.

2. На основании особенности действия на слизистую оболочку желудка и кишечника облепихового масла, витамина и и магния оксида изучен и предложен многокомпонентный препарат (гаст-робиол ЦД), в качестве противовоспалительного гастропротек-торного средства. а

3. Установлена противовоспалительная и репаративная активность! биотехнологического Р-каротина с полиненасыщенными жир-* ными кислотами, который предложен в качестве ранозажив-ляющего и противовоспалительного средства в виде мази (олео-гель). Изучена и предложена комбинация Р-каротина с хлоргек-сидином, обеспечивающая противоожоговое и антимикробное действие (тканевые аппреты).

4. Учитывая необходимость поливалентной регуляции воспалительного процесса и с целью нивелирования нежелательных эффектов индометацина, исследовано и рекомендовано его сочетание с глюкозамином в суппозиториях, в качестве хонропротек-

торного противовоспалительного средства при остром и хроническом воспалении и дегенеративных изменениях суставов.

5. Разработаны методы визуализации стадий воспалительного процесса (экссудации и пролиферации) с помощью радиактивного технеция в статике и динамике. Установлено, что метронидазол в больших концентрациях накапливается в зоне воспаления и может служить его маркером.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Разработка, биологическое исследование и возможности использования фитокомплексов пастушьей сумки и мяты перечной для целей профилактической косметологии. Москаленко C.B. Сергиенко A.B. Пшукова И.В. Досягнення сучасно1 фармацп- в медичну практику: Матер ¡ал и наук.-практ. конф. присвяч75-р1ччю Укр. Фармац. акад. - Харюв,- 1996.- С. 226 -227.

2. Детоксицирующие свойства пектин- содержащих продуктов. Василенко Ю.Н. Зяблицева Н.Е. Компанцев В.А. Самокиш И.И. Москаленко C.B. Сергиенко A.B. Актуальные вопросы использ. прир., преформир. факторов, фнтотер. и др. традиционных методов в комплексном леч. забол.орг. пищев. и обмена веществ: Материалы регион, научн.-практ. конф. науч. и сан. - кур. учреждений КМВ, (2;1997;Ессентуки).-Ессентуки,- 1997.-С. 158.

3. Исследование биологической активности лечебно-косметической мази из клеточного сока эфирномасличной розы. Москаленко C.B. Зилфикаров И.Н. Сергиенко A.B., Челомбитько В.А. Заключительный отчет НИР 01. 9 90 0014 33 - 1998. -14 стр.

4. Создание лекарственной формы на основе масла плодов кали-

-38-

ны обыкновенной и изучение их фармакологической активности. Богданов А.Н. Пшуков Ю.Г. Щербинина Е.Ф. Тираспольская С.Г. Ку-либаба Н.И. Клипуновский В.И. Кузнецов А.В. Куль И.Я. Степанюк С.Н. Сергиенко А.В. Мартиросова Г.А./Актуальные вопросы инфекционной патологии и современные методы лечения: Ма-тер.Всерос.Науч.-прает. конф.(3;1-2 дек.1999;Пенза). - Пенза: ПДЗ, 1999.- С.44-46.

5. Сергиенко А.В., Фармакологическое исследование перспективной наружной лекарственной формы p-каротина Василенко Ю.К., Сергиенко А.В., Москаленко C.B., Скульте И.В. // Структурно-функциональные взаимодействия при компенсации нарушенных функций: Науч.тр. - Ессентуки: Мед центр ЮНЕСКО «Юнона» Ессентуки,2000. - Вып.4. - С.73-76. ;

6. Doronina, H.V., Sergienco, A.V. M.N.Ivashev Borrelia burgdorferii - neurological complications. Hterature review Structure - fimctional in-1

teractions at the compensation of impaired functions: Collection of scien- '

£

tific articles - Essentuky: Association médical senters of UNESCO, 2001. -№.5. - P. 25 - 29. Engl.

7. Сергиенко A.B. Разработка лечебно-профилактических наружных средств на основе биотехнологического Р-каротина и создание оригинальных технологий их производства. Пятигорск.- 2001. -21с. Рис. 6. Табл. 1. - Библиограф.: 34 назв. - Рус. - Деп. в ВИНИТИ. 29.12.01, № 2711 -В2001.

8. Сергиенко А.В. Особенности воспалительного процесса и его фармакологическая коррекция./ Экология и здоровье: Сборник научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО,

2002. - Вып.6 - С. 80-92. С. 92(Англ.).

9. Сергиенко A.B., Алиева М.У., Ивашев М.Н. Влияние витаминной растительной композиции на течение язвенного процесса в эксперименте Экология и здоровье: Сборник научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО, 2002. - Вып.6. - С. 135-139. С.140(Англ.).

10. Sergienko A.V, Multicomponent combined drug application for immune impairments correction. Pollen allergy Proceedings and abstracts, Sochi, Russia, October 17-21,2003. - p.76.

И. Разработка метода визуализации воспаления с применением радионуклидов /Сергиенко A.B., Мартьянов Б.М., Сидорова Т.Н., Сергиенко В.Б., Ивашев М.Н Экология и здоровье: Сборник научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО, 2003. -Вып.7. - С. 40-58. р.59 (Англ).

12. Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Возможность применения витаминной композиции в качестве антиульцерогенного средства. Регион. конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58;2003; Пятигорск): Материалы...-Пятигорск: ПятГФА, 2003.-С. 373.

13. Сергиенко A.B., Купянская В.Н.. Обоснование состава и разработка лекарственной формы на основе масла облепихового. Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58;2003; Пятигорск): Материалы ..-Пятигорск: ПятГФА, 2003. - С.223-226.

14. Сергиенко A.B., Задорожная - Зацепина Л.Е., Ивашев М.Н. Новые фармакологические противовоспалительные средства без ульце-рогенного эффекта / Экология и здоровье: Сборник науч. трудов -Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО, 2004. - Вып. 8 - С.

217- 225. р. 226 (Англ.).

15. Поиск методов и препаратов визуализации воспаления в эксперименте Сергиенко A.B., Иванова JI.P., Мартьянов Б.М., Сидорова Т.Н., Сергиенко В.Б. / Экология и здоровье: Сборник научных трудов - Ессентуки: Ассоциация мед. центров ЮНЕСКО, 2004. - Вып. 8. -С. 191-200,201 (Англ).

16. Фармакологический обзор новых средств, обладающих противовоспалительным и противоязвенным действием A.B. Сергиенко, Задорожная-Зацепина JI.E. Ивашев М.Н. Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (60;2005; Пятигорск): Материалы...-Пятигорск: ПятГФА, 2005. - С341-342.

17. Сергиенко A.B., Сергиенко В.Б. Радиологический биомаркер воспалительного процесса в эксперименте. / Экология и здоровье: Сборник науч. трудов - Ессентуки: Ассоциация мед.центров ЮНЕСКО, 2006. - Вып. 10. - С 87-93.

18. Сергиенко A.B., Степанова Э.Ф., Ивашев М.Н. Возможности коррекции нежелательных эффектов при терапии индометацином. Клинические исследования лек.средств в России: тез. науч. работ между-нар.конф. (1; 20-22 ноября 2001; Москва).-М.: Реафарм, 2001,- С.246, 247(англ.яз.).

19. Ивашев М.Н., Сергиенко A.B. Возможность применения растительных и синтетических лекарственных композиций в качестве репара-тивных средств Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгр.(9; 812 апр.2002г.-Москва). - М.: ГЭОТАР, «Медицина», 2002,- С. 620.

20. Исследование биологической активности соединений природного и синтетического происхождения Ивашев М.Н., Лысенко Т.А., Арльт

A.B., Сергиенко A.B., Крикова A.B. Паршин В.Д. Карпов A.A. Пужа-лин А. Н. / Фундаментальные проблемы фармакологии: Тез.докл.2-го съезда Российского Научного Общества Фармакологов. 21-25 апреля 2003г. Москва.-С. 211.

21. Фармакологическое изучение композиции глюкозамина и нестероидного противовоспалительного препарата на воспаление в эксперименте. Ивашев М.Н., Сергиенко A.B. Аммар Мохамад Аллаа Гази, Компанцев В.А. Алябьев A.A. Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгр.(10; 7-11 апр.2003г.-Москва). - М.: ГЭОТАР, «Медицина», 2003.-С.610.

22. Сергиенко A.B. Коррекция воспалительного процесса в экспериментальных условиях Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгр.(12; 18-22 апр.2005г.-Москва). - М.: ГЭОТАР, "Медицина", 2005.-С. 793.

23. Сергиенко A.B., Сергиенко В.Б., Ивашев М.Н. Радиодиагностика экспериментального воспаления у крыс Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгр.(12; 18-22 апр.2005г.-Москва). - М.: ГЭОТАР, "Медицина", 2005.-С. 794.

24. Сергиенко A.B., Сергиенко В.Б., Ивашев М.Н. Метронидазол -маркер экспериментального воспаления Человек и лекарство: Тез.докл. Рос. нац. конгр.(13; 3-7 апр.2006г.-Москва). - М.:ГЭОТАР, "Медицина", 2006,- С.610.

25. Сергиенко A.B. Поиск комплексных препаратов с оптимальным влиянием на воспаление Человек и лекарство: Тез.докл. Рос. нац. конгр.(13; 3-7 апр.2006г.-Москва). - М.:ГЭОТАР, "Медицина", 2006.-С. 614.

26. Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Трансдермальная фитокомпозиция -новый подход к профилактике стресса. - Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам 13-16 марта 2006г. 4-я Международная конференция; 2006. - С. 66.

27. Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Возможность применения многокомпонентного комбинириованного средства для коррекции иммунных нарушений / Мат. V съезда иммунологов и аллергологов СНГ (5, 8-11 июля 2003г., Санкт-Петербург). Аллергология и иммунология, июнь 2003.- Т.4.- №2,- С. 102.

28. Сергиенко A.B. Многокомпонентное комбинированное средство в комплексной коррекции иммунных нарушений. Успехи современного естествознания, приложение №2.- М.- 2003.- С. 63.

29.Сергиенко A.B. Фармакологическое изучение средств, регулирую-^ щих процессы воспаления при экспериментальной патологии (НИЩ заключительный отчет) 02 0304 240 0305.-2005.-212 стр. 1

30. Сергиенко A.B. Гастропротективные свойства нового лекарст-4 венного средства//Фармация . - 2005. - №1,- С. 36-37.

31. Сергиенко A.B. Ранозаживляющая активность мазей на основе магнетита//Фармация . - 2005. - №2. - С. 34-35.

32. Сергиенко A.B. Методологический подход к коррекции воспалительного процесса // Вестник Ставропольского государственного университета. - 2005. - №42. - С. 129-132.

33.Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Воспаление, его фармакологическая коррекция. - Пятигорск, 2004. - 188 с. Утверждено в качестве учебного пособия для студентов, обучающихся по специальности 040500 - фармация Учебно-методическим объединением по медицинскому и

-43-

фармацевтическому образованию вузов России.

34.Сергиенко A.B. Фармакотерапия воспалительных процессов кост-но-мышечной системы - Пятигорск, 2005.- 220с.

35. Сергиенко A.B. Суппозитории индометацина с глюкозамином -новое противовоспалительное средство// Фармация. - 2005. - №6.- С. 31-32.

36. Сергиенко A.B. Исследование противоязвенного действия га-стробиола // Экспериментальная и клиническая фармакология. -2006. - №2. - С. 37-39.

37. Сергиенко A.B. Коррекция экспериментальной иммунной дисфункции комплексом растений, олигоэлементов и витаминов \ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006.- том 7,-№ 3.- С. 438- 439.

38. Сергиенко A.B., Сергиенко В.Б., Ивашев М.Н. Визуализация неспецифического воспаления в эксперименте \ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006.- том 7,- № 3.- С. 440.

39. Сергиенко A.B. Возможность снижения иммунной токсичности противовоспалительных средств в эксперименте\ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006.- том 7.- № 3.- С. 439.

40. Сергиенко A.B., Сергиенко В.Б., Ивашев М.Н. Метронидазол имеет оптимальное включение в очаг неспецифического воспаления \ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006.-том 7.-№ 3,- С.439-440.

41. Сергиенко A.B., Долгова Н.Ю. Иммунокорректорное действие фенилоксопирролидинилацетамида \ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006,-том 7.- № 3,- С. 438.

42. Сергиенко A.B., Мальков И.В., Ивашев М.Н. Аминокапроновая

кислота - противовоспалительное средство без иммунотоксического побочного эффекта \ Аллергология и иммунология, сентябрь 2006.-том 7.-№3.-С. 437.

43. Сергиенко A.B., Салман Махмуд Али, Ивашев М.Н Протекторы тканевого метаболизма в экспериментальной фармакологии \ Аллергология и иммунология, сентябрь 200б.-том 7,- № 3 - С. 439.

44. Сергиенко А.В.Фармакология гастробиола. - Пятигорск, 2005. -152с.

45.Сергиенко A.B. Фармакология природных каротиноидов. - Пятигорск, 2006. - 156с.

46.Сергиенко В.Б., Беспалова Ж.Д., Поздеев В.В., Мартьянов Б.М., Сидорова М.В., Кузьмин A.B., Сергиенко A.B. Визуализация очагов воспаления с помощью меченного технецием-99т антимикробного олигопептида \ Вестник рентгенологии и радиологии, 2006.- №4. — С| 68-74. '

Патенты

1. Вергейчик E.H., Кошелев Ю.А., Купянская В.Н., Миренков В.А., Запесов A.C., Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Желатиновые капсулы «Гастробиол ЦД» на основе клатратов концентрата облепихо-вого масла, обладающие противоязвенным действием. Патент РФ Заявка №2003105141 приоритет изобретения 19.02.2003г.

2. Компанцев В.А., Алябьев A.A., Маринина Т.Ф., Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. Композиция - лекарственная форма противоар-трозного средства глюкозамина гидрохлорида для ректального применения. Заявка № 2004111912/15 (012700) приоритет изобретения 19.04.2004г.

РЕЗЮМЕ

Поиск и фармакологическая характеристика лекарственных средств, влияющих на воспалительный процесс в эксперименте

Ключевые слова: гастробиол, глюкозамин, индометацин, суппозитории, Р-каротин, воспаление.

Объект исследования: комплекс облепихового масла с витамином и и магния оксидом, суппозитории глюкозамина с индометаци-ном, микробиологический Р-каротин, экспериментальные животные: мыши, крысы, собаки, кролики, морские свинки, культуры тканей, изолированные органы

Предмет исследования: фармакологические и токсикологические свойства гастробиола, микробиологического р-каротина, суппозиториев глюкозамина с индометацином

Цель работы: Разработка методологии диагностики и фармакологической коррекции воспаления с учетом его стадий. Поиск лекарственных средств с оптимальным воздействием на экспериментальный воспалительный процесс.

Методы исследования: фармакологические, физиологические, биохимические, гистологические, токсикологические, параклинические, радиологические, статистические.

Полученные результаты и их новизна: Разработана методология радиоизотопной визуализации воспаления. Выявлен препарат с оптимальным включением в воспалительный очаг. Систематизированы средства, влияющие на воспаление, установлена закономерность между их составом и влиянием на воспаление. Изучена фармакология нового гастропротектора гастробиола. Впервые установлена противовоспалительная и репаративная активность микробиологического Р-каротина в лекарственных формах: олеогель, тканевые аппреты. Впервые изучена фармакология противовоспалительного хондропро-тектора суппозиториев глюкозамина с индометацином.

Область применения: экспериментальная фармакология, клиническая фармакология, гастроэнтерология, ревматология, терапия, кожные заболевания, медицинская радиология.

Для заметок

ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС Сергиенко Аэлита Валерьевна

Сергиенко Аэлита Валерьевна

ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС

автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА-2006

Подписано в печать 8.11.2006 формат 60x84/16 бумага писчая Печать офсетная. Гарнитура «Times». Усл. печл. 2,0. уч-им.л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ_

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Социальная значимость воспалительных заболеваний растет во всем мире, что связано с особенностями жизни современного человека. Острые воспалительные процессы чаще, чем прежде принимают затяжное течение, но наряду с этим возрастает и число истинно хронических воспалительных заболеваний [6, 243].

Воспаление является поливалентным, весьма динамичным процессом с множеством альтернативных и перекрещивающихся связей. Сложность процесса состоит в том, что симптомы воспаления являются отражением подвижной комбинации эффектов разных клеток, находящихся в определенных промежутках времени в разном функциональном состоянии. В развитии воспаления принимают участие различные медиаторы, имеющие разные концентрационные и диффузные характеристики. Очевидно, что понимание четкой характеристики участвующих в реакции различных типов клеток и медиаторов разных форм воспаления необходимо для целенаправленного поиска лекарственных средств, влияющих на определенные его стадии.

Воспаление - это типовой физиологический процесс, который развивается в васкуляризованных органах и тканях в ответ на повреждение. Воспаление, как аутохтонный процесс, самопроизвольно заканчивается при условии искоренения причинного агента. Однако, если флогогенный агент является неметаболизируемым (инородные тела), либо персистирующим в тканях (некоторые микроорганизмы), либо не может быть радикально устранен (ау-тоантиген), то создаются условия для продолжения альтерации и экссудации на фоне развернувшихся пролиферативных процессов [6,250, 252].

При хроническом воспалении происходит изменение структуры органов вследствие неполной регенерации, фиброплазии и некроза, которые всегда присутствуют в очагах хронического воспаления [295]. В результате в органе могут образовываться полости, окруженные пиогенными капсулами - абсцессы, возникнуть образования соединительной ткани, нарушиться органная микроархитектура [260, 346].

Если полное количественное восстановление клеток невозможно, что наблюдается при потере клеточных элементов, либо при недостаточной регенерации, то происходит восполнение дефекта соединительной тканью или фиброплазия, ее называют репарацией по типу субституции. Формируется молодая, богатая регенерирующими, высокопроницаемыми сосудами грануляционная ткань, затем переходящая в соединительную ткань, оставляющую рубец, (в качестве примера можно привести очаг кардиосклероза после инфаркта миокарда, глиоз после энцефалитов и при эпилепсии, цирроз в печени, рубец в слизистой оболочке желудка, спайки кишечника) [88, 295, 364].

В настоящее время фармакотерапия воспалительного процесса независимо от его стадии, сводится к подавлению отдельных симптомов, либо реакции в целом [205]. Данное обстоятельство не отражает принцип комплементарной реактивности биологических систем. Широко применяемые препараты для терапии воспалительного процесса не всегда имеют только положительные фармакодинамические характеристики. Стероидные и нестероидные противовоспалительные средства, влияющие на неимунные формы острого и хронического воспаления, а также на некоторые типы иммунного воспаления, обладают различным, но выраженным токсичным действием, особенно при длительном применении. Стероидные препараты при продолжительном употреблении понижают резистентность к инфекциям, нарушают обмен углеводов, жиров и белков, подавляют активность системы гипоталамус - гипофиз - надпочечники. Поэтому актуальной задачей остается поиск и разработка препаратов комбинированного и растительного состава для фармакологического синергизма на воспалительный процесс и снижения токсичности известных средств.

В этой связи своевременная рациональная фармакотерапия воспаления, диагностика и контроль терапии острых и хронических воспалительных процессов чрезвычайно важны. Для идентификации воспаления на ранних стадиях целесообразно создание радионуклидных препаратов, с применением которых диагностика может быть безболезненной и безопасной [280].

В клинической практике диагностика воспалительного процесса базируется на общих изменениях периферической крови: количественные и качественные характеристики лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов, при хронических воспалительных процессах - наличие С - реактивного белка, уровень содержания сиаловых кислот, сдвиг белковых фракций, уровень ин-терлейкинов -1, -6, -8, 18 [103, 205, 298, 359,372, 379].

Однако эти клинические и биохимические тесты носят неспецифический и ненаправленный характер, что затрудняет определение точной локализации и стадии воспаления в клинике. Создание, тестирование и клиническое применение визуализации воспаления, в диагностических и в лечебных целях может стать уникальной возможностью диагностики патологического процесса на ранних этапах. Для этого необходим симбиоз экспериментальной фармакологии и радионуклидной диагностики. Дальнейший прогресс радиофармакологии связан с появлением радиологических препаратов, имеющих оптимальное включение в очаг воспаления. Для этого необходимо отработать на животных различные модели воспаления, максимально приближенные к таковым в клинической практике и выбрать оптимальный ультра короткожи-вущий препарат, который являлся бы безопасным в применении и эффективным в точной и ранней диагностике воспалительных процессов [388, 427].

Создание, тестирование и клиническое применение радиофармацевтических препаратов для визуализации воспаления, представит реальное содействие клинической практике [417].

Одной из важных задач современной фармакологии остается поиск препаратов при определении стадии и топографии патологического процесса с оптимальным воздействием на воспаление [289]. В практической медицине имеется большой перечень противовоспалительных лекарственных средств, однако, большинство из них имеют ограничения, особенно в случае их длительного применения [157]. Актуальной является разработка препаратов, преимущественно растительного, либо комбинированного состава во избежание побочных токсических эффектов [59]. При этом для оценки их эффективности необходимо исследование биокинетики - фиксации в очаге воспаления и распределения. В этой связи, также актуальна разработка радиологических препаратов для диагностики воспаления и контроля эффективности фармакотерапевтических средств лечения воспалительного процесса [387, 333]. Разработка новых методологических подходов базируется на данных экспериментальной фармакологии и радиофармацевтики с использованием адекватных экспериментальных моделей воспаления.

Цель работы

Разработка методологии поиска и изучения новых комплексных препаратов для фармакологической разнонаправленной регуляции воспалительного процесса.

Задачи исследования

1. Провести систематическое изучение известных и новых фармакологически активных соединений минерального, биологического и синтетического происхождения, влияющих на процесс воспаления.

2. Изучить общетоксическое и фармакологическое действие нового гас-тропротекторного препарата с противовоспалительным компонентом действия - гастробиол ЦД.

3. Провести углубленное экспериментальное изучение лекарственных форм микробиологического (3-каротина - олеогеля и препаратов, аппретированных на волокнистых материалах, влияющих на воспалительный процесс.

4. Определить общетоксическое действие и фармакологическую активность нового противовоспалительного хондропротекторного комплексного препарата - суппозиториев глюкозамина с индометацином.

5. Разработать метод визуализации воспалительного процесса посредством радионуклидной диагностики.

Научная новизна работы

Впервые проведено систематическое изучение влияния 75 новых и известных соединений на воспалительный процесс. Выявлена закономерность между влиянием на воспаление и составом препаратов. Предложена систематизация средств, влияющих на воспаление.

Впервые изучена и предложена композиция облепихового масла с витамином и и магния оксидом (гастробиол ЦЦ), которая обеспечивает противовоспалительную и гастропротекторную активность, накопление препарата в очаге воспаления и возможность длительного применения комплекса.

Выявлена противовоспалительная и репаративная активность комплекса, содержащего микробиологический (3-каротин и полиненасыщенные жирные кислоты (олеогель). Изучено и предложено сочетание (3-каротина с хлоргек-сидином, обладающее выраженным противоожоговым и антимикробным действием (тканевые аппреты).

Установлена эффективность композиции, содержащей глюкозамина гидрохлорид с индометацином в суппозиториях при остром и хроническом воспалении с хондропротекторным действием.

Разработана методология визуализации воспалительного процесса с использованием радиоизотопных препаратов 99шТс. Выявлена способность мет-ронидазола максимально накапливаться в воспалительном очаге, что позволяет предложить его в качестве маркера воспаления.

Научно- практическое значение работы

Проведенное изучение соединений минерального, биологического и синтетического происхождения на различных моделях воспаления и предлагаемая систематизация этих средств, создает основу для направленного поиска потенциальных препаратов, влияющих на воспалительный процесс.

Выявленное впервые антиульцерогенное, противовоспалительное, регенеративное и спазмолитическое действие комплекса облепихового масла с витамином и и магния оксидом (гастробиол ЦД), который не влияет на желудочную секрецию, обладает антиоксидантной и мембраностабилизирую-щей активностью, позволяет рекомендовать эту композицию для клинического изучения в качестве противоязвенного препарата.

Результаты проведенного фармакологического изучения препаратов микробиологического (3-каротина - мази (олеогель) и тканевых аппретов, свидетельствующие о выраженном их противоожоговом и антимикробном действии, указывают на перспективность применения разработанных лекарственных средств в терапии воспалительных заболеваний в дерматологии и хирургии.

Доказанная эффективность сочетания синтетического противовоспалительного препарата индометацина с хондропротекторным средством глюко-замином при ректальном способе введения в качестве корректора нежелательных эффектов индометацина может быть рекомендовано для терапии воспалительно-дегенеративных процессов опорно-двигательного аппарата.

Разработанная методология визуализации воспаления с использованием радиоактивного технеция и способность метронидазола накапливаться в зоне воспаления, дает возможность использовать его в медицинской практике, как с целью диагностики, так и мониторинга терапии воспалительных процессов.

Результаты диссертационного исследования внедрены в научно-исследовательскую работу лаборатории экспериментальной фармакологии отдела радиологических исследований НИИ кардиологии им. А.Л.Мясникова, ГУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН, учебный процесс кафедр фармакологии Ставропольской государственной медицинской академии, Пятигорской государственной фармацевтической академии, Казанском государственном медицинском университете.

Связь диссертационного исследования с научно-исследовательскими программами

Диссертационная работа выполнена в НИИ клинической кардиологии им. A.JI. Мясникова, Пятигорской государственной фармацевтической академии в соответствии с планами научно-исследовательских работ. (№ госрегистрации 01.2.00 312721).

Объем и структура диссертации

Работа выполнена на 336 стр. машинописного текста, иллюстрирована 87 таблицами, 28 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, общего заключения и выводов. Список цитируемой литературы содержит 241 источник отчечественных авторов и 199 иностранных источников.

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены на VI , VII, VIII, IX, X, XI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", (г. Москва, 1999-2005гг.), на 54-59 ежегодной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 1999-2004гг), на республиканской научно-практической конференции "Здоровье и болезнь как состояния человека", г. Ставрополь, 2000г. Клиническая фармакология (г. Москва; 2001-2003гг.); Международном симпозиуме по аллергологии (г. Сочи, 2003), Конгрессе иммунологов (г. Санкт-Петербург, 2003г.). На X Конгрессе иммунологии и аллергологии (г. Москва 2006г.).

Публикации

По теме докторской диссертации опубликовано 50 научных работ, 4 монографии, 2 патента РФ.

Постановка проблемы

Воспаление относится к числу наиболее распространенных защитных патологических форм, наряду с гипоксией и стрессом, является приспособительной реакцией организма. Роль воспалительного процесса в организме неоспорима. Воспаление выступает в виде своеобразного индикатора при распознавании местных процессов, препятствует генерализации инфекции, что непременно привело бы к сепсису, способствует благоприятному завершению травм, которые в противном случае могли бы заканчиваться шоком, а так же восстановлению тканевых дефектов. Тем не менее, механизмы воспаления причиняют тканям вторичные аутоповреждения, в результате которых процесс становится неуправляемым и приобретает отрицательный характер. При любой локализации феноменологически воспаление обусловливают определенные признаки, из которых основные: краснота, отек, повышенная температура, боль, нарушения функций органов.

При хроническом воспалении, данные симптомы приобретают постоянный характер, зачастую системный, с периодами обострений и ремиссий, в результате чего существенно снижается качество жизни современного человека, что связано с его особенностями. Острые воспалительные процессы чаще, чем прежде принимают затяжное течение, наряду с этим возрастает и число истинно хронических воспалительных заболеваний. Если флогогенный агент является неметаболизируемым (инородные тела), либо персистирую-щим в тканях (некоторые микроорганизмы), либо не может быть радикально устранен (аутоантиген), то создаются условия для продолжения альтерации и экссудации на фоне развернувшихся пролиферативных процессов. Вопросы фармакотерапии хронического воспаления освещаются в литературе противоречиво. Как правило, применяют лишь те же фармакологические средства, что и при лечении острого воспаления. Этого оказывается явно недостаточно и воспалительный процесс прогрессирует. При длительном приеме данных препаратов существенным препятствием к их назначению являются побочные эффекты, ведущим среди которых является ульцерогенез, нарушение метаболизма. Современная биология, медицина и фармация изыскивают новые лекарственные средства и новые пути купирования симптомов воспаления.

Поиск новых противовоспалительных препаратов с селективным антиферментным механизмом действия открывает проблемы новых побочных эффектов, ведущим среди которых является кардиотоксичность и цереброток-сичность. Поэтому перспективно обратить внимание на известные классические препараты, хорошо изученные и апробированные, «облагородив» их путем комбинирования с компонентами натурального происхождения: растительного, минерального, биологического.

В настоящей диссертационной работе предлагается решить проблему терапии воспалительных процессов с использованием препаратов из разных фармакологических групп с разным механизмом действия в зависимости от стадии и характеристики воспалительного процесса. Средства, влияющие на воспалительный процесс систематизированы, предложена шкала репарации.

Проведена скрининговая работа по поиску наиболее активных соединений. Результаты проведенного скрининга позволили установить следующую закономерность: снижение вторичной аутоальтерации воспалительного процесса наступает при действии иммунокорректоров. Блокирование стадии экссудации обеспечивают такие препараты и соединения как НПВС, спиртовые гидрофильно-липофильные вытяжки из растений (10-40%), седативные препараты, транквилизаторы. Стимуляция стадии пролиферативного воспаления наблюдается при действии стероидных препаратов, флогогенных средств, масляных вытяжек и экстрактов растений, иммуно- и ЦНС стимуляторов, в малых дозах прооксидантов, мембранодестабилизаторов, медиаторов воспаления. Стимуляция экссудативного воспаления обеспечивается флогогенными средствами: прижигающие, дубильные вещества, спиртовые вытяжки из растений высокой концентрации (40-70%), в большой дозе медиаторы воспаления, прооксиданты, мембранодестабилизаторы.

Все средства, влияющие на процесс воспаления предлагается классифицировать следующим образом: флогогенные средства (стимуляторы воспаления), флоголитические препараты (ингибиторы воспаления) и флого-модуляторы - средства, поддерживающие некоторые стадии воспалительного процесса при ингибировании других. Такой методологический подход к коррекции воспалительного процесса выбран не случайно, основан на проведенных теоретических и экспериментальных изысканиях в данной области. Если фармакологическая коррекция первичной альтерации не представляется возможным, то все остальные стадии процесса воспаления реально подвергать терапии. Стадию вторичной аутоальтерации и экссудации следует блокировать (ингибировать), стадию пролиферативного воспаления необходимо контролируемо пролонгировать. Двусторонняя модуляция воспалительного процесса отражает принцип комплементарной реактивности биологических систем. Данное обстоятельство позволяет более полно подойти к проблеме полноценной регенерации тканей и органов в целом.

Цель методологического постановления данной темы заключается в завершении репарации именно по типу реституции с образованием нормально функционирующей ткани на месте поврежденных, либо утраченных клеток.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Выявлена закономерность между составом препаратов и влиянием на воспаление в результате изучения по влиянию на воспалительный процесс 75 новых и известных соединений. Предложена систематизация средств, влияющих на воспаление: флогогены (стимуляторы), флоголитики (ингибиторы), флогомодуляторы - регулирующие стадии воспалительного процесса. Доказано, что наиболее активны соединения комбинированного состава.

2. Изучен и предложен комплекс облепихового масла с витамином и и магния оксидом (гастробиол ЦД), который проявил выраженное противовоспалительное действие в слизистой оболочке желудка и кишечника.

3. Установлена противовоспалительная и репаративная активность комплекса микробиологического Р-каротина с полиненасыщенными жирными кислотами (олеогель). Изучена и предложена комбинация Р-каротина с хлоргексидином, обеспечивающая противоожоговое и антимикробное действие на коже (тканевые аппреты).

4. Определена эффективность сочетания хондропротектора глюкозамина с индометацином для применения при остром и хроническом воспалении и дегенеративных изменениях суставов.

5. Разработан методологический подход в диагностике воспаления с использованием радиологических методов. Экссудативное и пролиферативное воспаление визуализированов статике и динамике с использованием меченного технеция. Показано, что метронидазол накапливается в больших концентрациях в зоне воспаления и может быть его маркером.

РЕЗЮМЕ

Поиск и фармакологическая характеристика лекарственных средств, влияющих на воспалительный процесс в эксперименте

Ключевые слова: гастробиол, глюкозамин, индометацин, суппозитории, |3-каротин, воспаление.

Объект исследования: комплекс облепихового масла с витамином и и магния оксидом, суппозитории глюкозамина с индометацином, микробиологический (3-каротин, экспериментальные животные: мыши, крысы, собаки, кролики, морские свинки, культуры тканей, изолированные органы

Предмет исследования: фармакологические и токсикологические свойства гастробиола, микробиологического (3-каротина, суппозиториев глюкоза-мина с индометацином

Цель работы: Разработка методологии диагностики и фармакологической коррекции воспаления с учетом его стадий. Поиск лекарственных средств с оптимальным воздействием на экспериментальный воспалительный процесс.

Методы исследования: фармакологические, физиологические, биохимические, гистологические, токсикологические, параклинические, радиологические, статистические.

Полученные результаты и их новизна: Разработана методология радиоизотопной визуализации воспаления. Выявлен препарат с оптимальным включением в воспалительный очаг. Систематизированы средства, влияющие на воспаление, установлена закономерность между их составом и влиянием на воспаление. Изучена фармакология нового гастропротектора гастробиола. Впервые установлена противовоспалительная и репаративная активность микробиологического (3-каротина в лекарственных формах: олеогель, тканевые аппреты. Впервые изучена фармакология противовоспалительного хонд-ропротектора суппозиториев глюкозамина с индометацином.

Область применения: экспериментальная фармакология, клиническая фармакология, гастроэнтерология, ревматология, терапия, кожные заболевания, медицинская радиология.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Увеличению воспалительных заболеваний способствует неблагоприятная экология, стресс, применение физиологически высокоактивных соединений (бытовой химии, пищевых добавок, лекарственных средств), что приводит к поливалентной сенсибилизации организма. При хроническом воспалении изменяется структура органов вследствие неполной регенерации, фибро-плазии и некроза. Предыдущие исследования по фармакотерапии воспалительного процесса не учитывали его дифференцировку на стадии и вид, действие препаратов сводилось к угнетению воспалительной реакции. Однако, блокирование пролиферативной стадии воспаления препятствует формированию нормально функционирующих клеток, утраченных в результате альтерации. Учитывая поливалентный характер воспаления, его фармакологическая регуляция должна быть многосторонней с полимодальным механизмом действия. Это могут обеспечить препараты многокомпонентного состава, содержащие в одной лекарственной форме ингредиенты натурального происхождения (растительного, биогенного, минерального) и синтетические различного механизма действия. В связи с этим, поиск эффективных препаратов для фармакологической многосторонней регуляции воспаления является актуальной проблемой. Именно этой проблеме была посвящена данная работа.

Методологический подход к коррекции воспалительного процесса основан на теоретических и экспериментальных исследованиях в данной области. Если фармакологическая коррекция первичной альтерации не представляется возможной, то все остальные стадии процесса воспаления реально подвергать терапии. Вторичную аутоальтерацию и экссудацию следует ингибиро-вать, стадию пролиферативного воспаления целесообразно пролонгировать.

В настоящей научно-исследовательской работе предпринята попытка решить проблему терапии воспалительных процессов посредством препаратов с различным механизмом действия в зависимости от стадии и характеристики воспалительного процесса. Систематизированы препараты,

-281влияющие на процесс воспаления: флогогены (стимуляторы воспаления), флоголитики (ингибиторы) и флогомодуляторы - средства, поддерживающие некоторые стадии воспалительного процесса при ингибировании других. Поскольку цель воспалительного процесса - завершение репарации по типу реституции с образованием нормально функционирующей ткани на месте поврежденных, либо утраченных клеток, то необходимо обеспечение слаженной и последовательной работой медиаторов, стимулирующих и ингиби-рующих воспалительную реакцию. Для достижения поставленной цели было проведено изучение специфической активности биологически активных веществ различного происхождения: минерального, растительного, животного, микробиологического по действию на стадии и различные формы воспалительной реакции. Выявлены наиболее активные вещества с противовоспалительным, репаративным эффектом и проведена корреляция между источниками их получения и фармакологической активностью. Установлено, что на воспалительный процесс оказывают влияние препараты из разных фармакологических групп. Регулирующие воспалительный процесс фармакологические препараты с разным механизмом действия и из разных фармакологических групп систематизированы: флогогены (индукторы воспаления), флоголитики (ингибиторы воспалительного процесса) и флогомодуляторы - средства, поддерживающие некоторые стадии воспалительного процесса при ингибировании других (от латинского тоёи1айо-мерность, размерность). Такой методологический подход к модуляции воспалительного процесса основан на проведенных теоретических и экспериментальных изысканиях в данной области. Предложена шкала репарации фармакологических средств с различным эффектом, отражающая дифференцированное влияние препаратов на воспаление в зависимости от его вида и стадии.

Воспаление не является органо-специфичным и сопровождает многие патологические состояния, в том числе, органов ЖКТ. Язвенно-эрозивное поражение желудка и 12-перстной кишки в виде самостоятельного и сопут

-282ствующего заболевания, как отрицательный токсический побочный эффект лекарственных средств, затрагивает все слои населения. В фармакотерапии воспалительного поражения слизистой оболочки ЖКТ большое значение придается средствам, повышающим резистентность и регенеративную способность. Важными этиологическими факторами данного заболевания является стресс, нарушение нормальной эндоэкологии, несбалансированное питание, потребление лекарственных средств (противовоспалительных, транквилизирующих, антибактериальных, антигистаминных, ингибиторов пере-кисного окисления липидов), снижение адаптационных возможностей организма. Особенно важным является факт количественного роста язвы желудка детей, у которых к большому числу стандартных противоязвенных препаратов имеются возрастные противопоказания. Поэтому в фармакотерапии воспаления слизистой оболочки ЖКТ большое значение придается средствам, повышающим резистентность и регенеративную способность желудочно-кишечного тракта. Одним из препаратов по влиянию на воспалительный процесс явился комплекс облепихового масла с витамином U и MgO, патентное наименование которого - Гастробиол ЦД. Ему посвящено отдельное углубленное исследование, с целью довести комплекс до препарата.

Серию фармакологических исследований целесообразно было начать с определения безопасности, дозировки и кратности субстанции, предложенной для наполнения капсул. На культуре тканей куриных эмбрионов установлено отсутствие раздражающего действия на хорионаллантоисную оболочку. Определено, что субстанция облепихового масла с витамином U и MgO, относится к слабым раздражителям слизистых оболочек млекопитающих и относится к практически нетоксичным веществам, LD50 > 5000 мг/кг, при длительном применении не оказал общетоксического и раздражающего действия на млекопитающих. Гастробиол обладал выраженным противоязвенным действием в желудке и 12-перстной кишке. Использовали модель стероидно-этанолового поражения желудка (преднизолон 20 мг/кг, в 80% в

-283объеме 8 мл/кг). Учитывая, что одним из факторов ульцерогенеза является стрессорный компонент, и Г. Селье в первые 6-48 ч после воздействия стресса (реакция тревоги) отмечал эрозии желудочно-кишечного тракта, было целесообразным изучить влияние лекарственной формы на профилактику стрессорного язвообразования. Применение изучаемой лекарственной формы предотвращало диффузное язвенно-эрозивное поражение желудка через сутки после стресса (фиксирования на спине 60 мин) и на модели гистаминовой язвы (0,1% раствора бмг/кг). Предположительно участие гистамина в развитии дистрофии тканей желудка не находится в прямой связи с его физиологической медиаторной ролью, а скорее обусловлено его действием на метаболизм в этих тканях, учитывая способность гистамина активировать адени-латциклазную систему и проницаемость мембраны клетки для ионов. Именно поэтому было целесообразным применить данную модель ульцерогенеза.

Эффект исследуемой композиции по регенеративному компоненту превосходит показатель синтетического средства метилурацила и средства растительного происхождения - облепихового масла. Полученные результаты показали возможность применения нового состава комплекса в качестве лечебного и профилактического средства при воспалении желудка и кишечника. По действию на кишечный спазм, ишемию привратника гастробиол проявил спазмолитический эффект. Гастропротективный эффект вероятно связан с повышением метаболических регенеративных процессов слизистой оболочки желудка и ее резистентность к факторам агрессии.

При прямой радиометрии было показано, что накопление гастробиола в воспаленной фиброзной капсуле превышало таковую в нормальной ткани. Данные эксперимента свидетельствуют о фиксации гастробиола и его действии именно в очаге воспаления, вследствие чего побочные эффекты на остальные органы и ткани будут проявляться в гораздо меньшей степени.

В интегральном отношении композиция облепихового масла с витамином и и представляет собой наиболее удачную комбинацию средств

-284растительного и синтетического происхождения. При этом оптимально сочетаются антиульцерогенный, противовоспалительный эффект, спазмолитическое действие и стимуляция регенеративных процессов. Согласно предлагаемой классификации, гастробиол является комплексным противоязвенным лекарственным средством с флоголитическим компонентом действия. На гастробиол ЦД получен патент. Препарат включен в план 2006 г освоения новых видов продукции на предприятии Алтайвитамины, г.Бийск.

Следующим комплексным средством, с оптимальным воздействием на воспалительный процесс, которое определили посредством скрининга - это препараты на основе микробиологического (3-каротина. Каротиноиды - наиболее многочисленная и широко распространенная группа микробных пигментов. Рациональных и комфортных лекарственных форм отечественного производства для биотехнологического |3-каротина недостаточно. В этой связи, целесообразно изучение новых лекарственных форм биотехнологического (3-каротина и фармакологическое обоснование их использования для коррекции воспаления. Разработаны и промышленным способом апробированы олеогель 0,01% и аппретированные лекарственные формы с Каролином и хлоргексидином. При изучении противовоспалительной и ранозаживляющей активности установлено, что олеогель обладает выраженным влиянием на коррекцию воспалительного процесса в равной мере с препаратом сравнения. Тканевые аппреты существенно влияют на саногенез воспалительного и ожогового повреждения кожи и, кроме того, салфетки обладали антимикробной активностью в отношении таких патогенных микроорганизмов, как стафилококк, бациллы и бактерии кишечной группы. Все вышеизложенное дает основания предложить разработанные наружные лекарственные формы с р-каротином в качестве дополнительного лекарственного средства при раневой, комбустиозной патологии кожи и воспалительных процессах в ней, различной этиологии, удачно сочетая противовоспалительный эффект, антимикробное действие и влияние на репаративные процессы в коже. В своих ис

-285следованиях наружных лекарственных форм биотехнологического р-каротина мы исходили из того, что связь противовоспалительной активности, ранозаживляющего и антимикробного действия могут служить определяющим фактором в их комплексном использовании для коррекции альтератив-ных процессов инфекционной и неинфекционной этиологии. . Согласно предлагаемой классификации, гастробиол является комплексным противоязвенным лекарственным средством с флоголитическим компонентом действия. Лекарственные формы биотехнологического (3-каротина внедрены на фармацевтическом предприятии ЗАО «Роскарфарм», г. Краснодар.

Средством с оптимальным воздействием на воспалительный процесс, которое определили посредством скрининга - это комплекс, полученный на основе биологически активных компонентов животного происхождения -глюкозамина гидрохлорид с индометацином. В настоящее время выпускается раствор глюкозамина и таблетки глюкозамина в качестве хондропротектор-ных средств. Индометацин - дженерик отечественного производства, так же выпускается в нашей стране в виде монопрепарата. Уменьшить побочное действие популярных классических противовоспалительных средств, возможно изменив их путь поступления в организм. В этом плане заслуживает особое внимание ректальный способ введения. Возможность сочетания противовоспалительных препаратов и средств, воздействующих на метаболические процессы в хондроцитах и синовиоцитах - актуальная и социально значимая проблема. Глюкозамина гидрохлорид получают при переработке морских организмов из вторичного сырья хитозана. Широкое распространение, многосторонняя физиологическая активность глюкозамина, сочетающаяся с низкой токсичностью, объясняет не снижающуюся интенсивность поиска новых лекарственных форм на его основе и изучения их фармакологических свойств. Для изучения фармакологической активности суппозиториев глюкозамина с индометацином была вначале определена степень безопасности в условиях острого и субхронического эксперимента. Выявлено дозозависимое

-286влияние О-глюкозамина гидрохлорида на острое экссудативное воспаление, пролиферативное и хроническое неспецифическое воспаление. Установлена оптимальная доза, оказывающая выраженный противовоспалительный эффект - 10 мг/кг. Глюкозамина гидрохлорид в этой дозе способствовал нормализации температурного режима, понижая как реактивную и воспалительную гипертермию, так и компенсаторную гипотермию. Глюкозамина гидрохлорид и его комбинация с индометацином положительно влияла на динамику первичного и вторичного хронического артрита, обладала анальгезирующей активностью. Эффект вторичной альтерации протекал более мягко на фоне действия именно суппозиториев. Антикоагуляционная активность выражена менее агрессивно, чем у индометацина. Активность не уступает зарегистрированным зарубежным аналогам. Экспериментальные данные позволяют предложить сочетание индометацина с глюкозамином в качестве перспективного средства длительной терапии хронических дегенеративно-воспалительных заболеваний с учетом приоритетности ректального способа применения. Суппозитории индометацина с глюкозамином - новое перспективное противовоспалительное средство, модулятор адаптационно-приспособительных реакций, анальгетическое и жаропонижающее средство.

Следует признать целесообразность комбинирования глюкозамина с индометацином для усиления противовоспалительных свойств и коррекции нежелательных побочных эффектов последнего. В соответствии с предложенной классификацией, суппозитории глюкозамина и индометацина принадлежат к группе хондропротекторов с флогомодулирующим действием. На суппозитории глюкозамина с индометацином получен патент с промышленным внедрением на предприятии "НТЦ Экобиотек - Мурманск", в г. Мурманск.

В свете предлагаемой классификации, для фармакологической модуляции воспаления важно определить стадию патологического процесса. Очаги воспаления могут быть выявлены на ранних этапах их развития, когда еще не сформировался классический абсцесс с помощью радионуклидных методов.

-287

Практически все методы визуализации, применяемые в ядерной медицине, являются информативными, точными и обладают высокой разрешающей способностью, так как базируются на функциональных (физиологических и/или биохимических) изменениях органов и тканей на ранней стадии и на клеточном уровне. С другой стороны, развитие ядерной (радиационной) медицины неразрывно связано с разработкой новых эффективных фармацевтических препаратов, меченных радиоактивными изотопами, с созданием и совершенствованием специальной радиодиагностической аппаратуры. Острое экссудативное и пролиферативное воспаление визуализировано с использованием радио препарата технеция Тс 99т пирофосфата в статике и динамике.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности метода, о возможности использования в эксперименте с целью диагностики, и мониторинга терапии и о целесообразности проведения дальнейших экспериментальных изысканий в этом направлении. Радиологическое изучение 24 лекарственных средств из разных фармакологических групп, показало, что анти-протозойное средство метронидазол избирательно скапливается в очаге воспаления, что может стать основой для получения радиофармацевтического препарата (присоединения радиоактивной метки к этому препарату). Данное обстоятельство может эффективно сказаться на последующих изысканиях в данной области и послужить новым направлением в радиологической фармакологии для разработки радиофармацевтического маркера воспаления.

Таким образом, в настоящей диссертационной работе проведены биологические исследования по получению и изучению отечественных препаратов, влияющих на процесс воспаления в разных органах и системах с гастропро-тективным, антидегенеративным, ранозаживляющим эффектом.