Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Перенос кальцитонина из С-клетки в кровь и его гемато-С-целлюлярное регулирование в щитовидной железе нормальных и десимпатизированных гуанетидином крыс

На правах рукописи

Г ОД

КРАСНОПЕРОВ Ренат Анатольевич - илг, .

ПЕРЕНОС КАЛЬЦИТОНИНА ИЗ С-Ю1ЕТКИ В КРОВЬ И ЕГО ГЕМАТО-С-ЦЕЛЛЮЛЯРНОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ В ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЕ НОРМАЛЬНЫХ И ДЕСИМПАТИЗИРОВАННЫХ П/АНЕТИДИНОМ КРЫС

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 1999

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова.

акад. РАМН, д.м.н, проф. А.А.Кубатиев; д.м.н, проф. ЕАДемуров; д.м.н, проф. В.И.Кандрор.

Ведущее учреждение: Институт общей патологии и патологической физиологии РАМН.

Защита диссертации состоится 16 ноября 1999 года в 14.00 на заседании Диссертационного Совета Д074.05.10 при Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова (г. Москва, ул. Б.Пироговская, д.2-6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова (Зубовская пл., д.1).

Автореферат разослан ¿^-^^¿¡Яу 1999 года.

Ученый секретарь Диссертационного Совета

Научные консультанты:

чл.-корр. РАМН, д.м.н, проф. С.В.Грачев; д.б.н., проф. В.А.Глумова.

Официальные оппоненты:

к.м.н, доц.

А.Ю.Миронов.

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы.

1. Актуальность выбранного направления исследований. В функциональном статусе организма большое значение имеет эндокринная система, обладающая широким диапазоном регуляторных влияний. Она является важнейшим фактором гуморального контроля, координации и интеграции всех процессов жизнедеятельности. Особую роль система эндокринной регуляции играет в механизмах индивидуального развития, воспроизводства и иммунной защиты организма. При патогенных воздействиях компенсаторно-восстановительные реакции также протекают с непосредственным участием эндокринной системы.

Одним из основных направлений современной эндокринологии является изучение структурно-функциональных соответствий между состоянием инкретирующих клеток и уровнем их гормональных влияний в организме. В последние годы это направление все более успешно развивается в связи с разработкой новых методов, обладающих повышенной точностью. В результате исследователи стали фиксировать данные, вносящие элемент противоречивости в существующие представления о феномене внутренней секреции. Было, например, обнаружено, что в некоторых случаях клетки интенсивно производят гормональный продукт, но в кровь он поступает в незначительных количествах (Колесник и др., 1993; Рящиков и др., 1988; КИам^'а е1 а1., 1990). Подобного рода ситуации приобрели уже и клиническую значимость. В частности, в онкологической эндокринологии выделен новый класс опухолей - инциденталомы (Мамаева, 1997; Р1ессЫа е1 а1„ 1995; Тегго!о е! а!., 1998). При инциденталомах опухолевому перерождению подвергаются клетки, способные к активному синтезу гормональных веществ. Однако, концентрация соответствующего/их гормона/ов в крови нередко повышается лишь незначительно либо вообще остается нормальной.

Отмеченные противоречия могут иметь следующее объяснение. Методы, используемые для оценки состояния эндокринных клеток, характеризуют выведение гормона/ов во внеклеточное пространство. Дальнейшее поступление гормонального продукта в кровь определяется другим фактором - проницаемостью гематоцеллюлярной (ГЦ) системы в инкретирующем органе. Не исключено, что параметры потока гормональных молекул могут существенно меняться при прохождении через ГЦ-барьер. В частности, при равных значениях интенсивности клеточного экзоцитоза ГЦ-система потенциально способна с различной скоростью обеспечивать выведение гормона/ов в кровь. Следовательно, противоречивость получаемых данных может быть в определенной мере связана с неучитыванием влияний, оказываемых ГЦ-системой на процесс проведения гормональных молекул в русло гемоциркуляции. С этих позиций представляется очевидной актуальность настоящего исследования, в рамках которого впервые получены сведения о параметрах гормонопереноса из инкретирующей клетки в кровь и закономерностях его регулирования ГЦ-системой.

2. Актуальность разработки технологии количественного изучения транспорта кальцитонина (КТ) через гемато-С-целлюлярный (ГСЦ) барьер. С-клетки щитовидной железы (ЩЖ) синтезируют полипетидный гормон КТ и накапливают его в осмиофильных гранулах (см. обзорные публикации: Григорьев и др., 1992; Агпа е1 а1., 1995; Каие е1 а!., 1993). При воздействии секреторных стимулов гранулы перемещаются к С-клеточному сосудистому полюсу и вступают в процесс экзоцитоза. Дальнейший транспорт КТ в кровь обеспечивается ГСЦ-системой.

Для изучения регуляторных влияний, оказываемых ГСЦ-системой на проходящий через нее поток КТ, необходимы сведения об основных параметрах гормонопереноса в ЩЖ. В свою очередь, задача идентификации параметров ГСЦ-транспорта характеризуется: I) отсутствием исходной информации о скорости поступления КТ из С-клетки в ГСЦ-систему; 2)

ненаблюдаемостью процесса ГСЦ-переноса КТ существующими методами и 3) стохастичностью транспортного поведения ГСЦ-системы. Концептуально такая постановка задачи соответствует технологии камерного анализа. Однако, известные методы камерного анализа не позволяют оценить параметры транспорта КТ через ГСЦ-барьер. Попытка их применения приводит к непреодолимым техническим трудностям, связанным, например, с необходимостью подачи меченого КТ на вход ГСЦ-системы. Это обусловливает важность создания новой технологии, в рамках которой может быть найдено решение актуальной задачи идентификации параметров ГСЦ-транспорта КГ в ЩЖ.

3. Актуальность изучения регуляторной деятельности ГСЦ-системы в норме и при селективной фармакологической десимпатизации. Результаты выполненных нами ранее исследований позволили составить целостное представление о феноменологических и количественных аспектах ультраструктурной организации ГСЦ-системы в ЩЖ (Красноперое и др., 1994). Были выявлены и некоторые морфофункциональные соответствия, косвенно свидетельствующие о направленности интратиреоидной миграции КТ (Глумова, Красноперов, 1994). Однако, деятельность ГСЦ-системы по регулированию поступления КТ в кровь до настоящего времени не изучалась. Не были также получены характерные значения параметров ГСЦ-гормонопереноса [вероятности полного проведения КТ через ГСЦ-барьер (Р«о%), уровня ГСЦ-потерь КТ (РКт), биологической доступности (Р«т) и периода ГСЦ-полузадержки эндогенного КТ в ЩЖ (^д)]. В данной связи представляется актуальным изучение регуляторной деятельности ГСЦ-системы в нормальных условиях функционирования. Не менее важным является анализ особенностей ГСЦ-регулирования при патогенных воздействиях на организм. Вызывает, в частности, интерес рассмотрение ГСЦ-системы при селективной фармакологической десимпатизации, поскольку изменения С-клеток (Рящиков, 1989) и ультраструктуры ГСЦ-взаимодействия (Красноперов, 1995), обнаруженные у получавших гуанетидин

крыс, дают основания предполагать нарушение регулирования транспорта КТ в ЩЖ.

Изучение ГСЦ-системы у десимпатизированных животных является актуальным не только с позиций общенаучного анализа сбоев в ее функционировании, вызванных разбалансированностью внешних регулирующих влияний. Патофизиологический аспект получаемых в эксперименте сведений не менее важен, так как гуанетидиновая десимпатизация имеет признанный клинический прототип - вегетативную полинейропатию с преимущественным поражением постганглионарных адренергических нейронов. Данный синдром нередко встречается при сахарном диабете, амилоидозе и злокачественных опухолях (Вейн и др., 1991; Ando et al., 1995; Dejgaard et al., 1996; Tanaka et al„ 1997). Перечисленные заболевания иногда сопровождаются патологией кальциевого обмена (Хазанова и др., 1991; Niccoli et al., 1995), что в определенной мере может быть связано с нарушением эндокринной функции ГСЦ-системы в условиях адренергического дефицита.

Исследование вызванных гуанетидином отклонений в регуляторной деятельности ГСЦ-системы необходимо и с учетом внедрения в клиническую практику новой схемы лечения рефлекторной симпатической дистрофии. Важным компонентом этой схемы является назначение КТ, чаще всего в комбинации с гуанетидином (Arlet et al., 1997; Gordon, 1996; Hamamci et al., 1996). На основе информации об изменениях параметров поступающего в кровь потока КТ у десимпатизированных гуанетидином крыс может быть улучшено понимание патофизиологических основ проводимой медикаментозной терапии.

В связи с вышесказанным несомненна актуальность изучения регуляторной деятельности ГСЦ-системы в условиях нормального организма и при гуанетидиновой десимпатизации. Постановка и решение данной задачи в литературе нами обнаружены не были.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования являлось изучение влияний, оказываемых ГСЦ-системой на поток кальцитонина из С-кпетки в кровь, у нормальных и десимпатизированных гуанетидином крыс.

Задачи исследования:

1. Разработать технологию идентификации параметров транспорта кальцитонина через ГСЦ-барьер.

2. Оценить параметры ГСЦ-гормонопереноса в щитовидной железе нормально развивавшихся крыс.

3. Выявить основные закономерности влияний, оказываемых ГСЦ-системой в норме на кинетику поступления кальцитонина в кровеносное русло.

4. Дать количественную характеристику процессу ГСЦ-гормонопереноса в щитовидной железе десимпатизированных гуанетидином особей.

5. Определить особенности регуляторной деятельности ГСЦ-системы при генерализованном поражении постганглионарных адренергических нейронов.

6. На основе полученных данных охарактеризовать участие ГСЦ-системы в механизмах компенсации отклонений, возникающих в системе эндокринной регуляции кальциемии у неонатально десимпатизированных крыс разного возраста.

Научная новизна. В настоящей работе впервые рассматриваются влияния, оказываемые ГСЦ-системой на поток КТ у нормальных и десимпатизированных гуанетидином крыс. Результаты исследования позволили выделить в регуляторной деятельности ГСЦ-системы два направления. Одно из них связано с обеспечением оптимальных значений Ркт-Второе направление предполагает сглаживание вариации потока КТ, идущего из С-клетки в кровеносное русло.

В сглаживающих реакциях ГСЦ-системы выделено две компоненты: емкостная и морфокинетическая. С применением аппарата теории случайных процессов определены условия эффективной реализации емкостного

механизма сглаживания. Проведен анализ ГСЦ-морфокинетики. Выяснено, что сглаживающая активность ГСЦ-системы связана с корреляцией между толщиной ГСЦ-интерстиция (тгсци) и численной плотностью сублеммальных гранул на сосудистом полюсе С-клетки (NVsg).

ГСЦ-система впервые изучена при гиперкапьциемии. В группе крыс с субхронической кальциевой нагрузкой показано снижение емкости интерстициальной составляющей ГСЦ-системы. При этом морфокинетическая корреляция "тгсци - NVsg" отсутствует.

Получены неизвестные ранее данные об особенностях ГСЦ-транспорта у десимпатизированных животных. Выявлены и уточнены сдвиги, возникающие в системе эндокринной регуляции кальциемии. Оценено участие ГСЦ-системы в компенсации отклонений сывороточного кальция (Са) в динамике развития изменений, вызванных неонатапьным поражением постганглионарных адренергических нейронов.

В работе впервые описаны нарушения, затрагивающие способность ГСЦ-системы сглаживать вариацию проходящего через нее потока КТ. В патологический процесс оказываются вовлеченными, главным образом, механизмы морфокинетического регулирования. В особенности это выражено у 12-месячных десимпатизированных крыс, ГСЦ-система которых принципиально по-новому влияет на проходящий через нее поток КГ, усиливая его флюктуации. Емкостная компонента ГСЦ-регулирования остается относительно сохранной. Несколько меняется лишь диапазон колебаний КТ, сглаживаемых ГСЦ-системой.

Диссертационное исследование выполнено на основе ряда оригинальных разработок. Особое место среди них занимает новая технология изучения гормонального транспорта, базирующаяся на анализе дисперсии статистической связи между параметрами потока гормона на входе и выходе транспортирующей системы. В рамках данной технологии получены специальные математические формулы, позволяющие рассчитывать Rkt, Fkt и tin- Тем самым в практику научных исследований впервые вводится способ

идентификации параметров транспорта, применимый при изучении эндокринной деятельности различных ГЦ-систем.

В работе используется также ряд новых методов стереометрии ГЦ-барьеров, полученных на основе типологического анализа изображений ГЦ-барьеров в различных органах. Это позволило добиться большей точности результатов при изучении регуляторной деятельности ГСЦ-системы. Одна из разработок защищена патентом РФ.

Таким образом, в рамках настоящего исследования впервые выявлен и описан феномен изменения параметров гормонального потока при прохождении через ГЦ-систему, пространственно и микроанатомически обеспечивающей проведение гормона из инкретирующей клетки в кровь. Данный феномен рассматривается на примере ГСЦ-системы, т.е. системы сопряжения тиреоидной С-кпетки с перифолликулярным гемокапилляром. С помощью новой технологии исследования и соответствующего ей методического аппарата определены закономерности регуляторных влияний, оказываемых ГСЦ-системой на проходящий через нее поток КТ. При этом вопросы регулирования транспорта КТ из С-клетки в кровь рассматривались в условиях нормы и при селективной фармакологической десимпатизации, вызванной длительным введением гуанетидина. Некоторые предположения об устойчивости механизмов ГСЦ-регулирования проверялись в группе контрольных животных с субхронической кальциевой нагрузкой.

Научно-практическая значимость и рекомендации к использованию результатов работы. Результаты настоящего исследования характеризуют регуляторную деятельность ГСЦ-системы в ЩЖ. У нормально развивавшихся животных определены значения основных параметров ГСЦ-гормонопереноса. Показано, что при прохождении через ГСЦ-систему вариация потока КТ снижается. По всей видимости, это необходимо для защиты систем, воспринимающих гормональную информацию в крови и органах-мишенях, от высокоамплитудных и/или высокочастотных колебаний уровня КТ.

Проанализированы механизмы ГСЦ-регулирования в ЩЖ нормальных крыс. Определен диапазон флюктуаций потока КТ, эффективно сглаживаемых

ГСЦ-системой в силу ее емкостных свойств. Рассмотрены регуляторные проявления ГСЦ-морфокинетики. Выяснено, что сглаживающий эффект достигается за счет некоторого уменьшения эффективности транспорта КТ. При этом потери эндогенного КТ в ГСЦ-системе не превышают 15%. Механизмы ГСЦ-регулирования изучены в динамике постнатального онтогенеза. У 1-месячных крыс проанализирована их устойчивость к субхронической кальциевой нагрузке.

Результаты исследования нормально развивавшихся животных демонстрируют физиологическую значимость влияний, оказываемых ГСЦ-системой на перенос КТ из С-клетки в кровь. Это позволяет рассматривать ГСЦ-систему в качестве фактора окончательной настройки параметров потока КТ, покидающего ЩЖ. Полученные данные углубляют современные представления о феномене внутренней секреции и демонстрируют новые возможности регулирования процесса поступления гормона из эндокринной клетки в кровь.

Новые факты об изменениях регуляторной деятельности ГСЦ-системы у десимпатизированных гуанетидином крыс также представляют определенный теоретический интерес. Показано, что с развитием патологических изменений ГСЦ-система утрачивает способность адекватно влиять на параметры проходящего через нее потока КГ. В частности, ослабевают сглаживающие воздействия: меняется ГСЦ-морфокинетика, у 6- и 12-месячных крыс суживается диапазон флюкгуаций КГ, сглаживаемых ГСЦ-системой в рамках емкостного механизма. Обнаруженные изменения не могут не сказываться на устойчивости системы кальциевого гомеостаза к отклоняющим и повреждающим факторам.

У десимпатизированных гуанетидином крыс проведен анализ сдвигов в системе эндокринного контроля кальциемии. Уточнена направленность изменений сывороточного Са, базальных уровней КТ и паратгормона (ПТГ). Определена степень вовлеченности ГСЦ-системы в компенсацию выявленных отклонений. Полученные результаты расширяют имеющиеся представления о

характере и выраженности нарушений кальциевого гомеостаза при дисбалансе вегетативных влияний в организме.

В диссертации предлагаются разработки, которые могут быть использованы при изучении регуляторной деятельности ГЦ-систем и в других инкретирующих органах. Можно полагать, что особенно полезными для последующих работ в данном направлении являются технология исследования переноса КТ через ГСЦ-барьер и методы стереометрии ГЦ-систем. Важен также математический аппарат изучения транспортной и регуляторной деятельности ГСЦ-системы, сформированный нами с применением методов иммитационного математического моделирования и положений теории случайных процессов. Особый интерес при этом вызывают уравнения, связывающие 1) уровень ГСЦ-потерь КТ (Rkt) со степенью их вариабельности (CVr) при заданной величине \/аггсцп - частной дисперсии статистического прогноза, обусловленной Rkt, и 2) биологическую доступность эндогенного КТ (Fkt) с периодом его ГСЦ-полузадержки (ti,2).

Таким образом, результаты настоящего исследования являются основой нового научного направления по изучению влияний, оказываемых ГЦ-системами на процесс проведения гормональных молекул из инкретирующей клетки в кровь. В рамках данного направления могут, в частности, рассматриваться 1) механизмы и закономерности ГЦ-регулирования в эндокринных органах, 2) воздействие физиологических стимулов на регуляцию поступления гормонов в кровеносное русло, 3) нарушения регуляторной функции ГЦ-систем при повреждающих воздействиях, 4) компенсаторно-восстановительные процессы, происходящие с участием ГЦ-систем, и 5) возможности фармакологической коррекции эндокринных нарушений, связанные с прямым и/или опосредованным влиянием на регуляторную деятельность ГЦ-систем.

Представляемые технология идентификации параметров гормонального транспорта и соответствующий ей методический аппарат могут быть также полезны при решении любых аналогичных задач,

характеризующихся отсутствием исходной информации о скорости поступления вещества в транспортирующую систему и ненаблюдаемостью происходящих в ней процессов массопереноса. При работе в смежных предметных областях могут использоваться и предлагаемые нами методы стереометрического анализа ГЦ-барьеров. Это позволит сделать более комплексным изучение защитной и трофической функций ГЦ-систем.

Основные положения диссертационной работы могут быть внедрены в учебный процесс на кафедрах нормальной и патологической физиологии, общей патологии, гистологии, фармакологии и клинической эндокринологии в медицинских и других вузах при рассмотрении вопросов физиологии тиреоидных С-клеток, структурно-функциональной организации ГЦ-барьеров, эндокринной регуляции кальциевого гомеостаза, а также при изучении внутрижелезистых факторов регулирования инкреции и методов иммитационного математического моделирования.

Внедрение. Полученные результаты внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии и общей патологии Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова, кафедрах гистологии и эмбриологии Ижевской, Ивановской и Тюменской медицинских академий, а также используются в научно-исследовательской работе Центральной научно-исследовательской лаборатории Казанского медицинского университета, кафедр гистологии, нормальной анатомии, биологии и медицинской генетики Ижевской медицинской академии. Способ нанесения границ ГЦ-барьеров защищен патентом Российской Федерации N0 2075080.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Регуляторная деятельность ГСЦ-системы в нормальных условиях и при патологических состояниях может изучаться с использованием новой технологии количественной оценки гормонального транспорта, суть которой заключается в анализе дисперсии статистической связи между параметрами потока гормона на входе и выходе транспортирующей системы.

2. ГСЦ-система в щитовидной железе нормально развивавшихся крыс способна регулировать перенос эндогенного кальцитонина из С-клетки в

кровеносное русло. Одним из основных направлений регуляторной деятельности ГСЦ-системы является сглаживание флюктуаций проходящего через нее потока кальцитонина.

3. В условиях селективной фармакологической десимпатизации регуляторная деятельность ГСЦ-системы претерпевает существенные изменения. В динамике патологического процесса меняются параметры транспорта кальцитонина через ГСЦ-барьер. Обнаруживаются также нарушения сглаживающей активности ГСЦ-системы.

Апробация работы. Материалы настоящего исследования доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции "Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте" (г. Тюмень, 1996), заседании Удмуртского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (г. Ижевск, 1997), Всероссийской научной конференции с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины" (г. Москва, 1998), Всероссийской научной конференции "Закономерности морфогенеза и регуляции тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях" (г. Тюмень,

1998), заседании кафедры медицинской информатики и статистики Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова (г. Москва, 1998) и IV Всероссийском съезде морфологов с международным участием (г. Ижевск,

1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 научные работы, в том числе 17 - в центральной и международной печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, трех приложений и указателя литературы. Текст изложен на 233 страницах машинописи, иллюстрирован 47 рисунками и содержит 27 таблиц. Библиография включает 356 источников, в том числе 86 -на русском языке.

Основные условные обозначения

ГСЦ - гемато-С-целлюлярный,

КТ - кальцитонин (гипокальциемизирующий пептид),

ПТГ - паратгормон,

РИА - радиоиммунный анализ,

Са - кальций,

С\/вход - коэффициент вариации потока КТ на входе ГСЦ-системы, СУвыход - коэффициент вариации потока КГ на выходе ГСЦ-системы, CVr - коэффициент вариации ГСЦ-потерь КГ, Fkt - биологическая доступность эндогенного КТ,

Nvsg - численная плотность сублеммапьных гранул на сосудистом полюсе С-клетки,

Рюо% - вероятность полного поступления эндогенного КТ из С-клетки в

циркулирующую кровь, Rkt - уровень ГСЦ-потерь эндогенного КТ,

ti/2 - период полуэлиминации КТ, обусловленной его потерями на этапах ГСЦ-гормонопереноса (син.: период ГСЦ-полузадержки эндогенного КТ),

"ti/2 - характерное значение периода ГСЦ-полузадержки эндогенного КТ,

fi/2 - характерное время вариации уровня КТ в ГСЦ-системе,

Твход " характерное время вариации потока КТ на входе ГСЦ-системы,

Ткг - длительность проведения КТ через тиреоидный ГСЦ-барьер, Vrcun - объем интерстициапьной составляющей единичной ГСЦ-зоны, Ver - объем С-клеточной секреторной гранулы, Vari-сцп - частная дисперсия ковариационного прогноза Y по X,

обусловленная вариабельностью ГСЦ-потерь КТ, Уагху - общая дисперсия статистической модели У(Х), екг - инструментальная погрешность РИА концентрации КТ, esg - ошибка измерения NVsg,

тгеци - дистанция трансинтерстициапьного переноса КТ в ГСЦ-зоне (син.: толщина ГСЦ-интерстиция, толщина интерстициальной составляющей ГСЦ-комплекса).

Материалы и методы исследования

Экспериментальные процедуры

Исследование проведено на 182 белых крысах-самцах 0,5-, 1-, 3-, 6- и 12-месячного возраста. В каждой возрастной группе части животных (п=17) вводили гуанетидина моносульфат в дозе 15 мг/кг/сут. п/к в течение первых 14 дней после рождения. Контрольные особи в те же сроки получали изотонический раствор натрия хлорида (по п=18 в возрастной группе). У дополнительных контрольных животных 1-месячного возраста (п=7) вызывали гмперкальциемию в/м инъекциями 10%-ного раствора глюконата Са по 0,7 мл/сут. в течение 3 дней. Пробы оттекающей от ЩЖ крови на уровне правого желудочка сердца забирали методом сердечной пункции по Waynforth (1980). Декапитировали животных под эфирным наркозом. Определение сывороточной концентрации КТ и ПТГ

Для определения сывороточной концентрации КТ использовались тест-наборы для радиоиммунного анализа (РИА) "RIA-mat Calcitonin II" (Mallinckrodt Diagnostica GmbH, ФРГ) [порог чувствительности - 7,8 пг/мл; коэффициенты внутрисерийной и межсерийной вариации - 7,3% (п=30) и 10,6% (п=4) соответственно; неспецифическое связывание - менее 5%]. Уровень ПТГ измеряли иммунорадиометрическими наборами "ELSA-PTH" (CIS bio international, Франция) [порог чувствительности - 0,7 пг/мл; коэффициенты внутрисерийной и межсерийной вариации - 2,1% (п=15) и 2,7% (п=15) соответственно; неспецифическое связывание - не обнаружено]. Колориметрия Са в сыворотке крови

Для оценки уровня общего Са в сыворотке крови использовали наборы реактивов "Са КХ 50" фирмы Lachema (Чехия). Коэффициент внутрисерийной вариации - 3,0%.

Трансмиссионная электронная микроскопия

Фрагменты ЩЖ проводили для электронной микроскопии общепринятыми методами. Изучение ультратонких срезов и фотографирование необходимых полей зрения выполняли на электронных

микроскопах JEM-100B и Hitachi Н-300 (Япония). Размерные свойства ГСЦ-системы исследовали с применением набора разработанных нами методов стереометрии ГЦ-барьеров (Красноперое Р.А. и др., 1996, 1998). В частности, для нахождения границ ГСЦ-зоны использовали способ, основанный на выделении минимальной зоны ГСЦ-прилегания, в пределах которой естественная вариабельность хГсци существенно не сказывается на взаимной удаленности контуров сосудистого полюса С-кпетки и базальной поверхности кжста-С-целлюлярного эндотелиоцита (патент РФ No 2075080, заявл. Красноперовым и др., 1994). Сублеммальное представительство секреторных гранул на сосудистом полюсе С-клетки выражали NvSE. Оценка параметров ГСЦ-транспорта КТ

Перенос КТ из С-клетки в кровь изучали с использованием предлагаемой технологии оценки параметров гормонального транспорта, суть которой заключается в анализе дисперсии статистической связи между параметрами потока гормона на входе и выходе транспортирующей системы. При этом в изучаемой группе животных формировали модель статистической связи между экструзионной активностью сосудистого полюса С-клетки (X=Nvsg - вход ГСЦ-системы) и концентрацией КТ в сыворотке оттекающей от ЩЖ крови (Y - выход ГСЦ-системы). Частную дисперсию модели Y(X), обусловленную вариабельностью ГСЦ-потерь КТ (УагГсцп), оценивали с помощью анализа общей дисперсии модели (Varxy). Соответственно полученной оценке частной дисперсии \/агГсцп определяли Р100% и Rkt-Величину Fkt вычисляли как Fkt=1-Rkt. По известной оценке Fkt рассчитывали tia- Кинетику ГСЦ-потерь КТ аппроксимировали кинетикой первого порядка. Определение характера ГСЦ-влияний на вариацию потока КТ

Для изучения влияний, оказываемых ГСЦ-системой на вариацию проходящего через нее потока КТ, рассмотривали статистическую вариацию потока КТ на входе (СХ/Вход) и выходе (СХ/Выход) ГСЦ-системы. Тем самым выяснялось, в каком режиме функционирует ГСЦ-система: а) в режиме сглаживания флюктуаций потока КТ при прохождении через ГСЦ-систему, б)

режиме усиления колебательного процесса или в) сохранения статистической амплитуды колебаний потока КТ в неизменном виде. При этом вариации потока КТ на входе и выходе ГСЦ-системы оценивали следующим образом:

СУвход — В*2, СХ^'^'ПЛ = ^С\/кт2 — Бкт 2,

где С\/5д - коэффициент вариации Ыузе, е5д - ошибка измерения СУкт -коэффициент вариации концентрации КТ в тиреоидном венозном эффлюэнте на уровне правого желудочка сердца, ект - инструментальная погрешность РИА сыворотки крови на КТ.

Статистические методы обработки фактического материала

Фактический материал обрабатывали статистически, Данные

представляли в виде Х±стх. Для анализа результатов статистической обработки данных использовали аппарат теории случайных процессов и методы иммитационного математического моделирования [моделирование Монте-Карло, конфлюэнтный анализ, другие методы исследования статистических зависимостей (Айвазян и др., 1985; Кудрявцев, 1984; Розанов, 1990)].

Результаты исследования и их обсуждение

Система эндокринной регуляции кальциемии в условиях нормального организма

У животных раннего возраста определяется относительно низкая концентрация Са в сыворотке крови (табл.1). В дальнейшем уровень кальциемии достоверно (Р<0,001) повышается. Описанные возрастные изменения протекают на фоне характерной динамики С-кпеточной инкреции. В ранние сроки после рождения значения ТЧу,^ максимальны. В сыворотке крови определяются высокие уровни гипокальциемизирующего гормона КТ. С возрастом активность С-клеток снижается (Р<0,0001). Возникает спад концентрации КТ (Р<0,001), закономерно сопровождающийся повышением уровня Са. Уровень ПТГ также демонстрирует в онтогенезе некоторую тенденцию к снижению. Однако, она выражена в значительно меньшей степени, чем

Таблица 1

Показатели эндокринной регуляции кальциемии у нормально развивавшихся крыс разного возраста

Показатель Возраст

0,5 мес. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 12 мес.

(мкм'3) 72±8,3 69+6,0 6,4±2,73 6,4+1,03 6,0±0,66

КТ (пг/мл) 127±8,2 121+10,2 21±9,5 26±4,3 24±2,2

Ку58/КТ (усл.ед.) 0,57+0,040 0,57±0,022 0,30+0,049 0,25±0,022 0,25±0,011

ПТГ (пг/мл) 129±16,4 122+27,8 100±15,7 113±6,3 60±4,3

Са (ммоль/л) 2,0+0,11 2,0±0,02 2,4±0,18 2,3±0,25 2,3±0,21

в случае с КТ. Параметры ГСЦ-транспорта КТ в ЩЖ нормальных крыс

В группе нормально развивавшихся особей 0,5-месячного возраста корреляционный анализ обнаружил достоверную статистическую связь между (X) и уровнем КГ (У) в сыворотке оттекающей от ЩЖ крови (У=а+ЬХ, гжу=0,8045; а=69,1±10,69; Ь=0,79±0,147; Р<0,0001). Была также обнаружена ковариация с крайне близким к единице коэффициентом силы связи (рХу=0,997406; Р<0,0001) и незначительной величиной ошибки

прогнозирования (^агху =7,1982%). Это свидетельствует 0 достаточно сильной предопределенности сывороточной концентрации КТ 00 инкреторной активностью С-кпеток (X). Однако, значения У зависят не только от соответствующих значений предикторной переменной X, но и от ряда неконтролируемых моделью У(Х) факторов, в том числе от вариабельности Якт.

Для решения вопроса о том, какая часть дисперсии прогноза У по X обусловлена вариабельностью Якт (т.е. для определения \/аггсцп), из общей дисперсии ковариации (УагХу) вычитают дисперсию, обусловленную факторами с уже известной способностью привносить ошибку в статистический прогноз [среди таких факторов мы рассматривали инструментальную погрешность РИА концентрации КТ в сыворотке крови (ект)]:

Varrcun<VarXY-eKT2. (1)

Поскольку оценка инструментальной погрешности РИА известна (ект=7,3%, п=30)1, с помощью Р-распределения Фишера можно оценить вероятность того, что \/аггсцп=0 (т.е. вероятность отсутствия Rкт, или вероятность полного проведения КТ через ГСЦ-барьер в циркулирующую кровь). При

лА/агху =7,1982% и сколь угодно малой вариабельности Икт эта вероятность Рюо% составляет не менее 0,62.

Найдем доверительную границу Х/агГСцп при вероятности Р>0,95. Если

у/\/аг,< = 7,1982% [п=-|8; доверительный интервал при односторонней оценке: 4,4021% (Р=0,025) - 11,7707% (Р=0,975)] и ект=7,3% [п=30; 5,061% (Р=0,025) -

10,635% (Р=0,975)], то хЛ/аг^цп <9,127% (р>о,95). Для дальнейших расчетов воспользуемся полученным нами уравнением зависимости между Икт и Уаггсцгь

R, - ^

CV« + VVarroun '

(2)

При CVR>10% (Antonin et al., 1992; Overgaard et al., 1991) и War™ <9,127% получим: Rkt<0,477. Тогда Fkt>0,523. Следовательно, уровень ГСЦ-потерь КТ (или вероятность непоступления в кровь КТ, инкретируемого сосудистыми полюсами С-кпеток) составляет у 0,5-месячных крыс менее 47,7%, а биологическая доступность эндогенного КТ (вероятность проникновения молекулы КТ через ГСЦ-барьер) превышает 52,3%. С помощью факторного анализа невязки регрессионного анализа и с учетом внесения в неравенство (1) ошибки измерения NVsg (esg) было выяснено расположение истинных значений Fia в доверительном интервале 52,3%<Fkt<100%. Уточненные интервалы Fkt и Rkt составляют: 85%<Fkt<100% и 0%<Rkt<15%.

Определим период ГСЦ-полузадержки КТ (t1/2) как средний промежуток

1 В силу того, что все образцы сыворотки крови крыс одной возрастной группы подвергались РИА одновременно (с применением наборов одной серии), оценка межсерийной вариации при расчетах не используется.

Таблица 2

Параметры ГСЦ-транспорта в ЩЖ нормальных крыс различных сроков развития

Параметр Возраст

0,5 мес. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 12 мес.

Уточненные значения Rkt <15% «0% <15% <15% «0%

Уточненная Fkt 285% »100% >85% ¿85% «100%

tl/2 (мин.) 8,9 8,9 8,9 8,9 8,9

времени, который необходим для задержки/потери половины молекул гормона, поступивших в ГСЦ-систему в результате С-клеточной инкреции. При аппроксимации ГСЦ-потерь кинетикой первого порядка (Pento, 1978) истинно следующее уравнение:

Ткт

FKr = A-e а'"2,

(3)

где А и а - коэффициенты пропорциональности, е - основание натурального

логарифма, а Ткт - средняя длительность проведения KT через ГСЦ-барьер.

Проанализируем уравнение (3) для определения значений коэффициентов А

и а. При бесконечно малой Ткт (T«T«ti/2, ТкЛ/2 -* 0) все молекулы KT,

поступившие в ГСЦ-зону, проникают в кровь, т.е. Fia=A=1 (или 100% для Fia).

Если Tia=ti/2, то Fia=Ae"°=0,5 (в кровь поступает половина молекул KT,

оказавшихся в ГСЦ-зоне). Следовательно, a=ln2œ0,69 (при А=1). Подставив в

уравнение (3) найденные значения А и а, получим:

{ 1п2Ткт InFicr

Решая данное уравнение, найдем характерное значение tt/г при ТкгИ мин. (Ähren et ai., 1989; Baxter et al., 1991; McLean et al., 1984) и Fkt»0,925 (среднее

значение Fkt для интервала 85%<Fkt<100%): ti/2 = 8,9 мин.

Аналогичным образом были оценены параметры ГСЦ-транспорта у нормально развивавшихся животных 1-, 3-, 6- и 12-месячного возраста. Результаты вычислений представлены в табл.2. Их анализ свидетельствует о

Таблица 3

С\/вход, С\/оыход, их соотношение и вероятность случайного различия CVbxoa от С\/выход в норме

Параметр Возраст

0,5 мес. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 12 мес.

СУвход 10,25% 8,69% 41,81% 15,49% 10,25%

С\/выход 0,34% 8,47% 43,38% 15,33% 5,21%

С\/вход/С\/выход 30,0 1,03 0,96 1,01 1,97

Р вход/выход Р<0,0001 Р>0,05 Р>0,05 Р>0,05 Р=0,0040

Примечание. При расчете С\/Вход csg«4% (Artacho-Perula et al., 1997; Cruz-Orive L.M., 1990; Gundersen et al., 1987).

том, что в норме обеспечиваются достаточно высокие значения Fkt- Это согласуется с имеющимися в литературе сведениями о преимущественном пространственном сопряжении клеточных элементов тиреоидного эпителия (Rattanachaikunsopon et al., 1991) [и С-клеток в том числе (Краснопёрое и др., 1994)] с периферическими фрагментами эндотелиоцитов, обладающими большим количеством фенестр. В рамках бипорозной модели проницаемости эндотелия фенестры рассматриваются как участки скопления малых пор, обеспечивающие свободный трансмуральный перенос гидрофильных молекул с радиусом Стокса не более 4-5 нм (Fu et al., 1995; Rippe et al., 1994). Мономерная молекула KT крысы (Мг=3412) отвечает данному требованию. ГСЦ-регулирование вариации потока КТ в норме

В табл.3 приведены значения С\/Вход и С\/Выход в условиях нормы. При анализе всей совокупности нормально развивавшихся животных было выявлено, что поток КТ при прохождении через ГСЦ-систему имеет достоверно более низкий коэффициент вариации, чем исходно (^2=915,7; Р<0,0001; С\/вход/С\/выход=13,468). Вариация потока КТ на выходе ГСЦ-системы может быть представлена в виде следующего набора дисперсий:

CVBbK0fl2~CVBX0fl2-SmErcuc+(VarsmFjM/«Hfl+VarDL, где ЭтЕгсцс - сглаживающий эффект ГСЦ-системы, (VarSmt:)u/nHA -межиндивидуальная вариация ГСЦ-сглаживания, VarDL - дисперсия

концентрации КТ в крови, обусловленная разведением тиреоидного венозного эффлюэнта на участке "юкста-С-целлюлярный гемокапилляр - правый желудочек сердца". Следовательно, обнаруженное нами снижение вариации потока КГ у нормально развивавшихся крыс свидетельствует о неравенстве БтЕгсис нулю, т.е. ГСЦ-система функционирует в режиме сглаживания флюктуации проходящего через нее потока КТ.

Каков же механизм сглаживающего влияния ГСЦ-системы? По полученным нами данным объем интерстициальной составляющей ГСЦ-системы (\/гсци) превышает объем одной С-клеточной секреторной гранулы (\/сг) У нормально развивавшихся крыс не менее чем в 6650 раз (\/Сг»0,0028 мкм3). При имеющихся (табл.1), протяженности контура плазмалеммы сосудистого полюса С-клетки (линейная протяженность порядка 6 мкм), толщине сублеммальной зоны (0,20-0,25 мкм) и динамике С-клеточного экзоцитоза (МсвеЬее е1 а1., 1997; Мопск е1 а!., 1994; БсИегивЫ е! а!.. 1994) можно заключить, что емкость ГСЦ-зоны по отношению к КТ многократно превышает емкость секреторных гранул, экструзируемых сосудистым полюсом С-клетки за период времени, равный Ткт (т.е. примерно за 1 минуту).

Рассмотрим 1-камерную модель ГСЦ-системы, обладающую избыточной емкостью по отношению к КТ. Пусть \/(Ц - приток КТ, и(0 - уровень (т.е. количество или концентрация) КТ в камере и Х-и^) - отток КГ из камеры (Рис.1), где 1Д, - период времени, за который уровень КТ в камере при отсутствии притока уменьшается в 1-е"1 раза (приблизительно на 63%).

Введем также Твход . характерное время вариации притока КТ и Ткг -характерное время вариации уровня КТ в камере. В данном случае величины

Твход и Т1/2 выражают порядки временных интервалов, характеризующие квазипериодичность колебаний параметров потока вещества на входе и внутри ГСЦ-системы. Поэтому величина Т1/2 аналогична определяемому нами 2-

Уравнение уровня КТ в емкости имеет вид:

Рис.1. Емкостная модель ГСЦ-системы. Объяснения в тексте.

о:

Если приток КТ в камеру постоянен, стационарным решением уравнения является и(1)=1)в. Динамика уровня КТ при постоянном притоке имеет вид: 11(1) = и.+[11(Ь,)-и.]-е->■»-ь,>,

где I - текущий момент времени, ^ - исходное время рассмотрения и 11(У -начальный уровень КТ в емкости. Из этого следует, что отклонения уровня КТ от стационарного значения со временем экспоненциально затухают.

Пусть теперь приток КТ в камеру непостоянен, т.е. Щ)=\/в+Щ1), где У\/(1) - случайная величина с нулевым математическим ожиданием и конечной дисперсией [\А/(1> - отклонение притока КТ от среднего значения Х/в]. Если на рассматриваемом отрезке времени [I, у величина притока была известна, получим:

1

и(Ч = 11в+[ОД - Щ • е + \ \Л/(Ь) - е-1«-« Л.

(4)

Итак, динамика 11(1) является суммой трех членов. Первый из них - 11в - задает средний уровень КТ в емкости; второй член описывает экспоненциальное приближение начального уровня и (У к среднему уровню 1)в; а третий -

(

|\Л/(Ь)-е1«"сЛ -

ь>

отражает взаимодействие случайных колебаний входного уровня с емкостными механизмами в ГСЦ-системе. При этом если промежуток времени Н, достаточно велик, то

[11(к)-ив]е-Х(Мо)« Щ и вторым членом можно пренебречь. Тогда уравнение (4) приобретает вид:

Для анализа уравнения (5) рассмотрим пространство Б случайных величин с конечными математическим ожиданием и дисперсией. Рассмотрение проведем на отрезке времени до момента измерения ]-<ю, 0]. Тогда если ¡ЦЦ и т^) являются случайными величинами, введем скалярное произведение \ и г\, равное следующему математическому ожиданию:

Относительно нормы, порождаемой данным скалярным произведением, пространство Н - гильбертово, и пространство Б включено в пространство Н (или БсН). Пусть при этих условиях ЕеБ и имеет нулевое среднее. Тогда квадрат нормы случайной величины \ равен:

(о Л

что по неравенству Коши-Шварца-Буняковского не превосходит

о

-да

Поскольку \ имеет нулевое среднее, имеем М(Е,2)=ст,2, где а? - среднее квадратическое отклонение величины 4- Следовательно,

а;

Важно отметить, что данное соотношение тем ближе к единице, чем

медленнее меняется на временах порядка до Ш (или порядка Т1/2). Рассматривая сейчас уравнение (5), имеем:

Уаг^агЛ2, где »и. Уаги^, С^О/, ^ а™ ) ст«г х2

(здесь Уати - дисперсия уровня КТ в камере, Уагу - дисперсия притока КТ в камеру, \/аг,и - дисперсия оттока КТ из камеры, С\/и и С\/Хи - соответствующие

вектор транспорта КТ ->

Рис.2. Аппроксимация ГСЦ-системы 4-камерной моделью: камера 1 -базальная пластина тиреоидного фолликула, камера 2 - лерикапиллярный интерстиций; камеры 3 и 4 - стенка юкста-С-целлюлярного фрагмента перифолликулярного гемокапилляра (камера 3 - базальная пластина капилляра, камера 4 - его эндотелиальная выстилка).

коэффициенты вариации). Следовательно, в ГСЦ-системе, аппроксимируемой однокамерной емкостной моделью, вариация входящего потока КТ всегда не меньше вариации уровня КТ внутри камеры, а также и вариации выходящего потока КТ. При этом ГСЦ-сглаживание тем более выражено, чем более непостоянен приток КТ в ГСЦ-систему на временных интервалах порядка до Т1/2. Аналогичный анализ цепной 4-камерной емкостной модели (Рис.2) подтверждает способность ГСЦ-системы к емкостному выравниванию флюктуаций проходящего через нее потока КТ.

После того, как определено условие осуществления емкостного механизма сглаживания, связанное с соотношением характерных времен

вариации потока КТ на входе и внутри ГСЦ-системы (Твход< Т1/2), обратимся к

значениям Ь/г. Как было показано выше, величина данного параметра в норме составляет 8,9 мин. Следовательно, ГСЦ-система способна значимо сглаживать поступающий поток КТ, характерное время вариации которого менее 8,9 мин. Данный механизм ГСЦ-сглаживания тем эффективнее, чем

меньше Твход по отношению к 41/2. Важно отметить, что колебания входящего потока КТ первого порядка имеют характерное время до нескольких секунд [см. сведения, полученные на различных эндокринных клетках, и на С-клетках в том числе (Вегдз1еп, 1995; МсЗеЬее е4 а1., 1997; БсЬегиеЫ е1 а!., 1994)].

Является ли описанный механизм емкостной ГСЦ-стабилизации единственным? Или все же могут быть обнаружены и другие (в т.ч. активные) механизмы сглаживания параметров потока КГ? Для ответа на эти вопросы были проанализированы структурно-функциональные соответствия, потенциально способные отражать данный аспект ГСЦ-регулирования. На фоне отсутствия корреляций между выбранными структурно-функциональными показателями устойчиво выделялась статистическая связь между тгсци и Ку5Е. Во всех группах нормально развивавшихся животных данная связь имела положительный знак (коэффициент корреляции от +0,616 до +0,964; Р<0,05), что предполагает большую величину тгсци У животных с более активной С-клеточной инкрецией. При этом сила корреляционной связи достаточно высока. Следовательно, ГСЦ-система обладает неким механизмом сопряжения величины тгсци со скоростью поступления КТ в ГСЦ-зону. В результате при высокой интенсивности С-клеточной инкреции расстояние между С-клеткой и гемокапилляром увеличивается, что, в свою очередь, сопровождается повышением Ткт, и большая часть поступивших в ГСЦ-зону молекул КТ успевает подвергнуться влиянию элиминирующих механизмов. Если же поступление КТ в ГСЦ-зону замедлено, становится меньше и тгсци, соответственно чему снижаются потери гормона (Якт), и большая часть молекул КТ поступает в кровь. Закономерно, что способность к ГСЦ-сглаживанию в наибольшей степени выражена в группе с самым высоким коэффициентом корреляции "тгсци - Иу^" - у животных 0,5-месячного возраста (Гху=+0,964; Р<0,001).

Выявленная однонаправленность изменений Му<Е и тгсци способствует сглаживанию проходящего через ГСЦ-систему потока КТ, флюктуации которого неизбежны в силу стохастичности С-клеточной инкреции. Данный механизм ГСЦ-стабилизации, в отличие от емкостного, по всей видимости, является активным, поскольку предполагает ощутимые морфокинетические изменения пространственной организации ГСЦ-системы. При этом морфокинетическое сглаживание обеспечивает ослабление относительно

кт

ША/).МЛ

(К-кт)

в^щш,

ГСЦ-система

Рис.3. Схематически представлен механизм морфокинетического сглаживания флюктуаций потока КТ. В силу стохастичности С-клеточной инкреции на входе ГСЦ-системы квазипериодически возникают отклонения интенсивности притока КТ от некоего среднего значения. С изменениями величины входящего потока коррелируют изменения тГСци. В частности, при выбросе Ыуя» в сторону больших значений возрастает тТСци и, соответственно, уровень В результате происходит "срезывание" пиковых значений Аналогичным образом сглаживаются и спады (на рисунке линия Я«т не проведена) - тГсци и Якт снижаются. Поток КТ на выходе ГСЦ-системы становится более стабильным (С\/Выход<СУВход)-

медленных флюктуаций поступающего потока КТ, характерное время которых сопоставимо с характерным временем морфокинетических изменений в ГСЦ-системе [т.е. превышает 5 мин. - см. данные о кинетике изменения клеточной поверхности, полученные с помощью микроскопа атомной силы (Оауюэ е1 а1., 1994; 1_а1 е! а!., 1994)]. Важно также, что морфокинетическое сглаживание связано с усилением потерь КТ в ГСЦ-интерстиции при выраженном повышении интенсивности С-клеточной инкреции (Рис.3). Такое поведение ГСЦ-системы позволяет рассматривать потери КТ в ЩЖ в качестве кофактора регуляции, способного стабилизировать процесс поступления КТ в кровеносное русло (как мы помним, уровень Икт не был в норме равен нулю и колебался в пределах 0%<Ркт^15%).

В ЩЖ 1-месячных крыс с гиперкальциемией снижается емкость ГСЦ-системы [\/гсци составляет 4,13+1,971 мкм3 против 25,16±2,332 мкм3 в

контроле (Р<0,0001)]. Вместе с тем, сохраняется значительное превышение Vrcun над объемом секреторной гранулы (\/гсциЛ/сг=1475 при Ver порядка 0,0028 мкм3). Следовательно, в данной группе крыс если и можно ожидать снижение сглаживающих свойств емкостного типа, то лишь при крайне интенсивном поступлении КТ из С-клетки.

Изучение морфокинетики ГСЦ-системы продемонстрировало отсутствие структурно-функционального сопряжения Чгсци - Nvsg" (гху=-0,3112; Р>0,05), обеспечивавшего в норме сглаживание относительно медленных флюктуаций потока КТ. По всей видимости, это связано с сужением ГСЦ-интерстиция, необходимым для обеспечения предельно полного выведения КТ в кровь. Стабилизирующие влияния на поток КТ имеют при гиперкальциемии лишь второстепенное значение.

Система эндокринной регуляиии кальциемии у десимпатизиоованных гуанетидином крыс

Система эндокринного контроля кальциемии претерпевает в эксперименте достоверные изменения. У животных 0,5- и 1-месячного возраста концентрация Са в сыворотке крови несколько снижается (табл.4). При этом уменьшается Nvsg. Падает при десимпатизации и сывороточный уровень КТ. Выявленное снижение NVsg и концентрации КТ в сыворотке крови подтверждает имеющиеся в литературе сведения о гипофункциональном состоянии С-клеток ЩЖ в ранние сроки после селективной фармакологической десимпатизации (Рящиков и др., 1991; Heath Н., 1980).

К 3-месячному возрасту степень гипокальциемии несколько нарастает. У десимпатизированных особей регистрируется дальнейшее снижение Nvsg-Однако, сывороточный уровень КТ не уменьшается. Концентрация гормона даже возрастает, а соотношение NVsg/KT падает до самых низких в эксперименте величин, становясь меньше аналогичного контрольного показателя в 3,0 раза. Вызывает интерес, что снижение уровня Са становится более выраженным, несмотря на относительное восстановление адренергической иннервации в организме. Возможно, растущий организм

Таблица 4

Показатели эндокринной регуляции кальциемии у десимпатизирован-ных гуанетидином крыс (О.) в сравнении с контролем (К.)

Показатель Возраст

0,5 мес. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 12 мес.

Т1^ (мкм"3) О. 21+3,6' 8,0+1,84' 3,1±0,87* 79±3,7* 54+4,1'

к. 72±8,3 69+6,0 6,4±2,73 6,4+1,03 6,0+0,66

КТ (пг/мл) О. 70+7,9' 59±9,2* 31±10,9* 42+2,6* 31±3,9*

к. 127±8,2 121 ±10,2 21+9,5 26±4,3 24±2,2

14у$5/кт (усл.ед.) О. 0,30+0,032* 0,13+0,016* 0,10+0,016* 1,91 ±0,109* 1,79+0,234*

к. 0,57+0,040 0,57+0,022 0,30+0,049 0,25±0,022 0,25±0,011

ПТГ (пг/мл) О. 87±21,7* 67+16,0' 125±20,9* 124+3,4* 114+6,1*

к. 129+16,4 122±27,8 100±15,7 113±6,3 60+4,3

Са (ммоль/л) О. 1,9+0,07* 1,9±0,20* 1,8+0,12* 2,5+0,20* 2,5+0,20*

к. 2,0±0,11 2,0±0,02 2,4±0,18 2,3+0,25 2,3±0,21

Примечание. Звездочка - вероятность случайного различия меноду показателями опытной и контрольной групп Р<0,05.

стремится восполнить недостаточность процессов формирования скелета, имевшую место на более ранних этапах развития (Негэкоуйг е1 а1., 1984). Для этого у ювенильных крыс удерживается большая, чем в норме, концентрация КТ - гормона, оказывающего в целом гипокальциемизирующий эффект.

В сыворотке крови десимпатизированных крыс 6- и 12-месячного возраста концентрация Са превышает нормальный уровень. Одной из причин гиперкальциемии может являться увеличение концентрации ПТГ. В ответ на избыток сывороточного Са С-клетки резко активизируют инкрецию КТ. Однако, компенсаторный потенциал тиреоидного парафолликулярного эпителия оказывается недостаточным. Уровень КТ в крови увеличивается гораздо умереннее, в результате чего индекс Иу^/КТ достигает высоких величин. Относительно слабый прирост концентрации КТ при выраженном повышении Ь\чЕ (табл.4) и количества тиреоидных С-клеток (Рящиков, 1989) может свидетельствовать о задержке КТ на трансинтерстициальном и/или трансмуральном этапах ГСЦ-гормонопереноса в ЩЖ. Параметры ГСЦ-транспорта КТ при десимпатизации

Описанным выше способом были оценены параметры ГСЦ-гормонопереноса в ЩЖ. Полученные данные свидетельствуют о том, что у десимпатизированных крыс 0,5-, 1- и 3-месячного возраста, как и у нормальных животных, обеспечивается достаточно полное проведение КТ через ГСЦ-барьер (Fkt^85%). ГСЦ-потери КГ незначительны (Rkt¿15%) и являются одним из факторов компенсации пониженного содержания Са в сыворотке крови. Характерный период ГСЦ-полузадержки составляет 9,8 мин., что мало отличимо от соответствующего контрольного значения

(ti/2 = 8,9 мин.), g более поздние сроки патологического процесса (6- и 12-месячные особи), когда адренергический дефицит в организме повторно усиливается (Родионов и др., 1988), определяются нарушения ГСЦ-транспорта. Падает биодоступность эндогенного КТ (65%<Fkt¿75%), возрастает уровень ГСЦ-потерь (25%<RKr<35%), что в условиях формирующейся гиперкальциемии имеет декомпенсаторную направленность. При этом несколько снижается характерный период ГСЦ-полузадержки КТ (tur = 2,1 мин.).

ГСЦ-регулирование вариации потока КТ у десимпатизированных животных

У 0.5-месячных десимпатизированных крыс ГСЦ-система сохраняет способность сглаживать флюктуации входящего потока КТ (табл.5). Значительную роль в стабилизации параметров потока КТ играет емкостный механизм, поскольку объем интерстициальной составляющей ГСЦ-системы, как и в норме, многократно превышает объем секреторных гранул, экструзируемых сосудистыми полюсами С-клеток за период времени порядка

Ткт (Рис.4). Согласно условию ТвходсЪ/г, ГСЦ-система оказывает эффективные стабилизирующие влияния на проходящий через нее поток КТ, если характерное время колебаний потока КТ на входе меньше характерного периода полузадержки КТ внутри ГСЦ-системы (т.е. меньше 9,8 мин.). Колебания входящего потока КТ первого порядка отвечают данному условию, поскольку их характерное время не превышает нескольких секунд (Bergsten,

Таблица 5

С\/вход, С\/выход, их соотношение и вероятность случайного различия СУвход от СУвыход У десимпатизированных (О.) и нормально развивавшихся (К.) особей

Параметр Возраст

0,5 мес. 1 мес. 3 мес. 6 мес. 12 мес.

СУвход О. 16,52%' 22,93%* 28,06% «0%* 5,74%*

К. 10,25% 8,69% 41,81% 15,49% 10,25%

СУвыход О. 8,19%* 15,47%* 18,60%* «0%* 10,73%*

К. 0,34% 8,47% 43,38% 15,33% 5,21%

СУвход/СУвыход О. 2,02 1,48 1,51 «1 0,53

К. 30,0 1,03 0,96 1,01 1,97

Р вход/выход О. Р=0,0039 Р>0,05 Р>0,05 Р>0,05 Р=0,0084

К. Р<0,0001 Р>0,05 Р>0,05 Р>0,05 Р=0,0040

Примечание. Звездочка - вероятность случайного различия между коэффициентами вариации в опыте и контроле Р<0,03.

35 30 25 20 15 10 5 0

Рис.4. \/гсци У десимпатизированных и нормально развивавшихся крыс разного возраста (для сравнения Х/с^0,0028 мкм3). Светлые столбики - опыт, темные - контроль. Во всех возрастных группах вероятность случайного различия пары данных Р<0,05.

Угсци (мкм )

щ

•г4?*» Щ ГГ- • эй

И

•Л, щ | т

¡1 ЁЗЗК У

0,5 мес. 1 мес. Змее. 6 мес. 12мес.

1995; МсОеЬее е{ а!., 1997; БсЬегиеЫ е1а1., 1994).

У десимпатизированных крыс 0,5-месячного возраста отсутствуют проявления морфокинетического механизма сглаживания, обнаруживавшегося в норме как сопряжение тгсци с Т^. В результате данная группа животных характеризуется несколько сниженной стабилизирующей активностью ГСЦ-системы в сравнении с контролем (табл.5). При этом, однако, следует учесть, что показатель СУвход/СУвыход У нормальных крыс 0,5-месячного возраста был наибольшим среди контрольных животных.

Гемато-С-целлюлярная система в ЩЖ 1-месячных крыс продолжает оказывать сглаживающие влияния на поток КТ. Величина индекса СУвход/СУвыход даже несколько повышается по отношению к контролю. Тем не менее, снижение вариации КТ при прохождении через ГСЦ-систему не является статистически достоверным (Р=0,0636). С учетом усиления интенсивности колебаний входящего потока КТ [возрастание СУвход по отношению к контролю более чем в 2,9 раза (Р<0,0001)] приведенные факты свидетельствуют лишь о некоторой тенденции к усилению стабилизирующей активности ГСЦ-системы. При этом у получавших гуанетидин животных не было обнаружено корреляции "-ггсци - составлявшей в норме основу эффективного морфокинетического сглаживания.

Интересны изменения емкостного механизма в данной возрастной группе эксперимента. За счет набухания ГСЦ-интерстиция увеличивается емкость ГСЦ-системы (Рис.4). Несколько расширяется диапазон сглаживания входящих флюктуаций КТ (характерное время сглаживаемых колебаний до 9,8 мин., в контроле - до 8,9 мин). Выявленные изменения могут объяснять некоторый прирост стабилизирующей активности ГСЦ-системы, отмечаемый по сравнению с контролем в группе десимпатизированных крыс 1-месячного возраста.

У 3-месячных десимпатизированных животных сохраняется тенденция к сглаживанию флюктуаций потока КГ при прохождении через ГСЦ-систему (табл.5). Как и у 1-месячных десимпатизированных крыс, достоверной

разницы между входящей и выходящей вариациями КТ нет (Р=0,0547). Однако, индекс стабилизирующей активности ГСЦ-системы С\/вход/С\/выход несколько увеличивается по отношению к соответствующему показателю нормы. Вероятнее всего, это объясняется приростом емкости ГСЦ-системы и некоторым расширением диапазона сглаживаемых флююуаций (характерный период ГСЦ-полузадержки КТ составлял 9,8 мин. против 8,9 мин. в норме). При анализе морфокинетики не было выявлено сопряжения тгсци и NVsg.

У 6-месячных животных поток КТ на входе ГСЦ-системы фактически не осциллировал (табл.5). Статистически ровным был и выходящий поток КТ. По всей видимости, флюктуации экзоцитоза в С-клетках переставали быть синхронными, и входящий поток КТ приобретал необычную стабильность вследствие суммирования большого (>1000) количества относительно независимых колебательных процессов [Костин, 1973; см. также сведения о численности С-клеток в ЩЖ крысы (Conde, 1995) и о механизмах синхронизации колебаний в инкретирующих клетках (Civelek et al., 1997; Maki et al., 1995; Tornheim, 1997)]. В данных условиях нет необходимости в дополнительном ГСЦ-сглаживании. Поэтому морфокинетическая корреляция "тгсци - Nvsg" отсутствует.

Емкостный механизм ГСЦ-регулирования также претерпевает некоторые изменения. В сравнении с контролем повышается емкость ГСЦ-системы (Рис.4). Суживается диапазон флююуаций КТ, сглаживаемых ГСЦ-

системой Í*1 '2 = 2,1 мин. Пр0ТИВ 3,9 мин. в контроле). Однако, и в данном

случае величина Ь'2 превосходит характерное время входящих флюктуации первого порядка.

У десимпатизированных крыс 12-месячного возраста ГСЦ-система начинает усиливать колебания проходящего через нее потока КТ (табл.5). Впервые с развитием патологического процесса вариация потока КТ на выходе ГСЦ-системы достоверно превышает входящую вариацию КТ.

При анализе емкостного механизма регулирования сохраняется повышение \/гсци (Рис.4). Диапазон флююуаций КТ, сглаживаемых ГСЦ-

системой суживается (4ш = 2,1 мин., что ниже соответствующего контрольного показателя - 8,9 мин.). Если предположить, что в общем спектре флюктуации потока КТ доля колебаний с характерным периодом от 2,1 до 8,9 мин. значительна, снижение сглаживающей активности ГСЦ-системы в данной фуппе эксперимента становится понятным.

Вместе с тем, изменения емкостного механизма не позволяют объяснить выявленное усиление вариации потока КТ. Рассмотрим морфокинетический механизм ГСЦ-регулирования. В ЩЖ десимпатизированных крыс 12-месячного возраста определяется сопряжение тгсци со значениями однако параметры корреляционной связи,

описывающей данное сопряжение, достоверно отличаются от контрольных (гху=-0,6176; Р<0,05). Связь имеет отрицательный знак, что отражает большую величину тгсци (а значит, и большие интерстициальные потери КТ) у животных с меньшей активностью С-клеточной инкреции (N4^). Выявленная направленность корреляции "тгсци - предполагает усиление колебаний потока КТ при прохождении через ГСЦ-систему.

Таким образом, ГСЦ-система десимпатизированных особей 12-месячного возраста усиливает флюктуации проходящего через нее потока КТ. Это отмечается на фоне снижения РКт, имеющего в условиях формирующейся гиперкальциемии (табл.4) декомпенсаторную направленность. Правомерно предположить, что ГСЦ-система стемится восполнить недостаток гипокальциемизирующего эффекта КТ повышением его низкочастотных колебаний в крови, активизируя тем самым рецепторные механизмы в органах-мишенях. При этом коэффициент вариации потока КТ на выходе ГСЦ-системы десимпатизированных крыс данной возрастной группы (табл.5) не превышает значение С\/Выход, характерное для нормально развивавшихся животных (средний квадратический СУвыход для пяти возрастных групп контроля -21,05%).

Выводы

1. Регуляторная деятельность тиреоидной ГСЦ-системы в нормальных условиях и при патологических состояниях может изучаться с использованием новой технологии количественной оценки гормонального транспорта, суть которой заключается в анализе дисперсии статистической связи между параметрами потока гормона на входе и выходе транспортирующей системы. В рамках данной технологии могут быть получены характерные значения 1) вероятности полного проведения кальцитонина через ГСЦ-барьер (Рюо%). 2) уровня ГСЦ-потерь кальцитонина (Икт) 3) биологической доступности эндогенного кальцитонина (Р«т) и 4) периода ГСЦ-полузадержки кальцитонина в щитовидной железе (11/2).

2. Методически данная технология может быть реализована следующим образом: 1) формируется модель статистической связи между численной плотностью сублеммальных гранул на сосудистом полюсе С-клетки [N4^5 - характеризует поток кальцитонина на входе ГСЦ-системы (X)] и сывороточной концентрацией кальцитонина [интенсивность потока на выходе ГСЦ-системы (У)]; 2) дисперсия данной модели подвергается анализу для определения \/агГсцп - частной дисперсии прогноза У по X, обусловленной вариабельностью ГСЦ-потерь кальцитонина; 3) на основе выведенных нами уравнений зависимости Икт от \/аггсцп и <1/2 от РКт рассчитываются статистические оценки необходимых параметров ГСЦ-транспорта (Рюо%, Ркт, Гкт, Ъ/г).

3. ГСЦ-система в щитовидной железе нормальных крыс способна регулировать транспорт эндогенного кальцитонина из С-клетки в кровеносное русло. Одним из основных направлений регуляторной деятельности ГСЦ-системы является сглаживание вариации проходящего через нее потока кальцитонина. Для достижения этого положительного результата ГСЦ-система использует емкостный и морфокинетический механизмы сглаживания флюктуаций скорости поступления кальцитонина в кровь.

4. Суть емкостного механизма заключается в том, что емкость ГСЦ-системы по отношению к кальцитонину значительно превосходит емкость секреторных гранул, экструзируемых сосудистыми полюсами С-клеток за период времени, равный характерной продолжительности пребывания молекул кальцитонина в ГСЦ-системе (Ткт)- В результате кинетика оттока кальцитонина из ГСЦ-системы в большей степени определяется не стохастикой значений входящего потока кальцитонина (NVss), а транспортными свойствами самой ГСЦ-системы. Для эффективной реализации емкостного механизма сглаживания необходимо, чтобы характерное время входящей вариации кальцитонина было меньше характерного периода ГСЦ-полузадержки кальцитонина (характерное значение hrz У нормальных крыс -8,9 мин.).

5. Структурно-функциональной основой другого механизма сглаживания служит особый стереотип морфокинетики компонентов ГСЦ-системы. Данный стереотип проявляется сопряжением дистанции трансинтерстициального гормонопереноса (тгсци) с интенсивностью С-клеточной инкреции (NVsg) по типу "больше/меньше кальцитонина поступило в ГСЦ-систему - больше/меньше значение тгсци" (и, следовательно, больше/меньше уровень Ria). При этом диапазон изменений уровня ГСЦ-потерь кальцитонина, в рамках которого обеспечивается относительное сглаживание выбросов входящего потока, у нормальных крыс не шире 0%<Rkt<15%.

6. В условиях селективной фармакологической десимпатизации регуляторная деятельность ГСЦ-системы претерпевает существенные изменения. В динамике патологического процесса меняется Fkt -эффективность транспорта кальцитонина через ГСЦ-барьер. Обнаруживаются также нарушения сглаживающей активности ГСЦ-системы.

7. Вызванные десимпатизацией изменения эффективности ГСЦ-транспорта неодинаковы на разных этапах индивидуального развития. В ранние сроки после неонатапьного введения гуанетидина биодоступность

эндогенного кальцитонина соответствует нормальному уровню (Ркт>85%), а ГСЦ-потери (Р?ет<15%) являются одним из факторов, компенсирующих снижение сывороточной концентрации кальция (животные 0,5-, 1- и 3-месячного возраста). У половозрелых крыс (особи 6- и 12-месячного возраста) эффективность транспорта кальцитонина снижается (65%<РКт<75%, 25%<Якт<35%), что в условиях формирующейся гиперкальциемии имеет патологическую направленность.

8. Емкостный механизм ГСЦ-сглаживания не испытывает в эксперименте значительных изменений, поскольку соотношение емкостей ГСЦ-системы и секреторных гранул, экструзируемых сосудистыми полюсами С-клеток за период времени Ткт, сохраняет тот же порядок значений, что и у нормальных животных. Для эффективной реализации емкостного механизма характерное время входящей вариации кальцитонина должно быть меньше 9,8 мин. (0,5-, 1- и 3-месячные крысы) и 2,1 мин. (особи 6- и 12-месячного возраста), что несколько отличается от контрольного значения (8,9 мин.).

9. Морфокинетический механизм ГСЦ-регулирования при десимпатизации достоверно меняется. Эти изменения имеют возрастную специфику. Общей особенностью животных всех исследованных подопытных групп (0,5-, 1-, 3-, 6- и 12-месячные крысы) является нарушение структурно-функционального сопряжения "тгсци - положительный знак которого способствовал в норме эффективному сглаживанию флюктуаций потока кальцитонина при его прохождении через ГСЦ-систему.

10. В щитовидной железе десимпатизированных животных 12-месячного возраста ГСЦ-система усиливает флюктуации потока кальцитонина. Структурно-функциональной основой такого регуляторного поведения является отрицательное сопряжение дистанции трансинтерстициального гормонопереноса с интенсивностью С-клеточной инкреции по типу "больше/меньше кальцитонина поступило в ГСЦ-систему - меньше/больше значение тгсци" (и, следовательно, меньше/больше уровень Икт).

Список публикаций по теме диссертации

1. Красноперов P.A., Герасимов А.Н., Рящиков С.Н. Способ определения параметров гематоцеллюлярного взаимодействия.// Патент РФ No 2075080. МКИ6 G01 N33/48. Описание изобретения: С. 1-6. Заявл. 18.05.1994. Опубл. 10.03.1997. Бюл. No 7.

2. Глумова В.А., Красноперов P.A., Марков В.Н., Рящиков С.Н. Особенности ультраструктурной организации гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе крыс в норме и эксперименте.// Вестн. Удм. Ун-та.-

1995,- ЫоЗ.-С.ЮО-ЮЗ.

3. Глумова В.А., Красноперов P.A., Рящиков С.Н. Гемато-С-целлюлярные взаимоотношения в щитовидной железе крыс разного возраста.// Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга, в норме, патологии и эксперименте. Тюмень, 1996.- С.138-140.

4. Глумова В.А., Красноперов P.A., Рящиков С.Н., Марков В.Н. Постнатальный морфогенез гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе крысы.// Росс. Морфол. Ведом.-1996 - No 1(4).- С.43-47.

5. Красноперов P.A., Грачев C.B., Глумова В.А., Рящиков С.Н., Волкова С.И. Ультраструктурная организация гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе десимпатизированных гуанетидином крыс 4-недельного возраста.// Бюлл. экспер. биол. мед.- 1996.- Т.122, No 12,-С.678-681.

6. Красноперов P.A., Грачев C.B., Глумова В.А., Рящиков С.Н., Герасимов А.Н. Динамика постнатального морфогенеза гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе крысы.// Онтогенез.- 1996,- Т.27, No 2.- С.131-136.

7. Красноперов P.A., Грачев C.B., Глумова В.А., Рящиков С.Н., Герасимов А.Н. Стереометрический способ монокритериальной оценки инкреторной деятельности тиреоидного парафолликулярного эпителия.// Цитология.-

1996,- Т.38, No 4/5.- С.560-563.

8. Красноперое Р.А., Грачев С.В., Глумова В.А., Трусов В.В., Герасимов А.Н., Рящиков С.Н. Способ определения формальных границ зоны гематоцеллюлярного взаимодействия.//Арх. патол.- 1996.- Т.58, No 1,- С.68-70.

9. Красноперов Р.А. Биодоступность эндогенного кальцитонина в условиях селективной фармакологической десимпатизации.// Пат. физиол. экспер. тер,-1997,- No 2.- С.11-13.

10. Красноперов Р.А., Глумова В.А., Грачев С.В., Рящиков С.Н. Морфометрический анализ гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе десимпатизированных крыс.// Росс. Морфол. Ведом.-1997,- No 1(6).- С.84-89.

11. Красноперов Р.А., Грачев С.В., Глумова В.А., Рящиков С.Н. Постнатальное развитие гемато-С-целлюлярной системы в щитовидной железе десимпатизированных гуанетидином крыс.// Онтогенез - 1997.- Т.28, No 2.-С. 144-151.

12. Krasnoperov R.A., Grachev S.V., Glumova V.A. C-cell - blood transport in the rat thyroid: endogenous calcitonin bioavailability.// J. Endocrinol.- 1997.-Vol.152.- Suppl.- Abstract P282.

13. Krasnoperov R.A., Grachev S.V., Glumova V.A., Gerasimov A.N., Ryashchikov S.N. Efficiency of the calcitonin-transporting activity of the hemato-C-cellular system in the thyroid gland.// Biol. Bulletin.- 1997,- No 4,- P.382-386.

14. Глумова В.А., Красноперов P.A., Грачев С.В., Рящиков С.Н. Морфологический подход к оценке кинетики гемато-С-целлюлярного транспорта в щитовидной железе.// Тр. ИГМА. Ижевск, 1998,- Т.36.- С.43-46.

15. Глумова В.А., Красноперов Р.А., Чучкова Н.Н. Морфометрический анализ гемато-С-целлюлярных взаимоотношений в щитовидной железе десимпатизированных крыс.//Морфология.- 1998.-Т.113, No 3.- С.36-36.

16. Глумова В.А., Чучкова Н.Н., Красноперов РА, Юминова Н.А., Семенов В.В., Черенков И.А. Морфологический анализ адаптационных изменений интраорганных сосудов в норме и эксперименте.// Матер, конф.

"Закономерности морфогенеза и регуляции тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях. Тюмень, 1998,-С. 15-16.

17. Краснопёрое P.A. Гемато-С-целлюлярная биокинетика эндогенного капьцитонина в норме и при селективной фармакологической десимпатизации.// Матер. конф. молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", посвященной 240-летию ММА им. И.М.Сеченова. М„ 1998,- С.253-253.

18. Красноперое P.A. Биологическая доступность эндогенного капьцитонина.// Бюлл. экспер. биол. мед.- 1998.- Т. 125, No 4 - С.474-476.

19. Краснопёрое P.A., Грачев C.B., Герасимов А.Н. Стереометрический анализ гематоцеллюлярных барьеров.// Вестн. РАМН,- 1998,- No 5.- С.22-29.

20. Красноперов P.A., Грачев C.B., Глумова В.А., Герасимов А.Н., Рящиков С.Н. Исследование транспорта эндогенного капьцитонина в щитовидной железе крысы.// Росс. Физиол. Ж. им. И.М.Сеченова.- 1998,- Т.84, No 5-6,-С.547-552.

21. Краснопёрое P.A. Гемато-С-целлюлярное регулирование вариации потока капьцитонина в щитовидной железе нормальных и десимпатизированных крыс.//Анналы ФПНПК. М„ 1999.- Т.1.- С.131-131.

22. Краснопёрое P.A., Грачев C.B., Глумова В.А. Гемато-С-целлюлярный транспорт эндогенного капьцитонина в норме и при селективной фармакологической десимпатизации.// Росс. Морфол. Ведом.-1999,- No 12.- Разд.2.- С.86-86.

23. Краснопёрое P.A., Грачев C.B., Глумова В.А. , Рящиков С.Н. Эндокринная регуляция уровня кальциемии у десимпатизированных гуанетидином крыс.11 ММА им. И.М.Сеченова.- М„ 1999,- 14 е.- Деп в ВИНИТИ, 17.09.99,-No 2858-В99.