Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Патоморфология и патогенез поражений кожи при лепре

г-

сг. СУ.

о

со

^ На правах рукописи

ЖУРАВЛЕВА Галина Федоровна

ПАТОМОРФОЛОГИЯ И ПАТОГЕНЕЗ ПОРАЖЕНИЙ КОЖИ ПРИ ЛЕПРЕ

14.00.15- патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва -1997

Диссертация выполнена в Институте хирургии им. А. В. Вишневского РАМН.

Научный консультант:

академик РАМН, Заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор [Л. И. Струков\ доктор медицинских наук, профессор В. П. Туманов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В. В. Ерохин доктор медицинских наук, профессор Г. Г. Автандилов доктор медицинских наук, профессор А. П. Милованов

Ведущее учреждение — Московский медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко

Защита диссертации состоится 13 октября 1997 года в 14 часов на заседании Диссертационного Совета Д. 084.14.04 при Российском государственном медицинском университете (117869, г.Москва, ул. Островитянова, д. 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ.

Автореферат разослан 12 сентября 1997 года.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук, профессор А. Н. Тихомиров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Лепра - инфекционная болезнь, в

лечении которой к настоящему времени достигнуты определенные успехи. Контроль за лечением осуществляется различными способами, среди которых наиболее важными являются патоморфоло-гические и гистохимические показатели. В связи с этим, особую актуальность приобретает изучение органов и тканей больных проказой с помощью гистологических, гистохимических, микроци-тометрических и других методов исследования.

В последнее время гистохимические исследования стали широко применяться в биологии и медицине. Успехи в изучении морфологии и биохимии тканей человеческого организма создали возможность выявления многих биологически активных веществ и определения их роли в динамике патологических процессов (D.Green, 1955; M.Dixon, E.Webb, 1960; A. Lehninger, 1966; А.И.Стру-ков, 1985; Ю.И.Афанасьев, 1989; Д.С.Саркисов, 1995 и др.).

В настоящее время значение гистохимических и гистоэнзи-мологических исследований в патологическом процессе чрезвычайно велико. Современная медицина требует от патоморфолога не только анатомического подтверждения болезни, но и объяснения обменных нарушений, чтобы успешно решать вопросы морфогенеза и патогенеза заболевания.

Усилился интерес к изучению обменных процессов при лепре в очагах специфического воспаления, в частности, к выяснению структурно-химических нарушений при разных типах, стадиях и фазах заболевания. Однако, проведено мало исследований по изучению обменных процессов в коже больных лепрой с использованием новейших гистоэнзиматических и цитофотометрических ме-

тодов исследования, дающих информацию о состоянии клеточных структур, значительно расширяющую знания о механизме развития патологического лепрозного процесса на молекулярном уровне.

Недостаточно уделено внимание изучению изменений в гранулеме и окружающих тканях, мало освещен вопрос о состоянии окислительно-восстановительных процессов в коже больных лепрой. Имеются лишь отдельные работы об активности энзимов в лепрозных поражениях. Опубликованные данные часто противоречивы, не связаны с динамикой развития лепрозного процесса и применяемого антилепрозного лечения. Между тем, именно процессы окислительного метаболизма играют большую роль в патогенезе лепрозных поражений, определяют механизм и результаты действия применяемой комбинированной антилепрозной терапии.

Цель исследования - определить закономерности развития патологического процесса в тканях лепрозных гранулем кожи больных проказой и изучить состояние обменных процессов в очаге поражения при лепре с использованием современных методов гистоэнзимохимических, микроцитометрических и электронно-микроскопических исследований.

Задачи исследования:

1. Определить степень нарушений белкового обмена по содержанию рибонуклеопротеидов и активности окислительно-восстановительных ферментов в поражениях кожи больных трех типов лепры (лепроматозного, туберкулоидного, недифференцированного).

2. Исследовать характер изменений углеводного обмена по содержанию нейтральных и кислых гликозаминогликанов и активности гликолитических ферментов в коже лепрозных больных.

3. Изучить состояние жирового обмена по содержанию ли-пидов и активности гидролитических и липолитических ферментов в коже больных лепрой.

4. Выявить динамику гистохимических нарушений обмена веществ у больных лепрой с учетом типа, стадии и фазы развития заболевания в соответствии с гистогенетическим анализом поражений кожи.

5. Сопоставить характер морфофункциональных нарушений с клинической картиной болезни под воздействием-комплексной противолепрозной терапии.

6. Установить взаимосвязь процессов биологического окисления по активности дегидрогеназ, оксиредуктаз, цитохромоксида-зы, ферментов гликолитического пути, пентозного цикла в тканевом обмене больных лепрой.

Научная новизна исследования заключается в комлексном гистохимическом, гистоэнзиматическом, электронномикроскопи-ческом исследовании кожи больных лепрой, которые используются как тесты контроля за лечением больных проказой. Учитывая содержание основных метаболических веществ и активность ферментов в тканях, впервые сделано заключение о вариабельности уровня активности энзимов в зависимости от типа лепрозного процесса и стадии течения заболевания в связи с развитием регрессивных изменений и стойкости резидуаальных проявлений для реабилитации больных.

Впервые установлено, что в активных лепроматозных гранулемах кожи выражены процессы аэробного биологического окисления (ферментов цикла Кребса, оксиредуктаз, цитохромокси-дазы), гидролиза (кислой фосфатазы) и снижена активность анаэробного гликолиза (лактат- и алкогольдегидрогеназ). Можно по-

лагать, что такое соотношение звеньев обмена веществ определяет неполноценность макрофагов при лепроматозной проказе, не способных лизировать микобактерии лепры.

Снижение активности ферментов анаэробного гликолиза в гранулеме кожи больных туберкулоидного типа лепры следует рассматривать как отрицательное явление, которое может привести к озлокачествлению процесса и трансформации его в лепрома-тозный тип.

Практическое значение работы заключается в том, что гистохимические реакции могут служить тестами для определения типа лепры и стадии течения заболевания. Определены морфофунк-циональные критерии активности и регресса лепрозного процесса, необходимые для целенаправленной антилепрозной терапии и решения вопроса о реабилитации больных.

Сравнительные данные активности и локализации окислительно-восстановительных, гидролитических, липолитических ферментов, рибонуклеопротеидов, липидов, нейтральных и кислых гликозаминогликанов в активных, регрессирующих и резидуаль-ных лепрозных поражениях кожи позволяют детализировать знания о морфогенезе и патогенезе процесса в зависимости от типов лепры и применяемого лечения.

Результаты настоящего исследования используются в преподавании при чтении лекций и на практических занятиях на кафедрах патологической анатомии, гистологии и эмбриологии, анатомии человека лечебного и педиатрического факультетов Московской, Астраханской медицинских академий и Махачкалинского медицинского института. Методические материалы по использованию гистохимических и гистоэнзимологических исследований в предложенной модификации применяются не только на человеке

при различных заболеваниях, но и на других биологических объектах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности обмена веществ в пораженной коже больных лепроматозной проказой в активной стадии и фазе обострения типа узловатой эритемы проявляются высокой активностью ферментов аэробного дыхания (цикла Кребса, пентозного шунта и конечного звена - цитохромоксидазы) и низкой активностью энзимов анаэробного окисления (лактат-, алкогольдегидрогеназ), что характеризует нарушения обменных процессов в лепр^зных макрофагах, не способных лизировать микобактерии лепры.

2. Характер обменных процессов в поражениях кожи больных туберкулоидной проказой в активной стадии болезни в зависимости от применяемой комплексной антилепрозной терапии определяется высоким уровнем активности ферментов как аэробного дыхания, так и анаэробного гликолиза, что придает полноценность макрофагам, разрушающим микобактерии лепры.

3. Использование гистофизиологическогсЗ теста на холинэ-стеразу при недифференцированном и двух полярных типах констатирует состояние нервных структур в коже больных лепрой.

4. Полученные тесты с помощью комплексных методов исследования (гистологических, гистохимических, гистоэнзимологи-ческих, цитометрических, статистических, электронномикроскопи-ческих) использованы для решения вопросов диагностики, лечения, прогноза заболевания и реабилитации больных.

Апробация работы. Материалы доложены и обсуждены на: I Всесоюзной конференции дермато-венерологов (Ленинград, 1965), Совещании по экспериментальной лепрологии (Москва, 1965),

Межреспубликанской научно-практической конференции по вопросам лечения и диспансерного обслуживания больных лепрой (Астрахань, 1965), научной сессии Всесоюзного научно-исследовательского института по изучению лепры (Астрахань, 1969), научно-практической конференции по лепре (г.Кзыл-Орда, 1969), заседании кафедры патологической анатомии Российской государственной медицинской академии и Московского общества патологоанатомов (Москва, 1972), VII-th International symposium on marine medicine (Odessa, 1976), региональной конференции по экологическим проблемам Волжского региона (Саратов, 1989), заседании Астраханского отделения общества патологоанатомов (Астрахань, 1990), Ecological morfology International scientific conference (Astrakhan, 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 49 научных

работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 240 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава, 3 подглавы), материалов и методов исследования (1 глава), результатов собственных исследований (3 главы и 15 подглав), заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 359 источников: 140 - отечественной и 219 -зарубежной литературы. Работа иллюстрирована 5 таблицами, 4 диаграммами и 76 рисунками, из которых 44 цветных и 32 черно-белых микрофотографий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В данном исследовании применен комплекс методов: клинический, гистологический, гистохимический, гистоэнзимохимиче-ский, статистический, микроспектроцитометрический, электрон-номикроскопический. При проведении исследования использованы биопсии кожи с участков поражений от 124 больных лепрой и 19 практических здоровых (контроль). Гистологические анализы проведены у все исследованных лиц 1 или 2-3- раза в динамике, импрегнация нервных структур - у 19, гистоэнзиматические (окислительно-восстановительные, липолитические и гидролитические ферменты) - у 124, гистохимические (рибонуклеопротеиды, нейтральные и кислые гликозаминогликаны) - у 28. Гистологические препараты окрашивались гематоксилин-эозином, на микобактерии - по г1еЫ-№е15еп, липиды - Суданом Ш и черным Б по Ь.Ызоп, для выявления нервных волокон - импрегнация по Грос-Бильшовскому-Лаврентьеву, содержания рибонуклеопротеидов по 1.ВгасЬе1 (1957) и Е.РеагБе (1962), окислительно-восстановительных, гидролитических и липолитических ферментов - методы Е.РеагБе (1962), М/ЫасЫаБ (1957), М.ВигБЮпе (1965), гликозамнногликанов-РАБ-реакция по А.Шабадашу и В.Виноградову (1961). Электронная микроскопия применялась по методу О.РаЫе с использованием осмия и эпона-812. Микроспектроцитометрия проведена по Г.Автандилову (1970), статистическая обработка - Я^зЬег (1952) на электронно-вычислительной машине «Наири-М» (таблица 1).

Таблица 1

Материал и методы исследования

№ п/п Методы исследования Методы окраски Кол-во больных Кол-во больных

I. Гистологические В.Яопшз-морфология 124 162

21еЫ-Ыее1Беп - мико-бактерии лепры 124 162

2. Гистохимические Грос-Бильшовский -нервные волокна Ь.Уэоп-липиды 19 124 19 162

1.ВгасЬе1-РНК 28 28

РАБ-реакция-нейтральные гликозами-ногликаны 28 28

Толуидиновый синий-кислые гликозами-ногликаны 28 28

3. Гистоэнзимо-логические МЛЧасЫаз, Е-Реагее, М.ВигБЮпе, О.Оотоп - сукцинат-, малат-, изоцитрат-,глютамат-, лактат-, алкоголь-, а-глицерофосфат-, глю-козо-6-фосфатдегид-рогеназы, НАД-, НАДФ-оксиредук-тазы, цитохромокси-даза, щелочная, кислая фосфатазы, неспецифическая эстераза^ ацетилхолинэстераза 124 162

4. Электронно-микроскопические О.РаЫе-осмий, эпон-812 26 26

5. Микроспектро цитометриче-ские Г.Автандилов-цитометрия 24 24

6. Статистические Я^зЬег, Д.Сепетлиев 24 24

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При лепроматозной проказе клеточные элементы гранулем отличаются различной активностью ферментов в зависимости от их функционального состояния и степени морфологической диф-ференцировки. Лепрозные макрофаги гранулем, содержащие ли-пиды и гомогенные микобактерии, богаты нейтральными глико-заминогликанами и рибонуклеопротеидами. В зависимости от степени вакуолизации макрофагов количество указанных метаболитов изменяется. В макрофагах гранулем при активном лепроматоз-ном процессе обнаружена высокая активность ферментов цикла Кребса, пентозного цикла, НАД-, НАДФ-оксиредуктаз, цитохро-моксидазы, кислой фосфатазы, неспецифической эстеразы, что свидетельствует о высоком уровне оксилительно-восстановитель-ных процессов, активной жизнедеятельности этих клеток, усиленном синтезе белка. Полученные данные подтверждают результаты исследований A.Hollander, S.Sommers (1957), K.Chatterjee (1958), А.И.Косолапкиной (1962), S.Ghosh (1964), Н.И.Метлицкого (1966), Н.А.Вдовиной (1968) о богатстве протоплазмы клеток рибонуклеопротеидами и гликозаминогликанами. Повышение активности дыхательных и гидролитических ферментов в макрофагах, захвативших микобактерии, говорит о напряженном фагоцитозе при обнаружении в них различных форм микобактерий лепры.

Согласно R.Stowell (1948), Б.В.Кедровскому (1951), J.Taylor (1953), J.Brachet (1957), накопление в клетках РНК свидетельствует о повышенной клеточной активности, связанной с синтезом белка. По данным И.Г.Макаренко (1958), С.М.Соболева (1959), накопление в макрофагах нейтральных гликозаминогликанов, не ферментирующихся амилазой, возникает в результате их фагоцитарного

функционирования.

Ф.Е.Вишневецкий (1969) гистохимическими методами не смог обнаружить активности сукцинатдегидрогеназы в лепрозных клетках активных лепроматозных инфильтратов до лечения, активность цитохромоксидазы в них высокая. Он пришел к выводу о том, что активность цитохромоксидазы не коррелируется с активностью сукцинатдегидрогеназы и полагает, что угнетение сукцинатдегидрогеназы при лепроматозной проказе компенсируется за счет других звеньев оксилительно-восстановительного процесса, в том числе и гликолиза. Однако, полученные собственные данные не согласуются с такой трактовкой и позволяют сделать вывод о том. что повышение активности дыхательных и гидролитических ферментов (в том числе сукцинатдегидрогеназы) в макрофагах, захвативших микобактерии, свидетельствуют о напряженном фагоцитозе, в результате чего наступает, видимо, истощение макрофагов при сохранении в них большого количества зернистых и гомогенных микробактерий лепры. Согласно В.Ве1§ие1тап (1967), макрофаги больных лепроматозной проказой активно фагоцитируют лепрозные микобактерии в культуре ткани, но не способны лизировать микробы, превращаясь в типичные лепрозные клетки, в цитоплазме которых обнаруживаются многочисленные микобактерии и липидные включения.

В макрофагах лепроматозных гранулем установлена собственными исследованиями низкая активность лактат- и алкогольде-гидрогеназ, которые характеризуют состояние гликолиза в клетках, т.е. процессов распада углеводов, ведущих к образованию молочной кислоты. Лактатдегидрогеназа является важным показателем анаэробного пути потребления глюкозы и выработки молоч-

ной кислоты. Учитывая это, можно полагать, что в активной стадии лепроматозной проказы в гранулемах кожи процессы анаэробного гликолиза снижены, а процессы аэробного окисления усилены.

Известно, что фагоцитирующие клетки в качестве основного источника энергии используют гликолиз больше, чем дыхание (•Г.ШгбсЬ, 1956; г.СоЬп, 1960; М. Катоуэку, 1962). Подавление гликолиза приводит к снижению фагоцитарной активности (Н.В.Пучков, 1955; Ь.У/ЫЛу, 1961). В результате гликолиза появляется молочная кислота, которая обеспечивает низкий рН среды (О.Яозс, 1957). Согласно Я.ВиЬо1з (1957); Ь.СоЬп (1960), молочная кислота оказывает сильное антибактериальное действие. Возможно, что снижение лактатдегидрогеназы в лепрозных клетках придает неполноценность макрофагу и угнетает его антибактериальное влияние на микобактерни лепры. Подтверждением результатов полученного исследования служит работа Н.Я.Рыжовой (1972), где биохимическими методами определено снижение в сыворотке крови больных лепрой активности лактатдегидрогеназы и повышение нзоцитратдегидрогеназы по сравнению с контролем.

В цитоплазме лепрозных макрофагов инфильтратов кожи отмечен высокий уровень кислой фосфатазы, что косвенно характеризует их фагоцитарную активность. При регрессе заболевания, после 8-10 курсов антилепрозного лечения в разрушающихся макрофагах активность кислой фосфатазы низкая. В лимфоцитах ле-проматозных инфильтратов, замещающих лепрозные клетки, выражена активность кислой фосфатазы. Это явление можно рассматривать, как реакцию повышенной чувствительности замедленного типа, развивающуюся под влиянием лечения при некото-

ром восстановлении реактивности организма. Е.Впе£ег, 1.А11еп (1962) в очагах поражения при лепре, где происходит активный лизис бактерий, обнаружили повышение активности кислой фос-фатазы. К.РгаЬЬакагап, С.Яара! (1966) высказали предположение, что лечение лепры ДДС способствует лизису микобактерий в ле-прозных клетках за счет усиленного выделения гидролитических ферментов из лизосом. А.Ра1екаг, КМа§аг (1967) отметили повышение активности лизосомальных ферментов (кислой фосфатазы) у больных лепрой до лечения, по сравнению с группой здоровых лиц.

За последние годы проведены многочисленные микроспек-трофотометрические исследования, среди которых основное место занимает изучение нуклеопротеидов, белков, полисахаридов и ли-пидов. Количественной гистохимии ферментов посвящены работы В.В.Португалова, В.А.Яковлева (1958); В.Я.Бродского (1966), Г.Г.Автандилова (1970, 1990, 1996), хотя подобных исследования в коже при лепре в литературе не обнаружено.

Полученные собственные данные цитометрических исследований активности ферментов в макрофагах инфильтратов кожи в активной стадии лепроматозной проказы подтвердили результаты гистоэнзиматических реакций о высокой активности ферментов цикла Кребса, пентозного цикла, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы и низкой активности в них лактат- и алкогольдегидроге-наз. Оптическая плотность щелочной фосфатазы в эндотелиальных клетках капилляров инфильтратов и дермы является высокой в активной стадии лепроматозной проказы. Эти данные показывают различия в интенсивности аэробного и анаэробного дыхания в ле-прозных клетках и особенности их метаболизма. Определение ко-

личественных показателей ферментативных реакций при лепре имеет значение для объективной оценки уровня метаболических процессов в поражениях кожи.

В процессе лечения лепры сульфоновыми препаратами участились реакции с высыпаниями типа узловатой эритемы. При этом, согласно полученным данным, наибольшие изменения происходят в кровеносных сосудах: расширение просветов, набухание их эндотелия, утолщение стенок, периваскулярный отек, днанедез эритроцитов, т.е. преобладают явления васкулита с отеком дермы, фибриноидным набуханием коллагеновых волокон и клеток гладкой мышечной ткани. Как известно P.Rath de Souza, N.Souza Campos (1954), W.Pelper с соавт. (1955), Е.П.Бюкинг (1963) и др. тоже считают, что местный васкулит является основным проявлением патологического процесса при узловатой лепрозной эритеме. Повышение проницаемости сопровождается интенсивной вакуолизацией макрофагов и уменьшением размеров гранулем. В таких инфильтратах происходит накопление липидов, снижение вплоть до исчезновения РНК и нейтральных гликозаминогликанов (Н.А.Вдовина, 1964; Н.И.Метлицкий, 1966 и др.).

Под воздействием современных средств и методов лечения у больных лепроматозной проказой в регрессирующей стадии размеры инфильтратов уменьшаются, хотя в структуре их еще сохраняются крупновакуолизированные макрофаги. «Пенистые» клетки в инфильтратах постепенно разрушаются и замещаются лимфоцитами, определяются плазмоциты, тканевые базофилы и фибробла-сты. Оставшиеся лепрозные клетки почти лишены РНК и нейтральных гликозаминогликанов. Изменения в макрофагах сопровождаются деструкцией и элиминацией микобактерий. В разру-

шающихся лепрозных клетках снижается активность сукцинат-, малат-, изоцитрат-, а-глицерофосфат-, глютамат-, глюкозо-6-фос-фатдегидрогеназ, НАД-, НАДФ-оксиредуктаз, цитохромоксидазы, неспецифической эстеразы, кислой фосфатазы.

Цитометрические исследования показали статистически достоверное снижение (Р<0,01) активности кислой фосфатазы, дегид-рогеназ и оксиредуктаз в лепрозных клетках регрессирующих гранулем, что соответствует результатам собственных гистоэнзимати-ческих исследований. Уменьшается количество кровеносных сосудов в дерме и статистически достоверно снижается (Р<0,01) активность щелочной фосфатазы в эндотелиальных клетках капилляров остаточных гранулем и субэпидермальной зоны (табл. 2, рис. 1.).

Таблица 2

Уровень активности энзимов в макрофагах инфильтратов у больных лепроматозной проказой в активной стадии по сравнению с ре^ессирующей стадией

| № | п/п Ферменты х|±8х! Х2±8Х2 1 Р

! 1. |Сукцинатдегидрогеназа 0,347±0,009 0,089+0,007 22 <0,01

! 2. I Малатдегидрогеназа 0,465+0,011 0,174±0,006 23 <0,01

1 3" | Изоцитратдегидроге-! наза 0,363±0,014 0,153±0,006 13 ! <0,01

1 4. | Лактатдегидрогеназа 0,128+0,007 0,152±0,005 2,8 <0,05

1 5- | Глюкозо-6-фосфатде-! гидрогеназа 0,462+0,011 0,261±0,006 16 <0,01

; 6. |Алкогольдегидрогеназа 0^155+0,007 0,077±0,004 9,8 I <0,01

; 7. ! а-глицерофосфатде-! гидрогеназа 0,318±0,010 0,164±0,006 13 <0,01

: 8. ! Глютаматдегидроге-1 наза 0,306±0,013 0,112±0,004 14 ! <0,01

1 9. 1 НАД-оксиредуктаза 0,543±0,012 0,187±0,006 25 | <0,01

| 10. 1 НАДФ-оксиредуктаза 0,452±0,011 0,127±0?004 27 <0,01

1 И- 1 Кислая фосфатаза 0,363±0,007 0,137±0,005 25 | <0,01

| 12. \ Щелочная фосфатаза 0,291±0,008 0,085±0,004 22 <0,01

Условные обозначения: х - средняя геометрическая оптическая

плотность;

Sx - средняя ошибка средней геометрической;

t - коэффициент достоверности различия; Р- значение вероятностей.

Перспективным методом изучения активности окислительно-восстановительных ферментов является применение гистохимии в электронной микроскопии. В этой области опубликованы интересные работы А.И.Струкова, 1963; К.С.Митина, 1965; D.Roodyn, 1968; В.В.Серова, 1975; Д.С.Саркисова и др., 1980, 1995 и др. С помощью этих методов возможно наблюдать изменение митохондрий при различных функциональных и патологических состояниях клетки. По форме, распределению и интенсивности окраски гранул формазана, локализованных в митохондриях, можно судить об их состоянии и деятельности клетки в целом (D.Green с соавт., 1955; В.В.Португалов, 1959; Н.А.Пробатова, 1965 и др.). Исследование активности и распределения окислительных ферментов в митохондриях могут служить показателем функционального состояния клетки (E.Shelton и W.Schneider, 1952; E.Pearse и D.Scarpelli, 1958; В.В.Португалов, 1959; Н.Т.Райхлин, 1959 и др.).

При электронномикроскопическом исследовании при ле-проматозной проказе наиболее выраженные изменения определяются в макрофагах кожи, содержащих микобактерии лепры. Чаще изменения митохондрий лепрозных клеток выражаются набуханием, а также гиперплазией и вакуолизацией. Эти явления можно рассматривать как компенсаторную реакцию организма в ответ на патогенное воздействие размножающихся микобактерии лепры. Иногда формируются миелиноподобные фигуры.

0,6 п

ЕЭ Активная стадия

@ Регрессирующая стадия

Ферменты СДГ МДГ ИДГ ЛДГ Г-6ФАГ АДГ а-ДГ ГДГ НАД- НАДФ- Кисг * оксиредуктаза фосф

Рис. 1. Активность ферментов в макрофагах инфильтратов кожи больных лепроматозной проказой в активной стадии по сравнению с регрессирующей стадией.

Согласно собственным данным, в макрофагах кожи происходит формирование интактных лизосом. Тесная морфологическая связь электронноплотных включений и структур аппарата Голь-джи, наличие переходных образований позволяют считать формирование интактных лизосом в лепрозных клетках как процесс секреторный. Значительное число рибосом на мембранах эндоплазма-тического ретикулума говорит об усиленном синтезе белка в этих клетках. Встречаются образования типа вторичных лизосом. Сюда относятся фаголизосомы, содержащие микобактерии лепры. Однако, несмотря на наличие большого количества лизосом и кислой фосфатазы в лепрозных клетках, макрофаги не могут до конца справиться с размножающимися в них микобактериями.

Увеличение числа лизосом в одних случаях может служить морфологическим признаком активности клетки, усиленного фагоцитоза (С. с!е Оиуе, 1962; А.И.Брауде, 1967, 1968), а в других -свидетельствовать о нарушении ее работы, связанном с замедленным выведением продуктов распада и избыточным накоплением их в цитоплазме (Б.В.Втюрнн, 1968).

При регрессе заболевания в распадающихся лепрозных клетках наблюдается деструкция органелл. Как результат развития лизосом появляются резидуальные тельца, которые занимают большую часть цитоплазмы и придают клеткам пенистый вид. В рези-дуальных тельцах могут содержаться непереваренные остатки микобактерии.

Возможно, лечение сульфоновыми препаратами влияет на лизосомы, нарушая проницаемость липопротеиновой мембраны. Неполноценность лизосом может заключаться в их ферментативном дефиците или в нарушении проницаемости лизосомальных

мембран.

Выяснение причин функциональной неполноценности макрофагов при лепре имеет большое значение для разрешения вопросов морфогенеза поражений, патогенеза заболевания и для объективной оценки эффективности лечения.

Восстановление реактивности организма под влиянием лечения сульфоновыми препаратами сопровождается нормализацией кожных тестов, определяющих состояние реакции гиперчувствительности замедленного типа (W.Bullock, 1968, 1971). Известно, что лимфоциты и плазмоциты являются морфологическими субстратами клеточного иммунитета. Наличие в них рибонуклеопротеи-дов и окислительных ферментов указывает на интенсивность пластических процессов в связи с иммунобиологическими свойствами этих клеток (А. А.Рогов, 1962; А.Я.Фриденштейн, 1964; Р.А.Симакова, 1966; И.А.Чистякова, 1970). Накопление лимфоцитов А.И.Струков (1979) рассматривает как биологический процесс, направленный на освобождение ткани от микобактерий.

Следовательно, состояние ферментов в известной степени характеризует защитные силы организма, реактивность ретикуло-эндотелиальной системы, иммуноморфологические и иммуноал-лергические сдвиги в активной стадии заболевания, в период обострения и обратного развития его под влиянием химиотерапевти-ческих средств. Степень активности энзимов отражает характер и интенсивность воспалительного процесса. В сочетании с клиническими, бактериоскопическими и морфологическими данными, гис-тоферментохимические исследования дополняют и углубляют представление о нарушении обмена веществ в клетках специфических инфильтратов, помогают следить за течением процесса, слу-

жат одним из критериев излеченности. Некоторое повышение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах регрессирующих ле-проматозных инфильтратов свидетельствует о становлении клеточного иммунитета.

При туберкулоидной проказе в активной стадии имеются типичные инфильтраты из макрофагов типа «эпителиоидных» клеток в центре, с наличием клеток гигантского типа Пирогова-Лангханса и большого числа лимфоцитов по периферии гранулем. Изредка встречаются единичные микобактерии лепры. Липиды отсутствуют. В таких инфильтратах содержание РНК, нейтральных глико-заминогликанов и особенно активность ферментов локализуются преимущественно в местах скопления эпителиоидных и гигантст-ких клеток. В них определяется высокая или умеренная активность ферментов как аэробного (сукцинат-, малат-, изоцитрат-, глюта-матдегидрогеназ, НАД-, НАДФ-оксиредуктаз, цитохромоксида-зы), так и анаэробного цикла (лактатдегидрогеназы). Щелочная фосфатаза при туберкулоидной лепре обнаружена в значительном количестве в набухшем эндотелии кровеносных сосудов дермы. В функционально активных элементах туберкулоидных инфильтратов процессы аэробного окисления и анаэробного дыхания одинаково активны. Снижение активности лактатдегидрогеназы в макрофагах инфильтратов кожи больных туберкулоидной лепрой должно насторожить клинициста в смысле ухудшения процесса, озлокачествления и, возможно, трансформации его в лепроматоз-нын тип, характеризующийся низкой активностью лактатдегидрогеназы в макрофагах.

В связи с изложенным, можно заключить, что в процессе формирования различных типов лепры играют роль не столько особенности лепрозного возбудителя, сколько различные функ-

циональные способности макрофагов в процессе их взаимодействия с микобактериями. При лепроматозной проказе макрофаги превращаются в лепрозные клетки и, не будучи в состоянии справиться до конца с микобактериями (неполноценность их за счет особенностей ферментного набора различных клеточных структур), становятся для них «кормушкой» и способствуют размножению возбудителя. При туберкулоидной проказе макрофаги играют основную роль в формировании иммунитета. В.Ве1£ие1тап (1967), "У/.ВиИоск (1968), .Г.Тигк (1970) сообщили, что при туберкулоидной лепре с высоким уровнем клеточного иммунитета макрофаги лизи-руют поглощенные микобактерии лепры. Параллельно с клиническим сдвигом в сторону туберкулоидной лепры усиливается инфильтрация участков поражений лимфоцитами, плазмоцитами, которые составляют определенное звено в формировании неспецифического клеточного иммунитета. Лепроминовая проба у этих больных положительная, что вместе с обширной инфильтрацией лимфоцитами участков поражения у больных туберкулоидной проказой указывает на то, что у них имеется высокий уровень иммунитета, направленного против микобактерий лепры.

Под влиянием антилепрозной терапии при регрессе туберкулоидной лепры происходит постепенное разрушение макрофагов и замена туберкулоидной гранулемы неспецифическим мелкоклеточным инфильтратом, состоящим, в основном, из лимфоцитов и фибробластов. Одновременно нарастают фиброзно-атрофические изменения дермы (атофия эпидермиса, фиброз, уменьшение количества кровеносных сосудов, гиалинизация их стенок, атрофия производных кожи). В таких инфильтратах снижается содержание нейтральных гликозаминогликанов, РНК, активность окислитель-

но-восстановительных и гидролитических ферментов, что свидетельствует об угнетении окислительных процессов в основных клеточных субстратах гранулем под воздействием 1-3 курсов сульфо-новой терапии.

Полученные данные об угнетении окислителыю-восстанови-тельных и гидролитических процессов в клетках регрессирующих туберкулоидных инфильтратов подтверждены результатами цито-метрическнх исследований. В макрофагах туберкулоидных гранулем статистически достоверно снижена активность сукщшат-, ма-лат-, изоцитрат-, лактат-, глюкозо-6-фосфат-, алкоголь-, а-глице-рофосфат-, глютаматдегидрогеназ, НАД-, НАДФ-оксиредуктаз и кислой фосфатазы. Активность щелочной фосфатазы в эндотелии капилляров, по сравнению с активной стадией, снижена более, чем в 3 раза (таблица 3, рис. 2.).

При электронномикроскопическом исследовании при тубер-кулоидной проказе в макрофагах типа эпителиоидных клеток выражено интенсивное развитие гранулярного ретикулума, редкое обнаружение набухания митохондрий и микобактерий лепры. Эти изменения можно оценить как явления более завершенного фагоцитоза, чем при лепроматозной проказе.

Таким образом, высокая активность дыхательных и гидролитических ферментов в макрофагах туберкулоидных инфильтратов свидетельствует об активном участии этих клеток в фагоцитозе и напряженности в них обменных процессов. Это сочетается с выраженной пролиферацией лимфоцитов, а также плазмоцитов, богатых РНК.

На основании полученных данных представлена эволюция гистохимических изменений в динамике патологического процесса

у больных туберкулоидной проказой, что объясняет некоторые стороны морфогенеза и патогенеза заболевания, служит одним из критериев оценки уровня активности воспалительного процесса, а также контроля за состоянием регрессивных изменений под воздействием современного противолепрозного лечения.

Таблица 3

Уровень активности ферментов в макрофагах инфильтратов у больных туберкулоидной проказой в активной стадии по сравнению с регрессирующей стадией

№ | Ферменты п/п ! XI } Х|±8х| х2 1 Х2±8Х2 1 1 Р

1. | Сукцинатдегидро-I геназа 0,221±0,007 0,123±0,005 12 | <0,01

2. | Малатдегидрогена I за 0,222±0,011 0,121±0,005 8 | <0,01

3. I Изоцитратдегидро I геназа 0,287±0,009 0,080±0,005 20 | <0,01

4. Щактатдегидрогеназа 0,268+0,010 0,120±0,005 13 | <0,01

5. ! Глюкозо-6-фосфат-| дегидрогеназа 0,223+0,008 0,120±0,006 10 ) <0,01

6. | Алкогольдегидро-] геназа 0,151±0,006 0,098±0,005 6 I <0,01

7. | а-глицерофосфат-I дегидрогеназа 0,342±0,009 0,098±0,004 25 I <0,01

8. | Глютаматдегидро-I геназа 0,274+0,009 0,095±0,005 18 | <0,01

9. | НАД-оксиредукта-1 за 0,408±0,008 0,143±0,009 23 | <0,01

10. |НАДФ-оксиредукта-за 0,323±0,008 0,111±0,007 19 | <0,01

11. 1 Кислая фосатаза 0,243±0,009 0,097±0,005 13 | <0,01

12. |Делочная фосфатаза 0,302±0,009 0,083±0,003 24 1 <0,01

Условные обозначения: х - средняя геометрическая оптической

плотности;

Бх - средняя ошибка средней геометрической;

I - коэффициент достоверности различия; Р - значение вероятностей.

Рис. 2. Активность ферментов в макрофагах инфильтратов у больных туберкулоидной проказой в активной стадии по сравнению с регрессирующей стадией

У больных недифференцированной проказой морфологическим субстратом болезни являются инфильтраты лимфоцитарной структуры по ходу сосудисто-нервных пучков с наличием мико-бактерий лепры. В цитоплазме отдельных макрофагов, лимфоцитов и фибробластов инфильтратов кожи, взятой с мест поражения, имеется, в основном, умеренная активность ферментов цикла Кребса, пентозного шунта, анаэробного гликолиза, оксиредуктаз, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы и неспецифической эстера-зы.

Под влиянием специфической терапии происходит уменьшение размеров инфильтратов, выраженный фиброз дермы и снижение активности дыхательных и гидролитических ферментов, определяется низкая активность энзимов вне инфильтратов в соединительной ткани дермы, в эпидермисе, нервных волокнах, эндотелии кровеносных сосудов, эпителии сохраняющихся производных кожи.

В дерме встречаются измененные нервные волокна с неравномерной импрегнацией нервных фибрилл, иногда с варикозными утолщениями и вакуолями. Около них нередко видны тонкие, извитые, регенерирующие фибриллы, с умеренной активностью хо-линэстеразы. Можно предположить, что при регрессе заболевания происходит восстановление нервного импульса и передача его на нервные окончания, что клинически соответствует восстановлению чувствительности в местах бывших поражений. Наличие нервных окончаний, обладающих холинэстеразной активностью, по мнению \V.Montagna с соавторами (1964), характеризует восстановление поверхностной чувствительности кожи, что подтверждается исследованиями Н.И.Федорова (1945), Н.И.Ермаковой (1948),

Б.В.Савинич (1964) и собственными данными (1967, 1970) о появлении регенерирующих фибрилл и утолщений на концах нервных волокон при регрессе лепрозного процесса.

Таким образом, интенсивность реакции на холинэстеразу зависит от степени специфического поражения нервных волокон при лепре. Когда они деструктивно изменены или разрушены, то в этих участках интенсивность реакции уменьшается или же она отсутствует. Пораженные нервные волокна синтезировать ферментную систему не способны. При регрессе лепрозного процесса холинэ-стераза способствует формированию специализированной чувствительности нервных окончаний и восстановлению нервного импульса в коже. Появление ее, видимо, является адаптивной реакцией на продуцирование ацетилходина во вновь образованных нервных окончаниях и нервных волокнах.

Полагаем, что определение активности холинэстеразы может служить гнстоэнзимологическим тестом, характеризующим морфологическое и функциональное состояние нервных структур в коже больных проказой.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, проведенное изучение патологических изменений в динамике у больных лепрой в процессе их лечения дало возможность представить эволюцию гистохимических изменении при этом заболевании. Собственные исследования выявили гистохимические изменения, могущие служить критериями для объяснения некоторых сторон патогенеза заболевания, в частности, для оценки активности воспалительного процесса, а в сочетании с клиническими и лабораторными показателями, также и для контроля за состоянием регрессивных изменений у больных лепрой.

Примененные гистологические, гистоэнзимологические, ци-тофотометрические и электронномикроскопические методы исследования выявили взаимосвязь структуры, функции и химизма элементов гранулематозной ткани в коже на различных этапах течения лепрозного процесса.

Использование гистохимических методов исследования в ле-прологии расширяет знания в области патогенеза и гистогенеза поражений кожи, определяя биологическую роль ряда анатомических структур в патогенезе болезни. Эти морфофункциональные изменения не являются специфическими, но они способствуют раскрытию морфологической и функциональной (на уровне клетки и субклеточно) сущности заболевания и патологических процессов, происходящих в коже больных лепрой. Полученные гистохимические тесты патологического процесса помогут при изыскании средств, способных целенаправленно изменять обменные процессы в коже для умелого регулирования ферментативных процессов в зоне воспаления при лепре.

Патогенетическая терапия больных лепрой должна сочетаться с этиологической, направленной против возбудителя воспаления, и неспецифической, повышающей резистентность организма. Только при таком подходе к вопросу лечения лепры можно ожидать стойкий терапевтический эффект.

Итак, на основе комплексных исследований разработаны проблемы патоморфологии и патогенеза поражений кожи при лепре. Совокупность основных положений, представленных в настоящей работе, формирует современную теоретическую и практическую концепцию лепры.

выводы

1. Комплексное гистологическое, гистохимическое, гистоэн-зимологическое, микроспектроцитометрическое, электронномик-роскопическое исследование кожи больных лепрой доказало, что активность окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов в клетках инфильтратов кожи у этих больных отражает степень и интенсивность воспалительных регрессивных изменений.

2. При лепроматозной проказе макрофаги специфических инфильтратов обладают высоким содержанием рибонуклеопро-теидов, нейтральных гликозаминогликанов и соответственно высоким уровнем энзимологической активности: сукцинат-, малат-, изоцитрат-, а-глицерофосфат-, глюкозо-6-фосфат-, глютаматде-гидрогеназ, НАД-, НАДФ-оксиредуктаз, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы. Это свидетельствует об усилении синтеза белка и выраженных процессах биологического окисления в макрофагах инфильтратов.

3. Низкая активность лактат-, алкогольдегидрогеназ при ле-проматозном типе лепры, характеризующих состояние гликолиза в функционально активных макрофагах лепроматозных инфильтратов, указывает на снижение в них процессов анаэробного гликолиза и преобладание аэробного дыхания.

4. Вакуолизация митохондрий с просветвлением матрикса и фрагментацией крист отражает изменение в обменных процессах лепрозных клеток. Формирование интактных лизосом в макрофагах в активной стадии болезни имеет большое значение в клеточном механизме защиты (ввиду внутриклеточного паразитизма ми-кобактерий лепры). Показателем незавершенности фагоцитоза в них являются резидуальные тельца, содержащие непереваренные

остатки микобактерий.

5. При обострении лепроматозной проказы типа узловатой эритемы отмечается генерализованная реакция эндотелия кровеносных сосудов, фибриноидные изменения стенок капилляров, пе-риваскулярный отек, т.е. признаки повышения проницаемости капилляров, высокая активность щелочной фосфатазы, накопление кислых и нейтральных гликозаминогликанов и ферментов в межуточной ткани, что свидетельствует о развитии аллергической реакции.

6. При туберкулоидной проказе наблюдается высокий уровень клеточного иммунитета: усиленная пролиферация лимфоцитов, наличие лишь единичных микобактерий лепры и положительная лепроминовая реакция. В макрофагах типа эпителиальных клеток определяется высокая или умеренная активность окислительных и гидролитических ферментов, процессов аэробного дыхания и анаэробного гликолиза. Интенсивное развитие гранулярного ретикулума, редкое появление вакуолизации митохондрий и микобактерий лепры в цитоплазме эпителиоидных клеток позволяет оценить эти изменения как явления более завершенного фагоцитоза, чем при лепроматозной проказе.

7. При недифференцированной проказе морфологическим субстратом болезни являются лимфоцитарные инфильтраты с наличием микобактерий лепры, умеренная активность ферментов цикла Кребса, пентозного шунта, анаэробного гликолиза, оксире-дуктаз, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы.

8. При регрессе заболевания под влиянием современных средств комбинированного лечения в разрушающихся макрофагах остаточных инфильратов активность дыхательных и гидролитиче-

ских ферментов снижена. Это свидетельствует об угнетении метаболических процессов после истощения фагоцитарных функций. Увеличение количества лимфоцитов, плазмоцитов и тканевых ба-зофилов в регрессирующих инфильтратах можно рассматривать как неспецифическую реакцию в ответ на продукты распада гранулем.

9. В условиях регенерации нервных волокон в кожи при регрессе лепрозного процесса возрастает активность холинэстеразы. Определение ее активности в поражениях кожи может служить гис-тофизиологическим тестом, характеризующим морфологические и функциональные особенности нервных структур кожи больных лепрой.

10. Повышенная сосудистая проницаемость с высокой активностью щелочной фосфатазы в капиллярах дермы обычно является ведущим проявлением лепрозного воспаления, определяющим клинико-морфологические особенности заболевания.

11. Проведенное комплексное исследование показало, что имеется тесная зависимость структуры, функции и химизма элементов гранулематозной ткани в коже больных лепрой на различных этапах лечения больных. Функциональные изменения и гистохимические показатели особенностей обмена веществ опережают структурные нарушения в коже при изученных типах лепры.

12. Материалы исследования позволили решить проблему патоморфоза и патогенеза поражений кожи при лепре во всех проявлениях болезни в целом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании проведенных комплексных исследований у больных лепрой рекомендуется использование показателей уровня активности основных дыхательных, гидролитических, липолитиче-

ских ферментов и холинзстеразы в клетках всех слоев кожи как тестов для определения морфофункционального состояния ее поражений при лепроматозной, туберкулоидной, недифференцированной проказе в активной, регрессирующей и резидуальной стадиях заболевания.

2. Показатели снижения активности ферментов анаэробного гликолиза в макрофагах кожи при лепре можно рекомендовать для оценки степени ухудшения процесса и возможной трансформации в более злокачественный лепроматозный тип. И, наоборот, повышение степени активности энзимов анаэробного окисления в кожи свидетельствует об улучшении патогенетических признаков и переходе к выздоровлению.

3. Результативность современного комбинированного лечения больных лепрой проявляется увеличением лимфоцитов, плаз-моцитов, тканевых базофилов и активности кислой фосфатазы в поражениях кожи, что можно использовать в качестве показателя позитивной иммунологической реакции организма в ответ на продукты разрушения микобактерий и клеток регрессирующих специфических гранулем.

4. Предложенные критерии следует применять для контроля за эффективностью лечения, при решении вопросов прогноза и реабилитации больных лепрой.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Неврологические изменения при регрессирующей стадии

лепроматозного типа лепры // Вестник дерматологии и венероло-гии.-1965.-№5.-С. 68-71.

2. Попытка выявления аутоантител в крови больных лепрой // Доклады Совещания по экспериментальной лепрологии. - М.,

1965.-С. 190-197.

3. О неврологических диагностических признаках регрессирующей и резидуальной стадий недифференцированного типа лепры // Тез. докл. межресп. научно-практич. конф. по вопросам профилактики, лечения и дисп. обслуживания больных лепрой. - Астрахань. -1965. - С. 20-21.

4. О неврологических изменениях при регрессирующей и резидуальной стадиях туберкулоидной лепры // Вопросы лепрологии и дерматологии. - Ростов-на-Дону. - 1965. - № 3 (19). - С. 26-30.

5. Опыт выявления аутоантител в крови больных лепрой // Вопросы лепрологии и дерматологии. - Ростов-на-Ддну. - 1965. - № 3(19).-С. 89-92.

6. Неврологические проявления при регрессирующей и резидуальной стадиях лепрозного процесса // Автореферат дисс. на степень канд. мед. наук. - Астрахань. -1967. - 23 с.

7. Неврологические проявления при регрессирующей и резидуальной стадиях лепрозного процесса // Канд. дисс. - Астрахань. -1967.- 176 с.

8. Некоторые функциональные пробы в диагностике регрессирующей и резидуальной стадий лепрозного процесса // Тез. докл. научно-практ. конф. по вопросам борьбы с лепрой. - Ростов-на-Дону. - 1967. - С. 28-29.

9. Некоторые признаки регрессирующей и резидуальной стадии недифференцированного типа лепры // Ученые записки Института по изучению лепры. - Астрахань. - 1968. - № 5 (10). - С. 161165.

10.0 гистологических изменениях кожи при регрессирующей и резидуальной стадиях лепрозного процесса II Ученые записки Института по изучению лепры. - Астрахань. - 1968. - № 5 (10). - С.

519-525.

11. Гистохимическое исследование активности некоторых дыхательных ферментов (дегидрогеназ) в коже больных лепрома-тозным типом лепры // Тез. докл. научной сессии Института лепры (юбилейной). - Астрахань. - 1969. - С. 76-77.

12. Об активности некоторых окислительно-восстановительных ферментов в коже больных лепрой об обострениях типа ле-прозной узловатой эритемы // Тез. докл. научно-практ. конф. в г.Кзыл-Орде (8 сентября 1969). - Астрахань. - 1969. - С. 77 (соавт.: Л.И.Косолапкина, Г.А.Хрыков).

13. Гистохимическая характеристика активности холинэсте-разы в нервных окончаниях кожи больных лепроматозной проказой II Ученые записки Института лепры. - Астрахань. - 1970. - № 6 (И)-С. 355-360.

14. Об активности основных ферментов цикла Кребса в коже больных лепроматозной проказой II Ученые записки Института лепры. - Астрахань. - 1970. - № 6 (11). - С. 361-367.

15. Окислительно-восстановительные процессы в коже при различных стадиях туберкулоидной проказы // Вопросы лепроло-гии и венерологии. - Ростов-на-Дону. - 1970. - № 7 (23). - С. 81-85.

16. Вопросы патоморфологии и гистохимии лепры по материалам отечественной и зарубежной литературы за последние годы // Ученые записки Института лепры.-Астрахань.-1970.-№ 6 (11). - С. 109-117. (соавт.: Л.И.Косолапкина, Л.М.Чернышева).

17. Гистохимическая характеристика кожи больных лепроматозной проказой Я Архив патологии. -1971. - № 4. - С. 32-36.

18. Гистохимическое исследование некоторых окислительно-восстановительных ферментов в пораженной кожи при обострениях типа лепрозной узловатой эритемы II Вестник дерматологии и

венерологии. - 1971. - № 1. - С. 16-18 (соавт.: Л.И.Косолапкина, Г.А.Хрыков).

19. Histochemical investigation of the activity of oxidoreductases in the skin lesions of lepromatous leprosy patients // Bull. Wld. Helth. Org. -1972.-N46.-P. 813-819.

20. Об активности цитохромоксидазы в коже больных лепрой // Ученые записки института лепры. - Астрахань. - 1972. - № 7 (12). - С. 246-249 (соавт.: Р.А.Аксанова).

21.Цитохимическое изучение некоторых ферментов в пораженной коже больных недифференцированной проказой // Ученые записки института лепры. - Астрахань. - 1972. - № 7 (12). - С. 241245 (соавт.: В.К.Логинов, Р.А.Аксанова).

22. Гистологические и гистохимические исследования мышечной ткани соленого осетра при хранении // Известия вузов. Пищевая технология. - 1983. - № 6. - С. 54-58 (соавт.: A.M.Голубев).

23. К изучению обратимости морфофункциональных нарушений двигательных центров нервной системы карпа под влиянием гербицида сатурна // Экспериментальная водная токсикология. -Рига. - «Зинатне». - 1986. - Вып. И. - С. 187-191 (соавт.: Г.В.Земков).

24. Гистохимическое определение динамики активных метаболитов в гонадах рыб в эколого-токсикологических исследованиях II В сб.: Методы ихтиотоксикологических исследований. - Л., 1987. - С. 36-37. (соавт.: Г.В.Земков).

25. Методика гистопатологического анализа1'состояния отделов центральной нервной системы у рыб под влиянием нейро-тропных токсикантов // В сб.: Методы ихтиотоксикологических исследований. - Л., 1987. - С. 39-40 (соавт.: Г.В.Земков).

26. Морфофункциональная оценка детоксикационной функции печени и воспроизводительной системы рыб в период нерестового хода // В сб.: Методы ихтиотоксикологических исследований.

- Д.. 1987. - С. 41. (соавт.: Г.В.Земков).

27. Активность неспецифической эстеразы, щелочной и кислой фосфатаз в кишечнике воблы Rutilus rutilus caspicus (Jak) на ранних этапах развития // Вопросы ихтиологии. - 1988. - Т. 28. - № 3. - С. 512-516. (соавт.: В.Н.Беляева, М.В.Илясова).

28. К изучению ферментативной активности кишечника молоди воблы // Тез. докл. VII Всесоюзной конференции по экологической физиологии и биохимии рыб // Ярославль. - 1989. - Т. 1. - С. 138-139 (соавт.: В.Н.Беляева, М.В.Илясова).

29. Морфофункциональные нарушения в организме промысловых видов как возможные последствия загрязнения дельты реки Волги II Тез. докл. региональной конференции «Экологические проблемы Волги». - 1989. -Ч II., Медико-биологические проблемы.

- Саратов. - 1989. - С. 178-179. (соавт.: Г.В.Земков).

30. Характер и степень сопряженности морфофункциональ-ных изменений в организме осетровых с количеством экзотокси-кантов в их внутренних органах // Тез. докл. Всесоюзного совещания «Осетровое хозяйство водоемов СССР» (ноябрь, 1989) - Астрахань. - 1989. - Часть II. - С. 6-8. (соавт.: Г.В.Земков, И.В.Кокушкина).

31. Морфофункциональные изменения во внутренних органах и тканях Каспийского тюленя в зависимости от уровня накопления тяжелых металлов II Тез. докл. X Всесоюзного совещания по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих. - М., 1990. - С. 321-322 (соавт.: Л.С.Хураськин,

Г.В.Земков).

32. Динамика морфофункциональных нарушений в организме карпа под влиянием сульфата меди // Тез. докл. Всесоюзн. конференции «Экологические проблемы охраны живой природы» - М., 1990. - ч. 2. - С. 115-116 (соавт.: Г.В.Земков, Н.Н.Федорова).

33. Морфофункциональные аспекты адаптации- организма рыб к современным экологическим условиям Волго-Каспийского бассейна // Тез. докл. симпозиума, поев. 90-летию со дня рожд. проф. Н.Л.Гербильского. - Л. - 1990. - С. 114-116 (соавт.: Г.В.Земков, Н.Н.Федорова).

34. Физиолого-биохимические показатели осетровых рыб в зависимости от уровня накопления экзотоксикантов во внутренних органах II Сб. научн. трудов ГосНИОРХ. - Л. - 1990:':,Вып. 313. - С. 186-204 (соавт.: Г.В.Земков, И.В.Кокушкина).

35. Морфофункциональные изменения в органах и тканях рыб в процессе онтогенеза при кумуляции токсикантов II Материалы Всесоюзной конференции «Влияние антропогенных факторов на морфогенез- и структурные преобразования органов».-Астрахань.-1991.-С. 153-154 (соавт.: Д.Л.Теплый, Г.В.Земков).

36. Межвидовая устойчивость к антропогенным химическим факторам среды на основе патогистологического анализа внутренних органов рыб И Материалы II Всесоюзн. конф. по рыбохозяйст-венной токсикологии, поев. 100-летию проблемы качества воды в России. - С.-Петербург.-1991.-Т. 1. - С. 200-202 (соавт.: К.К.Врочин-ский, Г.В.Земков).

37. Морфофункциональная оценка адаптации осетровых рыб в современных условиях обитания // Материалы VIII конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. - Петрозаводск. -

1992. - С. 104-105 (соавт.: Г.Ф.Металлов, Г.В.Земков)

38. Характер и степень патологических изменений в крови и внутренних органах судака // Материалы VIII конференции по экологической физиологии и биохимии рыб. - Петрозаводск. - 1992. -С. 40 (соавт.: Г.В.Земков).

39. Патоморфологические изменения в организме промысловых видов ихтиофауны как представителей конечного звена гидробиоценоза // Материалы совещания «Многолетние гидробиологические наблюдения во внутренних водах: современная ситуация и перспективы». - С.-Петербург,-1994.-С. 72. (соавт.: Г.В.Земков).

40. Гонадогенез осетровых в зависимости от степени функциональных нарушений щитовидной железы и печени при современных эколого-токсикологических воздействиях // Тез.докл. IV Всероссийской конф. «Нейроэндокринология - 95». - С.-Петербург, 1995. - С. 48 (соавт.: Г.В.Земков, А.Ж.Мухамбеталиева).

41. Цитогистохимические критерии развития кишечника белорыбицы на ранних стадиях развития II Материалы Международной конференции: «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов». - Астрахань. - 1996. - С. 197-198. (соавт.: Н.Н.Федорова, Д.Л.Теплый).

42. Патология печени и других паренхиматозных органов осетровых и костистых рыб // Юбилейный сборник научных трудов КаспНИРХа. - Астрахань. - 1997. (соавт. Ю.В.Алтуфьев).

43. Морфофункциональные показатели адаптационной и воспроизводительной способности каспийских осетровых II I Всероссийский конгресс ихтиологов.-Астрахань.-1997. (соавт.:

Ю.В.Алтуфьев, А.А.Романов).

44. Dynamics of metabolic and histofunctional disturbances in the organism of the Caspian sturgeons under conditions of antropogenic doad // 3-rd International symposium on sturgeon.-Piacenza.-Italy.-1997. - P. 147148. (N.N.Fyodorova, G.V.Zemkov).

45. New pathological manifestations of gonad-gametogenesis (Acipenseridae) (histological and histoenzymochemical study) // 3-rd International symposium on sturgeon. - Piacenza.-Italy.-1997. - P. 131-132. (A.A.Romanov).

46. Morphofunctional abnormalities in some organs and tissues of the Caspian sturgeons // 3-rd International symposium on sturgeon.-Piacenza.-Italy.-1997. - P. 7-8. (Y.V.Altufyev, A.A.Romanov).

47. Морфофункциональная оценка гомеостаза осетровых Каспия в современных экологических условиях // Тез. докл. IX Всероссийской конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. -М.. 1997. - С. 28-29 (соавт.: Г.В.Земков).

48. Возможности биотестирования качества открытых водоемов на основе патогистологического анализа органов и тканей рыб // Сб. научн. трудов АГМА. - Астрахань. - 1997. - С. 141-142 (соавт.: В.Ф.Зайцев, Г.В.Земков).

49. Сравнительное цитометрическое исследование при лепре активности дыхательных ферментов // Сб. научн. трудов. АГМА. -Астрахань. - 1997. - С. 133-135.