Патоморфологические и патогенетические особенности хеликобактерной инфекции

Костюнин, Кирилл Юрьевич

Диссертации по медицине → Патологическая анатомия

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Патоморфологические и патогенетические особенности хеликобактерной инфекции

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Костюнин, Кирилл Юрьевич Санкт-Петербург 2010 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Патоморфологические и патогенетические особенности хеликобактерной инфекции

На правах рукописи

0046И5854

КОСТЮНИН КИРИЛЛ ЮРЬЕВИЧ

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ

Патологическая анатомия 14.03.02

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ИЮН 2010

Санкт-Петербург - 2010

004605854

Работа выполнена на кафедре патологии Медицинского факультета Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный университет» Федерального агентства по образованию.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Цинзерлинг Всеволод Александрович

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Рыбакова Маргарита Григорьевна Доктор медицинских наук, профессор Чирский Вадим Семенович

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ».

Защита состоится 18 июня 2010 г. в_часов на заседании диссертационного

совета Д 208.090.03 при ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения и социального развития РФ» (197022, г. Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, д. 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

Автореферат разослан «_» мая 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Митрейкин Владимир Филиппович

Актуальность темы исследования.

Хронический гастрит - наиболее распространенное заболевание желудочно-кишечного тракта [Feldman R.A., 1998]. О наличии хронического воспаления можно говорить лишь после морфологического исследования [Remmele W., 1984]. Наибольшее развитие данное направление получило после открытия бактерии Helicobacter pylori [Marshall В., 1983]. Признана важная роль этого микроорганизма в развитии язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, MALT-лимфомы и аденокарциномы желудка [Ernst Р., 2000; Пиманов С.И., 2007]. В 1990 году пилорический хеликобактериоз был официально включен в Международную классификацию гастритов [Misiewicz J.J., 1990], а в 1994 году Международное агентство по изучению рака (IARK) отнесло его к канцерогенам первого порядка.

Одним из изменений слизистой оболочки желудка является гиперплазия покровно-ямочного эпителия, которую большинство исследователей связывают с наличием Helicobacter pylori [Аруин Л.И., 1998]. Исследования показали связь некоторых факторов вирулентности Helicobacter pylori с индексом апоптоза в эпителии [Peek Р., 1997]. Объяснить наличие гиперплазии покровно-ямочного эпителия в случаях, где Helicobacter pylori не обнаружен, не всегда возможно.

Часто на слизистой оболочке желудка при проведении морфологического исследования гастробиоптатов выявляется нехеликобактерная микробиота. Несмотря на то, что для некоторых микроорганизмов была показана роль в развитии воспаления в желудочно-кишечном тракте, до настоящего времени нехеликобактерная микробиота не является компонентом морфологического описания гастробиоптатов [Dixon М., 1996].

В ряде исследований показано, что риск развития болезни у конкретного человека зависит от генотипа штамма Helicobacter pylori, носителем которого он является [Miehlke S., 2000; Zambon C-F., 2003]. Считают, что CagA участвует в язвообразовании, развитии атрофии СОЖ, в процессе деградации и разрушения межклеточного матрикса и базальной мембраны, а также стимулирует продукцию интерлейкинов [Акопян И.Г., 2008]. Несмотря на значительное количество работ, посвященных изучению факторов вирулентности Helicobacter pylori и их связи с рядом важных заболеваний, в 2005 году в «Маастрихтском консенсусе-3» указывается, что наличие факторов вирулентности не влияет на назначение лечения [Malfertheiner Р., 2007], что привело к закрытию исследования в части лабораторий.

При многих инфекциях, включая Helicobacter pylori, повреждение тканей обусловлено не только самим возбудителем, но и агрессивным ответом иммунной системы, что обуславливает интерес изучения генных механизмов, регулирующих ее. Данное обстоятельство способствует рассмотрению

проблемы взаимоотношений макро- и микроорганизма с позиций генетической регуляции воспаления [Кононов A.B., 2009].

Активно развивающимся направлением в молекулярной биологии стало исследование генетического полиморфизма кандидатных генов, ответственных за то или иное заболевание. Несмотря на то, что для конкретного пациента единичная замена нуклеотида (SNP) в гене не несет очевидного значения, на уровне популяции такие исследования позволяют накапливать информацию о роли того или иного SNP в развитии определенных заболеваний.

Предполагается, что активация дендритных клеток должна играть ключевую роль в развитии иммунного ответа к Helicobacter pylori. Дендритные клетки экспрессируют ряд клеточных рецепторов, известных как патгерн-распознающие, на одном из них - CD209 сосредоточено внимание исследователей в связи с его важной ролью при ряде инфекций, в том числе вызванных Helicobacter pylori [Appelmelk B.J., 2003]. Эти данные послужили стимулом для работ, посвященных изучению генетической вариабельности гена CD209 [Neyrolles О., 2006]. Было показано, что полиморфизм промотора гена CD209 в позиции -336 (A/G) имеет функциональное значение для экспрессии CD209 рецептора и, вероятно, чувствительности к инфекционным заболеваниям [Sakuntabhai А., 2005]. Однако влияние данного полиморфизма на течение болезни не однонаправленно. С одной стороны, показана протективня роль аллеля -336А при туберкулезе и HTV инфекции, с другой стороны, при лихорадке Денге данный генотип способствует более тяжелому течению болезни [Neyrolles О., 2005; Barreiro L.B., 2006].

Наряду с другими цитокинами, Helicobacter pylori стимулирует секрецию моноцитарного хемотаксического протеина 1 типа (МСР-1) эпителиальными клетками желудка [Mori N., 2001]. В регуляторной области гена МСР-1 в позиции -2518 обнаружена функционально значимая однонуклеотидная A/G замена. Ряд исследований по влиянию данного полиморфизма на некоторые инфекционные заболевания показал преобладание GG генотипа у HTV инфицированных испанцев по сравнению со здоровыми [Vilades С., 2007], а также достоверное увеличение встречаемости аллеля G у больных туберкулезом мексиканцев по сравнению с контрольной группой [Flores-Villanueva P.O., 2005]. Для заболеваний, связанных с Helicobacter pylori, такого рода работ не проводилось.

Цель исследования Изучение некоторых патоморфологических и патогенетических особенностей гастритов, ассоциированных с Helicobacter pylori.

Задачи исследования 1. Выявить особенности течения хеликобактерной инфекции в различных

возрастных группах.

2. Поиск связей между морфологическими изменениями слизистой оболочки желудка с наличием и количеством Helicobacter pylori.

3. Изучить возрастные особенности гиперплазии покровно-ямочного эпителия, ее связь с другими морфологическими изменениями, наличием в биоптатах Helicobacter pylori.

4. Найти особенности взаимоотношений Helicobacter pylori и нехеликобактерной микробиоты, связи микробиоты с морфологическими проявлениями гастрита.

5. Изучить распределения генотипов Helicobacter pylori по генам CagA, VacA и IceA среди пациентов с различными морфологическими изменения слизистой оболочке желудка.

6. Установить, существует ли связь морфологических изменений слизистой желудка при хронических гастритах, ассоциированных с Helicobacter pylori, с генетическим полиморфизмом человека по гену CD209 в позиции -336, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

7. Определить связь морфологических изменений слизистой желудка при хронических гастритах, ассоциированных с Helicobacter pylori, с генетическим полиморфизмом человека по гену МСР-1 в позиции -2518, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

Научная новизна

Впервые при изучении гастрита, вызванного Helicobacter pylori, показаны взаимосвязи морфологических изменений слизистой желудка между собой, с половозрастными показателями, с наличием и количеством патогена. Впервые показана связь гиперплазии покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка с выраженностью и активностью воспаления при отсутствии связи с наличием и количеством Helicobacter pylori.

Впервые на большой выборке изучена связь между нехеликобактерной микробиотой и Helicobacter pylori, основными морфологическими проявлениями гастрита.

Впервые при хроническом гастрите изучен генетический полиморфизм человека по генам CD209 и МСР-1.

Впервые установлена взаимосвязь между основными морфологическими проявлениями гастрита и генетическим полиморфизмом человека по гену CD209 в позиции -336 и по гену МСР-1 в позиции - 2518, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

Теоретическая и практическая значимость

Доказано, что гистологический метод исследования гастробиоптатов, дополненный цитологическим исследованием мазков-отпечатков позволяет не

только надежно выявить Helicobacter pylori, но и охарактеризовать реакцию организма человека.

Гиперплазия покровно-ямочного эпителия является проявлением генетически обусловленной реактивности индивидуума, и зависит от выраженности и активности воспаления в желудке.

Показана необходимость оценивать наличие на поверхности слизистой оболочки желудка нехеликобактерной микробиоты, поскольку она способна вызывать на себя воспалительную реакцию.

Обнаружение взаимосвязи между морфологическими изменениями слизистой желудка, вызванных Helicobacter pylori, и генетического полиморфизма человека по генам CD209 и МСР-1 создает предпосылки для полной характеристики «генных сетей», ответственных за развитие язвенной болезни и рака желудка, что позволит оптимизировать диспансерное наблюдение и терапию.

Доказано, что исход взаимодействия хеликобактера с организмом человека зависит как от вирулентности микроорганизма, так и от генетических особенностей макроорганизма.

Внедрение результатов исследования Результаты исследований внедрены в преподавание студентам на кафедре патологии медицинского факультета Санкт-Петербургского государственного университета и кафедре патологии с курсом иммунологии и аллергологии Иркутского государственного медицинского университета. Полученныне результаты используются в практической работе Иркутского областного клинического консультативно-диагностического центра.

Положения, выносимые на защиту

1. Helicobacter pylori является возбудителем хронического гастрита. Количество Helicobacter pylori коррелирует с выраженностью и активностью воспаления, наличием лимфоидных агрегатов и кишечной метаплазией эпителия.

2. Гиперплазия покровно-ямочного эпителия является частым изменением слизистой желудка и связана с выраженностью и активностью воспаления.

3. Нехеликобактерная микробиота часто выявляется при морфологических исследованиях гастробиоптатов, в том числе без признаков воспалительных изменений. При наличии Helicobacter pylori нехеликобактерная микробиота чаще встречается при неактивных формах гастритов. При отсутствии Helicobacter pylori с нехеликобактерной микробиотой может быть связана легкая инфильтрация собственной пластинки нейтрофильными гранулоцитами. Наличие нехеликобактерной микробиоты коррелирует с Helicobacter pylori, возрастом, кишечной метаплазией, атрофией, наличием лимфоидных агрегатов.

4. У пациентов, пораженных cagA+ штаммами Helicobacter pylori, активный

гастрит и лимфоидные агрегаты выявляются чаще, чем у больных с cagA-штаммами. При 1 типе Helicobacter pylori активный гастрит выявляется также чаще, при этом наличие vacAsl отдельно достоверно не влияет на активность гастрита.

5. У носителей генотипа -336АА в гене человека CD209 реже развивается высокая активность воспалительного процесса в желудке и чаще развивается гастрит, вызванный малопатогенными штаммами Helicobacter pylori. У носителей генотипа -336AG и GG чаще развивается высокоактивный гастрит, вызванный высокопатогенными штаммами Helicobacter pylori.

6. У носителей генотипа -251 SAG и GG в гене человека МСР-1 чаще развиваются высокая активность хронического гастрита и гиперплазия покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка.

Личный вклад автора. Автором составлен план исследования, определены цели, задачи и методы исследования, лично проведен морфологический раздел работы, под контролем соответствующих специалистов осуществлен молекулярно-биологический раздел. Анализ результатов, в том числе статистическая обработка, выводы и практические рекомендации сформулированы лично автором.

Апробация работы Материалы диссертации были представлены на 4-й Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней -2007», (г. Москва, 2007); ежегодной конференции ДиаМА (г. Екатеринбург, 2008); Межрегиональной научно-практической конференции (г. Иркутск, 2008); 9-й Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием (г. Красноярск, 2009); доложены и обсуждены на 4-м съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г. Новосибирск, 2008), пленарном заседании Санкт-Петербургского общества патологоанатомов (г. Санкт-Петербург, 23 марта 2010 г.).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 работы - в ведущих рецензируемых периодических изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 35 рисунками. Библиографический список содержит 34 отечественных и 219 зарубежных источников.

Материал и методы исследования

В настоящей работе использовались гастробиоптаты, полученные в процессе рутинных клинико-эндоскопических исследований в Иркутском Диагностическом Центре.

Исследование проходило в два этапа. На первом этапе исследовано 2324 пациентов за период с 2001 по 2006 год, прошедших обследование в Иркутском Диагностическом Центре. В группе изучения было 1458 женщин, средний возраст которых составил 46,9±15,7 лет; и 866 мужчин, средний возраст которых составил 40,0±16,6 лет. Между выборками мужчин и женщин не наблюдалось значимых отличий по возрасту и полу в соответствии с критерием Манна-Уитни (р>0,05).

Морфологическое исследование. В каждом случае проводилось исследование на наличие Helicobacter pylori гистологически и цитологически.

Фиксация биоптатов для гистологического исследования из антрального и фундального отделов слизистой оболочки желудка проводилась в забуференном нейтральном 10% растворе формалина. Проводка материала проводилась в автомате для вакуумной проводки VIP-E150F фирмы "Sacura", Япония. Заливка в системе для автоматической заливки материала "TEC-1V" фирмы "Sacura", Япония. Резка стандартных серийных срезов толщиной 3 мкм на полуавтоматических роторных микротомах СМ-502 фирмы "Microm", Германия с использованием одноразовых ножей аппаратной проводки фирмы «Сакура». Окраска срезов гистологическими и гистохимическими методиками осуществлялась в автомате для покраски срезов DRS-601A фирмы "Sacura", Япония. Покрытие срезов на предметных стеклах покровными стеклами в автомате Cover Tech фирмы "Microm", Германия. Полученные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, толуидиновым синим.

В каждом случае с гастробиоптата делался мазок-отпечаток для цитологического исследования, поскольку общепризнанным считается, что цитологическое исследование мазков-отпечатков гастробиоптатов является высокоинформативным и недорогим методом, позволяющим оценивать не только количество Helicobacter pylori, но и описывать признаки гиперплазии покровно-ямочного эпителия, кишечной метаплазии, оценивать нехеликобактерную микробиоту, позволяет судить об выраженности и активности воспаления, а также делает в ряде случаев гистологический ответ при опухолевых процессах более достоверным. Полученный материал фиксировали и окрашивали азур-эозиновой смесью.

Результаты морфологических исследований биоптатов слизистой оболочки желудка оценивались по модифицированной сиднейской

классификации [Dixon М., 1996].

На втором этапе отбиралась группа пациентов при условии наличия Helicobacter pylori, определенным гистологическим и цитологическим методами исследования, для проведения молекулярно-биологического исследования.

Молекулярно-биологические исследования. ДНК из биолтатов СОЖ выделялась набором «ДНК-сорб А», производства ЦНИИ эпидемиологии по протоколу производителя. На одну ПЦР использовалось 50-100 мкг тотальной ДНК.

Произведен анализ 85 случаев от 25 мужчин и 60 женщин с морфологическим диагнозом «хронический гастрит». Во всех образцах наличие Helicobacter pylori было подтверждено гистобактериоскопически и с помощью ПЦР. Средний возраст мужчин составил 45.9±15.2 лет, а женщин 44.3±15.7 лет, между выборками мужчин и женщин не наблюдалось значимых отличий по возрасту и полу в соответствии с критерием Манна-Уитни (р>0,05).

Генотипирование генов cagA, vacA и iceAl проводилось наборами для ПЦР «Хеликопол СА», «Хеликопол VA» и «Хеликопол 1А» производства НПФ «Литех», согласно протоколов производителя. К типу I Helicobacter pylori, считающемуся наиболее вирулентным, были отнесены образцы ДНК, давшие положительный сигнал на ген CagA и si аллельный вариант гена VacA, все остальные образцы были отнесены к не-I типу [Atherton J.C. et al., 1995; Yamaoka Y. et al., 1995].

Для аналогичной группы было проведено исследование полиморфизма промотора гена DC-SIGN в позиции -336 A1G [Neyrolles О. et al., 2006] (номер SNP в NCBI: rs4804803) с помощью ПЦР в реальном времени с использованием "шпилечных" праймеров [Hazbon М.Н. et al., 2004] на амплификаторе iQ-Cycler (БиоРад, США) в 20 мкл реакционой смеси следующего состава: 1х ПЦР буфер (Интерлабсервис); 3 мМ MgS04 (Интерлабсервис); смеси олигонуклеотидов (Синтол) состоящей из общего и одного из дискриминирующих праймеров; флуоресцентного красителя SybrGreen II (Sigma, S-9305) в конечном разведении 1/10000; 4NTP (Интерлабсервис) в конечной концентрации 200 мкМ каждого нуклеотида; модифицированной TaqF полимеразы (Интерлабсервис) по 1 ед на реакцию и ДНК-образца в концентрации около 50 нг на реакцию. ПЦР инициировалась 15-ти минутным прогревом реакционной смеси при 95°С (для активации TaqF полимеразы) с последующей амплификацией в течение 45 циклов, состоящей из этапов: плавление при 95° - 30 сек.; отжига при 67° - 30 сек.; элонгации при 72° - 20 сек. В конце ПЦР анализировались кривые плавления ПЦР-продуктов для исключения неспецифических реакций.

Для изучения полиморфизма гена МСР-1 в позиции -2518 исследовался

91 пациент из 31 мужчины и 60 женщин, с морфологическим диагнозом «хронический гастрит». Средний возраст мужчин составил 44.6±16.1лет, а женщин 43.4±16.2 лет, между выборками мужчин и женщин не наблюдалось значимых отличий по возрасту и полу в соответствии с критерием Манна-Уитни (р >0,05).

Полиморфизм промотора гена МСР-1 в позиции -2518 (номер SNP -rs 1024611) исследовали методом ПЦР в реальном времени с использованием праймеров и LNA-зондов [Latorra D. et al., 2003], разработанных и синтезированных НПФ «Синтол», Россия. ПЦР выполняли на амплификаторе iQ-Cycler (БиоРад, США) в 20 мкл реакционой смеси следующего состава: 1х ПЦР буфер (Интерлабсервис); 3 мМ MgS04 (Интерлабсервис); смеси олигонуклеотидов состоящей из 2-х фланкирующих праймеров и 2-х зондов; 4NTP (Интерлабсервис) в конечной концентрации 176 мкМ каждого нуклеотида; модифицированной TaqF полимеразы (Интерлабсервис) по 1 ед. на реакцию и ДНК образца. ПЦР инициировалась 15-ти минутным прогревом реакционной смеси при 95°С (для активации TaqF полимеразы) с последующей амплификацией в течение 45 циклов, состоящей из этапов: плавление при 95° -30 сек.; отжига при 62° - 30 сек.; элонгации при 72° - 20 сек.

Статистический анализ. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программ Statistica 6.0. Поло-возрастные различия между группами сравнивали с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Анализ взаимосвязи двух морфологических признаков проводили с использованием критерия х2 или корреляционного анализа Спирмена. Частоты генотипов и соответствие наблюдаемых частот ожидаемому равновесию по Харди-Вейнбергу определяли с помощью программы Arlequin 3.0 (http://cmpg.unibe.ch/software/arlequin3). Сравнение частот аллелей и генотипов между различными группами проводили с использованием корреляционного анализа Спирмена, критерия х2 Пирсона или х2 с коррекцией Йетса на непрерывность, в случае присутствия абсолютных значений меньше 10.

Результаты исследования и обсуждение.

Морфологические данные.

Общие морфологические проявления гастрита.

Исследованы гастробиоптаты от 2324 пациентов за период с 2001 по 2006год. В группе изучения было 1458 женщин, средний возраст которых составил 46,9±15,7 лет; и 866 мужчин, средний возраст которых составил 40,0±16,6 лет.

При анализе данных обращает на себя внимание, что инфицированность Helicobacter pylori у жителей Иркутской области, проходивших обследование в

Иркутском областном клиническом консультативно-диагностическом центре, составляет 79%. На рисунке 1 отображено распределение признаков в процентах среди обследованных в зависимости от возраста. Следует отметить, что инфицированность детского населения Helicobacter pylori уже к 10-летнему возрасту превышает 60%, а к 25 годам превышает 80%. После 70-летнего возраста, вероятно в связи с нарастанием атрофических изменений собственной пластинки слизистой, процент инфицированности населения начинает снижаться.

Возраст

Рисунок 1. Распространенность признаков в процентах среди обследованных в зависимости от возраста.

Кроме этого, на рисунке отображена динамика случаев, где определялись признаки атрофических изменений слизистой, начиная с минимальных значений, характеризуется постепенным возрастанием с возрастом, достигая 50% случаев в возрасте 70 лет.

Кривая «активности» гастрита, т.е. доля случаев с налиием умеренно выраженной и выраженной инфильтрации нейтрофильными гранулоцитами, идет параллельно степени инфицированности Helicobacter pylori, уже к 25-летнему возрасту превышает 50%, с возрастом характеризуется волнообразным течением, начинает снижаться в возрасте 70 лет.

На данном рисунке также отражена доля случаев, где выявлялась нехеликобактерная микробиота: в течении жизни определяясь примерно в 25% случаев, после 60 лет, вероятно, в связи с нарастанием атрофических изменений, доля случаев с наличием нехеликобактерной микробиоты увеличивается до 60%.

Таблица 1. Оценка корреляции морфологических признаков хронического гастрита между собой и по отношению к полу и возрасту пациентов.

Атроф м 0/1 Выраженно сть Активное ть Мегагшаз ия 0/1 Агрега ты 0/1 Гиперплаз ия 0/1 Helicobac ter pylori Helicobac ter pylori 0/1 Нехеликобактер ная микробиота 0/1

Возраст rs-=0,37 р=0,01 г_=0,16 р-0,01 г,=0,14 р=0.01 г,=0,33 р=0,01 N г,=0,10 р=0,01 N r^—0,05 p=0,01 r=0,07 р=0,01

Пол Х!=4,94 р=0,03 N N N хЧзз р-0,04 N N N N

Атрофия 0/1 X г =0,15 р=0,01 г =0,19 а р=0,01 Х^840,68 р-0,01 Х2=18,7 7 р-0,01 6,87 р=0,01 N N xWs р=0,04

Выражетао сть X г^ОМ р=0,01 1,-0.15 р=0,01 г,=0,23 р-0,01 г.-ОДО р=0,01 r,=W3 p=0,01 r=0J6 pH),01 г--0,11 p=o,m

Аггквпость X г=0,17 р=О,01 г =0,23 1 р=Ю,01 г-0,05 р=0,02 p=0,01 r=0,38 p=0,01 г,--0,13 р=0,01

Метаплазия 0/1 X р=0,01 N r^—0,05 p=0,02 p=0,03 Х2=14^З p=o,oi

Агрегаты 0/1 X N г-0,18 а p=0,01 X=91,78 p=0,01 x-Vi р=0,М

Гигтерпдаш я 0/1 X N N N

Helicobacter p-jlon X X г=-030 р=0,01

Helicobacter pylori 0/1 X Хг-200,79 р=0,01

В таблице 1 показаны корреляции морфологических изменений слизистой желудка между собой и по отношению к полу и возрасту пациентов. Полученные в исследовании данные показали, что Helicobacter pylori действительно является агентом, способным вызывать в слизистой желудка инфильтрацию собственной пластинки мононуклеарами (rs=0,36, р=0.01) и нейтрофильными гранулоцитами (rs=0,37, р=0,01), а также запускать иммунные механизмы, приводящие к образованию лимфоидных агрегатов (х2-91,78, р=0,01).

Следующие морфологические показатели оказались связанными с возрастом пациентов: атрофические изменения слизистой желудка (rs=0,37, р=0,01) и, соответственно, гиперплазия (rs=0,10, р=0,01) и метаплазия (г5=0,33, р=0,01); выраженность (rs=0,16, р=0,01) и активность (rs=0,14, р=0,01) воспаления; прямо коррелировало с обнаружением дополнительной нехеликобактерной микробиоты в желудке (rs=0,07, р=0,01), вероятно, в результате нарастания атрофических изменений и обратно коррелировало с обнаружением Helicobacter pylori (rs=-0,05, р=0,01).

Атрофические изменения слизистой желудка показали связи со следующими морфологическими признаками: выраженностью (rs=0,15, р~0,01; Х2=67,23, р=0,01), активностью (rs=0,19, р=0,01; х2=69,67, р=0,01), наличием лимфоидных агрегатов (х2=18,77, р=0,01). В том, что существует прямая связь между кишечной метаплазией (х2=840,68, р=0,01), гиперплазией покровно-ямочного эпителия (х2=б,87, р=0,01) и атрофией, удивляться не приходится, поскольку морфология атрофии основывается на этих признаках. Очень интересно отметить факт наличия взаимосвязи между полом и атрофией, другими словами, хронический атрофический гастрит у женщин встречался достоверно чаще, чем у мужчин (х2=4,94, р=0,03). Также существует связь между полом и наличием в биоптатах лимфоидных агрегатов (^=4,33, р=0,04). У женщин агрегаты обнаруживаются в 43% случаев, а у мужчин - в 38%.

Выраженность и активность воспаления слизистой оболочки желудка были связаны со всеми другими морфологическими проявлениями гастрита.

Во многих случаях при гистологическом и цитологическом исследовании определяется дополнительная нехеликобактерная микробиота на поверхности слизистой оболочки. Интересно заметить, что наличие нехеликобактерной микробиоты обратно коррелирует с наличием (х2=200,79, р=0,01) и количеством (rs=-0,297, р=0,01) Helicobacter pylori. Можно объяснить данное обстоятельство двояко: с одной стороны, несомненно, что при нарастании атрофических изменений слизистой желудка и изменении кислотности желудочного содержимого больше преимущество будет иметь микробиота, более приспособленная к подобным условиям. С другой стороны, при наличии

большого количества хеликобактера на поверхности слизистой желудка, определение другой микрофлоры представляет определенные трудности для морфолога, производящего исследование. Зато при отсутствии хеликобактера или его незначительном количестве микробиота определяется без особых сложностей.

Кроме этого обращает внимание, что обнаружена прямая корреляционная связь между нехеликобакгерной микробиотой и возрастом, наличием кишечной метаплазии эпителия и признаками атрофии слизистой желудка и обратная связь с выраженностью воспаления, активностью, наличием лимфоидных агрегатов.

Гиперплазия покровно-ямочного эпителия.

Гиперплазия покровно-ямочного эпителия - частое изменение слизистой желудка, уже в 10 летнем возрасте наблюдается у 30% пациентов, частота выявления с возрастом увеличиваться, к 85 годам в нашем исследовании наблюдается уже у 70% пацентов (rs=0,10, р=0,01; рис.1). На основе этого нетрудно объяснить наличие связи с атрофическими изменениями слизистой желудка (х2=6,87, р=0,01), при том, что не обнаружено статистически достоверной связи с наличием метаплазии эпителия желез (х2=0,01, р=0,96) и лимфоидными агрегатами (х2=2,81, р=0,94).

При анализе взаимосвязи гиперплазии покровно-ямочного эпителия и выраженности мононуклеарной инфильтрации в собственной пластинке обнаружено, что по мере увеличения выраженности увеличивается доля случаев с гиперплазией покровно-ямочного эпителия (rs=0,10, р=0,01), начиная от 15% случаев без признаков воспаления в желудке и до 47% при выраженном воспалении.

Аналогичные данные получены при исследовании случаев при наличии и отсутствии в гастробиоптатах Helicobacter pylori (от 9% при отсутствии признаков воспаления до 47% при выраженном воспаления при наличии хеликобактера и от 16% до 49% при отсутствии Helicobacter pylori), что дает основание предполагать, что Helicobacter pylori никак не влияет на взаимосвязь выраженности воспаления и гиперплазии покровно-ямочного эпителия.

Обнаружена корреляция активности воспаления и гиперплазии покровно-ямочного эпителия (("3=0,05, р=0,02, таб. 1). Доля случаев с признаками гиперплазии постепенно увеличивается начиная с 24% при неактивных формах гастрита возрастая к умеренной активности до 48%, но после этого вновь снижается при высокой активности гастрита до уровня малоактивным форм, до 39%, т.е. гиперплазия чаще встречается при умеренно активном воспалении (статистически значимые различия между умеренно активными формами и активными х2=13,59, р=0,01).

Аналогично выраженности воспаления, при сравнении групп с наличием и отсутствием Helicobacter pylori, не выявлено статистически достоверных различий связи активности гастрита и гиперплазии покровно-ямочного эпителия (гиперплазия обнаружена у 27% неактивных гастритов, 36% малоактивных форм, 48% при умеренной активности и 39% при высокой активности воспаления при наличии хеликобактера; 22%, 42%, 49% и 35% соответсвенно при отсутствии), т.е. Helicobacter pylori не влияет на связь активности воспаления и гиперплазии покровно-ямочного эпителия.

Исследование взаимосвязи гиперплазии покровно-ямочного эпителия и наличия Helicobacter pylori показало, что статистически значимых различий не обнаружено - при наличии хеликобактера случаев без признаков гиперплазии 78%, с признаками гиперплазии 81% (х2=3,52, р=0,06).

Анализ количества Helicobacter pylori и гиперплазии покровно-ямочного эпителия показал отсутствие различий: гиперплазия была обнаружена в 36% при отсутствии хеликобактера, 37% при небольшом количестве, 41% при наличии умеренного количества и 40% при большом количестве Helicobacter pylori (rs=0,04, р=0,06).

Для определения связи гиперплазии покровно-ямочного эпителия и факторов вирулентности Helicobacter pylori проанализировано 100 случаев, где кроме гистологического метода было проведено ПЦР-исследование. Обнаружено, что ни один фактор сам по себе, ни токсотип 1 (сочетание CagA и VacAsl) не показали связи с гиперплазией покровно-ямочного эпителия (IceAl - х2=0,02, р=0,88; 1сеА2 - х2=0,13, р=0,72; VacAsl - %2=0,65, р=0,42; VacAml -Х2=0,04, р=0,85; CagA - х2=1,96, р=0,16; 1 токсотип - х2=0,49, р=0,48).

Нехеликобактерная микробиота.

Из 2305 случаев нехеликобактерная микробиота обнаружена в 588 случаев (26%). Проведен анализ взаимосвязи нехеликобактерной микробиоты с выраженностью и активностью воспаления.

Нехеликобактерная микробиота обнаружена при отсутствии признаков воспаления в желудке в 40% случаев. Близкие данные обнаружены при легких формах гастритов (39%). При умеренно выраженном и выраженном воспалении в желудке нехеликобактерная микробиота обнаружена при 23 и 22% соответственно. Другими словами, нехеликобактерная микробиота обнаруживается чаще при отсутсвии признаков воспаления или при легких формах гастритов (х2=42,42, р=0,01).

Аналогично выраженности воспаления нехеликобактерная микробиота обнаружена чаще при отсутствии активности воспаления (39%) или при легкой активности (31%), при умеренно активном и активном воспалении обнаружена в 22% и 20% соответственно (х2=39,99, р=0,01).

Отдельно проанализированы случаи, где в гастробиотатах обнаружен Helicobacter pylori. При наличии Helicobacter pylori нехеликобактерная микробиота обнаружена в 19% (343 случая из 1820), без статистически достоверных колебаний при разной выраженности гастрита (iy=-0,02, р=0,51), но достоверно чаще встречающаяся в случаях без признаков активности (статистически значимые различия между неактивными гастритами (33%) и гастритами с легкой активностью (19%), х =39,99, р=0,01).

Особенный интерес вызывают случаи, где обнаружена нехеликобактерная микробиота при отсутсвии Helicobacter pylori. Нехеликобактерная микробиота обнаружена в 51% случаев (244 случая из 481), что значительно чаще, чем в случаях с Helicobacter pylori (19%). Данное обстоятельство позволяет предположить несколько вариантов: вероятно, основным моментом служит то, что при значительных количествах Helicobacter pylori обнаружение посторонней микробиоты затруднено, особенно с учетом наличия кокковых форм. Другим объяснением данного феномена может быть то, что при наличии Helicobacter pylori действительно нехеликобактерная микробиота встречается значительно реже.

Можно утверждать, что нехеликобактерная микробиота при отсутсвии Helicobacter pylori обнаруживается примерно одинаково при разной степени выраженности гастрита, без статистически значимых различий (rs=0,03, р=0,47), т.е. не оказывает принципиального воздействия на выраженность моионуклеарной инфильтрации в собственной пластинке желудка.

При этом анализ взаимосвязи нехеликобактерной микробиоты и активности гастрита при отсутствии Helicobacter pylori показывает, что есть статистически значимые различия между гастритами без признаков активности (42% случаев с наличием микробиоты) и гастритами с малой активностью (59%) (Х^=8,61, р=0,01), т.е. нехеликобактерная микробиота обнаруживается чаще при легкой инфильтрации собственной пластинки нейтрофильными гранулоцитами.

Морфология гастрита и молекулярно-биологические данные.

Анализ морфологических признаков воспаления в желудке и факторов вирулентности Helicobacter pylori.

Проведен анализ морфологических признаков воспаления в желудке и факторов вирулентности Helicobacter pylori по генам: Ice AI, Ice А2, Vac Asl/s2, Vac Ami, Vac Am2, Cag A.

Наибольшее влияние среди факторов вирулентности хеликобактера на «активность гастрита», т.е. инфильтрацию собственной пластинки нейтрофильными лейкоцитами, оказывает цитотоксин, кодируемый геном cagA (rs=0,46; р=0,01). Другими словами, у пациентов пораженных cagA+ штаммами активный гастрит выявляется достоверно чаще, чем у больных с cagA-

штаммами хеликобактера. Аналогичная тенденция наблюдается и для фактора вирулентности vacAsl (вариант сигнального пептида гена vacA - si), т.е. у пациентов пораженных vacAsl+ вариантом возбудителя активный гастрит наблюдается чаще, чем у больных с vacAs2 вариантом гена. Однако в рамках настоящего исследования эти различия не достигли уровня статистически значимых. Тем не менее, изучение комбинации генов cagA+\vacAsl+ (I тип Helicobacter pylori) свидетельствует о том, что I тип хеликобактера достоверно чаще вызывает активный гастрит, чем не I тип, (rs=0,25, р=0,02). Помимо влияния на активность гастрита, присутствие cagA+ штаммов значимо увеличивает количество лимфоидных агрегатов в слизистой (х2=5,27; р=0,02).

Следует отметить, что фактор вирулентности vacAsl показал взаимосвязь с таким морфологическим проявлением воспаления в желудке как «выраженность» (степень лимфоплазмоцитарной инфильтрации собственной пластинки) (rs=0,28, р=0,01), аналогичная тенденция прослеживается и для 1 типа Helicobacter pylori (r=0,27, р=0,02). Так же у vacAsl+ пациентов чаще наблюдались лимфоидные фолликулы в собственной пластинке (х/=4,89, р=0,03).

Анализ морфологических признаков воспаления в желудке и полиморфизма гена CD209.

Другим направлением настоящей работы являлось изучение влияния полиморфизма промоторной области гена человека CD209 в позиции -336 на морфологические проявления гастрита с учетом влияния факторов вирулентности Helicobacter pylori. Среди исследованных 85 человек с хроническим гастритом - 62 человека имели генотип АА (73%), 20 - AG генотип (23%) и 3 пациента - GG генотип (3%). Гетерозиготность по локусу -336 A/G соответствовала ожидаемой при равновесии Харди-Вейнберга. Частоты распределения аллелей у 85 больных гастритом составила для аллеля А - 0.85, а для G - 0.15. Эти значения статистически не отличалось от результатов исследования распределения данных аллелей в мультинациональной группе (европейцы + азиаты), проведенной L.B. Barreiro [Barreiro L.B. et al., 2006]. Проанализированы следующие морфологические проявления гастрита: выраженность, активность, наличие лимфоидных агрегатов и фолликулов, атрофических изменений, кишечной метаплазии, гиперплазии покровно-ямочного эпителия.

Полученные результаты свидетельствуют, что у пациентов с AG и GG генотипами в 100% случаев наблюдается умеренно активный и активный гастрит, и, наоборот, у пациентов с генотипом АА активное воспаление слизистой оболочки желудка наблюдается реже (х2== 4,68; р=0,03, рис.2).

Рисунок 2, Взаимосвязь активности воспаления в желудке и генотипов гена СБ209.

Аналогичная тенденция прослеживается при анализе взаимосвязи активности воспаления в желудке и аллелей гена СБ209 (х2=4,72; р=0,03, таб.2).

Таблица 2.

Распределение морфологических признаков «активность воспаления» и «выраженность воспаления» по модифицированной Сиднейской классификации у носителей аллелей -ЗЗбАЛЗ гена СБ209.

Активность в баллах А аллель G аллель Выраженность в баллах А аллель G аллель

0 6 (4%) 0 (0%) 0 0 (0%) 0 (0%)

1 22 (15%) 0 (0%) 1 2 (1%) 0 (0%)

2 46 (32%) 8 (31%) 2 103 (72%) 19(73%)

3 70 (49%) 18 (69%) 3 39 (27%) 7 (27%)

Всего 144(100%) 26 (100%) Всего 144 (100%) 26(100%)

Кроме того, сравнение частот встречаемости аллелей гена CD209 в позиции - 336 у пациентов, пораженных штаммами Helicobacter pylori с различными генами вирулентности выявило достоверное увеличение числа cagA+ штаммов у носителей G аллеля (%2=4,23; р=0,04), другие гены вирулентности связи не показали.

Остальные морфологические изменения не показали связи с аллелями и генотипами гена CD209 в позиции -336.

Анализ морфологических признаков воспаления е желудке и полиморфизма гена МСР-1.

Изучалось влияния полиморфизма промоторной области гена человека МСР-1 в позиции -2518 на морфологические проявления гастрита с учетом

влияния факторов вирулентности Helicobacter pylori.

Исследовался 91 биоптат слизистой оболочки желудка от 31 мужчины и 60 женщин, с морфологическим диагнозом «хронический гастрит». Частоты генотипов в локусе -2518 A/G были следующими: АА - 41/91 (0.45), AG - 42/91 (0.46), GG - 8/91 (0.09). Полученное распределение генотипов значимо не отличается по вариабельности от того же локуса у европеоидов (пациентов с нефропатией и когорты здоровых в Германии [Steinmetz О.М. at al., 2004]).

Сравнение полиморфизма гена МСР-1 в позиции -2518 с различными генами вирулентности Helicobacter pylori выявило отсутствие взаимосвязи.

Проводилось сравнение полиморфизма гена МСР-1 по локусу -2518 A/G с наличием морфологических признаков воспалительных изменений СОЖ, в соответствии с модифицированной сиднейской классификацией, в частности: с выраженностью хронического воспаления, активностью воспаления, степенью атрофических изменений, наличием, степенью выраженности и видом кишечной метаплазии эпителия, степенью обсемененности Helicobacter pylori, наличием и количеством лимфатических агрегатов, наличием гиперплазии покровно-ямочного эпителия. Проведенный скрининг позволил выявить, что у носителей -2518G аллеля наблюдается достоверное увеличение случаев гиперплазии покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка (Х2=6,56;р = 0,01).

В табл. 3 приведено распределение морфологических признаков гастрита - «активность воспаления» и «выраженность воспаления» у носителей аллелей -2518A/G. Обращает на себя внимание достоверное увеличение числа высокоактивных гастритов, оцененных в «3» балла (-¿2=6,76; р=0,01), у носителей аллеля G - 69% по сравнению с 48% у носителей аллеля А. В тоже время, выраженность инфильтрации мононуклеарными клетками у носителей -2518А и -2518G аллелей достоверно не различалась.

Таблица 3

Распределение морфологических признаков «активность воспаления» и «выраженность воспаления» по модифицированной Сиднейской классификации у носителей аллелей -2518 A/G гена МСР-1.

Активность в А аллель G аллель Выраженность в А аллель G аллель

баллах баллах

0 8 (6%) 2 (3%) 0 0 (0%) 0 (0%)

1 18(15%) 4 (7%) 1 7(6%) 1 (2%)

2 38(31%) 12 (21%) 2 80(65%) 38 (66%)

3 60 (48%) 40(69%) 3 37 (30%) 19 (33%)

Всего 124 (100%) 58 (100%) Всего 124 (100%) 58 (100%)

Аналогичная картина прослеживалась для носителей АА-генотипа по сравнению с АС и Ой (х2=6,31; р=0,01; рис. 3).

Рисунок 3. Взаимосвязь активности воспаления в желудке и генотипов гена МСР-1.

Остальные морфологические изменения желудке не показали связи с аллелями и генотипами гена МСР-1 в позиции -2518.

ВЫВОДЫ:

1. Helicobacter pylori является возбудителем хронического гастрита у 79% пациентов. Доказано наличие прямых и обратных корреляционных связей наличия и количества Helicobacter pylori с такими проявлениями гастрита как выраженность, активность воспаления, наличие лимфоидных агрегатов и кишечная метаплазия эпителия.

2. Гиперплазия покровно-ямочного эпителия слизистой желудка встречается с частотой 40%, к 85 годам достигает 70%. Доказана ее связь с выраженностью и активностью воспаления. Отсутствует связь гиперплазии покровно-ямочного эпителия с Helicobacter pylori.

3. Нехеликобактерная микробиота выявляется при исследовании с частотой 26 %, в том числе без признаков воспалительных изменений. При наличии Helicobacter pylori нехеликобактерная микробиота встречается значительно реже (19 %), чаще при неактивных формах гастритов. При отсутствии Helicobacter pylori нехеликобактерная микробиота определяется достоверно чаще (51 %), при этом с ней может быть связана легкая инфильтрация собственной пластинки нейтрофильными гранулоцитами. Отмечается обратная корреляционная связь между нехеликобактерной микробиотой и Helicobacter pylori, при этом нехеликобактерная микробиота коррелирует с возрастом, наличием кишечной метаплазии, атрофии, лимфоидных агрегатов.

4. Анализ полиморфизма генов, кодирующих вирулентность Helicobacter pylori показал, что у пациентов, пораженных cagA+ штаммами, активный гастрит и лимфоидные агрегаты выявляется достоверно чаще, чем у больных с cagA-

штаммами Helicobacter pylori. При 1 типе Helicobacter pylori активный гастрит выявлялся также чаще, при этом наличие vacAsl отдельно достоверно не влияло на активность гастрита.

5. Изучение генетического полиморфизма гена CD209 в -336 позиции выявило, что у носителей генотипа -336АА достоверно чаще развивается малоактивный гастрит, вызванный малопатогенными штаммами Helicobacter pylori. Соответственно, у носителей генотипа -336AG и GG чаще развивается высокая активность хронического гастрита, вызванного высокопатогенными штаммами Helicobacter pylor.

6. У носителей генотипа -2518AG и GG в гене человека МСР-1 чаще развивается высокая активность хронического гастрита, а так же чаще встречается гиперплазия покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка.

Практические рекомендации:

1. Гистологическое исследование гастробиопсий, дополненное цитологическим исследованием, является методом, позволяющим говорить не только о наличии и количестве Helicobacter pylori, но и о характере и степени выраженности ответа макроорганизма на данный патоген.

2. Выделение в морфологическом ответе гиперплазии покровно-ямочного эпителия является важным, поскольку это проявление реактивности макроорганизма, зависящей от выраженности и актиностя воспалительного ответа.

3. При проведении морфологического исследования гастробиоптатов целесообразно указывать наличие нехеликобактерной микробиоты, так как она способна вызывать легкую инфильтрацию нейтрофильными гранулоцитами собственной пластинки.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Гутникова М.Ю., Цинзерлинг В.А. Исследование различий в морфологических проявлениях гастрита в зависимости от генотипа Helicobacter pylori по генам вирулентности и полиморфизма гена человека DC-SIGN -336A7G. // Молекулярная медицина. -2009. - № 2. - С.19-23. (из перечня ВАК РФ).

2. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Суханов A.B., Серебренникова E.H., Гутникова М.Ю., Цинзерлинг В.А. Исследование хеликобактерного гастрита в Иркутской области: роль и место морфологического метода. // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - № 2. - С.78-82. (из перечня ВАК РФ).

3. Огарков О.Б., Костюнин К.Ю., Гутникова М.Ю., Цинзерлинг В.А. Полиморфизм -2518 A/G гена моноцитарного хемотаксического белка 1 типа (МСР-1) влияет на морфологические проявления хронического гастрита. //

Вестник Санкт-Петербургского университета. Серия 11. Медицина. - 2009. - № 2. - С.48-53. (из перечня ВАК РФ).

4. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Гутникова М.Ю., Цинзерлинг В.А. Анализ полиморфизма генов Helicobacter pylori VacA, CagA, IceA и гена человека DC-SIGN (-336 A/G) у больных хроническим гастритом. // 4 всероссийская научно-практическая конференция «Генодиагностика инфекционных болезней — 2007» (Молекулярная диагностика — 2007). Сборник трудов. - Москва. - 2007.

— Том 3. - С.260-267.

5. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Суханов А.В., Серебренникова Е.Н., Гутникова М.Ю., Цинзерлинг В.А. Восприимчивость человека к хеликобактерной инфекции: исследование морфологическими и молекулярными методами. // Клинико-эпидемиологические проблемы заболеваний органов пищеварения. Материалы девятой Вострочно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием. Красноярск. - 2009. - С.122-130.

6. Костюнин К.Ю., Огарков О.Б., Суханов А.В., Цинзерлинг В.А. Хеликобакгерный гастрит в Иркутской области. // Материалы межрегиональной научно-практической конференции. - Иркутск. - 2008. - С.164-166.

7. Огарков О.Б., Костюнин К.Ю., Медведева Т.В., Антипина СЛ., Гутникова М.Ю., Никипелов О.М., Цинзерлинг В.А. Оценка клинической значимости метода молекулярного генотипирования полиморфизма гена человека DC-SIGN

— 336A/G у больных туберкулезом и гастритом. // Актуальные проблемы деятельности консультативно-диагностических центров. Материалы ежегодной конференции ДиаМА. - Екатеринбург. - 2008. - С.108-110.

8. Огарков О.Б., Костюнин К.Ю., Медведева Т.В., Антипина СЛ., Гутникова М.Ю., Некипелов О.М., Цинзерлинг В.А. Полиморфизм гена человека DC-SIGN

— 336 A/G у больных, пораженных штаммами Helicobacter pylori и Mycobacterium tuberculosis различных генотипов. // 4 съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск. - 2008. - С.247.

Подписано в печать 16.05.2010. Бумага офисная белая. Печать RISO. Тираж 100 экз. Заказ № 141380.

Отпечатано в ООО «Оперативная типография Вектор» 664025, г.Иркутск, ул. Степана Разина д.6, офис 106, т.: (3952) 33-63-26,25-80-09 e-mail: dc@siline.ru

Оглавление диссертации Костюнин, Кирилл Юрьевич :: 2010 :: Санкт-Петербург

Введение

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость

Внедрение результатов исследования в практику

Положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Глава 1. Обзор литературы

История открытия Helicobacter pylori

Эпидемиология Helicobacter pylori

Источник инфекции

Биологические свойства Helicobacter pylori

Факторы вирулентности

Helicobacter pylori и иммунитет

Helicobacter pylori и морфологические изменения лизистой 25 оболочки желудка

Гастрит и нехеликобактерная микробиота

Однонуклеотидный полиморфизм 33 Дендритные клетки, рецептор CD209 и его связь с заболеваниями 35 Цитокины, МСР-1 и его связь с инфекционными заболеваниями

Глава 2. Материалы и методы исследования

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Морфологические данные

3.1.1. Общие морфологические проявления гастрита

3.1.2. Гиперплазия покровно-ямочного эпителия

3.1.3. Нехеликобактерная микробиота

3.2. Морфология гастрита и молекулярно-биологические данные

3.2.1. Анализ морфологических признаков воспаления в 75 желудке и факторов вирулентности Helicobacter pylori

3.2.2. Анализ морфологических признаков воспаления в 78 желудке и полиморфизма гена CD

3.2.3. Анализ морфологических признаков воспаления в 80 желудке и полиморфизма гена МСР

Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Костюнин, Кирилл Юрьевич, автореферат

Актуальность темы исследования.

Хронический гастрит - наиболее распространенное заболевание желудочно-кишечного тракта [Feldman R.A., 1998]. О наличии хронического воспаления можно говорить лишь после морфологического исследования [Remmele W., 1984]. Наибольшее развитие данное направление получило после открытия бактерии Helicobacter pylori [Marshall В., 1983]. Признана важная роль этого микроорганизма в развитии язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, MALT-лимфомы и аденокарциномы желудка [Ernst Р., 2000; Пиманов С.И. , 2007]. В 1990 году пилорический хеликобактериоз был официально включен в Международную классификацию гастритов [Misiewicz J.J., 1990], а в 1994 году Международное агентство по изучению рака (IARK) отнесло его к канцерогенам первого порядка.

Гастрит, вызванный Helicobacter pylori, более чем в 10% случаев прогрессирует в атрофический гастрит [Bogder К., 1998]. Однако большинство осложений гастрита, в том числе опухоли, развиваются только у определенной части инфицированных [Kuipers E.J., 1998]. Данное обстоятельство способствует рассмотрению проблемы взаимоотношений макро- и микроорганизма с позиций генетической регуляции воспаления [Кононов А.В., 2009].

Одним из изменений слизистой оболочки желудка является гиперплазия покровно-ямочного эпителия, которую большинство исследователей связывают с наличием Helicobacter pylori [Аруин Л.И., 1998]. Признается возможность трансформации гиперплазии в рак [Kuipers E.J., 1999]. Исследования показали связь некоторых факторов вирулентности Helicobacter pylori с индексом апоптоза в эпителии [Peek Р., 1997]. Объяснить наличие гиперплазии покровно-ямочного эпителия в случаях, где Helicobacter pylori не был обнаружен, не всегда возможно.

Часто на слизистой желудка при проведении морфологического исследования гастробиоптатов выявляется нехеликобактерная микробиота. Несмотря на то, что для некоторых микроорганизмов была показана роль в развитии воспаления в желудочно-кишечном тракте, до настоящего времени нехеликобактерная микробиота не является обязательным компонентом в описании морфологического исследования гастробиоптатов [Dixon М., 1996].

Опубликован ряд исследований, в которых показано, что риск развития болезни у конкретного человека зависит от генотипа штамма Helicobacter pylori, носителем которого он является [Zambon C-F., 2003., Miehlke S., 2000]. Считают, что CagA участвует в язвообразовании, развитии атрофии слизистой оболочки желудка, в процессе деградации и разрушения межклеточного матрикса и базальной мембраны, а также стимулирует продукцию интерлейкина-8 [Акопян И.Г., 2008]. Не смотря на значительное количество работ, посвященных изучению факторов вирулентности Helicobacter pylori и их связи с рядом важных заболеваний, в 2005 году в «Маастрихтском консенсусе-3» указывается, что наличие факторов вирулентности не влияет на назначение лечения [Malfertheiner Р., 2007], что привело к закрытию исследования в части лабораторий.

При многих инфекциях, включая Helicobacter pylori, повреждение тканей обусловлено не только самим возбудителем, сколько агрессивным ответом иммунной системы, что обуславливает интерес изучения генных механизмов, регулирующих ее.

Внедрение методов молекулярной биологии в клиническую практику привело к значительному прорыву в диагностике целого ряда инфекционных болезней. Другим активно развивающимся направлением стало исследование генетического полиморфизма кандидатных генов, ответственных за то или иное заболевание. Несмотря на то, что для конкретного пациента единичная замена нуклеотида (SNP) в том или ином гене не несет очевидного клинического значения, на уровне популяции такие исследования позволяют накапливать информацию о роли того или иного SNP в развитии определенных заболеваний.

Дендритные клетки, наряду с другими антиген-презентирующими клетками, являются основным связующим звеном между естественной резистентностью и специфическим иммунным ответом при бактериальных и паразитарных инфекциях. Поэтому предполагается, что активация дендритных клеток при хеликобактерной инфекции должна играть ключевую роль в развитии иммунного ответа к Helicobacter pylori. Дендритные клетки экспрессируют ряд клеточных рецепторов, известных как паттерн-распознающие (pattern recognition receptors). На одном из таких рецепторов -CD209 в последнее время сосредоточено внимание многих исследователей в связи с его важной ролью при вирусных и ряде бактериальных инфекций [Neyrolles О., 2006], включая вызванных Helicobacter pylori [Appelmelk, В .J., 2003]. Эти данные послужили стимулом для работ, посвященных изучению генетической вариабельности гена CD209 и ее влиянию на чувствительность к инфекционным болезням [Neyrolles О., 2006].

Было показано, что полиморфизм промотора гена CD209 в позиции -336 (A/G) имеет функциональное значение для экспрессии CD209 рецептора и, вероятно, чувствительности к инфекционным заболеваниям [Sakuntabhai А., 2005]. Однако, влияние данного полиморфизма на различные инфекционные болезни не однонаправленно. С одной стороны, показана протективная роль аллеля -33 6А при туберкулезе и ШУ инфекции, с другой стороны, при лихорадке Денге данный генотип способствует более тяжелому течению болезни [Barreiro L.B., 2006; Neyrolles О., 2005]. Для воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, связанных с Helicobacter pylori, работ такого рода не проводилось.

Инфекционная патология в подавляющем большинстве случаев сопровождается резким изменением цитокинового профиля организма, по Thl или Th2 пути, т.е. развитию преимущественно клеточного или гуморального иммунного ответа. Наряду с другими цитокинами, Helicobacter pylori стимулирует секрецию моноцитарного хемотаксического протеина 1 типа (МСР-1) эпителиальными клетками желудка [Mori N., 2001].

В регуляторной области гена моноцитарного хемотаксического белка 1 типа в позиции -2518 обнаружена функционально значимая однонуклеотидная A/G замена. Для гомозиготных носителей аллеля А характерна менее активная транскрипция гена МСР-1 и, соответственно, меньшая продукция кодируемого белка мононуклеарами периферической крови [Rovin В., 1999]. Проводился ряд исследований по влиянию -2518A/G МСР-1 полиморфизма на некоторые инфекционные заболевания. Обнаружено преобладание GG генотипа у HIV инфицированных испанцев по сравнению со здоровыми [Vilades С., 2007]. Аналогично, исследование данного локуса у больных туберкулезом мексиканцев выявило достоверное увеличение встречаемости аллеля G по сравнению с контрольной группой [Flores-Villanueva P.O., 2005]. Для воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, связанных с Helicobacter pylori такого рода работ не проводилось.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение некоторых патоморфологических и патогенетических особенностей гастритов, ассоциированных с Helicobacter pylori.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Выявить особенности течения хеликобактерной инфекции в различных возрастных группах.

2. Поиск связей между морфологическими изменениями слизистой желудка с наличием и количеством Helicobacter pylori.

5. Изучить распределения генотипов Helicobacter pylori по генам CagA, Vac А и IceA среди пациентов с различными морфологическими изменения слизистой оболочки желудка.

6. Установить, существует ли связь морфологических изменений слизистой оболочки желудка при хронических гастритах, ассоциированных с Helicobacter pylori, с генетическим полиморфизмом человека по гену CD209 в позиции -336, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

7. Определить связь морфологических изменений слизистой оболочки желудка при хронических гастритах, ассоциированных с Helicobacter pylori, с генетическим полиморфизмом человека по гену МСР-1 в позиции -2518, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые при хроническом гастрите изучен генетический полиморфизм человека по генам CD209 и МСР-1.

Впервые установлена взаимосвязь между основными морфологическими проявлениями гастрита и генетическим полиморфизмом человека по гену CD209 в позиции -336 и по гену МСР-1 в позиции — 2518, с учетом генов вирулентности Helicobacter pylori.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Доказано, что гистологический метод исследования гастробиоптатов, дополненный цитологическим исследованием мазков-отпечатков позволяет не только надежно выявить Helicobacter pylori, но и охарактеризовать реакцию организма человека.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Результаты исследований внедрены в преподавание студентам на кафедре патологии медицинского факультета Санкт-Петербургского государственного университета и кафедре патологии с курсом иммунологии и аллергологии Иркутского государственного медицинского университета. Полученныне результаты используются в практической работе Иркутского областного клинического консультативно-диагностического центра.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Helicobacter pylori является возбудителем хронического гастрита. Его количество Helicobacter pylori коррелирует с выраженностью и активностью воспаления, наличием лимфоидных агрегатов и кишечной метаплазией эпителия.

Helicobacter pylori с нехеликобактерной микробиотой может быть связана легкая инфильтрация собственной пластинки нейтрофильными гранулоцитами. Наличие нехеликобактерной микробиоты коррелирует с Helicobacter pylori, возрастом, кишечной метаплазией, атрофией, наличием лимфоидных агрегатов.

4. У пациентов, пораженных cagA+ штаммами Helicobacter pylori, активный гастрит и лимфоидные агрегаты выявляются чаще, чем у больных с cagA-штаммами. При 1 типе Helicobacter pylori активный гастрит выявляется также чаще, при этом наличие vacAsl отдельно достоверно не влияет на активность гастрита.

6. У носителей генотипа -2518AG и GG в гене человека МСР-1 чаще развиваются высокая активность хронического гастрита и гиперплазия покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка.

Заключение диссертационного исследования на тему "Патоморфологические и патогенетические особенности хеликобактерной инфекции"

ВЫВОДЫ:

4. Анализ полиморфизма генов, кодирующих вирулентность Helicobacter pylori, показал, что у пациентов, пораженных cagA+ штаммами, активный гастрит и лимфоидные агрегаты выявляется достоверно чаще, чем у больных с cagA- штаммами Helicobacter pylori. При 1 типе Helicobacter pylori активный гастрит выявлялся также чаще, при этом наличие vacAsl отдельно достоверно не влияло на активность гастрита.

6. У носителей генотипа -2518AG и GG в гене человека МСР-1 чаще развивается высокая активность хронического гастрита, а также чаще встречается гиперплазия покровно-ямочного эпителия СОЖ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Выделение в морфологическом ответе гиперплазии покровно-ямочного эпителия является важным, поскольку это проявление реактивности макроорганизма, зависящей от выраженности и активности воспалительного ответа.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Костюнин, Кирилл Юрьевич

1. Акопян И.Г., Барышникова Н.В., Григорян Т.М. и др. Методы диагностики хеликобактериоза. СПб.: Диалект, 2008.

2. Ардатская М.Д., Дубинин А.В., Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения. // Тер. архив. 2001. — Вып.2. — С.67-72.

3. Ардатская М.Д., Минушкин О.Н., Иконников Н.С. Дисбактериоз кишечника: понятие, диагностические подходы и пути коррекции. Возможности и преимущества биохимического исследования кала. Пособие для врачей. М., 2004.

4. Аруин Л.И. Helicobacter (Campilobacter) pylori в этиологии и патогенезе гастрита и язвенной болезни. // Арх.пат. 1990. - Вып. 10. -С.3-9.

5. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. Москва: Триада-Х, 1998.

6. Аруин Л.И., Кононов А.В., Мозговой С.И. Актуальные вопросы патологической анатомии. // Материалы III съезда Российского общества патологоанатомов. Самара. - 2009. - Т.1. - С.5-8.

7. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. М., 2003.

8. Довгаль С.Г. Методы лабораторной диагностики хеликобактериоза. // Акт. пробл. инф. патол. 1993. - Вып.1. — С.21.

9. Жебрун А.Б. Антигенность и связывание сывороточных белков клетками и экстрактами клеток X. пил ори // Акт. пробл. инф. патол. -1993.-Вып.1.-С.25.

10. Ю.Иваников И.О., Кудрявцева Л.В., Щербаков П.Л и др. Особенности эпидемиологии и профилактики пилорического хеликобактериоза. //

11. Мат. Науч.-практ. Конф, поев. 30-летию учебно-научного центра Медицинского центра Управления делами Президента РФ. М. - 1998.- С.63-64.

12. П.Ивашкин В. Т. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии // Мед. кафедра. 2005. - № 1. - С. 4-17

13. Ковальчук JI.B., Ганковская JI.B., Рубакова Э.И. Система цитокинов. -М., 2000.

14. Кононов А.В. Helicobacter pylori и воспаление: иллюзия решенных проблем. // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол., колопроктол. 2003. -Вып.З. - С.39-45.

15. Кононов А.В. Генетическая регуляция и фенотип воспаления при Helicobacter pylori-инфекции. // Архив патологии. 2009. - Вып.5. -С.57-63.

16. Кононов А.В. Местный иммунный ответ на инфекцию Helicobacter pylori. II Материалы 7-й сессии Российской группы по изучению Н.pylori. 1998. - С.14—19.

17. Кононов А.В. Местный иммунный ответ на инфекцию Helicobacter pylori. II Рос.журн.гастроэнтерол.гепатол.колопроктол. 1999. — Вып.2.- С.715-722

18. Копанев Ю.А., Соколов A.JI. Дисбактериоз кишечника: микробиологические, иммунологические и клинические аспекты микроэкологических нарушений у детей. М.: МНИИ педиатрии и детской хирургии., 2002.

19. Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Бабин В.Н. и др. Дисбактериоз кишечника. // Рос. мед. журнал. 1999. - Вып.З. - С.40-45.

20. Мордвинов В.А., Фурман Д.П. Цитокины: биологические свойства и регуляция экспрессии гена интерлейкина-5 человека.// Вестник ВОГиС. -2009. Том 13. - С.53-67.

21. Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. Т.1. М.: Мед. лит., 1999.

22. Пасечников В.Д., Чуков С.З. Значение геномной гетерогенности штаммов Helicobacter pylori в развитии ассоциированной патологии гастродуоденальной зоны. // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. — 2000. — Вып.З. — С.7-11.

23. Пиманов С.И. Эзофагит, гастрит и язвенная болезнь. Москва: Мед. кн., 2000.

24. Пиманов С.И., Макаренко Е.В. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori: рекомендации Консенсуса Маастрихт III и комментарии. Витебск, 2007.

25. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. — М: МедиаСфера., 2003.

26. Рожавин М.А. Патогенные свойства Campylobacter pylori. // Клин. мед. 1989. - Вып. 11. - С. 20-24.

27. Симбирцев А.С. Интерлейкин-8 и другие хемокины. // Иммунология -1999. Вып.4. — С.9-14.

28. Симбирцев А.С. Цитокины — новая система регуляции защитных реакций организма. // Цитокины и воспаление — 2002. — Вып.1. — С.9-16.

29. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции. // Цитокины и воспаление 2004. - Вып.З. - С.16-21.

30. Соколов Е.И., Глан П.В., Гришина Т.И. Клиническая иммунология. -М.: Медицина, 1998.

31. Усенко Д.В. Эффективность кисломолочного продукта, содержащего Lactobacillus casei DN-114 001, при Н. pylori-инфекции у детей. // Лечащий врач. 2007. - Вып.7. - С.89-90.

32. Ушкалова Е.А. Комбинированные пробиотики в гастроэнтерологии. // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2008. - Вып.2. — С.25-30.

33. Шкитин В.А., Шпирина А.И., Старовойтов Г.Н. Роль Helicobacter pylori в патологии человека. // Клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2002. - Том 2 - №2 - С. 128-145.

34. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999.

35. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии. // Иммунология. 1997. - Вып.5. - С.7-14.

36. Akamatsu Т., Tabata K., Hironga M., Kawakami H., Uyeda M. Transmission of Helicobacter pylori infection via flexible fiberoptic endoscopy. // Am. J. Infect. Control. 1996. - V.24. - P.396-401.

37. Akira S., Hemmi H. Recognition of pathogen-associated molecular patterns by TLR family. // Immunol. Lett. 2003. - V.85. - P.85-95.

38. Allaker R.P., Young K.A., Hardie J.M., Domizio P., Meadows N.J. Prevalence of Helicobacter pylori at oral and gastrointestinal sites in children: evidence for possible oral-to-oral transmission. // J. Med. Microbiol. 2002. - V.51. -P.312-317.

39. Appelmelk В .J., Faller G., Claeys D., Kirchner Т., Vandenbroucke-Grauls C.M J.E. Bugs on trial: the case of Helicobacter pylori and autoimmunity. // Trends Immunol. Today 1998. - V.19. - P.296-9.

40. Appelmelk B.J., Van D., van Vliet S.J. et al. Cutting edge: carbohydrate profiling identifies new pathogens that interact with dendritic cell-specific 1СAM-3-grabbing nonintegrin on dendritic cells. // J. Immunol. 2003. -V.170. — P.1635-1639.

41. Atherton J.C. H. pylori virulence factors. // Br. Med. Bull. 1998. - V.54. -P. 105-20.

42. Atherton J.C., Cao P., Peek R.M., et al. Mosaicism in vacuolating cytotoxin alleles of Helicobacter pylori. II J. Biol. Chem. 1995. - V. 270. - P. 1777117777.

43. Banatvala N., Mayo K., Megraud F., Jennings R., Deeks J.J., Feldman R.A. The cohort effect and Helicobacter pylori. II J. Infect. Dis. 1993. - V.168. - P.219-221.

44. Barreiro L.B., Neyrolles O., Babb C.L. et al. Promoter variation in the DC -SIGN encoding gene CD209 is associated with tuberculosis. // PLoS Med. -2006. V.3.-N.2. -P.l-6.

45. Bates E. E. et al. APCs express DCIR, a novel C-type lectin surface receptor containing an immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif. // J. Immunol. 1999. - V.163. - P.1973-1983.

46. Bik E.M., Eckburg P.B., Gill S.R. et.al. Molecular analysis of the bacterial microbiota in the human stomach. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2006. -V.103. — P.732-7.

47. Bizzozero G. Uber die Schlauchformen drazen des magendaimkanalis und die beziehungen ihres epithelis zu dem oberflachenepithel der shleimhaut. // Arch. Mikr. Anat. 1893. - V.42. - P.82-125.

48. Bjorkholm В., Zhukhovitsky V., Lofman C. et al. Helicobacter pylori Entry into human gastric epithelial ceeels: a potential determinant of virulence, persistence, and treatment failures. // Helicobacter — 2000. V.5. - P. 14854.

49. Blaser M.J., Parsonnet J. Parasitism by the "slow" bacterium Helicobacter pylori leads to altered gastric homeostasis and neoplasia. // J. Clin. Invest. -1994.-V.94.-P.4-8.

50. Bode G., Mauch F., Malfertheiner P. The coccoid forms of Helicobacter pylori. Criteria for their viability. // Epidemiol. Infect. 1993. - V.lll. -P.483- 490.

51. Brookes A.J. The essence of SNP. // Gene. 1999. - V.234. - P.177-186.

52. Brown L.M., Thomas T.L., Ma J.L., Chang Y.S., You W.C., Liu W.D., Zhang L., Gail M.H. Helicobacter pylori infection in rural China: exposure to domestic animals during childhood and adulthood. // Scand. J. Infect. Dis. 2001. - V.33. - P.686-691.

53. Brown L.M., Thomas T.L., Ma J.L., Chang Y.S., You W.C., Liu W.D., Zhang L., Pee D., Gail M.H. Helicobacter pylori infection in rural China: demographic, lifestyle and environmental factors. // Int. J. Epidemiol. -2002. V.31. - P.638-645.

54. Caux Ch., Liu Y-J., Banchereau J. Recent advances in the study of dendritic cells and follicular dendritic cells. // Immunol. Today. 1995. - V.16. - P.3-6.

55. Cellini L. Donelli G. Microbial Ecology in Health and Disease. // Microb. Ecol. Health. Dis. 2000. - Suppl.2. - P.259-262.

56. Cohen S., Fisher В., Yoshida Т., Bettigole R.E. Serum migration-inhibitory activity in patients with lymphoproliferative diseases. // N. Engl. J. Med. -1974. V.290. - P.882-886.

57. Colonna M., Samaridis J., Angman L. Molecular characterization of two novel C-type lectin-like receptors, one of which is selectively expressed in human dendritic cells. // Eur. J. Immunol. 2000. - V.30. - P.697-704.

58. Conti P., DiGioacchino M. MCP-1 and RANTES are mediators of acute and chronic inflammation. // Allergy asthma proc. 2001. - V.22. - P.133-7.

59. Crabtree J. Gastric mucosal inflammatory responses to Helicobacter pylori. II Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - V.10. - P.29-37.

60. Dicksved J., Lindberg M., Rosenquist M., Enroth H., Jansson J.K., Engstrand L. Molecular characterization of the stomach microbiota in patients with gastric cancer and in controls. // J. Med. Microbiol. 2009. -V.58. - P.509-516.

61. Dixon M., Genta R., Yardley J. et al. Classification and grading of gastritis. // Am. J. Surg. Pathol. 1996. - V.20. - P.1161-1181.

62. Dixon M.F. Histological responses to Helicobacter pylori infection: gastritis, atrophy and preneoplasia. // Baillieres Clin. Gastroenterol. 1995. - V.9. -N.3. - P.467-486.

63. Doenges J.L. Spirochaetes in the gastric glands of macacus resus and humans without definite history of related disease. // Proc. Soc. Exp. Med. Biol. 1938. - V.38. - P.536-538.

64. Donahue J.P., Peek R.M., van Doom L.J. et al. Analysis if iceAl transcription in Helicobacter pylori. II Helicobacter 2000. — V.5. - P.l-12.

65. Dowuer В., Seen N.X., Kalbor J. et al. Antibodi response to Campylobacter in an ethnic group lacing peptic ulceration. // Scand. J. Infect. Dis. 1988. -V.20. - P.63-68.

66. Dupont H.L., Homick R.B., Snyder M.J., Libonati J.P. et al. Immunity in Shigellosis. I. Response of man to attenuated strains of Shigella. // J. Infect. Dis. 1972. - V.125. - P.5-11.

67. Dzierzanovska-Fangra K., Lehours P. Diagnosis of Helicobacter pylori infection. // Helicobacter 2003. - V.l. - P.6-13.

68. Enroth H., Engstrand L. Immunomagnetic separation and PCR for detection of Helicobacter pylori in water and stool specimens. // J. Clin. Microbiol. -1995. V.33. - P.2162-2165.

69. Erickson K.L., Hubbard N.E. Probiotic immunomodulation in health and disease. // J. Nutr. 2000. - V.130. - P403-09.

70. Emst P.B., Gold B.D. The disease spectrum of Helicobacter pylori: the immunopathogenesis of gastroduodenal ulcer and gastric cancer. // Annu. Rev. Microbiol. 2000. - V.54. - P.615-640.

71. SO.Fainboim L., Chernavsky A., Paladino N. et al. Cytokines and chronic liver disease. II Cytokine Growth Factor Rev. 2007. - V.18. - P. 143-157.

72. Fan X.G., Yakoob J., Fan X.J., Keeling P.W. Enhanced T-helper 2 lymphocyte responses: immune mechanism of Helicobacter pylori infection. // Ir. J. Med. Sci. 1996. - V.165. - P.37-39.

73. Feldman R.A., Eccersley A.J.P., Hardie J.M. Epidemiology of Helicobacter pylori: acquisition, transmission, population prevalence and disease-to-infection ratio. // Brit. Med. Bull. 1998. - V.54. - P.39-53.

74. Ferguson D.A., Li С., Patel N.R., Mayberry W.R., Chi D.S., Thomas E. Isolation of Helicobacter pylori from saliva. // J. Clin. Microbiol. 1993. -V.31. - P.2802-2804.

75. Fiedorek S.C., Malaty H.M., Evans D.L., Pumphrey C.L., Casteel H.B., Evans D.J., Graham D.Y. Factors influencing the epidemiology of Helicobacter pylori infection in children. // Pediatrics 1991. - V.88. -P.578-582.

76. Figdor C.G., van Kooyk Y., Adema G.J. C-type lectin receptors on dendritic cells and Langerhans cells. // Nature Rev. Immunol. 2002. - V.2. - P.77-84.

77. Figura N. Are Helicobacter pylori differences important in the development of Helicobacter pylori-related diseases? // Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. -1997. V.29. - P.367-374.

78. Figura N. Determinants of pathogenicity of Helicobacter pylori. // J. Chemother. 1999. - V.l 1. - P.22.

79. Fitzerald O., Murhy P. Studies on the physiological chemistry and clinical significance of urease and urea with special reference to the stomach. // Ir. J. Med. Sci. 1954. - V.292. - P.99-153.

80. Flores-Villanueva P.O., Ruiz-Morales J.A., Song C.H. et al. A functional promoter polymorphism in monocyte chemoattractant protein-1 is associated with increased susceptibility to pulmonary tuberculosis. // J. Exp. Med. -2005. V.202. - P.1649-1658.

81. Flores-Villanueva P.O., Ruiz-Morales J.A., Song C.H. et al. A functional promoter polymorphism in monocyte chemoattractant protein-1 is associated with increased susceptibility to pulmonary tuberculosis. // J. Exp. Med. -2005. V.202. - P.1649-1658.

82. Fons M, Gomez A, Karjalainen T. Mechanisms of colonization and colonization resistance of the digestive tract. // Microbial Ecol. Health Dis. -2000. V.2. - P.240-246.

83. Fox J.G., Batchelder M., Marini R., Yan L., Handt L., Li X., Shames В., Hay ward A., Campbell J., Murphy J.C. Helicobacter pylori induced gastritis in the domestic cat. // Infect. Immun. 1995. - V.63. - Р.267Ф-2681.

84. Freedberg A.S., Barron L.E. The presence of spirochetes in human gastric mucosa. // Am. J. Dig. Dis. 1940. - V.7. - P.443-445.

85. Fu S., Ramanujam K.S., Wong A., Fantry G.T. et al. Increased expression and cellular localization of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase 2 in Helicobacter pylori gastrit. // Gastroenterology 1999. - V.116. -P.1319-1329.

86. Fung W.P., Papadimitriou J.M., Matz L.R. Endoscopic, histological and ultrasrtructural correlations in chronic gastritis. // Am. J. Gastroenterol. -1979. V.71. - P.269-279.

87. Geijtenbeek T.B.H. et al. Identification of DC-SIGN, a novel dendritic cell-specific ICAM-3 receptor that supports primary immune responses. // Cell -2000. V.100. - P.575-585.

88. Genta R.M. Review article: after gastritis—an imaginary journey into a Helicobacter-free world. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2002. - V.16. -P.89-94.

89. Giannella R.A., Broitman S.A., Zamcheck N. Salmonella enteritis. I. Role of reduced gastric secretion in pathogenesis. // Dig. Dis. 1971. - V.16. -P. 1000-6.

90. Goodvin C.S., Armstrong J.A., Chilvers T. Transfer of Campylobacter pylori and Campylobacter mustelae to Helicobacter gen.nov. as Helicobacter comb.nov., respectively. // Int. J. Syst. Bacterid. 1989. -V.39. - P.397.

91. Goodwin C.S., Armstrong J.A. Microbiological aspects of Helicobacter pylori (Campylobacter pylori). // Eur. J. Clin. Microbiol. -1990. V.9.-P.1-13.

92. Goodwin C.S., McCulloch R.K., Armstrong J.A., Wee S.H. Unusual cellular fatty acids and distinctive ultrastructure in a new spiral bacterium (Campylobacter pyloridis) from the human gastric mucosa. // J. Med. Microbiol. 1987. - V.19. - P.257-267.

93. Graham D.Y., Peura D.A. Helicobacter pylori: consensus reached: peptic ulcer disease is on the way to becoming an historic disease. // Am. J. Gastroenterol. 1994. - V.89. - P. 1137-1139.

94. Graham, D.Y., Malaty H.M., Evans D.G., Evans D.J., Klein P.D., Adam E. Epidemiology of Helicobacter pylori in an asymptomatic population in the United States. // Gastroenterology 1991. — V.100. -P.1495-1501.

95. Gruber D., Pohl D., Vavricka S., Stutz В., Fried M., Tutuian R. Swiss tertiary care center experience challenges the age-cohort effect in Helicobacter Pylori infection. // Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases 2008. - V.17. - P.373-377.

96. Hart D., Fabre J. Demonstration and characterization of la-positive dendritic cells in the interstitial connective tissues of rat heart and other tissues, but not brain. // J. Exp. Med. 1981. - V.154. - P.347-61.

97. Hazbon M.H., Alland D. Haiipin Primers for Simplified Single-Nucleotide Polymorphism Analysis of Mycobacterium tuberculosis and Other Organisms. // J. Clin. Microbiol. 2004. - V.42. - P.1236-1242.

98. Hegarty J.P., Dowd M.T., Baker K.H. Occurrence of Helicobacter pylori in surface water in the United States. // J. Appl. Microbiol. 1999. -V.87. - P.697-701.

99. Hemmi H. et al. A Toll-like receptor recognizes bacterial DNA. // Nature 2000. - V.408. - P.740-745.

100. Holton J., Vaira D., Menegatti M., Miglioli M. et al. Helicobacter pylori therapy advances and opportunities. - Milan: Mosby-Wolfe, 1998.

101. Hynes S.O., Broutet N., Wadstrom T. et al. Phenotypic variation of Helicobacter pylori isolates from geographically distinct regions detected by lectin typing. // J. Clin. Microbiol. 2002. - V.40. - P.227-232.

102. Janeway C.A., Medzhitov R. Innate immune recognition. // Annu. Rev. Immunol. 2002. - V.20. - P. 197-216.

103. Kabir S. Detection of Helicobacter pylori DNA in feces and saliva by polymerase chain reaction: a review. // Helicobacter 2004. - V.9. - P.l 15123.

104. Katoh M., Saito D., Noda Т., Yoshida S., Oguro Y., Yazaki Y., Sugimura Т., Terada M. Helicobacter pylori may be transmitted through gastrofiberscope even after manual hyamine washing. // Jpn. J. Cancer Res. 1993. - V.84. -P.117-119.

105. Keates S., Keates A.C., Warny M. et al. Differential Activation of MitogenActivated Protein Kinases in AGS Gastric Epithelial Cells by cag+ and cag- Helicobacter pylori. //J. Immunology 1999. - V.163. - P.5552-9.

106. Kersall В., Strober W. Distinct populations of dendritic cells are present in the subepithelial dome and T cell regions of the murine Peyer's patch. // J. Exp. Med. 1996. - V.183. - P.237-47.

107. Kirkland T.S., Viriyakosol S., Perez-Perez G.I., Blaser M.J. Helicobacter pylori lipopolisaccharide can activate 70Z/3 cells via CD14. // Infect. Immun. 1997. - V.65. - P.604-608.

108. Kirn J.S., Jung H.C., Kim J.M., Song I.S., Kim C.Y. Interleukin-8 expression by human neutrophils activated by Helicobacter pylori soluble proteins. // Scand. J. Gastroenterol. 1998. - V.33. - P.1249-1255.

109. Kivi M., Tindberg Y., Sorberg M., Casswall Т.Н., Befrits R., Hellstrom P.M., Bengtsson C., Engstrand L., Granstrom M. Concordance of Helicobacter pylori strains within families. // J. Clin. Microbiol. — 2003. -V.41. P.5604—5608.

110. Klein P.D., Graham D.Y., Gaillour A., Opekun A.R., Smith E.O. Water source as risk factor for Helicobacter pylori infection in Peruvian children. // Lancet 1991. - V.337. - P. 1503-1506.

111. Konturek P.C. Physiological, immunohistochemical and molecular aspects of gastric adaptation to stress, aspirin and to H. pylori-derived gastrotoxins. // J. Physiol. Pharmacol. 1997. - V.48. - P.3-42.

112. Kranzer К., Sollner, L., Aigner M. et al. Impact of Helicobacter pylori virulence factors and compounds on activation and maturation of human dendritic cells. // Infection and Immunity 2005. - V.73. - P .4180-4189.

113. Krienitz W. Ueber das auftreten von mageninhalt bei carcinoma ventriculi. // Dtsch. Med. Wochenschr. 1906. - V.22. - P.872.

114. Kruglyak L, Nickerson DA. Variation is the spice of life. // Nat. Genet. 2001. - V.27. - P.23^236.

115. Kuipers EJ. Helicobacter pylori, MALT lymphoma and gastric cancer. // J. Chemother. 1999. - V.ll. - P.25.

116. Kuipers E J. Review article: relationship between Helicobacter pylori, atrophic gastritis and gastric cancer. // Aliment. Pharmacol. Ther. 1998. -V.12. - P.25-36.

117. Kuipers E.J., Pena A.S., van Kamp G., Uyterlinde A.M., Pals G., Pels N.F., Kurz-Pohlmann E., Meuwissen S.G. Seroconversion for Helicobacter pylori. II Lancet 1993. - V.342. - P.328-331.

118. Kurose I., Granger D., Evans D.J. et al. Helicobacter pylorijinduced microvascular protein leakage in rats: role of neutrophils, mast cells, and platelets. // Gastroenterology 1994. - V.107. - P.70-9.

119. Kusters J.G., Gerrits M.M., Van Strijp J.A., Vandenbroucke- Grauls C.M. Coccoid forms of Helicobacter pylori are the morphologic manifestation of cell death. // Infect. Immun. 1997. - V.65. - P.3672-3679.

120. Laine L., Ahnen D., McClain C., Solcia E. Review article: potential gastrointestinal effects of long-term acid suppression with proton pump inhibitors. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2000. - V.14. - P.651-68.

121. Landi S., Gemignani F., Bottari F. et al. Polymorphisms within inflammatory genes and colorectal cancer. // J. Negat. Results Biomed. -2006. V.24. - P.l-15.

122. Latorra D., Campbell K., Wolter A., Hurley J. Enhanced allele-specific PCR discrimination in SNP genotyping using 3' locked nucleic acid (LNA) primers. // Human Mutation. 2003. - V.22. - P.79-85.

123. Lehours P., Yilmaz O. Epidemiology of Helicobacter pylori infection. // Helicobacter 2007. - V.12. - P. 1-3.

124. Leung W.K., Siu K.L., Kwok C.K., Chan S.Y., Sung R., Sung J.J. Isolation of Helicobacter pylori from vomitus in children and its implication in gastro-oral transmission. // Am. J. Gastroenterol. 1999. - Y.94. -P.2881- 2884.

125. Leunk R.D., Johnson P.T., David B.C. et al. Cytotoxic activity in broth-culture filtrates of Campylobacter pylori. II J. Med. Microbiol. 1988. - V.26. - P.93-99.

126. Luger A. Ueber spirochaeten und fusiforme bazillen im darm, mit einer beitrag zur frage der lamblien-enteritis. // Wiein. Klin. Wochenschr. -1917. V.52. - P. 1643-1647.

127. Maeda S., Mentis A.F. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection. // Helicobacter 2007. - V.12. - P. 1-14.

128. Makristathis A., Rokita E., Labigne A. et al. Highly significant role of Helicobacter pylori urease in phagocytosis and production of oxygenmetabolites by human granulocytes. // J. Infect. Dis. 1998. - V.177. -P.803-6.

129. Malaty H.M., Graham D.Y. Importance of childhood socioeconomic status on the current prevalence of Helicobacter pylori infection. // Gut. -1994. Y.35. - P.742-745.

130. Mannick E.E., Bravo L.E., Zarama G. et al. Inducible nitric oxide synthase, nitrotyrosine, and apoptosis in Helicobacter pylori gastritis: effect of antibiotics and antioxidants. // Cancer Res. 1996. - V.56. - P.3238-43.

131. Marshall B.J., Armstrong J.A., Francis G.J., Nokes N.T., Wee S.H. Antibacterial action of bismuth in relation to Campylobacter pyloridis colonization and gastritis. // Digestion 1987. - V.37. - P. 16-30.

132. Marshall B.J., Armstrong J.A., McGechie D.B., Glancy R.J. Attempt to fulfil Koch's postulates for pyloric Campylobacter. II Med. J. Austr. — 1985. V.142. - P.436-439.

133. Marshall B.J., McGechie D.B., Rogers P.A., Glancy R.J. Pyloric Campylobacter infection and gastroduodenal disease. // Med. J. Austr. -1985.-V.142.-P.439-444.

134. Marshall B.J., Warren J.R. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration. // Lancet 1984. - P.1311-1315.

135. Matteo M.J., Granados G., Perez C.V. et al. Helicobacter pylori cag pathogenicity island genotype diversity within the gastric niche of a single host. // J. Med. Microbiol. 2007. - V.56. - Р.66Ф-669.

136. Mendall М.А., Goggin P.M., Molineaux N. Levy J., Toosy Т., Strachan D., Northfield T.C. Childhood living conditions and Helicobacter pylori seropositivity in adult life. // Lancet 1992. - V.339. - P.896-897.

137. Michetti P. Lactobacilli for the management of Helicobacter pylori. // Nutrition 2001. - V.17. - P.268-269.

138. Miehlke S., Kirsch C., Agha-Amiri K. et al. The Helicobacter pylori vacA si, ml genotype and cagA is associated with gastric carcinoma in Germany. // Int. J. Cancer. 2000. - V.87. - P.322-327.

139. Misiewicz J.J., Tytgat G.N.J., Goodwin C.S. et al. The Sydney system: a new classification of gastritis // 9th Congress of Gastroenterology. Working party reports. Melbourne. 1990. - P. 1-10.

140. Mitchell H.M., Lee A., Carrick J. Increased incidence of Campylobacter pylori infection in gastroenterologists: further evidence to support person-to-person transmission. // Scand. J. Gastroenterol. 1989. -V.24. -P.396- 400.

141. Mobley H. The role of Helicobacter pylori urease in the pathogenesis of gastritis and peptic ulceration. // Alim. Pharmacol. Ther. 1996. - V.10. - P.57-64.

142. Moran A.P. The role of lipopolysacchande in Helicobacter pylory pathogenesis. // Aliment. Phatmacol. Ther. 1996. - V.10. - P.57-64.

143. Mori N., Ueda A., Geleziunas R. et al. Induction of monocyte chemoattractant protein 1 by Helicobacter pylori involves NF-kappaB. // Infect. Immun. 2001. - V.69. - N.3. - P.1280-1286.

144. Morris A., Nicolson G., Loud G. at al. Seroepidemiology of Campylobacter pylori II N. Z. Med. J. 1986. - V.99. - P.657-659.

145. Moss S.F., Calam J., Aganval B. et al. Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori. // Gut. 1996. - V.38. - P.498-501.

146. Murakami K., Fujioka Т., Kodama R. et al. Helicobacter pylori infection accelerates human gastric mucosal cell proliferation. // J. Gastroenterol. 1997. - V.32. - P.184-188.

147. Nalin D.R., Levine R.J., Levine M.M. et al. Cholera, non-vibrio cholera, and stomach acid. // Lancet 1978. - V.2. - P.856-859.

148. Neyrolles O., Gicquel В., Quintana-Murci L. Towards a crucial role for DC SIGN in tuberculosis and beyond. // Trends in Microbiology -2006. - V.14. - N.9. - P.383-387.

149. Nilius M., Strohle A., Bode G., Malfertheiner P. Coccoid like forms (elf) of Helicobacter pylori. Enzyme activity and antigenicity. // Int. J. Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis. 1993. - V.280. - P.259-272.

150. O'Toole P.W., Lane M.C., Porwollik S. Helicobacter pylori motility. // Microbes Infect. 2000. - V.2. - P. 1207-1214.

151. Oppenheim J., Feldman M. et al. Cytokine Reference. — London: Academic Press, 2000.

152. Palmer E.D. Investigation of the gastric mucosa spirochetes of the human. // Gastroenterol. 1954. - V.27. - P.218-220.

153. Parsonnet J. The incidence of Helicobacter pylori infection. // Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. - V.9. - P.45-51.

154. Parsonnet J., Blaser M.J., Perez-Perez G.I., Hargrett-Bean N., Tauxe R.V. Symptoms and risk factors of Helicobacter pylori infection in a cohort of epidemiologists. // Gastroenterology 1992. - V.102. - P.41-46.

155. Parsonnet J., Friedman G.D., Orentreich N., Vogelman H. Risk for gastric cancer in people with cagA positive or cagA negative Helicobacter pylori infection. // Gut. 1997. - V.40. - P.297-301.

156. Parsonnet J., Shmuely H., Haggerty T. Fecal and oral shedding of Helicobacter pylori from healthy infected adults. // JAMA. 1999. - V.282. — P.2240—2245.

157. Pavli P., Woodhams C., Doe W. at al. Isolation and characterization of antigen-presenting dendritic cells from the mouse intestinal lamina propria. // Immunol. 1990. - V.70. - P.40—7.

158. Peek P.M., Moss S.F., Tham K.T. et al. Helicobacter pylori cagA+ strains and dissociation of gastric epithelial cell proliferation from apoptosis. // J. Natl. Cancer Inst. 1997. - V.89. - P.863-8.

159. Peek R.M. Microbes and microbial toxins: paradigms for microbial-mucosal interactions. Helicobacter pylori strain-specific activation of signal transduction cascades related to gastric inflammation. // AJP-GI. 2001. -V.280. - P.525-30.

160. Perez-Perez G.I., Rothenbacher D., Brenner H. Epidemiology of Helicobacter pylori infection. // Helicobacter — 2004. V.9. - P. 1-6.

161. Perez-Perez G.I., Witkin S.S., Decker M.D., Blaser M.J.• Seroprevalence of Helicobacter pylori infection in couples. // J. Clin.

162. Microbiol. 1991. - V.29. - P.642-644.

163. Periti P., Tonelli F., Capurso L., Nicoletti P. Managing Helicobacter pylori infection in the new millennium: a review. // J. Chemother. 1999. -V.ll. - P.3-55.

164. Poms R.E., Tatini S.R. Survival of Helicobacter pylori in ready-to-eat foods at 4 degrees. // C. Int. J. Food Microbiol. 2001. - V.63. - P.281-286.

165. Pounder R.E., Ng D. The prevalence of Helicobacter pylori infection in different countries. // Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. - Y.9. - P.33-39.

166. Queralt N., Bartolome R., Araujo R. Detection of Helicobacter pylori DNA in human faeces and water with different levels of faecal pollution in the north-east of Spain. // J. Appl. Microbiol. 2005. - V.98. - P.889-895.

167. Radcliff F., Ramsay A., Lee A. Is a mixed Thl/Th2 response necessary for effective immunity against Helicobacter? // Gut. 1997. - V.41. - P.60.

168. Rautemaa R., Rautelin H., Puolakkainen P., et al. Survival of Helicobacter pylori from complement lysis by binding of GPI-anchored protectin (CD59). // Gastroenterology 2001. - V.120. - P.470-479.

169. Raymond J., Thiberg J.M., Chevalier C., Kalach N., Bergeret M., Labigne A., Dauga C. Genetic and transmission analysis of Helicobacter pylori strains within a family. // Emerg. Infect. Dis. — 2004. V.10. -P.1816-1821.

170. Remmele W. Magen in Pathologie, Bd2. // Berlin. 1984. - P.141-229.

171. Replogle M.L., Glaser S.L., Hiatt R.A., Parsonnet J. Biologic sex as a risk factor for Helicobacter pylori infection in healthy young adults. // Am. J. Epidemiol. 1995. - V.142. - P.856-863.

172. Ridge J., Fuchs E., Matzinger P. Neonatal Tolerance Revisited: Turning on Newborn T Cells with Dendritic Cells. // Science 1996. - V.271. - P.1723-6.

173. Rieder G., Einsiedl W., Hatz R.A. et al. Comparison of CXC chemokines ENA-78 and interleukin-8 expression in Helicobacter pylori-associated gastritis. // Infection and Immunity 2001. - V.69. - P.81-8.

174. Romani N., Schuler G. The immunologic properties of epidermal Langerhans cells as a part of the dendritic cell system. // Semin. Immunopathol. 1992. - V.13. - P.265-79.

175. Rovin В., Lu L., Saxena R. A novel polymorphism in the MCP-1 gene regulatory region that influences MCP-1 expression. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - V.259. - P.344-348.

176. Rowland M., Daly L., Vaughan M., Higgins A., Bourke В., Drumm B. Age-specific incidence of Helicobacter pylori. // Gastroenterology 2006. -V.130. — P.65-72.

177. Rugge M., Genta R.M. Staging and grading of chronic gastritis. // Human Pathology. 2005. - V.36. - P.228-33

178. Ryan E.J. et al. Dendritic cell-associated lectin-1: a novel dendritic cell-associated, C-type lectin-like molecule enhances T cell secretion of IL-4. // J. Immunol. 2002. - V.169. - P.5638-5648.

179. Sakuntabhai A., Turbpaiboon C., Casademont I. et al. A variant in the CD209 promoter is associated with severity of dengue disease. // Nat. Genet.- 2005. V.37. - N.5. - P.507-513.

180. Salomon H. Uber das spirillum des saugetiermages und sein verhalten zu den bellegzellen. // Zentrabl.fur Bakt. 1896. - V.19. - P.433-442.

181. Santana M.A., Rosenstein Y. What it takes to become an effector T cell: the process, the cells involved, and the mechanisms. // J. Cell Physiol. -2003. V.195. - P.392-401.

182. Savage D.C. Microbial ecology of gastrointestinal-tract. // Annu. Rev. Microbiol. 1977.- V.31. -P.107-133.

183. Schistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori. IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Lyon, 7-14 June 1994. // IARC Monogr. Eval. Carcinog. Risks Hum. 1994 - V.61. - P.l-241.

184. Schuler G., Steinman R. Murine epidermal Langerhans cells mature into potent immunostimulatory dendritic cells in vitro. // J. Exp. Med. -1985. V.161. - P.526-46.

185. Schwarz K. Ueber penetrierende Magen — und Jejunageschwure. // Beitr. Klin. Chir. 1910. - V.67. - P.96-128.

186. Scott D., Weeks D., Melchers K., Sachs G. The life and death of Helicobacter pylori. // Gut. 1998. - V.43. - P.56-60.

187. Sertl K., Takemura Т., Tschachler E. et al. Dendritic cells with antigen-presenting capability reside in airway epithelium, lung parenchyma and visceral pleura. // J. Exp. Med. 1986. - V.163. - P.436— 451.

188. Shimoyama Т., Crabtree J.E. Bacterial factors and immune pathogenesis in Helicobacter pylori infection. // Gut. 1998. - V.43. - P.2-5.

189. Shimoyama Т., Everett S.M., Dixon M.F. et al. Chemokine mRNA expression in gastric mucosa is associated with Helicobacter pylori cagA positivity and severity of gastritis. // J. Clin. Pathol. 1998. - V.51. - P.765-770.

190. Shindo К., Machida M., Fukumura M., Koide К., Yamazaki R. Omeprazole induces altered bile acid metabolism. // Gut. — 1998. V.42. -P.266-271.

191. Sidebothman R.L., Baron J.H. Hypothesis: Helicobacter pylori, urease, mucus, and gastric ulcer. // Lancet 1990. - V.27. - P. 193-195.

192. Solnick J.V., Schauer D.B. Emergence of diverse Helicobacter species in the pathogenesis of gastric and enterohepatic diseases. // Clin. Microbiol. Rev. 2001. - V.14. -P.59-97.

193. Steinmann R., Cohn Z. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. // J. Exp. Med. 1973. - V.137. - P.l 142-1162.

194. Steinmetz O.M., Panzer U., Harendza S. et al. No association of the -2518 MCP-1 A/G promoter polymorphism with incidence and clinical course of IgA nephropathy. // Nephrol. Dial. Transplant. 2004. - V.19. -P.596-601.

195. Stolte M., Kroher С., Meining A., et al. A comparison of Helicobacter pylori and H. heilmannii gastritis. A matched control study involving 404 patients. // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - V.32. - P.28-33.

196. Stratton C.W. Mechanisms of action for antimicrobial agents: general principles and mechanisms for selected classes of antibiotics. In: Lorian V. Antibiotics in Laboratory Medicine, fourth edition. Baltimore: Williams &Wilkins - 1996. - P.579-603.

197. Steinman R. The dendritic cell system and its role in immunogenicity. // Ann. Rev. Immunol. 1991. — V.9. - P.271-96.

198. Sung J.J.Y., Lin S.-R., Ching J.Y.L., Zhou L.-Y., To K.F., Wang R.-T. et al. Atrophy and intestinal metaplasia one year after cure of H. pylori infection: a Prospective, randomized study. // Gastroenterology 2000. -V.119. -P.7-14.

199. Suzuki N., Yamamoto K., Toyoshima S., Osawa Т., Irimura T. Molecular cloning and expression of cDNA encoding human macrophage C-type lectin. Its unique carbohydrate binding specificity for Tn antigen. // J. Immunol. 1996. - V.156. - P.128-135.

200. Taylor D.N., Parsonnet J. Epidemiology and natural history of H. pylori infections. In: Infections of the Gastrointestinal Tract, edited by Blaser M.J., Smith P.F., Ravdin J., Greenberg H., Guerrant R.L. New York: Raven., 1995.-P.551-564.

201. Thalmaier U.f, Lehn N., Pfeffer K. et. al. Role of tumor necrosis factor alpha in Helicobacter pylori gastritis in tumor necrosis factor receptor 1-deficience mice. // Infect. Immun. 2002. - V.31 - P.3149-3155.

202. Thanos D., Maniatis T. NF-kappa B: a lesson in family values. // Cell 1995. — V.80. - P.529-532.

203. Torres A., Perez-Perez G., Goreia Buey M., Pajares J. Immunological adhesion molecules on gastric mucosa. Does H. pylori, and specifically cagA+ strains influence its expression? // Gut. 1995. - V.37. - P.34.

204. Tytgat G.N. Endoscopic transmission of Helicobacter pylori. II Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. -V.9. - P. 105-10.

205. Ueno H., Klechevsky E., Morita R., Aspord С., Cao Т., Matsui Т., Di Pucchio Т., Connolly J., Fay J.W., Pascual V., Palucka A.K., Banchereau J. Dendritic cell subsets in health and disease. // Immunol Rev. 2007. -V.219. -P.l 18-42.

206. Underhill D.M., Ozinsky A. Toll-like receptors: key mediators of microbe detection. // Curr. Opin. Immunol. 2002. - V.14. - P. 103-110.

207. Vaara M., Vaara T. Polycations as outer membranedisorganizing agents. // Antimicrob. Agents Chemother. 1983. - V.24. - P. 114-22.

208. Valladeau J. et al. Immature human dendritic cells express asialoglycoprotein receptor isoforms for efficient receptor-mediated endocytosis. // J. Immunol. 2001. - V.167. - P.5767-5774.

209. Valladeau J. et al. Langerin, a novel C-type lectin specific to Langerhans cells, is an endocytic receptor that induces the formation of Birbeck granules. // Immunity. 2000. - V.12. - P.71-81.

210. Van den Brink G.R., ten Kate F.J., Ponsioen C.Y., Rive M.M., Tytgat G.N., van Deventer S.J., Peppelenbosch M.P. Expression and Activation of

211. NF-B in the Antrum of the Human Stomach. // J. Immunology 2000. -V.164. - P.3353-3359.

212. Van der Ende A., Rauws E.A.J., Feller M., Mulder C.J.J., Tytgat G.N.J., Dankert J. Heterogeneous Helicobacter pylori isolates from members of a family with a history of peptic ulcer disease. // Gastroenterology 1996. - V.l 11. - P.638-647.

213. Van Doom L.-J., Figueiredo C., Megraud F. et al. Geographic distribution of vacA allelic types of Helicobacter pylori. II Gastroenterology 1999. - V.l 16. - P.823-30.

214. Verdu E., Viani F., Armstrong D. et al. Effect of omeprazole on intragastric bacterial counts, nitrates, nitrites, and N-nitroso compounds. // Gut. 1994. - V.35. - P.455-60.

215. Watanabe N., Shimada Т., Ohtsuka et al. Proinflammatory cytokines and Helicobacter pylori stimulate CC-chemokine expression in gastric epithelial cells. // J. Physiol. Pharmacol. 1997. - V.48. - P.405-413.

216. Watanabe Т., Goto H., Arisawa T. et al. Local immune response in Helicobacter /ту/б>п-infected gastric mucosa: investigation of Яр-specific IgA in gastric juice. // Gut. 1997. - V.41. - P.62.

217. Weis W.I., Taylor M.E., Drickamer K. The C-type lectin superfamily in the immune system. // Immunol. Rev. 1998. - V.l63. - P. 19-34.

218. Willment J.A., Gordon S., Brown G.D. Characterization of the human p-glucan receptor and its alternatively spliced isoforms. // J. Biol. Chem. — 2001. V.276. - P.43818-43823.

219. Wirth H.P., Yang M., Peek R.M., Tham K.T., Blaser M.J. Helicobacter pylori Lewis expression is related to the host Lewis phenotype. // Gastroenterology 1997. - V.113. - P.1091-8.

220. Wirth H.P., Yang M.Q., Karita M., Blaser M.J. Expression of the human cell surface glycoconjugates Lewis X and Lewis Y by Helicobacter pylori isolates is related to cagA status. // Infect. Immun. 1996. - V.64. -P.4598^4605.

221. Xu J., Gordon J.I. Honor thy symbionts. // PNAS USA. 2003. -V.100. - P. 10452-10459.

222. Yamaoka, Y., Kita M., Kodama T. et. al. Expression of cytokine mRNA in gastric mucosa with Helicobacter pylori infection. // Scand. J. Gastroenterol. 1995. - V.30. - P.l 153-1159.

223. Yoshida N., Granger D.N., Evans D.J. et al. Mechanisms involved in Helicobacter pylori-induced inflammation. // Gastroenterology 1993. -V.105. - P. 1431-40.

224. Zambon C-F., Navaglia F., Basso D. et al. Helicobacter pylori babA2, cagA, and si vacA genes work synergistically in causing intestinal metaplasia. // J. Clin. Pathol. 2003. - V.56. - P.287-291.