Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Охратоксины и их действие на организм кур (цыплят-бройлеров)

Актуальность темы.Решения ХХУ1 съезда КПСС, майского и ноябрьского (1982 г.) Пленумов ЦК КПСС указывают на дальнейшую необходимость развития промышленного птицеводства, предусматривают значительный рост производства кормов, повышение их качества и рациональное использование.В общем комплексе проблем интенсификации производства мяса птицы большое значение имеют вопросы профилактики кормовых отравлений, приводящих к падежу значительного количества птицепоголовья, потерям продуктивности, затратам на лечение, чем наносится значительный экономический ущерб народному хозяйству.В связи с этим одной из актуальных проблем для ветеринарных специалистов является сокращение до минимума потерь от заболеваний, вызываемых микотоксинами - метаболитами некоторых видов микроскопических грибов, присутствующих в кормах для животных и птицы.Несмотря на то, что за последние годы проведены значительные исследования по изучению микотоксинов и микотоксикозов, многие вопросы, связанные с патогенезом микотоксикозов, остаются недостаточно раскрытыми. Наблюдается все еще значительное отставание от зарубежных стран в разработке методов аналитического определения микотоксинов в кормах и продуктах животноводства. Недостаточно полно изучены показатели предельно допустимых количеств микотоксинов в кормах для разного вида животных и птицы, метаболизм, выведение и накопление их в организме.Одними из открытых в последние годы микотоксинов являются охратоксины - метаболиты некоторых видов грибов родов Aspergillus и Peniclllium. - 4 За последние десять лет охратоксикозы зарегистрированы в таких странах как: США, Канада, Дания, Швеция, Голландия, Франция, Италия, Польша, Югославия, Ивдия и многих дрзггих, тогда как в СССР исследования в этой области до настоящего времени не проводились* Ряд исследователей установили грибы-продуценты охратоксинов, изучили чувствительность к ним разного вида животных и птицы. Исключительное большинство опытов по изучению действия охратоксинов на организм птицы проводилось на цыплятах-бройлерах первых трех недель жизни. Данных, определяющих характер физиологического действия охратоксинов на цыплят -бройлеров старше 4-х недель жизни, в доступной литературе не обнаружено. Однако возникновение микотоксикозов именно в этот период наиболее вероятно, так как птица старше четырех недель жизни, финишного периода откорма, начинает получать стабильный несменяемый рацион, партии которого могут подвергаться длительному хранению.Кроме того, исследования по изучению действия охратоксинов на организм птицы проводились в основном с одним из метаболитов охратоксинов - охратоксином А, в то время как действие охратоксинов В и С осталось малоизученным. Данные о действии смеси трех известных метаболитов охратоксинов (А, В и С) в доступной литературе отсутствуют, тогда как химико-токсикологическое исследование кормов и других биологических субстратов показывает присутствие смеси метаболитов охратоксинов, В литературе очень мало сведений о действии охратоксинов на гематологический, биохимический и иммунологический статус птицы, об адаптации организма к охратоксинам при длительном их поступлении в организм. Охратоксины, как и другие чужеродные соединения, подвергаются метаболизму и детоксикации в организме. На эти - 5 процессы большое влияние оказывают фон питания и особенности птицы, которые определяются ее породной и линейной принадлежностью.В связи с этим очень важньм является изучение действия охратоксинов на цыплят-бройлеров конкретного отечественного кросса, получавших комбикорма, характерные для используемых в нашей стране.Отсутствие этих данных не позволяет организовать действенный ветеринарно-санитарный контроль за качеством кормов, применяемых для кормления птицы в этот период, разработать методы прижизненной и посмертной диагностики, дать оценку иммунобиологического статуса организма птицы при охратоксикозе.Из сказанного следует, что изучение чувствительности цьшлятбройлеров старше четырех недель жизни к охратоксинам является актуальной задачей.Цель и задачи исследований. Изучить в динамике действие различных доз охратоксина А и смеси охратоксинов А, В, С на организм цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-6" старше четырех недель жизни с тем чтобы на основе полздюнных данных разработать методы диагностики охратоксикоэов птицы и предложить рекомендации по профилактике этого микотоксикоза.В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. Наработать необходимые для проведения опытов количества охратоксинов, провести их очистку,определить концентрацию.2. Воспроизвести охратоксикоз цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-6" на фоне типовых отечественных рационов, изучить клинические и патологоанатомические признаки охратоксикоэов.3. Изучить влияние охратоксина А и смеси охратоксинов А, В, С на показатели абсолютной и относительной массы внутренних органов.4. Изучить действие охратоксинов на гематологические показа- 6 тели и белковый состав сыворотки крови, 5» Изучить влияние охратоксинов на некоторые иммунологические показатели организма бройлеров.6, Определить величину ЛД-50 смеси охратоксинов А, В, С для цыплят-бройлеров четырехнедельного возраста.7. Разработать рекомендации по борьбе с охратоксикозами птицы.Научная новизна. Впервые в СССР на фоне структуры отечественных комбикормов воспроизведен охратоксикоз цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-6". Впервые изучены клинические симптомы при развитии экспериментального острого, подострого и хронического охратоксикозов, вызванных охратоксином А и смесью охратоксинов А, В, Спатологоанатомические изменения, влияние изучаемых микотоксинов на показатели абсолютной и относительной массы внутренних органов и состояние периферической крови цыплят-бройлеров. Изучены биохимические и иммунологические показатели организма цыплят при охратоксикозах, а также определена величина ЛД-50 смеси охратоксинов для цыплят-бройлеров четырехнедельного возраста.Практическая значимость. Разработан проект ^Тйетодических рекомендаций по борьбе с охратоксикозами птицы", в которых описаны клинические и патологоанатомические признаки охратоксикозов и обоснована необходимость определения в кормах не только концентрации охратоксина А, но и суммарной концентрации охратоксинов А ж с. Внедрение в производство разработанных рекомендаций позволит вести борьбу с охратоксикозами птицы, что будет способствовать повышению сохранения птицепоголовья.Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены: - на Всесоюзной научно-технической конференции по проблемам защиты кормов и продуктов животноводства от загрязнений токсичес- 7 кими веществами ( микология и микотоксикогология), Москва, 1980г.; - на Х1У Всесоюзной конференции молодых ученых и аспирантов Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени назгчно-исследовательского и технологического института птицеводства, Загорск, I98I г.; - на конференции Московского отделения Всесоюзного биохимического общества АН СССР, Москва, I98I г.; - на четвертой конференции молодых ученых Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного наздшо-контрольного института ветеринарных препаратов МСХ СССР, Москва, 1982 г.; - на межлабораторном совещании сотрудников ВНИИТЙП, Загорск, 1983 г.; - на межлабораторном совещании сотрудников ВНИИВС, Москва, 1984 г.По материалам диссертации опубликовано четыре работы, в которых отражены основные положения диссертации, Основные положения диссертации. Изучено действие охратоксинов на организм цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-б" при откорме с 28 до 49-дневного возраста (клинические симптомы, патологоанатомические изменения, состояние периферической крови, биохимические и иммунологические показатели) определена величина ЛД-50 смеси охратоксинов А, В, С для цыплят-бройлеров этого возраста,а также разработаны практические рекомендации по борьбе с охратоксикозами птицы.Структура и объем работы. Материалы диссертации изложены на 175 страницах машинописного текста, в том числе: введение-6 стр., обзор литературы - 28 стр., собственные исследования - 54 стр., обсуждения, выводы, практические предложения - 25 стр. Список - 8 использованной литературы содержит 118 отечественных и 164 иностранных работ. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами, 12 графиками и 3 рисунками.Настоящая диссертационная работа выполнена в лаборатории контроля и стандартизации биологически активных препаратов Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов МСХ СССР. Научный руководитель - доктор ветеринарных наук И.А.Курманов (ВНИИВС), консультант - кандидат биологических наук А.Н.Леонов (ВНШВС). n CI "п. 0БЗ(Р ЛИТЕРАТУРЫ 2«I» Микотоксикозы сельскохозяйственных животных и птиц Микотоксикозы - группа незаразных болезней животных и птицы, возникающих при поедании кормов, пораженных токсинообразующими 14икроскопическими грибами, Работами советских ученых /Н,А*Спесивцева, 1946 - 1975; А.Х.Саркисов, 1944-I97I; В.И^Билай и Н.М.Пидопличко, 1948-1977; Х.А.Джилавян , I960-1970; А,И.Курманов, I960-I97I; А.М.Ахметвли, 1973, 1975, и др./ внесен значительный вклад в изучение микотоксикозов животных и человека и разработку мер их профилактики.Несмотря на это проблема микотоксикозов не только не утратила, а наоборот, в связи с переходом животноводства на промышленную основу, приобрела актуальное значение.В настоящее время обнаружено и описано более ста микотоксинов» Для многих из них установлена структура, определены основные свойства, механизм действия и разработаны методы определения в кормах и других биологических субстратах, Перечень обнаруженных микотоксинов нельзя считать исчерпанным, так как появляется все больше сообщений о роли микроскопических грибов в отравлениях животных и птиц в различных зонах мира.Группа трихоцетеновых микотоксинов включает около 60 структурно-родственных биологически активных соединений, вырабатываемых грибами рода Dendrodochium, Myrothecium, Trichoderma, Stachybotrys / G.I.Szathmary et. al., 1976/.Продуцентами трихоцетеновых микотоксинов из рода Fusarium являются грибы F.tricinctum, F. graminearum, F. solani, F. nivale, F.sporotrichieiia, F.poae, вырабатывающие ТОКСИНЫ; Т-2 токсин, диацетоксисцирпенол, фузаренон X, ниваленол, дезоксиниваленол (вомитоксин) и др. /В.В.Ермаков с соавт., 1978; c.J.Mirocha et, al., 1976; T.Baglioni et. al., 1977; H.Schweighardt et. al., I98I/.Шузариотоксины широко распространены в кормах и служат причиной многих алиментарных микотоксикозов животных. Спектр их патогенного действия обширен и проявляется в некрозах слизистых оболочек и кожи, эстрогенном, тератогенном и канцерогенном действии, нарушении гемопоэза, снижении естественной резистентности организма /И.А.Курманов, I97I; И.Е.Губин, 1974; Н.А.Кстюнина, 1976; В.И.Билай, 1977; В.А.Труфанова, 1980; И.С.Елистратов и др., I98I; Г.Е.Колыванова, I98I; G.A.Weaver, 1978; D.Veseiy, 1979; J.Bauer, 1980; T.Yoshizawa, 1980; H.Kriegleder, I98I/.Первые сообщения о токсикозе, вызываемом грибами рода Fusarium, появились в России в конце прошлого столетия /Н.А.Паль- II чевский, 1882/ в связи с употреблением в пищу так называемого "пьяного хлеба". Было выяснено, что причиной отравления является зерно, зараженное грибом F. graminearum. Заболевание характеризовалось поражением нервной системы и высокой смертностью.Еще один представитель рода Fusariuu - гриб F, sporotrichieiia, вырабатывает токсин, вызывающий у людей заболевание, известное под названием алиментарно-токсической алейкии (АТА).Аналогичное заболевание вызывает токсин гриба р. tricinctum, называемый Т-2 токсином.Среди работ, посвященных выяснению этиологии и изучению клинических признаков при этих микотоксикозах, следует назвать публикации И.А.Курманова /I960, 1968, I97I, 1980/, В.И.Билай /1977, 1978/, Х.А.Дйсилавяна /I98I/, И.С.Елистратова и В.Л.Беспалова /I98I/, B.Lacza et.ai., /1977/. По данным этих авторов, токсин Т-2 вызывает у животных резкое снижение продуктивности, нарушение гемопоэза, аборты, обладает выраженным эмбриотоксическим действием.Токсические метаболиты гриба Dendrodochium toxlcum в состав которых входят роридин А и веррукарин А, относящиеся к трихоцетеновым микотоксинам, вызывают дендрохиотоксикозы.Отмечено, что дендрохиотоксины обладают высокой токсичностью для животных. Болезнь протекает остро, наблюдается вялость, сонливость, гипотония органов пищеварения, отсутствует аппетит, пульс частый, слабые колики, на языке серый налет, обильное слюнотечение. У овец болезнь проявляется отсутствием аппетита, жвачки, гипотонией рубца /й.А.Курманов, I960; А.И.Молочнова, 1970; М.И.Саликов и др., 1970/. то СтаХИбОТрИОТОКСИН, продуцируемый грибом Stachybotrys a l ternans , МОЖНО отнести К одному из первых открытых микотоксинов. Впервые картина заболевания у лошадей, вызываемая этим грибом, была описана в Венгрии K,Jarmai в 1929 г. Однако автор не смог установить этиологии заболевания. П.Д.Ятелем в 1938 г» была открыта причина заболевания - токсическая форма гриба stachybot« rys aitemans , вызвавшая массовые отравления лошадей в УССР /Б.Е»Айзенман и Д»Г.Кудлай, 1978/.Следует отметить, что при изучении этиологии стахиботриотоксикоза, дендродохиотоксикоза и при выявлении этиологического значения представителей рода Fusarium в заболевании людей ад.иментарно-токсической алейкией, впервые в мире большим коллективом ученых было проведено комплексное исследование алиментарных микотоксикозов /Ф.М.Пономаренко, К.И.Вертинский, А.Х.Саркисов, С М .Бакай и др*, 1938- 1944/.Вторая группа токсинов, образуемая грибами этого рода, отто носится К клавиновым производным. Продуцент этой группы токсинов гриб GiavicepB paspaii • Отравление, обусловленное метаболитом этого гриба, носит название "клавицепстоксикоз" /Н.А,Спесивцева, 1945; C.J.Mirocha et.al., 1974; J.C.Jong, 1979 /, Грибы Myrothecium verrucarium вырабатывают ТОКСИН веррукарин И вызывают заболевание миротециотоксикоз, протекающее с отеком легких и диареей /Т«И.Жаркова, 1976/. Грибы Pithomyces chartarum вырабатывают ТОКСИН спородесмин, относящийся к классу пиперазинов и вызывающий фациальную экзему - питомицестоксикоз / N.R.Towers, 1978 /• Известны также токсические свойства грибов рода Aiternaria, вырабатывающих токсичную тенуазоновую кислоту / J.J.Giambrone et.al., 1978 /.Наибольший интерес с точки зрения токсинообразования представляют грибы, относящиеся к роду Aspergillus и Penicillium, которые Являются космополитами среди микроскопических грибов и способны развиваться на растительных субстратах, зерне и кормосмесях при весьма широких температзфных и влажностных параметрах /Н.А.Спесивцева, 1964; Д.Н.Пустокашина и др., 1974; Л.В.Кравченко, 1978; G.Velinsky, 1979 /.Следует отметить, что клинические признаки отравлений метаболитами грибов родов Aspergillus и Penicillium неспецифичны И в большинстве случаев характеризуются нарушением функции печени И почек /И.А.Курманов, 1969; И.С.Елистратов, 1974; М.А.Ахметели, 1975; Н.В.Демидова и И.Х.Долторнязов, 1975; p.Krogh, 1979/.Афлатоксины считаются одними из самых сильных известных в настоящее время канцерогенных веществ. Они подавляют синтез - 15 РНК, ДНК и белков в печени, извращают метаболизм клеток, что является основой их канцерогенного и тератогенного действия /А,А. Покровский и др., 1973; А.М.Ахметели, 1975/, поражают систему кроветворения, приводя к тромбоцитопении, лейкопении и анемии, нарушают функцию печени, снижают естественную резистентность организма, отрицательно влияют на обмен веществ /Л.В.Кравченко, 1978; G.-F.Chang et.al., 1979; J.D.Clark et.al., 1980; J.A.Doerr et.al., 1980; G.M.Lanza et.al., 1980; M.O.Tapia et.al., 1980 /.Еще одним представителем группы микотоксинов, производных кумарина, является токсин стеригматоцистин, вырабатываемый грибами А. versicolor И А. niduians, который так же как И афлатоксины, вызывает некрозы печени /Н.В.Волков, 1980; G.Fogiiani et.al., 1979 /.Третий представитель группы производных кумарина - охратоксин, продуцируемый как грибами рода Aspergillus, так и грибами рода Penicillium.Открытие у представителей родов Aspergillus и Penicill ium способности продуцировать идентичные токсины, объединило в микотоксикологическом отношении эти два рода.Токсины микроскопических грибов могут обладать антибиотическими свойствами, однако граница мевду антибиотическими и микотоксическими свойствами чисто условна и многие антибиотики плесневых грибов токсичны для животных /Ю.И.Рубинштейн, I95I; З.Э. Многие из перечисленных видов грибов наряду с основными ток- 16 сипами и антибиотиками продуцируют ред токсичных кислот /В.И.Билай, 1970/.Необходимо также учитывать, что микотоксины, обладающие канцерогенным, тератогенным и мутагенным действием, представляют большую социальную опасность, угрожая здоровью человека / M.Ruggiero et.al., 1980; R.C.Patten, I98I /. - 17 2»2, Охратоксикозы сельскохозяйственных животных и птиц История юпроса и открытия, Охратоксины представляют собой родственную в химическом отношении группу токсических метаболитов некоторых видов грибов родов Aspergillus И Penicillium • Проблема охратоксикозов возникла в 1965 г,, когда была обнаружена И описана особая группа токсических веществ, ввделяемых некоторыми штаммами грибов рода Aspergillus ochraceus Wilh. / de B.Scott, 1965 /, от ВИДОВОГО названия которого охратоксины получили свое наименование» Однако следует отметить, что еще в 1962 г, G.M.christinsen , изолировав ИЗ хранящегося зерна грибы Aspergillus ochraceus » показал, ЧТО культура грибов обладает токсичными свойствами. K.J.Merve et.al. /1965/, P.S.Steyn et.al. /1967/ ввделили чистые культуры штаммов, продуцирующих токсин, провели его химическое исследование, в результате которого вщелили три метаболита охратоксинов - А,В,С и дали их структурную характеристику, Известен неидентифицированный полностью охратоксин Д / P.M.scott et.al., I97I /.Физико-химические свойства охратоксинов. По своей химической структуре охратоксины являются дериватами дегидроизокумарина, связанные пептидно через 7-карбоксигруппу с ь-фенилаланином.Охратоксин А представляет собой 7-карбокси-5-хлор-8-гидрокси3,4-дегидро-З-метил-изокумарин, связанный пептидной связью с ь-фенилаланином, Охратоксин В - дехлороформат охратоксина А, где атом хлора в фенольном кольце замещен на атом водорода. Охратоксин С является этиловым эфиром .охратоксина А (рис. I).18 Рисунок I .Структурная торг.1ула охратоксинов • COOR О -CHrCH-NH-C Охратоксин А: Е=Н; Rj=C^ Охратоксин В: R=H; Rj=H Охратоксин С: R=C2%> \=^^ - 19 Высокая токсичность охратоксинов обусловлена, вероятно, способностью фенольного гидроксила в дегидроизокумариновом кольце к диссоциации / K.J.Merve et.al., 1965 /.Охратоксины чувствительны к действию света, но когда они присутствуют в пораженном субстрате, свет на них действует слабо / H.L.Pitout, 1969 /.Из трех представителей охратоксинов наибольшей токсичностью обладает охратоксин А» Охратоксин С менее токсичен, чем охратоксин А, а охратоксин В считается малотоксичным соединением, не играющим решающей роли в отравлениях / P.s.steyn et.al., 1967; R.C.Doster et.al., 1975 /.На долю охратоксина А приходится около Ь0$ общего количества охратоксинов в контаминированном зерне /p.s.steyn et.al., 1967 /.1970; I.C.Mxmrc et.al., 1973; B.B.Lillehoj et.al., 1980 /• Ha естественных субстратах наибольшее количество охратоксинов ВЩеЛЯЛИ из пшеницы и риса /A.F.Schindler et.al., 1970; F.-S. Chu et.al., 1970 /.Охратоксины были ввделены также из жидких субстратов, в частности яблочного сока при его порче / F.Senser et.al., 1967 /.Влияние температуры и влажности субстрата на рост продуцента и образование охратоксина А для различных штаммов трех видов грибов - А.ochraceus, Р.cyclopium, P.viridicatum изучали C.W.Bacon et.al. /1973/, I.Harwig et.al. /1974/, M.P.Northolt et.al. /1979/.При культивировании охратоксикогенных штаммов на полусинтетических питательных средах, наилучшей оказалась среда с добавлением А% сахарозы и Z% дрожжевого экстракта. Охратоксин В образовывался только при увеличении содержания сахарозы свыше 8^ и был значительным при 16-32% / N.D.Davis et. al., 1969 /.Не менее существенное значение имеет и углеводный состав среды. Наибольших выход охратоксина А достигался путем выращивания гриба Asp.ochraceus wiih. В течение 10-14 дней на среде с мальтозой. Эффективность добавления других углеводов убывала в последовательности: мальтоза-сахароза-глюкоза-фруктоза-лактоза / G.Engel, 1976 /.Существенное влияние на синтез охратоксина А на синтетических питательных средах имеет источник азота. Так, органический источник азота давал больший выход охратоксина, чем неорганический. Из органических источников лучший - L-глютаминовая кислота, худший - фенилаланил и аргинин. Из неорганических источников лучший - аммония нитрат и аммония ацетат / J.M.Moore, I97i /.Многими из упомянутых авторов не отмечено корреляционной связи между интенсивностью роста гриба-продуцента и количеством синтезируемого охратоксина / C.W.Hesseltine et.al., 1972 /.По данным p.Krogh /1973/, в пробах овса и ячменя естественные концентрации охратоксина А достигали 27 500 мкг/кг» В результате исследования комбикормов, проведенных в Советском Союзе в течение 1975-1980 гг, Н.В.Волков, З.И.Пилипец и Л.И.Погребняк обнаружили охратоксиногенные штаммы микроскопических грибов.А.Н.Леонов и О.В.Чижова /1977/ выборочно проверяли десятидневные культуры гриба p.viridicatmn West. , ввделенные из урожая ржи 1976 г. основных хлебопроизводящих районов Поволжья. Некоторые из проверенных изолятов образовывали охратоксин А. H.Giadoch /1973/ ИЗ 2590 образцов кормов, комбикормов и кормосмесей в 21-24^ случаев обнаружила их загрязненность грибами родов Penicillium В 38-42^ - Aspergillus • В ЧИСЛе ВВДеленных микотоксинов был обнаружен и охратоксин А. Отсутствие в нашей стране до 1980 г, доступной методики определения охратоксинов в кормах не позволяло с должной широтой проводить микотоксикологический анализ кормов, однако, при микологическом анализе было показано, что обсеменение кормов и других биологических субстратов микроскопическими грибами, потенциальнышл продуцентами охратоксинов, регистрируются во всех областях СССР /В.И.Билай, Н.М.Пидопличко, 1970; Н.Харченко и др., 1979; - 24 Е.П.Кремлев, 1980/.Точных статистических данных о случаях спонтанного отравления охратоксинами накоплено недостаточно, однако имеющиеся косвенные данные указывают на то, что эти отправления имели место / P.B.Hamilton, 1975 /• Остаточныв количества охратоксинов в органах и тканях животных с признаками токсической нефропатии находили многие исследователи / S.Gatenbeck et.al., 1977; L.Rutqvist et.al., 1977; 1978; K.Hult et.al., 1979; P.Krogh, 1979 /,4T0 указывает на потребление корма, содержащего охратоксины.Влияние охратоксинов на организм животных и человека остается недостаточно изученным, однако некоторые авторы считают, - 25 что охратоксины играют определенную роль в патогенезе некоторых заболеваний, этиология которых до сих пор не раскрыта /А.М.Ахметели, 1975; P.K.S.Austwick, 1975; P.Krogh et.al., 1977; P,Krogh, 1980/.Клинические симптомы охратоксикозов. Острое течение охратоксикоза А у птицы отличается быстрым развитием симптомов и высокой смертностью / I.C.Peckham et.al., I97I; E,Creppy et. al., 1979/.Изучение острой токсичности охратоксина А у трехнедельных цыплят-бройлеров показывает, что через шесть часов после введения разовой оральной дозы 16 мг/кг массы у цыплят появляется вялость, беспорядочность движений, диарея. Несколько часов спустя начинается атаксия, птица принимает сидячее положение. Через 18 часов отмечается потеря рефлексов, последующая мелкая дрожь мышц ног или прострация. Смерть наступала через 22-25 часов / w.E. Huff et.al., 1974 /.Из данных табл. 3 следует, что чувствительность птицы к охратоксинам зависит от ее породы и возраста. Взрослые цыплята менее чувствительны к охратоксину А, чем однодневные. Породная принадлежность птицы также влияет на величину ЛД-50 охратоксинов.При введении в воздушную камеру 5-дневным куриным эмбрионам 50 мкг охратоксина А, 80^ их погибало через 48 и 100^ - через 96 часов. Средняя летальная доза через 48 часов (ЛД-50) составила 16,96 МКГ/ЯЙЦО / M.Yomasaki et.al., I97I /.Наиболее заметно у птиц, получавших с кормом охратоксин А, угнетение, сухость и геморрагии слизистой оболочки глотки, висцеральная подагра, белые хлопьевидные шелушения в уретре, почках и перикарде / М^С.РгЮг et.ai., 1978 /.У перепелок охратоксин А вызывал отставание в росте, вялость и снижение продуктивности / R.c.Doster, 1973 /.Проведенные исследования показывают, что клинические признаки охратоксикоза А неспецифичны и характеризуются проявлениями, сходными при многих микотоксикозах.Изменения со стороны желудочно-кишечного тракта у животных, получавших охратоксин А, характеризовались энтеритами, некротическими изменениями слизистой толстого отдела кишечника, увеличением проницаемости его стенок. У поросят наблюдали отек в брыжеечных лимфоузлах / G.M.Szczech et.al., 1973; M.F.Warren rt.al,, 1980/.У трехнедельных цыплят-бройлеров,получавших с первого дня жизни охратоксин А, изменения внутренних органов характеризовались увеличением относительной массы зоба, железистого и мускульного желудка, почек, печени и уменьшением относительной массы фабрициевой сумки / W.E.Huff et.al., 1974 /. T.Bafiioni /1977/ наблвдал набухание митохондрий, зернистость и уменьшение эндоплазматической сети в печени у уток и пролиферацию желчных протоков у крыс.Микроскопические изменения у поросят включали острый нефроз, гепатовакуолизацию или некроз, подавление гемопоэза в костном мозге и выход лимфоидных элементов из селезенки. В начальной стадии охратоксикоза А отмечали дистрофические изменения проксимальных канальцев почек, десквамацию эпителия, интерстициальный фиброз. Затем развивалась атрофия канальцев, утолщение основной мембраны, гиалинизация отдельных канальцев почек / P.Krogh, P.EIling, I97I, 1977 /. G.M.Szczech et.al. /1973, 1978/ у поросят, собак и крыс описали некроз и набухание эпителиальных канальцев почек* Таким образом, показана чувствительность к охратоксинам почти всех видов сельскохозяйственных животных и птиц, рыб, человека. Проведенные исследования показывают, что патологоанатомические изменения при охратоксикозе А выражаются признаками, общими для многих токсикозов, в том числе и микотоксикозов. - 29 Основные патологоанатомические изменения обнаруживаются в печени и почках.Влияние охратоксинов на иммунитет животных и птицы изучено слабо. В работе м.о.Prior et. ai./1979/ описано значительное снижение титра циркулирующих антител на соответствующий антиген у мышей, получавших охратоксин А внутрибрюшинно в течение 50 дней до 5 мкг/кг массы. При этом число клеток, образующих антитела, в селезенке не изменялось.Еще одна работа по изучению иммунитета при охратоксикозе А, выполнена c.-F.chang et.ai. /I98I/, которые наблюдали снижение фагоцитарной активности и фагоцитарного индекса у цыплят, получавших от 4 до 8 мкг/г охратоксина А с кормом. При этих дозах отмечается также снижение активности гетерофилов, не связанное с циркулирующими факторами, а вероятно, вызванное дефектов самих гетерофилов,так как бактерицидная активность крови сохранялась.Результаты этих работ дают основание предполагать, что иммунодепрессивное действие охратоксина А связано с угнетением функции как фабрициевой сумки, так и тимуса.Биохимические показатели при охратоксикозах. р. Krogh /1980/ обращает внимание на тот факт, что охратоксин А являеется ингибитором синтеза РНК и белка. Аналогичные данные приводят M.G. Prior et.ai. /1979/, которые кроме того обнаружили достоверное снижение активности лактатдегидрогеназы и глутаматдегидрогеназы в культуре клеток. Причем подавление синтеза ферментов зависело от длительности действия токсина.В ТО же время у мышей, получавших внутрибрюшинно охратоксин А в дозе 5 мг/кг массы один раз в неделю в течение шести недель, число лейкоцитов увеличивалось вдвое за счет лимфоцитов, Количество моноцитов, нейтрофилов и базофилов снижалось. Уменьшалось также количество эритроцитов и гемоглобина /A.M.Gupta et. al., 1979 /. - 32 По данным D.S.Pettersson /I98I/, у телят при отсутствии клинических признаков наблюдается снижение количества лейкоцитов.При хроническом охратоксикозе А у индюшат с.F. Chang et.ai. /I98I/ отметили уменьшение количества лейкоцитов за счет лимфоцитов и нейтрофилов. G.M.Szczech et.ai. /1978/ при спонтанном охратоксикозе А у человека наблюдали алейкию.Влияние охратоксинов на половую систему животных и птиц, Действие охратоксинов на половую систему крыс-самцов выражается расширением семявыводящих канальцев центральных отделов семенников с накоплением жидкости в их просвете. Отмечены также некротические изменения придатков семенников и цитолиз эпителия семенных канальцев / J.M6re et.ai,, 1979 /.По данны1л M.A.Gupta et.ai. /1980/, доза охратоксина А 5 мг/кг массы у крыс-самок вызвала задержку полового цикла в фазе диэструса. В яичниках увеличивалось содержание аскорбиновой кислоты и холестерина на фоне резкого уменьшения активности глюко-б-фосфат-дегидрогеназы, что свидетельствует об угнетении стероцдогенеза.У кур-несушек диета с охратоксином А вызвала уменьшение яйценоскости и снижение массы яйца, тогда как на выводимость и оплодотворяемость влияния не оказала / M.G.Prior et.ai. ,1978/.Напротив, c.Corteliezzi /1978/ считает, что охратоксин А - саглый сильный токсин для птицы. Доза 1ч/млн.частей комбикорма задерживает половое созревание, а доза 2 и 3 ч/млн. вызывает снижение оплодотворяемости и выводимости, а цыплята первых трех недель жизни бывают ослабленными.По данным L.Rutqvist et.al. /1978/ у свиней охратоксин А накапливается в почках и печени. Содержание охратоксина А в почках свиней составляло от 32 до 104 ми/кг, У кур-несушек остаточные количества охратоксина А M.G.Prior et.al. /1978/ находили в печени, почках и мышцах, В жире и коже охратоксин не обнаруживали* При однократном введении козе охратоксина А в течение 7 дней Ы% токсина выводилось с мочой, 38^ - с калом, Ь% - обнаруживалось в молоке, 2,26^ - в крови. Через шесть часов после введения в печени и почках регистрировалось 1,5 и 0,5^ соответственно - 34 введенного количества охратоксина. Исследованием тонкослойной хроматографией соединений, выведенных с мочой и калом, установлено, что основная часть токсина соединена с двумя неидентифицированными метаболитами охратоксина А / K,Nip wei et.ai., I979 /.Аналогичные данные получили Р. Gal tier et.ai. /1979/ у крыс, когда после разового перорального введения охратоксина А основная его часть выводилась с мочой и калом в течение десяти дней» Охратоксин А не выводился с выдыхаемым воздухом, В моче было обнаружено пять неидентифицированных метаболитов охратоксина А. В почках жирных свиней с признаками нефропатии содержание охратоксина А варьировало от 10 до 68 мкг/кг. В мышечной и жировой ткани, исходя из концентрации охратоксина А в почках, его содержание колебалось от 29,3 до 20,3 мкг/кг от 2,0 до 47,5 мкг/кг ткани соответственно / P.Kfogh, i977 /.Период полувыведения из плазмы у крыс составил 57,75 и 53,31 часа, в зависимости от способа введения - перорального или внутривенного» После перорального введения пик концентрации охратоксина А в плазме крови достигался через один час / p.Gaitier et.al., 1979 /.Для накопления в жире свиней 2,51 мкг/кг охратоксина А, требуется содержание его в кормах в концентрации 0,0099 г/кг. Такой же уровень содержания охратоксина А в кормах дает содержание его в печени 0,35 мкг/г / K.Huit et.al., I980 /.Токсичность охратоксинов увеличивается под воздействием стресс-факторов / w.E.Huff et.al,, 1975/, а также отметки синергизм действия других токсинов / E.R.Rati et.al., I98I /. у цыплят, получавших одновременно охратоксин А и афлатоксин, значительно возрастает смертность, снижается масса тела, увеличивается масса почек. При этом не обнаружено синергизма действия этих токсинов на селезенку, поджелудочную железу, железистый желудок и фабрициеву сумку / w.E.Huff et.al., 1981 /.Заключение по обзору литературы» Анализ представленных литературных данных свидетельствует об актуальности изучения биологического действия микотоксинов,в том числе и охратоксинов, на организм птицы, В настоящее время идентифицированы три метаболита охратоксинов, установлена их химическая структура, обнаружена способность к охратоксинообразованию более чем у 17 видов родов Aspergillus и Peniciiiium , достаточно ПОЛНО изучены условия токсинообразования, накоплены данные о наличии охратоксинов в кормах и других биологических субстратах, разработаны методы химико-аналитического определения охратоксинов, установлена чувствитель- 36 ность к ним разного вида животных и птицы, Ьлесте с тем, изучение биологического действия охратоксинов проводилось с одним из метаболитов - охратоксином А. Токсикобиологический эффект охратоксинов В и С остался мало изученным, хотя величина ЛД-50 охратоксина А незначительно превышает величину ЛД-50 охратоксина С, а исследование кормов показывает, что на долю охратоксинов В и С приходится до 50^ общего содержания охратоксинов» Данные о токсичности смеси охратоксинов А, В, С, присутствующей в контаминированных кормах в том или ином соотношении, отсутствзшт, несмотря на то, что смесь охратоксинов обусловливает случаи спонтанных охратоксикозов.В настоящее время накоплен большой статистический материал, позволяющий судить о параметрах токсичности охратоксина А для цыплят-бройлеров первых трех недель жизни, однако данные, определяющие характер токсичного действия охратоксинов при поступлении в организм птицы старше четырех недель жизни - отсутствуют, хотя токсичность охратоксинов для цыплят этого возраста может быть ниже, чем для цыплят первых трех недель жизни и было бы нерационально не использовать финишные комбикорма на основании параметров токсичности, определенных для цыплят стартового периода откорма.Имеющиеся работы свидетельствуют о том, что охратоксин А обладает широким спектром патологического воздействия на организм птицы» Показаны нарушения обмена, гемопоэза, патология печени и почек, тератогенное действие, снижение скорости роста и развития.Однако многие из этих данных разрозненны и противоречивы. Отсутствуют убедительные сведения о состоянии естественной резистентности организма, о влиянии охратоксинов на многие биохимические показатели. Противоречивы результаты морфологического исследова- 37 ния крови, что видимо связано с выбором разного вида подопытных животных, способом и длительностью введения охратоксина А, величиной его дозы или с другими факторами.Наблвдения показывают, что в ряде случаев параду с охратоксинами в питательном субстрате образуются и другие токсины, такие как пеницилловая кислота, цитринин, щавелевая кислота, которые могут усилить токсичность охратоксинов и изменить клиническое течение заболевания, Достаточно полно изучено распределение охратоксина А в органах и тканях организма и установлено, что охратоксин А накапливается в основном в почках, печени и мышцах, следовательно, проблема охратоксикозов выходит за границы ветеринарного значения и приобретает не менее важное социальное* Охратоксины - относительно стабильные соединения, которые могут длительно находиться в кормах. Тщательная проверка ингредиентов кормов и хранящихся кормосмесей на содержание охратоксинов - основа ветеринарно-санитарного контроля качества кормов, но вместе с тем профилактика охратоксикозов заключается и в своевременной их диагностике, а лечение - в познании механизмов действия.В связи с этим, в настоящей работе изз^чалось влияние охратоксина А и смеси охратоксинов А, В, С в сравнительном аспекте на клинические, гематологические, биохимические и иммунологические показатели цыплят-бройлеров высокопродуктивного отечественного кросса "Бройлер-6" с тем чтобы цредложить методы прижизненной и посмертной диагностики охратоксикозов и меры их профилактики. - 3 8 Ш. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Материалы и методы Место проведения работы. Работа проводилась на базе вивария лаборатории контроля и стандартизации биологически активных препаратов Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов мех СССР. Используемые животные. Опыты проводились на цыплятах-бройлерах кросса "Бройлвр-6", полученных из опытного хозяйства Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского и технологического института птицеводства» Комбикорма для кормления птицы были получены из опытного хозяйства ВНИИТИП и племптицесовхоза "Конкурсный" Загорского района Московской области, Гриб-продуцент ОХраТОКСИНОВ - Aspergillus ochraceus Wilh. штамм 132 429, получен в лаборатории микологии Всесоюзного научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, С целью изучения влияния охратоксинов на организм цыплятбройлеров старше четырех недель жизни, в кал5Д0м опыте было сформировано по 9 групп цыплят 28-дневного возраста, по 12 голов в каждой группе. Птицу подбирали по принципу аналогов, средней массой 550+30 г. Перед постановкой каждого опыта цыплят с 21-дневного возраста ввдерживали в семидневном предопытном периоде. Физиологическое состояние птицы перед постановкой опыта оценивали по следзшщим показателям: подсчет форменных элементов крови и определение концентрации гемоглобина; определение общего белка и состава основных белковых фракций сыворотки крови; определение бакте- 39 рицидной, лизоцимной и фагоцитарной активности.После определения физиологического состояния птицы гфиступали к формированию групп. Птицу метили индивидуальными крылометками» Цыплята содержались в четырехъярусных клеточных батареях с решетчатыми полами, по одной группе в каждой клетке. Поение и кормление птицы соответствовало нормам ВНИИТИП от 1972 г. (ГОСТ 18221-72).Исследования проводили через 7, 14 и 21 день после начала введения охратоксинов.Кровь для морфологических исследований и исследований активности нейтрофилов брали из подкрыльцовой вены. Кровь для получения сыворотки ввщу большого объема биохимических и иммунологических исследований брали методом тотального обескровливания из яремной вены, после чего проводили вскрытие птицы для изучения степени патологоанатомических изменений и определения абсолютной и относительной массы внутренних органов. Определение живой массы цыплят проводили путем взвешивания перед каждым исследованием» Из сформированных девяти групп шесть групп (I, 2,3, 4, 5, 6-я) были опытными, три - контрольными (7, 8, 9-я).Количество вводимого охратоксина А и смеси охратоксинов А, В, С для птицы кавдой опытной группы составляло 0,2; 0,3; 0,7; 1,1; 1,5 и 1,9 мг/кг массы. Пересчет вводимого количества охратоксинов проводился через кавдые семь дней опытов с учетом средней живой массы цыплят по каждой группе. Контроль ставили на условиях содержания и кормления, на раствор экстракта риса или пшеничных отрубей, не содержавших охратоксины и на 5^-ный раствор этилового спирта.Испытуемые токсины растворяли в 5^ном этиловом спирте с таким - 40 расчетом, чтобы в I мл спиртового раствора содержалась определенная концентрация охратоксина А или смеси охратоксинов А, В, С, Все растворы задавались ежедневно зггром, перед началом кормления, индивидуально с помощью шприца-зонда, Схема постановки опытов (табл» 2, 3).Расчет концентрации охратоксинов А, В, С проводили по сумме охратоксинов А и С, Охратоксин В, как малотоксичное соединение / P.S.Steyn et.al., 1967; R.G.Doster et.al., 1973 / Нв учитывали, При ЭТОМ в смеси охратоксинов А, В, С содержалось около 2500 мкг охратоксина А, 1500 мкг охратоксина С и 800 мкг охратоксина В в I мл, Г - 42 Определение ДД-50 смеси охратоксинов А, В, С проводили в условиях хозяйства, на базе племптицесовхоза "Смена" Загорского района Московской области. Опыт проведен в трех повторностях на 330 цыплятах-бройлерах, Всего в опытах было использовано 978 цыплят-бройлеров.Изучение клинических признаков охратоксикозов проводили путем ежедневного наблюдения за птицей.Гематологические показатели.Определение количества эритроцитов и лейкоцитов проводили пробирочным методом по Н.М.Николаеву /1954/, с подсчетом в камере Горяева. Для окраски лейкоцитов использовали красящую жидкость с нейтральротом; количество гемоглобина в крови определяли по гемометру Сали типа ГС-3 /А.А.Кудрявцев, Л.А.Кудрявцева, 1974; Е.А.Кост, 1975/.Биохимические показатели.Определение общего белка проводили на рефрактометре типа ИРФ-22. Расчет количества общего белка проводили по принятым таблицам.Содержание основных белковых фракций сыворотки крови определяли экспресс-методом, предложенным в качестве унифицированного для лабораторных клинических исследований /В.Г.Колб, B.C.Камышников, 1976/.Иммунологические показатели.Определение бактерицидной активности сыворотки крови проводили по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой /1978/.Метод основан на изменении оптической плотности мясо-пептонного бульона при росте в нем микроорганизмов с добавлением и без - 43 добавления испытуемой сыворотки, В качестве тест-культуры использовали культуру E.coii штамм II3-3, полученную в ВГШШ ветпрепаратов МСХ СССР» При слабой бактерицидной активности сыворотки оптическая плотность возрастает за счет накопления в ней размножающихся микробов.В наших измерениях бактерицидная активность выражалась в показателях не нарастания оптической плотности, а ее угнетения, Для определения бактерицидной активности в процентах, полученный процент нарастания оптической плотности вычитается от 100 и получается процент сыворотки, в которой размножение микробов угнеталось, Определение количества лизоцима проводили методом количественного определения диффузией в агар, по Х,Я,Грант с соавт. /1973/.В качестве тест-культуры использовали лиофильно высушенную культуру M.lysodeicticus.Фагоцитарную активность нейрофильных лейкоцитов определяли по методу Е.А.Кост и М.Й,Стенко /1974, 1975/, Учитывали: - фагоцитарную активность псевдоэозинофилов (ФАЛ) - отношение активных фагоцитов к общему числу подсчитанных фагоцитов; - фагоцитарный индекс Райта (ФИ) - среднее число фагоцитированных микробов на один активный фагоцит.Биометрический анализ полученного материала проводили в вычислительном центре ВШТИП на электронно-вычислительной машине "ЭШ-Минск-6" методом вариационной статистики, Принятый уровень достоверности различий показателей (Р) не превышает 0,05, Наработку охратоксинов проводили совместно со старшим научным сотрудником лаборатории микологии ВНИИВС, кандидатом биологических наук А.Н.Леоновым, по методике н.ь.Тгепк et.ai. /i97i/, Гриб-продуцент Aspergillus ochraceus штамм 132 429. Культура гриба размножалась, поддерживалась и хранилась на сусло-агаре, Среда выращивания - очищенное рисовое зерно или пшеничные отруби.Извлечение охратоксинов из измельченной пробы, очистку, разделение и определение концентрации охратоксинов в экстрактах проводили в лаборатории микологии ВНИИВС. Концентрация охрактоксина А в полученном экстракте из рисового зерна составляла 3000 мкг/мл. Концентрация охратоксинов А, В, С в экстракте из пшеничных отрубей составляла 2500, 800 и 1500 мкг/мл соответственно.3.2. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при охратоксикозах В имеющейся литературе описаны симптомы острого и хронического охратоксикоза А птиц, но степень проявления клинических и патологоанатомических изменений в динамике заболевания подробно не изучалась. Также не изучены клиническая картина и патологоанатомические изменения, вызванные смесью охратоксинов А, В, С, являющиеся, однако, важным диагностическим материалом при изучении спонтанных случаев охратоксикозов, поскольку в кормах, пораженных охратоксиногенными грибами, присутствует смесь охратоксинов А, В, С, представленных в том или ином соотношении.Учитывая вьш1еизложенное, мы изучали развитие симптомов ох- 46 ратоксикозов, а также степень выраженности патологоанатомических изменений в зависимости от величины испытуемых доз и длительности их поступления в организм, Симптомы заболевания, Наблюдение за птицей, получавшей охратоксин А и смесь охратоксинов А, В, С, показало, что клинические симптомы охратоксикозов не имеют существенных различий и характеризуются общими признаками, в связи с чем мы описываем общую картину охратоксикозов, Первый период наблюдений (I-7-й день). В первый день после дачи токсинов изменений в поведении птицы не отмечено» Затем, начиная со вторых суток (20-26 часов) в 4, 5, б-х группах (от 1,1 до 1,9 мг/кг массы), независимо от вида токсинов, развивались признаки токсикоза. Птица этих грзшп много и часто пьет, отказывается от корма, на 3-5-й день стоит, сбившись в кучу, или лежит, вздрагивает» Отмечали частую дефекацию, каловая масса жидкой консистенции.К пятым суткам признаки токсикоза развивались у цыплят всех опытных групп. Цыплята угнетены, лежат, много пьют, корм поедают неохотно. К седьмому дню опытов у цыплят, получавших 1,1; 1,5; 1,9 мг/кг массы охратоксина А или смеси охратоксинов А, В, С, развивался профузный понос с примесью алой крови. У цыплят, получавших 1,9 мг/кг охратоксина А или смеси охратоксинов А, В, С, наблюдалось истечение из клюва слизи с примесью крови.В первую неделю наблвдений у цыплят, получавших охратоксин A, отмечено шесть, а у цыплят, ползгчавших смесь охратоксинов А, B, С - девять случаев падежа (рисунки 2, 3).Второй период наблюдений (8-14-й день). Дальнейшее наблюдение за птицей, получавшей охратоксины, показало, что в течение - 47

У. ВЫВОДЫ

I* Охратоксин А и смесь охратоксинов А, В, С (в соотношении 5:1,6:3) вызывают патологические изменения в организме цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-б" старше четырех недель жизни. Тяжесть патологических изменений зависит от величины вводимого количества охратоксинов и длительности их поступления в организм, В степени выраженности клинических изменений, вызванных охратоксином А и смесью охратоксинов А, В, С, видимых различий не установлено.

2. Клинические признаки охратоксикозов характеризовались следующими показателями: а) острое течение заболевания - вызывает введение 1,5 и 1,9 мг/кг живой массы как охратоксина А, так и смеси охратоксинов А, В, С и проявляется резким угнетением птицы, отказом от корма, жаждой, саливацией, частой дефекацией с примесью крови в кале, высокой смертностью; б) подострое и хроническое течение заболевания наступало при введении 0,2; 0,3; 0,7; 1,1 мг/кг живой массы как охратоксина'А, так и смеси охратоксинов А, В, С. Подострое течение заболевания характеризуется резким истощением птицы, снижением аппетита, жаждой, саливацией, частой дефекацией, угнетением, анемией гребня и сережек, асцитом, нервными расстройствами. Хроническое течение заболевания характеризуется незначительным угнетением, снижением аппетита, жаждой, частой дефекацией, отставанием в росте и развитии.

3. Патологоанатомические изменения при остром, подостром и хроническом течении заболевания аналогичны, имеются лишь различия в степени их выраженности. Наиболее характерным и постоянным признаком является жировое перерождение печени, катарально-гемор-рагическое воспаление слизистой железистого желудка и тонкого отдела кишечника, застойная гиперемия почек с последующим изменением их окраски до серо-розовой или серой.

4. При охратоксикозах цыплят-бройлеров наблюдается прогрессирующее снижение числа лейкоцитов в крови. Степень лейкопении связана с величиной дозы охратоксинов и длительностью их поступления в организм. При подостром и хроническом течении охратокси-козов наблюдается умеренный эритроцитоз и снижение концентрации гемоглобина.

5. Влияние охратоксинов на белковый состав сыворотки крови выражается снижением общего белка и изменением протеинограммы сыворотки крови. Снижается уровень альбуминов, увеличивается количество альфа-, бета- и гамма-глобулинов. Характер протеинограммы при охратоксикозах соответствует таковому при гепатонефротичес-ком симптокомплексе.

6. Уровень естественной резистентности организма цыплят-бройлеров, больных охратоксикозами, снижается. Бактерицидная активность сыворотки крови резко снижена. Изменение способности псевдоэозинофилов крови к фагоцитозу выражается как в уменьшении числа фагоцитирующих псевдоэозинофилов, так и в угнетении их поглотительной функции. Уменьшение концентрации лизоцима в сыворотке крови наступает при подостром и хроническом течении заболевания.

7. При охратоксикозах увеличивается массовый индекс печени, железистого и мускульного желудков, селезенки, почек, сердца. Абсолютная масса этих органов колеблется как в сторону снижения, так и повышения. Наиболее постоянным и характерным признаком является увеличение абсолютной массы и массового индекса печени и почек.

8. Определение величины ЛД-50 смеси охратоксинов А, В, С для цыплят-бройлеров кросса "Бройлер-6" четырехнедельного возраста показало эту величину равной 4,4 мг/кг живой массы.

9. Предположительный диагноз охратоксикозов ставится на основании клинических признаков, гематологических показателей и па-тол огоанатомических изменений, характерных для гепатонефротичес-кого симптокомплекса. Окончательный диагноз ставится на основании обнаружения в кормах охратоксинов.

У1. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны "Методические рекомендации по борьбе с охраток-сикозами птицы", рассмотренные и одобренные Главным управлением ветеринарии МСХ СССР, и включенные в проект "Методических указаний по санитарно-микологическому исследованию кормов".

Автор выражает глубокую признательность научному руководителю, доктору ветеринарных наук И.А.Курманову за общее руководство, методическую и научную консультации; канд.биол.наук А.Н.Леонову, канд.вет.наук С.А.Воробьеву за ценные советы и практическую помощь при выполнении и написании данной диссертации; а также благодарит весь коллектив сотрудников лаборатории контроля и стандартизации биологически активных препаратов ВГНКЙ ветпрепа-ратов МСХ СССР за чуткое и доброе отношение к автору и его работе.