Автореферат и диссертация по медицине (14.02.04) на тему:Оценка иммунореактивности организма работающих в производстве винилхлорида

На правах рукопис

АЛЕКСЕЕВ Роман Юрьевич

ОЦЕНКА ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА РАБОТАЮЩИХ В ПРОИЗВОДСТВЕ ВИНИЛХЛОРИДА

14.02.04 - медицина труда

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

* ФЕВ 2013

005049764

Иркутск — 2013

005049764

Работа выполнена в Ангарском филиале Федерального государственного бюджетного учреждения «Восточно-Сибирский научный центр экологии человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук - НИИ медицины труда и экологии человека.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Бодиенкова Галина Михайловна

Официальные оппоненты:

Лемешевская Елизавета Петровна доктор медицинских наук, профессор (заведующая кафедрой гигиены труда и гигиены питания ГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ)

Белохвостикова Татьяна Сергеевна доктор медицинских наук, профессор (профессор кафедры клинической лабораторной диагностики ГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения РФ)

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт комплексных проблем гигиены и профессиональных заболеваний» СО РАМН

Защита диссертации состоится <&ЬР »2013 г. в «_» часов на

заседании диссертационного совета Д.001.03$ .01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО РАМН по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО РАМН

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Приоритетной задачей социальной политики государства и здравоохранения является сохранение здоровья работающего населения, способствующее укреплению трудового потенциала страны и росту экономического благополучия общества (Онищенко Г.Г., 2009, 2010; Потапов А.И., 2010).

В настоящее время востребованным во многих странах мира, в том числе и в России, является производство винилхлорида (ВХ). Работающие на современных производствах ВХ подвергаются воздействию комплекса хлорированных углеводородов (Лемешевская Е.П., 1995,1996; МещаковаН.М. с соавт., 2008,2011, 2012), оказывающих на организм самые разнообразные эффекты: канцерогенный (Стовбур H.H. с соавт., 1979; Hsieh H.I. et al„ 2011), мутагенный (Basler A., Rohrbom G„ 1980; Bolt H.M., 2005), эмбриогенный, тератогенный (Шубочкин Л.Н., 1983; Chiang S.Y. et al„ 1997; Dogliotti E., 2006). Кроме того, у работающих возможно развитие патологии желудочно-кишечного тракта, а именно: фиброза, цирроза, портальной гипертензии, гепатоза, липоматоза поджелудочной железы (Nosko М. et al„ 1989; Attarchi M.S. et al„ 2007; Sherman M., 2009). Исследованиями ряда авторов (Антонюженко В.А., 1980; Каляганов П.И., 2002; Лахман О.Л. с соавт., 2008; Рукавишников B.C. с соавт., 2011; КатамановаЕ.В., 2012) показано влияние ВХ на нервную систему работающих, которое в большинстве случаев проявляется неспецифическими функциональными расстройствами по типу астено-невротического или астено-вегетативного синдрома, синдромом вегето-сосудистой дистонии и полиневропатии. В.А. Антонюженко (1980), П.И. Калягановым (2002), V. Foa, P.A. Bertazzi (1974) зарегистрированы случаи хронической интоксикации винилхлоридом. Известно, что нервная и иммунная системы работают как единый структурно-функциональный блок (Абрамов В.В., 1998). Вместе с тем сведения об изменениях в иммунной системе при воздействии хлорированных углеводородов на организм немногочисленны (Давыдова Н.С., 1999; Бодиенкова Г.М. с соавт., 2006, 2010, 2012; Литовская A.B. с соавт., 2006; Трошин В.В., 2009; Курчевенко С.И., 2011; Ward М.А. et. al., 1976; Mizerski J. et al., 1979).

До настоящего времени отсутствуют сведения об изменениях в иммунной системе на ранних стадиях и в постконтактном периоде нейроинтоксикации винилхлоридом. Недостаточно изученными остаются вопросы, касающиеся роли аутоиммунных механизмов в развитии неврологических нарушений. А именно: отсутствуют данные о формировании аутосенсибилизации к отдельным нейроспецифическим белкам, которые позволяют выявлять функциональные нарушения в специализированных структурах нервной ткани у работающих, а также сопряженности их со степенью выраженности неврологических проявлений. Отсутствуют сведения о взаимосвязи экспозиционной нагрузкой ВХ и ДХЭ, концентрации винилхлорида в крови у работающих и изменением иммунологических параметров. Все это открывает новые возможности как в изучении патогенеза нейроинтоксикации, так и в разработке и научном обосновании иммунологических критериев ранней диагностики заболеваний у работающих в производстве винилхлорида.

Цель исследования

Выявить закономерности формирования изменений иммунореактивности организма работающих в производстве винилхлорида в зависимости от интенсивности и продолжительности его воздействия.

Основные задачи исследования

1. Выявить закономерности изменений сывороточных концентраций IgA, IgM, IgG, IgE у «практически здоровых» работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое (эмоционально-лабильное) расстройство с вегетативной дисфункцией).

2. Оценить изменения цитокинового профиля (IL-8, IL-2, IL-lß, IL-4, IL-6), концентрации интерферонов (INF-a, INF-y) и фактора некроза опухоли (TNF-a) у работающих в зависимости от степени выраженности неврологических проявлений.

3. Определить интенсивность выработки белка S-100B и уровней аутоантител к нейротропным белкам (S-100, NF-200, GFAP, ОБМ, B-зав. Са-канал, Глу-Р, DA-P, ГАМК-Р, Сер-Р, АХ-Р, ДНК, ß2GP, MAG) у работающих.

4. Выявить взаимосвязь между изменением показателей иммунореактивности организма работающих и экспозиционной нагрузкой токсикантами, стажем работы во вредных условиях труда.

5. Изучить в эксперименте изменения уровней белка S-100B, про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-lß, ИЛ-10, TNF-a) в сыворотке крови белых крыс при ингаляционном воздействии на них винилхлоридом.

6. Обосновать иммунологические критерии раннего выявления изменений в нервной системе работающих, обусловленных профессией.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Результаты, полученные в ходе исследований, позволили получить новые данные о нарушении процессов иммунорегуляции как одного из универсальных составляющих патогенеза поражений нервной системы при нейроинтоксикации винилхлоридом.

Впервые показано, что закономерные изменения в иммунной системе работающих в производстве винилхлорида характеризуются дисбалансом иммуноглобулинов, нарушением цитокинового профиля, которые сопряжены с клиническими проявлениями и обусловлены преимущественно продолжительностью воздействия производственных факторов и экспозиционной нагрузкой ВХ и ДХЭ.

Получены новые данные, расширяющие представления о роли про- и противовоспалительных цитокинов в процессах иммунорегуляции организма работающих в производстве винилхлорида. Установлено, что у «практически здоровых» работающих преобладают про-воспалительные реакции над противовоспалительными, у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации выявлено снижение провоспалительной направленности реакций.

Приоритетными являются сведения об особенностях аутоиммунного ответа организма работающих при воздействии хлорированных углеводородов (ВХ и ДХЭ). В формировании иммунной дисфункции и повреждении ткани мозга важную роль играют аутоиммунные реакции с направленностью к антигенам нервной ткани. Установлено возрастание у «практически здоровых» работников сывороточных концентраций ауто-АТ к MAG, а у лиц с клиническими проявлениями астенического расстройства с вегетативной дисфункцией - ауто-АТ к ДНК, ауто-АТ к S-100, принципиально отличающихся как по интенсивности, так и по спектру белков, на которые вырабатываются ауто-АТ при воздействии других нейротоксикантов (паров металлической ртути). Впервые показано, что изменение синтеза аутоантител к специфическим белкам нервной ткани связано с ухудшением неврологического статуса.

Впервые констатирован факт выявленной взаимосвязи между концентрацией винилхлорида в крови работающих и изменением иммунологических показателей.

Экспериментальными исследованиями показано возможное прогредиентное течение хронической интоксикации винилхлоридом, подтверждением того является гиперпродукция белка S-100B и нарушение цитокинового баланса в отдаленном постконтактном периоде нейроинтоксикации у белых крыс.

Практическая значимость работы

На основании полученных результатов научно обоснованы и разработаны иммунологические критерии донозологической диагностики хронической интоксикации винилхлоридом, необходимые как при проведении периодических и предварительных медицинских осмотров, так и для целенаправленного контроля за терапевтическими мероприятиями. Учитывая, что развитие и клиническое манифестирование профессиональной патологии проявляется позднее, чем регистрируются изменения в системе иммунитета, обоснованным является создание постоянного мониторинга состояния здоровья, включающего состояние иммунореактивности работающих в производстве винилхлорида.

Зная уровни нейроспецифических белков в крови работающих, можно с большей вероятностью судить об интенсивности протекания патологических процессов в нервной системе, а на основании уровней ауто-АТ - судить об иммунореактивности, что, очевидно, должно предполагать патогенетически обоснованную терапию в индивидуальном порядке.

Результаты работы послужили основанием для разработки способа выявления ранних признаков хронического воздействия винилхлорида (заявка на изобретение № 2012116257 (024543) от 25.04.12 г.), методических рекомендаций «Современные подходы к раннему выявлению нейроиммунных нарушений у работающих при воздействии нейротоксикантов» (утверждены Научным советом № 45 по медико-экологическим проблемам здоровья работающих от 05.10.2012. г. Москва).

Основные положения работы используются в педагогической и научной деятельности на базе учебно-образовательного центра ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Формирование начальных проявлений хронической нейроинтоксикации (астеническое расстройство с вегетативной дисфункцией) у работающих в производстве винилхлорида сопровождается нарастанием иммунной недостаточности, проявляющейся дисбалансом иммуноглобулинов, нарушением цитокиновой регуляции, аутоиммунного ответа, которые обусловлены продолжительностью воздействия и экспозиционной нагрузкой винилхлоридом и дихлорэтаном.

2. Особенностью формирования аутоиммунных реакций организма работающих в производстве винилхлорида является возрастание концентраций ауто-АТ к специфическим белкам нервной ткани - S-100, MAG и ауто-АТ к ДНК, сопряженных с ухудшением неврологического статуса работников. Наиболее информативными показателями в диагностике начальных проявлений нейроинтоксикации винилхлоридом у работающих, являются IL-4, белок S-100B, ауто-АТ к: S-100, вольтаж-зависимому Са-каналу, DA-P, ГЛУ-Р, ГАМК-Р.

Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на: Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2010); II Международной студенческой научной конференции с участием молодых ученых «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2010); Общероссийской научной конференции «Перспективы развития вузовской науки» (Сочи, 2010); International Scientific Conference «Fundamental and applied research in medicine» (France, 2010); Международной научной конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Таиланд, 2011); Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва,

2011); II Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Человек: здоровье и экология» (Иркутск, 2011); X Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» (Москва, 2011); Всероссийском симпозиуме «Медико-биологические аспекты обеспечения химической безопасности Российской Федерации», посвященнм 50-летию со дня основания ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА (Санкт-Петербург, 2012); Национальной конференции «Клиническая иммунология и аллергология—практическому здравоохранению» (Москва, 2012); Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Экологические и медицинские проблемы Сибири», посвященной 25-летию ВСНЦ (Ангарск, 2012); Второй международной междисциплинарной конференции «Современные проблемы системной регуляции физиологических функций» (Турция,

2012); Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Иркутск, 2012); XI Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» (Москва, 2012).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, из них 6 — в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, 2 - в международной печати, 1 монография. Подготовлены заявка на изобретение № 2012116257 (024543) от 25.04.12 г., методические рекомендации.

Личный вклад автора

Автор принимал участие в планировании, организации и проведении иммунологических исследований. Самостоятельно проведена математическая обработка, обобщение и обсуждение полученных результатов. Объем выполненной работы = 90 %.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, иллюстрирована 16 таблицами и 5 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов. Список литературы включает 351 источник, из них 185 - на русском и 166 — на иностранных языках.

Работа выполнена в рамках темы основного плана НИР 019 «Изучение закономерностей формирования нарушений церебрального гомеостаза в отдаленном периоде профессиональных нейроинтоксикаций у работающих» (номер государственной регистрации № 01200500603, инвентарный номер № 02200802651) и НИР 021 «Изучение механизмов формирования поражений нервной системы при воздействии производственных нейротоксикантов разной химической природы» (номер государственной 6

регистрации № 01200803 591) на базе Ангарского филиала ФГБУ «Восточно-Сибирского научного центра экологии человека» СО РАМН - Научно-исследовательского института медицины труда и экологии человека.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика обследованных лиц

Объектом исследования явились работающие в производстве винилхлорида (ВХ) ОАО «Саянскхимпласт» г. Саянска. Для решения поставленных задач проведено лабораторно-иммунологическое обследование рабогтающих мужского пола. В соответствии с поставленными задачами исследований сформированы следующие группы обследуемых работников.

I. Группа «практически здоровых» мужчин. Всего 53 работающих в производстве ВХ со стажем работы 12,2 ± 0,7 года, средним возрастом 36,9 ± 1,2 года. Группа сформирована на основании периодического медицинского осмотра врачами клиники Ангарского филиала ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН.

II. Группа лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации, характеризующейся астеническим (эмоционально-лабильным) расстройством с вегетативной дисфункцией. Всего обследовано 26 мужчин, находившихся на обследовании и лечении в клинике института, средний стаж работы которых составил 18,3 ± 1,2 года, средний возраст -47,3 ± 1,9 года.

Контрольную группу «условно здоровых» мужчин в количестве 56 человек составили лица, сопоставимые по возрасту и общему трудовому стажу, не имеющие в профессиональном маршруте контакта с веществами нейротоксического действия.

Кроме того, для решения одной из задач и более детального раскрытия механизмов формирования аутоиммунного ответа работающих обследованы работающие в контакте с парами металлической ртути (производство каустика ОАО «Саянскхимпласт»): 11 «практически здоровых» работников со стажем работы во вредных условиях труда 16,6 ± 2,0 года, средним возрастом 42,2 ±2,4 года; 13 работников с начальными проявлениями нейроинтоксикации со средним стажем работы 18,5 ± 2,2 года, средним возрастом 50,6 ± 2,4 года; 10 пациентов с профессиональной хронической ртутной интоксикацией, находившихся на обследовании и лечении в клинике.

Методы исследования

Состояние иммунитета оценивали путем определения в сыворотке крови иммуноглобулинов (Ig) основных классов А, М, G и Е и цитокинов IL-Iß, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-a, INF-y, INF-a методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем производства «Вектор-Бест» (г. Новосибирск). Анализ иммунологических показателей выполнен на спектрофотометре ИФА-ЕЬХ800 вертикального сканирования, позволяющем проводить измерения оптической плотности раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм, 620-654 нм.

Определение содержания белка S-100B в сыворотке крови работающих проводили твердофазным иммуноферментным методом, используя реактивы фирмы CanAg (Швеция). Наличие аутоантител к миелин-ассоциированному гликопротеину (MAG) определяли с использованием тест-систем производства BÜHLMANN anti-MAG ELISA (Швеция).

' Для выявления изменений аутоиммунных реакций оценивали сывороточное содержание нейротропных ауто-АТ, направленных к белкам: нейрофиламентному протеи-ну-200 (NF-200), глиальному фибриллярному кислому белку (GFAP), S-100, основному белку миелина (ОБМ), вольтаж-зависимому Са-каналу (B-зав. Са-канал), глутаматным рецепторам (Глу-Р), дофаминовым рецепторам (DA-P), ГАМК-рецептрорам (ГАМК-Р), серотониновым рецепторам (Сер-Р), холинорецепторам (АХ-Р), ДНК, р2-шикопротеину (ß2GP) с помощью ЭЛИ-Н-Теста МИЦ «Иммункулус» (г. Москва). Среднюю индивидуальную иммунореактивность (СИР) каждого анализируемого образца сыворотки крови и отклонения (R) рассчитывали, согласно инструкции к набору ЭЛИ-Н-Тест (Полетаев А.Б., 2011).

Оценка экспозиционной нагрузки токсикантами (винилхлоридом и дихлорэтаном) на работающих выполнена за годы работы с учетом потребления объема воздуха за смену в зависимости от тяжести и напряженности трудового процесса и годового индивидуального риска хронической интоксикации химическими веществами с учетом риска комбинированного действия и суммарного загрязнения воздуха рабочей зоны совместно с д.м.н. Н.М. Мещаковой и д.б.н. М.П. Дьякович.

Концентрации ВХ в сыворотке крови работающих и в воздухе затравочных камер определяли на газовом хроматографе совместно с сотрудниками лаборатории физико-химических методов исследования к.б.н. О.М. Журба и м.н.с. А.Н. Алексеенко.

Экспериментальные исследования выполнены на базе лаборатории токсикологии Ангарского филиала ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека (зав. лабораторией - д.м.н., профессор Л.М. Соседова) в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных целей (Страсбург, 1986) и требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к Приказу Минздрава СССР от 12.08.1977 № 775). Для проведения исследований сформировано 5 групп экспериментальных животных (по 8 белых беспородных крыс-самцов в каждой группе). Животные подвергались ингаляционному воздействию винилхлоридом на протяжении 4 недель по 4 часа ежедневно, кроме выходных дней. Ингаляционная затравка лабораторных животных проводилась совместно с к.м.н. Г.Д. Хомуевым и осуществлялась в 200-литровых газовых камерах при динамической подаче винилхло-рида из баллона через систему редукторов и смесителей. Концентрация винилхлорида в воздухе затравочных камер определялась газохроматографическим методом. Средняя концентрация винилхлорида в затравочных камерах составляла 1947 мг/м3. Животные содержались в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище. Первый забор крови был произведен из подъязычной вены до начала воздействия газом. Дальнейшее обследование экспериментальных животных проводили в 5 этапов: через 14 дней после начала воздействия винилхлоридом — первая группа; через 28 дней после начала экспозиции — вторая группа; в постконтактном периоде, через 5 дней после прекращения воздействия винилхлоридом - третья группа; через 22 дня после прекращения воздействия - четвертая группа; через 35 дней после окончания воздействия - пятая группа. Материалом для исследования явилась сыворотка крови 48 животных весом 190-315 г.

У всех животных определяли уровни цитокинов с помощью тест-систем «Rat IL-lß Platinum ELISA BMS630/BMS630TEN», «Rat IL-10 Platinum ELISA BMS629/

BMS629TEN», «Rat TNF-a Platinum ELISA BMS622/BMS622TWO/ BMS622TEN» eBioscience, Bender MedSystems GmbH (Austria), белка S-100B фирмы CanAg (Швейцария) - методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 в среде Windows (№ AXXR004E642326FA, правообладатель лицензии - Ангарский филиал ФГБУ. «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН). Для показателей рассчитывалась средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (ш), стандартные отклонения (а), медиана (Me) и интерквартильный размах (25-й и 75-й процентили). Достоверность различий средних оценивалась с использованием параметрических и непараметрических критериев - Стьюдента (при нормальном распределении) и Манна - Уитни с учетом поправки Бонферонни (при отличающемся от нормального распределения) (Реброва О.Ю., 2002; Гржибовский A.M., 2008) Для суждения о достоверности различий встречаемости качественных признаков применяли метод Фишера для малых выборок. Для оценки взаимосвязи количественных признаков проводили корреляционный анализ с использованием коэффициента ранговой корреляции Spearmen (г) (Зайцев В.М., 2003). Использован многомерный дискриминантный анализ (Гельфгат E.JI., 2003).

Работа не ущемляет права и не подвергает опасности благополучия обследованных работающих в соответствии с требованиями биомедицинской этики, предъявляемыми Хельсинской Декларацией Всемирной медицинской ассоциации (2000), и Приказом Минздрава РФ № 266 (от 19.06.2003). Исследования выполнены с информированного согласия пациентов в Ангарском филиале ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН. Аттестат аккредитации испытательной лаборатории № ГСЭН.1Ш.ЦОА.149, зарегистрированный в Государственном реестре № РОСС.RU.0001.510164 от 26.10.2011 г.; Лицензия на осуществление медицинской деятельности № ФС-38-01-001391 от 16.01.2012 г.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты лабораторно-иммунологического обследования позволили выявить изменения сывороточных концентраций иммуноглобулинов у работающих в производстве винилхлорида. Так, у «практически здоровых» стажированных работников наблюдалось снижение уровня IgM до 1,08 ± 0,1 мг/мл (против 2,03 ± 0,12 мг/мл в контроле;р < 0,05), у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое расстройство с вегетативной дисфункцией) наблюдалось снижение его до 0,92 ± 0,1 мг/мл (р < 0,05). При этом снижение IgA наблюдалось только у «практически здоровых» работников (1,63 ± 0,1 мг/мл против 2,07 ± 0,12 мг/мл в контроле; р < 0,05).

Наблюдение за одними и теми же работниками в динамике (через 4 года) показало (рис. 1) достоверное возрастание уровней IgA, IgM у «практически здоровых» и IgM у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации, хотя эти значения не достигали контрольных значений и оставались на низком уровне.

Анализ изменений уровней иммуноглобулинов на индивидуальном уровне позволил выявить отклонения показателей от нормы у обследованных при первом и повторном обследованиях (рис. 2).

«практически здоровые» работники

мг/мл

2,5

2 1,5 1 4-'

0,5 0

А*

1дА 1дМ I 11 — обследование

20 15 10 5 0

мг/мл

лица с начальными проявлениями нейроинтоксикации

мг/мл

1дв

] 2-обследование

■ контроль

Рис. 1. Изменения в динамике (через 4 года) средних уровней сывороточных иммуноглобулинов у работающих в производстве винилхлорида: А - различия по сравнению с контролем; * - различия между первым и вторым обследованием статистически значимы при р 5 0,05.

ПИ 1 - обследование Щ 2 - обследование

Рис. 2. Частота выявления показателей сывороточных иммуноглобулинов выше и ниже нормы у работающих в производстве винилхлорида: * - различия между первым и вторым обследованием статистически значимы при р < 0,05.

У «практически здоровых» стажированных работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации в большинстве случаев обнаружено снижение 1пМ. А именно обнаружено снижение концентрации ^М у «практически здоровых» работников в 72,7 % случаев, при повторном обследовании - в 57,6 % случаев, так же, как и у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (в 77,8 % и 44,4 % случаев). ^М синтезируется одним из первых иммуноглобулинов в ответ на попадание в организм сложных по антигенному составу чужеродных веществ. Кроме того, ^М участвует в возникновении и поддержании аутоиммунных реакций (Козлов В.А. с соавт., 2009). Не исключено, что снижение у работающих обусловлено иммунодепрессивным действием ВХ и ДХЭ на отдельные клетки иммунной системы.

Что касается ^А, то установлены различия в частоте выявления значений показателя выше и ниже нормы у «практически здоровых» работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации, свидетельствующие о нарастании нарушений в иммунной системе при продолжающемся воздействии токсикантов. Следует обратить 10

внимание на тот факт, что хлорированные углеводороды обладают раздражающим действием на слизистые оболочки. При этом низкая концентрация IgA в крови у 45,5 % обследованных «практически здоровых» работников при первом обследовании и у

12.1 % при повторном может быть обусловлена не только снижением его продукции, но и переходом в слизистые оболочки, поскольку IgA является одним из основных защитных факторов серозно-слизистых секретов (Козлов ВА. с соавт., 2009). У лиц с клиническими проявлениями при первом обследовании выявлено также снижение (в

22.2 % случаев) содержания IgA, а при обследовании этих же пациентов через 4 года в 22,2 % случаев установлено возрастание сывороточной концентрации IgA-

Важно отметить разнонаправленный характер изменений уровня IgG, ответственного за вторичный иммунный ответ, в обеих группах как при первом, так и при повторном обследованиях, что может свидетельствовать о различной степени выраженности компенсаторно-приспособительных иммунных реакций при воздействии ВХ и ДХЭ на организм. У работников с начальными проявлениями нейроинтоксикации значения показателя выше нормы зарегистрированы в 44,4 % случаев (у «практически здоровых» работников - в 21,2 % случаев). Указанный факт служит аргументом в пользу возрастающей антигенной нагрузки на организм работающих с начальными проявлениями нейроинтоксикации.

Таким образом, результаты выполненных исследований позволяют констатировать, что воздействие ВХ и ДХЭ на работающих приводит к снижению IgM у «практически здоровых работников» и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации, снижению средних уровней IgA у «практически здоровых» работников. Установлено нарастание дисбаланса иммуноглобулинов у работающих в контакте с ВХ и ДХЭ при повторном обследовании их через 4 года.

Учитывая, что цигокины являются «новой самостоятельной системой саморегуляции» иммунитета и играют основную роль в реализации коммуникаторных (сигнальных) взаимодействий в процессе развития иммунного ответа (Кетлинский O.A., Симбирцев A.C., 2008), нами проведено исследование цитокинового профиля у работающих (рис. 3).

| |контроль

¡•«практически здоровые» * работники

Лица с начальными проявлениями нейроинтоксикации

Рис. 3. Цитокиновый профиль у работающих в производстве винилхлорида: • - различия относительно контроля; * - различия между группами статистически значимы при р < 0,05.

Анализ полученных данных позволил выявить компенсаторное увеличение уровня IL-1 ß у «практически здоровых» работающих до 1,68 ± 1,0 пг/мл (прошв 1,15 ± 0,4 пг/мл в контроле;/? = 0,004), в то время как у лиц с начальными проявлениями нейроштгоксикации наблюдается снижение его до 0,66 ± 0,29 пг/мл (р = 0,01). Снижение концентраций IL-1 ß у работающих с нарастанием клинических проявлений, по-видимому, обусловлено тем, что синтезируемый макрофагами IL-1 легко проникает в мозг через гемагоэнцефалический барьер, индуцируя в гипоталамусе секрецию кортикотропин-рилизинг-фактора, который в свою очередь оказывает влияние на функциональную активность гипофиза и надпочечников. В ответ на это гипофиз стимулирует секрецию АКТГ, а кора надпочечников - ппококорти-коидные гормоны, повышенный уровень которых тормозит секрецию IL-1 в макрофагах и тем самым ослабляет иммунный ответ (Knudsen HJ., Dinarello С.A., Storm Т.В., 1987).

Особого внимания заслуживает факт повышения провоспалителыюго IL-8 у «практически здоровых» работников до 48,5 ± 10,5 пг/мл и у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации-до 38,5 ± 14,0 пг/мл (против 3,01 ± 0,5 пг/мл в контроле;р = 0,0001). Наблюдаемое повышение указанного интерлейкина, очевидно, связано с одной из его важнейших функций - ангиогенной активностью, а также с индукцией хемотаксиса нейтрофи-лов, эозинофилов, базофилов и др. (Rollins В., 1997). Полученные результаты согласуются с результатами клинического обследования работающих в производстве винилхлорида, свидетельствующими о нарушении церебральной гемодинамики и реактивности мозговых сосудов (во фронто-мастоидальном бассейне), усиленной вазоконстрикторной реактивности, проявляющейся повышением тонусных показателей (Катаманова Е.В., 2012).

Что касается изучения изменений концентрации плейотропного IL-2, то следует отметить более выраженное его снижение у работающих с начальными проявлениями нейроинтоксикации - до 1,3 ± 0,6 пг/мл относительно «практически здоровых» работающих (3,8 ± 1,0 пг/мл; р = 0,03) и группы контроля (16,6 ± 2,5 пг/мл; р = 0,0001). Снижение концентрации IL-2, возможно, обусловлено как ингибицией его продукции за счет накопления иммуносупрессивных субстанций, так и изменениями соответствующих рецепторов (IL-2 R) и генов, кодирующих этот рецептор (Бережная Н.М., Горецкий Б. А., 1992), что может служить фактором риска в отношении развития аутоиммунных реакций в организме (Рождественский Л.М., 2007).

Следует отметить компенсаторное возрастание TNF-ct, как у «практически здоровых» работников (до 14,8 ± 6,2 пг/мл;р < 0,0001), так и у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (до 13,2 ± 9,9 пг/мл; р = 0,0007) относительно группы контроля (2,45 ± 0,7 пг/мл). Известно, что TNF-a является одним из ранних и чувствительных показателей, характеризующий состояние резистентности организма к неблагоприятным производственным факторам (Черешнев В.А., Гусев Е.Ю., 2001; Недоспасов С.А. с соавт., 2004). Вместе с тем параллельно усилению продукции провоспалительных цитокинов у «практически здоровых» работающих наблюдается снижение уровня противовоспалительного IL-4 (до 3,6 ± 1,0 пг/мл против 10,0 ± 3,0 пг/мл в контроле; Р ~ 0,01). У лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации при менее выраженной провоспалительной направленности отмечена тенденция к возрастанию концентраций IL-4 до 7,1 ± 1,9 пг/мл. При этом значения указанного показателя оставались ниже уровня контрольных значений. Следует учесть, что IL-4 принимает участие в ограничении воспалительного ответа, осуществляя контроль за секрецией провоспалительных цитокинов и регулируя, таким образом, тяжесть повреждения тканей.

При изучении интерферонового статуса отмечено повышение уровней INF-y у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации до 7,6 ± 2,4 пг/мл (в контроле -4,7 ±2,3 пг/мл; р< 0,001). Что касается INF-a, играющего ключевую роль в локальной и системной противовирусной защите и обладающего выраженным антипролиферативным действием на лимфоидные и некоторые соматические клетки (Dafny N., Jang Р.В., 2005; Kaneko N. et al., 2006), следует отметить повышение его концентрации у «практически здоровых» работающих до 13,2 ± 2,2 пг/мл (в контроле - 2,9 ± 1,4 пг/мл; р = 0,006).

Таким образом, анализ полученных результатов дает основание полагать о нарушении цитокиновой регуляции иммунного ответа работающих при воздействии ВХ и ДХЭ, наиболее выраженном у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации.

Учитывая, что специфические свойства той или иной ткани определяются первичной структурой специфичных для нее белков, нами исследованы сывороточные концентрации белка S-100B, являющегося наиболее специфичным белком мозговой ткани (рис. 4).

150 120 90 60 30 О

контроль «практически лица с начальными здоровые» проявлениями

работники нейроинтоксикации

Рис. 4. Уровень белка S-100В в сыворотке крови работающих в производстве винилх-лорида: А - различия по сравнению с контролем; * - различия между группами статистически значимы при р < 0,05.

Результаты исследования позволяют констатировать наиболее выраженное повышение содержания белка S-100B в сыворотке крови у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации до 140,5 ±21,2 нг/л по сравнению с «практически здоровыми» работниками (74,5 ± 10,3 нг/л;р < 0,05) и группой контроля (66,4 ± 5,1 нг/л; р < 0,05). Данный факт, вероятно, можно объяснить тем, что винилхлорид, являясь нейротропным ядом, непосредственно действует на клетки мозга. Повышение концентрации белка S100B у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации связано с усилением его экспрессии в ответ на повреждение, что может быть одним из саногенетических механизмов, направленных на восстановление поврежденной нервной ткани, очищение от детрита и повышение устойчивости к последующим повреждениям (Траилин A.B., Левада O.A., 2009). В свою очередь белок S-100 выполняет множество других функций. В этой связи, возможно, что при воздействии ВХ и ДХЭ на организм формируются нарушения в трансдукции сигналов, контролирующих активность ферментов энергетического обмена в клетках мозга (Landar А. et al., 1996), кальциевого гомеостаза (Barger S.W., van Eldik L.J., 1992), пролиферации и дифференцировки клеток (Marenholz I„ Heizmann C.W., Fritz G., 2004). Вместе с тем не исключено, что происходит повышение проницаемости гемато-энцефалического барьера, в результате чего увеличивается выход белков в кровь, в том

нг/л

к *

числе и белка S-100B. Заслуживает внимания тот факт, что уже начальные проявления нейроинтоксикации винилхлоридом сопровождаются увеличением в сыворотке крови белка S-100B. В связи с этим последний может являться маркером начальных изменений в нервной системе. Наши данные подтверждают тот факт, что белки группы S-100 являются важнейшими регуляторами деятельности мозга и принимают участие в реализации фундаментальных базовых функций нервной системы (Heizmann C.W., 2002).

Анализ количественных изменений в содержании специфичных ауто-АТ может служить прецизионным и удобным инструментом, позволяющим судить о начинающихся или уже манифестировавших патологических процессах любой органной локализации (Арапов Н. А., Полетаев АБ., 2007). В связи с этим представляло интерес оценить концентрации аутоантител к различным нейротропным белкам у работающих в производстве ВХ.

В результате исследований выявлена более выраженная интенсивность аутоиммунных реакций у работающих с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое расстройство с вегетативной дисфункцией), о чем свидетельствует возрастание у последних концентраций ауто-АТ к белку S-100 до 0,772 (0,671-1,019) у.е. относительно группы «практически здоровых» работников (0,689 (0,601-0,826) у.е.; р < 0,05). Если учесть, что в клинической симптоматике обследованных нами лиц врачами клиники были установлены эмоционально-волевые расстройства в виде эмоционально-аффективной ригидности, следует полагать, что выявленные повышенные уровни ауто-АТ к S-100 указывают на изменения в структурах ЦНС, отвечающих за регуляцию эмоционального статуса Также у лице начальными проявлениями нейроинтоксикации обнаружены достоверно высокие уровни ауто-АТ к ДНК (0,202 (0,159-0,243) у.е.) по сравнению с группой контроля (0,156 (0,142-0,178) у.е.; р = 0,04). Обращает на себя внимание увеличение уровня ауто-АТ к MAG у «практически здоровых» работников до 348,3 (293,1—448,8) BTU (в контроле - 259,4 (214,4-372,0) BTU; р = 0,02). Выявленное повышение уровней ауто-АТ к нейротропным белкам у работающих может свидетельствовать о ранних (до-нозологических) изменениях в определенных структурах нервной ткани.

Кроме того, нами рассчитана средняя индивидуальная иммунореактивность (СИР) к нейротропным белкам, которая может проявляться в виде поликлональной иммуноактивации (стойкое повышение всех или большинства уровней ауто-АТ) либо поликлональной иммуносупрессии (низкий уровень всех или большинства ауто-АТ). В результате исследований установлено снижение средней индивидуальной иммунореак-тивности к антигенам нервной ткани более чем у половины обследуемых работников (у «практически здоровых»—в 81 % случаев, у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации — в 75 % случаев). Выявленная стойкая поликлональная иммуносупрессия у большинства работающих может являться следствием длительного воздействия неблагоприятных производственных факторов и может сопровождаться нарушением клиренса, т.е. удаления из организма продуктов апоптоза клеток и в последующем может привести к хронической аутоинтоксикации продуктами обмена (Полетаев А.Б., 2011).

По мнению ряда исследователей (Meroní et al., 2007; Quintan et al., 2008; Полетаев А.Б., 2011), основную клиническую информацию несет не столько абсолютное содержание тех или иных ауто-АТ, сколько их аномальные изменения. В связи с этим нами проанализирована частота выявления аномальных уровней ауто-АТ к нейротропным белкам у работников. В большем проценте случаев были выявлены аномально высокие уровни ауто-АТ к S-100, GFAP, NF-200, 02GP, Сер-Р, ОБМ, АХ-Р, ГАМК-Р и ГЛУ-Р у

работающих с начальными проявлениями нейроинтоксикации, тогда как аномально низкие уровни ауто-АТ определены в единичных случаях к B-зав. Са-каналу, ГАМК-Р, АХ-Р и ОБМ. Что касается «практически здоровых» работников, то аномальные уровни ауто-АТ определены в меньшем проценте случаев и к меньшему спектру специализированных структур нервной ткани. Полученные результаты свидетельствуют о нарастании аутоиммунных реакций у работающих при формировании клинических проявлений неврологических расстройств. В данном случае аутоиммунные реакции следует рассматривать как вторичные иммунные изменения, направленные на поддержание или восстановление нарушенного гомеостаза за счет оптимизации клиренса антигенов ввиду того, что ауто-АТ способны стимулировать процессы регенерации, синтез ДНК и митотическую активность клеток-мишеней. Выявление стойких аномалий в сывороточном содержании маркерных ауто-АТ определенной специфичности дает врачу возможность проанализировать характер изменений, происходящих в организме (в том числе на этапе предболезни) (Чурилов Л.П., 2008; Полетаев А.Б., 2011).

Учитывая, что нами было выявлено изменение продукции ауто-АТ к отдельным специфичностям, а не ко всем изучаемым нами структурным белкам нервной ткани, для более детального раскрытия механизмов формирования аутоиммунного ответа организма работающих интересным, на наш взгляд, являлся анализ того, к каким именно нейротропным белкам вырабатываются ауто-АТ при воздействии других нейротокси-кантов. В таблице 1 представлена сравнительная оценка уровней ауто-АТ к нейротропным белкам в зависимости от воздействия винилхлорида и дихлорэтана, а также паров металлической ртути.

Как следует из данных, представленных в таблице 1, при воздействии нейротокси-кантов различной химической природы (винилхлорида, дихлорэтана и паров металлической ртути) установлены различия в содержании уровней ауто-АТ к различным белкам нервной ткани. У «практически здоровых» работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации при воздействии винилхлорида и дихлорэтана зарегистрировано возрастание ауто-АТ к MAG, S-100 и ДНК. Заслуживает внимания тот факт, что у «практически здоровых» работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации парами металлической ртути наблюдались повышенные концентрации ауто-АТ к более широкому спектру нейротропных белков (MAG, ГАМК-Р, ГЛУ-Р, АХ-Р). У пациентов с установленным диагнозом хронической ртутной интоксикации выявлены изменения в содержании ауто-АТ почти ко всем изучаемым белкам нервной ткани, что может свидетельствовать об их клинической значимости. Результаты выполненных исследований убедительно доказывают зависимость выраженности аутоиммунных реакций (более выраженной при воздействии ртути, чем при воздействии винилхлорида и дихлорэтана) от воздействующих нейротоксикантов и стадии клинических проявлений нейроинтоксикации. Есть все основания полагать, что нарушение специфического антителогенеза, индуцированного различными нейротоксикантами, является одним из важных звеньев патогенеза определенных нарушений в нервной системе при воздействии различных токсикантов. Изменения в содержании ауто-АТ к антигенам из нервной ткани с большой вероятностью могут свидетельствовать о сано- или патогенетических изменениях функционирования иммунной системы и использоваться в качестве предикторов поражения нервной системы в мониторинге эффективности проводимой терапии и в прогнозировании формирования того или иного неврологического синдрома в каждом конкретном случае.

Таблица 1

Сравнительная оценка уровней ауто-АТу работающих при воздействии различных нейротоксикантов, Ме (0,25-{175)

Ауто-АТ к Контроль Производство винилхлорида Производство каустика Пациенты сХРИ (п = Ю) [5]

«практически здоровые» работающие (п =21) [1] Лица с начальными проявлен, нейроинто-ксикации (л = 20) [2] «практически здоровые» работающие (п = 11)[3] Лица с начальными проявлен, нейроинто-ксикации (п = 13)[4]

^-200 (У-е.) 0,278 (0,219-0,308) 0,318 (0,222-0,369) 0,299 (0,271-0,389) 0,303 (0,200-0,392) 0,280 (0,236-0,335) 0,345 (0,258-0,445)

вРАР (У-е.) 0,294 (0,269-0,342) 0,284 (0,225-0,314) 0,294" (0,272-0,359) 0,249 (0,219-0,447) 0,237 (0,213-0,274) 0,337 (0,253-0,449)

Б-ЮО (У-е.) 0,772 (0,629-0,936) 0,689 (0,601-0,826) 0,772 (0,671-1,019) 0,661 (0,513-0,794) 0,699 (0,515-1,063) 0,759 (0,608-0,932)

ОБМ (У-е.) 0,273 (0,219-0,471) 0,251 (0,217-0,296) 0,258 (0,229-0,326) 0,267 (0,202-0,310) 0,249 (0,197-0,262) 0,283 (0,225-0,364)

В-зав. Са-канал (У-е.) 0,219 (0,200-0,232) 0,227 (0,200-0,262) 0,235 (0,205-0,271) 0,248 (0,193-0,286) 0,211 (0,184-0,245) 0,301 * (0,271-0,371)

АХ-Р (У-е.) 0,299 (0,235—0,346) 0,306 (0,234-0,366) 0,288 (0,252-0,357) 0,257 " (0,191-0,285) 0,245 "" (0,220-0,258) 0,326 (0,269-0,414)

Глу-Р (У-е.) 0,264 (0,248-0,286) 0,294 (0,234-0,366) 0,310 (0,238-0,373) 0,334 (0,257-0,362) 0,251 (0,224-0,292) 0,351 (0,247-0,420)

ГАМК-Р (У-е.) 0,235 (0,191-0,256) 0,264 (0,202-0,349) 0,265 (0,224-0,330) 0,299*'3-5 (0,243-0,327) 0,238 ■4-ь (0,202-0,265) 0,351 * (0,321-0,446)

ЭА-Р (У-е) 0,261 (0,235-0,290) 0,255 (0,215-0,296) 0,275 (0,244-0,297) 0.294*3"5 (0,213-0,373) 0,248'" (0,232-0,294) 0,398 * (0,351-0,457)

Сер-Р (У-е.) 0,384 (0,343-0,459) 0,354 (0,315-0,469) 0,370 (0,302-0,427) 0,415'" (0,317-0,536) 0,349 (0,331-0,412) 0,488 * (0,471-0,583)

ДНК (У-е.) 0,156 (0,142-0,178) 0,181 (0,147-0,227) 0,202* (0.159-0,243) 0,191"3~& (0,157-0,238) 0,173 (0,160-0,233) 0,282* (0,249-0,381)

В2вР (У-е.) 0,213 (0,193-0,244) 0,221 (0,198-0,268) 0,215 (0,186-0,260) 0,247 (0,185-0,269) 0,199 (0,194-0,234) 0,272 * (0,249-0,352)

МАй (вти) 259,4 (214,4-372,0) 348,3* (293,1-448,8) 341,2 (277,0—450,3) 353,0*"" (313,4-392,4) 342,5 * "" (314,4-368,8) 568,2* (451,4-611,7)

Примечание: * - различия между группами; А - различия по сравнению с контролем статистически значимы при р < 0,05.

В результате исследования зависимости между выраженностью изменений иммунологических показателей и продолжительностью воздействия токсикантов (табл. 2) выявлены наиболее выраженные изменения в иммунной системе у высокостажированных работающих (15 и более лет), характеризующиеся снижением концентрации 1£>М, И.-2 и увеличением концентрации 1№-а, белка Б-100В. При этом у работающих со стажем 10-14 лет отмечено снижение 1Ь-4 и ЮТ-у, увеличение 1Ь-8 относительно менее стажированных работников (5-9 лет) и группы контроля. У работников со стажем работы 5-9 лег изменения иммунологических параметров были менее выражены и характеризовались снижением 1£>А и одновременном возрастанием ГЬ-ф, ГЬ-8, по сравнению с группой контроля.

Содержание ауго-АТ в сыворотке крови работников в зависимости от стажа работы во вредных условиях труда представлены в таблице 3.

Таблица 2

Изменения некоторых показателей иммунитета у работающих в зависимости от стажа работы в производстве винилхлорида, М±т

Стажевые группы

Показатели Контроль 1 (5-9 лет) II (10-14 лет) III (15 и более лет)

п = 26 л = 24 л = 29

1дА (мг/мл) 2,07 ±0,12 1,58 ±0,1 4 1,70 ± 0,14*' |н 1,95 ±0,20

1дМ (мг/мл) 2,03 ±0,12 0,96 ±0,1 4 1,34 ±0,2 4 0,84 ± 0,09 4

1дв (мг/мл) 10,6 ±0,3 51,4 ± 18,4 22,4 ± 12,04' |н 20,3 ± 8,3

11.-1 р (пг/мл) 1,15 ±0,4 3,2 ±2,0 4 0,4±0,24*'н 0,43 ±0,18 4

11.-2 (пг/мл) 16,6 ±2,5 3,8 ±1,8 4 2,7 ±0,8 4 2,4 ± 0,9 4

11-4 (пг/мзл) 10,0 ±3,0 5,1 ±1,4 1,5 ±0,9 4' ,н 7,2 ± 1,8 1,1

11_-6 (пг/мл) 1,68 ±0,4 16,5 ±9,6 6,2 ±3,9 *'"|н 6,6 ±2,8"'"'"

11.-8 (пг/мл) 3,01 ±0,5 47,0 ±13,9 4 40,5 ±14,4 4 47,5 ±15,5 4

ШР-у (пг/мл) 4,79 ±2,3 8,1 ±2,2 1,6 ±0,7 4 "'н 7,7 ±2,3 4 "ш "

1^-0 (пг/мл) 2,9 ±1,4 11,0 ± 2,6 4 9,5 ±2,5 4 ' 15,4 ± 2,8

Т^-а (пг/мл) 2,45 ± 0,7 25,2 ± 12,0 4 3,3 ±1,6 4 13,6 ±9,2 4

Э-ЮОВ (нг/л) 66,4 ±5,1 61,9 ± 14,4 113,7 ± 21,9 117,2 ± 18,1 '"н

Примечание: ▲ - различия по сравнению с контролем; *-различия между стажевыми группами статистически значимы при р < 0,05.

Таблица 3

Изменения концентраций ауто-АТу работающих в зависимости от стажа работы в производстве винилхлорида, Ме

Ауто-АТ к Контроль Стажевые группы

I (5-9 лет) п= 13 II (10-14 лет) л = 9 III (15 и более лет) л = 19

^-200 (у.е.) 0,278 (0,219-0,308) 0,299 (0,209-0,350) 0,299 (0,274-0,337) 0,337 (0,259-0,426)

вРАР (у.е.) 0,294 (0,269-0,342) 0,292 (0,225-0,316) 0,290 (0,266-0,314) 0,292 (0,265-0,376)

Э-ЮО (у.е.) 0,772 (0,629-0,936) 0,636 (0,549-0,789) 0,702 (0,667-0,795) 0,803 (0,593-1,047)

ОБМ (у.е.) 0,273 (0,219-0,471) 0,220 4 (0,186-0,238) 0,246""-' (0,232-0,280) 0,286 "н (0,239-0,365)

В-зав. Са-канал (у.е.) 0,219 (0,200-0,232) 0,211 (0,179-0,260) 0,236 (0,207-0,263) 0,232 (0,209-0,274)

АХ-Р (у.е.) 0,299 (0,235-0,346) 0,275 (0,187-0,333) 0,302 (0,199-0,357) 0,295 (0,255-0,404)

Глу-Р (у.е.) 0,264 (0,248-0,286) 0,252 (0,217-0,330) 0,308 (0,249-0,312) 0,317 (0,237-0,433)

ГАМК-Р (у.е.) 0,235 (0,191-0,256) 0,219 (0,199-0,334) 0,262 (0,229-0,313) 0,276 (0,241-0,411)

ОА-Р (у.е.) 0,261 (0,235-0,290) 0,248 (0,216-0,291) 0,237 (0,215-0,290) 0,283 (0,246-0,424)

Сер-Р (у.е.) 0,384 (0,343-0,459) 0,343 (0,306-0,413) 0,361 (0,322-0,395) 0,383 (0,325-0,494)

ДНК (у.е.) 0,156 (0,142-0,178) 0,152 (0,147-0,206) 0,180 (0,144-0,208) 0,221 4-*"н (0,166-0,256)

Р2СР (у.е.) 0,213 (0,193-0,244) 0,219 (0,198-0,248) 0,208 (0,192-0,227) 0,218 (0,195-0,282)

МАв (ВТи) 259,4 (214,4-372,0) 354,5 (288,1-501,3) 346,8 (293,2-386,8) 329 4 (282,7-448,8,4)

Примечание: А - различия по сравнению с контролем; * - различия между стажевыми группами статистически значимы при р < 0,05.

Как следует из данных, представленных в таблице 3, с возрастанием продолжительности работы во вредных условиях труда происходит нарастание аутоиммунных реакций. А именно у работающих со стажем более 10 лет наблюдается повышение ауто-АТ к ОБМ относительно менее стажированных работников. У высокостажиро-ванных работников выявлено повышение содержания ауто-АТ к MAG, что, возможно, связано с запуском антимиелинового процесса. У работников со стажем 15 и более лет выявлено повышение ауто-АТ к ДНК по сравнению с менее стажированными (5-9 лет) и группой контроля.

Значительный интерес также представляла оценка изменений иммунологических показателей в зависимости от экспозиционной нагрузки ВХ и ДХЭ на работающих (рассчитана за годы работы с учетом потребления объема воздуха за смену в зависимости от тяжести и напряженности трудового процесса и годового индивидуального риска хронической интоксикации химическими веществами). Результаты корреляционного анализа показали, что с увеличением экспозиционной нагрузки ВХ и ДХЭ у «практически здоровых» работающих возрастает концентрация INF-a в сыворотке крови. У лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации происходит рассогласование этой связи. Следует отметить, что повышение концентрации INF-a может свидетельствовать об усилении антипролиферагивного действия на лимфоидные клетки, снижении их функциональной активности (Капеко N. et а1., 2006).

Анализируя полученные результаты, можно заключить, что с увеличением экспозиционной нагрузки токсикантами происходит более выраженное напряжение компенсаторно-приспособительных механизмов организма работающих.

Винилхлорид быстро метаболизируется в организме с образованием тиодигликолевой кислоты, ^ацетил-8-винилцистеина и др. (Green Т., 1977; Bolt Н.М. et al., 1980). Как сам винилхлорид, так и его метаболиты, оказывают неблагоприятное действие на организм. Нами предпринята попытка выявить взаимосвязь между содержанием винилхлорида в крови работающих и изменением у них иммунологических показателей. В результате исследований у «практически здоровых» работников выявлено, что с повышением концентрации винилхлорида в крови снижается содержание INF-a (г = -0,74; р = 0,004) и ауто-АТ к MAG (г = -0,57; р = 0,04). Установленные особенности взаимосвязей, возможно, свидетельствуют о непосредственном иммунотоксическом воздействии ВХ на клетки иммунной системы. Таким образом, обнаружение выраженных иммунных сдвигов у стажированных работников, а также зависимость их от содержания винилхлорида в крови и экспозиционной нагрузки ВХ и ДХЭ могут быть связаны с тем, что уровни ВХ в организме являются дозозависимой величиной. При этом чем больше количество ВХ поступает в организм, тем дольше его метаболиты будут находиться в организме, оказывая патогенное действие. Именно поэтому наиболее выраженные изменения в иммунной системе зарегистрированы у работающих, имеющих более длительный контакт.

Учитывая, что нами обследованы «практически здоровые» работающие и лица с начальными проявлениями нейроинтоксикации винилхлоридом (среди работающих выявлен только один случай хронической интоксикации винилхлоридом), определенный интерес представляло изучение изменений иммунологических параметров (особенно в отдаленном периоде интоксикации винилхлоридом) на модели экспериментальных животных. Результаты экспериментальных исследований позволили подтвердить важную роль нарушений цигокинового баланса в развитии интоксикации винилхлоридом. Так,

уже через 14 дней воздействия газом на белых крыс наблюдалось повышение уровня 1Ь-1Р до 15,7 (5,0-25,5) пг/мл (р < 0,05) (до начала воздействия газом - 10,2 (3,6-14,1) пг/мл) с последующим снижением концентрации 1Ь-1р до 1,9 (0,6-5,5) пг/мл (р < 0,05) через 28 дней воздействия ВХ по сравнению со сроком 14 дней воздействия. Следует отмеппъ достоверное снижение Т№-а через 28 дней после воздействия ВХ до 0,541 (0,488-0,603) пг/ мл по сравнению с обследованием через 14 дней воздействия - 0,666 (0,611-0,762) пг/мл (р < 0,05). Важно отметить, что через 35 дней постконтактного периода продолжалось снижение ЮТ-а до 0,342 (0,255-0,496) пг/мл (р < 0,05) относительно значений указанного показателя у белых крыс до затравки винилхлоридом (0,650 (0,577-0,686) пг/мл). Параллельно после прекращения воздействия винилхлоридом на белых крыс наблюдалось возрастание сывороточной концентрации противовоспалительного 1Ь-10: на 23-й день-до 88,0 (71,1-126,6) пг/мл, на 36-й день - до 84,9 (69,5-129,4) пг/мл (р < 0,05) относительно значений до опыта- 53,2 (50,9-70,9) пг/мл. Заслуживает особого внимания факт выраженного возрастания концентраций белка 8-100В уже через 14 дней воздействия газом до 3693,3 (24044-4245,6) нг/л. До начала эксперимента этот показатель составил 268,0 (2291-279,9) нг/л. Содержание белка Б-100В оставалось достоверно высоким во все сроки обследования в период затравки (через 28 дней - 2157,9 (1616-2840,9) нг/л; р < 0,005). Важно то, что высокие значения указанного показателя сохранялись и после прекращения затравки (1837 (1522-2667,6) нг/л; 1091,4 (720,3-1758,3) нг/л; 3453,5 (3098,6-3962,9) на 6-й, 23-й и 36-й день соответственно;р < 0,05), что свидетельствует о возможном прогредиентном течении интоксикации винилхлоридом. Кроме того, результаты экспериментальных исследований согласуются с результатами клинических обследований и еще раз подтверждают значимую роль белка Б-100В в процессах иммунорегуляции и отражают степень активности патологического процесса в мозге при нейроинтоксикации винилхлоридом.

С помощью методов многомерного статистического анализа нами обоснованы иммунологические показатели для диагностики ранних признаков хронического воздействия винилхлорида. Наиболее значимыми критериями являются 1Ь-4, белок Э-100В, ауго-АТ к Б-100, В-зав. Са-каналу, ГЛУ-Р, ГАМК-Р, БА-Р, оценка информативности которых представлена в таблице 4.

Таблица 4

Оценка информативности признаков, включенных в линейные дискршшнантные функции

Показатели Р-включения Р

белок Б-ЮОВ, нг/л 23,27 0,00002

ауто-АТ к В-зав. Са-каналу, у.е. 9,65 0,003

ауто-АТ к Б-100, у.е. 9,02 0,004

11.-4, пг/мл 6,85 0,012

ауто-АТ к ОА-Р, у.е. 5,89 0,019

ауто-АТ к ГЛУ-Р, у.е. 4,86 0,033

ауто-АТ к ГАМК-Р, у.е. 4,80 0,034

Точность диагностики начальных проявлений нейроинтоксикации винилхлоридом составила 88 %.

В заключение важно отметить, что предболезнь - переходное состояние, а изменения, проявляющиеся у «здоровых» работников в данный период лишь на молекулярном (метаболическом) уровне, как правило, являются полностью обратимыми. Это является

основанием для разработки новых объективных прогностико-диагностических технологий, острый недостаток которых ощущается в медицине труда.

Совокупность полученных нами результатов позволила выявить наиболее информативные показатели в диагностике начальных проявлений нейроинтоксикации винилх-лоридом. По своей сути белок й-100В, ауто-АТ к й-100, В-зав. Са-каналу, МАО - это качественно новые интегративные показатели, характеризующие формирование ранних изменений в нервной системе при хроническом воздействии ВХ и ДХЭ.

ВЫВОДЫ

1. Общей закономерностью изменений в содержании сывороточных концентраций иммуноглобулинов А, М, Б у работающих в производстве винилхлорида является снижение 1$>М как у «практически здоровых» стажированных работников, так и у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое расстройство с вегетативной дисфункцией). У «практически здоровых» работников выявлено снижение уровня ^А. При повторном обследовании (через 4 года) работающих возрастает частота выявления отклонений от нормы, что свидетельствует о нарастании иммунных нарушений при продолжающемся воздействии производственных факторов.

2. При воздействии хлорированных углеводородов (винилхлорида, дихлорэтана) на работающих зарегистрированы нарушения цитокинового баланса, подтверждающие важную роль цитокиновой сети в развитии нейроинтоксикации винилхлоридом. А именно: у «практически здоровых» работающих относительно контроля наблюдается возрастание уровней 1Ь-1Р, 1Ь-8, ЮТ-а, ЮТ-а и снижение противовоспалительного 1Ь-4,1Ь-2, у работников с начальными проявлениями нейроинтоксикации—возрастание 1Ь-8, ЮТ-а, ЮТ-у и снижение 1Ь-1 р, 1Ь-4, 1Ь-2. У лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации установлено более выраженное снижение 1Ь-2 по сравнению с «практически здоровыми» работающими (р — 0,03).

3. У работников с клиническими проявлениями астенического расстройства с вегетативной дисфункцией установлено выраженное увеличение сывороточной концентрации нейроспецифического белка Э-ЮОВ (140,5 ± 21,2 нг/л) относительно стажированных «практически здоровых» работников (74,5 ± 10,3 нг/л; р = 0,007) и группы контроля (66,4 ±5,1 нг/л; р = 0,02), что позволяет рассматривать указанный показатель в качестве молекулярного предиктора нарушений функций мозга.

4. Выявлены различия в проявлении аутоиммунных реакций у работающих в производстве винилхлорида (у «практически здоровых» работников выявлено возрастание ауто-АТ к МАО, у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации - повышение концентраций ауто-АТ к белку 8-100 и ДНК), принципиально отличающиеся от параметров, характеризующих аутоиммунные реакции организма у работающих при воздействии других нейротоксикантов (паров металлической ртути), что свидетельствует о различных механизмах, лежащих в основе формирования неврологических нарушений.

5. Состояние иммунореактивности организма работающих зависит от стажа работы в производстве ВХ и экспозиционной нагрузки винилхлоридом и дихлорэтаном. Наиболее выраженные изменения иммунологических показателей обнаружены у высокостажировш I-ных работников (со стажем 15 и более лет), проявляющиеся в снижении концентраций

в 2,4 раза, 1Ь-2 - в 6,9 раза, возрастании ЮТ-а в 5,3 раз, белка Б-100В - в 1,8 раз, ауто-АТ к

ДНК, MAG, ОБМ - в 1,4 раза У работающих в неблагоприятных условиях труда в течение 10-14 лет установлено снижение IL-4 в 6,6 раза, INF-y - в 2,9 раза, увеличение IL-8 в 13,4 раз. У работников со стажем 5-9 лет выявлено снижение IgA в 1,3 раза, увеличение IL-1 ß в 2,7 раза, IL-8 - в 15,6 раз. Подтверждением зависимости изменений показателей иммунитета от экспозиционной нагрузки ВХ и ДХЭ является выявленная прямая корреляционная связь (г = 0,45; р = 0,04) между экспозиционной нагрузкой токсикантами и сывороточной концентрацией INF-a у «практически здоровых» работающих.

6. Ингаляционное воздействие винилхлоридом в концентрации 1947 мг/м3 на белых крыс в течение 28 дней приводит к гиперпродукции белка S-100B, нарушению цитоки-нового баланса. Сохраняющиеся высокие концентрации белка S-100B в сыворотке крови экспериментальных животных в постконтактном периоде подтверждают возможность прогредиентного течения интоксикации винилхлоридом и могут свидетельствовать о повреждении в структурах нервной ткани.

7. Наиболее информативными показателями в диагностике начальных проявлений интоксикации винилхлоридом, являются концентрации IL-4, белка S-100B, ауто-АТ к: S-100, B-зав. Са-каналу, DA-P, ГЛУ-Р, ГАМК-Р в сыворотке крови работающих.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Алексеев Р.Ю, Взаимосвязь между уровнем общего IgE и нейрональными аутоантителами у пациентов с профессиональной интоксикацией // Клинические и теоретические аспекты современной медицины: Матер. II междунар. студ. науч. конф. с участием молодых ученых. - М., 2010. - С. 25-26.

2. Бодиенкова Г.М., Алексеев Р.Ю., Боклаженко Е.В. Оценка взаимосвязи между уровнем общего IgE и аутоантителами к миелин-ассоциированному гликопротеину у работающих в контакте с нейротоксикантами И Дни иммунологам в Сибири: Матер. Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. - Красноярск, 2010. - С. 279-280.

3. Бодиенкова Г.М., Алексеев Р.Ю., Боклаженко Е.В. Оценка уровней общего IgE у больных с нейроинтоксикацией различной этиологии // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 1 (71). - С. 7-9.

4. Бодиенкова Г.М, Боклаженко Е.В., Иванова Ю.В., Курчевенко С.И., Алексеев Р.Ю. и др. Роль цитокинов в развитии профессиональных нейроинтоксикаций у работающих на различных стадиях патологического процесса // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 11. - С. 22-26.

5. Бодиенкова Г.М., Боклаженко Е.В., Курчевенко С.И., Иванова Ю.В., Алексеев Р.Ю. и др. Роль цитокинов в развитии профессиональных нейроинтоксикаций у работающих//Современные наукоемкие технологии. -2010. -№ 10. - С. 38—41.

6. Алексеев Р.Ю. Закономерности изменений иммунореактивности работающих в контакте с хлорированными углеводородами // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. -2011. - № 3 (79). - Ч. 1. - С. 143-147.

7. Алексеев Р.Ю. Иммунологические аспекты адаптации организма работающих к хлорированным углеводородам // Матер. XVIII Междунар. науч. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов». - М., 2011. - [Электрон, опт. диск (CD-ROM) ISBN 978-5-317-03634-8].

8. БодиенковаГ.М., Алексеев Р.Ю., Боклаженко Е.В. Иммунологические методы оценки ранних проявлений нейроинтоксикации у работающих // Профессия и здоровье: Матер. X Всерос. конгр. - М„ 2011. - С. 73-75.

9. Бодиенкова Г.М., Алексеев Р.Ю., Боклаженко Е.В. Компенсаторно-приспособительные реакции иммунного ответа организма работающих в производстве винилхлорида // Российский аллергологический журнал. - 2012. - № 1, Вып. 1.-С. 59-60.

10. Бодиенкова Г.М., Алексеев Р.Ю., Курчевенко С.И. Изменения показателей гуморального иммунитета в динамике (через 3 года) у работающих в производстве винилхлорида // Международный журнал экспериментального образования. — 2011. — №3.-С. 140-141.

11. Bodyenkova G.M., Boklajenko E.V., Alekseyev R.Y. Immunopathology of the professional neurointoxications // Int. J. of Applied and Fundamental Research. — 2011. -N2.-P. 16-17.

12. Алексеев Р.Ю. Адаптивные процессы в иммунной системе у работающих в производстве винилхлорида // Экологические и медицинские проблемы Сибири: Сб. тр. Межрегион, науч.-пракг. конф. молодых ученых, поев. 25-летию создания ВСНЦ СО РАМН. - Ангарск, 2012. - С. 3-10.

13. Бодиенкова Г.М., Алексеев Р.Ю. Закономерности компенсаторно-приспособительных реакций иммунного ответа работающих при хроническом воздействии винилхлорида // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. -2012.-№3 (85), Ч. 2. - С. 46-49.

14. Бодиенкова Г.М., Боклаженко Е.В., Алексеев Р.Ю. Актуальные вопросы иммунопатологии профессиональных нейроинтоксикаций // Медико-биологические аспекты обеспечения химической безопасности Российской Федерации: Сб. тр. Всерос. симп., поев. 50-летию со дня основания ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА России. - СПб., 2012.-С. 27-30.

15. Бодиенкова Г.М., Боклаженко Е.В., Алексеев Р.Ю. Особенности формирования аутоиммунных реакций к различным нейротрофическим белкам при воздействии паров металлической ртути //Российский аллергологический журнал. - 2012. - № 1, Вып. 1. - С. 61-62.

16. Бодиенкова Г.М, Боклаженко Е.В., Алексеев Р.Ю., Катаманова Е.В. Нейроим-мунные механизмы формирования хронической ртутной интоксикации // Современные проблемы системной регуляции физиологических функций: Сб. матер, второй между-нар. междисциплинарной конф. — Бодрум (Турция), 2012. - С. 24—26.

17. Бодиенкова Г.М., Тимофеева С.С., Ушакова О.В., Курчевенко С.И., Боклаженко Е.В., Бодиенкова С.Г., Алексеев Р.Ю. Актуальные вопросы диагностики иммунопатологических состояний у работников химических производств: монография. Иркутск: НЦРВХ СО РАМН, 2012. - 138 с.

18. Курчевенко С.И., Боклаженко Е.В., Алексеев Р.Ю. Сравнительная оценка компенсаторно-приспособительных реакций организма работающих при воздействии нейро-токсикангов // «Профессия и здоровье»: Матер. XI Всерос. конгр. - М, 2012. — С. 280-282.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Ауто-АТ - аутоантитела

АХ-Р - холинорецепторы

B-зав. Са-канал - вольтаж-зависимый Са-канал

ВХ - винилхлорид

ГАМК-Р - ГАМК-рецепторы

Глу-Р - глутаматные рецепторы

ДНК - двуспиральная ДНК

ДХЭ - 1,2-дихлорэтан

ИТР - инженерно-технические работники

ИФА - иммуноферментный анализ

ОБМ - основной белок миелина

Сер-Р - серотониновые рецепторы

ЦНС - центральная нервная система

ß2GP - бета-2-гликопротеин

DA-P -дофаминовые рецепторы

GFAP - кислый фибриллярный белок астроглии

IgA, IgM, IgG, IgE - иммуноглобулины классов А, М, G, Е

IL - интерлейкин

INF - интерферон

MAG - миелин-ассоциированный гликопротеин

NF-200 - нейрофиламентный протеин

TNF-a - фактор некроза опухоли-альфа

S-100B - кислый кальций-связывающий белок

Подписано в печать 24.12.2012. Бумага офсетная. Формат 60x84'/ Гарнитура Тайме. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ № 002-13._

РИО НЦРВХ СО РАМН (Иркутск, ул. Борцов Революции, 1. Тел 29-03-37. E-mail: arleon58@gmail.com)

Актуальность проблемы

Приоритетной задачей социальной политики государства и здравоохранения является сохранение здоровья работающего населения, способствующее укреплению трудового потенциала страны и росту экономического благополучия общества [Оншценко Г.Г., 2009, 2010; Потапов А.И., 2010]. В свою очередь, одним из приоритетных вопросов медицины труда является изучение влияния токсических веществ, в том числе нейротоксикантов на здоровье работающих [Барышников И.И., ЛойтА.О., Савченков М.Ф., 1991; Артамонова В.Г., 1996; Рукавишников B.C., Лахман O.JI. с соавт., 2003; ИзмеровН.Ф., 2008; Бодиенкова Г.М., 1997,2010; Захаренков В.В. с соавт., 2010].

В настоящее время востребованным во многих странах мира, в том числе и в России, является производство винилхлорида (ВХ). Работающие на современных производствах ВХ подвергаются воздействию комплекса хлорированных углеводородов [Лемешевская Е.П., 1995, 1996; МещаковаН.М. с соавт., 2008; 2011; 2012], оказывающих на организм самые разнообразные эффекты: канцерогенный [Стовбур H.H. с соавт., 1979; Hsieh H.I. et al., 2011], мутагенный [Basler A., Rohrborn G., 1980; BoltH.M., 2005], эмбриогенный, тератогенный [Шубочкин Л.Н., 1983; Chiang S.Y. et al., 1997; Dogliotti E., 2006]. Кроме того, у работающих возможно развитие патологии желудочно-кишечного тракта, а именно: фиброза, цирроза, портальной гипертензии, гепатоза, липоматоза поджелудочной железы [Nosko М. et al., 1989; Attarchi M.S. et al., 2007; Sherman M., 2009]. Исследованиями ряда авторов [Антонюженко B.A., 1980; Каляга-новП.И., 2002; Лахман О.Л. с соавт., 2008; Рукавишников B.C. с соавт., 2011; Катаманова Е.В., 2012] показано влияние ВХ на нервную систему работающих, которое в большинстве случаев проявляется неспецифическими функциональными расстройствами по типу астено-невротического или астено-вегетативного синдрома, синдромом вегето-сосудистой дистонии и полиневропатии. Анто-нюженко В.А. (1980), Калягановым П.И. (2002), Foa V., BertazziP.A. (1974) зарегистрированы случаи хронической интоксикации винилхлоридом. Известно, что нервная и иммунная системы работают как единый структурно-функциональный блок [Абрамов В.В., 1998]. Вместе с тем, сведения об изменениях в иммунной системе при воздействии хлорированных углеводородов на организм немногочисленны [Давыдова Н.С., 1999; Бодиенкова Г.М. с соавт., 2006, 2010, 2012; Литовская А.В. с соавт., 2006; ТрошинВ.В. 2009; Курчевен-ко С.И. 2011; Ward М.А. et. al., 1976; Mizerski J. et al., 1979].

До настоящего времени отсутствуют сведения об изменениях в иммунной системе на ранних стадиях и в постконтактном периоде нейроинтоксикации винилхлоридом. Недостаточно изученными остаются вопросы, касающиеся роли аутоиммунных механизмов в развитии неврологических нарушений. А именно, отсутствуют данные о формировании аутосенсибилизации к отдельным нейроспецифическим белкам, которые позволяют выявлять функциональные нарушения в специализированных структурах нервной ткани у работающих, а также сопряженности их со степенью выраженности неврологических проявлений. Отсутствуют сведения о взаимосвязи экспозиционной нагрузкой ВХ и ДХЭ, концентрацией винилхлорида в крови у работающих и изменением иммунологических параметров. Все это открывает новые возможности, как в изучении патогенеза нейроинтоксикации, так и в разработке и научном обосновании иммунологических критериев ранней диагностики заболеваний у работающих в производстве винилхлорида.

Цель работы:

Выявить закономерности формирования изменений иммунореактив-ности организма работающих в производстве винилхлорида в зависимости от интенсивности и продолжительности воздействия.

Основные задачи исследования:

1. Выявить закономерности изменений сывороточных концентраций 1§А, 1§М, 1§Е у «практически здоровых» работников и лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое (эмоционально-лабильное) расстройство с вегетативной дисфункцией).

2. Оценить изменения цитокинового профиля (1Ь-8,1Ь-2,1Ь-1|3,1Ь-4,1Ь-6), концентрации интерферонов (ЮТ-а, ЮТ-у) и фактора некроза опухоли (ЮТ-а) у работающих в зависимости от степени выраженности неврологических проявлений.

3. Определить интенсивность выработки белка Б-100В и уровней аутоантител к нейротропным белкам (Б-100, №-200, вРАР, ОБМ, В-зав.Са-канал, Глу-Р, БА-Р, ГАМК-Р, Сер-Р, АХ-Р, ДНК, р2вР, МАв) у работающих.

4. Выявить взаимосвязь между изменением показателей иммунореактивности организма работающих и экспозиционной нагрузкой токсикантами, стажем работы во вредных условиях труда.

5. Изучить в эксперименте изменения уровней белка 8-100В, про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1(3, ИЛ-10, ЮТ-а) в сыворотке крови белых крыс при ингаляционном воздействии на них винилхлоридом.

6. Обосновать иммунологические критерии раннего выявления изменений в нервной системе работающих, обусловленных профессией.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Результаты, полученные в ходе исследований, позволили получить новые данные о нарушении процессов иммунорегуляции как одного из универсальных составляющих патогенеза поражений нервной системы при нейроинтоксикации винилхлоридом.

Впервые показано, что закономерные изменения в иммунной системе работающих в производстве винилхлорида, характеризуются дисбалансом иммуноглобулинов, нарушением цитокинового профиля, которые сопряжены с клиническими проявлениями и обусловлены преимущественно продолжительностью воздействия производственных факторов и экспозиционной нагрузкой ВХ и ДХЭ.

Получены новые данные, расширяющие представления о роли про- и противовоспалительных цитокинов в процессах иммунорегуляции организма работающих в производстве винилхлорида. Установлено, что у «практически здоровых» работающих преобладают провоспалительные реакции над противовоспалительными, у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации выявлено снижение провоспалительной направленности реакций.

Приоритетными являются сведения об особенностях аутоиммунного ответа организма работающих при воздействии хлорированных углеводородов (ВХ и ДХЭ). В формировании иммунной дисфункции и повреждении ткани мозга важную роль играют аутоиммунные реакции с направленностью к антигенам нервной ткани. Установлено возрастание у «практически здоровых» работников сывороточных концентраций ауто-АТ к МАв, а у лиц с клиническими проявлениями астенического расстройства с вегетативной дисфункцией- ауто-АТ к ДНК, ауто-АТ к Б-100, принципиально отличающиеся как по интенсивности, так и по спектру белков, на которые вырабатываются ауто-АТ при воздействии других нейротоксикантов (паров металлической ртути). Впервые показано, что изменение синтеза аутоантител к специфическим белкам нервной ткани связано с ухудшением неврологического статуса.

Впервые констатирован факт выявленной взаимосвязи между концентрацией винилхлорида в крови работающих и изменением иммунологических показателей.

Экспериментальными исследованиями показано возможное прогредиентное течение хронической интоксикации винилхлоридом, подтверждением того является гиперпродукция белка 8- 100В и нарушение цитокинового баланса в отдаленном постконтактном периоде нейроинтоксикации у белых крыс.

Практическая значимость работы

На основании полученных результатов научно обоснованы и разработаны иммунологические критерии донозологической диагностики хронической интоксикации винилхлоридом, необходимые как при проведении периодических и предварительных медицинских осмотров, так и для целенаправленного контроля за терапевтическими мероприятиями. Учитывая, что развитие и клиническое манифестирование профессиональной патологии проявляется позднее, чем регистрируются изменения в системе иммунитета, обоснованным является создание постоянного мониторинга за состоянием здоровья, включающего состояние иммунореактивности работающих в производстве винилхлорида.

Зная уровни нейроспецифических белков в крови работающих, можно с большей вероятностью судить об интенсивности протекания патологических процессов в нервной системе, а на основании уровней ауто-АТ судить об иммунореактивности, что очевидно должно предполагать патогенетически обоснованную терапию в индивидуальном порядке.

Результаты работы послужили основанием для разработки способа выявления ранних признаков хронического воздействия винилхлорида (заявка на изобретение № 2012116257 (024543) от 25.04.12 г.), методических рекомендаций «Современные подходы к раннему выявлению нейроиммунных нарушений у работающих при воздействии нейротоксикантов», утверждены Научным советом №45 по медико-экологическим проблемам здоровья работающих от 05.10.2012. г. Москва.

Основные положения работы используются в педагогической и научной деятельности на базе учебно-образовательного центра ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Формирование начальных проявлений хронической нейроинтоксикации (астеническое расстройство с вегетативной дисфункцией) у работающих в производстве винилхлорида сопровождается нарастанием иммунной недостаточности, проявляющейся дисбалансом иммуноглобулинов, нарушением цитокиновой регуляции, аутоиммунного ответа, которые обусловлены продолжительностью воздействия и экспозиционной нагрузкой винилхлоридом и дихлорэтаном.

2. Особенностью формирования аутоиммунных реакций организма работающих в производстве винилхлорида является возрастание концентраций ауто-АТ к специфическим белкам нервной ткани - S-100, MAG и ауто-АТ к ДНК, сопряженных с ухудшением неврологического статуса работников. Наиболее информативными показателями в диагностике начальных проявлений нейроинтоксикации винилхлоридом у работающих, являются IL-4, белок S-100В, ауто-АТ к: S-100, вольтаж-зав. Са-каналу, DA-P, ГЛУ-Р, ГАМК-Р.

Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на:

- Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (г. Красноярск, 2010);

- II Международной студенческой научной конференции с участием молодых ученых «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (г. Москва, 2010);

- Общероссийской научной конференции «Перспективы развития вузовской науки» (г. Сочи, 2010);

- International Scientific Conference «Fundamental and applied research in medicine» (France, 2010);

- Международной научной конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Таиланд, 2011);

- Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (г. Москва, 2011);

- II Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Человек: здоровье и экология» (г. Иркутск, 2011);

- X Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» (г. Москва, 2011);

- Всероссийском симпозиуме «Медико-биологические аспекты обеспечения химической безопасности Российской Федерации», посвященного 50-летию со дня основания ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА (г. Санкт-Петербург, 2012);

- Национальной конференции «Клиническая иммунология и аллергология - практическому здравоохранению» (г. Москва, 2012);

- Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Экологические и медицинские проблемы Сибири», посвященной 25-летию ВСНЦ (г. Ангарск, 2012);

- Второй Международной междисциплинарной конференции «Современные проблемы системной регуляции физиологических функций» (Турция, 2012);

- Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (г. Иркутск, 2012);

- XI Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» (г. Москва, 2012).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, из них 6 -в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, 2 - в международной печати, 1 монография.

Личный вклад автора

Автор принимал участие в планировании, организации и проведении иммунологических исследований. Самостоятельно проведена математическая обработка, обобщение и обсуждение полученных результатов. Объем выполненной работы ~ 90 %.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, иллюстрирована 16 таблицами и 5 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов. Список литературы включает 352 источника, из них 185 - на русском и 167 -на иностранных языках.

ВЫВОДЫ

1. Общей закономерностью изменений в содержании сывороточных концентраций иммуноглобулинов А, М, в у работающих в производстве винил-хлорида является снижение ^М, как у «практически здоровых» стажирован-ных работников, так и у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации (астеническое расстройства с вегетативной дисфункцией). У «практически здоровых» работников выявлено снижение уровня ^А. При повторном обследовании (через 4 года) работающих возрастает частота выявления отклонений от нормы, что свидетельствует о нарастании иммунных нарушений при продолжающемся воздействии производственных факторов.

2. При воздействии хлорированных углеводородов (винилхлорида, дихлорэтана) на работающих зарегистрированы нарушения цитокинового баланса, подтверждающие важную роль цитокиновой сети в развитии нейроинтоксикации винилхлоридом. А именно, у «практически здоровых» работающих относительно контроля наблюдается возрастание уровней 1Ь-1р, 1Ь-8, ЮТ-а, ЮТа и снижение противовоспалительного 1Ь-4,1Ь-2, у работников с начальными проявлениями нейроинтоксикации - возрастание 1Ь-8, ТОТ-а, ЮТ-у и снижение 1Ь-1р, 1Ь-4,1Ь-2. У лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации установлено более выраженное снижение 1Ь-2 по сравнению с «практически здоровыми» работающими (р = 0,03).

3. У работников с клиническими проявлениями астенического расстройства с вегетативной дисфункцией установлено выраженное увеличение сывороточной концентрации нейроспецифического белка Б- 100В (140,5 ±21,2 нг/л) относительно стажированных «практически здоровых» работников (74,5 ± 10,3 нг/л; р = 0,007) и группы контроля (66,4 ± 5,1 нг/л; р = 0,02), что позволяет рассматривать указанный показатель в качестве молекулярного предиктора нарушений функций мозга.

4. Выявлены различия в проявлении аутоиммунных реакций у работающих в производстве винилхлорида (у «практически здоровых» работников выявлено возрастание ауто-АТ к MAG, у лиц с начальными проявлениями нейроинтоксикации повышение концентраций ауто-АТ к белку S-100 и ДНК), принципиально отличающиеся от параметров, характеризующих аутоиммунные реакции организма у работающих при воздействии других нейротокси-кантов (паров металлической ртути), что свидетельствует о различных механизмах, лежащих в основе формирования неврологических нарушений.

5. Состояние иммунореактивности организма работающих зависит от стажа работы в производстве ВХ и экспозиционной нагрузки винилхлоридом и дихлорэтаном. Наиболее выраженные изменения иммунологических показателей обнаружены у высокостажированных работников (со стажем 15 и более лет), проявляющиеся снижением концентраций IgM в 2,4 раза, IL-2 - в 6,9 раза, возрастанием INF-a в 5,3 раза, белка S-100B - в 1,8 раза, ауто-АТ к ДНК, MAG, ОБМ - в 1,4 раза). У работающих в неблагоприятных условиях труда в течение 10-14 лет установлено снижение IL-4 в 6,6 раза, INF-y - в 2,9 раза, увеличение IL-8 в 13,4 раза. У работников со стажем 5-9 лет выявлено снижение IgA в 1,3 раза, увеличение IL-lß - в 2,7 раза, IL-8 - в 15,6 раз. Подтверждением зависимости изменений показателей иммунитета от экспозиционной нагрузки ВХ и ДХЭ является выявленная прямая корреляционная связь (г = 0,45; р = 0,04) между экспозиционной нагрузкой токсикантами и сывороточной концентрацией INF-a у «практически здоровых» работающих.

6. Ингаляционное воздействие в течение 28 дней винилхлоридом в концентрации 1947 мг/м3 на белых крыс приводит к гиперпродукции белка S-100В, нарушению цитокинового баланса. Сохраняющиеся высокие концентрации белка S-100B в сыворотке крови экспериментальных животных в постконтактном периоде подтверждают возможность прогредиентного течения интоксикации винилхлоридом и могут свидетельствовать о повреждении в структурах нервной ткани.

7. Наиболее информативными показателями в диагностике начальных проявлений интоксикации винилхлоридом, являются концентрации 1Ь-4, белка Б- 100В, ауто-АТ к Б-100, вольтаж-зав. Са-каналу, БА-Р, ГЛУ-Р, ГАМК-Р в сыворотке крови работающих.

127