Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Оценка эффективности применения перфторорганических соединений в комплексной терапии токсических поражений печени

На правах рукописи

Р Г Б ОД

ЕВЛАШЕВА НАДЕЖДА НИКОЛАЕВНА

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ПЕРФТОРОРГАНИЧПСКИХ СОЕДИНЕНИЙ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ТОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ ПЕЧЕНИ

14.00.05. - Внутренние болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Астрахань 1997

Работа выполнена унцинскон академии.

ц Астраханской государственной

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Левитан Б. Н. Научные консультанты: доктор биологических наук

С. И. Воробьев, кандидат медицинских наук А. Э. Васильев Официальные оппоненты: кандидат медицинских наук,

профессор ЛГМА Трубников Г. Л. доктор медицинских наук, профессор Цодиков Г. В.

Защита состоится ^C^^/C-^c-d.— 1997 года в____

сов на заседании диссертационного совета К 004.16.02 при тграханской государственной медицинской академии по адресу: 4000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханской 1сударственной медицинской академии. j

Автореферат разослан (,-С —1997 года.

Учений секретарь диссертационного совета кандидат медицинских

наук, доцент Зашшкова Л. В.

Введение

Акхулльнасть_хемы. Проблема лечения заболеваний токсической этиологии является актуальной для современной медицины. Поражение печени при этом является одним из наиболее частых осложнений, утяжеляющих течение ряда интоксикаций (Подымова С. Д., 1993).

По статистическим данным токсикологических центров общее количество больных с токсическими поражениями за год в России составляет более 300 ООО (Лужников П. А., 1995).

Развитие промышленного производства, освоение новых месторождений полезных ископаемых, широкое применение средств защиты растений и удобрений в сельскохозяйственном производстве, а также появление на потребительском рынке новых продуктов и веществ постоянно расширяет спектр высокотоксичных факторов, приводящих к токсическим поражением печени. В некоторых случаях медицине не известны способы их лечения, а применение традиционных методов не дает достаточно эффективных результатов.

Для Астраханской области особый интерес представляет разработка методов терапии отравлений природным сероводородсодержащих газом Астраханского газоконденсатпого месторождения /АГМ/. Природный газ ATM является уникальным но составу и характеризуется повышенным содержанием сероводорода /до 26 об%/, сернистого ангидрида, меркаптанов и других химических соединений повышенной токсичности (Лсфппдпяров Р. И. с соавт., 1995).

Вышеперечисленное свидетельствует о необходимости разработки новых методов лечения поражений печени токсической этиологии, п том числе обусловленных воздействием природного газа АГМ.

Перспективным представляется использование в комплексной ерапии токсических гепатопатий нового класса лекарственных [репаратов - субмикронных перфторуглеродных эмульсий, в частности, (репарата "Перфторан". Последний разработан в Институте еоретической и экспериментальной биофизики Российской академии тук, г. Пущино, и с 1995 г. разрешен Фармкомитетом РФ к клиническому использованию. По своей эффективности, отсутствию оксического действия на организм препарат опережает известные ггечественные и зарубежные аналоги (Воробьев С. И., 1994, Иваницкий Р. с соавт., 1903).

Учитывая, что в литературе отсутствуют данные о лечебном 1снользовании пер(|ггораиа при токсических поражениях печени, лредставляется актуальным исследовать его эффективность при данной патологии, в том числе при отравлениях, обусловленных воздействием природного газа ЛГМ.

Цельлюследовашш. Диссертационная работа посвящена изучению эффективности перфторуглеродной эмульсии "Перфторан" в терапии токсических поражений печени, в том числе вызванных сероводородсодержащим газом ЛГМ в эксперименте, обоснованию клинического применения препарата при данной патологии.

Задалиисследования:

1. Исследовать некоторые биохимические показатели и морфологические особенности печени лабораторных животных при отравлении их сероводородсодержащим газом ATM в зависимости от концентрации сероводорода в газовой смеси. Разработать экспериментальную модель поражения печени сероводородом.

2. Изучить эффективность перфторана при экспериментальных поражениях печени четыреххлористым углеродом и

сероводородсодержащнм газом АГМ. Обосновать дозы и кратность его введения при данной патологии.

3. Сопоставить лечебное действие перфторана и других препаратов, используемых в клинической гепатологии (эссеициале, преднизолона, реальдирона) на экспериментальной модели токсического поражения печени.

4. Провести апробацию и оценить лечебную эффективность перфторана у больных токсическими поражениями печени.

Основныелшложеш1я,_выно£1шые_11а^защиту:

1. Сероводородсодержащий газ АГМ вызывает поражение печени различной степени выраженности от дистрофических изменений до тяжелой токсической гепатогттии в зависимости от концентрации сероводорода в газовой смеси.

2. Перфторорганические эмульсии оказывают выраженный лечебный эффект при токсических поражениях печени, вызванных четыреххлористым углеродом и сероподородсодержащнм газом ЛГМ в эксперименте.

3. Использование перфторорганическнх эмульсий до воздействия на экспериментальных животных четыреххлористого углерода и сероводородсодержащего газа АГМ не оказывает защитного действия на печень.

4. Перфторорганические эмульсии оказывают достоверно более выраженный лечебный эффект при токсических поражениях печени, по сравнению с эссеициале, преднизолоном, реальдироном.

5. Применение перфторана у больных с токсическими поражениями печени способствует улучшению клинико-лабораторных показателей состояния печени.

Науниая_новизна__работы. Впервые на большом

экспериментальном материале установлена высокая лечебная

эффективность иерфторорганическнх соединений при токсичеплш поражениях печени. При этом установлен новый факт: содержание перфторуглерода в клетках печени коррелирует с уменьшением оГп,<- , повреждении органа.

На двух экспериментальных моделях токсического пораженнч печени показано, что превентивное введение перфторана не предупреждает развития патологического процесса в органе.

Впервые охарактеризованы клинико-морфологическг."

особенности повреждения печени газом АГМ с повышенным содержанием сероводорода. Определена доза и экспозиция газа АГМ, необходимые для моделирования токсического поражения печени этим поллютантом.

Впервые в комплексной терапии больных с токсическими поражениями печени апробированы перфторуглеродные эмульсии п оценен их лечебный эффект.

Практнческая_цеш1ость_исследовання: Разработан новый способ лечения токсических поражений печени (заявка на изобретение № 96114157/14(020256), приоритет от 12 июля 1996 г).

Разработана экспериментальная модель токсического поражения печени сероводородсодержащим газом АГМ, которая может быть использована в токсикологических лабораториях.

Внедрение___в_практику: разработанный способ лечения

токсической гепатопатии перфтораном применяется в токсикологическом отделении НПМК "Экологическая медицина". Модель поражения печени сероводородсодержащим газом АГМ применяется на кафедре факультетской терапии, ЦНИИЛ Астраханской государственной медицинской академии.

Апробация_работы_и_публикации: основные положения

диссертации были доложены на научной конференции

Межрегиональной ассоциации гастроэнтерологов памяти академиь X. Василенко (Москва, 1995), II Российской гастроэнтерологиче неделе (Москва, 199G), IX Международном симиоз1 "Perfluorocarbon'96" (Пущино, 199G), симпозиуме гепатол Белоруссии (Гродно, 1996), научно-практической копфереп посвященной 120-летию Александро-Мариинской больницы (Астра: 1996), конференции "Проблемы экологии в медицине" (Астрахань, 1 межкафедралыюй конференции АГМЛ (Астрахань, 1997).

По теме диссертации опубликовано 5 работ, зарегнстрирова рационализаторских предложения, одно изобретение.

Структура II объем__диссертации: диссертация состоит

введения, плести глав, обсуждения полученных результатов, выв практических рекомендаций и библиографического указа содержащего 172 отечественных и 43 зарубежных источников. Р< изложена на 158 страницах, иллюстрирована 14 таблицами i рисунком.

Материал и методы исследования

Всего под наблюдением находилось 210 мышей линии СВА, м; 10-12 г.

Затравка сероводородсодержащим газом производилас специальной затравочной камере производства Московского инст профзаболеваний и гигиены труда им. Эрисмана объемом 200 ли Для исследования использовался природным газ ЛГМ. Эксперпг. проводились на интактных животных с составлением газовых сг> воздуха с сероводородсодержащим газом в концентрации 200, 30( мг/м3 по H2S, являющимся наиболее агрессивным компош природного газа ATM, время экспозиции 1 час.

Затравка четыреххлористым углеродом производилась в закрытом жсикаторе емкостью 4 литра, в центре которого на решетке помещали ю 5 мышей, на дно эксикатора ставили бюкс с 0,05 мл яда, что :оздавало концентрацию CCL4, равную 1,225 мг%. Время экспозиции 10 i 20 мин.

Инъекции П осуществлялись интрабргашинно в дозе 6 и 12 мл/кг, федннзолона 1,3 мг/кг, эссенциале 0,14 мл/кг, реальдирона 43 гыс.ед/кг.

Контроль составили интактные мыши, которым вводился П и экспериментальные животные, подвергнутые воздействию CCL4 и H2S без П. Мышей разбивали на группы (по 5 мышей в каждой), различавшихся по условиям экспозиции токсикантов, а также.дозам и кратности введения препаратов.

Изучалась морфологическая картина печени с морфометрией, использовались различные окраски, в том числе на суммарные липнды и белок, гликопротеиды, гликоген, рибонуклеиды, нуклеиновые кислоты. Исследовался уровень цитолигических ферментов (ЛАТ и ACT) и циркулирующих в крови эритроцитарных агрегатов.

Изучалась, эффективность нерфторуглеродной эмульсии. в комплексной терапии троих больных с токсическими поражениями печени путем наблюдения за динамикой течения заболевания, сопоставления клинических и лабораторных показателей. Последние включали: определение в сыворотке крови активности АЛТ, ACT, концентрации билирубина и его фракций, тимоловой пробы.

Исследование влияние перфторана на агрегационнуга способность тромбоцитов, in vitro было выполнено на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов модель 230LA.

Результаты количественных морфологических исследований оценивались методами медицинской статистики (Г.Г.Автандилов, 1973,

1974) с оценкой достоверности признаков по критерию Стыодена. Проводился корреляционный анализ.

Расчеты выполнены по программе "Slatgraf" на компьютере серии IBM 486 AT/XT.

Результаты собственных исследований

Проведенные исследования показали, что под воздействием высоких концентраций газа АГМ в эксперименте развиваются глубокие нарушения морфологической структуры печени, причем характер поражения зависит от концентрации H2S в газовой смеси.

Наиболее тяжелые изменения в печени выявляются при концентрация газа АГМ 400 мг/м3 но 112S. При этом 00% животных погибло непосредственно после ингаляции газа, а остальные были малоподвижны и выказывали все признаки тяжелом интоксикации. Развивались мультилобулярные коагуляционные некрозы гепатоцитов, тяжелая гиалиновокапельная дистрофия, полная дискомилексация долек, были выражены явления дискариоза с кариопикнозом, массивные расстройства печеночной мнкроциркуляции в виде кровоизлияния вокруг центральных вен, расширения и полнокровия межбалочных капилляров с явлениями стаза эритроцитов.

При воздействии на животных H2S в концентрации 200 мг/м3 нарушения в печени были незначительными: отсутствовали некрозы, развивались лишь дистрофические изменения очагового характера, дискомплексация долек от легкой до умеренной степени, намечалась тенденция к очаговой пролиферации эндотелиоцитов. Расстройства микроциркуляции органа не были выражены.

Оптимальной для изучения поражений печени I I2S в эксперименте оказалась концентрация 300 мг/м3. Через сутки после затравки печень при осмотре была увеличена, с единичными кровоизлияниями под

9 '

<<

сапсулу, микроскопически выявлялась гиалииовокаиельиая дистрофия >'|. епатоцитов диффузного характера, днскомплексация печеночных " ^олек, имелись очаговые некрозы гепатоцитов, были выражены явления ^искариоза в гепатоцитах центра долек - изменялась величина и форма |дра, появлялась фенестрация и крупноглыбчатая конденсация :роматина, в портальных трактах отек, полнокровие, диффузная шфильтрация гранулоцитами и пролиферация фибробластов, выражена |ролиферация звездчатых эндотелиоцитов. Выявлены расстройства [еченочного кровообращения, нарушения сосудистой проницаемости. ¡ce мыши из данной группы выжили после воздействия газа, хотя в 1ервые трое суток у них наблюдалась клиническая картина тяжелой штоксикацин.

При оценке лечебного действие перфторапа у экспериментальных клиютных, подвергнутых воздействию газа АГМ в эксперименте с ;онцентрацней 300 мг/м3 по H2S выявлен выраженный положительный ффект ПЭ на патологию печени (табл. № 1). Он наиболее отчетливо появляется в группе экспериментальных животных, при двухкратном 1ведепни П в дозе 6 мл/кг с интервалам в одни сутки (группа № 3), что юдтверждается исчезновением воспалительных изменений при шкроскопии печени, некрозов, расстройств кровообращения. Сохранялась лишь небольшая днскомплексация долек и легкая ернистая дистрофия третьей зоны ацинусов. На этом фоне шределялись включения перфторуглерода в клетки Купфера и епатоциты, объемная доля которых составила 89.3±15.8% (р<0.05). Доля [еизмененных гепатоцитов достигала 85=Ы6.1% (р<0.05). Уровень [итолитических ферментов в этой группе самый низкий АЛТ - 1.75 1Моль/чхл, ACT - 1.7 ммоль/чхл.

Таблица Ns 1. Количественные параметры объема повреждения и воспалительных

• изменений печени экспериментальных животных при воздействии газа АГМ в концентрации 300 мг/м1 по НзЭ и перфторана: ■

Группы Об/доля Об/доля дистрофических Об/доля Об/доля Об/ доля

зоны изменении воспали- клеток, содер- неизменен

некроза тяжелая легкая тельных изменений жащих пер-фторуглерод ных клеток

1 19.4±5.1 61.3±14.5 13.4±4.2 0 0 0

контр. H2S

2 0 0 32.0±7.5 1.0+0.05 37.С±5.9 67.0+18.1*

контр.П

3 0 0 15.0±4.8 0 89.3±15.8 85.0±16.1

4 8.0±0.4* 37.0±8.5 5.0±15.1 5.0±0.8. 14.3±0.6 0**

5 5.0±0.3* 60.0±14.3 31.0±10.1 4.0±0.3 10.5±0.3 0*Л

6 17.0±0.6* 51.0±13.1 30.0+0.9 2.0+0.1 0 0**

. 7 15.0±0.45 62.0±15.1 18.0+4.9 3.0+0.5 0 3.0+0.5

8 0 0 0 0 92.0±18.0 98.0+14.0

Примечания: * - достоверность р < 0.05 по сравнению с контролем 1

** - достоверность р < 0.05 по сравнению с контролем 8 Менее выраженный . терапевтический эффект перфторана прослеживается в группе экспериментальных животных, получивших лечебную дозу эмульсии 6 мл/кг однократно после затравки сероводородсодержащим газом АГМ 300 мг/м' в течение часа (группа № 2). У них при микроскопическом исследовании в печени также отсутствуют некрозы и расстройства микроциркуляции, но определяется более высокая объемная доля дистрофических изменений до 32±7.5%, в виде зернистой дистрофии, воспалительные изменения но типу персистирующего гепатита (в пределах портальных трактов), хотя их доля мала. На фоне меньшего количества клеток, содержащих частицы перфторуглерода 37±5.9%, ниже была и доля неизмененных гепатоцитов (67±18.1% (р<0.05)). В этой группе более высок и уровень цитолитических ферментов АЛТ - 2.0 ммоль/чхл, ACT - 1.02 ммоль/чхл, что совпадает со снижением объемной доли клеток, содержащих частицы перфторуглерода.

Лечебное действие Г1Э проявляется и на фоне более тяжелого поражения печени газом ЛГМ, смоделированного двукратной затравкой экспериментальных животных с интервалом в одни сутки (группа № 5). При этом животные получали П дпажДы. 15 этой группе у животных сохранялось сравнительно тяжелое поражение печени: объемная доля некрозов составила 5±0.3% (р<0.05), они выходят за пределы портального тракта. Выражены дистрофические изменения, при этом доля' легкой дистрофии составила 60±14.3% (р<0.05), тяжелой -31±10.1% (р<0.05). По все же они были достоверно менее выражены, по сравнению с контрольной группой животных без П. Выявлено' и повышение уровня цитолнтнческих ферментов: ЛЛТ- 1.05 ммоль/чхл, ЛСГ - 1.0 ммоль/чхл.

В то же время, предварительное введение иерфторана по оказывает прогективного влияния па степень повреждения печени экспериментальных животных сероподородсолержпщнм газом ЛГМ. Наиболее серьезное поражение печени, но своей тяжести приближающееся к контролю с затравкой, выявлено в группах экспериментальных животных при предварительном введении П перед затравкой газом ЛГМ (группы № С>, 7): печень увеличена с массивными кровоизлияниями под капсулу, выражена дискомплексацня долек, объемная доля некрозов достигает 17±0.Г>%, приближаясь к таковой в группе контрольных животных (19,4±5.1%), тяжелая гиалиновокапельная дистрофия по центру долек, объемная доля которой составила 30±0.9%, легкой - 51±13.1% (р<0.05). Выражены расстройства кровообращения в виде нарушения сосудистой . проницаемости. Высокий уровень цитолптнческнх ферментов так же свидетелрствует о тяжелом поражении печени - ЛЛТ 2.3 ммоль/чхл, ЛСТ- 1.05 ммоль/чхл, при объемной доле, клеток, содержащих частицы иерфторуглерода равной нулю (р<0.05) (рис. № 1).

Рисунок № 1. Соотношение объемной доли клеток печени, содержащих частни перфторуглерода и уровня ^политических ферментов лабораторных мышей:

1 2 3 4 5 6 7

[ ВНВААТ СИАСТ -о- Клетки с Й

Анализ полученных данных позволил выявить обратну корреляционную заинспмость между объемной долей некрозов количеством клеток, содержащих частицы перфторуглеро/ достоверного характера - ■ 0.76 (р<0.05), между объемной доле воспалительных изменений, и. клетками, содержащими частиц перфторуглерода достоверного характера - 0.31 (р<0.05), намечает» тенденция к прямой корреляции между неизмененными клетками клетками с частицами перфторуглерода (табл. 2).

Таблица № 2. Корелляционная зависимость между объемной долей некрозов, воспалет неизменными клетками печени экспериментальных животных и объемной долей клетс содержащих частицы перфторуглерода:

По некрозам По воспалению По неизменным

клеткам

Коэффициент -0.76 -0.31 0.92

корреляции (П)

Примечание: □ < 0.05

Таким образом, пер<|ггоран оказывает выраженное лечебное действие при токсических поражениях печени, обусловленных воздействием газа ЛГМ. При этом наиболее предпочтительной является схема введения эмульсии: 6 мл/кг двухкратно с интервалом в одни сутки. Эта же доза перфторана, но введенная однократно, хотя и оказывает положительное действие, является недостаточной для купирования патологического процесса в печени.

При оценке терапевтического действие перфторана на модели токсической гепатопатии, вызванной четыреххлористым углеродом, также выявлен выраженный лечебный эффект ПЭ на патологические изменения в печени (табл. № 3).

Исходя из данных, полученных в ходе эксперимента, наиболее: отчетливое терапевтическое действие П так же проявляется в группе экспериментальных животных (группа № 6), получивших внутрибрюшинпые инъекции П дважды с интервалом в один день в дозе 6 мл/кг, на фоне однократной затравки ССЬ4 (табл. № 3). При этом микроскопически в печени выявлялась умеренная гналиновокапельная дистрофия гематоцитов, причем в большей степени легкая - 25±4.2 об.% (р<0.05) в отличие от 37,5*12.1 об.% в контроле с ССЬ4, и в меньшей степени тяжелая - 10±0.9 об.% (р<0.05), против 25*8.9 об.% (р<0.05) в контроле. Некрозы у животных отсутствовали, тогда как в контрольной группе их доля составила 30*10.1%, объемная доля неизмененных клеток составили 42,2% на фоне 20,4 об.% клеток, содержащих частицы перфторутлерода. Расстройства кровообращения незначительны в виде полнокровия.

Сходный положительный эффект перфторана наблюдался и в группе животных, которые получили инъекцию эмульсии однократно, но в дозе 12 мл/кг (группа № 4), а менее выраженный, по сравнению с

предыдущими группами, наблюдался у экспериментальных животных получивших но одной инъекции ПЭ в дозе 6 мл/кг (группа № 3). Таблица Н» 3. Количественные параметры объема повреждения и воспалительны

изменений ткани печени при воздействии ССЦи перфторана (%):

Группы Об. доля зоны некроза Об. доля дистрофических изменений тяжелая легкая Об. доля воспалитель ных изменений Об. доля клеток, со держащих перфтор-углерод Об. доля неизменен ных клеток

1 контр. ССЦ 38±10.1 25.0+8.9* ' 37.5±12.1 10.1+0.5 0 0

2 контр. П 0 0* 0 0 92.0110.0 98.0± 14.0

3 0 8.2+0,6 42.4+12.0 12.5±7.4* 29.2+3.5 34.9 + 15.1

4 0 4.1 + 0.2* 30.9+11.2 7.1+0.3 3/.7 | 0.9 50.0+15.2

5 0 10.0+0.9* 54.0 + 5.6* 10.0 »0.5* 14.0» 2.Г) 10.0 + 2.4

6 0 10.0 + 0.7* 25.0±4.2* 23.0+12.1* 20.4-2.4 42.2+9.1

7 0 0 49.0+15.5 20.0±8.1 29.3> 12.1 31.0+10.1

8 28.0± 14.5 22.0+9.0* 39.0± 14.0 7.0 + 0.4 21.0а 5.2 4.0+0.3

9 41.9 + 10.1 12.9+3.1* 4.3±0.5 40.9+15.2* 0 0

10 0 4.0.-0.09* 32.0+6.5* 0 62.0+14.5 64.С+ 10.1

Примечания: * - достоверность р < 0.05 по сравнению с контролем 1

** - достоверность р < 0.05 по сравнению с контролем 2 При микроскопическом исследовании .печени 4-он группы мышс (табл. № 3) - некрозы отсутствовали, выявлялась гиалииопокапельнп дистрофия по периферии печеночной дольки, п гепатоцита перипортальных трактов, объемная доля легкой дистрофии состави/ 42,4±12.0% (р<0.05), что больше, чем п группах животных, которь получили суммарную дозу перфторана 12 мл/кг. Объемная до/ тяжелой дистрофии была меньше, чем в контроле, и составила - 0,2=с0 %, против 25±8.9об.% (р<0.05) в контрольной группе животных. До/ неизмененных клеток высока - 34,9±15.1 об.% в отличие от контроля об.%), но все же она меньше в группе животных, которые получили инъекции П (42,2±9.1 об.%), на фоне умеренного содержания часта перфторуглерода в клетках печени - 29,2±3.5' об.%. Расстрой сп

ровообращения в виде полнокровия в этси группе экспериментальны у. ;ивотных не выражены.

Для выявления временной зависимости терапевтического действия репарата в одной из групп мышей (группа № 5) инъекция эмульсии ыла отсрочена и сделана через два дня после отравления на фоне /\нократной затравки четыреххлорнстым углеродом. Во всех выше писанных группах инъекция ПЭ производилась на следующий день осле отравления. Полученные данные позволили утверждать, что П, римененный в течение суток после затравки оказывает более ыраженный лечебный эффект, чем при отсроченном введении.

Предварительное использование перфторана перед отравлением !СЬ4 так же, как и перед затравкой Н23, не предупреждает развитие атологического процесса в печени лабораторных мынюй, о чем пндетельствует микроскопическая картина органа животных. В печени ышей этих групп (группы № 8, 9, 10) выявлялись массивные оагуляционные некрозы, их объемная доля - 41,9±10.1об.% (р<0.05), в гличие от контрольной группы (38 ±10.1 об.%). Доля тяжелой иффузной гиалиновокапельной и зернистой дистрофии приближается контролю - 22±9.8об.% (р<0.05), в контрольной группе мышей она □ставила 25±8.9об.% (р<0.05). Аналогичная картина наблюдается и с егкой степенью дистрофии, она составила 39±14.0об.% (р<0.05), в онтролыюй группе - 37.5± 12.0об.%. Неизмененных гепатоцитов в этой эуппе нет, отсутствуют и включения частиц перфторуглерода в клетки ечени.

Для выявления дезагрегирующего действия П в некоторых группах кспериментальных животных определялись циркулирующие в крови ритроцитарные агрегаты (рис. № 2). У животных, подвергнутых эздействию ССХ^ по сравнению с иитактиыми животными, аблюдается появление в крови эрнтроцнтарных агрегатов. Применение

П приводит к нормализации коэффициента агрегации - агрегаты отсутствуют в группах лабораторных мышей, получивших инъекции перфторана после затравки. Па фоне более тяжелого поражения печени, смоделированного 2-мя затравками ССЬ4, однократное введения ПЭ также способствует уменьшению количества агрегатов. Предварительное введение эмульсии, хотя и не оказывает защитного эффекта от воздействия ССЬ4 по данным морфологической картины печени, но способствует исчезновению эритроцитарных агрегатов из крови.

Рисунок № 2. Коэффициент агрегации эритроцитов в различных группах животных:

Таким образом, перфторан оказывает выраженное лечебное действие при токсическом поражении печени ССЦ,, в эксперименте, при этом доза эмульсии 6 мл/кг, , введенная однократно через два дня после отравления экспериментальных животных ССЦ менее эффективна, чем та же доза препарата, но введенная на следующий день после отравления. Терапевтическое действие перфторана при остром отравлении в эксперименте проявляется и при более тяжелом поражении печени, хотя оно и менее выражено, чем при однократной затравке экспериментальных животных ССЬ4. Более того, П в

'ммарной дозе 12 мл/кг оказывает максимальное терапевтическое !Йствиё при токсическом поражении печени CCL4, однако эедпочтительнее суммарную дозу разделить на 2 введения по 6 мл/кг, >.рез одни сутки, на следующий день после отравления. В то же время патопротективного действия пер<}ггорана на клетки печени при ^едварительном его применении перед воздействием токсикантов не >швлено.

Сравнительное изучение эффективности П при токсических >ражениях печени четыреххлористым углеродом показало эеимущсство ПЭ перед применяемыми в гепатологнн препаратами: :сенциале, преднизолон, реальднрон. При этом во всех группах квотных, получивших вышеперечисленные препараты без перфторана лявлялись дистрофические изменения различной степени .фаженности от умеренной зернистой до тяжелой шалнновокапельной баллонной дистрофии. Некрозы печеночных клеток присутствовали по :ех группах животных, получивших в качестве лечебного средства эедннзолон, эссенциале и реальдироп, кроме тех групп лабораторных мшей, которые получили реальдирон в сочетании с П. В этих же lynnax животных были выражены расстройства кровообращения, редварительное введение реальдирона как самостоятельно, так и в )четашш с ПЭ перед затравкой не оказывает защитного действия на «утки печени. В то же время, одновременное введение перфторана и гальдирона в качестве лечебного средства на следующий день после правки оказывает выраженный терапевтический эффект на патоциты, который сходен с таковым в группе животных, получивших )сле затравки две инъекции ПЭ.

Таким образом показано, что лечебное действие перфторана )стоверно выше при токсических поражениях печени, по сравнению с :сенциале, преднизолоном н реальдироном. Реальдирон оказывает

терапевтическое действие только в сочетании с П, что говорит о возможном потепциировапии эффекта эмульсии реальдироном. Тот факт, что ПЭ эффективны при различных но механизму поражениях печени позволяет ьысказагься об их универсальном гепатопротективном действии.

Исходя из полученных данные об эффективности ПЭ в лечении токсических поражений печени а эксперименте, была проведена апробация перфторана в терапии гепатопатнй токсической этиологии в клинике.

Препарат применен в комплексной терапии у 3-х больных, в том числе у одного с токсической гепатопатией, вызванной хлорированным углеродом, и у двух - гемолитическим ядом (уксусной эссенцией).

У всех больных состояние при поступлении расценивалось как тяжелое. В . клинике доминировали диспепсический и болевой синдромы, лихорадка, желтуха различной степени выраженности, геморрагические проявления.. Это. подтверждалось и данными биохимического исследования крови: повышением общего билирубина до 5-8 норм, трансаминаз до 3 норм, осадочных проб, фибриногена, причем фибриноген В был положительный на + +.

Перфторан был введен внутривенно капельно в дозе 400 мл на 5-"/ дни после отравления с одновременной ннгаляциег кислородовоздушной смеси. Ипфузию больные перенесл1 удовлетворительно, аллергических реакций не было.

Улучшение самочувствия произошло у всех больных на следующш день после инфузии препарата и проявлялось уменьшением слабости снижением температуры тела, уменьшением болевого синдрома I метеоризма, купированием головной боли, уменьшением интенсивносп желтухи и геморрагического синдрома. Это подтверждалось 1 лабораторными показателями: общ. билирубин снизился в 2-3 раза, п<

сравнению с исходными данными, на третий-четвертый дет, цчг\.< введения препарата, с последующей нормализацией его ур. >j>-Содержание трансамипаз уменьшилось до нормы на третий-имч мч". день после введения препарата. Кроме того снизился уровень фибриногена, при этом фибриноген В не определялся.

В одном случае в связи с летальным исходом от грозного осложнения основного заболевания (раннее желудочно-кишечное кровотечение) произведена аутопсия с исследованием морфологической картины печени. Результаты его были сопоставлены с данными гистологии печени больной, экзитировавшей от аналогичного осложнения и не получившей перфторап (у больных одинакова этиология отравления, срок пребывания в стационаре, причина смерти). По данным гистологической картины печени, несмотря на ожидаемое более тяжелое поражение органа но данным биохимического исследования крови, у больной, в комплексную терапию которой был включен П, некрозы гепатоцитов и расстройства микроцнркуляцин отсутствовали, структура печени была сохранна, выявлялась лишь диссеминированная гиалнновокапельная дистрофия. В то же время, при микроскопии печени у больной, не получившей П, выявлялись более выраженные изменения: центральные коагуляционные некрозы, полная дискомплексация долек, зернистая и гиалиновокаиельная дистрофия центральных отделов долек, тяжелые расстройства микроциркуляции -стаз деформированных эритроцитов в синусоидах, диапедсзныс кровоизлияния, феномен "сладжа" эритроцитов. При этом биохимические показатели крови у этой больной были близки к нормальным.

Для подтверждения дезагрегирующего действия перфторана у больных исследовалось влияние последнего на спонтанную и индуцированную агрегацию тромбоцитов in vitro. Полученные данные

свидетельствовали об уменьшении под воздействием ПЭ i спонтанной, так и индуцированной агрегации. При этом снижалаа скорость ее нарастания. Контролем послужили исследования влияния in vitro на тромбоциты доноров, у которых также наблюдалс снижение агрегацнонной активности кровяных телец и скорости нарастания.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют эффективности перфторана в комплексной терапии токсическ поражений печени различной этиологии. Применение ПЭ открыв« новые возможности патогенетического лечения поражений пече токсической природы.

Выводы •

Г. Сероиодородсодержащий газ Астраханского газоконденсатш месторождения вызывает различные но выраженности поврежде! печени (от дистрофии до некрозов) и расстройства кровообращеп Глубина поражения печени находится в прямой зависимости содержания сероводорода в газовой смеси. Концентрация газа ; мг/м3 по сероводороду с экспозицией в 1 час является оптимальной ; моделирования токсического поражения печени.

2. Перфгорорганическая эмульсия "Перфторан" оказыв. выраженный лечебный эффект при токсических поражениях пече вызванных четыреххлористым углеродом и сероводородсодержащ газом в эксперименте. Оптимальная дозировка пер()ггорана при эт составляет 6-12 мл/кг веса двухкратно с интервалом в сутки.

3. Сравнительное изучение эффективности перфторана и дру| препаратов (преднизолон, эссенциале, реальдирон), применяемых терапии токсических поражений печени, демонстрирует его бо> выраженное лечебное действие.

4. Превентивное использование перфторана у экспернме1ггальных ивотных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода и ;роводородсодержащего газа Лсграханского газоконденсатного деторождения, не предупреждает развития токсического поражения ;чени.

5. Применение nepcjrropana у больных с токсическими натопатиями способствует существенному улучшению клинических и бораторных показателей, отражающих состояние печени.

Практические рекомендации

Разработанный способ лечения токсических поражений печени !Комендуется использовать в практике терапевтических, строэнтерологическнх и токсикологических отделений (заявка на обретение № 9G114157/14(020256), приоритет от 12 июля 1S96 г).

Разработанную модель поражения печени

роводородсодержащим газом ATM рекомендуется использовать в ксикологических лабораториях.

Перечень работ, опубликованных по теме диссертации

1. Патология печени при острых отравлениях природным газом с вышенным содержанием сероводорода (экспериментальные следования). // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, лопроктологии. - Санкт-Петербург, 1996. - № 4. - с. 172. (Соавт. А.Э. сильев, Б.Н. Левитан)

2. Моделирование поражений печени сероводородом. // ктуальные вопросы гепатологии". Тезисы докладов II спубликанского симпозиума генатологов Белоруссии. - Гродно, 1996. -96-97. (Соавт. Б.Н. Левитан, А.Э. Васильев)

3. Изменение печени при воздействии природного газа Астраханского газоконденсатного месторождения. // Медико-биологические аспекты адаптации. - Астрахань, 1996. - с. 97-102. (Соавт. Б.Н. Левитан, А.Э. Васильев, H.H. Тризно)

4. Состояние печени при экстремальном воздействии природного газа Астраханского газоконденсатного месторождения. // Проблемы экологии в медицине. - Астрахань, 1996. - с. 108. (Соавт. D.H. Левитан, А.Э. Васильев, Г.П. Джуваляков)

5. Способ лечения острых отравлений сероводородом в эксперименте. Удостоверение № 1120. 1996 г., АГМЛ. (Соавт. А.Э. Васильев, Б.Н. Левитан)

6. Способ лечения экспериментального токсического гепатита. Удостоверение № 1096. 1996 г., АГМА. (Соавт. А.Э. Васильев, D.H. Левитан)

7. Способ лечения токсических поражений печени. Заявка на изобретение № 96114157114(020256), приоритет от 12.06.96 Б.Н. (Соавт. Левитан Б.Н., А.Э. Васильев)

Список принятых сокращений [ - Астраханское газоконденсатное месторождение

- перфторан

ЭС - перфторорганические соединения

- перфторуглеродные эмульсии .4 - четыреххлористый углерод

- сероводород

Объем 1 п. л.

100 экз.

Издательство Астраханской государственной медицинской академии 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121