Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Оценка эффективности интерферонотерапии при хроническом миелолейкозе по данным гистоморфологического исследования
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.29
Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка эффективности интерферонотерапии при хроническом миелолейкозе по данным гистоморфологического исследования
Кумас Сотирис Морфи
На правах рукописи
РГЗ од
/. !' г' 7РП7
Ч !.<П1 /Ы/
Оценка эффективности интерферонотерапии при хроническом миелолейкозе по данным гистоморфологического исследования.
Гематология и переливание крови - 14.00.29
АВТОРЕФЕРАТ
Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва - 2002
Работа выполнена в Государственном учреждении
Гематологический Научный Центр Российской Академии Медицинских Наук
Научные руководители:
Доктор медицинских наук, профессор Н.Д. Хорошко Доктор медицинских наук, профессор Г.А. Франк
Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАЕН А.К. Голенков Доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель наук РФ, Т.И. Булычёва
Ведущее научное учреждение:
Российский Онкологический Научный Центр РАМН
Защита состоится «.....»...................... 2002 г. в.....час. на заседании
диссертационного совета Д 001.042.01 в Гематологическом Научном Центре РАМН (Москва, 125167, Новозыковский проезд, д. 4а)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Гематологического Научного Центра Российской Академии Медицинских Наук
Автореферат разослан «.....»...............2002 г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, старший научный сотрудник В.Д. Реук
саг. г -¿гзз. &
Общая характеристика работы
Актуальность вопроса
Оценка эффективности терапии хронического миелолейкоза (ХМЛ) интерфероном-альфа (IFN-a.) тесно связана с развитием цитогенетического ответа, в частности большого (полного и частичного), который в свою очередь определяет длительность хронической фазы ХМЛ и выживаемость больных. Результаты четырёх рандомизированных (The Italian cooperative study group on chronic myeloid leukemia, 1994; Ohnisht et al,1995; Allan et al, 1995; Hehlmann et al,1996) и одного мета-анализа (Chronic Myeloid Leukemia trialist's collaborative group, 1997) показали, что IFN-a удлиняет выживаемость больных примерно на 20 мес., в сравнении с бусульфаном (миелосаном) и с гидроксимочевиной в зависимости от групп риска во время установления диагноза. Десятилетняя выживаемость больных из группы низкого риска составляет в целом 40 %, и возрастает до 65-80% для тех пациентов, которые достигли полного цитогенетического ответа (Hasford et al,1998). Добавление малых доз цитозин-арабинозида (Ara-С) в программе терапии ещё более увеличивает частоту цитогенетических ремиссий (Guilhot et al,1997) Таким образом, терапевтические подходы при ХМЛ изменились от контроля гематологических проявлений болезни к подавлению опухолевого клона.
Хотя эффективность IFN-a в терапии ХМЛ чётко доказана, до сих пор точный механизм достижения терапевтического эффекта до конца пока не известен. Накопленные экспериментальные и клинические данные указывают на участие различных механизмов: прямого антипролиферативного эффекта (Gordon et al, 1998; Cornelisseri et а1,1998), активации отдельных звеньев иммунной системы (Pawelec et al, 1995; Meseri-Delwail et al, 1994; Sacchi et al, 1997; Oka et al, 1998), нормализации адгезии ХМЛ клеток-предшественников к стромальным элементам (Bhatia et al, 1994), запуска апоптозаХМЛ клеток (Sellen et al, 1997).
В настоящее время для прогнозирования течения ХМЛ и эффективности терапии IFN-a предложены и используются различные прогностические модели (Хорошко Н.Д., 1992; Sokal et al, 1934; Kantarjian et al, 1985; Hasford et al, 1998) и факторы (уровень протеина STAT (Landolfo et al, 2000), соотношение ИРФ-1 и ЙРФ-2 протеинов, достижение полной гематологической ремиссии в течение первых 3 месяцев после начала терапии (Maxon et al, 1998)). Однако сопоставление прогноза и результатов терапии часто указывает на их несоответствие, а, кроме того, часть выше описанных прогностических факторов не вошли в широкую клиническую практику. Более того, ни в одной из прогностических систем не учитываются параметры гистологической картины костного мозга, хотя в литературе встречаются сообщения о прогностической ценности отдельных гистологических параметров (Семенова Е.А., 1990; Thiele et al, 1986, 1995). В тоже время, роль изучения гисгоморфологической картины ХМЛ в оценке эффективности терапии IFN-a до настоящего времени не определена.
В связи с этим, учитывая тот факт, что всем больным ХМЛ, вошедшим в протокол с использованием стандартных доз IFN-a 2b (Интрон А - 5 МЕ/м2, подкожно, ежедневно) во время установления диагноза также, как и на фоне терапии производилась трепанобиопсия, представляло интерес выявить те или иные особенности гистологической картины костного мозга, с помощью которых можно внести определенный вклад в прогнозирование и оценку эффективности терапии.
Цель: выявление факторов, определяющих прогноз и эффективность терапии стандартными дозами IFN-a у больных ХМЛ, в гистологических препаратах.
Задачи исследования:
1. Обосновать значение гистологических параметров а качестве прогностических критериев эффективности терапии IFN-a.
2. Сопоставить гистологическую картину на фоне терапии IFN-a с глубиной цитогенетического ответа.
3. Определить влияние терапии IFN-<x на миелофиброз.
4. Изучить с помощью иммуногистохимии уровень пролиферации лейкоэной популяции, и отдельные субпопуляции лимфоцитов.
Научная новизна Показано важное значение отдельных гистологических параметров - степени миелофиброза, состояние эритроидного ростка, степень редукции лейкозной популяции в качестве факторов, определяющих прогноз и эффективность терапии стандартными дозами IFN-a. Охарактеризованы морфологические проявления терапевтического патоморфоза ХМЛ на фоне терапии IFN-a. Кроме того, доказано, что на фоне терапии IFN-a миелофиброз не прогрессирует.
С помощью иммуногистохимии изучены отдельные субпопуляции лимфоцитов и уровень пролиферации лейкозной популяции, что позволило осветить некоторые аспекты противолейкозного эффекта IFN-a при ХМЛ. Более того, установлена прогностическая ценность данных параметров для подбора больных, подлежащих терапии стандартными дозами IFN-a.
Научно-практическое значение.
Предложены гистоморфологические признаки, позволяющие прогнозировать и оценивать эффективность терапии стандартными дозами IFN-а, больных ХМЛ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 научных работ. Апробация работы. Настоящая работа является фрагментом темы, выполняемой по плану НИР ГНЦ РАМН «Сравнение эффективности программ терапии хронического миелолейкоза на основе альфа-интерферона и химиотерапии под контролем мопекулярно-биологического и иммунологического мониторинга» (№ Госрегистрации 01980001157). Работа апробирована 19.11.2001 г. на заседании проблемной комиссии ГНЦ РАМН «Гемобластозы и депрессия кроветворения». Основные положения диссертации доложены на 2 научных конференциях: Международной школе гематолога (Переделкино, 2000 г.); на пятой встрече Европейской гематологической ассоциации (Бирмиген, 2000 г.).
Объём и структура работы. Диссертация изложена на 201 страницах. Состоит из введения, 6 глав, обсуждения результатов, выводов, приложения и списка литературы, включающего 387 работ, в том числе 23 работ отечественных авторов. В работе 38 таблиц, 10 рисунков и 24 фотографией. Диссертация выполнена в клинике химиотерапии лейкозов и патологии эритрона (руководитель - д.м.н. проф. Н.Д.Хорошко) Гематологического Научного Центра РАМН (директор академик РАН, профессор А.И.Воробьев). Гистологическое и иммуногистохимическое исследования проводились в лаборатории патологической анатомии ГНЦ РАМН (руководитель - д.м.н. проф. Г.А.Франк) Цитогенетический анализ осуществлялся в лаборатории цитогенетики ГНЦ РАМН с.н.с. к.м.н. Захаровой A.B. (руководитель- д.м.н. Домрачева Е.В.). Клиническое ведение больных ХМЛ осуществлялось совместно с в.н.с. д.м.н. Туркиной А.Г.
Статистическая обработка данных включал определение: средних величин; достоверности различий (р) (методом х-квадрата); коэффициента корреляции
Спирмена (г) и применение многофакторной линейной регрессии и производилась совместно с руководителем отдела компьютеризации ГНЦ РАМН Б. В. Зингерманом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Общая характеристика больных
Материалом для выполнения настоящей работы послужили данные клинических и лабораторных исследований 52 больных в хронической фазе ХМЛ, находившихся под наблюдением клиники химиотерапии лейкозов и патологии эритрона ГНЦ РАМН, в рамках протокола ХМЛ МИГ - 97. Среди наблюдавшихся было 26 мужчин и 26 женщин в возрасте от 18 до 62 года, медиана - 40 лет.
Диагноз хронической фазы ХМЛ устанавливали на основании типичной клинико-лабораторной картины - лейкоцитоза в периферической крови, наличия незрелых гранулоцитов, в ряде случаев гипертромбоцитоза, анемии, разрастания гранулоцитарного ростка в костном мозге с преобладанием миелоцитов, спленомегалии (не у всех больных) и трепанобиоптатов костного мозга. Диагноз подтверждён наличием «филадельфийской» хромосомы, у всех 52 больных без дополнительной кариологической аномалии. Группы риска больных ХМЛ определяли в соответствии с прогностической моделью ГНЦ-РАМН 92 (Н.Д.Хорошко, 1992), которая включала следующие неблагоприятные признаки: 1 - анемия (Hb < 90 г/л), 2-лейкоциты >200x 109/л, 3 - бластные клетки в периферической крови > 3 %, 4 - промиелоциты + миелсциты в крови >20%, 5-базофилы в крови >7%, 6-тромбоциты > 500x 109/л или <100х 109 /л, 7 - селезенка > 10 см ниже реберной дуги, 8 - печень > 5 см ниже реберной дуги. К группе низкого риска относили больных, у которых имеется любой, только один, из перечисленных неблагоприятных признаков, промежуточного - 2-3, высокого - от 4 и более.
По условиям протокола ХМЛ МИГ-97 в нэго включались больные с диагнозом ХМЛ давностью не более 4-х месяцев, которые находились на лечении гидроксимочевиной не более 4-х месяцев. Всем больным, назначался курс гидроксимочевины с целью редукции опухолевой клеточной массы. При достижении уровня лейкоцитов 10 х 10э/л лечение гидроксимочевиной приостанавливалось и начиналось постоянное введение Интрона А в дозе 5 МЕ/м2 в день, в сочетании с малыми дозами Ага-С (10 мг/м2 х 2 раза в день, подкожно в течение 10 дней подряд ежемесячно). Изменение вводимых доз препаратов осуществлялось при развитии токсических реакций по единым схемам, как предусматривалось по протоколу ХМЛ МИГ-97.
Цитогенетический анализ костного мозга выполняли прямым методом и методом культивирования клеток с равномерной и G-дифференциальной окраской (G-banding), а также с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hibridization) (FISH). Цитогенетический ответ определяли по содержанию Ph' - положительных клеток в пунктате костного мозга. При этом выделяли 4 степени ответа: 1) полный - 0 % (отсутствие) клеток Ph' + клона; 2) частичный - менее 35 %; 3) минимальный (МЦО) от 36 до 95 % и 4) цитогенетический ответ отсутствует (ЦОО) - сохранение Ph' + клеток в 96-100 %. Полный и частичный объединяются под названием большой цитогенетический ответ (БЦО).
При изучении гистологической картины ХМЛ основным объектом исследования являлись трепанобиоптаты костного мозга. В анализ включены 43 трепанобиоптата, взятые во время установления диагноза - первичные, и 68 на фоне терапии IFN-a - повторные. Срок взятия первого повторного
трепанобиоптага, от момента установления диагноза в среднем составил 16,2 ± 4,7 мес. (интервалы от 5 до 36 мес.)
Биоптаты костного мозга получали с помощью трепанирования заднего верхнего гребешка подвздошной кости, фиксировали в забуференом нейтральном формалине, декальцинировали в смеси Де Кастро и заливали в парафин. Срезы толщиной 5 цк окрашивали гематоксилин-эозином. Для количественной оценки изменений гистологической картины костного мозга на фоне проводимой терапии (совместно с к.м.н. Семеновой Е.А.) использован метод гистоморфометрии, разработанный в патологоанатомическом отделении ГНЦ-РАМН (методические рекомендации: "Гистологическое исследование костного мозга при гематологических заболеваниях и вторичных изменениях кроветворения", Москва, 1978 г.). С помощью окулярной сетки, содержащей 25 тест - точек (Г. Г. Автандилов, 1973), при увеличении х140 в 40 случайно взятых полях зрения определяли % площади, занимаемой в срезах трепанобиоптата гемопоэтической, жировой и костной тканью, а также мегакариоцитами. Площадь гемопоэтической ткани вычислили по формуле: Бгт = 100% - (Эж+Эк), где Бгт-площадь гемопоэтической ткани; Эж- площадь жировой ткани; Бк- площадь костной ткани. В дальнейшем производилось вычисление площади мегакариоцитов по отношению к площади гемопоэтической ткани по формуле: Б мгк отн. = 5мгк общУБгт, где Э мак относительная площадь мегакариоцитов; Эмгк общ. - общая площадь мегакариоцитов в срезе; Эгт - площадь гемопоэтической ткани. В качестве контроля использованы данные морфометрического исследования трепанобиоптатов 12 человек с реактивным лимфаденопатиями (Е.А. Семенова, 1990).
Состояние эритроидного ряда оценивалось визуально. Наличие 5 и более эритроидных клеток (7-12 клеток) в каждом поле зрения соответствовало нормальному содержанию эритрокариоцитов в костном мозге. Обнаружение при увеличении х 200 нескольких эритроидных островков (3-7 клеток) почти в каждом поле зрения трепанобиоптата расценивалось как умеренное, а единичных эритро- и нормобластов - как выраженное сужение эритропоэза.
Степень редукции лейкозных разрастаний в повторных трепанобиоптатах также оценивалась визуально по 3 основным гистологическим признакам: 1) уменьшение плотности роста клеток; 2) наличие очагов опустошения и 3) полей жировых клеток. При умеренно выраженной редукции эти изменения были очаговыми, чередовались с участками плотного клеточного роста и составляли менее половины площади гистологического среза. При выраженной редукции гистологическая картина была представлена обширными участками опустошённой стромы и/или полями жировых клеток, занимающими более половины площади гистологического среза при сохранении небольших участков плотного роста клеток.
Для выявления ретикулиновых золокон применяли импрегнацию срезов по методу Гомори. Оценка различных степеней миелофиброза (МФ) производилась на основании следующей градации:
Степень I - отсутствие фиброзных изменений (МФО) в костном мозге. При этом в костномозговых полостях, если имело место высокая клеточность костного мозга определялось чередование участков нормальной сети аргирофильных волокон с участками деструкции сети (определялись лишь отдельные тонкие аргирофильные волокна).
Степень II - наличие очагового ретикулинового МФ (ОРМФ), в виде разрастаний и утолщения аргирофильных волокон на обширных участках вокруг сосудов, вблизи костных балок, занимающих почти всю площадь отдельных костномозговых полостей.
Степень III - наличие диффузного ретикулинового МФ (ДРМФ), в виде густой сети утолщенных неправильной формы аргирофильных волокон почти на протяжении всей площади костномозговых полостей.
Степень IV - наличие грубого коллагенового МФ (КМФ), который выявляется уже при обзорной окраске гематоксилином-эозином.
Иммуногистохимическое исследование (совместно с к.м.н. Капланской И.Б.) проводилось на парафиновых срезах толщиной 3-5 мкм, помещенных на адгезивные стекла, покрытых L-полилизином, с помощью авидин-биотин-пероксидазного метода и панели моноклональных антител (мкАТ): CD3; CD4; CD8; CD20; NK; PCNA; Ki-67 (фирмы "Dako", Дания). После депарафинизации и дегидратации препаратов по стандартной методике для восстановления антигенной реактивности тканей перед нанесением первичных антител срезы обрабатывали в бытовой скороварке в течение 2 минут после достижения максимальных значений давления и температуры. Данная процедура проводилась для работы с мкАТ CD3; CD8; «¡67. Срезы промывали в трис-буфере рН = 7,6. Для блокирования эндогенной пероксидазы, препараты помещали в раствор метанола с перекисью водорода в течение 30 минут. Далее срезы инкубировали с первичными антителами в стандартных разведениях в течение 30 минут. С целью подбора оптимального режима (чтобы специфическое окрашивание было интенсивным, а фоновое - минимальным) перед началом исследования мы провели пробную реакцию с различными разведениями первичных мкАТ со сроками инкубации. При стандартизации метода использовались отрицательные контроли из стандартного набора. На следующем этапе использовали вторичные антитела по авидин-биотин методике, при которой, биотин - содержащие вторичные антитела реагируют с молекулами стрептовидина, коньюгированными пероксидазой. В качестве хромогена применяли 3,3' - диаминобензидин (ДАВ). Препараты докрашивали гематоксилином и заключали в бальзам.
Методика морфометрического подсчета: Для определения относительной площади, занимаемой отдельными подгруппами клеток (окрашенных мкАТ) нами использована следующая методика: с помощью окулярной сетки при увеличении х 700, в 20 случайно выбранных полей зрения подсчитано число клеток, окрашенных мкАТ. При этом выбраны поля зрения, содержащие только гемопоэтическую и жировую ткань, а не костную ткань. В последующем для определения относительной площади (X) каждой подгруппы клеток, нами использована следующая формула:
Ч* - число клеток в 20 полях зрения; Ъ -площадь гемопоэтической ткани.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Распределение больных по группам риска ХМЛ произведено на основании прогностической модели ХМЛ ГНЦ-РАМН 92 (Н.Д.Хорошко, 1992). Согласно этой модели в момент установления диагноза к группе низкого риска отнесены 26 (50,0 %) больных, промежуточного риска - 20 (38,5 %), а высокого риска -6(11,5 %).
Клинико-гематологическая характеристика больных во время установления диагноза с учётом групп риска ХМЛ ГНЦ-РАМН 92 представлена в таблице 1.
Табл. 1:Клинико-гематологическая характеристика 52 больных ХМЛ во время установления диагноза с учётом групп риска ХМЛ ГНЦ-РАМН 92.__
Параметры Клинико-гематологическая характеристика M + m
Низкого риска п = 26 Промежуточного риска п = 20 Высокого риска п=6
Возраст 37 ±12 42 ±8 41 ±7
Гемоглобин г/л 121 ±14,9 114 + 17 86 ±11
Лейкоциты х 109/л 74 ±47 127 ±59 215 + 78
Тромбоциты х 109/л 370±153 535 ±302 388 ±221
Бласты % 0,6 ±0,8 1,9 ± 1,7 5,5 + 1,7
Эозинофилы % 2,3 х 1,7 2,7 ±1,7 3,3 ±2
Базофилы % 2,5 ± 1,8 4,3 ±2,5 6,2 ±2,9
Лимфоциты % 10 ±4,5 6,3 ±4,4 2,3 ±1,1
Моноциты % 3 ± 1,8 2,1 ±1,5 1,5 ± 1
Бласты в пунктатах % 2,3 ± 1,4 2,5 ±1,0 2,6 ± 1,4
Лимфоциты в 2,1 ±1,0 1,6 ±0,8 2,3 ±0,8
Селезенка * 1,9 ±2 5,5 ±5,5 14,0 ±9,0
Печень * 0,9 ±1 1,6 ± 1,4 3,3 ± 2,2
*-см из под края реберной дуги
Как видно из данных приведенной таблицы, наряду с ухудшением других клинико-гематологических признаков: снижение уровня гемоглобина, увеличение лейкоцитоза и процента властных клеток и базофилов в периферической крови и размеров селезенки и печени, по мере увеличения числа неблагоприятных прогностических признаков по категориям риска, одновременно отмечается снижение относительного количества лимфоцитов в периферической крови. В группе низкого риска, относительное количество лимфоцитов в среднем составило 10 + 4,5 % (от 2 до 24 %), в группе промежуточного риска-6,3 +4,4 % (от 1 до 26 %), а в группе высокого риска -2,3 + 1,1 % (от 1 до 5 %).
Анализ результатов терапии показал, что цитогенетический ответ во время взятия повторного трепанобиоптата развился у 36 больных (69,3%). При этом доля БЦО составила 26,9 % (14 больных), а МЦО - 42,4 % (22 больных). ЦОО -отсутствовал в 30,7 % (16 больных).
Нами сопоставлены результаты терапии и распределение больных по группам риска больных ХМЛ ГНЦ-РАМН 92.
Табл. 2: Сопоставление групп риска больных XMJ1 ГНЦ-РАМН 92 с последующим цитогенетическим ответом._
Группы риска больных ХМЛ ГНЦ-РАМН 92 Степень цитогенетического ответа
Большой Малый Отсутствует
Низкого риска п = 26 (%) 11 (42,3%) 10 (38,5%) 5(19,2 %)
Промежуточного риска п = 20 (%) 2 (10,0%) 10(50.0%) 8 (40,0 %)
Высокого I 1/1К7о/ч риска п = 6 (%) j ' (16,7 /о) 2 (33,3 %) 3 (50,0 %)
Коэффициент корреляции Спирмена = 0,343 (р=0,013)
По представленным данным (табл.2), наилучшие результаты получены у больных группы низкого риска, доля цитогенетического ответа в целом составила 80,8 %, а наихудшие у больных группы высокого риска - 50,0 %. При этом процент БЦО составил 42,3 % и 16,7 % соответственно. Таким образом, можно говорить о том. что выделение прогностических групп больных на основании прогностических критериев ХМЛ ГНЦ-РАМН 92, в большом проценте (коэффициент корреляции г = 0,343 (Р = 0,013)) отражает успех терапии IFN-ct. Однако, развитие цитогенетического ответа (50,0%), в том числе и большого (16,7%), в группе высокого риска, как и его отсутствие (19,2%) группе низкого риска заставляют искать дополнительные прогностические факторы.
На первом этапе гистологического исследования выполнена морфометрия определенных гистологических параметров в трепанобиоптатах больных ХМЛ взятых до лечения и на фоне терапии (табл. 3). Сравнительный анализ показал, что в трепанобиоптатах, взятых во время установления диагноза имело место увеличение площади, занятой гемопозтической тканью и относительной площади мегакариоцитов по сравнению с таковой в контрольной группе. Одновременно жировая ткань практически отсутствовала, что существенно ниже площади жировой ткани в контрольной группе. При анализе тех же параметров на фоне терапии отмечалось уменьшение площади гемопозтической ткани, и мегакариоцитов на фоне существенного увеличения жировой ткзни.
Табл 3 Результаты морфометрии трепанобиоптатов,
взятых до начала и на фоне терапии.
Гистологический параметр Время исследования Норма
До лечения п = 43 М±т % На фоне терапии п = 50 М±т %
Площадь гемопозтической ткани 80,7 ±7,3 61,1 ± 15,2 46,7+2,0
Площадь жировой ткани 0,6 + 0,5 20,1 + 14,6 24,1+1,9
Площадь костной ткани 19,6 ±6,4 20,5 + 6,3 1,6 ± 1.0 30.5+2,1 1^4+0,2
Относительная площадь мегакариоцитов 2,2 ±1,6
В результате сравнительного анализа состояния эритроидного ростка в первичных и повторных трепанобиоптатах, во первых показано существенное подавление эритроидного ростка на фоне развития ХМЛ, и во вторых его частичное или полное восстановление в большинстве случаев на фоне терапии (рис. 1). Во время установления диагноза резкое сужение эритроидного ростка отмечалось в большинстве случаев - 81,4 %. Умеренное сужение выявлено только в 16,3 %. Доля выявления умеренного сужения на фоне терапии составила 41,6 %, а эритроидный росток соответствовал норме в 39,6 % случаев.
сужение сужение □ До начала терапии пНа фоне терапии,
Рис. 1: Состояние эритроидного ростка до начала и на фоне терапии
Представляло
интерес сопоставить состояние эритроидного ростка в первичных трепанобиоптатах с последующим цитсгенетическим ответом (табл. 4).
Табл. 4; Состояние эритроидного ростка в первичных трепанобиоптатах и последующий цитогенетический ответ. ____
Состояние эритроидного ростка Цитогенетический ответ
Отсутствует Малый Большой
Нормальное л =1 (%) 1(100%) 0 (0 %) 0 (0 %)
Умеренно сужен п =7 (%) 1 (14,3 %) | 2 (28,6 %) 4(57,1 %)
Резко сужен п=35 (%) 11 (31,4%) 17 (48,6 %) 7 (20 %)
По представленным данным, цитогенетический ответ чаще всего- 85, 7 % развивается при наличии умеренного сужения эритроидного ростка в первичных трепанобиоптатах, по сравнению с наличием резкого сужения - 68,6 %. Более того, БЦО имел место в 57,1 % при умеренном сужении эритроидного ростка, напротив 20 % при резком сужении (р > 0,05).
Результаты сопоставления между состоянием эритроидного ростка в повторных трепанобиоптатах и степенью цитогенетического ответа представлены в таблице 5.
Табл. 5: Состояние эритроидного ростка в повторных трепанобиоптатах и
Состояние эритроидного ростка Цитогенетический ответ Р с3 . 0,22 с3 : 0,04
Большой Малый Отсутствует
Нормальное1 % 42,1 42,1 15.8
Умеренно сужен * % 20,0 45.0 35,0 с1 : 0,22 с3 : 0,35
Резко сужен13 % 0 55,6 44,4 с1 :0,04 с2 : 0,35
Сопоставление с цитогенетическим ответом показало, что в группе больных с нормальным эритроидным ростком цитогенетический ответ в целом развился в 84,2 % случаях, а БЦО в 42,1 %. В противоположность этому в группе резкого сужения цитогенетический ответ наблюдался в 55,6 % случаев. Необходимо указать, что при этом БЦО не развился ни при одном наблюдении. Таким образом, исходя из полученных данных, можно говорить о том, что выявление резкого сужения эритроидного ростка на фоне терапии 1РЫ-а служит показателем неуспешной терапии.
При исследовании трепанобиоптатов было уделено внимание гранулоцитарному (ГВ) и гранулоцитарно-мегакариоцитарному (ГМВ) варианту лейкозных инфильтратов ХМЛ, которые выделены и охарактеризованы подробно рядом авторов (Семенова Е.А, 1990; ВигкЬаП е{ а!, 1984; Оеогдп а1, 1980). По нашим материалам ГВ в первичных трепанобиоптатах выявлен в 79,5 % случаев, а ГМВ в 20,5 %. Относительная площадь мегакариоцитов при ГВ составила 1,4 ± 0,8, при ГМВ-2,7 ±2,3.
Так как по данным различных авторов ГМВ является плохим прогностическим признаком, представлялось интересным определить влияние гистологического варианта ХМЛ на результаты терапии,
Табл. 6: Сопоставление гистологического варианта ХМЛ в первичных трепанобиоптатах с цитогенетическим ответом.__
Гистологический Цитогенетический ответ
вариант ХМЛ Отсутствует Малый Большой Р
ГВ
% 25,7 % 51,4 % 22,9%
ГМВ Р=0,28
% 44,4 % 22,2% 33,3 %
Сопоставление гистологического варианта ХМЛ в первичных трепанобиоптатах с цитогенетическим вариантом (табл. 6) показало, что последний чаще всего развился у больных с ГВ (74,3 %), по сравнению с группой ГМВ (55,5 %). В то же время доля БЦО в данной группе составила 33.3% против 22,9 % при ГВ. (различия статистически не достоверные).
In vitro показано, что IFN-a обладает способностью подавлять рост колоний мегакариоцитарного ряда (Carlo-Stella et al, 1988; Ganser A et al, 1987), и таким образом теоретически существует возможность того, что на фоне терапии IFN-a развитие ГМВ должно приостановиться Освещение вопроса относительно возможного перехода одного гистологического варианта в другой показало, что в 9
случаях был отмечен переход ГВ в ГМВ. На фоне этого, у 5 больных цитогенетический ответ отсутствовал, у 3 развился МЦО, и только у 1 больного обнаружен БЦО. Переход ГМВ в ГВ выявлен только в 1 случае, при этом одновременно развился БЦО.
Таким образом, проведенное нами динамическое исследование серии трепанобиоптатов на фоне проводимой терапии стандартными дозами 1Р1\1-а, показало возможность перехода ГВ в ГМВ, который происходит чаще, чем обратные изменения. Однако полученные результаты позволяют предполагать, что ГМВ ХМЛ, ещё не означает безуспешность терапии.
При исследовании трепанобиоптатов больных ХМЛ на фоне терапии ^N-<1, в костном мозге обнаруживаются морфологические признаки редукции лейкозной популяции. Выраженная редукция была отмечена в 52 % случаев, а умеренная в 16 %. Отсутствие редукции, т.е. сохранение гистологических признаков ХМЛ мы выявили в 32 % случаев.
Анализ результатов сопоставления с цитогенетическом ответом (табл. 7) показал, что БЦО чаще всего - 85,7 % сочетается с выраженной редукцией по сравнению с группами МЦО - 57,2 % (р = 0,13) и отсутствием цитогенетического ответа - 13,3 % (р = 0,00005). Одновременно сочетание БЦО с отсутствием редукции не выявлено ни в одном наблюдении. Более того сочетание отсутствия цитогенетического ответа с отсутствием редукции имело место в 80,0 % (р = 0,00005).
Табл. 7: Сопоставление цитогенетического ответа и степени редукции
лейкозной популяции в повторных трепанобиоптатах .
Цитогенетический ответ Степень редукции лейкозной популяции р
Отсутствует Умеренная Выраженная
Большой1 п = 15 % 0 0% 2 14,3 % 12 85,7 % с2: 0,13 с3: 0,00005
Малый^ п = 21 % 4 19,0% 5 23,8 % 12 57,2 % с1: 0,13 с3: 0,013
Отсутствует-3 п = 14 % 12 80,0 % 1 6,7 % 2 13,3 % с1: 0,00005 с2: 0,013
По данным различных авторов миелофиброз (МФ) (Семенова Е.А., 1990, Thiele et al, 1996) оказывает отрицательное влияние на течение и результаты терапии ХМЛ. При изучении первичных трепанобиоптатов отсутствие МФ имело место у 36,9 % больных, очаговый ретикулиновый МФ у 34,8 %, и диффузный ретикулиновый МФ у 28,3 %. Грубый коллагеновый МФ не выявлен ни у одного больного.
При анализе клинико-лабораторных параметров (табл. 8) выявлены определенные закономерности. Возраст больных в группе отсутствия МФ меньше - 33 ± 11 лет по сравнению с группами очагового и диффузного ретикулинового МФ - 44 ± 7 и 42 ± 8 лет соответственно. В группе отсутствия МФ доля мужчин составила - 71,4 %, а женщин - 28, 6 %, в группах обнаружения МФ данное соотношение меняется в обратном направлении: доля женщин - 62 %, а мужчин -38 %. В группе диффузного ретикулинового МФ уровень гемоглобина - 100 ± 14
г/л, количество лимфоцитов - 4,8 ± 3,7 % и моноцитов - 1,0 х 0,4 %, что ниже по сравнению с группами отсутствия МФ и очагового ретикулинового МФ. С другой стороны, количество лейкоцитов - 177 ± 77 х 109/л, тромбоцитов - 526 ± 295 х 109/л и бластных клеток - 2,7 ± 2,6 % в периферической крови выше. Одновременно, анализ указывает, что по мере нарастания степени МФ, в частности при диффузном ретикулиновом МФ нарастают размеры селезенки - 10 ± 9,2 см и печени - 3 г 1,6 см. Таким образом, полученные нами данные указывают на то, что нарастание степени МФ коррелирует с ухудшением клинико-лабораторных параметров.
Табл. 8: Клинико-лабораторная характеристика больных в зависимости от
Клинико-лабораторные параметры Степень миелофиброза во время установления диагноза Коэффициент корреляции
МФО П = 17 ОРМФ п = 16 ДРМФ п= 13
Возраст 33 ± 11 44 ±7 42 ±8
Пол М/Ж 10/4 6/11 5/7
Селезенка см * 3,5 ± 3,2 1,8 ±2,2 ¡10 ±9,2 0,334
Печень см * 1.5 ± 1,2 0,5 ±0,7 3 + 1,6 0,283
Гемоглобин г/л I 119 ± 20 116 ï 15 100 ± 14 - 0,239
Лейкоциты х109/л J 83 ±51 94 ±67 177 ±77 0,433
Тромбоциты х10 9/л 469 ±258 414+177 526 ± 295 0,263
Бласты % 1,2 + 1,4 1,2+1,4 2,7+2,6 0,229
Эозинофилы % | 2,1 ±1,6 2,9 + 2,2 | 2,7 ±1,5 0,135
Базофилы % 3,3 ± 2,2 3,7 ±2,5 3,7 ±2,5 0,144
Лимфоциты % 8,7 ±5,1 8,6 + 4,2 4,8 ±3,7 -0,318
Моноциты % 2,8 ±1,2 3,1 ±1,8 1,0+0,4 i - 0,324
"-см из под края реберной дуги.
На основании полученных результатов при сопоставлении степени МФ во время установления диагноза и принадлежностью больных к различным группам риска больных ХМЛ ГНЦ-РАМН 92 можно говорить, о том, что между ними существует определенная корреляционная связь: по мере распределения по неблагоприятным прогностическим группам нарастает и процент выявления диффузного ретикулинового МФ от 9,1 % в группе низкого риска до 66,7 % в группе высокого риска, (коэффициент корреляции Спирмена составил: г = 0,499 (Р=0,0004) (табл. 9).
Табл. 9: Сопоставление степени миелофиброза в первичных трепанобиоптатах с группами риска ХМЛ (ГНЦ-РА1ШН 92).
Степень миелофиброза Прогностические группы больных ХМЛ Р
Низкий риск п = 22 % Промежуточный рискп =18 % Высокий риск п = 6 %
МФО ' п = 17 13 59,1 % 3 16,7 % 1 16,6 % с^: 0,14 с3: 0,0016
ОРМФ2 п = 16 7 31,8% 8 44,4 % 1 16,6% с' : 0,14 с 3:0,036
ДРМФ3 ! п —13 2 9,1 % 7 38,9 % 4 66,7 % с1: 0,0016 с2:0,036
Результаты сопоставления степени МФ в первичных трепанобиоптатах с последующим цитогенетическим ответом (табл. 10) указывают на то, что последний чаще всего - 88,2 % развивается при отсутствии МФ в первичных трепанобиоптатах, значительно реже - на фоне диффузного ретикулинового МФ -23,1 %. При очаговом ретикулиновом МФ цитогенетический ответ имел место в 81,3 % (коэффициент корреляции Спирмена г = 0,485 (Р = 0,0006)). Одновременно доля БЦО в этих же группах составила 35,3 %, 7,7 % и 25,0 ^соответственно. Таким образом, на основании собственных результатов можно говорить о том, что обнаружение диффузного ретикулинового МФ во время установления диагноза указывает на группу больных с плохим прогнозом.
Табл. 10: Сопоставление степени миелофиброза в первичных
Степень миелофиброза Цитогенетический ответ Р
Большой Малый Отсутству ет
МФО1 п = 17 6 (35,3 %) 9 (52,9 %) 2(11,8%) с*: 0,33 с3:
ОРМФ 2 л = 16 4 (25,0 %) 9 (56,3 %) 3(18,7%) с': 0,33 с3: 0,02
ДРМФ п = 13 1 (7,7 %) 2 (15,4 %) 10(76,9 %> с1: 0,0017
С другой стороны, сочетание цитогенетического ответа, в том числе и большого, с диффузным ретикулиновым МФ в первичных трепанобиоптатах указывает на необходимость более углубленного анализа с целью обнаружения более точных прогностических признаков. При проведении такого анализа мы остановились на сочетание степени МФ и гистологического варианта ХМЛ в первичных трепанобиоптатах. Результаты данного сопоставления показали, что наихудшее влияние на результаты терапии оказывает сочетание диффузного ретикулинового МФ и ГМВ (табл. 11).
Табл. 11:Влияние степени миелофиброза в сочетании с гистологическим
Цитогене тический ответ ГВ п = 35 ГМВ п = 9
Степень миелофиброза Степень миелофиброза
МФО ОРМФ ДРМФ МФО ОРМФ ДРМФ
ЦОО п,*= 9 п2* = 4 1* 11,1 % 3 33,3 % 5 55,6 % 0* 0% 0 0% 4 100 %
МЦО nt*= 18 Пг * = 2 7 38,9 % 9 50% 2 11,1 % 1 50% 1 50% 0 0%
БЦО п,*=8 п2* = 3 5 62,5 % 2 25% 1 12,5 % 1 33,3 % 2 66,7 % 0 0%
гн-к группе ГВ: Пг-К группе ГМВ:*-к числу данной группе
При сочетании диффузного ретикулинового МФ с ГМВ в первичных трепанобиоптатах больных ХМЛ в 100 % случаев цитогенетический ответ отсутствовал. Напротив, при сочетании диффузного ретикулинового МФ с ГВ отсутствие цитогенетического ответа имело место в 55,6 % случаях.
В настоящее время обсуждается вопрос относительно роли мегакариоцитов и факторов, вырабатываемых ими в развитии МФ (Саэ^о-Ма1азрюа Н, 1981). С целью изучения данного вопроса, нами сопоставлены различные степени МФ с гистологическими вариантами ХМЛ.
Табл. 12 Гистологические варианты ХМЛ и различные степени
Гистологический вариант ХМЛ Степень миелофиброза Р
МФО ОРМФ ДРМФ
ГВ п = 32 (%) 12(37,5%) 12 (37,5 %) 8 (25,0 %) Р = 0,49
ГМВ п = 9 (%) 2 (22,2 %) 3 (33,3 %) 4 (44,5 %)
Как видно из результатов, представленных в таблице 12 развитие МФ (очагового и диффузного ретикулинового) чаще имело место при ГМВ ХМЛ - 77,8 %, против 62,3 % при ГВ ХМЛ. Доля диффузного ретикулинового МФ при ГМВ составила- 44,5 %, против 25,0 % при ГВ. Очаговый ретикулиновый МФ встречался почти одинаково часто как при ГВ - 37,5 %, так и при ГМВ - 33,3 % (р > 0,05). Более того, в группе больных, у которых отмечен переход ГВ ХМЛ в ГМВ ХМЛ на фоне терапии IFN-a, в 5 случаях на фоне перехода усиление МФ не отмечено, в 1 случае наблюдали переход МФ из очагового в грубый коллагеновый, а также в 3 случаях его регрессию. Таким образом, полученные нами результаты, не позволяют говорить, что развитие МФ зависит от количества мегакариоцитов. По нашему мнению развитие МФ скорее всего зависит от степени атипии лейкозных мегакариоцитов.
Теоретически существует возможность, что IFN-a способен приостановить развитие МФ, так как in vitro подавляет рост мегакариоцитов и фибробластов, которые участвуют в развитии МФ (Carlo-Stella et al, 1988; Wang et al, 1992). Однако клинические данные, касающиеся развития/ прогрессирования МФ на фоне терапии IFN-a противоречивы. Одни авторы указывают на положительный
эффект терапии IFN-a (Wilhelm et а!, 1998), а другие (Thiele et al, 2000) отрицают это.
Нами изучены в динамике трепанобиоггтаты от 41 больного ХМЛ с целью оценки влияния терапии IFN-a (стандартные дозы) на развитие и прогрессирование МФ (табл. 13). Срок наблюдения в среднем составил 16,6 ±4,9 мес. (от 5 до 36 мес.).
13: Эволюция миелос зиброза на фоне терапии IFN-a.
Степень МФ в 1м трепанобиоптате Степень миелофиброза в 2м трепанобиоптате
МФО ОРМФ ДРМФ КМФ
МФО п = 14 * 13 92,9 % * 1 7,1 % 0 0% 0 0%
ОРМФ п = 16 8 47,1 % 6 37,5 % 1 5,9 % 1 5,9 %
ДРМФ п= 11 3 27,3 % 3 27,3 % 5 45,4 % 0 0%
- к числу данной группы
На фоне терапии ^N-0. прогрессия МФ обнаружена только в 3 случаях, что составило -7,3 %. В группе больных с отсутствием МФ в первичных трепанобиоптатах в 1 случае (7,1 %) отмечен переход в очаговый ретикулиновый МФ, который сопровождался развитием БЦО. В группе больных с очаговым ретикулиновым МФ, отмечены 1 случай (5,9 %) перехода в диффузный ретикулиновый МФ и 1 (5,9 %) в грубый коллагеновый МФ. В обоих наблюдениях цитогенетический ответ отсутствовал.
Регрессия МФ выявлена у 14 больных (34,2 %). В группе пациентов с очаговым ретикулиновым МФ в первичных трепанобиоптатах, отсутствие МФ в повторных трепанобиоптатах выявлено в 8 случаях (47,1 %). При этом цитогенетический ответ распределился таким образом: БЦО- 3 наблюдения, МЦО - 4, отсутствие -1 наблюдение. В группе диффузного ретикулинового МФ отмечены 3 случая (27,3 %) перехода в очаговый ретикулиновый МФ без развития цитогенетического ответа, и 3 случая (27,3 %) ухода МФ, при этом БЦО выявлен у одного, а МЦО - у 2 больных.
При сопоставлении степеней МФ в повторных трепанобиоптатах и цитогенетического ответа (рис. 2) были получены следующие результаты. В группе отсутствия МФ процент цитогенетического ответа составил 91,7 %, при этом БЦО-37,5 %. Цитогенетический ответ отсутствовал в 8,3 % случаях. Обнаружение очагового ретикулинового МФ в 63,6 % случаев сопровождалось развитием цитогенетического ответа, а доля БЦО составила 18,2 %. При обнаружении диффузного ретикулинового МФ или грубого коллагенового МФ в 100 % наблюдений цитогенетический ответ отсутствовал (коэффициент корреляции г = 0,41 (р = 0,003)), что по нашему мнению указывает на неэффективность терапии.
Грубый 1 коллагеновый'
100
Диффузный | ретикулиновый *
100
Очаговый ретикулиновый
18,21,: - ш
36,4
МФ отсутствует
:-5Я ■
8,3
О 20 40 60 80 100 120 ВБЦО ОМЦО ОЦОО
Рис. 2: Сопоставление степени миелофиброза в повторных
трепанобиоптатах с цитогенетическим ответом.
Сравнительный анализ пролиферативного уровня лейкозной популяции, оцениваемый с помощью мкАТ антител РСЫА и № 67, в первичных и повторных трепанобиоптатах указал на снижение уровня данного параметра на фоне терапии: в первичных трепанобиоптатах составил в среднем 36,8 ± 3,5 % (от 7,1 % до 88,7 %), напротив 23,0 ± 2,0 % (от 4,6 % до 54,5 %) на фоне терапии.
Сопоставление между уровнем пролиферации лейкозной популяции в первичных трепанобиоптатах со степенью последующего цитогенетического ответа раскрыло наличие корреляции между данными параметрами (г = 0,821 (р = 0,000000)). БЦО сочетался с высоким уровнем пролиферации лейкозной популяции в первичных трепанобиоптатах - 57,2 ± 4,5 %, а в группе отсутствия цитогенетического ответа отмечался самый низкий уровень пролиферации - 15,3 ± 2,1 %. Полученные результаты позволили нам рекомендовать изучение данного параметра для подбора пациентов ХМЛ, подлежащих лечению 1Р1Ч. Сравнение пролиферативного уровня лейкозной популяции в первичных и повторных трепанобиоптатах показало уменьшение данного парамметра только в группах БЦО - от 57,2 ± 4,5 % до 22,1 ± 3,2 % (р < 0,05), и МЦО - от 37,5 ± 3,7 % до 24,6 ± 2,8 % (р < 0,05) (табл. 6.1). Корреляции между уровнем пролиферации в повторных трепанобиоптатах и достигнутым цитогенетическим ответом не выявлена (г = 0,000). С другой стороны выявлена корреляция между изменением уровней пролиферации лейкозной популяции в первичных и повторных трепанобиоптатах и достигнутым цитогенетическим ответом (г = 0,667) (табл. 14).
Табл 14: Уровень пролиферации ХМЛ популяции в первичных и повторных трепанобиоптатах и последующий цитогенетический ответ____________________________
Цитогене-тический ответ Уровень пролиферации Изменения уровня пролиферации между 1-
В первичных трепанобиоптатах М±ш Min...Мах Достоверность различий уровня пролиферации в первичных трепанобиопта тах с другими В повторных трепанобиоптатах М±т Min... Мах Достоверность различий первичных и повторных трепанобиопта тов (р) М±т Min...M ах Достоверность различий изменения уровня пролиферации с другими группами (р)
БЦО п = 9 57,2 + 4,5 41,2... 88,6 с МЦО: 0,033 с ЦОО: 22,1 ± 3,2 13,2...41,7 0,003 -36,1 ± 7,0 с МЦО: 0,018 с ЦОО:
МЦО п = 14 3705 + 3,7 10,6..68,6 с БЦО: 0,033 с ЦОО: 24,6 ± 2,8 9,4... 4507 0,036 -12,8 ±5,5 с БЦО: 0,018 с ЦОО: 0,019
ЦОО п = 9 15,3 ± 2,13 7...27,5 с БЦО: 0,000000 с МЦО: 0,00024 21,2 ±4,9 4,6..54,4 0,11 5,9 ±3,4 10,9.2 6,9 с БЦО: 0,00005 с МЦО: 0,019
Коэффициент корреляции (Спирмена) составил:
• между уровнем пролиферации в первичных ТБ и последующим цитогенетическим ответом г = 0,821 (р=0,000000)
• между уровнем пролиферации в повторных ТБ и достигнутым цитогенетическим ответом г = 0,000 (корреляция отсутствует)
• между изменением уровней пролиферации в первичных и повторных ТБ и достигнутым цитогенетическим ответом г = 0,667 (р=0,00003)
1РМ-а относится к модуляторам биологического ответа, т.е. обладает способностью активизировать защитные механизмы организма против опухоли. В литературе имеются данные, указывающие на роль иммунно-опосредованный эффект 1Р№-а при развитии цитогенетического ответа (Рау/е1ес е! а1, 1995; БассЫ е{ а1, 1997; Мезэеп-Ое^аП а1, 1994).
Табл. 15:Изменения субпопуляций лимфоцитов до начала и на фоне
терапии.
Клеточные субпопуляции Первичные трепанобиоптаты М±т Повторные трепанобиоптаты М + т Достоверность различий Р
СОЗ+ 0,62 ± 0,064 3,3 ±0,42 Р = 0,000000
СЭ4+ 0,85 ±0,066 2,98 + 0,47 Р = 0,000045
СО 8+ 0,77 ± 0,069 3,11+0,52 Р = 0,000037
СО 20+ 0,18 + 0,037 1,37 ±0,30 Р = 0,00044
1МК+ 0,64 ±0,064 1,5 ±0,28 Р = 0,002
При сравнении с первичными трепанобиоптатами (табл. 15), в повторных трепанобиоптатах, взятых на фоне терапии 1РМ-а отмечается увеличение всех субпопуляций лимфоцитов, участвующих, как в клеточном, так и в гуморальном звеньях иммунитета (различия достоверны).
Учитывая увеличение всех субпопуляций лимфоидных клеток на фоне терапии, следующий этап заключался в; 1 - охарактеризовать изменения, которые претерпевают отдельные субпопуляции лимфоцитов на фоне терапии 1РМ- а, в зависимости от цитогенетического ответа; 2 - определить возможную прогностическую роль отдельных субпопуляций лимфоцитов.
На основании представленных результатов (табл. 16) можно говорить о наличии корреляционной связи между количеством СО 4+ (г = 0,56 (р = 0,0007)), и СО 8+ Т-лимфоцитов (г = 0,43 (р = 0,014)), и МК+-кпеток (г = 0,69 (р = 0,00001) в первичных трепанобиоптатах и степенью последующего цитогенетического ответа. Данные субпопуляции в группе последующего БЦО были самые высокие, по сравнению с группой МЦО и особенно с группой отсутствия цитогенетического ответа.
Табл. 16: Распределение результатов иммуногистохимического окрашивания и морфометрии субпопуляций лимфоцитов по группам цитогенетического ответа (ЦО).
Субпопуляции лимфоцитов Цитогенетический ответ (ЦО) Коэффициент кореляции г (р)
БЦО п = 9 МЦО п = 14 ЦОО п = 9 ЦОс уровнем в 1-м трепаноб-иоптате ЦОс уровнем в 2-м трепаноб-иоптате
До начала терапии М + т На фоне терапии М + т До начала терапии М ±т На фоне терапии М±т До начала терапии М ±т На фоне терапии М + т
СО 3+ 0,62 ±0,12 5.76 ±0,51 0,67 ± 0,083 2,6 ±0,44 0,53 ±0,14 2,19 ±0.78 0,09 (0,58) 0,46 (0,007)
СО 4+ 1,16 ±0,09 5,77 ±0,86 0,77 ± 0,089 2,8 ±0,56 0,64 ± 0,12 0,79 ± 0,21 0,56 (0,0007) 0,67 (0,00002)
СО 8+ 0,95 ±0,14 6,3 ±0,67 0,8 ±0,10 2,37 ± 0,57 0,54 ±0,096 1,42 ± 0,74 0,43 (0,014) 0,55 (0,001)
СО 20+ 0,09 ± 0,047 2,48 ± 0,92 0,28 ± 0,066 1,4 ±0,35 0,12 ±0,054 0,36 ± 0,15 0,05 (0,78) 0,53 (0,002)
ЫК + 1.02 ±0,065 3,0 ±0,79 0,55 ± 0,079 1,28 ±0,23 0,4 ± 0,096 0,53 ± 0,85 0,69 (0,00001) 0,56 (0,0009)
Похожая тенденция обнаружена при сравнении показателей субпопуляций лимфоцитов в повторных трепанобиоптатах со степенью цитогенетического ответа. По мере усиления степени цитогенетического ответа одновременно отмечается увеличение количество показателей всех исследуемых субпопуляций. В группе БЦО имели место самые высокие показатели, а в группе отсутствия цитогенетического ответа самые низкие. Таким образом, полученные нами результаты по нашему мнению являются подтверждением участия иммуно-опосредованного эффекта именно 1РЫ-а в достижении цитогенетического ответа, так как Ага-С обладает только антипролиферативным действием при ХМЛ и является известным иммунодепресантом (Бока! е( а1, 1987).
Так как генез МФ по-видимому комплексный, интересно установить возможную связь между содержанием различных субпопуляций лимфоцитов и МФ. С этой целью, нами сопоставлены различные субпопуляции лимфоцитов со степенью МФ в первичных трепанобиоптатах (табл. 17.).
Табл. 17: Сопоставление субпопуляций лимфоцитов со степенью
миелофиброза в первичных трепанобиоптатах больных ХМП.
Субпопуляции лимфоцитов Степень миелофиброза Коэффициент корреляции Я
МФО п = 11 ОРМФ п = 12 ДРМФ п = 9
СОЗ+ 0,57 ±0,09 0,79 ±0,12 0,42 + 0,06 0,14 (р = 0,44)
СО 4+ 0,89 ±0,13 0,84 ±0,10 0,79 ±0,13 0,08 (р = 0,08)
СО 8+ 0,75 ±0,07 0,81 ±0,12 0,74 ±0,17 0,10 (р = 0,38)
СО 20+ 0,24 ±0,09 0,19 + 0,05 0,09 ± 0,03 0,13 (Р = 0,58)
1МК + 0,67 + 0,11 0,72 + 0,11 0,49 ± 0,09 | (р%345]
Доверительные различия Р > 0,05 Р > 0,05 Р > 0,05 |
При анализе полученных результатов не выявлено, какой либо связи между показателями субпопулиций лимфоцитов и степенью МФ.
Учитывая полученные результаты о прогностической значимости отдельных морфологических параметров во время установления диагноза, предпринята попытка с помощью статистической системы - многофакторной линейной регрессии выделить те факторы, которые оказывают наибольшее влияние (положительное или отрицательное) на результаты терапии стандартными дозами 1РЫ-а.
На основании статистической обработки данных, выбраны пять параметров, которые влияют на степень цитогенетического ответа на фоне терапии 1РЫ-а (представлены в формуле). Положительное влияние оказывают уровень пролиферации ХМЛ популяции, количество СО 4+ и СО 8+ Т-пимфоцитов, а отрицательное влияние степень МФ и количество СО 20+ В-лимфоцитов.
ЦО = 2,91-(0,0232 х уровень пролиферации)-(0,4868 х СО 8 +)-(0,2713 х СО 4+)+(0,2358 х степень МФ)+(0,4922 х СО 20+), где
(ЦО - цитогенетический ответ
Степень МФ - отсутствует = 1; очаговый ретикулиновый = 2; диффузный ретикулиновый = 3)
На основании данной формулы нами выделены три группы ожидаемого цитогенетического ответа на фоне терапии 1РЫ-а: группа БЦО < 1,5, группа МЦО > 1,5 £ 2,5 и группа ЦОО > 2,5. При приложении этих групп к собственным материалам (группа из 32 больных) больные распределились следующим образом: к группе ожидаемого БЦО - 11 больных, к группе МЦО - 12, а к группе отсутствия ЦО - 9 больных. Сопоставление с результатами терапии показало, что процент совпадения для группы БЦО составил 72,7 %, для МЦО-83,4%, а для группы отсутствия ЦО - 88,9 %.
Таким образом, в результате предпринятых нами исследований показана целесообразность комплексного изучения гистоморфологической картины ХМЛ с целью прогнозирования и оценки эффективности терапии стандартными дозами )РЫ-а с высокой долей вероятности.
ВЫВОДЫ
1. Комплексный анализ гистоморфологической картины костного мозга больных хроническим миелолейкозом до начала программной терапии (стандартные дозы интерферона-альфа- 5 МЕ/м2 день) в сочетании с малыми дозами цитазин-арабинозида (10 мг/м2 х 2 раза в день, 10 дней каждого месяца) позволяет с высокой долей вероятности предсказать успех терапии.
2. Повторная оценка гисгтоморфологических параметров, таких как состояние зритроидного ростка, степень миелофиброза и редукции лейкозной популяции на фоне терапии стандартными дозами интерферона-альфа позволяет оценить эффективность терапии.
3. Определение уровня пролиферации лейкозной популяции в трепанобиоптатах больных хроническим миелолейкозом, с помощью моноклональных антител РСЫА и К'| 67, до лечения обладает прогностической ценностью, так как в последующем коррелирует со степенью цитогенетического ответа (г = 0,821 (р = 0,000000)). При достижении положительного терапевтического эффекта на фоне терапии имеет место антипролиферативный эффект, поскольку отмечается снижение уровня пролиферации лейкозной популяции с 36,8 ± 3,5 % до 23,0 ±2,0%.
4. Во время установления диагноза значения СО 4+, СО 8+ лимфоцитов и ЫЮ-кпеток, выявляемых иммуногистохимическим методом в трепанобиоптатах больных хроническим миелолейкозом, имеют прогностическую ценность, так как они коррелируют со степенью последующего цитогенетического ответа. Иммуно-опосредованный эффект интерферона-альфа играет существенную роль в достижении цитогенетического ответа.
5. Диффузный ретикулиновый миелофиброз, выявляемый в момент установления диагноза у больных хроническим миелолейкозом является неблагоприятным прогностическим признаком.
6. На фоне терапии стандартными дозами интерферона-альфа, миелофиброз не усиливается, а также при успешной терапии возможна его регрессия.
7. Большой цитогенетический ответ достижим и при гранулоцитарно-мегакариоцитарном варианте хронического миелолейкоза, хотя терапия
стандартными дозами интерферона-апьфа не предотвращает переход гранулоцитарного в гранупоцитарно-мегакариоцитарный вариант.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1- Семенова Е.А., Кумас С. Патоморфоз хронических миелопролиферативных заболеваний при терапии препаратами интерферона по данным трепанобиоптатов костного мозга. Проблемы гематологии и трансфузиологии 2000, № 4: 59-60
2- Хорошко Н.Д., Туркина А.Г., Кузнецов С.В., Соколова М.А., Захарова А В., Домрачева Е.В., Журавлев B.C., Кумас С., Круглов С.С. Хронический миелолейкоз - успехи современного лечения и перспективы. Гематология и трансфузиология, 2001, № 4: 4-8
3- Koumas S., Semenova Е.А., Turkina AG, Khoroshko N.D., Frank G.A. Immunohistochemical research of populations of lymphocytes and Fas antigen in trephine biopsies of patients with Ph+ CML under IFN-a therapy. The Hematology journal, Volume 1, Supplement 1, June 2000; p 87
4- Koumas S., Semenova E.A., Turkina A.G., Khoroshko N.D., Frank G.A. Bone marrow fibrosis in chronic myelogenous leukemia and cytogenetic response during IFN-alpha therapy. The Hematology Journal, Volume 1, Supplement 1, June 2001; p 21
Список сокращений:
БЦО- большой цитогенетический ответ
ГВ- гранулоцитарный вариант
ГМВ- гранулоцитарно-мегакариоцитарный вариант
ГНЦ РАМН- Гематологический научный центр Российской академии
медицинских наук ДРМФ- диффузный ретикулиновый миелофиброз ИРФ-1/2- интерферон регулирующий фактор КМФ- коллагеновый миелофиброз мкАТ- моноклональные антитела МФ- миелофиброз МФО- миелофиброз отсутствует МЦО- малый цитогенетический ответ ОРМФ- очаговый ретикулиновый миелофиброз ХМЛ- хронический миелолейкоз
ХМЛ-МИГ 97- хронический миелолейкоз Московская исследовательская группа
ЦОО- цитогенетический ответ отсутствует РЫ-а- интерферон-альфа
24
Благодарности:
Автор исключительно благодарен моим наставникам - проф. д.м.н. Нине Дмитриевне Хорошко и проф. д.м.н. Георгию Азраамовичу Франку. Хотелось бы выразить особую благодарность ведущему научному сотруднику клиники химиотерапии лейкозов и патологии зритрона д.м.н. Туркиной А Г., и коллегам-врачам отделения, оказавшим неоценимую помощью в сборе клинических данных, создавших обстановку доброжелательности и заинтересованности в результатах проводимых исследований. Выполнение данной работы было бы невозможным, без чрезвычайно важной методической и практической помощи научных сотрудников и лаборантов Лаборатории патологической анатомии ГНЦ РАМН, и особенно к.м.н. Семеновы Е.А., и к.м.н. Капланской И.Б. Особую благодарность хотелось бы выразить с.н.с. лаборатории цитогенетики ГНЦ РАМН к.м.н. Захаровой A.B., и моим рецизентам д.м.н, Сарычевой Т.Г. и к.м.н. Менделеевой Л.П. за ценные советы и исправления, а также Зингерману Б.В. за статистическую обработку полученных данных.
Оглавление диссертации Кумас, Сотирис Морфи :: 2002 :: Москва
Список сокращений 5
Введение 7
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Клиническая, патогенетическая, патоморфологическая и иммунологическая характеристика хронического миелолейкоза в условиях современной терапии интерфероном-альфа
1 1 Клинические проявления и прогностические критерии при хроническом миелолейкозе 11
1 2 Пролиферация и апоптоз при хроническом миелолейкозе 17
1 3 Адгезия клеток-предшественников при хроническом миелолейкозе
14 Патогистологическая картина хронического миелолейкоза в условиях современной терапии интерферон-альфа 21
1 5 Иммунная система при хроническом миелолейкозе 35
1 6 Механизмы действия интерферона-альфа при хроническом миелолейкозе 40
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 21 Характеристика больных, прогностические модели и режим терапии 50
2 2 Гистологическое исследование костного мозга 53-55 2 3 Иммуногистохимическое исследование трепанобиоптатов больных хроническим миелолейкозом 56
ГЛАВА 3. КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕРАПИИ
31 Распределение больных хроническим миелолейкозом по прогностическим группам и клинико-лаборатопцая характеристика 58
3 2 Результаты терапии стандартными дозами интерферона-альфа 61 об
3 3 Анализ цитогенетических ответов в зависимости от количества лимфоцитов в периферической крови и в пунктатах костного мозга 66
ГЛАВА 4. ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРВИЧНЫХ И ПОВТОРНЫХ ТРЕПАНОБИОПТАТОВ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕ-ЛОЛЕЙКОЗОМ
4 1 Общая характеристика трепанобиоптатов больных хроническим миело-лейкозом 72-73 4 2 Эритроидный росток 73-77 4 3 Гистологические варианты хронического миелолейкоза 77-83 4 3 Редукция лейкозной популяции на фоне терапии стандартными дозами га-а 83
ГЛАВА 5. МИЕЛОФИБРОЗ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ НА ФОНЕ ТЕРАПИИ ИНТЕРФЕРОНА-АЛЬФА
5 1 Частота выявления и характер миелофиброза в первичных трепаноби-оптатах больных хроническим миелолейкозом 89
5 2 Влияние миелофиброза на результаты терапии и его прогностическая роль при лечении хронического миелолейкоза стандартными дозами интерферона-альфа 91-97 5 3 Сопоставление миелофиброза с другими гистологическими параметрами
5 4 Эволюция миелофиброза на фоне терапии интерферона-альфа 99
ГЛАВА 6. ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРЕПАНОБИОПТАТОВ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ 61 Уровень пролиферации лейкозной популяции до начала терапии и на фоне лечения интерферона-альфа 105
6 2 Иммуногистохимическое исследование субпопуляций лимфоцитов с помощью моноклональных антител в трепанобиоптатах больных хроническим миелолейкозом 111-113 6 3 Субпопуляции лимфоцитов при разных цитогенетических ответах, и их прогностическая роль 113-115 6 4 Результаты сопоставления субпопуляций лимфоцитов с другими гистологическими параметрами 115
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 123
ВЫВОДЫ 144
Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Кумас, Сотирис Морфи, автореферат
Актуальность вопроса
Оценка эффективности терапии хронического миелолейкоза (ХМЛ) препаратами интерферона-альфа (ПТЧ-а) определяется развитием цитогене-тического ответа, в частности большого (полного и частичного), который в свою очередь определяет длительность хронической фазы ХМЛ и выживаемость больных.
5 настоящее время общепризнанно, что применение 1Р\-« в терапии хронического миелолейкоза пролонгирует выживаемость больных. Результаты четырёх рандомизированных исследований [28,163,164,261,335,336] и одного мета-анализа [85] показали, что ПТ^-а удлиняет выживаемость больных примерно на 20 мес, в сравнении с бусульфаном (миелосаном) и с гидроксимочевиной в зависимости от групп риска во время установления диагноза [156,164,261,333,335,336] Десятилетняя выживаемость больных из группы низкого риска составляет в целом 40 %, и возрастает до 65-80% дня тех пациентов, которые достигли полного цитогенетического ответа [161] Существующие клинические данные указывают на наличие связи между дозами ШЯ-а, времени начала терапии (ранняя хроническая фаза - в течение 6 мес от диагноза) и результатами терапии [27] Добавление малых доз цитозин-арабинозида (Ага-С) в программе терапии еще более увеличивает частоту цитогенетических ремиссий и выживаемость [156,357] Таким образом, терапевтические подходы при ХМЛ изменились от контроля гематологических проявлений болезни к подавлению опухолевого клона.
Хотя эффективность П^Ы-а в терапии ХМЛ четко доказана, до сих пор точный механизм достижения терапевтического эффекта до конца не известен. Накопленные экспериментальные и клинические данные указывают на участие различных механизмов: прямого антипролиферативного эффекта [51,146], активации отДельйых звеньев иммуннЬЙ системы
247,262,273,275,293], нормализации адгезии XMJ1 предшественников к стромальным элементам [51,55], запуска апоптоза XMJ1 клеток [305].
В настоящее время для прогнозирования течения хронического мие-лолейкоза и ответа на терапию предложены и используются различные прогностические модели [18,161,182,184,317]. Однако сопоставление между прогнозом и результатами терапии часто указывает на их несоответствие. Более того, ни в одной из прогностических систем не учитываются параметры гистологической картины костного мозга, хотя в литературе встречаются сообщения о прогностической ценности отдельных гистологических параметров [10,338,343] В то же время, роль изучения гистоморфологиче-ской картины хронического миелолейкоза в оценке эффективности терапии IFN-a до настоящего времени не определена.
Хотя в настоящее время, предложены различные факторы, с помощью которых можно в определенной степени предсказать ответ на терапию IFN-a (уровень STAT протеина [216], ИРФ-1 и ИРФ-2 протеинов [389], достижение полной гематологической ремиссии в течение первых 3 месяцев после начала терапии [380]), до конца данный вопрос не решен Более того, часть выше описанных прогностических факторов не вошли в широкую клиническую практику или оценка эффективности происходит через определенное время С другой стороны, учитывая стоимость терапии IFN-a, частоту побочных эффектов по сравнению с другими средствами в частности с гидроксимочевиной, также как и появление новых агентов типа STI 571, роль выявления факторов, определяющих прогноз и эффективность терапии IFN-a возрастает
В связи с этим, учитывая тот факт, что всем больным, вошедшим в протокол XMJI МИГ-97 с использованием стандартных доз IFN-a 2b (Ин-трон А - 5 МЕ/м2 подкожно, ежедневно) во время установления диагноза также, как и на фоне терапии производилась трепанобиопсия, представляло интерес выявить те или иные особенности гистологической картины, с помощью которых можно внести определенный вклад в прогнозирование и оценку эффективности терапии.
Целью настоящей работы является выявление факторов, определяющих прогноз и эффективность терапии стандартными дозами 1ГО-а, в гистологических препаратах больных ХМЛ.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
1. Обосновать значение гистологических параметров в качестве прогностических критериев эффективности терапии 1Ш-а
2. Сопоставить гистологическую картину на фоне терапии №N-0 с глубиной цитогенетического ответа.
3. Определить влияние терапии ПЫ-а на миелофиброз.
4. Изучить с помощью иммуногистохимии уровень пролиферации лей-козной популяции, и отдельные субпопуляции лимфоцитов»
Научная новизна В результате сравнительного изучения трепаноби-оптатов больных ХМЛ, взятых во время установления диагноза и на фоне терапии 1РМ-а (Интрон А), показано важное значение отдельных гистологических параметров - степени миелофиброза, состояния эритроидного ростка и степени редукции лейкозной популяции, в качестве факторов, определяющих прогноз и эффективность терапии стандартными дозами 1Ш-а. Изучение трепанобиоптатов, взятых на фоне терапии ШЫ-а, позволило охарактеризовать морфологические проявления терапевтического патомор-фоза ХМЛ. Кроме того, доказано, что на фоне терапии 1Ж-а миелофиброз не прогрессирует.
С помощью иммуногистохимии изучены отдельные субпопуляции лимфоцитов и уровень пролиферации лейкозной популяции, что позволило осветить некоторые аспекты противолейкозного эффекта ШЛ-а при ХМЛ. Более того, установлена прогностическая ценность данных параметров для подбора больных, подлежащих терапии стандартными 1ГО-а.
Научно-практическое значение.
6 результате проведенной работы предложены гистоморфологические признаки, позволяющие прогнозировать и оценивать эффективность терапии стандартными дозами IFN-a больных XMJI
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы.
Апробация работы. Настоящая работа является фрагментом темы, выполняемой по плану НИР ГНЦ РАМН «Сравнение эффективности программ терапии хронического миелолейкоза на основе альфа-интерферона и химиотерапии под контролем молекулярно-биологического и иммунологического мониторинга» (№ Госрегистрации 01980001157). Работа апробирована 19.11.2001 г. на заседании проблемной комиссии ГНЦ РАМН «Гемо-бластозы и депрессия кроветворения». Основные положения диссертации доложены на 2 научных конференциях: Международной школе гематолога (Переделкино, 2000 г.); на пятой встрече Европейской гематологической ассоциации (Бирмиген, 2000 г.).
Объём и структура работы. Диссертация изложена на 199 страницах. Состоит из введения, 6 глав, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения. В работе 38 таблиц, 10 рисунков и 24 микрофотографий. Диссертация выполнена в клинике химиотерапии лейкозов и патологии эритрона (руководитель - д м.и. проф. Н.Д. Хорошко) Гематологического Научного Центра РАМН (директор - академик РАН, профессор А.И. Воробьев). Гистологическое и иммуногистохимическое исследования костного мозга проводились в лаборатории патологической анатомии ГНЦ РАМН (руководитель - д м.н. проф. Г А Франк). Цитогене-тический анализ осуществлялся в лаборатории цитогенетики ГНЦ РАМН с.н.с. к.м.н. Захаровой A.B. (руководитель- д м.и. Домрачева Е.В.). Клиническое ведение больных осуществлялось совместно с в.н.с. д.м.н. Туркиной А.Г.
Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка эффективности интерферонотерапии при хроническом миелолейкозе по данным гистоморфологического исследования"
144 ВЫВОДЫ
1. Комплексный анализ гнстоморфологической картины костного мозга больных хроническим миелолейкозом до начала программной терапии (стандартные дозы интерферона-альфа (5 МЕ/м2 день) в сочетании с малыми дозами цитазин-арабинозида (10 мг/м2 х 2 раза в день, 10 дней каждого месяца)) позволяет с высокой долей вероятности предсказать успех терапии.
2. Повторная оценка гистоморфологических параметров, таких как состояние эритроидного ростка, степень миелофиброза и редукции лейкозной популяции на фоне терапии стандартными дозами интер-ферона-альфа позволяет оценить эффективность терапии
3. Определение уровня пролиферации лейкозной популяции в трепано-биоптатах больных хроническим миелолейкозом, с помощью моно-клональных антител РСЫА и К167, до лечения обладает прогностической ценностью, так как в последующем коррелирует со степенью цитогенетического ответа (г = 0,821 (р = 0,000000)). При достижении положительного терапевтического эффекта на фоне терапии имеет место антипролиферативный эффект, поскольку отмечается снижение уровня пролиферации лейкозной популяции с 36,8 ± 3,5 % до 23,0 ■ 2,0 %.
4 Во время установления диагноза значения СО 4+, СО 8+ лимфоцитов и КК ■ -клеюк. выявляемых иммуногистохимическим методом в тре-панобиоптатах больных хроническим миелолейкозом, имеют прогностическую ценность, так как они коррелируют со степенью последующего цитогенетического ответа. Иммуно-опосредованный эффект интерферона-альфа играет существенную роль в достижении цитогенетического ответа.
5 Диффузный ретикулиновый миелофиброз, выявляемый в момент установления диагноза у больных хроническим миелолейкозом является неблагоприятным прогностическим признаком
6 На фоне терапии стандартными дозами интерферона-альфа, миелофиброз не усиливается, а также при успешной терапии возможна его регрессия
7 Большой цитогенетический ответ достижим и при гранулоцитарно-мегакариоцигарном варианте хронического миелолейкоза, хотя терапия стандартными дозами интерферона-альфа не предотвращает переход гранулоцитарного в гранулоцитарно-мегакариоцитарный вариант
146
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Кумас, Сотирис Морфи
1. Абдулкадыров K.M., Рукавицин O.A., Моисеев С.И., Ругаль В.И.: Сравнительный анализ влияния терапии а2-интерфероном (реафероном) на морфофункциональное состояние костного мозга у больных хроническим миелолейкозом. Гематол. и трансфузиол., 1993;3:11-13
2. Волкова М.А.: Клинико-патогенетические основы современной терапии хронических лейкозов. Дис. докт. мед. наук, М., 1975
3. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д.: « Хронический миелолейкоз ». В кн. Руководство по гематологии. М. Москва, 1985, т. 1, с. 234-244
4. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д.: В кн. Руководство по гематологии. М. Москва, 1985, т. 1,с. 58-59
5. Дульцин М.С., Климова Н.Ф., Чернцова Т А., Захарова A.B.: Идиопатиче-ский миелофиброз и вторичный миелофиброз при хроническом миело-лейкозе. Пробл Гематол и Перелив Крови, 1967;1:12-23
6. Климова Н.Ф.: Особенности течения хронического миелолейкоза с развитием миелофиброза в условиях цитостатической терапии. В сб. "Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии" М.,1974;с.143-144
7. Неменова Н.М., Протасова Т.Г. К патологической анатомии миелофиброза. Тер Архив, 1974;8 29-35
8. Османлиев П.Д.: К вопросу о нормальной гистологической картине костного мозга человека. Пробл гематол и перел крови, 1961 ;5:22-27
9. Ругаль В.И., Абдулкадыров K.M.: Гистоморфометрия структур кроветворного микроокружения костного мозга подвздошной кости Гематология и трансфузиология, 1985;7:41-45
10. Ю.Семенова Е.А.: Патоморфологические проявления хронического миелолейкоза в динамике течения заболевания. Автореф. канд. дисс Лениград, 1990, с.23
11. П.Семенова Е.А., Хохлова М П., Хорошко Н.Д., Невская Т.П., Туркина А.Г.: Гистологические варианты хронического миелолейкоза и их клиническое значение. Гематол. и трансфузиол., 1988;3:24-28
12. Серов В В., Шехтер А.Б.: Соединительная ткань. М. Медицина, 1981
13. Соколова М.А.: Низкие дозы ишерферона-альфа в терапии хронического миелолейкоза. Дис. канд. мед. наук, Москва 1998.
14. Теодорович В.П., Абдулкадыров K.M.: Трепанобиопсия костного мозга при некоторых гематологических заболеваниях. JI. Медицина, 1977
15. Туркина А.Г.: Клинико-иммунологическая характеристика хронического миелолейкоза на различных стадиях заболевания. Дис. канд. мед. наук, Москва 1984.
16. Френкель М.А., Волкова М.А., Флейшман Е.В.: Клинико-гематологические параллели при хроническом миелоидном лейкозе. Тер. Архив, 1981;9:20-25
17. Фриновская И.В.: Хронический миелолейкоз. Пробл. гематол. и перелив. Крови, 1979;6:43-46
18. Хорошко Н.Д.: Современная терапия хронического миелолейкоза. Ав-тореф. докт. дисс., Москва, 1992,45с.
19. Хорошко Н.Д.: Интенсификация терапии хронического миелолейкоза с учетом факторов прогнозирования течения болезни. Тер. Архив, 1993;7: 23-28
20. Хохлова Р.Н.: Сравнительное изучение кроветворения в разных костях человека. Дис. канд. мед. наук, 1953; с. 267
21. Шалаев В.А., Стренева Т.И.: Фиброзные изменения костного мозга у больных хроническим миелолейкозом. Пробл Гематол и Перелив крови, 1979;12:30-34
22. Шардаков В.И., Мачульский Я.М.: Клинические значение результатов исследования материала трепанобиопсий костного мозга у больных хроническим миелолейкозом. Пробл гематол и перелив крови, 1981;8:45-48
23. Шардаков В И, Копанева Т Г, Минаков В Н, Федоровская НА К вопросу о патогенезе развития фиброретикулярной ткани у больных хроническим миелолейкозом Гематология и трансфузиология, 1988,8 28-29
24. Abe Y, Miyake М, Honuclu А, Kimura S, Hitsumoto Y Expression of membrane-associated lymphotoxm/tumor necrosis factor-b on Ьшпап lym-phokine-activated taller cells Jpn J Cancer Res, 1991,82 23
25. Afar D E, Goga A, Cohen L et al Genetic approaches to defining signaling by the CML-associated tyrosine kinase BCR-ABL Cold Spring Harbor Symp Quant Biol, 1994,59 589
26. Agematsu К, Nakahon Y Recipient origin of bone marrow denved fibroblastic stromal cells during all penods following bone marrow transplantation in humans Br J Haematol, 1991,79(3) 359-65
27. Alimena G, Moira E, Lazzarino M et al Interferon a-2b as therapy for Ph-positive chronic myelogenous leukemia a study of 82 patients treated with intermittent or daily administration Blood, 1988,72 642-647
28. Albrecht T, Schwab R, Henkes M, Peschel С, Huber С, Aulitzky W E Primary proliferating immature myeloid cells from CML patients are not resistant to mduction of apoptosis by DNA damage and growth factor withdrawal Br J Haematol, 1996,95 501-507
29. Amos T.A., Lewis J.L., Grand F.H., Gooding R.P., Goldman J.M., Gordon M.Y.: Apoptosis in chronic myeloid leukemia: normal responses by progenitor cell to growth factor deprivation, X-irradiation and glucocorticoids. Br J Haematol, 1995; 91:387-393
30. AndreeffM.: Cell kinetics of leukemia. Semin Hematol, 1986; 23:300-314
31. Athens J.W., Raab S.O., Haab O.P., Boggs D R., Asherbrucker H., Cartwright G.E., Wintrobe M.M.: Leukokinetic studies, X, Blood granulocyte kinetics in chronic myelocytic leukemia. J Clin Invest, 1965; 44:765-777
32. Avraham H., Banu N., Scadden D.T., Abraham J., Groopman J.E.: Modulation of megakaryocytopoiesis by human basic fibroblast growth factor. Blood, 1994; 83:2126-2132
33. Barge J., Slabodsky-Brousce N., Bernard J.F.: Histohnmunology of myelofibrosis: A study of 100 cases. Biomedicine, 1978; 2:73-75
34. Barrett J., Guimaraes A., Cullis J., Goldman J.M.: Immunological characterization of the tumor-specific bcr/abl junction of Philadelphia chromosome positive chronic myeloid leukemia. Stem Cells, 1993; 11:104
35. Bartl R., Byrkhardt R., Frisch B., Sehlag R.: Prognosis of bone marrow fibrosis in haematological malignancies. Adv Path Anat, 1981; 1:425-428
36. Bartl R., Byrkhardt R., Jager K., Frisch B., Pappenberger R, Kettner G.: Histologic classification of chronic myeloproliferative disorders (MPD) in "Pathology of the bone marrow" Ed. by Lennert K., Hubner K., Gustav Verlag, Stuttgart, 1984; 170-173
37. Bauenneister D.E.: Quantitation of bone marrow reticulin a normal range. Am J Clin Pathol, 1971; 56(1):24-31
38. Bazzoni G., Carlesso N., Grifiin J.D., Hemler M.E.: BCR/ABL expression stimulates integrin function on hematopoietic cell lines. J Clin Invest, 1996; 98:521-528
39. Bedi A., Zehnbauer B.A., Barber J.P., Sharkis S.J., Jones R.J.: Inhibition of apoptosis by BCR-ABL in chronic myeloid leukemia. Blood, 1994; 83:20382044
40. Bettini R., Ferrari V., Rapazzini P.: Bone marrow patterns and survival in chronic myeloid leukemia. Haematologica, 1985; 3:272-273
41. Ben-Yehuda D. et al: Molecular follow-up of disease progression and interferon therapy in chronic myelocytic leukemia. Blood, 1997; 90(12):4918-4923
42. Benech P., Mory Y., Revel M., Chebath J.: Structure of two forms of the inter-feron-induced (2'-5') oligo-A synthetase of human cells on cDNAs and gene sequences. EMBO Journal, 1985; 4: 2249
43. Bennett J.H.: Case of hypertrophy of the spleen and liver, in which death took place from suppuration of the blood. Edinburgh Medical and Surgery Journal, 1845;64:413-423
44. Bentley S.A., Alabaster O., Foidart J.M.: Collagen heterogenity in normal human bone marrow. Br J Haematol, 1981; 48(2):287-290
45. Bentley S.A.: Bone marrow connective tissue and the haemopoietic microenvironment. Br J Haematol, 1982; 50(l):l-6
46. Bentley S.A. Biology and pathobiology of bone marrow connective tissue in myelofibrosis Pathophisiology and clinical management. Ed by Lewis SM, Dekker M, New York, Basel, 1985,87-104
47. Bernard J., Jacquillat R.: Study of prognostic parameters in chronic myelogenous leukemia. Abstr Fourth Meeting Eur Div Int Soc of Haematology, 1977
48. Bhatia R., McGlave P.B., Verfaillie C.M.: Interferon-a treatment of marrow stroma results in enhanced adhesion of chronic myelogenous progenitors via mechanism involving MlP-la and TGF-p. Exp Hematol, 1994; 22:797a (abstr)
49. Bhatta R, McGlave P B, Dewald G W, Blazar B R, Verfailhe C M Abnormal function of the bone marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia role of malignant stromal macrophages Blood, 1995,85 3636-3645
50. Bhatia R, McGlave P, Verfailhe C M Treatment of marrow stroma with m-terferon-a restores normal PI integral-dependent adhesion of chronic myelogenous leukemia hematopoietic progenitors Role of MlP-la J Clin Invest, 1995, 96 931
51. Bhatia R, McCarthy J B , Verfailhe C M Interferon-alpha restores normal beta 1 integral-mediated inhibition of hematopoietic progenitor proliferation by the marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia Blood, 1996, 87(9) 3883-91
52. Bhatia R, Verfailhe C M Inhibition of BCR-ABL expression with antisense oliginucleotides restores pi mtegnn-mediated adhesion and proliferation inhibition in chronic myelogenous leukemia hematopoietic progenitors Blood, 1998,91 3414-3422
53. Biernaux C , Loos M, Sels A, Huez G, Strykmans P Detection of bcr-abl gene expression at a very low level in blood cells of some healthy individuals Blood, 1995, 86 3118
54. Bnnkmann V et al Interferon-alpha increases the frequency of interferon gamma-producing human CD4+ cells J Exp Med, 1993,178 1655-1663
55. Browning J L, Androlewicz M J, Ware C F Lymphotoxin and an associated 33-kDa glycoprotein are expressed on the surface of an activated human T cell hybndoma J Immunol, 1991,147 1230
56. Bruno E, Cooper R J, Wilson E L, Gabnlove J L, Hoflman R Basic fibroblast growth factor promotes the proliferation of human megakaryocyte progenitor cells Blood, 1993,8? 430-435
57. Buhr T, Chontz H, Georgu A The impact of megakaiyocyte proliferation of the evolution of myelofibrosis Histological follow-up study in 186 patientswith chromc myeloid leukemia Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol, 1992,420(6) 473-478
58. Burkhardt R, Fnsch B, Baitl R Bone biopsy in haematological disorders J Clin Pathol, 1982,2 257-284
59. Burkhardt R, Bartl R, Jager K, Fnsch B, Kettner G, Mahl G, Sund M Chronic myeloproliferative disorders (CMPD) Path Res Pract, 1984, 179(2) 131-186
60. Burkhardt R, Bartl R, Jager K, Fnsch B, Kettner G , Mahl G, Sund M Working classification of chromc myeloproliferative disorders based on histological, haematological and clinical finding J Clin Path, 1986,3 237-352
61. Burrhoughs J M, Gupta P, Verfailhe C M Soluble factors from tne mouse fibroblast cell line M210-B4 support in vitro hematopoiesis Exp Hematol, 1994, 22 1095-1101
62. Burstou J, Penmger J L The reticulin content of bone marrow in haematological disorders Br J Haematol, 1963,9(1) 172-184
63. Buysseus N, Beurgeois N H Chromc myelocytic leukemia versus idiopathic myelofibrosis Cancer, 1977,4 1548-1561
64. Caldwell J, Palsson B O, Locey B, Emerson S G Culture perfusion schedules influence the metabolic activity and growth factor production rates of human bone marrow stromal cells J Cell Physiol, 1991,147 344-353
65. Cahgans-Cappio F , Vigliam R, Novanno A, Cannessi G, Campara D, Ga-vosto F Idiopathic myelofibrosis A possible role for immune complexes in the pathogenesis of bone marrow fibrosis Brit J Haematol, 1981 117-21
66. Carlo Stella C., Cazzola M.: Interferons as biologic modulators of hematopoietic cell proliferation and differentiation. Haematologica, 1988; 73(3):225-37
67. Castello G., Lerza R., Cerrutti D., Cavallini G., Bogliolo G., Pannacciulli I.: The in vitro and in vivo effect of recombinant interferon a-2a on circulating haematopoietic progenitor cells in polycythaemia vera. Br J Haematol, 1994; 87:621-623
68. Cervantes F., Pierson B.A., McGlave P.B., Verfaillie C M., Miller J.S.: Autologous activated natural killer cells suppress primitive chronic myelogenous leukemia progenitors in long-term culture. Blood, 1996; 87:2476-2485
69. Chaganti R.S.K., Bailey R.B., Jhanwar SC., Arlin Z.A., Clarkson B.D.: Chronic myelogenous leukemia in the monosomic cell line of a fertile Turner syndrome mosaic (45,X/46,XX). Cancer Genet Cytogenet, 1982; 5:215-221
70. Choudhuiy A., Gajewski J.L., Liang J.C. et al: Use of leukemic dendritic cells for the generation of anti-leukemic cellular cytotoxicity against Philadelphia chromosome-positive chronic myelogenous leukemia. Blood, 1997; 89:11331142
71. Chronic Myeloid Leukemia Trialist's Collaborative Group: Interferon a versus chemotherapy for chronic myeloid leukemia: a meta-analysis of seven randomized trials. J Natl Cancer Inst, 1997; 89:1616-1620
72. Clarkson B., Strife A.: Linkage of proliferative and maturational abnormalities in chronic myelogenous leukemia and relevance to treatment. Leukemia, 1993; 7:1683-1721
73. Clough V., Geaiy C.G., Hashii K., Davsou J., Kuolsou T.: Myelofibrosis in chronic granulocytic leukemia. Brit J Haematol, 1979; 4:515-526
74. Comer A.R., Liebl E.C., Hoffmann F.M.: Can clues to the molecular defects in chronic myelogenous leukemia come from genetic studies on the Abelson tyrosine kinase in fruit flies? J Lab Clin Med, 1995; 125:686
75. Coleman S, Throp D, Fisher J, Baile.y-Wood R, Lim S H Cytokine enhancement of lmmunogemcity m chronic myeloid leukaemia Leukemia, 1997 , 11(12)2055-9
76. Cooper T W, Eisen A Z, Stnckhn G P et al Platelet-derived collagenase inhibitor characterization and subcellular localization Proc Natl Acad Sci USA, 1985, 82 2779-83
77. Comelissen J J, Ploemacher R E, Wognum B W et al An m vitro model for cytogenetic conversion m CML Interferon-a preferentially inhibits the outgrowth of malignant stem cells preserved m long-term culture J Clm Invest, 1998,102(5) 976-983
78. Cortes J, Fayad L, Kantarjian H, O'Brien S, Lee M S , Talpaz M Association of HLA phenotype and response to interferon-alpha in patients with chronic myelogenous leukemia Leukemia, 1998, 12 455
79. Cortez D, Kadlec L, Pendergast A M Structural and signaling requirements for BCR-ABL-mediated transformation and inhibition of apoptosis Molecular and Cellular Biology, 1995,15 5531-5541
80. Cortez D, Stoica G, Pierce JH, Pendergast AM The BCR-ABL tyrosine kinase inhibits apoptosis by activating a Ras-dependeni signaling pathway Oncogene, 1996, 13 2589-2594
81. Cortez D, Reuther G, Pendergast A M The Bcr-Abl tyrosine kinase activates mitogemc signaling pathways and stimulates Gl-to-S phase transition in hematopoietic cells Oncogene, 1997,15 2333-2342
82. Cotter T G BCR-ABL An anti-apoptotic gene in chronic myelogenous leukemia Leuk Lymphoma, 1995,1 231
83. Daley G Q, Baltimore D Transformation of an interleukin 3-dependent hematopoietic cell line by the chronic myelogenous leukemia-specific p210bcr/abl protem Proc Natl Acad Sci USA, 1988,85 9312-9316
84. Daley G Q, Van Etten R A, Baltimore D Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome Science, 1992, 256 836-839
85. Debred C, Ehebold J La myelofibrosis au cours des hemopathies Valeur diagnostique et prognostique A propes de 402 observation Sem Hop Paris, 1974, 24 1625-1634
86. Delia D, Aiello A, Sohgo D et al Bcl-2 proto-oncogene expression in normal and neoplastic human myeloid cells Blood, 1992,79 1291-1298
87. Devred C , Diebold J La myelofibrose au cours des hemopathies Valeur diagnostique et prognostique A propes de 402 observation Sem Hop Pans, 1974, 24 1625-1634
88. Dhut S , Chaplin T, Young B D , BCR-ABL and BCR proteins Biochemical characterization and localization Leukemia, 1990,4 745
89. Diamond J, Goldman J M, Melo J V BCR-ABL, ABL-BCR, BCR, and ABL genes are all expressed m individual granulocyte-macrophage colony-forming unit colomes derived from blood of patients with chronic myeloid leukemia Blood, 1995,85 2171-2175
90. Diebold J Myelofibrose et reseau fibrillaise de soutieu de la moelle os-souse hematopoietique Sem Hop Pans, 1974,24 1619-1624
91. Dikmezian R, Kantarjian H M, Keating M B et al The relevance of re-ticulin stammeasured fibrosis at diagnosis m chronic myelogenous leukemia Cancer, 1987, 59 1739-1743
92. Dilly S A, Jagger C J Bone marrow stromal cell changes m haemato-logical mahgnancues J Clin Pathol, 1990,43 942-946
93. Doermer P, Lao B, Wilmanns W Kinetics of bone marrow cell production m human acute and chronic myeloid leukemias Leuk Res, 1980, 4 231237
94. Dowding C., Guo A.P., Osterholz J. et al: Interferon-a overrides the deficient adhesion of chronic myeloid leukemia primitive progenitor cells to bone maiTow stromal cells. Blood, 1991; 78:499-505
95. Duhamel G., Stachariab J.: La fibrose de la moelle osseuse claus les he-mopathies malignes et les caucers. Etude histologue de 2786 biopsies. Sem Hop. Paris, 1981; 34:111-116
96. Eaves A.C., Cashman J.D., Gaboury D.G. et al: Unregulated proliferation of primitive CML progenitors in the presence of nomal adherent cells. Proc Natl Acad Sei USA, 1986; 83:5306-5310
97. Edwards DR., Murphy G., Reynolds J.J., Whitman S.E., Docherty A.J.P., Angel P., Heath J.K.: Transforming growth factor beta modulates the expression of collagenase and metalloproteinase inhibitor. EMBO J, 1987; 6:1899-1904
98. Einat M., Resnitzky D., Kimchi A.: Close links between reduction of c-myc expression by interferon and G0/G1 arrest. Nature, 1985; 313:597-600
99. Einhorn S., Blomgren H., Strander H.: Interferon and spontaneous cytotoxicity in man: I. Enhancement of the spontaneous cytotoxicity of peripheral lymphocytes by human leukocyte interferon. Int J Cancer, 1978; 22:405-412
100. Estrov Z., Markowitz A.B., Kurzrock R., Talpaz M. et al: Suppression of chronic myelogenous leukemia colony growth by interleukin-4. Leukemia, 1993;7:214-220
101. Facchetti F., Tironi A., Marocolo D. et al: Histopathological changes in bone marrow biopsies from patients with chronic myeloid leukaemia after treatment with recombinant alpha-interferon. Histopathology, 1997; 31(1): 3-11
102. Feinstein E., Climino G., Gale R.P., Canaani E.: Initiation and progression of chronic myelogenous leukemia. Leukemia, 1992; (Suppl. 1): 37-43
103. Fernandes R.S., Gorman A M., McGahon A., et al: The repression of apoptosis by activated abl oncogenes in chronic myelogenous leukemia. Leukemia, 1996; 10(Suppl 2):S17
104. Fialkow P J, Garther S M, Yoshida A Clonal origin of chronic myelocytic leukemia in man Proc Natl Acad Sci USA, 1967,58 1468-1471
105. Fialkow PJ, Jacobsen RJ, Papayannopoulou T Chronic myelocytic leukemia clonal origin in a stem cell common to granulocyte, erythrocyte, platelet and monocyte/macrophage Am J Med, 1977,63 125-130
106. Fitzgerald P H, Pickering A F, Elby J R Clonal origin of the Philadelphia chromosome and chronic myeloid leukemia Evidence from a sex chromosome mosaic Br J Haematol, 1971,21 473-480
107. Fnsh B, Bartl R, Burkhardt R Bone marrow biopsy in clinical medicine an overview Haematologica, 1982,3 245-285
108. Fnsh B, Bartl R, Burkhardt R, Jager K Histologic criteria for classification and differentiation diagnosis of chronic myeloproliferative disorders Haematologica, 1984,2 209-226
109. Fnsh B, Bartl R, Burkhardt R, Jager K, Mahl G, Kettuer G Classification of myeloproliferative disorders by bone marrow histology in "Bone marrow biopsies updated New prospects for clinical diagnostics" ed by Fnsch B, BartlR, 1984, p57-80
110. Fnshi B, Bartl R "Histology of myelofibrosis and osteomyelosclerosis" in "Myelofibrosis Pathophisiology and clinical management" ed by Lewis SM, Dekker M, New York, Basel 1985, p51-86
111. Gale R P, Cannam E An 8-kilobase abl RNA transript in chronic myelogenous leukemia Proc Natl Acad Sci USA, 1984,81 5648-5652
112. Galvam DW, Cawley JC Mechanism of action of a interferon in chronic granulocytic leukaemia evidence for preferential inhibition of late progenitors Br J Haematol, 1989,73 475-479i
113. Ganser A., Carlo-Stella C., Greher J. et al: Effect of recombinant interferons alpha and gamma on human bone mairow-derived megakaryocyte progenitor cells. Blood, 1987; 70(4): 1173-1179
114. Gastro-Malaspina H., Rabbelino E.M., Yen A., Nachman R.L., Moore M.A.: Human megakaryocyte stimulation of proliferation of bone marrow fibroblasts. Blood, 1981; 57:781-787
115. Gastro-Malaspina H.: Pathogenesis of myelofibrosis: role of ineffective megakaryopoiesis and megakaryocyte componenets. In: Myelofibrosis and the biology of connective tissue. Alan R. Liss, New York, pp 427-454
116. Gay S., Miller E.J.: Collagen in the physiology and pathology of connective tissue. Stuttgart, Gustav Fischer, 1978
117. Georgii A., Vykoupil K.F., Thiele J.: Chronic megakaiyocytic-granulocytic myelosis-CMGM. Virchows Arch, 1980; 3:253-268
118. Georgii A., Thiele J., Vykoupil K.F.: Osteomyelofibrosis/sclerosis: a histological and cytogenetic study on core biopsies of bone marrow. Virchows Arch, 1980; 3:269-286
119. Georgii A., Vykoupil K.F., Thiele J.: Histopathology of bone marrow and clinical findings in chronic myeloproliferative disorders in "Pathology of the bone marrow" ed. by Lennert K., Hubuer K., Gustav Fischer Verlag, Stuttgart 1984; pp 147-169
120. Gidlund M., Orn A., Wigzell H., Senik A., Gresser I.: Enhanced NK cell activity in mice injected with interferon and interferon inducers. Nature, 1978; 273:759
121. Gillitand D.G., Blanchard K.L., Bunn H.F.: Clonality in myeloproliferative disorders: analysis by means of the polymerase chain reaction. Proc Natl Acad Sei USA, 1991; 88:6848-6852
122. Gishizky M L, Witte O N Initiation of deregulated growth of multipotent progenitor cells by bcr-abl in vitro Science, 1992,256 836-839
123. Golde D W, Champlin R E Chronic myelogenous leukemia Resent advances Blood, 1985,65 1039-1047
124. Comez GA, Sokal JE, Walsh D Prognostic features at diagnosis of chronic myelocytic leukemia Cancer, 1981, 10 2470-2477
125. Gordon M \ , Dowding C R, Riley G P, Goldman J M, Greaves M F Altered adhesive interactions with marrow stroma of haematopoietic cells in chronic myeloid leukaemia Nature, 1986,328 342-344
126. Gordon M Y, Riley G P, Watt S M, Greaves M F Compartmentaliza-tion of a haematopoietic growth factor (GM-CSF) by glycosammoglycans m the bone marrow microenvironment Nature, 1987,326 403-405
127. Gordon M Y Extracellular matrix of the marrow microenvironment Br J Haematol, 1988,70 1-4
128. Gordon M Y , Clarke D, Atkinson J, Greaves M F Hemopoietic progenitor cell binding to the stromal microenviromnent in vitro Exp Hematol, 1990, 18 837
129. Goto T, Nishikon M, Arlm Z et al Growth characteristics of leukemic and normal hematopoietic cells m Ph'-chromc myelogenous leukemia and effects of intensive treatment Blood, 1982,59 793-808
130. Goton A, Miyazawa K, Ohyashiki K, Tauchi T, Boswell H S, Brox-meyer H E, Toyama K Tyrosine phosphorylation and activation of focal adhesion kinase (pl25FAK) by BCR-ABL oncoprotem Exp Hematol, 1995, 23 1153-1159
131. Gralmck H R, Harbor J, Vogel C Myelofibrosis in chronic granulocytic leukemia Blood, 1971,37(2) 152-162
132. Greiner J.W. et al: Enhanced expression of surface tumor-associated antigens on Human breast and colon tumor cells after recombinant human leukocyte alpha-interferon treatment. Cancer Res, 1984; 44:3208 3214
133. Greiner J.W., Fisher P.B., Pestka S., Schlom J.: Differential effects of recombinant human leukocyte interferons on cell surface antigen expression. Cancer Res, 1986; 46:4984 -4990
134. Greffen J., Stephenson J R., Heisterkamp N., Klein A., Bartram C.R., Grosveld G.: Philadelphia chromosomal breakpoints are clustered within a limited region, bcr, on chromosome 22. Cell, 1984; 36:93-99
135. Groopman J.E.: The pathogenesis of myelofibrosis in myeloproliferative disorders. Haematol Med, 1980; 92:857-858
136. Guilhot F., Chastang C., Michallet M. et al: Interferon a2b (IFN) combined with cytarabine versus interferon alone in chronic myelogenous leukemia. N Engl J Med, 1997; 337:223-229
137. Han Z.C., Bellucci S., Wan H.Y., Caen J.P.: New insights into the regulation of megekaiyocytopoiesis by haemapoietic and fibroblastic growth factors and transforming growth factor beta-1. Br J Haematol, 1992; 81:1-5
138. Har&st B., Huddlestone JR., Casall P., Merigan T.C., Oldstone M B.: Interferon acts directly on human B lymphocytes to modulate immunoglobulin synthesis. J Immunol, 1981; 127:2146
139. Harrison-Findik D., Susa M., Varticovski L.: Association of phosphatidy-linositol 3-kinase with SHC in chronic myelogenous leukemia cells. Oncogene, 1995; 10:1385
140. Hasford J., Pfinmann M., Hehlmann R. et al: A new prognostic score for the survival of patients with chronic myeloid leukemia treated with interferon a. J Natl Cancer Inst, 1998; 90:850-858
141. Hasselbalch H., Nielseu H., Berild D., Kappelyaard E.: Circulating immune complex in myelofibrosis. Sem, 1985; 34(2):177-180
142. Hehlmann R., Heimpel H., Hasford J. et al: Randomized comparison of interferon-a with busulfan and hydroxyurea in chronic myelogenous leukemia. Blood, 1994; 84:4064-4077
143. Heisterkamp N„ Stephenson J R., Groffen J. et al: Localization of the c-abl oncogene adjacent to a translocation break point in chronic myelocytic leukaemia. Nature, 1983; 306:239-242
144. Heisterkamp N., Stam K., Groffen J., de Klein A., Grosveld G.: Structural organization of the bcr gene and its role in the Ph translocation. Nature, 1985;315:758-761
145. Henkart P.A.: Lymphocyte-mediated cytotoxicity: Two pathways and multiple effector molecules. Immunity, 1994; 1:343
146. Hirata J., Takahira H., Kaneko S., Nishimura J., Nawata H.: Bone marrow stromal cells in myeloproliferative disorders. Acta Haematol, 1989; 82:3539
147. Hiti-Harper J., Wohl H., Harper E.: Platelet factor 4: an inhibitor of collagenase. Science, 1978; 199:991-992
148. Hochhaus A., Lin F., Reiter A. et al: Quantification of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients on interfrron-alpha therapy by competitive polymerase chain reaction. Blood, 1996; 87:1549-1555
149. HofSnan B., Liebermann D.A., Selvakumaran M. et al: Role of c-myc in myeloid differentiation, growth arrest and apoptosis. Curr Topics Microbiol Immunol, 1996; 211:17
150. Hurley R.W., McCarthy J.B., Verfaillie C.M.: Direct adhesion to bone marrow stroma via fibronectin receptors inhibits hematopoietic progenitor proliferation. J Clin Invest, 1995; 96:511
151. Ignotz R., Massague J.: Transforming growth factor-beta stimulates the expression of fibronectin and collagen and their incorporation into the extracellular matrix. J Biol Chem, 1986; 261:4337-4345
152. Jacknow G., Frizzera G., Gail-Peczalska K. et al: Extramedullar presentation of the blast crisis of chronic myelogenous leukemia. Br J Haematol, 1985;61:225-236
153. Kabarowski J.H.S., Allen P.B., Wiedemann L.M.: A temperature sensitive p210 BCR-ABL mutant defines the primary consequences of BCR-ABL tyrosine kinase expression in growth factor dependent cells. EMBO J, 1994; 13:5887-5895
154. Kagi D, Ledermam В , Burla К, Seller P, Odermatt В, Olsen К J, Po-dack E R, Zmkemagel R M, Hengartner H Cytotoxicity mediated by T cells and natural killer cells is greatly unpaired m perfonn-deficient mice Nature, 1994,369 31
155. Kagi D, Vignaux F, Ledermann В, Burki К, Depraetere V, Nagata S , Hengartner H, Golstem P Fas and perform pathways as major mechanisms of T cell-mediated cytotoxicity Science, 1994,265 528
156. Kagi D, Ledermann В , Burki К, Zmkemagel R M, Hengartner H Molecular mechanisms of lymphocyte-mediated cytotoxicity and their role m immunological protection and pathogenesis m vivo Annu Rev Immunol, 1996, 14 207
157. Kamada N, Uchino J Chronologic sequence m appearance of clinical and laboratory findings characteristic of chronic myelogenous leukemia Blood, 1978,51 843-850
158. Kantarjian H M, Smith T L, McCredie К В et al Chronic myelogenous leukemia A multivariate analysis of the associations of patient characteristics and therapy with survival Blood, 1985,66 1326
159. Kantarjian H M, Keating M J, Talpaz M et al Chrome myelogenous leukemia m blast crisis Analysis of 242 patients Am J Med, 1987,83 445-454
160. Kantarjian H M, Keating M J, Smith T L, Talpaz M, McCredie К В Proposal for simple staging system m chronic myelogenous leukemia Am J Med, 1990, 88 1
161. Kantarjian H M, Talpaz M, Keatmg M J et al Intensive chemotherapy induction followed by interferon-alpha maintanse m patients with Philadelphia chromosome positive chronic myelogenous leukemia Cancer, 1991, 68 12011207
162. Kantaijian H M, Keatmg M J EsteyEH et al Treatment of advanced stages of Philadelphia chromosome positive chronic myelogenous leukemia with interferon-alpha and low dose of cytarabme J Clm Oncol, 1992, 10 772778
163. Kantarjtan HM, Deisseroth A, Kurzrock R, Estrov L, Talpaz M Chronic myelogenous leukemia a concise update Blood, 1993,82 691-703
164. Kantarjian H M, Smith T L, O'Brien S et al Prolonged survival m chronic myelogenous leukemia after cytogenetic response to mterferon-a therapy Ann Intern Med, 1995,122 254-261
165. Kantarjian HM, O'Brien S, Anderim P, Talpaz M Treatment of chronic myelogenous leukemia current status and investigation options J Am Soc Hemat, 1996,8 3069-3080
166. Kawaishi K, Kimura A, Katoh O, Sasaki A, Oguma N, Ihara A, Sa-tow Y Decreased L-selectin expression in Cd34-positive cells from patients with chronic myelocytic leukaemia Br J Haematol, 1996,93 367-374
167. Kimchi A, Resnitzky D, Ber R, Gat G Recessive genetic deregulation abrogates c-myc suppression by interferon and is implicated in oncogenesis Mol Cell Biol, 1988,8 2828-2836
168. Kimchi A Cytokine triggered molecular pathways that control cell cycle arrest J Cell Biochem, 1992,50 1-9
169. Kimura A, Katoh O, Kuramoto A Effects of platelet derived growth factor, epidermal growth factor and transforming growth factor beta on the growth of human marrow fibroblasts Br J Haematol, 1988,69 9-12
170. Kitanaka A, Ito C , Nishigali H et al CD38-mediated growth suppression of B-cell progemtors requires activation of phosphatidyhnositol 3-kinase and involves its association with the protein product of the c-abl proto-oncogene Blood, 1996,88 590
171. Klagsbrum M The fibroblast growth factor family structural and biological properties Prog Growth Factor Res, 1989, 1 207-235
172. Kloetzer W, Kurzrock R, Smith L et al, The human cellular abl gene product in chronic myelogenous leukemia cell line K562 has an associated tyrosine protein kinase activity Virology, 1985,1401 230-238
173. Kloke 0, Niderle N, Qui Y et al Impact of lnterferon-alpha induced cytogenetic improvement on survival m chronic myelogenous leukemia Br J Haematol, 1993, 83 399-404
174. Klucher K M, Lopez D V, Daley G Q Secondary mutation maintains the transformed state m BaF3 cells with inducible BCR/ABL expression Blood, 1998,91 3927-3934
175. Kolb H J, Mittermuller J, Clemm C H, et al Donor leucocyte transfusions for treatment of recurrent myelogenous leukemia m bone marrow transplant patients Blood, 1990,76 2462
176. Koller M R, Palsson B O Tissue engineering reconstitution of human hematopoiesis ex vivo Biotech Bioeng, 1993,42 909-930
177. Komarmcki M, Rasmska M, Wozny T Significance of histologic bone marrow evaluation in diagnosis of chronic granulocytic leukemia II Megakaryocytes Acta Haematol Pol, 1995,26 195-200 Abstract
178. Konopka J B, Watanabe S M, Witte O N An alteration of the human c-abl protein in K562 leukemia cells unmasks associated tyrosine kinase activity Cell, 1984, 37,1035-1042
179. Konopka J B, Witte O N Detection of c-abl tyrosine kinase activity m vitro permits direct comparison of normal and altered abl gene products Mol Cell Biol, 1985,5 3116-3123
180. Kramer A, Wilier A, Hochhaus A, Saubele S, Hallek M, Hehlmann R BCR/ABL stimulates adhesion of myeloid cells to fibronectin by increased expression of a5pl integrals (abstract) J Mol Med, 1997,75 B151
181. Krause J R Myeloproliferative disorders in bone marrow biopsy Ed by Jkrausse, Churehill Livmgstou 1981, pp 85-108
182. Kriegler M, Perez C , DeFay K, Albert I, Lu S D A novel form of TNF/cachectm is a cell surface cytotoxic transmembrane protem Ramifications for the complex physiology of TNF Cell, 1988,53 45
183. Kurzrock R, Kloetzer W S, Talpaz M et al, Identification of molecular variants of p210 bcr-abl m chronic myelogenous leukemia Blood, 1987, 70 233-236
184. Kurzrock R, Guttermann JU, Talpaz M The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias New Eng J Med, 1988, 319 990998
185. Kurzrock R, Estrov Z, Kantarjian H, Talpaz M Conversion of mter-feron-induced, long-term cytogenetic remissions m chronic myelogenous leukemia to polymerase chain reaction negativity J Clm Oncol, 1998,16 1526
186. Kuto F, Nagaoka T , Watanabe Y, Hayashi M, Horasawa Y, Hirasawa Y, Tokuhiro H Chrome myelocytic leukemia ultrastructural histopathology of bone marrow from patients m the chronic phase Ultrastruct Pathol, 1984, 6 307-317
187. Laiho M, Saksela O , Keski-Oja J Transforming growth factor (5 induction of type-1 plasminogen activator inhibitor J Biol Chem, 1987, 262 17467-17474
188. Lambertenghi-Dehhers G, Pozzoh E, Benazzi E, Maiolo A T, Foa P, Polli E Bone marrow biopsy m chronic myeloid leukemia significance of some histological parameters Haematologica, 1986,2 113-116
189. Landolfo S, Gnbaudo G, Angeretti S, Gariglio C Mechanisms of viral inhibition by interferons Pharmacological Therapy, 1995,65 415
190. Landolfo S, Guanni A, Riera L, Gangho M, Gnbaudo G, Cignetti A, Cordone I, Montefusco E, Mandelli F, Foa R Chrome myeloid leukemia cells resistant to interferon a lack STAT1 expression The Hematology Journal, 2000,1 7-14
191. Lazzarino M, Mozza E, Castello A, Juverardi D, Coci A, Pagnucco G, Magnni V, Zei G, Bemasoom C Myelofibrosis in chronic granulocytic leuekemia cluucopathologic correlations and prognostic sigmficance Br J Haematol, 1986,2 227-240
192. Leemhuis T, Leibowitz D, Cox G , Silver R, Srour E F, Tncot G, Hoffman R Identification of BCR/ABI,-negative pnmitive hematopoietic progenitor cells within chronic myeloid leukemia marrow Blood, 1993,81 801
193. Lichtman M A The ultrastructure of the hemopoietic environment of the marrow areview ExpHematol, 1981,9 391-410
194. Lim SH, Coleman S Chrome myeloid leukemia as an immunological target Am J Hematol, 1997, 54 61
195. Lindahl P, Leaiy R, Gresser I Enhancement by interferon of the specific cytotoxicity of sensitized lymphocytes Proc Natl Acad Sci USA, 1972, 69 721
196. Lmg M, Wen Y J, Lim S H Prevalence of antibodies against proteins denved from leukemia cells m patients with chronic myeloid leuekemia Blood, 1998,92 4764-4770
197. Long M W, Dixit V M Thrombospondin functions as a cytoadhesion molecule for human hematopoietic progemtor cells Blood, 1990, 75 2311-2318i
198. Lowin B, Hahne M, Mattmann C, Tschopp J Cytolytic T-cell cytotoxicity is mediated through perform and Fas lytic pathways Nature, 1994, 370 650
199. Lowry A P, Deacon D, Whitefield P, McGrath H E, Quesenberry P J Stem cell factor induction of m vitro murine hematopoietic colony formation by "subliminal" cytokine combinations The role of "anchor" factors Blood, 1992, 80 663-669
200. Lull T, Pang K C , Thomas E et al Type I IFNs enhance the terminal differentiation of dendritic cells J Immunol, 1998,161 1947-1953
201. Lundell BI, McCarthy J B , Kovach N L, Verfailhe C M Activation-dependent a5pi integrin-mediated adhesion to fibronectm decreases proliferation of chronic myelogenous leukemia progenitors and K562 cells Blood, 1996, 87 2450-2458
202. Ma D D, Da W M, Purvis-Smith S et al Chromosomal analysis of bone marrow stromal fibroblasts m allogeneic HLA compatible sibling bone marrow transplantations LeukRes, 1987,11 661-3
203. Mahon F, Montastruc M, Faberes C , Reiffers J Predicting complete cytogenetic response in chiomc myelogenous leukemia patients treated with recombinant interferon-a Blood, 1994, 84 3592
204. Mandanas R A, Boswell H S , Lu L, Leibowitz D BCR-ABL confers growth factor mdependence upon a murine myeloid cell line Leukemia, 1992, 6 796-800
205. Martin-Henao G.A., Quirosa R., Sureda R. et al: L-selectin expression is low on CD34+ cells from patients with chronic myeloid leukemia and interferon-« up-regulates this expression. Haematologica, 2000; 85:139-146
206. Martyre M.C.: Platelet PDGF and TGF-P levels in myeloproliferative disorders. Leuk Lymphoma, 1991; 6:1-6
207. Martyre M.C., Romquin N., Le Bousse-Kerdiles C., Chevillard S., Ben-yahia B., Dupriez B., Demory J.L., Banters F.: Transforming growth factor-p and megakaryocytes in the pathogenesis of idiopathic myelofibrosis. Br J Haematol, 1994; 88:9-16
208. Martyre M.C., Le Bousse-Kerdiles C., Romquin N., Chevillard S., Praloran V., Demory J.L., Dupriez B Elevated levels of basic growth factor in megakaryocytes and platelets from patients with idiopathic myelofibrosis. Br J Haematol, 1997; 97:441-448
209. Massague J.: The transforming growth factor-P family. Ann Rev Cell Biol, 1990; 6:597-641
210. Mayani H., Guilbert L.J., Janowska-Wieczorek A.' Biology of the hemopoietic microenviroment. Eur J Haematol, 1992; 49:225-233
211. McGahon A., Bissonnette R., Schmitt M. et al: BCR-ABL maintains resistance of chronic myelogenous leukemia cells to apoptosis cell death. Blood, 1994;83:1179-1187
212. McWhirter J R, Wang J Y Activation of tyrosine kinase and microfila-ment-binding functions of c-abl by bcr sequences in bcr-abl fusion proteins Mol Cell Biol, 1991,11 1553-1565
213. McWhirter J R, Wang J Y An actin-binding function contributes to transformation by the Bcr-Abl oncoprotein of Philadelphia chromosome-positive human leukemias EMBO J, 1993,12 1533-1546
214. Melamed D, Tiefenbrum N, Yanden A, Kimchi A Interferons and m-terleukin-6 suppress the DNA binding activity of E2F m growth sensitive hematopoietic cells Mol Cell Biol, 1993,13 5255-5265
215. Meredith J, Takada Y, Fomaro M, Languino L R, Schwartz MA Inhibition of cell cycle progression by the alternatively spliced integral beta 1C Science, 1995, 269(5230) 1570-2
216. Mesen-Delwail A, Delwail V , Bnzard A, et al Effects of alpha -interferon on MHC unrestricted cytotoxicity m chronic myelogenous leukemia Biotechnol Ther, 1994, 5 47-57
217. Miyamura K, Iijima N, Itou T et al Functional expression of Fas receptor on the progenitor cells of chronic myelogenous leukemia Induction by interferon-y and ubemmex Blood, 1996, 88 232 (abstr, suppl 1)
218. Molldrem J J, Clave E , Jiang Y Z et al Cytotoxic T lymphocytes specific for a nonpolymorphic protemase 3 peptide preferentially inhibit chronic myeloid leukemia colony-forming units Blood, 1997,90 2529
219. Montastuc M, Mahon F X, Faberes C et al Response to recombinant interferon a m patients with chronic myelogenous leukemia m a single center results and analysis of predictive factors Leukemia, 1995,9 1997-2002
220. Montes G S , Knztau R M, Shigihara K M, Tohoro R, Mourao PAS, Lunquera L C U Histochemical and moiphological characterization of reticular fibres Histochemistry, 1980,65(2) 131-142
221. MoiTow G W, Pease G L, Stroebel G F, Bennett W A Teiminal phase of chrome myelogenous leukemia Cancer, 1965,3 369-374
222. Muller C.A., Walz J., Zinser R, Buhring HJ., Steinke B., Schmidt H.: In vivo induction of HLA molecules in patients with myeloproliferative syndrome during IFN alpha treatment. Ann Hematol, 1991; 63(5):259-63
223. Neumann H.A., Fauser A.A.: Effect of interferon on pluripotent hematopoietic progenitors (CFU-GEMM) derived from human bone marrow. Exp Hematol, 1982; 10:587-590
224. Niederle N., Kloke O., Osieka R., May D., Wandle U.B., Becher R., Opalka B., Schmidt C.G.: Treatment of chronic and acute phase chronic myelogenous leukemia with interferon-y. Blood, 1988; 52:119-128
225. Nishii K., Kabarowski J.H., Gibbons D L. et al: ts BCR-ABL kinase activation confers increased resistance to genotoxic damage via cell cycle block. Oncogene, 1996; 13:2225-2234
226. Nowell P.C., Hungerford D.A.: A minute chromosome in human granulocytic leukemia. Science, 1960; 132:1497-1501
227. Oda T„ Heaney C., Hagopian J R„ Okuda K„ Griffin J D„ Druker B.J.: Crkl is the major tyrosine-phosphorylated protein in neutrophils from patients with chronic myelogenous leukemia. J Biol Chem, 1994; 269:22925-22928
228. Ohnishi K., Ohno R., Tomonaga M. et al: A randomized trial comparing interferon-a with busulfan for newly diagnosed chronic myelogenous leukemia in chronic phase. Blood, 1995; 86:906-916
229. Oka T., Sastry K.J., Nehete P. et al: Evidence for specific immune response against P210 BCR-ABL in long-term remission CML patients treated with interferon. Leukemia, 1998; 12:155
230. Ortaldo J.R. et al: Effects of recombinant and hybrid recombinant human leukocyte interferons on cytotoxic activity of natural killer cells. J Biol Chem, 1983; 258:1501-1505
231. Ortaldo J.R. et al: Effects of several species of human leukocyte interferon on cytotoxic activity of NK cells and monocytes. Int J Cancer, 1983; 31: 285-289.
232. Otsuka T., Eaves C.J, Humphries R.K., Hogge D.E., Eaves A.C.: Lack of evidence for abnormal autocrine or paracrine mechanisms underlying the uncontrolled proliferation of primitive chronic myeloid leukemia progenitor cells. Leukemia, 1991; 5:861-868
233. Pane F., Mostarda I., Selleri C. et al: BCR/ABL mRNA and the P2jqBcr/abl pjotgi,, are downmodulated by interferon-a in chronic myeloid leukemia patients. Blood, 1999; 94(7):2200-2207
234. Papadopoulos K.P., Suciu-Foca N., Hesdorffer C S. et al: Naturally processed tissue- and differentiation stage-specific autologous peptides bound by HLA class I and II molecules of chronic myeloid leukemia blasts. Blood, 1997; 90:4938-4946
235. Parronchi P. et al: IL-4 and 1FN (alpha and ganuna) exert opposite regulatory effects on the development of cytolytic potential by Thl or Th2 human T cell Clones. J Immunol, 1992; 149:2977-2963
236. Pawelec G., Rehbein A., Schlotz E., Da Silva P.: Cellular immune responses to autologous chronic myelogenous leukemia cells in vitro. Cancer Immunol Immunother, 19%; 42:193
237. Pawelec G., Da Silva P., Max H. et al: Relative roles of natural killermediated and T cell-mediated anti-leukemia effects in chronic myelogenous leukemia patients treated with interferon-alpha. Leuk Lymphoma, 1995; 18:471
238. Pawelec G., Zeuthen J., Kiessling R.: Escape from host-antitumor immunity. Crit Rev Oncogenesis, 1997; 8:111
239. Pawelec G., Schlotz E., Rehbein A.: IFN-a regulates IL-10 production by CML cells in vitro. Cancer Immunol Immunother, 1999; 48:430-434
240. Pearson C.A., Pearson D., Shibahara S., Hofsteenge J., Chiquet-Ehrismann R.: Tenascin: cDNA cloning and induction by TGF-fi, EMBO J, 1988;7:2977-2981
241. Pendergast A.M., Gishizky M.L., Havlik M.H., Witte O.N.: SHI domain autophosphoiylation of p210 bcr/abl is required for transformation but not growth factor independence. Mol Cell Biol, 1983; 13:1728-1732
242. Pendergast A.M., Muller A.J., Havlik M.H., Maru Y„ Witte O.N.: BCR sequences essential for transformation by the BCR-ABL oncogene bind to the ABL SIC regulatory domain in a nonphosphotyrosine-dependent manner. Cell, 1991;66:161-171
243. Penn I.: Secondary neoplasms as a consequence of transplantation and cancer therapy. Cancer Detect Prev, 1988; 12:39-57
244. Pestka S, Langer J, Zoon K C , Samuel C E Interferons and their actions Annu Rev Biochem, 1987,56 727-777
245. Pierson B A, Miller J S The role of autologous natural killer cells in chronic muelogenous leukemia Leuk Lymphoma 1997,27 387-399
246. Puther H, Waldrop F S Silver impregnation method for reticulm fibres and reticulm A re-investigation of then origin and specifity Histochemistry, 1978, 57(3) 177-187
247. Quesenberry P J Stromal cells in long-term bone marrow cultures In Tavassoli M (ed) Handbook of the hemopoietic microenvironment Humana, Clifton, NJ, 1989, pp 253-285
248. Raitano A B , Halpern J R, Hambuch T M, Sawyers C L The Bcr-Abl leukemia oncogene activates Jun kinase and requires Jun for transformation Proc Natl Acad Sci USA, 1995,92 11746-11750
249. Rameshwar P, Denny T N, Stem D, Gascon P Monocyte adhesion in patients with bone marrow fibrosis is required for the production of fibrogenic cytokines Potential role for interleukin-1 and TGF-beta J Immunol, 1994, 153 2819-2830
250. Reilly J T, Barnett D, Dolan G, Forrest P, Eastham J, Smith A Characterization of an acute micromegakaryocytic leukemia evidence for the pathogenesis of myelofibrosis Br J Haematol, 1993,83 58-62
251. Rizzoh V, Savoldo B, Regazzi E et al Chrome myelogenous leukemia CD34+ marrow cells lacking CD95 expression are enriched for BCR/ABL negative primitive and committed progemtors Bone Marrow Transplant, 1997, 19 30 (abstr, suppl 1)
252. Rouvier E, Luciam M F, Golstein P Fas involvement m Ca2+mdependent T cell-mediated cytotoxicity J Exp Med, 1993,177 195 ^
253. Rowley J.D.: A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and giemsa staining. Nature, 1973; 243:290-293
254. Rowley J.D.: The Philadelphia chromosome translocation. A paradigm for understanding leukemia. Cancer, 1990; 65:2178-2184
255. Rowley P.T., Keng P.C., Kosciolek B.A.: Tue sffect of bcr-abl antisense oligonucleotide on DNA synthesis and apoptosis in K562 chronic myeloid leukemia cells. Leuk Res, 1996; 20:473-480
256. Sacchi S., Cortes J., Kantarjian H., Talpaz M.: Effects of interferon-alpha therapy on lymphocyte subpopulations in patients with chronic myeloid leukemia. Hematopathology and Molecular Hematology, 1997; 1 l(l):41-47
257. Salgia R., Li J.L., Lo S.H., Brunkhorst B., Kansas G.S., Sobhany E.S., Sun Y., Pisick E., Hallek M., Ernst T.: Molecular cloning of human paxillin, a focal adhesion protein phosphorylated by P210BCR/ABL. J Biol Chem, 1995; 270:5039-5047
258. Salgia R., Li J.L., Ewaniuk D.S., Pear W„ Pisick E„ Burky S.A., Ernst T., Sattler M., Chen L.B., Griffin J.D.: BCR/ABL induces multiple abnormalities of cytoskeletal function. J Clin Invest, 1997; 100(1) 46-57
259. Sanchez-Garcia I., Grutz G.: Tumorigenic activity of the BCR-ABL on-cigenes is mediated by BCL2. Proc Natl Acad Sci USA, 1995; 92:5287
260. Sattler M., Salgia R., Okuda K. et al: The proto-oncogene product p210CBL and the adaptor proteins CRKL and c-CRK link c-ABL, pl90BCR/ABL and p210BCR/ABL to the phosphatidylinositol-3 kinase pathway. Oncogene, 1996; 12:839
261. Sawyers C.L., Denny C.T., Witte O.: Leukemia and the dismption of normal hematopoiesis. Cell, 1991;64:337-350
262. Rowley J D A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacnne fluorescence and giemsa staining Nature, 1973,243 290-293
263. Rowley JD The Philadelphia chromosome translocation A paradigm for understanding leukemia Cancer, 1990,65 2178-2184
264. Rowley P T, Keng P C , Kosciolek B A The effect of bcr-abl antisense oligonucleotide on DNA synthesis and apoptosis in K562 chronic myeloid leukemia cells Leuk Res, 1996,20 473-480
265. Sacchi S, Cortes J, Kantarjian H, Talpaz M Effects of interferon-alpha therapy on lymphocyte subpopulations in patients with chronic myeloid leukemia Hematopathology and Molecular Hematology, 1997, 11(1)41-47
266. Salgia R, Li J L, Lo S H, Brunkhorst B , Kansas G S, Sobhjny E S, Sun Y, Pisick E, Hallek M, Ernst T Molecular cloning of human paxillin, a focal adhesion protein phosphorylated by P210BCR/ABL J Biol Chem, 1995, 270 5039-5047
267. Salgia R, Li J L, Ewaniuk D S, Pear W, Pisick E, Burky S A, Ernst T, Sattler M, Chen L B, Griffin J D BCR/ABL mduces multiple abnormalities of cytoskeletal function J Clin Invest, 1997,100(1) 46-57
268. Sanchez-Garcia I, Grutz G Tumongemc activity of the BCR-ABL on-cigenes is mediated by BCL2 Proc Natl Acad Sci USA, 1995,92 5287
269. Santodonato L et al Cure of mice with established metastatic friend leukemia cell tumors by a combined therapy with tumor cells expressing both ui-terferon-al and herpes simplex thymidine kinase followed by ganciclovir Human Gene Therapy, 1996,7 1-10
270. Sattler M, Salgia R, Okuda K et al The proto-oncogene product p210CBL and the adaptor protems CRKL and c-CRK link c-ABL, pl90BCR/ABL and p210BCR/ABL to the phosphatidyhnositol-3 kinase pathway Oncogene, 1996, 12 839
271. Sawyers C L, Denny C T, Witte O Leukemia and the disruption of normal hematopoiesis Cell, 1991,64 337-350
272. Sawyers C.L., Callahan W., Witte O.N.: Dominant negative MYC blocks transformation by ABL oncogenes. Cell, 1992; 70:901
273. Sawyers C.L., McLaughlin J., Witte O.N.: Genetic requirement for Ras in the transformation of fibroblasts and hematopoietic cells by the Bcr-Abl oncogene. J Exp Med, 1995; 181:307-313
274. Schmitz B., Thiele J., Witte O. et al: Influence of cytokines (IL-1 alpha, IL-3, IL-11, GM-CSF) on megakaryocyte-fibroblast interactions in normal human bone marrow. Eur J Haematol, 1995; 55(l):22-32
275. Scultz R.M., Papamatheakis J.D., Chirgos M.A.: Interferon: an inducer of macrophage activation by polyanions. Science, 1977; 197:674
276. Seewann H.L., Lehnert M., Juttner F.: The value of bone marrow biopsy in chronic myeloid leukemia. Haematologia, 1983; 1:67-72
277. Sellen C., Sato T., del Vecchio L et al: Involvment of Fas-mediated apoptosis in the inhibitory effects of interferon-a in chronic myelogenous leukemia. Blood, 1997; 89:957
278. Sellen C., Maciejewski J.P., Pane F. et al: Fas-mediated modulation of Bcr/Abl in chronic myelogenous leukemia results in differential effects on apoptosis. Blood, 1998; 92:981
279. Shaklai M.: Cellular components of stroma in vivo in comparison with in vitro systems. In: Tavassoli M (ed) Handbook of the hemopoietic microenvironment. Humana, Clifton, NJ, 1989, pp 219-251
280. Shtivelman E., Gale R.P., Dreazen O.: bcr-abl RNA in patients with chronic granulocytic leukemia. Blood, 1987; 69:971-973
281. Silver R.T.: Chronic myeloid leukemia. A perspective of the clinical and biologic issues of the chronic phase. Hematol Oncol Clin North Am, 1990; 4:319
282. Simmons P.J., Masinovsky B., Longenecker B.M. et al: Vascular cell adhesion molecule-1 expressed by bone marrow stromal cells mediates the binding of hematopoietic progenitor cells. Blood, 1992; 80:388
283. Singhai S, Powles R, Treleaven J et al Allogenic bone marrow tranaplantation for primary myelofibrosis Bone Marrow Transplant, 1995, 16(6) 743-6
284. Skorski T, Kanakaraj P, Ku D H et al Negative regulation of pl20GA GTPase promoting activity bv p210bcr/abl Implication for RAS-dependent Philadelphia chromosome positive cell growth J Exp Med, 1994,179 1855
285. Skorski T, Nieborowska-Skorska M, Szczyhk C, Kanakaraj P, Perrotti D, Zon G, Gewirtz A, Perussia B, Calabretta B C-RAF-1 serine/threonine kmase is requires m BCR/ABL-dependent and normal hematopoiesis Cancer Res, 1995,55 2275-2278
286. Skorski T, Kanakaraj P, Nieborowska-Skorska M et al Phosphatidy-hnositol-3 kmase activity is regulated by BCR/ABL and is required for the growth of Philadelphia chromosome-positive cells Blood, 1995,86 726
287. Smetsers TFCM, Skorski T, van de Locht LTF et al Antisense BCR-ABL oligonucleotides mduce apoptosis in the Philadelphia chromosome-positive cell lme BV173 Leukemia, 1994, 8 129
288. Sokal JE, Cox EB, Baccaram M et al Prognostic discrimination in "good-risk" chronic granulocytic leukemia Blood, 1984,63 789-799
289. Somasundaram R, Rao S G A, Advam S H, Gangal S G In vitro generation of effector cells cytotoxic to autologous targets from chronic myeloid leukemia patient m remission Cancer Immunol Immunother, 1998,27 177
290. Spear G T, Paulnock D M, Jordan R L, Meitzer D M, Merritt J A, Borden E C Enhancement of monocyte class I and II histocompatibility antigen expression m man by m vivo beta-mterferon Clin Exp Immunol, 1987 , 69(1) 107-15
291. Stam K., Heisterkamp N., Grosveld G.: Evidence of a new chimeric bcr/c-abl mRNA in patients with chronic myelocytic leukemia and the Philadelphia chromosome. New Engi J Med, 1985; 313:1429-1433
292. Straetmans N., Ma D.D., Nevell D.F. et al: Evolution of bone marrow fibrosis and stromal antigenic expression in chronic myeloid leukemia on alpha interferon and Ara-C therapy. Hematopathol Mol Hematol, 1996; 10(4): 213-22
293. Stryckmans P., Cronkite E.P., Fache F., Fliedner T.M., Ramos J.: Deoxyribonucleic acid synthesis time of erythropoietic and granulopoietic cells in human beings. Nature, 1966;211:717-720
294. Stryckmans P., Debusscher L., Socquet M.: Regulation of bone marrow myeloblast proliferation in chronic myeloid leukemia. Cancer Res, 1976; 36:3034-3038
295. Stryckmans P., Debusscher L., Collard E.: Cell kinetics in chronic granulocytic leukaemia (CGL). Clin Haematol, 1977,6:21-40
296. Takahashi M., Keating A., Singer J.W : A functional defect in irradiated adherent layers from chronic myelogenous leukemia long-term marrow cultures. Exp Hematol, 1985; 13:926-931
297. Talpaz M., McCredie K B., Mavligit G.M., Gutterman J.U.: Leukocyte interferon-induced myeloid cytoreduction in chronic myelogenous leukemia. Blood, 1983; 62(3):689-92
298. Talpaz M., Estrov Z., Kantaijian H. et al: Persistence of dormant leukemic progenitors during interferon-induced remission in chronic myelogenous leukemia. J Clin Invest, 1994; 94:1383-1389
299. Tanzez J, Najeau J, Jacquillat C, Ripault J, Chone J "Fibrose medulläre et erythroblastose splemque dans la leukeme myeloide chromque" Nouv Rev France Hemat, 1967,5 801-808
300. Teffen A, Silverstein MN, Noel P Agnogeiuc myeloid metaplasia Semin Oncol, 1995,22 327-33
301. Teixido J, Hemler M E, Greenberger J S , Anklesana P Role of beta 1 and beta 2 integrals m the adhesion of human CD34hi stem cells to bone marrow stroma J Clin Invest, 1992,90(2) 358-67
302. The Benelux CML Study Group Randomized study on hydroxyurea alone versus hydroxyurea combined with low-dose interferon-a2b for chronic myeloid leukemia Blood, 1998,91 2713-2731
303. The Italian Cooperative Study Group on Chrome Myelogenous Leukemia Prognostic factors on chronic granulocytic leukemia Blood, 1981, 72 856859
304. The Italian Cooperative Study Group on chronic myeloid leukemia Interferon- alpha- 2a as compared with conventional chemotherapy for the treatment of cromc myeloid leukemia N Engl J Med, 1994,330 820-825
305. The Italian Cooperative Study Group on Chronic Myeloid Leukemia Long-term follow-up of the Italian trial of interferon-a versus conventional chemotherapy m chronic myelogenous leukemia Blood, 1998,92 1541-1548
306. Thiele J, Holgados S , Chontz H, Ceorgn A Density, distribution and size of megakaryocytes m inflammatory reaction of the bone marrow (myelitis) and chronic myeloprohpherative disorders Scand J Haematol, 1983,3 329-341
307. Thiele J, Foulmeister J, Vouneguth B, Zankovich R, Fisher R The prognostic implication of clinical and histological features m Ph'+ chronic myelocytic leukemia (CML) Anticancer Res, 1986,6 1401-1409
308. Thiele J., Zirbes T.K., Kvasnicka H M. et al: Effect of interferon therapy on bone marrow morphology in chronic myeloid leukemia: a cytochemical and immunohistochemical study of trephine biopsies. J Interfron Cytokine Res, 1996; 16(3):217-24
309. Thiele J., Zirbes T.K., Kvasnicka H.M. et al: Interferon therapy, but not busulfan restores normal-sized megakaryopoiesis in CML- a comparative histo-and immunomorphometric study. Anal Cell Pathol, 1996; 11:1,31-42
310. Thiele J., Kvasnicka H.M., Zirbes T.K. et al: Effects of interferon treatment on the macrophage population in the bone marrow of patients with Phl+-CML. Hematopathol Mol Hematol, 1996; 10:201-12
311. Thiele J., Zirbes T.K., Lorenzen J. et al: Apoptosis and proliferation (PCNA labelling) in CML- a comparative immunohistological study on bone marrow biopsies following interferon and busulfan therapy. J Pathol, 1997; 181:316-22
312. Thiele J., Kvasnicka H.M., Fischer R., Diehl V.: Clinicopathological impact of the interaction between megakaryocytes and myeloid stroma in chronic myeloproliferative disorders: a concise update. Leuk Lymphoma, 1997; 24:463481
313. Teichmann J.V., Ludwing W.D., Thiel E.: Cytotoxicity of IL-2 induced lymphokine activated killer (LAK) cells against human leukemia and augmentation of killing by interferon and tumor necrosis factor. Leukemia Res, 1992; 16:287-298
314. Tiefenbrun N., Melamed D., Levy N. et al: Alpfe interferon suppresses the cyclin D3 and cdc25A genes, leading to a reversible Go-like arrest. Mol Cell Biol, 1996; 16:3934-3944
315. Tura S., Baccarini M., Corbelli G. et al: Staging of chronic myeloid leukemia. Br J Haematol, 1981; 47:105-119
316. Tura S.: Cytarabine increases karyotypic response in a-IFN treated chronic myeloid leukemia patients: results of a national prospective randomized trial. Blood, 1998; 92:317a
317. Upadhyaya G., Guba S., Sih S. et al: Interferon alpha restores the deficient expression of the cytoadhesion molecule lymphocyte function antigen-3 by chronic myelogenous leukemia progenitor cells. J Clin Invest, 1991; 88:2131
318. Van Etten R.A., Jackson P., Baltimore D. et al: The mouse type IV c-abl gene product is a nuclear protein and activation of transforming ability is associated with cytoplasmic localization. Cell, 1989; 58:669
319. Valiron O., Clemancey-Marcille G., Troesch A., et al: Immunophenotype of blast cehs in chronic myeloid leukemia. Leuk Res, 1998; 12:861
320. Varma N„ Varma S„ Marwaha N. Garewal G.: Histological and clinical evolution patterns of chronic myelocytic leukemia. Indian J Cancer, 1997; 34(4):164-168
321. Verfiulhe CM, Miller W J, BoylanK, McGlave PB Selection of benign primitive hematopoietic progenitor m chronic myelogenous leukemia on the basis of HLA-DR antigen expression Blood, 1992,79 1003
322. Vmcent P C, Cronkite E P, Greenberg M L, Kirsten C, Schrffer L M , Stryckmans P A Leukocyte kinetics in chronic myeloid leukemia I DNA synthesis tune in blood and marrow myelocytes Blood, 1969, 33 843-850
323. Virchow R L K Weisses Blut Fronep's Neue Notizen a d Geb D Nat u Heilk, Weimar 36 151-155
324. WangJ C , Lang^H D, Liao P, Wong^A Recombinant alpha-interferon inhibits colony formation of bone marrow fibroblast progemtor cells (CFU-F) Am J Hematol, 1992,40 81-85
325. Weiss R E , Reddi A H Apperance of fibronectm during the differentiation of cartilage, bone and bone marrow J Cell Biol, 1981,88 630-636
326. Wetzler M, Kurzrock R, Lowe D G, Kantaqian H, Gutterman J U, Talpaz M Alteration m bone marrow adherent layer growth factor expiession a novel mechanism of chronic myelogenous leukemia progression Blood, 1991,78 2400-2406
327. Wilhelm M., Bieso-Ramos C., O Brien S. et al: Effect of interferonalpha therapy on bone marrow fibrosis in chronic myelogenous leukemia. Leukemia, 1998; 12(l):65-70
328. Yao R., Cooper G.M.: Requirement for phosphatidylinisitol-3 kinase in the prevention of apoptosis by nerve growth factor. Science, 1995; 267:2003
329. Yoder M.C., Williams D.A.: Matrix molecule interactions with hematopoietic stem cells. Exp Hematol, 1995; 23:961-967
330. Zion M., Ben-Yehuda D., Avraham A. et al: Progressive de novo DNA methylation at the bcr/abl locus in the course of chronic myelogenous leukemia. Proc Natl Acad Sci USA, 1994; 91:10722
331. Zuffa E., Vianelli N., Martinelli G., Tazzari P., Cavo M., Tura S.: Autoimmune mediated thrombocytopenia associated with the use of interferon-alpha in chronic myeloid leukemia. Haematologica, 1996; 81(6):533-5
332. Mahon F.X., Faberes C., Pueyo S. et al: Response at three months is a good predictive factor for newly diagnosed chronic myeloid leukemia patients treated by recombinant interferon-a. Blood, 1998; 4059-4065
333. Vaugnam P.S., van Wijnen A.J., Stein J.L., Stein G.S.: Interferon regulatory factors: growth control and histone gene regulation it's not just interferon anymore. J Mol Med, 1997; 75:348-359
334. Krensky A M., Reiss C.S., Mier J.W. et al: Long-term human cytotoxic T-cell lines allospecific for HLA-DR6 antigen are OKT4+. Proc Natl Acad Sci USA, 1982; 79:2365
335. Jacobson S.J., Richert R., Biddison W.E. et al: Measles virus-specific T4+ human cytotoxic T cell clones are restricted by class II HLA antigens. J Immunol, 1984; 133:754
336. Giralt S., Hester J., Huh Y. et al: CD8-depleted donor lymphocyte infusion as treatment for relapsed chronic myelogenous leukemia after allogenic bone marrow transplantation. Blood, 1995; 86:4337
337. Herberman R.B.: Natural killer (NK) cells and their possible roles in resistance against disease. Clin Immun Rev, 1981; 1:1-65
338. Trinchieri G., Perussia B.: human natural killer cells: biologic and pathologic aspects. Lab Invest, 1984; 50:489-513
339. Sokal J., Leong S., Gomez G.: Preferential inhibition by cytarabine of CFR-GM from patients with chronic granulocytic leukemia. Cancer, 1987; 59:197
340. Hochhaus A., Yan X.H., Wilier A. et al: Expression of interferon regulatory factor (IRF) genes and response to interferon-alpha in chronic myeloid leukemia. Leukemia, 1997; ll(7):933-939