Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных вариантах печени ревматоидного артрита: патогенетические и клинические аспекты
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.05
Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных вариантах печени ревматоидного артрита: патогенетические и клинические аспекты
На правах рукописи
Огнева Елена Аркадьевна
ОСОБЕННОСТИ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СПЕКТРА КЛЕТОК КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ТЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА: ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
14.00.05 - внутренние болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Оиаи'
Астрахань — 2007
003071643
Работа выполнена в ГОУ ВПО "Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Научный руководитель:
доктор медицинских наук,
профессор Демидов Алексей Александрович
Научный консультант:
доктор медицинских наук,
профессор Сучков Сергей Викторович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук,
доцент Попов Евгений Антонович
кандидат медицинских наук Эсаулова Татьяна Алексеевна
Ведущая организация:
ГОУ ВПО «Волгоградский медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Защита состоится «Ш мая 2007 г в /J^часов на заседании диссертационного совета К 208 005 01 при ГОУ ВПО АГМА Росздрава (414000, г Астрахань, ул Бакинская, 121)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханской государственной медицинской академии
Автореферат разослан <<
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, '
доцент л д Заклякова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
Большое социальное значение ревматоидного артрита определяется не только его распространенностью, но и развитием у значительного числа больных стойкой нетрудоспособности Ревматоидный артрит, относящийся к системным аутоиммунным заболеваниям и представляющий собой поражение суставов преимущественно воспалительного характера, может рассматриваться в качестве одной из наиболее информативных моделей системной аутоиммунной патологии, удельный вес которой среди соматических заболеваний постоянно возрастает
В последние годы достигнут значительный прогресс в понимании патогенеза ревматоидного артрита В частности, установлено, что важнейшим фактором в развитии заболевания является клеточное звено иммунитета в сочетании с системой межклеточных взаимодействий Таким образом, очевидно, что одним из наиболее перспективных подходов к изучению иммунорегуляторных дефектов при ревматоидном артрите является исследование поверхностного фенотипа иммунокомпетентных клеток как в очагах поражения, так и в периферической крови Высокая клиническая информативность и практическая ценность такого подхода продемонстрированы при бронхиальной астме, миокардите и рассеянном склерозе Вместе с тем, при ревматоидном артрите вышеуказанный подход при изучении состояния иммунной системы использован не был
Вышеперечисленное определяет актуальность избранной темы диссертационного исследования для медицины сегодняшнего дня
Цель исследования
Выявление патогенетически и диагностически значимых иммунофенотипических маркеров клеточных субпопуляций периферической крови, определяющих степень тяже-
сти и прогноз у больных с различными клиническими вариантами течения ревматоидного артрита
Задачи исследования
1 Изучить особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных клинических вариантах течения ревматоидного артрита
2 Исследовать характер ассоциативности и возможные корреляции между содержанием отдельных субпопуляций клеток (или клеточных кластеров) периферической крови и особенностями течения ревматоидного артрита
3 Оценить патогенетическую и клинико-диагностическую значимость выявленных корреляций у больных с различными вариантами течения ревматоидного артрита
4 Разработать и внедрить в клиническую практику дополнительные критерии оценки прогнозирования и течения ревматоидного артрита
Научная новизна
Впервые проведено комплексное исследование суб-популяционной архитектоники клеток периферической крови у больных с различными вариантами течения ревматоидного артрита, по итогам которого внесены уточнения в концепцию иммунопатогенеза ревматоидного артрита Выявлена ассоциативная взаимосвязь между определенными наборами (кластерами) субпопуляций клеток крови и клиническими вариантами течения ревматоидного артрита.
Основные положения, выносимые на защиту
1 Риск прогрессирования ревматоидного артрита и формирования внесуставных (висцеральных) форм синдро-мальной патологии характеризуется появлением в крови пациента определенных субпопуляций клеток, определяющих в значительной степени особенности патогенеза и клиническую картину заболевания
2 Впервые определены количественные параметры субпопуляционного спектра клеток крови у больных с различными клиническими вариантами течения ревматоидного артрита и установлена их взаимосвязь с конкретными формами иммунопатологии"
3 Установлена выраженная ассоциативная взаимосвязь как между определенными наборами (кластерами) субпопуляций клеток крови и клиническими вариантами течения ревматоидного артрита (клинико-кластерная ассоциативность), так и между кластерами или группами кластеров (межкластерная ассоциативность), что имеет не только патогенетическое значение, но и существенную клиническую ценность при ведении больных с ревматоидным артритом
Практическая значимость работы
Предложенные дополнения к существующей концепции иммунопатогенеза ревматоидного артрита позволят более точно выявлять предикторы неблагоприятных исходов заболевания для установления прогноза и дальнейшей тактики лечения Определение субпопуляционной патоархитекто-ники крови (в том числе, субпопуляционных клеточных маркеров высокого риска развития внесуставных форм патологии) у больных с ревматоидным артритом может служить дополнительным иммунологическим критерием, позволяющим уточнить степень активности, оценить тяжесть состояния и прогнозировать течение заболевания
Внедрение результатов исследования
Результаты диссертационной работы внедрены в клиническую практику ревматологического отделения ГКБ №3 им С М Кирова, кафедры пропедевтики внутренних болезней с курсом ревматологии Астраханской государственной медицинской академии
Апробация результатов работы и публикации
Основные положения и выводы диссертации представлены на научно-практической конференции с международным участием "Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины" (Астрахань-Волгоград-Москва, 2006г)
Положения и выводы диссертации доложены на межкафедральной конференции с участием кафедр Астраханской государственной медицинской академии и врачей ГКБ №3 г Астрахани
По теме диссертации опубликовано 15 работ, в том числе статьи в центральных отечественных научных журналах, тезисы докладов на отечественных и международных научных конференциях
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 8 работ отечественных и 240 иностранных авторов Объем работы 116 печатных страниц, включая 16 таблиц, 2 рисунка, 9 диаграмм, 3 клинических примера больных
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования
В условиях специализированного ревматологического отделения ГКБ №3 была сформирована группа из 200 больных с достоверно известным диагнозом ревматоидного артрита В качестве контроля использовали кровь 40 клинически здоровых доноров Обследование проводилось в течение 2001 года и 2004 года
При диагностике ревматоидного артрита учитывались анамнез заболевания, данные объективного обследования и лабораторных тестов, а также рентгенологического исследования Диагноз ревматоидного артрита ставился на основа-
нии классификационных критериев РА, предложенных Американской коллегией ревматологов (1987г) и получивших международное признание, т к характеризуются высокой чувствительностью (91-94%) и специфичностью (89%) Нами для постановки достоверного диагноза ревматоидного артрита учитывалось наличие не менее, чем 4 из 7 классификационных критериев РА
Из 200 обследуемых больных РА было 164 женщин (82%) и 36 мужчин (18%) Средняя длительность заболевания 6,2 года Медленно прогрессирующее течение отмечено у 119 больных (59,5%), быстро прогрессирующее - у 81 больного (40,5%) Серопозитивный вариант наблюдался у 160 больных (20%), серонегативный- 40 больных (80%) По степеням активности заболевания 1-38 больных (19%), И- 102 (51%), III-60 (30%) 152 (76%) больных были с внесуставной (системной) патологией (анемия, кахексия, васкулит, перикардит и др) Всего использовано 300 образцов крови 200 больных и 40 доноров
Сывороточные концентрации IgG, IgM и IgA в сыворотках крови определяли методом радиальной иммунодиф-фузии по Манчини
Количественное определение ЦИК в периферической крови на основе их размера проводили с использованием двух концентраций (3,5% и 4%) ПЭГ-6000 на лазерном нефелометре при длине волны 810 нм
Исследование субпопуляционного состава клеток периферической крови проводили путем иммунофенотипиро-вания клеток CDlc+, CDld+, CD3+, CD4+CD25+, CD4+CD7" ,CD5+, CD7+, CD8+, CD8+CD25+, CDllb+, CDllc+, CD14+, CD14+CD163+, CD16+, CD18+, CD19+, CD20+, CD21+, CD22+, CD23+, CD25+, CD27+, CD28+, CD30+, CD38+, CD44+, CD45+, CD45RA+, CD45R0+, CD54+, CD56+, CD57+, CD57+CD8+, CD60+, CD69+, CD71+, CD80+, CD82+, CD86+, CD86+19+, CD86+14+, CD94+, CD95+, CD116+, CD158a+, CD158b+ и CD2+CD150+ на проточном цитометре с применением соот-
ветствующих моноклональных антител отечественного и зарубежного производства
Исследования проводились с одно - (например, CD4 или CD 19) и двухцветной метками (например, CD4CD25) на базе лаборатории клинической иммунологии МОНИКИ им М Ф Владимирского, а трехцветной меткой (например, CD3CD16CD56) - на базе Калифорнийского университета в Сан-Франциско (США) В качестве типирующих антител были использованы моноклональные антитела фирм "Протеиновый контур", а также антитела, полученные от проф А Ю Барышникова (РОНЦ РАМН) и доктора А Н Филатова (Институт иммунологии), зарегистрированные на международном рынке, и антитела, приготовленные в Институте микробиологии Калифорнийского университета (Сан-Франциско, США), например, CD86+19+, CD86+14+, CD158a+, CD158b+ и CD2+CD150, CD27+, CD28+, CD36+, CD37+, CD40+, CD44+, CD60+, CD62L+, CD63+, CD68+, CD69+, CD81+, CD82+, CD94+, CD95+ Часть образцов крови была помечена сложными комбинациями моноклональных антител с трехцветной меткой CD 14 (My-4)/CD 16 (Leu-11 c)/CD4(Leu-3 a), CD 14/CD4/CD13 (Leu-M7), CD14/CD4/CD1 lb (Leu-15) и др Anti-CD4 и анти-CD8, используемые в отдельных исследованиях, были связаны с перидинхлорофилл-протеином (PerCP), CD 14, CD45RO и CD45RA - с ФИТЦ, остальные - с ФЭ
При анализе NK-клеток поверхностные фенотипы анализировали с использованием многоцветной иммуноф-люоресценции Часть из таких типирующих антител, например, анти-Уа24 (клон С15) и анти-Vhll (клон С21), предназначенные для идентификации и подсчета NK клеток, получены от д-ра С Порселли, д-ра JI Метелитцы и д-ра Т Элбейка (США) Используемые антитела отличались низким уровнем неспецифического окрашивания и высокой разрешимостью (при достаточной плотности анализируемой популяции клеток определялось менее 0,01% детектируемых по двойной метке клеток) Для контроля уровня неспецифического связывания антител использовали изотонические кон-
троли иммуноглобулинов (Becton-Dickinson, США), меченные ФИТЦ, ФЭ и др
Из каждой пробы анализировали от 3500 до 5500 жизнеспособных клеток попадающих в соответствующий гейт, дискриминируемых по интенсивности свечения В ходе цитометрии данные по прямому и боковому светорассеянию исследуемых клеток отражали на двумерных гистограммах, а именно, FSC/SSC (прямое/forward side scatter/FSC и угло-Boe/side scatter/SSC) светорассеяние
Для сигнала по FSC и SSC использовали линейное усиление, с помощью которого сигналы флюоресценции усиливались до четырех (пяти) декадных логарифмических шкал
Достоверность результатов оценивалась с помощью t-критерия Стъюдента Данные представлены в виде (М±ш), различия считались достоверными при р<0,05 Полученные данные были статистически обработаны с помощью программы Excel, компьютерной системы "Microcoft Word"
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты исследований субпопуляционного спектра клеток крови у больных ревматоидным артритом представлены в таблице 1
В соответствии с полученными данными были выделены 4 группы больных
Группа с иммунофенотипом I - это больные с выраженным аутоиммунным синдромом, охватывающим по глубине и спектру нарушений как эффекторные, так и регуля-торные звенья иммунологической реактивности В эту группу вошли больные с длительностью заболевания не менее двух лет (54 человека) 60 % с быстропрогрессирующим течением В этой группе больных в 100 % случаев (98 человек) отмечены экстраартикулярные проявления при ревматоидном артрите ревматоидные узелки- 98 человек, анемия- 81 человека, кахексия- 41 человек, кожный васкулит- 61 чело-
век, лихорадка- 27 человек, перикардит- 17 человек В этой группе не отмечено больных с серонегативным вариантом ревматоидного артрита
Таблица 1
Субпопуляционный спектр клеток крови больных ревматоидным артритом
Субпопуляции с фенотипом Клинически здоровые доноры Группы больных с ревматоидным артритом
I (49%) II (32%) III (11%) IV (8%)
1 2 3 4 5 6
ДК
СШс+, % 2,2±0,1 *5,3±0,3 *3,6±0,1 2,3±0,1 2Д±0,1
СО 1 с1+, % 1,9±0,1 *24,8±0,1 *34±1,0 1,б±0,1 1,8±0,1
С028+, % 10,2±0,2 *214,9±0,9 10,3±0,9 *'б,1±0,4 9,4±0,8
СЭ81+, % 11,2±1,2 *"15,3±1,0 12,0±0,7 *'б,6±0,7 10,6±0,9
С082+, % 7,6±0,3 *212,9±0,7 7,3±0,3 *'4,0±0,9 6,3±0,3
СБ86+, % 12,0±1,1 *19,3±0,8 12,б±0,7 *'8,0±0,8 11,1±0,6
Зрелых Т-клеток
СОЗ+,% 65,2±2,3 | 62,2±1,9 67,1±1,8 |*'52,0±3,2 64,Ш,2
Клеток с активационными маркерами
СЭ25+, % 3,4±0,2 *5,2±0,2 *'4,4±0,7 *'1,9±0,1 *4,0±0,1
С038+, % 42,8±1,9 *256,8±1,8 *'49,3±1,3 41,0±1,8 *48,0±1,9
СВ69+, % 38,8±0,9 *43,3±1,7 *'42,1±1,4 38,1±1,2 37,2±1,4
Т-клеток-хелперов (ТЬ-клеток)
СЭ4+, % 38,2±1,1 *43,1±1,4 *41,1±1,4 *29,2±1,2 | *40,6±1,4
Цитотоксических клеток-супрессоров
С08+, % | 70,3±1,8 | *'65,8±1,9 69,2±2,0 *80,1±5,6 | 69,5±2,1
ЫК-клеток
СЭ16+, % 20,8±0,9 *'14,9±0,7 *'18,4±0,6 20,2±1,9 21,1±1,0
С056+, % 18,8±0,8 *'11,2±0,6 *'16,5±0,8 19,1±0,9 19,2±0,9
СЭ60+, % 2,1±0,1 *7,1±0,5 *23,3±0,1 2,0±0,1 1,9±0,1
СБ94+, % 6,9±0,4 *213,2±1,5 *11,6±0,5 *3,2±0,1 6,1±0,3
СЭ158а+,% 8,9±0,7 8,4±0,7 7,9±0,3 8,1±0,4 8,1±0,3
СЭ158Ь+, % 7,0±0,9 7,2±1,1 6,8±0,4 7,1±0,4 7,5±0,4
С0116+, % 1,3±0,2 1,2±0,9 1,4±0,1 1,5±0,1 1,1±0,1
СЭ57+, % 6,8±0,1 *213,4±0,9 *10,4±0,5 6,1±0,6 6,5±0,5
СЭ57+С08+,% 12,2±1,1 *216,9±1,2 *14,4±0,8 12,2±0,8 10,4±0,3
1 2 3 4 5 6
С04+С07" СБ28~ % 5,0±0,1 *9,2±0,7 *6,5±0,2 5,2±0,5 5,5±0,5
В-клеток
С019+,% 11,8±0,8 * 13,3±0,8 *213,4±0,7 11,4±0, *13,8±0,7
С020+, % 10,2±0,7 *"12,1±0,7 *212,2±0,4 10,5±0,8 *12,0±0,6
ст\+,% 4,2±0,3 *5,6±0,8 4,1±0,4 4,1±0,1 4,6±0,3
СШ2+, % 13,2±0,3 *14,1±0,6 14,5±0,5 14,2±0,7 11,6±0,5
СЭ23+, % 2,7±0,1 *23,0±0,1 *4,8±0,2 2,8±0,1 2,9±0,1
С071+, % 6,8±0,4 *10,3±0,6 *28,7±0,3 5,7±0,6 6,2±0,3
Макрофагов/моноцитов
СШ4\ % 18,7±0,7 *7,2±0,3 19,9±0,8 15,8±0,7 17,2±0,9
:014+С0163+,% 7,2±0,1 *1,4±0,1 *10,4±0,7 5,9±0,2 6,1±0,3
Проапоптотических Т-клеток
СВ95+, % | 42,7±0,9 *6,2±0,4 | *61,7±2,1 | 42,9±1,2 | 40,0±0,9
Иных специализированных клеток
СЭ5+С072\ % 3,8±0,1 *7,2±0,3 3,9±0,1 3,2±0,1 3,0±0,1
С05 С072+, % 3,1±0,1 * 1,4±0,1 *2,0±0,1 9,3±0,5 8,НО,4
СО45Я0+, % 3,4±0,2 *6,2±0,4 *4,3±0,2 4,3±0,2 3,3±0,1
С045ЯА+, % 3,6±0,2 3,4±0,1 3,7±0,1 3,7±0,1 3,2±0,1
С04+СЭ45КА+ С062Ь+, % 9,2±0,5 *14,4±0,6 *11,3±0,3 6,1±0,8 10,4±0,6
С04+СВ45ЯА+ С0621Г, % 1,2±0,1 6,5±0,4 *8,8±0,4 11,3±0,8 10,2±0,7
СВ8+СП45ЯА +С062Ь+, % б,1±0,б *12,5±0,8 *9,2±0,8 5,9±0,3 6,4±0,4
С08+СБ45ЯА ТЮ62Ь+, % 8,5±0,2 *14,1±0,8 *11,1±0,4 8,1±0,3 8,4±0,6
С08+С045ЯА ~С062Ь~, % 6,2±0,3 5,9±0,4 6,2±0,3 6,5±0,3 6,1±0,4
С04+СЭ28" % 1,2±0,2 *4,4±0,1 *4,1±0,2 1,3±0,1 1,4±0,1
С011Ь+, % 12,2±0,9 * 19,1 ±0,6 *14,2±0,8 *10,0±0,7 12,6±0,7
СЭ11с+, % 22,2±1,1 *29,9±1,4 *24,1±0,9 *15,3±0,9 21,1±1,1
СВ44+, % 16,5±1,3 *24,7±1,1 *20,1±0,9 14,5±0,8 15,0±1,3
СЭ18+, % 14,2±1,1 *21,1±1,9 *17,7±0,8 13,7±0,7 15,2±1,6
С054+, % 1,8±0,3 *4,3±0,3 1,9±0,1 1,2±0,1 1,5±0,1
С062Ь+, % 7,8±0,4 *10,0±0,7 *8,1±0,2 6,2±0,3 7,2±0,6
1 2 3 4 5 6
ст\ % 11,4±0,6 *7,1±0,6 *10,0±0,7 12,0±0,7 10,1±0,8
СЭ2+150+, % 6,0±0,2 *11,2±0,8 *9,2±0,б 6,3±0,2 6,2±0,6
С05+, % 10,7±0,8 *16,7±0,8 *12,7±0,8 *8,1±0,2 10,1±0,8
съТ, % 1,8±0,1 *0,9±0,1 1,7±0,1 1,6±0,1 1,4±0,1
СЭ27+, % 11,4±0,6 *8,2±0,6 10,4±0,8 10,2±0,7 9,5±0,7
С05+С027+,% 5,2±0,2 *2,9±0,1 5,0±0,2 4,9±0,2 5,0±0,4
Примечание Достоверность различий по сравнению со здоровыми донорами *-<0,05, *' -<0,01, *3 -<0,001
Группа с иммунофенотипом II - это больные с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом, затрагивающим, в основном, эффекторные звенья иммунитета Как правило, это пациенты с активностью заболевания II и III степени, имеющие уже в 80% случаев (51 человек) экстраартику-лярные проявления ревматоидные узелки- 29 человек, анемия- 28 человек, кахексия- 32 человека, кожный васкулит- 4 человека, лихорадка- 17 человек, перикардит- 6 человек Их них отмечено 8 % больных (5 человек) с серонегативным вариантом течения
Группа с иммунофенотипом III - это больные также с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом, но ассоциированным с вторичным иммунодефицитом - ВИД Как правило, это пациенты с активностью заболевания не выше II, имеющие экстраартикулярные проявления только в 20% случаев Из них отмечено анемия- 15 человек, вторичный амилоидоз- 7 человек, кахексия- 4 человека, лихорадка- 9 человек Больные с серонегативным вариантом течения составили 68 % (14 человек)
Группа с иммунофенотипом IV - больные без признаков иммунопатологии
Серопозитивный вариант ревматоидного артрита ассоциировался с достоверно более выраженной, чем при се-ронегативном течении, картиной серопатологии аутоиммунного характера, заключающейся в отчетливой гипергаммаг-лобулинемии по ^М- и ^в-изотипам, заметно более высо-
ком содержании в крови ЦИК и присутствии подавляющего числа сывороточных маркеров аутоиммунного воспаления и маркеров системных заболеваний соединительной ткани аутоиммунной природы Наиболее яркие признаки иммунопатологии наблюдались у пациентов с ^М-РФ+-вариантом ревматоидного артрита
Сравнительный анализ полученных данных дает основание говорить о том, что для большинства больных с ревматоидным артритом (в первую очередь, для иммунофенотипов I и II) характерна типичная картина аутоиммунного синдрома, затрагивающего как эффекторные, так и регуляторные звенья иммунитета В пользу данного утверждения свидетельствует целый ряд фактов, среди которых ключевое значение для вышеуказанных больных имеют выраженное увеличение индексов активации Т/В-лимфоцитов, рост экспрессии активационных маркеров на клетках обеих линий диффе-ренцировки, формирование диспропорций в составе иммуно-регуляторных субпопуляций с одновременным возрастанием роли дендритных клеток, значительное увеличение интенсивности апоптоза аутореактивных Т-лимфоцитов, что согласуется с мнением большинства исследователей, подчеркивающих исключительную значимость механизмов ТЬ1-зависимой аутоагрессии в патогенезе ревматоидного артрита Особый интерес представляет группа III, сочетающая в себе признаки аутоиммунного синдрома и синдрома ВИД (ВИДАС), ибо принципиальным для современной модели ревматоидного артрита является доминирующее участие механизмов наследственного иммунитета на ранних (в том числе, доклинических) стадиях и аутоиммунитета - в фазе про-грессирования заболевания и развернутой клинической симптоматики Отличительным признаком больных с ВИДАС является незначительный дефицит СОЗ-лимфоцитов, ассоциированный с едва заметной гиперактивацией иммунитета по аутоиммунному варианту Именно в этих группах с умеренным течением процесса средняя длительность заболевания составляет от 2 до 5 лет, занимая промежуточное поло-
жение, тогда как при выраженном аутоиммунном синдроме сроки развития ревматоидного артрита не менее 4-5 лет, а заболевание носит, как правило, тяжелый характер, включая признаки висцеральной патологии
У больных с иммунофенотипом IV выраженных признаков иммунопатологии не обнаружено, и в связи с этим данную группу можно рассматривать как самостоятельный вариант течения ревматоидного артрита, требующий индивидуального подхода к разработке патогенетиче- ски обоснованных лечебно-реабилитационных мероприятий
К одним из наиболее значимых иммунорегулятор-ных Т-клеток принадлежат С04+-лимфоциты, экспресси-рующие ранние активационные маркеры Формирование в составе этой группы клеток каких-либо аномалий ведет к развитию тяжелых аутоиммунных нарушений, свидетельствуя о важнейшей роли такого рода субпопуляций в контроле иммунного гомеостаза Именно для больных с такими нарушениями отличительной особенностью является выраженная гиперфункция В-звена, заметные сдвиги в клеточном имму-норегуляторном и эффекторном звеньях, а также низкие индексы апоптоза циркулирующих в крови Т-лимфоцитов Развернутая картина классического аутоиммунного синдрома, наблюдаемая нами у пациентов с фенотипами I и И, включает в себя сочетанные признаки весьма полиморфной клинико-иммунологической симптоматики
Существенное место занимает появление в крови больных с ревматоидным артритом значительного числа Т-лимфоцитов, имеющих фенотип С045Ш)+, способных прилипать к компонентам микроокружения и выполняющих функции Т-клеток памяти или индукторов Т-хелперов Более того, субпопуляции с фенотипом С045ЯА~С062Ь+С04/8+, относящиеся к центральным Т-клеткам памяти и обеспечивающие созревание "наивных" Т-лимфоцитов, при ревматоидном артрите также заметно повышены, тогда как субпопуляции с фенотипом С045КА+С062ЬХ04/8+, относящиеся к эффектор-ным Т-клеткам памяти и способствующие миграции ауторе-
активных Т-клеток в зону воспаления, имеют тенденцию к уменьшению своих размеров, что коррелирует с нормальным содержанием в крови готовых к апоптозу индукторов Т-супрессоров с фенотипом CD45RA+
Данное несимметричное распределение Т-клеток у здоровых лиц отсутствовало В этой связи уменьшение в крови больных ревматоидным артритом числа эффекторных Т-клеток памяти с фенотипом CD8+ может говорить об усиленной миграции данных клеток в направлении очагов воспаления, что способствует прогрессированию суставного синдрома
Среди цитотоксических инструментов у больных с ревматоидным артритом особый интерес вызывают NK-клетки На фоне стабильной численности NK-клеток с каноническими фенотипами, несущих низкоаффинные Fc-рецепторы, нами отмечено возрастание ряда особых субпопуляций клеток-киллеров - (а) с фенотипом CD8+CD57+, утилизирующих для механизма узнавания клеточных мишеней относительно редкие наборы Т-клеточных рецепторов (TCR) и (б) уникальным фенотипом CD4+CD7~CD28~, способных к клональной экспансии, гиперпродукции у-ИФН и реализации цитотоксических свойств в отсутствие костимуляторных сигналов
В роли партнера NK-клеток с фенотипом CD4+CD7-CD28" на ранних стадиях ревматоидного артрита может выступать и популяция лимфокин-активированных клеток-киллеров, реализующая под действием ИЛ-2 свои цитотокси-ческие свойства в отношении целого ряда мишеней
Не менее важным партнером может служить и субпопуляция клеток-киллеров с фенотипом CD8+CD28", способная секретировать перфорины и другие субстанции с цитоли-тическими свойствами Естественно, что, накапливаясь в зоне поражения (суставных сумок или хряща), такой ансамбль клеток с выраженными цитотоксическими свойствами и готовностью секретировать многокомпонентные наборы про-воспалительных цитокинов, способен вызывать выраженную
деструкцию окружающей ткани с прогрессированием ревматоидного артрита и формированием внесуставных форм син-дромальной патологии
Продемонстрированы ассоциативные взаимосвязи между содержанием в крови субпопуляций, экспрессирую-щих патогенетически и клинически значимые фенотипиче-ские маркеры активации с одной стороны и вариантом течения ревматоидного артрита, с другой Для больных ревматоидным артритом, имеющих выраженные сдвиги в составе субпопуляций периферической крови (иммунофенотипы I и II), отличительной особенностью является и признаки гиперфункции В-звена, проявляющей себя в увеличении численности зрелых В-лимфоцитов и возрастании в ряде случаев титров сывороточных иммуноглобулинов и антимишеневых ау-тоантител, что типично для картины аутоиммунного синдрома
Обнаруженные нами сдвиги в субпопуляционном спектре клеток периферической крови сочетаются при ревматоидном артрите с высокими индексами апоптоза циркулирующих в крови Т-лимфоцитов (содержание в крови СБ95+-лимфоцитов у больных с ревматоидным артритом заметно повышено) Развернутая картина аутоиммунного синдрома, наблюдаемая у пациентов с иммунофенотипами I и II, включает в себя сочетанные признаки полиморфной клинико-иммунологической симптоматики, характерной для наиболее агрессивных вариантов течения ревматоидного артрита
Сопоставляя полученные данные в отношении субпо-пуляционного состава периферической крови и особенностей картины ревматоидного артрита при различных иммунофе-нотипах, следует заметить, что в случае иммунофенотипа I одним из важнейших иммунологических критериев прогрес-сирования процесса является обогащение периферической крови субпопуляциями дендритных клеток Эти клетки, будучи одним из ключевых инструментов наследственного иммунитета, участвуют (вместе с костимуляторными молекулами) в презентации аутоантигенов Т-лимфоцитам, обуславли-
вая в конечном итоге активацию последних и формирование у предактивированных Т-лимфоцитов цитотоксических свойств, рестриктированных по фенотипу С01 Естественно, что гиперфункция дендритных клеток и входящих в состав соответствующего кластера АПК обуславливает нарушение процессов презентации аутоантигенов клеткам иммунной системы, а, в конечном итоге, формирование признаков аутоиммунного синдрома. Ряд важнейших субпопуляций дендритных клеток, экспрессирующих функционально активные маркеры, увеличены в крови больных ревматоидным артритом с иммунофенотипами I и И, провоцируя активацию Т-звена иммунитета
ВЫВОДЫ
1 Впервые изучены особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных клинико-иммунологических вариантах течения ревматоидного артрита и показано, что прогрессирование и риск формирования вне-суставных (висцеральных) форм синдромальной патологии зависят, в числе прочего, от особенностей субпопуляционной архитектоники клеток периферической крови, в значительной степени, определяющей, патогенез и клиническую картину заболевания
2 Наиболее яркие признаки патологии в составе клеточных субпопуляций наблюдались у пациентов с ^М-РФ+-вариантом ревматоидного артрита, среди которых нами установлено четыре иммунологических фенотипа
• фенотип I (больные с выраженным аутоиммунным синдромом, охватывающим по глубине и спектру сдвигов клетки с эффекторными и регуляторными функциями),
• фенотип II (больные с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом, затрагивающим, в основном, клеточные субпопуляции в составе эффекторных звеньев иммунитета),
• фенотип III (больные с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом на фоне вторичного иммунодефицита/ВИД, демонстрирующие тенденцию к обеднению крови сублопу-
ляциями клеток, преимущественно, с эффекторными свойствами),
• фенотип IV (больные без признаков иммунопатологии с физиологическими значениями содержания в крови клеточных субпопуляций)
3 Наиболее значимые уровни ассоциативности установлены для
а) клеток, несущих ранние и поздние активационные маркеры (CD25+, CD38+, CD69+ и др ) и вероятности формирования у больных с ревматоидным артритом внесуставных (висцеральных) форм синдромальной патологии,
б) тенденции к активному росту численности кластеров цитотоксических клеток с каноническими фенотипами (CD16+ и CD56+), а так же CD44+ и CD62L+ клеток с одной стороны и прогрессирующего характера развития ревматоидного артрита с интенсивным формированием внесуставных (висцеральных) форм синдромальной патологии, с другой,
в) содержания клеток, экспрессирующих активационные или костимуляторные маркеры (CD28+ и CD23+), и клеток с цитотоксическими функциями (CD94+), с другой,
г) клеточных субпопуляций, экспрессирующих активационные и костимуляторные маркеры с одной стороны, и дендритных клеток, несущих собственные маркеры, с другой (CD21+, CD25+, CD27+, CD28+, CD38+, CD69+, CDlc+, CDld+, CD71+, CD81+ и CD86+),
д) субпопуляционных кластеров В-лимфоцитов (CD5+CD72+, CD5+, CD19+, CD20+, CD21+, CD22+, CD23+, CD71+) с одной стороны, и масштабов развития у больных с ревматоидным артритом внесуставных (висцеральных) форм синдромальной патологии, с другой
4 Разработан и внедрен в клиническую практику дополнительный иммунологический критерий диагностики и прогнозирования течения ревматоидного артрита, основанный на выявлении специфичных для ревматоидного артрита иммунологических признаков, а именно, межкластерных и
клинико-кластерных взаимосвязей в субполуляционной архитектонике клеток периферической крови
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1.Сучков С В Новые подходы к экспресс-диагностике и прогнозированию системных и локальных аутоиммунных заболеваний / Габибов А Г , Третьяк Е Б , Огнева Е.А.// Труды IV Международной конференции «Современные технологии восстановительной медицины», 12-16 мая 2001 г, Россия, Сочи, С 339-340
2 Огнева Е.А. Аутоиммунный синдром при ревматоидном артрите иммунофенотипические варианты и их клиническая оценка /В А Агеев, Т Е Наумова, М В Чихладзе, М. Шанидзе, А Н Хитров, 3 С Алекберова, С В Сучков// Аллергология и иммунология, 2004, Том 5, N3, С 359-367
3 СуЧков С В Современная модель патогенеза ревматоидного артрита и ее место в клинической практике /А Н Хитров, Т Е Наумова, Е.А.Огнева, В А Агеев, А Г Габибов, 3 С Алекберова // Тер Архив, 2004, №12, С 83-87
4 Хитров А Н Новые механизмы антителоопосредо-ванной цитотоксичности /Т Е Наумова, Е.А. Огнева, 3 С Алекберова, А Г Габибов, О М Дурова, С В Сучков // Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 208
5 Огнева Е.А. Аутоиммунный синдром при ревматоидном артрите Часть 1 субпопуляционный спектр и его кли-нико-патогенетическая оценка /Б В Пинегин, А Н Хитров, З.С Алекберова, Т Е1Ье1к, С В Сучков)// Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 236-237
6 Огнева Е.А. Аутоиммунный синдром при ревматоидном артрите Часть 2 особенности наследственного иммунитета /Б В Пинегин, А Н Хитров, 3 С Алекберова, Т Е1Ье1к, С В Сучков)// Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 237-238
7 Огнева Е.А. Аутоиммунный синдром при ревматоидном артрите Часть 3' состояние гуморального звена иммунитета /Б В Пинегин, А Н Хитров, 3 С Алекберова, Т Elbeik, С В Сучков // Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 238-239
8 Огнева Е.А. Аутоиммунный синдром при ревматоидном артрите. Часть 4 особенности клеточного иммунитета /Б В Пинегин, А.Н Хитров, 3 С Алекберова, Т Elbeik, С В Сучков // Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 239
9 Калинина Е В Антителоопосредованная цитоток-сичность новый взгляд на проблему /Н Н Кекенадзе, 3 С Шогенов, Е.А. Огнева, А Н Хитров, 3 С Алекберова, Н В Гнучев, А Г Габибов, С В Сучков // Аллергология и иммунология, 2005, 6, 2, С 241-242
10 Сучков С.В Новые механизмы антителоопосредо-ванной цитотоксичности и их возможная роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний /Т Е Наумова, А Н. Хитров, В А Агеев, Е.А. Огнева, 3 С Алекберова, О М Дурова, Н А Пономаренко, А Г Габибов // Молекулярная медицина, 2005, №1, С. 32-36
11 Khitrov A Clinical autoimmunity m rheumatoid arthritis and its specific features /Е. Ogneva, Z Shogenov, N Keke-nadze, E Kalinina, M Zemtsova, К Maltsev, S Suchkov // Advances in immunopathology and respiratory allergy (edited by R Sepiashvili), Proceedings of The III World Congress on Immunopathology and Respiratory Allergy, 2005, Feb 5-8, Pattaya (Thailand), Medimond International Proceedings (Italy), P 109112
12 Хитров АН Особенности наследственного иммунитета при ревматоидном артрите / Огнева Е.А., Elbeik Т, Алекберова 3 С , Сучков С В // Медицинская иммунология, март-июнь 2006,том 8, № 2-3,с 237
13 Хитров АН Клинико-лабораторная оценка гуморального звена иммунитета при ревматоидном артрите / Огнева Е.А., Elbeik Т , Алекберова З.С , Сучков С В // Медицинская иммунология, март-июнь 2006,том 8, № 2-3,с 238
14 Хитров А Н Клинико-лабораторная оценка клеточного звена иммунитета при ревматоидном артрите / Огнева Е.А., Elbeik Т , Алекберова 3 С , Сучков С В // Медицинская иммунология, март-июнь 2006,том 8, № 2-3,с 238
15 Хитров АН Клинико-патогенетическая оценка-аутоиммунного синдрома при ревматоидном артрите /Е.А. Огнева, Т Elbeik, 3 С Алекберова, Б В Пинегин, С В Сучков // Материалы 5-ой научно-практической конференции с международным участием "Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины"5-10 мая 2006, Астрахань-Волгоград* Москва, с 256-257
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АКА- антикератиновые антитела
анти-ССР- антицитруллинированные антитела
анти-Col- антиколлагеновые антитела (суммарные)
анти-Col II- антиколлагеновые (к коллагену типа II) антитела
АЯА-антиядерные антитела
ДК- дендритные клетки
ЕД ОП - единицы оптической плотности
РА- ревматоидный артрит
РФ- ревматоидный фактор
ЦИК- циркулирующие иммунные комплексы
ЦРБ- С-реактивный белок
ANCA- антинейтрофильные цитоплазматические антитела NK- натуральные киллеры
Огнева Елена Аркадьевна
ОСОБЕННОСТИ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СПЕКТРА КЛЕТОК КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ТЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
14 00 05 - внутренние болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Подписано в печать 20 04 2007 Бумага «Iceberg» Тираж 100 экз Заказ № 2210
Издательство Астраханской государственной медицинской Академии, 414000, г Астрахань, ул Бакинская, 121
Оглавление диссертации Огнева, Елена Аркадьевна :: 2007 :: Астрахань
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1.Обзор литературы. Современная модель патогенеза ревматоидного артрита и ее место в клинической практике.
1.1.Иммуногенетические основы предрасположенности к развитию ревматоидного артрита: состояние проблемы.
1.2.Феномен молекулярной мимикрии и его место в патогенезе ревматоидного артрита.
1.3.Особенности гуморального звена иммунитета и его место в формировании картины аутоиммунного синдрома у больных ревматоидным артритом.
1.4.Цитокины и их роль в патогенезе ревматоидного артрита.
1.5.Особенности клеточного звена иммунитета и его место в формировании картины аутоиммунного синдрома у больных ревматоидным артритом.
1.6. Механизмы апоптоза и их значение для патогенеза ревматоидного артрита.
1.7. Особенности современной модели иммунопатогенеза ревматоидного артрита и ее значение для клинической практики.
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Клиническая характеристика обследованных больных.
2.2.0бьем и характеристика материала лабораторного исследования.
2.3.Сывороточные концентрации антигенов и антител.
2.4. Сывороточные концентрации иммуноглобулинов.
2.5. Количественное определение циркулирующих иммунных комплексов в периферической крови.
2.6.Количественное определение сывороточных криоглобули-нов.
2.7.Исследование субпопуляционного состава клеток периферической крови.
2.8.Исследование содержания в крови Thl- и ТЬ2-клеток и определение их функциональной активности.
2.9.Исследование функциональной активности Т- и В-лимфоцитов.
2.10.Общелабораторные и клинико-инструментальные исследования.
ГЛАВА 3.Результаты собственных исследований.
3.1.Серологическая характеристика больных ревматоидным артритом.
3.2. Субпопуляционный спектр клеток крови у больных ревматоидным артритом.
3.2.1.Субпопуляционный спектр клеток крови больных ревматоидным артритом, фенотип I и фенотип II.
3.2.2.Субпопуляционный спектр клеток крови больных ревматоидным артритом, фенотип III.
3.2.3.Субпопуляционный спектр клеток крови больных ревматоидным артритом, фенотип IV.
3.3.Больные с IgM-РФ-вариантом течения ревматоидного артрита.
3.4.Наиболее значимые корреляции межкластерных взаимосвязей.
Глава 4.Обсуждение результатов.
Выводы.
Введение диссертации по теме "Внутренние болезни", Огнева, Елена Аркадьевна, автореферат
В последние годы наблюдаются серьезные нарушения иммунной системы при самых разных заболеваниях, в том числе, аутоиммунной природы. Свидетельством этому является неуклонный рост числа больных с данной патологией и склонность к затяжному течению и хронизации. По статистическим данным ВОЗ [1999 год] системные аутоиммунные заболевания составили около трети от общего числа нозологий в клинике внутренних болезней. Большое социальное значение таких болезней, в том числе ревматоидного артрита, определяется не только их распространенностью, но и развитием у значительного числа больных стойкой нетрудоспособности [4,53]. Таким образом, ревматоидный артрит, относящийся, по классификации А. Ройта, к системным [органонеспе-цифическим] аутоиммунным заболеваниям, представляющий собой поражение суставов преимущественно воспалительного характера, может рассматриваться одной из наиболее информативных клинических и экспериментальных моделей системной аутоиммунной патологии.
Важнейшим фактором в развитии ревматоидного артрита считают клеточное звено иммунитета, а также систему межклеточных [кооперативных] взаимодействий, контролируемых как набором клеточных инструментов регуляции, так и факторами гуморальной природы [аутоантителами, сетью цитоки-нов и др.]. Так, например, активированные цитокинами С04+-лимфоциты [клетки-хелперы] стимулируют образование плазматических антителопродуци-рующих В-лимфоцитов, приобретающих в условиях аутоиммунной патологии функции «фабрики» по производству ревматоидных факторов.
В последние годы достигнут значительный прогресс в понимании патогенеза ревматоидного артрита, а также в разработке современных технологий и средств иммунодиагностики, иммуномониторинга и иммунопрогнозирования, составивших, по мнению большинства исследователей, основу современных программ лечебно-реабилитационных и лечебно-профилактических мероприятий в клинике ревматоидного артрита [9,51,216].
Иммунокомпетентные клетки, в частности, играют при различных формах ревматоидного артрита значительную роль в развитии суставных и висцеральных [системных] поражений, определяя, в конечном счете, специфику дезорганизации и характер структурных перестроек в пораженных тканях. Так, важнейшую роль в патогенезе ревматоидного артрита играют аутореактивные Т-клетки, определяющие уровень и объем разрушений в тканях суставов, а ключевую функцию активации в отношении аутореактивных Т-клеток выполняет одна из двух субпопуляций Т-клеток-хелперов - ТЫ-лимфоциты. Следует подчеркнуть при этом, что способность аутореактивных Т-клеток к активации во многом определяет развитие аутоиммунных нарушений при ревматоидном артрите, причем одна из самых важных ролей в регуляции функциональной активности практически всех клеточных клонов, участвующих в формировании аутоиммунного ответа, принадлежит ранним активационным антигенам и антигенам дендритных клеток [ДК], определение которых имеет большое значение для оценки общей функциональной активности Т-лимфоцитов.
Из вышеперечисленного следует, что одним из наиболее перспективных подходов к изучению нарушений иммунорегуляции при различных патологических состояниях у больных с ревматоидным артритом является исследование поверхностного фенотипа иммунорегуляторных и эффекторных клеток в периферической крови. В современной экспериментальной и клинической иммунологии важное место занимает анализ периферической крови с использованием моноклональных антител к различным антигенам лимфоцитов. В литературе имеются данные об участии в патогенезе ревматоидного артрита основных субпопуляций лимфоцитов: CD3+ [зрелые Т-лимфоциты], CD4+ [хелперно-индукторные Т-клетки], CD8+ [супрессорно-цитотоксические Т-лимфоциты], CD72+ [В-лимфоциты]. Однако, полученные в этих работах результаты противоречивы, и, представляя несомненный научный интерес, пока не отражают состояния иммунной системы у этих больных.
В связи с этим серьезный фундаментальный и большой практический интерес представляет изучение, наряду с популяционным составом, поверхностной экспрессии антигенов лимфоцитов, свидетельствующей об активации иммунной системы. Высокая информативность и практическая ценность такого подхода уже была показана при ряде заболеваний: бронхиальной астме, рассеянном склерозе и других. Однако он практически не был использован при изучении состояния иммунной системы у больных с ревматоидным артритом.
Цель исследования
Целью настоящего исследования является выявление патогенетически и диагностически значимых иммунофенотипических маркеров клеточных субпопуляций периферической крови, определяющих степень тяжести и прогноз у больных с различными клиническими вариантами течения ревматоидного артрита.
Задачи исследования
1. Изучить особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных клинических вариантах течения ревматоидного артрита.
2. Исследовать характер ассоциативности и возможные корреляции между содержанием отдельных субпопуляций клеток [или клеточных кластеров] периферической крови и клиническими особенностями течения ревматоидного артрита.
3. Оценить патогенетическую и клинико-диагностическую значимость выявленных корреляций у больных с различными вариантами течения ревматоидного артрита.
4. Разработать и внедрить в клиническую практику дополнительные критерии оценки прогнозирования и течения ревматоидного артрита.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное исследование субпопуляционной архитектоники клеток периферической крови у больных с различными вариантами течения ревматоидного артрита, по итогам которого внесены уточнения в некоторые звенья иммунопатогенеза ревматоидного артрита. Выявлена ассоциативная взаимосвязь между определенными наборами [кластерами] субпопуляций клеток крови и клиническими вариантами течения ревматоидного артрита.
Практическая значимость
Разработаны дополнительные иммунологические критерии диагностики и прогнозирования течения ревматоидного артрита и установлены субпопуляци-онные клеточные маркеры высокого риска развития внесу ставных [висцеральных] форм патологии. Предложенные дополнения к существующей концепции иммунопатогенеза ревматоидного артрита позволят более точно выявлять пре-дикаторы неблагоприятных исходов заболевания для установления прогноза и дальнейшей тактики лечения. Определение субпопуляционной патоархитекто-ники крови у больных с ревматоидным артритом может служить дополнительным иммунологическим критерием, позволяющим уточнить степень активности, оценить тяжесть состояния и прогнозировать течение заболевания с риском развития висцеральных [внесуставных] форм синдромальной патологии. Результаты исследований могут быть использованы в практическом здравоохранении для диагностики и мониторинга больных с теми или иными вариантами течения ревматоидного артрита и найти широкое применение в общетерапевтической и клинико-иммунологической практике.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Риск прогрессировать ревматоидного артрита и формирования вне-суставных [висцеральных] форм синдромальной патологии характеризуется появлением определенных субпопуляций клеток, определяющих в значительной степени особенности патогенеза и клиническую картину заболевания.
2. Впервые определены количественные параметры субпопуляционного спектра клеток крови у больных с различными клиническими вариантами течения ревматоидного артрита и установлена их взаимосвязь с конкретными формами иммунопатологии.
3. Установлена выраженная ассоциативная взаимосвязь как между определенными наборами [кластерами] субпопуляций клеток крови и клиническими вариантами течения ревматоидного артрита [клинико-кластерная ассоциативность], так и между кластерами или группами кластеров [межкластерная ассоциативность], что имеет не только патогенетическое значение, но и существенную клиническую ценность при ведении больных с ревматоидным артритом.
Апробация работы
Основные положения и выводы диссертации представлены и обсуждены на III Всемирном Конгрессе по «Клинической патологии и реабилитации в медицине» (Патайя, Тайланд, 4-11 февраля 2005г.), X Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2006» (Санкт-Петербург, май 2006г.), научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград-Москва, май 2006г.).
Положения и выводы диссертации доложены на межкафедральной конференции с участием кафедр Астраханской государственной медицинской академии и врачей ГКБ №3 г.Астрахани 18 января 2007г.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 15 работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 8 работ отечественных и 240 иностранных авторов. Объем работы 126 печатных страниц, включая 16 таблиц, 2 рисунка, 9 диаграмм, 3 клинических примера больных.
Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных вариантах печени ревматоидного артрита: патогенетические и клинические аспекты"
ВЫВОДЫ
1.Впервые изучены особенности субпопуляционного спектра клеток крови при различных клинико-иммунологических вариантах течения ревматоидного артрита и показано, что прогрессирование и риск формирования внесуставных [висцеральных] форм синдромальной патологии зависят, в числе прочего, от особенностей субпопуляционной архитектоники клеток периферической крови, в значительной степени, определяющей, патогенез и клиническую картину заболевания.
2. Наиболее яркие признаки патологии в составе клеточных субпопуляций наблюдались у пациентов с IgM-РФ^вариантом ревматоидного артрита, среди которых нами установлено четыре иммунологических фенотипа:
• фенотип I [больные с выраженным аутоиммунным синдромом, охватывающим по глубине и спектру сдвигов клетки с эффекторными и регуляторными функциями];
• фенотип П [больные с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом, затрагивающим, в основном, клеточные субпопуляции в составе эффектор ных звеньев иммунитета];
• фенотип Ш [больные с умеренно-выраженным аутоиммунным синдромом на фоне вторичного иммунодефицита/ВИД, демонстрирующие тенденцию к обеднению крови субпопуляциями клеток, преимущественно, с эффекторными свойствами];
• фенотип IV [больные без признаков иммунопатологии с физиологическими значениями содержания в крови клеточных субпопуляций].
3. Наиболее значимые уровни ассоциативности установлены для: а] клеток, несущих ранние и поздние активационные маркеры [CD25+, CD38+, CD69+ и др.] и вероятности формирования у больных с ревматоидным артритом внесуставных [висцеральных] форм синдромальной патологии; б] тенденции к активному росту численности кластеров цитотоксических клеток с каноническими фенотипами [CD16+ и CD56*], а так же CD44+ и CD62L+ клеток с одной стороны и прогрессирующего характера развития ревматоидного артрита с интенсивным формированием внесуставных [висцеральных] форм синдромальной патологии, с другой; в] содержания клеток, экспрессирующих активационные или костимуляторные маркеры [CD28+ и CD23*], и клеток с цитотоксическими функциями [CD94*], с другой; г) клеточных субпопуляций, экспрессирующих активационные и костимуляторные маркеры с одной стороны, и дендритных клеток, несущих собственные маркеры, с другой [CD21+, CD25+, CD27+, CD28+, CD38+, CD69+,CDlc+, CDld+, CD71+, CD81+ и CD86*]; д) субпопуляционных кластеров В-лимфоцитов [CD5+CD72+, CD5+, CD19+, CD20+, CD21+, CD22+, CD23+, CD71*] с одной стороны, и масштабов развития у больных с ревматоидным артритом внесуставных [висцеральных] форм синдромальной патологии, с другой.
5. Разработан и внедрен в клиническую практику дополнительный иммунологический критерий диагностики и прогнозирования течения ревматоидного артрита, основанный на выявлении специфичных для ревматоидного артрита иммунологических признаков, а именно, межкластерных и клинико-кластерных взаимосвязей в субпопуляционной архитектонике клеток периферической крови.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДА ISIS
Разработанный дополнительный иммунологический критерий диагностики и прогнозирования течения ревматоидного артрита на основании установленных субпопуляционных клеточных маркеров высокого риска развития внесус-тавных [висцеральных] форм патологии рекомендуется к внедрению в широкую терапевтическую практику.
Определение субпопуляционной патоархитектоники крови у больных ревматоидным артритом необходимо использовать в ревматологических стационарах, центрах, на базе ревматологической службы в поликлинической сети при назначении больным болезнь-модифицирующих и болезнь-контролирующих препаратов, а именно:
- при получении результатов исследований клеточных субпопуляций, соответствующих I и П иммунофенотипу, необходимо назначать более агрессивную базисную терапию, при отсутствии противопоказаний необходимо назначать болезнь-контролирующие препараты;
- при получении результатов исследований клеточных субпопуляций, соответствующих Ш иммунофенотипу, необходимо проводить иммунокорреги-рующую терапию иммунотропными препаратами.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Огнева, Елена Аркадьевна
1. Астапенко, М.Г. Клинико-лабораторная характеристика различных форм ивариантов ревматоидного артрита// Вопросы ревматологии. 1977. - № 1.- С. 25-30.
2. Барыпшиков, А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференциро-вочным антигенам лимфоцитов человека // Гематологическая трансфузиология -1990. -№ 8. С. 4-7.
3. Мазуров, В.И. Клиническая ревматология / В.И. Мазуров.- Спб., 2005. С. 87-141.
4. Насонов, В.А. Клиническая ревматология / В.А. Насонов, М.Г. Остапенко. -М., 1989.-С. 253-312.
5. Насонова, В.А. Ревматические болезни / В.А. Насонова, Н.В. Бунчук. М., 1997.-С. 257-261.
6. Сигидин, Я.А. Диффузные болезни соединительной ткани / Я.А. Сигидин, Н.Г. Гусева, М.М. Иванова. М., 2004. - С. 32-71.
7. Сперанский, А.И. Аутоиммунные болезни (клинические и теоретические аспекты) // Аллергология и иммунология. 2002. - № 1. - т. 3. - С. 62-83.
8. Тумян, Г.С. Иммунологические критерии прогноза при лимфоме Ходжкина // VIII Российский онкологический конгресс: мат-лы конф. М., 2004. - С. 15.
9. Agematsu, К. Memory В cells and CD27 // Agematsu К. Histol Histopathol. -Spain, 2000.-P. 573-576.
10. Alaverdi, N. CD27. Other names: Tp55 // Alaverdi N. J Biol Regul Homeost Agents. Italy, 2000. - P. 237-240.
11. Andersson, U. HMGB1 is a potent trigger of arthritis // Andersson U. J Intern Med. England, 2004. - P. 344-350.
12. Arnett, FC. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis // Arnett FC. Arthritis Rheum. United States, 1988.-P. 315-324.
13. Arosa, FA. CD8+CD28- T cells: certainties and uncertainties of a prevalent human T-cell subset. // Arosa FA. Immunol Cell Biol. Australia, 2002. - P. 1-13.
14. Asseman, C. About CD4pos CD25pos regulatory cells // Asseman C. Autoimmunity Reviews. Netherlands, 2002. - P. 190-197.
15. Aune, T.M. Gene Expression Profiles in Human Autoimmune Disease // Aune T.M. Current Pharm Des. Netherlands, 2003. - P. 1-13.
16. Baier, A. Apoptosis in rheumatoid arthritis // Baier A. Curr Opin Rheumatol. -United States, 2003. P. 274-279.
17. Baines, PB. Endothelial cell adhesion molecules in meningococcal disease // Baines PB. Arch Dis Child. England, 1999. -P. 74-76.
18. Balandraud, N. Epstein-Barr virus load in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis: accurate quantification using real-time polymerase chain reaction // Balandraud N. Arthritis Rheum. United States, 2003. - P. 1223-1228.
19. Baugh, JA. Mechanisms for modulating TNF alpha in immune and inflammatory disease // Baugh JA. Curr Opin Drug Discov Devel. England, 2001. - P. 635-650.
20. Benoist, C. Autoimmunity provoked by infection: how good is the case for T cell epitope mimicry? // Benoist C. Nature Immunology. United States, 2001. - P. 797801.
21. Berczi, I. Natural immunity and neuroimmune host defense // Berczi I. Ann N Y Acad Sci. United States, 2000. - P. 248-257.
22. Biddle, DA. Extranodal follicular dendritic cell sarcoma of the head and neck region: three new cases, with a review of the literature // Biddle DA. Mod Pathol .United States, 2002. P. 50-58.
23. Billings, SD. Epithelioid sarcoma-like hemangioendothelioma // Billings SD. Am J Surg Pathol. United States, 2003. - P. 48-57.
24. Bizzaro, N. Diagnostic accuracy of the anti-citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis // Bizzaro N. Clin Chem. United States, 2001. - P. 1089-1093.
25. Blair, PJ. CD28 co-receptor signal transduction in T-cell activation // Blair PJ. Biochem Soc Trans. England, 1997. - P. 651-657.
26. Bofill, M. CD38 in health and disease // Bofill M. Chem Immunol. Switzerland, 2000.-P. 218-234.
27. Bohbot, A. Peripheral blood CD34+ cells: method of purification and ex vivo expansion // Bohbot A. Nouv Rev Fr Hematol. France, 1995. - P. 359-365.
28. Borowitz, MJ. Monoclonal antibody phenotyping of B-cell non-Hodgkin's lymphoma. The Southeastern Cancer Study Group experience // Borowitz MJ. Am J Pathol. United States, 1985. - P. 514.
29. Borrego, F. Structure and function of major histocompatibility complex (MHC) class I specific receptors expressed on human natural killer (NK) cells // Borrego F. Immunol. England, 2002. - P. 637-660.
30. Botto, M. Clq, autoimmunity and apoptosis // Botto M. hnmunobiology. -Germany, 2002. P. 395-406.
31. Boyum, A. Separation of lymphocytes, granulocytes, and monocytes from human blood using iodinated density gradient media // Boyum A. Methods Enzymol. -United States, 1984. P. 88-102.
32. Boyum, A. Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient medium density and osmolality // Boyum A. Scand J Immunol. England, 1991.-P. 697-712.
33. Brennan, F.M. Inhibitory effect of TNF-& antibodies on synovial cell interleukin-1 production in rheumatoid arthritis // Brennan F.M. Lancet. England, 2001. - P. 244-247.
34. Cabanas, C. CD18 (leukocyte integrin beta2 subunit) // Cabanas C. J Biol Regul Homeost Agents. Italy, 1999. - P. 137-139.
35. Carroll, MC. The complement system in В cell regulation // Carroll MC. Mol Immunol. England, 2004. - P. 141-146.
36. Cesano, A. CD22 as a target of passive immunotherapy // Cesano A. Semin Oncol. United States, 2003. - P. 253-257.
37. Chambers, C.A. Co-stimulation in T cell responses // Chambers C.A. Curr. Opin. Immunol. England, 1997. - P. 369-404.
38. Chang, YL. New aspects in clinicopathologic and oncogene studies of 23 pulmonary lymphoepithelioma-like carcinomas // Chang YL. Am J Surg. Pathol. -United States, 2002. P. 715-723.
39. Chen, L. Co-inhibitory molecules of the B7-CD28 family in the control of T-cell immunity // Chen L. Nat Rev Immunol. England, 2004. - P. 336-347.
40. Cheuk, W. Inflammatory pseudotumor-like follicular dendritic cell tumor: a distinctive low-grade malignant intra-abdominal neoplasm with consistent Epstein-Barr virus association // Cheuk W. Am J Surg. Pathol. United States, 2001. - P. 721731.
41. Cheuk, W. Primary histiocytic lymphoma of the central nervous system: a neoplasm frequently overshadowed by a prominent inflammatory component // Cheuk W. Am J Surg. Pathol.- United States, 2001. P. 1372-1379.
42. Christiansen, E. DNA-antibodies in sera from patients with systemic lupus erythematosus // Christiansen E. Acta Derm Venereol. Sweden, 1975. - P. 195-198.
43. Christopherson, KW. Endothelial chemokines in autoimmune disease // Christopherson KW. Curr Pharm Des. Netherlands, 2004. - P. 145-154.
44. Cichy, J. The liberation of CD44 // Cichy J. J Cell Biol. United States, 2003. - P. 839-843.
45. Clausen, B.E. Clonally-related immunoglobulin VH domains and nonrandom use of DH gene segments in rheumatoid arthritis synovium // Clausen B.E. J Mol. Med. -Netherlands, 1998. P. 240-251.
46. Cooper, MA. Human natural killer cells: a unique innate immunoregulatory role for the CD56(bright) subset // Cooper MA. Blood. United States, 2001. - P. 31463151.
47. Соре, АР. Exploring the reciprocal relationship between immunity and inflammation in chronic inflammatory arthritis // Cope AP. Rheumatology. -Switzerland, 2003. P. 716-731.
48. Croft, M. Costimulation of T cells by 0X40, 4-1BB, and CD27 // Croft M. Cytokine Growth Factor Rev England, 2003. - P. 265-273.
49. Croft, M. Co-stimulatory members of the TNFR family: keys to effective T-cell immunity? // Croft M. Nat Rev Immunol. England, 2003. - P. 609-620.
50. Cunnane, G. Infections and biological therapy in rheumatoid arthritis // Cunnane G. Best Pract Res Clin Rheumatol- England, 2003. P. 345-363.
51. Dascher, CC. CD1 antigen presentation and infectious disease // Dascher CC. Contrib Microbiol. Switzerland, 2003. - P. 164-182.
52. Davidson, A. Autoimmune Diseases // Davidson A. New England J. Med. -United States, 2001. P. 340-350.
53. Dayer, JM. The pivotal role of interleukin-1 in the clinical manifestations of rheumatoid arthritis // Dayer JM. Rheumatology. -Switzerland, 2003, P. 3-10.
54. D'Cruz, D. Testing for autoimmunity in humans // D'Cruz D. Toxicol Lett. -Netherlands, 2002.-P. 93-100.
55. Deaglio, S. CD38/CD31, a receptor/ligand system ruling adhesion and signaling in human leukocytes // Deaglio S. Chem Immunol. Switzerland, 2000. - P. 99-120.
56. Deaglio, S. Human CD38: a (Revolutionary story of enzymes and receptors // Deaglio S.LeukRes. -England, 2001.-P. 1-12.
57. Deterre, P. CD38 in T- and B-cell functions // Deterre P. Chem Immunol. -Switzerland, 2000. P. 146-168.
58. Dobrovolskaia, MA. Toll receptors, CD 14, and macrophage activation and deactivation by LPS // Dobrovolskaia MA. Microbes Infect. France, 2002. - P. 903-914.
59. Dockrell, DH. The multiple roles of Fas ligand in the pathogenesis of infectious diseases // Dockrell DH. Clin Microbiol Infect. France, 2003. - P. 766-779.
60. Dong, H. Costimulating aberrant T cell responses by B7-H1 autoantibodies in rheumatoid arthritis // Dong H. J. Clin. Invest. United States, 2003. - P. 363-370.
61. Dorner, T. The role of В cells in rheumatoid arthritis: mechanisms and therapeutic targets // Dorner T. Curr Opin Rheumatol. United States, 2003. - P. 246-252.
62. Dustin, ML. Membranes as messengers in T cell adhesion signaling // Dustin ML. Nat Immunol. United States, 2004. - P. 363-372.
63. Engel, P. New CD from the В cell section of the Fifth International Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens // Engel P. Leuk Lymphoma. -England, 1994.-P. 61-64.
64. Espinoza, L.R. Virus-associated arthritis // Espinoza L.R. Best Pract Res Clin Rheumatol.- England, 2003. P. 309-318.
65. Fairweather, D.L. From infection to autoimmunity // Fairweather D.L. J. of Autoimmunity. England, 2001. - P. 175-186.
66. Fantini, F. New drugs and treatment strategies for rheumatoid arthritis // Fantini F. Recenti Prog Med. Italy, 2003. - P. 361-379.
67. Fazou, C. Epitope specificity of clonally expanded populations of CD8+ T cells found within the joints of patients with inflammatory arthritis // Fazou C. Arthritis Rheum. United States, 2001. - P. 2038-2045.
68. Feldman, M. Mechanisms for modulating TNF alpha in immune and inflammatory disease // Feldman M. Curr Opin Drug Discov Devel. England, 2001.-P. 635-650.
69. Feltkamp, ТЕ. Antinuclear antibody determination in a routine laboratory // Feltkamp ТЕ. Ann Rheum Dis. England, 1996. - P. 723-727.
70. Firestein, G.S. Evolving concepts of rheumatoid arthritis // Firestein G.S. Nature. England, 2003. - P. 356-361.
71. Firestein, G.S. Somatic mutations in the p53 tumor suppressor gene in rheumatoid arthritis synovium // Firestein G.S. Proc. Natl Acad. Sci. USA. -United States, 1997. P. 10895-10900.1.l
72. Franz, J.K. Expression of sentrin, a novel antiapoptotic molecule, at sites of synovial invasion in rheumatoid arthritis // Franz J.K. Arthritis Rheum.- United States, 2000.-P. 599-607.
73. Frenette, P.S. Adhesion molecules Part П: Blood vessels and blood cells // Frenette P.S. The New England J. of Medicine. - United States, 2003. - P. 43-45.
74. Foon, KA. Immunologic classification of leukemia and lymphoma // Foon KA. Blood. United States, 1986. - P. 1-31.
75. Gahmberg, CG. Leukocyte integrins and inflammation // Gahmberg CG. Cell Mol Life Sci. Switzerland, 1998. - P. 549-555.
76. Garboczi, D.N. Structure of the complex between human T-cell receptor, viral peptide and HLA-A2 // Garboczi D.N. Nature. England, 1996. - P. 134-141.
77. Gerli, R. In vivo activated T cells in rheumatoid synovitis. Analysis of Thl- and Th2-type cytokine production at clonal level in different stages of disease // Gerli R. Clin Exp Immunol. England, 2002. - P. 549-555.
78. Gewurz, B.E. Virus subversion of immunity: a structural perspective // Gewurz B.E. Cuit. Opin. Immunol. England, 2001. - P. 442-450.
79. Gjertsson, I. The role of В cell CD22 expression in Staphylococcus aureus arthritis and sepsis // Gjertsson I. Microbes Infect. France, 2004. - P. 377-382.
80. Goldbach-Mansky, R. Rheumatoid arthritis associated autoantibodies in patients with synovitis of recent onset // Goldbach-Mansky R. Arthritis Res. England, 2000. - P. 236-243.
81. Gonzalez-Juanatey, C. Echocardiographic and Doppler findings in long-term treated rheumatoid arthritis patients without clinically evident cardiovascular disease // Gonzalez-Juanatey C. Semin Arthritis Rheum. United States, 2004. - P. 231-238.
82. Goldring, SR. Mechanisms of bone loss in inflammatory arthritis: diagnosis and therapeutic implications // Goldring SR. Arthritis Res. England, 2000. - P. 33-37.
83. Goronzy, J.J. Ageing, autoimmunity and arthritis T-cell senescence and contraction of T-cell repertoire diversity catalysts of autoimmunity and chronic inflammation // Goronzy J.J. Arthritis Res Ther. - England, 2003. - P. 225-234.
84. Grade, J. A proinflammatory role for IL-18 in rheumatoid arthritis // Gracie J. J. Clin. Invest. United States, 1999. - P. 1393-1401.
85. Grom, AA. Natural killer cell dysfunction: A common pathway in systemic-onset juvenile rheumatoid arthritis, macrophage activation syndrome, and hemophagocytic lymphohistiocytosis? // Grom AA. Arthritis Rheum. United States, 2004. - P. 689698.
86. Groh, V. Recognition of stress-induced MHC molecules by intestinal epithelial gamma-delta T cells // Groh V. Science. United States, 1998. - P. 1737-1740.
87. Gumperz, JE. CDl-specific T cells in microbial immunity // Gumperz JE. Сип-Орт Immunol. England, 2001. - P. 471-478.
88. Hammond, KJ. NKT cells: potential targets for autoimmune disease therapy? // Hammond KJ. Tissue Antigens. Denmark, 2002. - P. 353-363, 93-97.
89. Han, Z. c-Jun N-terminal kinase is required for metalloproteinase expression and joint destruction in inflammatory arthritis // Han Z. J. Clin. Invest. United States, 2001.-P. 73-81.
90. Haringman, J J. Chemokine blockade: a new era in the treatment of rheumatoid arthritis? // Haringman J.J. Arthritis Res Ther. England, 2004. - C. 87-91.
91. Hassfeld, W. Autoantibody to the nuclear antigen RA33: a marker for early rheumatoid arthritis // Hassfeld W. Br J Rheumatol. England, 1993. - P. 199-203.
92. Hermiston, ML. CD45: a critical regulator of signaling thresholds in immune cells // Hermiston ML. Annu Rev Immunol. United States, 2003. - P. 107-137.
93. Hou, R. Interleukin-12 and interleukin-2-induced invariant natural killer T-cell cytokine secretion and perforin expression independent of T-cell receptor activation // Hou R. Immunology. England, 2003. - P. 30-37.
94. Irie-Sasaki, J. CD45 regulated signaling pathways // Irie-Sasaki J. Curr Top Med Chem. Netherlands, 2003. - P. 783-896.99Jose, C. Immunoregulatory T cells in autoimmunity // Jose C. Autoimmunity Reviews. Netherlands, 2004. - P. 45-51.
95. Kahn, HJ. Monoclonal antibody D2-40, a new marker of lymphatic endothelium, reacts with Kaposi's sarcoma and a subset of angiosarcomas // Kahn HJ. Mod Pathol. United States, 2002. - P. 434-440.
96. Kanda, T. T-lymphocyte subsets as noninvasive markers of cardiomyopathy //Kanda T. Clin Cardiol. United States, 1990. - P. 617-622.
97. Kang, YM. CD8 T cells are required for the formation of ectopic germinal centers in rheumatoid synovitis // Kang YM. J Exp Med. United States, 2002. - P. 1325-1336.
98. Kawachi, K. Interdigitating dendritic cell sarcoma of the spleen: report of a case with a review of the literature // Kawachi K. Am J Surg Pathol. United States, 2002. - P. 530-537.
99. Khan, AI. L-selectin: an emerging player in chemokine function // Khan AI. Microcirculation. United States, 2003. - P. 351-358.
100. Kijimoto-Ochiai S. CD23 (the low-affinity IgE receptor) as a C-type lectin: a multidomain and multifunctional molecule // Kijimoto-Ochiai S. Curr Allergy Asthma Rep. United States, 2002. - P. 332-339.
101. Kim, H.-J. В cells in rheumatoid arthritis // Kim H.-J. Arthritis Res. England, 2000.-P. 126-131.
102. Kinne, R.W. Synovial fibroblast-like cells strongly express jun-B and C-fos proto-oncogenes in rheumatoid-and osteoarthritis // Kinne R.W. Scand. J. Rheumatol. Suppl. Norway, 1995. - P. 121-125.
103. Kirwan, J.R. // Kirwan J.R. Arthritis Rheum.- United States, 2004. P. 1-4.
104. Kolenko, V. Inhibition of NF-кВ activity in human T lymphocytes induces caspase-dependent apoptosis without detectable activation of caspase-1 and -3 // Kolenko V. J. Immunol. United States, 1999. - P. 590-598.
105. Komelisse, RF. Bacterial meningitis: mechanisms of disease and therapy // Komelisse RF. Eur J Pediatr. Germany, 1995. - P. 85-96.
106. Kouskoff, V. Organ-specific disease provoked by systemic autoimmunity // Kouskoff V. Cell. United States, 1996. - P. 811-822.
107. Kronenberg, M. The unconventional lifestyle of NKT cells // Kronenberg M. Nat Rev Immunol. England, 2002. - P. 557-568.
108. Kumagai, S. Topics on immunological tests for rheumatoid arthritis // Kumagai S. Rinsho Byori. Japan, 2004, - P. 836-843.
109. Lane, PJ. Dendritic cell subsets and costimulation for effector T-cell responses // Lane PJ. Curr Opin Pharmacol. England, 2001.- P. 409-416.
110. Lee, D.M. Mast cells: a cellular link between autoantibodies and inflammatory arthritis // Lee, D.M. Science. United States, 2002. - P. 1689-1692.
111. Leech, M. Regulation of p53 by macrophage migration inhibitory factor in inflammatory arthritis // Leech M. Arthritis Rheum. United States, 2003. - P. 1881-1889.
112. Li, N.L. Isolation and characteristics of autoreactive T cells specific to aggrecan G1 domain from rheumatoid arthritis patients // Li N.L. Cell Res. China, 2000. -P. 39-49.
113. Lipsky, P.E. Infliximab and methotrexate in the treatment of rheumatoid arthritis. Anti-Tumor Necrosis Factor Trial in Rheumatoid Arthritis with Concomitant Therapy Study Group // Lipsky P.E. N. Engl. J. Med. United States, 2000. - P. 1594-1602.
114. Liu, H. The role of apoptosis in rheumatoid arthritis // Liu H. Curr Opin Pharmacol. England, 2003. - P. 317-322.
115. Liu, H. TNF-a gene expression in macrophages: regulation by NF-кВ is independent of c-Jun or C/EBPP // Liu H. J. Immunol. United States, 2000. - P. 14277-4285.
116. Liu, H. Constitutively activated Akt-1 is vital for the survival of human monocyte-differentiated macrophages: role of Mcl-1, independent of NF-кВ, Bad or caspase activation // Liu H. J. Exp. Med. United States, 2001. - P. 113-125.
117. Li-Weber, M. Function and regulation of the CD95 (APO-l/Fas) ligand in the immune system // Li-Weber M. Semin Immunol. England, 2003. - P. 145-157.
118. Loken, MR. Flow cytometric analysis of normal В lymphoid development // Loken MR. Pathol Immunopathol Res. Switzerland, 1988. - P. 357-370.
119. Long, EO. Inhibition of natural killer cell activation signals by killer cell immunoglobulin-like receptors (CD 158) // Long, EO. Immunol Rev. Denmark, 2001.-P. 223-233.
120. Lubberts, E. The role of IL-17 and family members in the pathogenesis of arthritis // Lubberts E. Curr Opin Investig Drugs. England, 2003. - P. 572-577.
121. Lubberts, E. IL-17 promotes bone erosion in murine collagen-induced arthritis through loss of the receptor activator of NF-кВ ligand/osteoprotegerin balance // Lubberts E. J.Immunol. United States, 2003. - P. 2655-2662.
122. Lysholm, J. Local anti-type II collagen antibody production in rheumatoid arthritis synovial fluid. Evidence for an HLA-DR4-restricted IgG response // Lysholm J. Arthritis Rheum. United States, 1994. - P. 1023-1029.
123. Madden, D.R. The three-dimensional structure of peptide-МНС complexes // Madden D.R. Annu. Rev. Immunol. United States, 1995.- P. 587-622.
124. Mageed, RA. Immunopathology and the gene therapy of lupus // Mageed RA. Gene Ther. England, 2003. - P. 861-874.
125. Malaviya, R. Mast cell modulation of immune responses to bacteria // Malaviya R. Immunol Rev. Denmark, 2001. - P. 16-24.
126. Maldonado, A. Decreased effector memory CD45RA+CD62L- CD8+ T cells and increased central memory CD45RA-CD62L+ CD8+ T cells in peripheral blood of rheumatoid arthritis patients // Maldonado A. Arthritis Research & Therapy. -England, 2003. P. 91-96.
127. Mancini, G. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion // Mancini G. Immunochemistry. England, 1965. - P. 235-254.
128. Mariette, X. Anti-cytokines in the treatment of inflammation // Mariette X. Rev Prat. France, 2003. - P. 507-511.
129. Marzio, R. CD69 and regulation of the immune function // Marzio R. Immunopharmacol Immunotoxicol.- United States, 1999. P. 565-582.
130. Mashimo, T. The expression of the KAI1 gene, a tumor metastasis suppressor, is directly activated by p53 // Mashimo T. Proc. Nat. Acad. Sci.- United States, 1998. -P. 11307-11311.
131. Mason, DY. Monoclonal Anti-CD22 (pl35) antibodies for the detection of normal and neoplastic В lymphoid cells // Mason DY. Blood. United States, 1987. -P. 836.
132. Masuko-Hongo, K. Virus-associated arthritis // Masuko-Hongo K. Best Pract Res Clin Rheumatol. England, 2003. - 309-318.
133. Masuko-Hongo, K. Long-term persistent accumulation of CD8+ T cells in synovial fluid of rheumatoid arthritis // Masuko-Hongo K. Ann Rheum Dis. -England, 1997.-P. 613-621.
134. Matsui, T. Autoantibodies to T cell costimulatory molecules in systemic autoimmune diseases // Matsui T. J. Immunol. United States, 1999. - P. 4328-4335.
135. McCain, GA. Antibody to extractable nuclear antigen in the rheumatic diseases // McCain GA. J Rheumatol. Canada, 1978. - P. 399-406.
136. McKenney, Ж. CD31 expression in intratumoral macrophages: a potential diagnostic pitfall // McKenney JK. Am J Surg Pathol. United States, 2001. - P. 1167-1173.
137. Menaker, RJ. Fascination with bacteria-triggered cell death: the significance of Fas-mediated apoptosis during bacterial infection in vivo // Menaker RJ. Microbes Infect. France, 2003. - P. 1149-1158.
138. Mendlick, MR. Translocation t(l;3)(p36.3;q25) is a nonrandom aberration in epithelioid hemangioendothelioma // Mendlick MR. Am J Surg Pathol. United States, 2001. - P. 684-687.
139. Melendez, ND. VCAM (CD-106) and ICAM (CD-54) adhesion molecules distinguish keratoacanthomas from cutaneous squamous cell carcinomas // Melendez ND. Mod Pathol. United States, 2003. - P. 8-13.
140. Metelitsa, LS. Flow cytometry for natural killer T cells: multi-parameter methods for multifunctional cells // Metelitsa LS. Clin Immunol. United States, 2004. - P. 267-276.
141. Michal, M. Dendritic cell neurofibroma with pseudorosettes: a report of 18 cases of a distinct and hitherto unrecognized neurofibroma variant // Michal M. Am J Surg Pathol. United States, 2001. - P. 587-594.
142. Mierau, R. New aspects in autoantibody diagnosis in collagen diseases // Mierau R. Z Rheumatol. Germany, 2002. - P. 355-366.
143. Mimori, T. Clinical significance of anti-Ku autoantibodies~a serologic marker of overlap syndrome? // Mimori T. Intern Med.- England, 2002. P. 1096-1098.
144. Moody, DB. Intracellular pathways of CD1 antigen presentation // Moody DB. Nat Rev Immunol. England, 2003. - P. 11-22.
145. Morita, Y. Flow cytometric single-cell analysis of cytokine production by CD4+ T cells in synovial tissue and peripheral blood from patients with rheumatoid arthritis // Morita Y. Arthritis Rheum. United States, 1998. - P. 1669-1676.
146. Muir, ТЕ. Metanephric adenoma, nephrogenic rests, and Wilms' tumor: a histologic and immunophenotypic comparison // Muir ТЕ. Am J Surg Pathol. -United States, 2001. P. 1290-1296.
147. Mukai, HY. Nodal CD8 positive cytotoxic T-cell lymphoma: a distinct clinicopathological entity // Mukai HY. Mod Pathol. United States, 2002. - P. 11311139.
148. Nadler, L. В Cell/Leukemia Panel Workshop: Summary and comments. In: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler LM, Bernstein Ш, eds. Leukocyte Typing П: Human T Lymphocytes // Nadler L. New York: Springer-Verlag. United States, 1986.-P. 3-43.
149. Nakashima, T. RANKL and RANK as novel therapeutic targets for arthritis // Nakashima T. Curr Opin Rheumatol. United States, 2003. - P. 280-287.
150. Naor, D. CD44 in rheumatoid arthritis // Naor D. Arthritis Res Ther. England, 2003.-P. 105-115.
151. Naor, D. CD44 in cancer // Naor D. Crit Rev Clin Lab Sci. United States, 2002. -P. 527-579.
152. Nepom, G.T. HLA genes associated with rheumatoid arthritis: identification of susceptibility alleles using specific oligonucleotide probes // Nepom G.T. Arthritis Rheum. United States, 1989. - P. 15-21.
153. Nicholson, 1С. CD62L (L-selectin) // Nicholson 1С. J Biol Regul Homeost Agents. Italy, 2002. - P. 144-146.
154. Pagliari, L.J. Macrophages require constitutive NF-кВ activation to maintain A1 expression and mitochondrial homeostasis // Pagliari L.J. Mol. Cell. Biol. United States, 2000. -P. 8855-8865.
155. Pap, T. Invasiveness of synovial fibroblasts is regulated by p53 in the SCID mouse in vivo model of cartilage invasion // Pap T. Arthritis Rheum. United States, 2001.-P. 676-681.
156. Pap, T. Fibroblast biology Role of synovial fibroblasts in the pathogenesis of rheumatoid arthritis // Pap T. Arthritis Res. England, 2000. - P. 361-367.
157. Patel, DD. CXCR3 and CCR5 ligands in rheumatoid arthritis synovium // Patel DD. Clin Immunol. United States, 2001. - P. 39-45.
158. Ponta, H. CD44: from adhesion molecules to signalling regulators // Ponta H. Nat Rev Mol Cell Biol. England, 2003. - P. 33-45.
159. Pope, R.M. Apoptosis as a therapeutic tool in rheumatoid arthritis // Pope R.M. Nature Reviews Immunology. England, 2002. - P. 1-9.
160. Pope, R.M. Principles of Molecular Rheumatology //PopeR.M. CurrMolMed. Netherlands, 2000. - P. 325-361.
161. Qin, S. The chemokine receptors CXCR3 and CCR5 mark subsets of T cells associated with certain inflammatory reactions // Qin S. J Clin Invest. United States, 1998.-P. 746-754.
162. Radice, A. Antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) // Radice A. Autoimmunity. England, 2005. - P. 93-103.
163. Ramalingam, P. Posttransplant lymphoproliferative disorders in lung transplant patients: the Cleveland Clinic experience // Ramalingam P. Mod Pathol. United States, 2002. - P. 647-656.
164. Rankin, JA. Biological mediators of acute inflammation // Rankin JA. AACN Clin Issues. United States, 2004. - P. 3-17.
165. Rantapaa-Dahlqvist, S. Diagnostic and prognostic significance of autoantibodies in early rheumatoid arthritis // Rantapaa-Dahlqvist S. Scand J Rheumatol. Norway, 2005.-P. 83-96.
166. Raza, K. Predictive value of antibodies to cyclic citrullinated peptide in patients with very early inflammatory arthritis // Raza K. J Rheumatol. Canada, 2005. - P. 231-238.
167. Reinhold, U. CD4+ CD7- T cells: a separate subpopulation of memory T cells? // Reinhold U.J. Clin Immunol. United States, 1997. - P. 265-271.
168. Robbins, PD. Gene therapy for arthritis // Robbins PD. Gene Ther. England, 2003.-P. 902-911.
169. Ronaghy, A. Immunostimulatory DNA sequences influence the course of adjuvant arthritis // Ronaghy A. J Immunol. United States, 2002. - P. 51-56.
170. Reme, T. Mutations of the p53 tumour suppressor gene in erosive rheumatoid synovial tissue // Reme T. Clin Exp Immunol. England, 2000. - P. 353-358.
171. Renaudineau, Y. Rheumatoid factor on a daily basis // Renaudineau Y. Autoimmunity. England, 2005. - P. 11-16.
172. Rondeel, J.M. Immunofluorescence versus ELISA for the detection of antinuclear antigens // Rondeel J.M. Expert Rev Mol Diagn. England, 2002. - P. 226-232.
173. Roura-Mir, C. Sorting out self and microbial lipid antigens for CD1 // Roura-Mir C. Microbes Infect. France, 2003. - P. 1137-1148.
174. Sawhney, S. Macrophage activation syndrome: a potentially fatal complication of rheumatic disorders // Sawhney S. Arch Dis Child. England, 2001. - P. 421426.
175. Schonbeck, U. The CD40/CD154 receptor/ligand dyad // Schonbeck U. Cell Mol Life Sci. Switzerland, 2001. - P. 4-43.
176. Sebbag, M. The antiperinuclear factor and the socalled antikeratin antibodies are the same rheumatoid arthritis-specific autoantibodies // Sebbag M. J Clin Invest. -United States, 1995. P. 2672-2679.
177. Sempowski, GD. Structure and function of the CD7 molecule // Sempowski GD. Crit Rev Immunol. United States, 1999. - P. 331-348.
178. Sen, M. Blockade of Wnt-5A/Frizzled 5 signaling inhibits rheumatoid synoviocyte activation // Sen M. Arthritis Rheum. United States, 2001. - P. 772781.
179. Sibbitt, W.L. Oncogenes, growth factors, and autoimmune diseases (review) // Sibbitt W.L. Anticancer Res. Greece, 1991. - P. 97-113.
180. Sidorenko, SP. The dual-function CD 150 receptor subfamily: the viral attraction // Sibbitt W.L. Nat Immunol. United States , 2003. - P. 19-24. 205.Sharpe, AH. The B7-CD28 superfamily // Sharpe AH. Nat Rev Immunol. -England, 2002. - P. 116-126.
181. Smeets, TJ. Poor expression of T cell-derived cytokines and activation and proliferation markers in early rheumatoid synovial tissue // Smeets T.J. Clin. Immunol. Immunopathol. United States, 1998. - P. 84-90.
182. Steiner, G. Autoantibodies in rheumatoid arthritis and their clinical significance // Steiner G. Arthritis Res. England, 2002. - P. 1-5.
183. Sun, W. Histiocytic sarcoma involving the central nervous system: clinical, immunohistochemical, and molecular genetic studies of a case with review of the literature // Sun W. Am J Surg Pathol. United States, 2003. - P. 258-265.
184. Takamoto, T. Lymphocyte subsets in patients with dilated cardiomyopathy and perimyocarditis // Takamoto T. J Clin Lab Immunol. Scotland, 1986. - P. 113-116.
185. THart, В A. Gene therapy in nonhuman primate models of human autoimmune disease // THart BA. Gene Ther. England, 2003. - P. 890-901.
186. Tarkowski, M. Expression and function of CD30 on T lymphocytes // Tarkowski M. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). Switzerland, 1999. - P. 217-221.
187. Taylor, PC. Anti-cytokines and cytokines in the treatment of rheumatoid arthritis // Taylor PC. Curr Pharm Des. Netherlands, 2003. - P. 1095-1106.
188. Terstappen, LWMM. Identification and characterization of plasma cells in normal human bone marrow by high-resolution flow cytometry // Terstappen LWMM. Blood. United States, 1990. - P. 1739-1747.
189. Torres, B.A. Modulation of disease by superantigens // Torres B.A. Curr. Opin. Immunol. England, 1998. - P. 465^70.
190. Triantafilou, M. Innate recognition of bacteria: engagement of multiple receptors // Triantafilou M. Crit Rev Immunol. United States, 2002. - P. 251-268.
191. Turesson, C. Endothelial expression of MHC class II molecules in autoimmune disease // Turesson C. Curr Pharm Des. Netherlands, 2004. - P. 129-143.
192. Tussey, L. Functionally distinct CD8+ memory T cell subsets in persistent EBV infection are differentiated by migratory receptor expression // Tussey L. Eur J Immunol. Germany, 2000. - P. 1823-1829.
193. Union, A. Identification of citrullinated rheumatoid arthritis-specific epitopes in natural filaggrin relevant for antifilaggrin autoantibody detection by line immunoassay //Union A. Arthritis Rheum. United States, 2002.-P. 1185-1195.
194. Van Amersfoort, ES. Receptors, mediators, and mechanisms involved in bacterial sepsis and septic shock // Van Amersfoort ES. Clin Microbiol Rev. -United States, 2003. P. 379-414.
195. Van Boekel, M.A.M. Autoantibody systems in rheumatoid arthritis: specificity, sensitivity and diagnostic value. Arthritis Res. England, 2002. - P. 87-93.
196. Van der Heijden, I.M. Presence of bacterial DNA and bacterial peptidoglycans in joints of patients with rheumatoid arthritis and other arthritides. Van der Heijden I.M. Arthritis Rheum. United States, 2000. - P. 593-598.
197. Van Jaarsveld, CHM. The prognostic value of the antiperinuclear factor, anti-citrullinated peptide antibodies and rheumatoid factor in early rheumatoid arthritis. Van Jaarsveld CHM. Clin Exp Rheumatol. Italy, 1999. - P. 689-697.
198. Vincent, MS. Understanding the function of CD 1-restricted T cells // Vincent MS. Nat Immunol. United States, 2003. - P. 517-523.
199. Viola, A. T cell activation determined by T cell receptor number and tunable thresholds // Viola A. Science. United States, 1996. - P. 104-106.
200. Vizcarra, C. New perspectives and emerging therapies for immune-mediated inflammatory disorders // Vizcarra C. J Infus Nurs. United States, 2003. - P. 319325.
201. Verbeke, CS. Fas ligand expression in Hodgkin lymphoma // Verbeke CS. Am J Surg Pathol. United States, 2001. - P. 388-394.
202. Verheijden, G.F. Human cartilage glycoprotein-39 as a candidate autoantigen in rheumatoid arthritis // Verheijden G.F. Arthritis Rheum. United States, 1997. - P. 1115-1125.
203. Walsh, D.A. Focally regulated endothelial proliferation and cell death in human synovium // Walsh D.A. Am. J. Pathol. United States, 1998. - P. 691-702.
204. Wang, L. Down-regulation of Fas expression in the lymph nodes of patients infected with human immunodeficiency virus // Wang, L. Arch Pathol Lab Med. -United States, 2002. P. 28-32.
205. Wang EC. CD8high+ (CD57+) T cells in patients with rheumatoid arthritis // Wang EC. Arthritis Rheum. United States, 1997. - P. 237-248.
206. Wesley, J. NK T cell-NK cell cross-talk: reciprocal interaction and activation? // Wesley J. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). Switzerland, 2003. - 121-126.
207. Weyand, C.M. The influence of HLA-DRB1 genes on disease severity in rheumatoid arthritis // Weyand C.M. Ann. Intern. Med. United States, 1992. - P. 801-803.
208. Willmann, K. A flow cytometric immune function assay for human peripheral blood dendritic cells // Willmann K. J Leukoc Biol. United States, 2000. - P. 536544.
209. Williams R.C. Antigenic determinant reactig with rheumatoid factor: epitopewith different primary sequences share similar conformation // Williams R.C. Mol. Immunol. England, 1997. - P. 543-552.
210. Woolley, DE. The mast cell in inflammatory arthritis // Woolley DE. N Engl J Med. United States, 2003. - P. 1709-1711.
211. Yamanishi, Y. Regional analysis of p53 mutations in rheumatoid arthritis synovium // Yamanishi Y. Proc. Natl Acad. Sci. USA. United States, 2002. - P. 10025-10030.
212. Yousem, SA. Pulmonary Langefhans' cell histiocytosis: molecular analysis of clonality // Yousem SA. Am J Surg Pathol. United States, 2001. - P. 630-636.
213. Zhang, H.G. Gene therapy that inhibits nuclear translocation of nuclear factor-кВ results in tumor necrosis factor-a-induced apoptosis of human synovial fibroblasts // Zhang H.G. Arthritis Rheum. United States, 2000. - P. 1094-1105.
214. Zhou, Z. Autoantigenic posttranslational modifications of proteins: does it apply to rheumatoid arthritis? // Zhou Z. Curr Opin Rheumatol. United States, 2002. - P. 250-253.
215. Ziolkowska, M. Laboratory changes on anti-tumor necrosis factor treatment in rheumatoid arthritis // Ziolkowska M. Curr Opin Rheumatol. United States, 2003. -P. 267-273.
216. Zon-Giebel, A. Interleukin-1 receptor antagonists in the treatment rheumatoid arthritis // Zon-Giebel A. Przegl Lek. Poland, 2002. - P. 916-918.