Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Особенности иммунологической реактивности новорожденных, родившихся у матерей с урогенитальным хламидиозом

На правах рукописи

РЕМИЗОВА ИРИНА ИВАНОВНА

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ, РОДИВШИХСЯ У МАТЕРЕЙ С УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ХЛАМИДИОЗОМ

14.00.36. - аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 2005

Работа выполнена в Государственном учреждении «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества Министерства Здравоохранения Российской Федерации» (директор - доктор медицинских наук Черданцева Г. А.)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Базарный Владимир Викторович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Имельбаева Эльвира Аркамовна доктор медицинских наук, профессор Волосников Дмитрий Кириллович

Ведущее учреждение: ГУ Институт иммунологии и физиологии УРО РАН, г. Екатеринбург

Защита состоится

«Л^Г» 2005 г.

часов на за-

седании диссертационного совета Д 208.117.03 Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской Федерации» (454092 г. Челябинск, ул. Воровского, 64).

в

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской Федерации»

Автореферат разослан

2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л.Ф.

ОБШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Медико-социальное значение уроге-нитального хламидиоза обусловлено его широким распространением в популяции (Ильин И.И. и соавт., 1993; Asche L.V. et. al., 1993; Ngeow Y.F. et. al., 1990; Stephenson J. et. al., 2000) и влиянием на репродуктивное здоровье. Данные литературы указывают на высокий уровень заболеваемости среди беременных и родильниц с поражением плодов и новорожденных (Василос Н.С. и соавт., 1990; Gencay M. et. al., 1995; Vaz F.A et. al, 1999). В зависимости от характера возбудителя, сроков гестации, напряженности гуморального и клеточного звеньев иммунитета беременной женщины, частота заражения новорожденных колеблется от 12 до 70% (Малова И.О., 1998; Радзинский В.Е. и соавт., 1996; Тареева Т.Г. и соавт., 1999; Царегородцев А.А. и соавт., 2001).

Показано, что в зависимости от времени инфицирования плода в раннем неонатальном периоде у новорожденного могут наблюдаться как тяжелые генерализованные формы хламидийной инфекции (сепсис, менингоэнцефалит, пневмония), так и локальные ее проявления (конъюктивит, вульвовагинит) (Кудрявцева Л.В. и соавт., 2001; Савенкова М.С. и соавт., 2004; Филин В.А и соавт, 1999; Claman P. et. al., 1995). Вместе с тем, у некоторых детей даже при наличии возбудителя клинические проявления инфекции отсутствуют (Королева Л.И., 2000). Это вызывает определенные сложности в трактовке лабораторных показателей при постановке диагноза хламидийной инфекции у данной категории детей. Обозначенная проблема охватывает два аспекта. Фундаментальный касается иммунологических механизмов взаимосвязи микроорганизма Chlamydia trachomatis (Ch. trachomatis) и

плода. Прикладной аспект заключается в необходимости интерпретации полученных данных у новорожденных, родившихся от инфицированных матерей.

Сложность обоснования нарушений иммунологической адаптации новорожденных, родившихся от матерей с хламидиозом, сопряжена с тем, что стандартные методы лабораторного обследования не дают информации о функциональных резервах иммунокомпетентных клеток.

С одной стороны, состояние гуморального звена иммунитета при инфекционной патологии обычно оценивают по результатам измерения концентрации общих и специфических иммуноглобулинов различных классов, не учитывая гетерогенность функциональных свойств специфических антител (Башмакова М.А. и соавт., 2000; Бойцов А.Г. и соавт., 2002; Демихов В.Г. и соавт., 2001). С другой стороны, гуморальный иммунитет в периоде новорожденности имеет пассивный характер (материнские антитела) и оценить влияние материнских антител на формирование иммунного ответа новорожденных стандартными методами исследования в большинстве случаев не представляется возможным. В этой связи особенно перспективным направлением может явиться поиск наиболее информативных показателей иммунного статуса, позволяющих прогнозировать развития заболевания, что и определило цель настоящего исследования.

Цель работы: оценить особенности специфического иммунитета у детей, родившихся от матерей с урогенитальным хламидиозом, выявить наиболее информативные лабораторные иммунологические показатели и на их основе разработать критерии оценки и прогноза

реализации внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных детей.

Задачи исследования:

1. Изучить состояние иммунной системы новорожденных детей, родившихся от матерей с хламидиозом.

2. Оценить биологические свойства и влияние специфических материнских антител на формирование иммунореактивности в раннем не-онатальном периоде новорожденности.

3. Выявить диагностическую информативность лабораторных показателей, отражающих развитие хламидийной инфекции у новорожденных.

4. Разработать диагностический алгоритм иммунологического прогнозирования развития данной патологии в раннем неонатальном периоде.

Научная новизна. В работе впервые дана оценка иммунореак-тивности новорожденных с учетом эффекта специфических материнских антител. Определено клинико-диагностическое значение функциональной активности антихламидийных антител IgG класса. Установлено, что пассивная передача высокоаффинных специфических антител к нейтрализующим белковым антигенам наружной мембраны хламидий (МОМР) способствует формированию протективного иммунного ответа у новорожденных. Неблагоприятное влияние на реактивность иммунной системы ребенка оказывают низкоаффинные антитела к липополисахаридному комплексу хламидий.

Информативными показателями, отражающими развитие признаков инфицирования у новорожденных, являются: титр и функцио-

нальная активность специфических антител, уровень циркулирующих иммунных комплексов низкой молекулярной массы.

Получены приоритетная справка № 2004117369 от 7.06.04. «Способ определения функциональной активности антихламидийных антител» и приоритетная справка № 2004135589/14 от 6.12.2004 «Способ определения групп риска по развитию внутриутробной хла-мидийной инфекции у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде» (авторы: Ремизова И.И., Чистякова Г.Н., Черданцева Г.А.).

Практическая значимость работы. Предложен перечень лабораторных иммунологических показателей, необходимых для обследования новорожденных, родившихся от матерей с хламидиозом. Использование разработанных критериев позволит расширить возможности клинической интерпретации иммунограмм и будет способствовать сокращению экономических расходов на необоснованные исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Инфицирование новорожденных Ch. trachomatis сопровождается изменением комплекса лабораторных иммунологических показателей, отражающих дисфункцию клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

2. Пассивная передача высокоаффинных специфических антител к нейтрализующим белковым антигенам способствует активации клеточного звена и формированию протективного иммунного ответа у новорожденных. Неблагоприятное влияние на реактивность иммунной системы ребенка оказывают низкоаффинные антитела к липополиса-харидному комплексу хламидий.

3. Иммунологическими показателями, позволяющими прогнозировать развитие хламидийной инфекции у новорожденных в раннем не-онатальном периоде, являются: титр IgG к липополисахаридам хлами-дий, функциональная аффинность специфических IgG к нейтрализующим белковым антигенам, концентрация циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой.

Апробация результатов и внедрение в практику. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях ГУ НИИ ОММ (1999 - 2004 г.г.), Всероссийской междисциплинарной научно-практической конференции «Внутриутробные инфекции плода и новорожденного» (г. Саратов, 2000); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Роль новых перинатальных технологий в снижении репродуктивных потерь» (г. Екатеринбург, 2001); V международной конференции «Здоровье, труд, отдых в XXI веке» (г. Москва, 2002); Всероссийской научно-практической конференции «Медицинские технологии в охране репродуктивного здоровья женщины» (г. Екатеринбург, 2003г); V Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Санкт-Петербург, 2003г).

Результаты исследований, представленные в диссертации, внедрены в практику отделения ранней реабилитации новорожденных детей ГУ НИИ ОММ, «Центр семейной медицины», г. Екатеринбурга; лабораторном отделении Свердловской Областной клинической больницы №1 и используются на кафедре клинической лабораторной и микробиологической диагностики Уральской государственной медицинской академии в преподавании раздела «Иммунодиагностика ин-

фекций».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, двух глав собственных исследований, заключения выводов и списка литературы, включающего 126 работ отечественных и 84 работы иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 6 рисунками и 18 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа основана на результатах клинико-лабораторного обследования 100 новорожденных детей, родившихся от женщин с физиологической и осложненной хламидиозом беременностью. Диагноз урогенитального хламидиоза во время беременности был установлен на основании международной классификации болезней (МКБ-10), с учетом акушерско-гинекологического анамнеза и данных лабораторного исследования.

Новорожденные дети обследовались в отделениях детской клиники (руководитель к.м.н. A.M. Литвинова). Матери обследованных новорожденных получали лечение и подготовку к родоразреше-нию в акушерском стационаре Уральского НИИ охраны материнства и младенчества МЗ РФ в 1998-2003г.г. Иммунологические исследования осуществлялись в отделении клинической иммунологии и микробиологии института (руководитель к.м.н. Г.Н. Чистякова).

В соответствии с установленным диагнозом, при участии вра-

ча-педиатра (д.м.н., с.н.с. Г.А. Черданцевой) нами выделены следующие группы:

I группа - 36 здоровых, доношенных новорожденных, родившихся от женщин с неосложненной беременностью, низким и умеренным риском по развитию неонатальной инфекции;

II группа - 30 детей от женщин с хламидийной инфекцией, у которых внутриутробное развитие, роды и ранний период адаптации протекали физиологически (дети были выписаны домой на 4-7 сутки жизни);

Ш группа - 34 новорожденных, родившихся с признаками внутриутробного инфицирования (ВУИ), диагностированными согласно методическим рекомендациям под ред. Ткаченко А.К. (1998).

Диагноз хламидийной инфекции у матерей и их новорожденных детей был верифицирован на основании выявления ДНК инфекционного агента методом точечной гибридизации с использованием ДНК-зонда, меченного биотином (Международный институт биологической медицины, г. Москва); полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью диагностических тест-систем "Литех" на ДНК-амплификаторе "Терцик" МС-2 (г. Москва); прямой иммунофлюорес-ценции (ПИФ) с использованием моноклональных антител серии "ХламиСкан", НПФ "ЛАБдиагностика" (г.Москва). Материалом для исследования служили образцы проб, взятые из цервикального канала у женщин и с задней стенки глотки, осадка мочи - у детей.

Серологическое исследование для определения родоспецифи-ческих антител к липополисахаридам хламидий (LPS) проводили реакции непрямой гемагглютинации (тест РНГА НПО "БИОМЕД", г.

Пермь) и иммуноферментном анализе (r-ELISA "MEDAK", Германия). Видоспецифические антитела IgM, IgG классов к нейтрализующим антигенам основного белка внешней мембраны (МОМР) Ch. trachomatis и Chlamydia pneumonia, psittaci (Ch, pneumonia, psittaci) - в иммуноферментном анализе на тест-системах ЗАО "Вектор-Бест", НПО "Медико-Биологический Союз". Для детекции результатов реакции использовали ридер "Мультискан - МСС/340" ("Labsystems", Финляндия). Материалом для исследования служила сыворотка крови, взятая утром, натощак из периферической вены в соответствии с общепринятыми требованиями. Обследование беременных женщин на хла-мидиоз проводили в течение беременности и перед родами, новорожденных детей обследовали на 3-5 сутки жизни.

Иммунологическое обследование новорожденных включало в себя исследование клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Идентификацию лимфоцитов проводили в реакции прямой иммуноф-люоресценции на проточном цитофлюориметре фирмы "Becton Dickinson" с использованием оригинальных диагностических наборов "Simul Set IMK Lymphocyte" с помощью моноклональных антител (МкАТ), меченых флюоресциин-5-изотиоцианатом и фикоэритрином к фенотипическим маркерам лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16,56+ и CD19+/CD23+, CD3+/HLA-DR+, антигенам.

Изучение окислительно-восстановительных процессов ней-трофилов выполняли с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия (Маянский А.Н., 1981). Исследование функциональной активности моноцитов периферической крови осуществляли с использованием спектрофотометрического варианта НСТ-теста по Е.П. Кисе-

левой, А.В. Полевщикову (1994), в качестве стимулятора добавляли взвесь инактивированной суточной культуры стафилококка в фосфатном буфере, приготовленную с использованием стандарта оптической мутности (109 микробных тел в 1 мл).

Определение общей гемолитической активности системы комплемента сыворотки крови проводили методом титрования по Л.С. Резниковой (1967).

Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) выполняли методом преципитации в 3% и 4% растворах полиэтиленг-ликоля (ПЭГ-6000) (Гриневич Ю.А. и соавт., 1981). Иммунные комплексы, выделенные при 4% концентрации ПЭГ, оценивали как содержащие крупные, средние и малые по размеру агрегаты (полный состав ЦИК). При 3% концентрации ПЭГ в основном осаждаются крупные ЦИК Содержание средне- и низкомолекулярных ЦИК определяли по разности концентраций IgG в комплексах, полученных соответственно в 4% и 3% ПЭГ (Туманова И.А.,1986).

Определение сывороточных иммуноглобулинов А, М, G классов определяли методом радиальной иммунодиффузии (Mancini G. et.al., 1963) с использованием моноспецифической сыворотки Нижегородского государственного предприятия по производству бактерийных препаратов.

Функциональную активность специфических IgG оценивали по интенсивности их взаимодействия с антигеном (аффинности) (Климова С.В. и соавт. 1997), модифицированной нами для определения аффинности антихламидийных антител.

Способ определения функциональной активности антихлами-

дийных антител. В предварительно промытые фосфатным буфером лунки полистиролового планшета с иммобилизированным антигеном (МОМР Chlamydia) вносили контрольные (положительные и отрицательные) сыворотки и опытные образцы (положительную на хламидии сыворотку пациентов брали в разведении, дающем при длине волны 492 нм оптическую плотность 1000-1500 единиц). После 30 минутной инкубации в термостате при 37°С (фиксация антител на антигене) и последующей отмывки фосфатным буфером в лунки добавляли аммоний роданистый (CH4N2S - о.с.ч.) ("MERCK", Германия) в различных концентрациях (1,0; 1,5; 2,0; 2,5 М) и инкубировали 10 минут при комнатной температуре. Затем, лунки планшета отмывали фосфатным буфером и добавляли конъюгат. Далее ход реакции проводили по инструкции, используемой тест-системы. Интенсивность окрашивания оценивали по величине оптической плотности с помощью фотометра.

Относительную величину аффинности антител (RHAV) определяли по формуле: RHAV = А1 х 7 + А2 х 6 + A3 х 5 + А4 х 4, где А1, А2, A3, А4 - процент от начального количества антител, оставшихся в лунке после их обработки роданистым аммонием в концентрациях 2,5; 2,0; 1,5; 1,0 М соответственно.

Статистическую обработку материала проводили на IBM PC -TechSell с использованием программы "Microsoft Excel", «STATISTICA 6» и процедуры дискриминантного анализа, реализованной в пакете прикладных программ "КВАЗАР", "STATGRAPH 2.1" (Мазуров А.Д. и соавт., 1999). При сравнении групп использовали критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони.

Результаты исследования и их обсуждение Проведенные исследования позволили выявить наиболее характерные лабораторные признаки влияния хламидийной инфекции матери на состояние иммунной системы новорожденного в раннем неонатальном периоде в сравнении со здоровыми детьми I группы. При обследовании новорожденных, родившихся у инфицированных матерей, было обнаружено, что антигенная нагрузка и частота выявления видо- и ро-доспецифических к белковым антигенам хламидий в изучаемых группах была практически одинаковой (табл.1).

Таблица 1

Частота выявления антигена и специфических антител к хламидиям у новорожденных на 3-5 сутки жизни

Показатели I-я группа (n=36) II-я группа (n=30) III-я группа (n=34)

абс. % абс. % абс. %

Ch.trachomatis (ПЦР) - - 6 20,0 7 20,6

LPS-IgG Chlamydia (ИФА) - - 17 56,7 27 79,4*

Антитела к МОМР к Chlamy-dia (ИФА) - - 20 66,7 22 64,7

Ch.trachomatis - IgG (ИФА) - - 12 60,0 16 72,7

Ch.trachomatis - IgG C.pneumonia, psittaci - IgG (ИФА) - - 8 40,0 6 27,3

Серонегативные 36 100 10 33,3 7 20,6

Примечание: *р<0,05 в сравнении между II и III группами

Тем не менее, у детей с признаками ВУИ, IgG к липополисаха-ридному компоненту клеточной стенки хламидий определялись значительно чаще. Анализ количественного и качественного состава специфических антител показал, что при развитии инфекционного процесса у новорожденных наблюдаются высокая концентрация специфических IgG как к LPS, так и к белковым антигенам хламидий, функциональная активность антител в обоих случаях является сниженной (рис. 1).

При физиологическом течении раннего периода адаптации в сыворотке крови новорожденных обнаруживаются невысокие титры специфических обладающие высокой функциональной активностью.

Рис.1. Характеристика специфического гуморального иммунитета новорожденных, родившихся от матерей с хламидийной инфекцией

(3-5 сутки)

Различная иммунореактивность новорожденных, родившихся у матерей с хламидиозом, была обусловлена не только клиническими проявлениями инфекционного процесса, но и влиянием материнских специфических антител на иммунную систему ребенка (табл.2, 3 ,4).

Так, у новорожденных без признаков ВУИ, имеющих физиологическое течение периода ранней постнатальной адаптации, отмечено увеличение числа В- и Т-лимфоцитов, в том числе - экспрессирующих на своей поверхности молекулы активации (НЬЛ-ВЯ+/ СБ3+).

Таблица 2

Иммунологические показатели периферической крови у новорожденных, родившихся у матерей с хламидийной инфекцией в сравнении со здоровыми детьми на 3-5 сутки жизни, (М±т)

Показатели I груша (п=36) Ц группа (п=30) Ш группа (п=34)

Лейкоциты, абс. 9,82 ± 0,51 11,66 ± 1,17 9,24 ± 0,49 **

Лимфоциты % 38,16 ± 1,47 32,04 ± 1,86 39,92 ± 1,68 **

абс. 3,69 ± 0,20 3,32 ± 0,22 3,59 ± 0^4

Моноциты % 9,29 ± 0,71 9,95 ± 0,44 11,00 ± 0,49*

абс. 0,89 ± 0,06 1,20 ± 0,11 1,01 ± 0,06

СЭЗ+ % 78,39 ± 1,40 75,61 ± 1,47 73,89 ± 1,36 *

абс. 2,93 ± 0,19 2,67 ± 0,67 2,76 ± 0,24

СШ+ % 61,36 ± 1,91 56,74 ± 2,31 55,74 ± 1,50 *

абс. 2,30 ± 0,17 1,99 ± 0,17 1,97 ± 0,15

СЭ8+ % 21,52 ± 0,94 21,21 ± 1,31 20,71 ± 0,99

абс. 0,77 ± 0,04 0,76 ± 0,09 0,73 ± 0,07

СШ+/СВ8+ 3,21 ± 0,23 3,1 ± 0,23 3,17 ± 1ДЗ

ньАВм;т+ % 1,62 ± 0,21 6,13 ± 1,61 * 4,83 ± 0,62 *

абс. 0,06 ± 0,00 0,22 ± 0,05 * 0,14 ± 0,02 *

С019+ % 10,42 ± 0,62 14,95 ± 1,18 * 12,21 ± 0,90

абс. 0,34 ± 0,02 0,53 ± 0,05 * 0,40 ± 0,03 * **

С023+/ СБ 19+ % 52,39 ± 3,42 60,40 ± 3,67 83,65 ± 4Д9 * "

абс. 0,21 ± 0,03 0,31 ± 0,03 * 0,39 ± 0,06 *

СБ16,56+ % 7,1 ± 0,69 7,13 ± 0,85 11,42 ± 0,98 * **

абс. 0,25 ± 0,02 0,25 ± 0,03 0,38 ± 0,04 * «»

Примечание/ *р<0,05 в сравнении с новорожденными контрольной группы;

**р<0,05 в сравнении с новорожденными без признаков инфицирования

Установлена тенденция к повышению функциональной активности нейтрофилов у 70% детей. Некоторое угнетение активности комплемента и снижение уровней сывороточных иммуноглобулинов компенсировалось высокоаффинными специфическими к нейтрализующим антигенам МОМР хламидий, в результате, циркулирующие иммунные комплексы не выявлялись в сыворотке крови у большинства детей или концентрация их определялась на низком уровне.

Таблица 3

Характеристика фагоцитоза новорожденных на 3-5 сутки жизни,

(М±т)

Показатели I группа (п=36) II группа (п=30) III группа (п=34)

НСТ- нейтрофилов спонтанный 29,7±,64 24,92±3,95 29,11±2,93

НСТ- нейтрофилов индуцированный 44,67±2,96 43,5±4,09 45,43±19,77

Коэффициент стимуляции нейтрофилов 1,88±0,22 2,15±0,17 1,79±0,71

НСТ- моноцитов спонтанный 176,18±29,50 109,89±15,24 207,87±36,61

НСТ- моноцитов индуцированный 216,64±37,50 200,89±31,10 287,33±42,76

Коэффициент стимуляции моноцитов 1,72±0,18 1,65+0,12 1,35 ±0,09*

Примечание: *р<0,05 в сравнении с контрольной группой

Таблица 4

Сравнительная оценка показателей гуморального звена иммунитета новорожденных, родившихся от матерей с хламидийной инфекцией на 3-5 сутки жизни, (М ±т)

Показатели I группа (п=36) II группа (п=30) III группа (п=34)

^ г/л 0,13 ± 0,01 0,04 ± 0,02 * 0,10 ± 0,03 **

^М, г/л 0,20 ± 0,02 0,13 ± 0,05 * 0,23 ± 0,04

IgG, г/л 13,14 ± 0,83 10,10 ± 0,62 * 11,99 ± 0,54

СН50, усл.ед. 48,19 ± 1,83 39,70 ± 1,87 * 40,69 ± 1,22 *

ЦИК общий состав, усл.ед 3,81 ± 1,30 5,17 ± 1,93 32,2 ± 6,94 * **

ЦИК высокомолекулярные (в.м.), усл.ед. 1,30 ± 0,58 3,42 ± 1,58 8,1 ± 2,54 * **

ЦИК низкомолекулярные (н.м.), усл.ед 0,54 ± 0,30 1,67 ± 0,61 25,90 ± 5,61 * **

Примечание: *р<0,05 в сравнении с контрольной группой; **р<0,05 в сравнении с новорожденными без признаков инфицирования

Отличительной особенностью состояния иммунной системы новорожденных с признаками ВУИ явилось преимущественное нарушение клеточного звена иммунитета, которое характеризовалось де-

прессией продукции кислородных радикалов моноцитами, уменьшением относительного числа CD3+ и CD4+ популяций лимфоцитов, а также увеличением количества NK-клеток.

Концентрация сывороточных иммуноглобулинов находилась в пределах физиологической нормы, но наличие низкоаффинных анти-хламидийных IgG и снижение активности комплемента способствовало увеличению концентрации циркулирующих иммунных комплексов.

Индивидуальный анализ корреляционных связей между иммунологическими показателями позволил представить различные модели развития иммунного ответа у детей, родившихся от матерей с хлами-диозом, в зависимости от течения периода ранней адаптации.

Установлено, что исход осложненной хламидиозом беременности для ребенка благоприятен в том случае, если специфический иммунный ответ матери является зрелым, что обусловлено высокоаффинными антителами, преимущественно к нейтрализующим антигенам МОМР Chlamydia (рис. 2).

В этом случае функционально активные специфические антитела матери оказывают непосредственное влияние на субпопуляцию CD4+ -лимфоцитов новорожденного, регулируя синтез высокоаффинных антител посредством активации CD 19+ клеток. При этом в сыворотке крови новорожденных наблюдается увеличение содержания В-клеток и повышение количества Т-лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности молекулы активации (HLA-DR+/CD3+). В-лимфоциты функционируют сопряженно с цитотоксическими CD8+ и CD16 56+ клетками, каждая из которых взаимосвязана с активной популяцией HLA-DR+/CD3+ лимфоцитов.

Обнаруженное нами снижение концентрации сывороточных IgM, IgA, IgG и угнетение активности комплемента, вероятно, компенсируется повышенными уровнями В-лимфоцитов, а также функционально - активными материнскими и собственными антителами новорожденного, которые связываясь с антигенами хламидий, способствуют элиминации патогена фагоцитирующими клетками. Доказательством этому служит незначительное количество иммунных комплексов, выявляемых в сыворотке крови новорожденных.

Рис. 2. Корреляционные связи гуморального звена иммунитета новорожденных, родившихся от матерей с урогенитальным хламидиозом

(3-5 сутки жизни).

В случае осложненного течения периода ранней адаптации нейтрализующие антитела к белковым антигенам хламидий существенного значения не имели (отсутствует корреляция между CD4+ и ЯИЛУ- IgG к МОМР), и основное действие на иммунную систему но-

ворожденных оказывали низкоаффинные материнские IgG к LPS хла-мидий. Снижение хелперной активности Т-лимфоцитов проявлялось в низком аффинитете образующихся специфических IgG антител и их ограниченной эффекторной активности, сводящейся к спектру активности IgM и IgA. Чем выше в исследовании был титр низкоаффинных IgG к LPS-хламидий, тем более высокой была концентрация сывороточных IgA и IgM новорожденных. Кроме того, нарушение в регуляции антителообразования CD4+ клетками было сопряжено с угнетением активности комплемента, что еще более усугубляло супрессию гуморальных реакций и способствовало повышению циркуляции иммунных комплексов в кровяном русле. Обнаруженное нами ослабление цитотоксического действия иммунокомпетентных клеток, с одной стороны, могло быть вызвано высокой концентрацией ЦИК, подавляющих активность натуральных киллеров, несмотря на их повышенное содержание в сыворотке крови, с другой стороны, влиянием низкоаффинных антител на субпопуляцию CD8+ лимфоцитов. Об этом же свидетельствует нарушение функциональных связей между активированной популяцией HLA-DR+/CD3+ и цитотоксическими клетками.

Статистическая обработка полученных результатов исследования с привлечением методов дискриминантного анализа позволила определить наиболее информативные иммунологические показатели, адекватно отражающие развитие признаков инфицирования у новорожденных. Информативными являются следующие тесты диагностики: определение титра антител к липополисахаридам хламидий (IgG к LPS), оценка функциональной аффинности антител к нейтрализующим антигенам главного белка внешней мембраны (IgG к МОМР), из-

мерение концентрации циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой (ЦИК низкомол.),,

На этой основе разработано правило прогноза реализации хла-мидийной инфекции в раннем неонатальном периоде новорожденно-сти:

D = XlxKl+X2x К2 + ХЗхКЗ + const,

где значения X соответствуют иммунологическим параметрам: XI -ЦИК (низкомолекулярные) (усл.ед.), Х2 - IgG к LPS хламидий (усл.ед.), Х3 - аффинность IgG к МОМР хламидий (усл.ед.), К1 = 0,04; К2 = 0,002; КЗ =- 0,002; const =-0,48.

Далее, с использованием данных иммунологических показателей крови по уравнению определяют диагностический показатель (D). При D< 0 - делают заключение об отсутствие иммунологических признаков развития хламидийной инфекции. При D> 0 диагностируют наличие лабораторных признаков, характерных для реализации данной патологии.

Предлагаемый способ имеет специфичность - 94,7%; чувствительность - 100%. Эффективность метода составляет 97,1%. Вероятность распознавания на тестовой выборке (30 новорожденных) составила 100%.

Таким образом, установлено, что пассивная передача высокоаффинных специфических антител к нейтрализующим белковым антигенам способствует формированию протективного иммунного ответа у новорожденных. Неблагоприятное влияние на реактивность иммунной системы ребенка оказывают низкоаффинные антитела липополисаха-ридной природы.

Используя обоснованное расширение схемы иммунологического исследования крови, в раннем неонатальном периоде новорож-денности удается диагностировать развитие хламидийной инфекции на доклинической стадии заболевания, с использованием минимального набора иммунологических тестов.

ВЫВОДЫ

1. Развитие хламидийной инфекции в раннем неонатальном периоде сопровождается выраженными изменениями параметров иммунной системы новорожденных детей.

2. Особенности формирования иммунореактивности новорожденных, родившихся от матерей с урогенитальным хламидиозом, обусловлены состоянием антихламидийного специфического иммунитета матери.

3. Пассивная передача высокоаффинных IgG к нейтрализующим белковым антигенам хламидий способствует формированию протек-тивного иммунного ответа у новорожденных. Неблагоприятным прогнозом течения раннего периода адаптации является наличие в сыворотке крови новорожденных низкоаффинных IgG к липополисаха-ридному компоненту хламидий, оказывающих супрессивное влияние на иммунную систему.

4. Наиболее информативными лабораторными показателями, отражающими развитие инфицирования у новорожденных, являются: титр IgG к липополисахаридам хламидий, функциональная аффинность специфических IgG к нейтрализующим белковым антигенам, концентрация циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой.

5. Разработанный способ лабораторного прогнозирования, заключающийся в определении интегрального показателя, позволяет выделить группу риска по развитию хламидийной инфекции в раннем периоде новорожденности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Предложено при лабораторном обследовании беременных женщин и новорожденных детей на хламидиоз включать следующие иммунологические тесты:

1. Исследование функциональной активности специфических антител к нейтрализующим антигенам главного белка внешней мембраны (КНАУ - ^О к МОМР) хламидий у беременных женщин с уро-генитальным хламидиозом (II - III триместр). Значение ЯНАУ-^О к МОМР хламидий > 400,0 усл.ед. свидетельствует о полноценном специфическом гуморальном ответе и защите новорожденного от инфекции. Значение КНАУ-^О к МОМР хламидий < 400,0 усл.ед. характеризует супрессию гуморальных реакций и возможность неблагоприятного перинатального исхода.

2. В случае выявлении низкоаффинных специфических антител у матери, при обследовании новорожденных провести дополнительно к существующей схеме лабораторного исследования на хламидиоз (выявление антигена и антител к инфекционному агенту) определение следующих иммунологических показателей крови: титра ^О к липо-полисахаридам хламидий, функциональной аффинности ^О к МОМР хламидий, концентрации циркулирующих иммунных кохмплексов с низкой молекулярной массой с последующим вычислением диагно-

стического показателя (Б) по формуле. При Б< 0 - делают заключение об отсутствие иммунологических признаков развития хламидийной инфекции. При Б> 0 диагностируют наличие лабораторных признаков, характерных для реализации данной патологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ремизова И.И. Сравнительная оценка лабораторных тестов при хламидийной инфекции у беременных / И.И. Ремизова, Г.А. Чер-данцева, Г.Н. Чистякова //Внутриутробные инфекции плода и новорожденного. Тез. докл. Всерос.: межддисциплинарной науч.-практ. конфер. (г.Саратов, 29-31 мая 2000г). - Саратов, 2000г.-С.137-138

2. Ремизова И.И. Характеристика гуморального иммунитета новорожденных от матерей с урогенитальным хламидиозом / И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева, Г.Н. Чистякова // Роль новых перинатальных технологий в снижении репродуктивных потерь: Сб. науч. тр. всероссийской научно-практической конференции с международным участием (г. Екатеринбург, 20-21 ноября 2001 г.). -Екатеринбург, 2001. - С.224 - 226.

3. Ремизова И.И. Иммунологические особенности раннего периода адаптации новорожденных при хламидийной инфекции / И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева, Г.Н. Чистякова // "Проблемы мед. энзи-мологии" и Рос. Форума: "Соврем.технологии лаб.диагност.нового столетия": Материалы 1-й межд.конфер. (г. Москва, 28-31 мая 2002г). - Москва, 2002. - С. 151 - 152.

4. Глазкова Л.К. Особенности течения хламидийной инфекции у бе-

ременных / Л.К. Глазкова, Н.В. Башмакова, Ю.И. Моторнюк, И.И. Ремизова // Инфекции передаваемые половым путем - 2002. - №2. -С. 15-20.

5. Ремизова И.И. Оценка иммунного статуса новорожденных от матерей с хламидиозом / И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева, В.В. Базарный, Г.Н. Чистякова // Иммунология Урала: Материалы П конференции иммунологов Урала (г.Пермь, 9-12 сентября 2002г). - Пермь, 2002. - № 1 (2). - раздел 4. - С. 97.

6. Ремизова И.И. Иммунологические компенсаторные реакции новорожденных от матерей с хламидиозом / И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева, В.В. Базарный, Г.Н. Чистякова //Медицинские технологии в охране репродуктивного здоровья женщины: Матер. все-рос.наун.-прак.конфер-ии (г.Екатеринбург, декабрь 2003г). - Россия, Екатеринбург, 2003. - С. 171 - 174.

7. Ремизова И.И. Иммунологические особенности раннего периода адаптации новорожденных у матерей с урогенитальным хламидиозом / И.И. Ремизова, Г.Н. Чистякова // "Здоровье, труд, отдых в XXI веке. (Профилактика, лечение, реабилитация в различные периоды жизни человека)": Материалы V международной конференции. - Москва, 2002. - С. 238 - 240.

8. Ремизова И.И. Аффинность специфических антител как признак внутриутробной хламидийной инфекции новорожденных / И.И. Ремизова, Г.А. Черданцева, В.В. Базарный, Г.Н. Чистякова // Аллергология и иммунология: Материалы V Съезда иммунологов и аллергологов СНГ (Санкт-Петербург, 8-11 июля 2003г). - Россия, Санкт-Петербург, 2003. - С. 173.

9. Ремизова И.И. Особенности клеточного иммунитета новорожден-ных,группы риска по развитию хламидийной инфекции / И.И. Ремизова, Г.Н. Чистякова // Сб. научн. работ 69-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного центра РАМН - Курск, 2004. - ч. I. - С.365-366.

10. Ремизова И.И. Оценка состояния фагоцитарного звена иммунной системы новорожденных от матерей с хламидиозом / И.И. Ремизова, Г.Н. Чистякова // Russian Journal of Immunology. - 2004. - v. 9 (1).-P.319.

11. Ремизова И.И. Диагностическая значимость аффинности специфических антител к Chlamidia в прогнозировании инфекции у новорожденных / И.И. Ремизова, Г.Н. Чистякова // Клин. лаб. диагностика. - 2004. - № 9. - С. 36.

12. Ремизова И.И. Влияние специфических материнских антител на формирование иммунореактивности новорожденного при хлами-дийной инфекции / И.И. Ремизова, Г.Н. Чистякова, Г.А. Чердан-цева, В.И. Токарь // Мать и дитя: Материалы VI Рос. Фор. тез. докл. -М., 2004. -С. 581 -583.

РЕМИЗОВА ИРИНА ИВАНОВНА

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ, РОДИВШИХСЯ У МАТЕРЕЙ С УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ХЛАМИДИОЗОМ 14.00.36. - аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ЛР №020452 от 04.03.1997г. (продлена) Министерства по печати РФ

Подписано в печать 18.01.2005г. Формат 60x84 1/16 Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №_121_. Отпечатано в типографии УГМА, ул. Репина, д.З.

i"

!/J 'o

'ó

1197