Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Оптимизация репаративного остеогенеза в челюстной кости при иммунодефицитном состоянии путем применения Полиоксидония совместно с неколлагеновыми белками кости (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

УДК: 616-056.3-02:616.314-76-085.462

Бондаренко ии^иь'2358

Марина Олеговна

Оптимизация репаративного остеогенеза в челюстной кости при иммунодефицитном состоянии путем применения Полиоксидония совместно с неколлагеновыми белками кости (экспериментальное исследование)

14.00.21 - «Стоматология»

14.00.16 - «Патологическая физиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2007

003062358

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава»

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор Воложин Александр Ильич

доктор медицинских наук, профессор Мустафаев Магомет Шабазович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Топольницкий Орест Зиновьевич

доктор биологических наук, профессор Вальцева Инга Алексеевна

Ведущая организация:

ФГУ "Центральный научно-исследовательский институт стоматологии Росздрава" ¿¿^

Защита состоится 2007 года в № часов на заседании

диссертационного совета К 208.041.03 при ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава» по адресу: 127006, Москва, ул. Долгоруковская д. 4. Почтовый адрес: 127473, Москва ул. Делегатская, д. 20/1 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета (127206, Москва, ул. Вучетича, д. 10а).

Автореферат разослан « » 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, Кандидат медицинских наук, доцент

О. П. Дашкова

Общая характеристика работы 1. Актуальность проблемы

В стоматологии и челюстно-лицевой хирургии для возмещения костных дефектов широкое распространение получили материалы, содержащие гидроксиапатит, трикальцийфосфат и коллаген, которые являются, в первую очередь, остеокондукторами и сами по себе обладают слабо выраженными остеоиндуцирующими свойствами (Щепеткин И.А., 1994). Их некоторый стимулирующий эффект, по-видимому, обусловлен способностью фиксировать из крови факторы роста, которые активируют остеогенез. Свойствами факторов роста обладают также некоторые неколлагеновые белки костной ткани (НБК), которые фиксируются в ткани в процессе репаративного остеогенеза (Десятниченко К.С., 1997). Удаление этих белков лишает кость остеоиндуцирующих свойств. Среди НБК выделяют трансформирующий фактор роста, факторы роста фибробластов, инсулиноподобные факторы роста, колониеобразующие факторы гранулоцитов и макрофагов, интерлейкины и другие (Ртсе1шап Я-Б., 1992). К настоящему времени выделен в чистом виде ряд этих факторов, которые с успехом используются в практической медицине для стимулирования построения костной ткани. Известно, что каждый из этих факторов выполняет самостоятельную функцию, действуя на процессы хемотаксиса, пролиферации, адгезии, дифференцировки, экспрессию клетками тканеспецифических белков и т.д. (Мс СаЛЬпу Т.Ь., Сепй-еПа М., 2000). Но оптимальный конечный эффект определяется совместным, кооперативным действием этих факторов, каждый из которых выполняет самостоятельную функцию. Поэтому применение комплекса НБК, содержащих остеогенетические факторы, может оказаться более эффективным, чем использование отдельных факторов.

Такие белки выделены на ЗАО НПО «Полистом», и они могут быть апробированы на предмет их эффективности для стимулирования регенерации костной ткани. При этом важным является условие введения

этих белков в костную рану. Известно, что физиологический эффект НБК зависит от их сорбции на компонентах костной ткани: гидроксиапатите, трикальцийфосфате и коллагене, которые удерживают эти белки и способствуют их функционированию. Такие компоненты являются основой остеопластических материалов, разработанных и выпускаемых на ЗАО «Полистом». К ним относятся остеопластические материалы Гапкол, Колапол и другие. Поэтому актуальным является изучение применения НБК, введенные в состав этих материалов, для усиления построения костной ткани. Особенно актуально применение эффективного средства, стимулирующего остеогенез при его угнетении, вызванном различными факторами. Моделью угнетения построения костной ткани является введение антиметаболита, например, циклофосфана, который вызывает также иммунодефицитное состояние (А.И. Воложин и др., 1999 - 2003, Д.С.Дубровин, 2004). Не исключено, что на фоне иммунодефицитного состояния (ИДС), помимо НБК, сорбированных на остеопластических материалах, следует вводить также иммуномодулятор. Одним из наиболее эффективных считается высокомолекулярный препарат, синтезированный в Институте иммунологии РАМН — Полиоксидоний. Он испытан как в эксперименте на животных, так и в клинике при снижении иммунной защиты. Поэтому актуальной проблемой стоматологии и патофизиологии является изучение возможности применения НБК в сочетании с остеопластическим материалом и иммунокоррекцией полиоксидонием при заживлении костной раны на фоне ИДС, что и определило цель настоящей работы.

Цель: Повысить эффективность лечения травматических повреждений челюстных костей при иммунодефицитом состоянии, используя для этого иммуномодулятор Полиоксидоний вместе с неколлагеновыми белками кости.

Задачи

1. Изучить в эксперименте реакцию системы крови на травму нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния и введения иммуномодулятора Полиоксидония.

2. Применить длительную культуру костного мозга декстеровского типа для оценки биосовместимости и остеостимулирующих свойств костнопластических материалов.

3. Оценить состояние тканевых структур в области костной травмы челюсти в динамике после повреждения, выраженность и длительность воспалительных реакций при нормальном иммунном статусе и иммунодефицитном состоянии.

4. Определить темпы новообразования и дифференциации соединительно-тканного регенерата в костных дефектах при иммунодефицитном состоянии.

5. Изучить динамику созревания соединительно-тканной компоненты регенерата и удельный вес не костной (хондроидной) части регенерата при иммунодефицитном состоянии.

6. Определить степень эффективности препарата Полиоксидоний для нормализации регенерации костной ткани челюсти при иммунодефицитном состоянии.

7. Оценить роль неколлагеновых белков кости, введенных в состав остеопластического материала Гапкол, в процессе регенерации костной ткани при иммунодефицитном состоянии.

Научная новизна

Установлено, что заживление искусственно вызванного дефекта нижней челюсти у крыс сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет клеток гранулоцитарного ряда и моноцитов. Введение

животным антиметаболита циклофосфана по соответствующей схеме приводит к умеренно выраженному иммунодефицитному состоянию, проявляющемуся лимфопенией. Введение иммуномодулятора полиоксидония приводит у этих животных к частичной нормализации лейкоцитарной формулы крови в результате возрастания числа лимфоцитов и моноцитов.

Воспроизведение у подопытных животных иммунодефицитного состояния вызывает развитие в области костной раны нижней челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных, в том числе, некротических изменений и резкое торможение процесса заживления дефектов. В ходе регенерации челюсти дифференцировка остеогенных клеточных элементов и новообразование костного вещества у животных с иммунодефицитном состоянием протекают активно, но накопление остеоида не сопровождается адекватным построением более зрелых костных структур, что говорит о торможении процессов остеогенной дифференцировки и созревания костного вещества. Введение животным с иммунодефицитном состоянием в костную рану челюсти одного Гапкола слабо активизирует регенераторный процесс. Научной новизной отличаются данные о том, что включение в состав Гапкола неколлагеновых белков кости совместно с применением полиоксидония вызывает заметное усиление костно-регенераторного процесса в дефектах кости, что проявлялось в активизации процесса новообразования костных структур. Роль центров остеогенеза при этом играют частицы Гапкола.

Практическое значение

С целью разработки и испытания новых, а также совершенствования известных остеопластических материалов для последующего их использования в стоматологической практике и челюстно-лицевой хирургии целесообразно проведение доклинической фазы исследования: экспериментальное моделирование иммунодефицитного состояния, на фоне

которого изучается процесс репаративного остеогенеза нижней челюсти. Коррекция иммунодефицитного состояния может быть осуществлена путем подкожного введения иммуномодулятора полиоксидония в дозе 0,01 мг/100 г веса крысы через день в течение двух недель, всего 7 инъекций. Практическое значение имеют данные о том, что при необходимости восстановления репаративного процесса в костях лицевого скелета в условиях иммунодефицитного состояния для клинической апробации эффективно применение остеопластического материала Гапкол, содержащего неколлагеновые белки кости при условии парентерального введения полиоксидония. Гапкол в комплексе с неколлагеновыми белками кости может быть использован при иммунодефицитном состоянии как средство комплексной профилактики нарушений процесса заживления костной раны челюсти.

Положения, выносимые на защиту

1. Создание искусственного костного дефекта на нижней челюсти у крыс сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет гранулоцитов и фазовьми изменениями числа моноцитов. Введение животным антиметаболита циклофосфана приводит к умеренно выраженному иммунодефицитному состоянию, проявляющемуся лимфопенией. Введение иммуномодулятора полиоксидония частично нормализует у животных показатели периферической крови.

2. В длительных культурах костного мозга на Гапколе и Гапколе-неколлагеновые белки кости развиваются стромальные и кроветворные клетки, и идут процессы формирования кроветворного микроокружения. С увеличением времени культивирования на материале Гапкол-неколлагеновые белки

кости по сравнению с «чистым» Гапколом наблюдается преобладание стромальных клеток над кроветворными.

3. Воспроизведение у подопытных животных иммунодефицитного состояния вызывает развитие в области костной раны нижней челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных и некротических изменений, а также резкое торможение процесса регенерации. При этом накопление остеоида в процессе регенерации не сопровождается адекватным построением зрелых костных структур, что говорит о торможении процессов остеогенной дифференцировки.

4. Введение животным с иммунодефицитного состояния в костную рану челюсти одного Гапкола незначительно активизирует регенераторный процесс. Включение неколлагеновых белков кости в состав Гапкола вызывает заметное усиление костно-регенераторного процесса в дефектах кости, активизацию процесса новообразования костных структур, а частицы Гапкола играют роль центров остеогенеза.

Внедрение результатов исследования

Полученные данные используются в учебном процессе и дальнейшей научной работе кафедры госпитальной хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии и кафедры патофизиологии стоматологического факультета ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на: Третьем Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием, (Москва, 2004), совместном совещании сотрудников кафедр хирургической стоматологии, кафедры патофизиологии стоматологического факультета и лаборатории биотехнологии минерализованных тканей НИМСИ при МГМСУ 11 января 2007 года.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста. Состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», двух глав собственных исследований, Обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 112 российских и 66 иностранных авторов. В диссертации представлено 5 таблиц 34 рисунка.

Публикации По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 1 в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для достижения цели и решения поставленных задач проведено 2 серии опытов на 132 лабораторных крысах. Ниже приводится описание экспериментов по сериям.

Проведение эксперимента для изучения регенерации костной ткани челюсти

В 1-й серии опыты проведены на 72 крысах «Вистар» с исходной массой 180 - 220 грамм. У животных под гексеналовым наркозом открытым доступом с помощью зубоврачебного бора при малых оборотах в области ветви нижней челюсти создавали круглый сквозной дефект, диаметром около 2 мм. Оперативные вмешательства проводили в стерильных условиях. Животные разделены на 5 групп.

В 1-й (контрольной) группе создавали дефект нижней челюсти и не закрывали остеопластическим материалом Гапколом;

во 2-й группе у крыс вначале воспроизводили ИДС, затем создавали дефект нижней челюсти и также как в 1-й группе не закрывали его остеопластическим материалом;

в 3-а группе животным с ИДС дефект челюсти закрывали «чистым» Гапколом, то есть не содержащим НКБ;

в З-б группе животным с ИДС дефект челюсти закрывали Гапколом, содержащим НКБ,

в 4-й группе животным с ИДС дефект челюсти закрывали Гапколом, не содержащим НКБ. Кроме того, животным проводили иммунокоррекцию с помощью ПО;

в 5-й группе животным с ИДС дефект челюсти закрывали Гапколом, содержащим НКБ, как и в 4-й группе проводили иммунокоррекцию с помощью ПО. Пластинка Гапкола размером около 0,7 х 0,7 см накладывалась на наружную поверхность ветви нижней челюсти,

сверху укладывали мягкие ткани, дополнительной фиксации материала не проводилось. На кожу накладывали швы из шелка. Рана заживала первичным натяжением. Животных выводили из опыта через 15,30,60 и 90 суток после начала опыта по 3 крысы на каждый срок исследования.

Умеренную степень ИДС воспроизводили во 2-й, 3-й, 4-й и 5-й группах посредством парентерального введения циклофосфана в дозе 25 мг/кг на инъекцию. Препарат разводили на физиологическом растворе и вводили крысам под кожу бедра по 0,5 мл. Сначала по одной инъекции двое суток подряд, затем, для поддержания ИДС, циклофосфан вводили в той же дозе (25 мг/кг, однократно) с периодичностью 10 суток.

ПО вводили крысам 4-й и 5-й группы подкожно: первый раз в день нанесения травмы нижней челюсти, затем через день в течение двух недель, всего 7 инъекций. Однократная доза ПО составляла 0,01 мг/100 г веса крысы.

Следовательно, начало введения ПО совпадало с периодом возникновения ИДС. Травму нижней челюсти воспроизводили на 10-й день после первой инъекции циклофосфана, когда у животных развилось ИДС.

Схема проведения эксперимента на крысах приведена в табл. 1.

В конце эксперимента животных выводили из опыта избыточной дозой гексенала, выделяли челюстные кости, фиксировали в 10% нейтральном формалине, декальцинировали в трилоне Б и после общепринятой обработки заливали в парафин. Срезы толщиной около 7-8 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Препараты рассматривали в световом микроскопе.

Таблица 1.

Схема проведения эксперимента на крысах и количество животных в группах (Эксперимент по изучению состояния костной ткани)

Сроки опыта, сутки Группы животных

1 гр. Контроль 2 гр ИДС 3-агр. ИДС+Гап кол 3-6 гр ИДС+Гапкол+ НБК 4-я гр. ИДС+Гапкол+ Полиоксидоний 5-я гр. ИДС+Гапк ОЛ+НБК + Полиоксид оний

15 3 3 3 3 3 3

30 3 3 3 3 3 3

60 3 3 3 3 3 3

90 3 3 3 3 3 3

Изучение реакции периферической крови

Во 2-й серии опытов изучали реакцию системы крови на травму нижней челюсти крыс в условиях ИДС и применения с целью иммунокоррекции ПО. Всего в опыте участвовало 60 крыс. Схема проведения опыта представлена в табл. 2

Таблица 2

Схема проведения эксперимента на крысах и количество животных в группах (Эксперимент по изучению реакции крови)

Группы животных

Сроки опыта j сутки 1 Контроль 2 Травма 3. Травма + ИДС 4 Травма + ИДС + Полиоксидоний

15 5 5 5 5

30 5 5 5 5

60 5 5 5 5

Животных подвергали эвтаназии под гексеналовым наркозом путем декапитации на 15,30 и 60 сутки после травмы нижней челюсти. Брали кровь, в которой с помощью автоматического анализатора определялись показатели, в том числе: общее число лейкоцитов (х 103 в мкл), количество эритроцитов (х 106 в мкл), концентрация гемоглобина (грамм в 100 граммах крови), гематокрит (в %); число лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов рассчитывали как в относительных (в %), так и в абсолютных (х 103 в мкл) величинах.

В работе использован проточный счетчик среднего класса Cobas Micros 18 ОТ (АВХ, Франция), который позволяет одновременно анализировать 18 гематологических параметров, включая также процентное содержание и абсототый подсчет 3-х популяций лейкоцита Подсчет и дифференцировка форменных элементов крови проводилась кондукгометрическим методом с автоматическим забором и разведением пробы.

Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием критерия Стьюдента, различие между группами считали достоверным при t < 0,05.

Методика оценки свойств остеопластического материала с помощью декстеровской культуры костного мозга

Эксперименты выполнены с использованием костного мозга мышей (С57В1/6 х СВА) Fl массой 18-24 г, поставляемых питомником РАМН «Столбовая». Длительные культуры костного мозга декстеровского типа вели, как описано ранее (И. Л.Чертков, O.A. Гуревич, 1984 и И. Л. Чертков и А .Я. Фриденштейн, 1977).Костный мозг одной бедренной кости мышей без суспендирования помещали в 10 мл полной среды на основе среды Фишера, обогащенной L-глютамином, 14% лошадиной сыворотки, 6% эмбриональной телячьей сыворотки, 10"8 М гидрокортизона и антибиотиками. Культуры вели при температуре 33° С в пластиковых флаконах (площадь дна 25 см2) с еженедельной сменой половины культуральной среды.

Через 3 недели культивирования, когда на дне флакона образовывался нормально функционирующий стромальный подслой, проводили изучение процессов кроветворения на остеопластическом материале, помещенном в длительные культуры костного мозга. Было проведено сравнение материала Гапкол и Гапкол-НБК

Образцы материала прямоугольной формы размером 20 х 8 мм, массой 0,15 г, толщиной 0,5-1 мм, сначала помещали в чашки Петри диаметром 35 мм, на поверхность полоски наносили костный мозг в концентрации 1,5x106 клеток на мл среды.

После этого инкубировали в течение 30 минут при температуре 37° С. Затем материал переносили в культуральные флаконы, содержащие 3-недельные длительные культуры костного мозга, и помещали в термостат для дальнейшего культивирования.

Через 7, 14, 21 и 28 суток культивирования из флаконов извлекали образцы и проводили исследование клеточного состава адгезирующего слоя. Было взято по 4 полоски Гапкола каждого вида во все сроки исследования. Для снятия клеток с Гапкола использовали раствор трипсина в концентрации 0,02% в сочетании с 0,02 % раствором ЭДТА. Для изучения морфологического состава костного мозга, снятого с материала, раствор с клетками центрифугировали 10 минут при скорости 1500 оборотов в минуту. Затем клетки промывали раствором Хенкса и повторно центрифугировали. После центрифугирования сливали надосадочную жидкость и из осажденных на дне пробирки клеток приготавливали мазки-отпечатки, которые окрашивали по методу Паппенгейма, и подсчитывали миелограммы.

С целью оценки интенсивности процессов кроветворения на различных по составу исследуемых образцов, перед приготовлением мазков для морфологических исследований, под микроскопом в камере Горяева подсчитывали общее количество клеток костного мозга в суспензии.

После снятия клеток измеряли размер каждой полоски с точностью до 1 мм, вычисляли площадь поверхности, а затем результаты оценки количества клеток на мембранах рассчитывали на 1 см2 поверхности мембран.

Абсолютные значения содержания стромальных и кроветворных клеток на изучаемом материале получали расчетным путем, на основании значений общего количества клеток, снятых с 1 см2 поверхности материала, и процентного содержания стромальных и кроветворных клеток, определенных при подсчете миелограмм.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью (-критерия Стьюдента. Основные результаты и обсуждение

В результате проведенного исследования было показано, что в ходе заживления искусственно вызванного дефекта нижней челюсти у лабораторных крыс без воспроизведенного ИДС происходят определенные

изменения в показателях периферической крови. Они выражались в сравнительно кратковременном лейкоцитозе за счет гранулоцитов и в фазовых изменениях числа мононуклеаров, что можно объяснить неспецифической реакцией организма на травму и мобилизацию механизмов остеорепарации.

Основным результатом моделирования НДС у животных является снижение числа лимфоцитов, что в поздние сроки эксперимента не сопровождалось лейкопенией, благодаря компенсаторному увеличению моноцитов и гранулоцитов. По результатам исследования периферической крови развившееся ИДС можно оценивать как умеренно выраженное. Известно, что большие дозы циклофосфана введенного крысам приводит к столь значительному снижению иммунной защиты, что оно не коррегируется применением иммуномодулятора. Введение ПО приводило у животных с умеренно выраженным ИДС к увеличению числа лейкоцитов не только в результате возрастания числа лимфоцитов, но и моноцитов, особенно в поздний срок эксперимента - на 60-е сутки. Этот эффект можно считать важным в связи с ролью мононуклеаров, как клеток выделяющих цитокины, которые регулируют репаративные процессы в тканях. Полученные данные в известной мере помогают объяснить механизмы нарушения репаративного процесса в костной ткани при недостаточности иммунных механизмов и обосновать применение иммуномодуляторов в комплексном лечении больных в клинике челюстно-лицевой хирургии.

Основной задачей работы было изучение влияние Гапкола, модифицированного введением ЦБК на регенерацию костной ткани челюсти. Для этого было использовано 2 приема: изучение с помощью клеточных культур и гистологических метод оценки заживления костной раны.

Одним из относительно новых методов в стоматологии и реконструктивной хирургии является оценка свойств остеопластических материалов с помощью длительных культур костного мозга декстеровского типа. Применение этого метода основано на том, что в механизме

регенерации кости важная роль принадлежит клеточным взаимодействиям, в том числе, участию фибробластов и клеток-предшественников остеогенеза, которые мигрируют и покрывают материалы. Развитие на них костномозгового кроветворения в условиях культивирования может отражать способность усиливать остеоинтеграцию, о чем свидетельствует анализ данных литературы. Установлено, что в регуляции гемопоэза важную роль играет кроветворное микроокружение, осуществляющее адгезивную функцию для стволовых кроветворных клеток в костном мозге и регуляцию их пролиферации и дифференцировки (Десятниченко К.С., 1997). Гемопоэтический эффект достигается созданием «ниш» микроокружения, обеспечивающих прямой межклеточный контакт и интенсивный гуморальный обмен стромы с гемопоэтическими клетками.

Вместе с тем, костномозговое микроокружение необходимо и для нормального протекания процессов развития и перестройки костной ткани, а в условиях применения остеопластических материалов адгезирующие на поверхности клетки, могут оказывать положительное влияние на остеоиндукцию. Остеобластогенез и функциональная активность зрелых остеокластов находятся под регуляторным контролем полипептидных факторов роста, продуцируемых кроветворными и стромальными клетками костномозгового микроокружения, а известные в настоящее время гемопоэтические факторы роста принимают активное участие в остеогенезе (Герасимов A.M., Фурцева JI.H. 1986). Таким образом, костная ткань и костный мозг онтогенетически связаны, находятся под контролем родственных белковых регуляторов и оказывают взаимное влияние.

Проведенные эксперименты показали, что в длительных культурах костного мозга на Гапколе и Гапколе-НБК развиваются стромальные и кроветворные клетки, и идут процессы формирования кроветворного микроокружения. На этих материалах наблюдается постепенное увеличение общего числа клеток, возрастание содержания стромальных и уменьшение числа кроветворных клеток. Причем с увеличением времени

культивирования, в зависимости от состава мембран, отмечается разная степень устойчивости структуры мембран, а также проявляются различия изменений общего количества клеток на мембранах и соотношения стромальных и кроветворных клеток. Особенно важным является преобладание стромальных клеток над кроветворными на модифицированном Гапколе, в процессе развития костномозгового окружения (табл.3). Таблица 3

Изменения общего числа клеток, а также количества стромальных и кроветворных клеток на материалах Гапкол и Гапкол-НБК в различные сроки культивирования в длительных культурах костного мозга

Сроки исследования Число клеток Х103 на 1 см3 Образцы материалов

ГАПКОЛ- НБК ГАПКОЛ

7-е сутки Общее число клеток 148,0±8,4* 89,0+6,2

Стромальные 45,9±2,6 39,2±2,7

Кроветворные 102,1±5,8* 49,8+3,5

14-е сутки Общее число клеток 203,0±11,6* 152,0±8,2

Стромальные 109,6±6,3 107,2±5,7

Кроветворные 93,4±5,3* 44,8±2,5

21-е сутки Общее число клеток 248+14,8* 191,0+12,4

Стромальные 215,8±12,9* 171,9±11,2

Кроветворные 32,2±1,9* 19,1±1,2

28-е сутки Общее число клеток 136,0±7,8 113,0±7,2

Стромальные 116,9±6,7 106,2±6,7

Кроветворные 19,1+1,1* 6,8+0,5

* - достоверно при р<0,05, по сравнению с материалом Гапкол-НБК

Стромальным мезенхимальным клеткам придается основное значение как источника остеопрогениторных клеток, дифференцирующихся в костные клетки. Возможно, что преобладание числа стромальных клеток связано с воздействием неколлагеновых белков, среди которых имеются факторы, активирующие пролиферацию мезенхимальных стромальных клеток костного мозга и их дифференцировку в остеобласты. Однако этот вопрос нуждается в дальнейшем изучении. Что же касается общего числа клеток, то их уменьшение на Гапколе-НБК по сравнению с обычным Гапколом можно объяснить меньшей устойчивостью в культуральной среде, поэтому некоторая часть клеток к 4-й неделе не сохраняются на исследуемом материале и переходит в культуральную жидкость.

На основании полученных данных можно предположить, что для двух изучаемых модификаций Гапкола при трансплантации в костную ткань будут наблюдаться различия их остеогенных свойств. Эти данные были оценены с помощью морфологического исследования репаративного остеогенеза после травмы нижней челюсти при нормальном иммунном статусе и развитии ИДС.

В процессе изучения динамики постгравматического процесса у подопытных животных выявлена довольно выраженная индивидуальная вариабельность реакции организма на экспериментальные воздействия в виде формирования иммунодефицита, а так же эффекта от применения иммуномодулятора и факторов, оптимизирующих процессы репаративного остеогенеза. Это до некоторой степени затрудняло выявление корреляций между условиями экспериментов и наблюдаемыми эффектами. В связи с этим мы определили ряд критериев, применение которых должно было бы объективизировать данные исследований и, таким образом, повысить степень сопоставимости и интерпретируемость результатов.

К таким критериям относили:

1. Состояние тканевых структур в области травмы в динамике экспериментальных наблюдений, в том числе, эффекты

повреждения, характер, выраженность и длительность воспалительных реакция;

2. Характер и темпы новообразования соединительно-тканного регенерата в костных дефектах нижней челюсти;

3. Темпы дифференциации соединительно-тканной компоненты регенерата;

4. Темпы новообразования и созревания костного вещества в дефектах кости;

5. Удельный вес не костной компоненты регенерата, (хондроидной ткани)

Использование этого приема позволило, в известной степени, решить проблему объективизации оценок результатов гистоморфологического исследования по группам наблюдений, в динамике процесса заживления костных ран в зависимости от условий эксперимента.

Полученные результаты свидетельствовали о том, что развитие у животных ИДС приводило к развитию в области травмы деструктивных (некротических) изменений и воспалительного процесса, и вместе с тем, к резкому торможению у них заживления дефектов кости (рис.1). При этом, отмечалось пролонгирование развившегося в области костной травмы воспаления, в отдельных случаях даже на 60-е сутки опыта в костном дефекте наблюдался нашоительный процесс.

Замедление костно-регенераторных процессов лишь отчасти можно связать с воспалительным фоном, на котором они протекали вследствие ИДС. Вместе с тем обращало на себя внимание, что сама по себе дифференцировка остеогенных клеточных элементов и новообразование костного вещества как будто бы были поначалу весьма активными. Однако накопление остеоида без выраженной тенденции к количественно адекватному построению более зрелых костных структур, в частности, фиброзных костных трабекул говорило о торможении у животных при ИДС именно процессов созревания костного вещества.

PjHC.1. ii крофото гра м м a. Группа. 2. 15 суток. Йе эротически с изменения a i каин заполнившей косшый дефект (стрелки утлом), большое число гигантских многоядерных клеток (одинарные стрелки). Видно иошюбраюншшое костное

волокнистой тканью, у краен дефекта отмечаются напластования остеоидных (Стрелки yj-.юм} и фнбритных бадочек (сдвоенные стрелки) на матери некую кость. XI00,

При анализе результатов исследования в серии опытов с введением в костные дефекты Гапкола и Гапкола с НБК были выявлены 2 основных момента.

Во-первых, введение при ИДС в костную рану одного лишь Гапкола лишь незначительно активизировало регенераторный процесс, по сравнению с группой опытов, где «иммунодефицитным» животным не вводили в костную рану Гапкол.. При этом уже на 15 сутки опыта в отдельных случаях можно было наблюдать активное новообразование остеоидных структур, К 30 суткам этот процесс продолжал прогрессировать, однако к 60 суткам опыта в плотной части регенерата начинали преобладать костно-хрящевые и хондроидные структуры, т.е. гистогенез новообразованной ткани в этих случаях был несовершенным.

Во-вторых, включение при тех же условиях опытов в состав Гапкола комплекса НБК обусловило заметное усиление костно-регенераторного процесса в дефектах кости (рис. 2). Во все сроки эксперимента наблюдалось усиление процесса новообразования костных структур. При этом, в некоторых случаях частицы Гапкола играли, по-видимому, роль центров остеогенеза, в результате чего они оказывались запаянными новообразованным костным веществом. В целом площадь новообразованной костной ткани в костном дефекте в З-б группе наблюдений оказалась заметно больше, чем в 3-а группе.

В заключительных сериях экспериментов у животных производили коррекцию вызванного ИДС с помощью подкожного введения иммуномодулятора ПО. На этом фоне с целью оптимизации костно-регенераторного процесса в дефектах бедренной кости использовали известные средства (Гапкол отдельно и Гапкол с НБК в комплексе, соответственно, группы 4 и 5).

Полученные данные свидетельствовали о том, что коррекция иммунодефицита с помощью ПО приводила у подопытных животных к падению интенсивности воспалительного процесса в области травмы и некоторому снижению проявлений гигантоклеточных реакций на введенный в костный дефект Гапкол.

Однако одного лишь Гапкола оказалось явно не достаточно, чтобы кардинально изменить характер процессов, протекающих в костных дефектах, относительно групп 3 и 4. Отмечалось лишь довольно слабое усиление костно-регенераторного процесса, а процессы остеогенной дифференцировки и созревания уже образовавшихся структур были по-прежнему заторможены. К 60 суткам от начала опыта в этой группе животных регенерат менее, чем на 1/2 площади дефекта был занят клеточно-и грубоволокнистой соединительной тканью, а на остальном протяжении, главным образом, на периферии дефекта новообразованными костными структурами и, в значительной мере, хондроидной тканью, что свидетельствовало о несовершенстве механизмов остеогенетической дифференцировки.

Лишь в группе 5, где сочетались эффекты иммунокоррекции и воздействия комплекса Гапкола и НБК, отмечалась стабильная интенсификация остеогенетических процессов. Дифференцировка уже образовавшегося костного вещества протекала с тенденцией к превалированию костных структур над хрящевыми структурами. Эти структуры встречались в отдельных участках (в области входа в дефект) регенерата и были вполне естественной его компонентой, поскольку область травмы локализовалась в эпифизе бедренной кости, богатом хрящевыми элементами. В количественном отношении процесс заживления костных дефектов так же характеризовался как полноценный, что наглядно демонстрируется при сопоставлении данных по группе 5 (площадь, занятая костным регенератом, от площади дефекта - 3/4 в одном случае и несколько более 1/2 - в другом) с результатами, полученными в группе сравнения.

Таким образом, коррекция ИДС у экспериментальных животных с помощью ПО в сочетании с применением препаратов, оптимизирующих репаративный остеогенез, таких как комплекс Гапкола и НБК, могут быть использованы, как средства коррекции нарушений процесса заживления костных ран при ИДС.

ВЫВОДЫ

1. Заживление искусственно вызванного дефекта нижней челюсти у крыс с нормальным иммунным статусом сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет гранулоцитов (в среднем на 25-30%) и фазовыми изменениями числа мононуклеаров. Введение животным антиметаболита циклофосфана приводит к умеренно выраженному иммунодефицитному состоянию, проявляющемуся в лимфопении без лейкопении, благодаря компенсаторному увеличению числа клеток гранулоцитарного ряда и моноцитов.

2. В длительных культурах костного мозга на материалах Гапкол и Гапкол-неколлагеновые белки кости развиваются стромальные и кроветворные клетки, и идут процессы формирования кроветворного микроокружения. С увеличением времени культивирования, на материале Гапкол-неколлагеновые белки кости, по сравнению с обычным Гапколом, наблюдается относительное преобладание стромальных клеток над кроветворными (в среднем на 10-30% в разные сроки опыта)

3. Введение иммуномодулятора полиоксидония приводит у животных с умеренно выраженным иммунодефицитным состоянием и травмой нижней челюсти к нормализации лейкоцитарной формулы в результате возрастания числа лимфоцитов и моноцитов, особенно в поздние сроки эксперимента.

4. Воспроизведение у подопытных животных иммунодефицитного состояния вызывает развитие в области костной раны нижней

челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных, в том числе некротических изменений и резкое торможение процесса заживления костных дефектов.

5. В ходе регенерации челюсти дифференцировка остеогенных клеточных элементов и новообразование костного вещества у животных с иммунодефицитным состоянием вначале протекают активно, однако накопление остеоида не сопровождается адекватным построением более зрелых костных структур, что говорит о торможении процессов остеогенной дифференцировки и созревания костного вещества.

6. Введение животным с иммунодефицитным состоянием в костную рану челюсти одного Гапкола слабо активизирует регенераторный процесс (по сравнению с группой, где Гапкол не использовался). Включение в состав Гапкола неколлагеновых белков кости вызывает некоторое усиление костно-регенераторного процесса в костной ране, активизацию процесса новообразования костных структур. При этом частицы Гапкола играют роль центров остеогенеза, в результате чего они оказывались запаянными в новообразованное костное вещество.

7. Коррекция иммунодефицитного состояния у экспериментальных животных с помощью полиоксидония и применение препаратов, оптимизирующих репаративный остеогенез: Гапкола в комплексе с неколлагеновыми белками кости, может быть использована при иммунодефиците, как средство комплексной профилактики нарушения заживления костной раны челюсти.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полиоксидоний в виде подкожных инъекций оказывает

нормализующее действие на показатели периферической крови, отражающие состояние иммунной защиты у животных с

иммунодефицитным состоянием, и частично нормализует течение репаративного процесса в костной ткани челюсти.

2. При необходимости восстановления репаративного процесса в

костях лицевого скелета в условиях иммунодефицита для клинической апробации рекомендуется применение остеопластического материала (Гапкол), содержащего неколлагеновые белки кости совместно с назначением иммунотропного препарата Полиоксидония.

Основные положения диссертации опубликованы в работах:

1. Саппсина Т.Н., Бондаренко М.О., Дружинина P.A., Дубровин Д.С.

Экспериментальная оценка эффективности Полиоксидония при иммунодефицитном состоянии по показателям клеточного состава периферической крови. // В кн.: Человек и лекарство, 2003, С 659.

2. Бондаренко М.О., Мустафаев Магомет М., Сашкина Т.Н., Дружинина P.A. Влияние иммуномодулятора Полиоксидония на показатели периферической крови при травме нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния в эксперименте // В кн.: Третий Российский конгресс по патофизиологии с международным участием. Дизрегуляционная патология органов и систем. Материалы конгресса. Москва, 2004. С. 111.

3. Бондаренко М.О. Дубровин Д.С., Аскерова С.Ш. Применение иммуномодулятора Полиоксидония для коррекции течения посттравматической регенерации нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния в эксперименте. В кн: Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Ш конференция молодых ученых России с международным участием. // Материалы конференции, 20-24 января 2004 г. С 307.

4. Бондаренко М.О. Применение иммуномодулятора Полиоксидония для оптимизации заживления костных дефектов при иммунодефицитном состоянии (Экспериментальное исследование) // Актуальные вопросы стоматологии. Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 100-летию создания Саратовского одонтологического общества, Саратов, 2005, С. 112.

5. Бондаренко М.О., Мустафаев М.Ш. Обоснование применения препарата «Полиоксидоний» при иммунодефицитном состоянии в эксперименте // Материалы 8-го ежегодного научного форума «Стоматология 2006», М. С 74.

6. Бондаренко М.О. Иммуномодулятор Полиоксидоний - эффективный препарат для коррекции иммунодефицитного состояния. В кн.: Актуальные проблемы стоматологии. Материалы всероссийской научно-практической конференции, посвященной 105-летию со дня рождения профессора Е.Е. Платонова. М., 2006, С.33-34.

7. Воложин А.И., Бондаренко М.О., Фионова Э. В., Ожелевская С.А. Применение иммуномодулятора Полиоксидония совместно в неколлагеновыми белками кости для ускорения регенерации челюсти при иммунодефицитном состоянии в эксперименте. Патологическая физиология и экспериментальная терапия, 2007, №1, С 27-28.

Формат А5

'умага офсетная N 1-80 г/м2 сл. печ. л. 0$ Тираж^ОО

аказ № 23

Отпечатано в РИО МГМСУ Изд. лицензия ИД № 04993 от 04.06.01 года Москва, 103473,

/I,Ч.,.|-. !,■.-..,. ОЛ/1

1. Актуальность проблемы

В стоматологии и челюстно-лицевой хирургии для возмещения костных дефектов , широкое распространение получили материалы, содержащие гидроксиапатит, трикальцийфосфат и коллаген, которые являются, в первую очередь, остеокондукторами и сами по себе обладают слабо выраженными остеоиндуцирующими свойствами (Щепеткин И.А., 1994). Их некоторый стимулирующий эффект, по-видимому, обусловлен способностью фиксировать из крови факторы роста, которые активируют и w остеогенез. Свойствами факторов роста обладают также некоторые неколлагеновые белки костной ткани (НБК), которые фиксируются в ткани в процессе репаративного остеогенеза (Десятниченко К.С. 1987, 1995, 1997). Удаление этих белков лишает кость остеоиндуцирующих свойств. Среди НБК выделяют . трансформирующий фактор роста, факторы роста фибробластов, инсулинподобные факторы роста, колониеобразующие факторы гранулоцитов и макрофагов, интерлейкины и другие (Fincelman R.D., 1992). К настоящему времени выделен в чистом виде ряд этих факторов, которые с успехом используются в практической медицине для стимулирования построения костной ткани. Известно, что каждый из этих факторов выполняет самостоятельную функцию, действуя на процессы хемотаксиса, пролиферации, адгезии, дифференцировки, экспрессию клетками тканеспецифических белков и т.д. (Мс Carthny T.L., Centrella М;, 2000). Но оптимальный конечный эффект определяется совместным, кооперативным действием этих факторов, каждый из которых выполняет самостоятельную функцию. Поэтому применение комплекса НБК, содержащих остеогенетические факторы, может оказаться более эффективным, чем использование отдельных факторов.

Такие белки выделены на ЗАО НПО «Полистом», и они могут быть апробированы на предмет их эффективности для стимулирования регенерации костной ткани. При этом важным является условие введения этих белков в костную рану. Известно, что физиологический эффект НБК зависит от их сорбции на компонентах костной ткани: гидроксиапатите,' трикальцийфосфате и коллагене, которые удерживают эти белки и способствуют их функционированию. Такие компоненты являются основой остеопластических материалов, разработанных и выпускаемых на ЗАО «Полистом». К ним относятся такие материалы, как Гапкол, Колапол и другие. Поэтому актуальным является изучение применения НБК, введенных в состав этих материалов, для усиления построения костной ткани. Особенно актуальным является применение эффективного средства, стимулирующего остеогенез при его угнетении, вызванном различными факторами. Моделью угнетения построения костной ткани является введение антиметаболита, например, циклофосфана, который одновременно вызывает иммунодефицитное состояние (А.И. Воложин и др., 1999 — 2003, Д.С.Дубровин, 2004). Не исключено, что на фоне иммунодефицитного состояния, помимо НБК, сорбированных на остеопластических материалах, следует вводить также иммуномодулятор. Наиболее эффективным из них считается высокомолекулярный препарат, синтезированный в Институте иммунологии РАМН - Полиоксидоний, испытанный как в эксперименте на животных, так и в клинике при снижении иммунной защиты. Поэтому актуальной проблемой стоматологии и патофизиологии является изучение возможности применения НБК в сочетании с остеопластическим материалом и иммунокоррекцией Полиоксидонием при заживлении костной раны ьна фоне иммунодефицитного состояния, что и определило цель настоящей работы.

Цель: Повысить эффективность лечения травматических повреждений челюстных костей при иммунодефицитном состоянии, используя для этого иммуномодулятор Полиоксидоний вместе с неколлагеновыми белками кости- индукторами пбстроёния костной ткани

Задачи

1. Изучить в эксперименте реакцию системы крови на травму нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния (ИДС) и введение иммуномодулятора Полиоксидония.

2. Применить длительную культуру костного мозга декстеровского типа для оценки биосовместимости и остеостимулирующих свойств w и костнопластических материалов.

3. Оценить состояние тканевых структур в области костной травмы челюсти в динамике после повреждения, выраженность и длительность воспалительных реакций при нормальном иммунном статусе и ИДС.

4. Определить темпы новообразования и дифференциации соединительно-тканного регенерата в костных дефектах при ИДС.

5. Изучить динамику созревания соединительно-тканной компоненты регенерата и удельный вес не костной (хондроидной) части регенерата при ИДС.

6. Определить степень эффективности препарата Полиоксидоний для нормализации регенерации костной ткани челюсти при ИДС.

7. Оценить роль НБК, введенных в состав остеопластического материала Гапкол, в процессе регенерации костной ткани при ИДС.

Научная новизна

Установлено, что заживление искусственно вызванного дефекта нижней челюсти у крыс сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет клеток гранулоцитарного ряда и моноцитов. Введение ч и животным антиметаболита циклофосфана по соответствующей схеме приводит к умеренно выраженному ИДС, проявляющемуся лимфопенией. Введение иммуномодулятора Полиоксидония приводит у этих животных к частичной нормализации лейкоцитарной формулы крови в результате возрастания числа лимфоцитов и моноцитов.

Воспроизведение у подопытных животных ИДС вызывает развитие в области костной раны нижней челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных, в том числе, некротических изменений и резкое торможение' процесса заживления дефектов. В ходе регенерации челюсти дифференцировка остеогенных клеточных элементов и новообразование костного вещества у животных с ИДС протекают активно, но накопление остеоида не сопровождается адекватным построением более зрелых костных структур, что говорит о торможении процессов остеогенной дифференцировки и созревания костного вещества. Введение животным с иммунодефицитом в костную рану челюсти одного Гапкола слабо активизирует регенераторный процесс. Научной новизной отличаются данные о том, что включение g состав Гапкола НБК совместно с применением Полиоксидония вызывает заметное усиление костно-регенераторного процесса в дефектах кости, что проявлялось в активизации процесса новообразования костных структур. Роль центров остеогенеза при этом играют частицы Гапкола.

Практическое значение

С целью разработки и испытания новых, а также совершенствования известных остеопластических материалов для последующего их использования в стоматологическойлрактике и челюстно-лицевой хирургии целесообразно проведение доклинической фазы исследования: экспериментальное моделирование ИДС, на фоне которого изучается процесс репаративного остеогенеза нижней челюсти. Коррекция ИДС может быть осуществлена путем подкожного введения иммуномодулятора Полиоксидония в дозе 0,01 мг/100 г веса крысы через день в течение двух недель, всего 7 инъекций. Практическое значение имеют данные о том, что при необходимости восстановления репаративного процесса в костях лицевого скелета в условиях ИДС для клинической апробации эффективно применение остеопластического материала (Гапкол), содержащего НБК при условии парентерального введения Полиоксидонием. Гапкол в комплексе с неколлагеновыми белками кости может быть использован при ИДС как средство комплексной профилактики нарушений процесса заживления костной раны челюсти.

Положения, выносимые на защиту

1. Создание искусственного костного дефекта на нижней челюсти у крыс сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет гранулоцитов и фазовыми изменениями числа моноцитов. Введение животным антиметаболита циклофосфана приводит к умеренно . выраженному ИДС, проявляющемуся лимфопенией. Введение иммуномодулятора Полиоксидония частично нормализует у животных показатели периферической крови.

2. В длительных культурах костного мозга на Гапколе и Гапколе-НБК развиваются стромальные и кроветворные клетки, и идут процессы формирования кроветворного микроокружения. С увеличением времени культивирования на материале Гапкол-НКБ по сравнению с Гапколом наблюдается преобладание стромальных клеток над кроветворными.

3. Воспроизведение у подопытных животных ИДС вызывает развитие в области костной раны нижней ^челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных и некротических изменений, а также резкое торможение процесса регенерации. При этом накопление остеоида в* процессе регенерации не сопровождается адекватным построением зрелых костных структур, что говорит о торможении- процессов остеогенной дифференцировки.

4. Введение животным с ИДС в костную рану челюсти одного Гапкола незначительно активизирует регенераторный процесс. Включение в состав Гапкола НБК вызывает заметное усиление костно-регенераторного процесса в> дефектах кости, активизацию процесса новообразования костных структур, а частицы Гапкола играют роль центров остеогенеза.

Внедрение результатов работ

Полученные данные внедрены в дальнейшую научную работу на кафедре хирургический стоматологии КБГУ, а также в учебный процесс и научную работу кафедры патологического физиологии стоматологического факультета ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.

Основные положения диссертации опубликованы в работах:

1. Сашкина Т.И., Бондаренко О.А., Дружинина Р.А., Дубровин Д.С. Экспериментальная оценка эффективности Полиоксидония при иммунодефицитном состоянии по показателям клеточного состава периферической крови. // В кн.: Человек и лекарство, 2003, С 659.

2. Бондаренко М.О., Мустафаев Магомет М., Сашкина Т.И., Дружинина Р.А. Влияние иммуномодулятора Полиоксидония на показатели периферической крови при травме нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния в эксперименте // В кн.: Третий Российский конгресс по Патофизиологии с международным участием. Дизрегуляционная патология органов и систем. Материалы конгресса. Москва, 2004. С.111. '

3. Бондаренко О.А. Дубровин Д.С., Аскерова С.Ш. Применение иммуномодулятора Полиоксидония для коррекции течения посттравматической регенерации нижней челюсти в условиях иммунодефицитного состояния в эксперименте. В кн: Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Ш конференция молодых ученых России с международным участием. // Материалы конференции^ 20-24 января 2004 г. С 307.

4. Бондаренко М.О. Применение иммуномодулятора Полиоксидония для оптимизации заживления костных дефектов при иммунодефицитном состоянии (Экспериментальное исследование) // Актуальные вопросы стоматологии. Материалы • межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 100-летию создания Саратовского" одонтологического общества, Саратов, 2005, С. 112.

5. Мустафаев М.Ш., Бондаренко М.О. Регенерация костной ткани при иммунодефицитном состоянии // В кн.: Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии. Материалы конференции, ЦНИИС, 13-19 июня 2005 года, С

6. Бондаренко М.О. Иммуномодулятор Полиоксидоний - эффективный препарат для коррекции иммунодефицитного состояния. В кн.: Актуальные проблемы стоматологии. Материалы всероссийской научно-практической конференции, посвященной 105-летию со дня рождения профессора Е.Е.Платонова. М., 2006, С.33-34. о

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на: Третьем Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием, (Москва, 2004), совместном совещании сотрудников кафедр хирургической стоматологии, кафедры патофизиологии стоматологического факультета и лаборатории биотехнологии минерализованных тканей НИМСИ при МГМСУ 20 октября 2006 года.

11

ВЫВОДЫ

1. Заживление искусственно вызванного дефекта нижней челюсти у крыс с нормальным иммунным статусом сопровождается развитием непродолжительного лейкоцитоза за счет гранулоцитов и фазовыми изменениями числа мононуклеаров. Введение животным антиметаболита циклофосфана приводит к умеренно выраженному ИДС, проявляющемуся в лимфопении без лейкопении, благодаря компенсаторному увеличению числа клеток гранулоцитарного ряда и моноцитов.

2. В длительных культурах костного мозга на материалах Гапкол и Гапкол-НБК развиваются стромальные и кроветворные клетки, и идут процессы формирования кроветворного микроокружения. С увеличением времени культивирования, на материале Гапкол-НБК, по сравнению с обычным Гапколом, наблюдается преобладание стромальных клеток над кроветворными.

3. Введение иммуномодулятора Полиоксидония приводит у животных с умеренно выраженным ИДС и травмой нижней челюсти к нормализации лейкоцитарной формулы в результате возрастания числа лимфоцитов и моноцитов, особенно в поздние сроки эксперимента.

4. Воспроизведение у подопытных животных ИДС вызывает развитие в области костной раны нижней челюсти тяжелых воспалительных, деструктивных, в том числе некротических изменений и резкое торможение процесса заживления костных дефектов.

5. В ходе регенерации челюсти дифференцировка остеогенных клеточных элементов и новообразование костного вещества у животных с ИДС вначале протекают активно, однако накопление остеоида не сопровождается адекватным построением более зрелых костных структур, что говорит о торможении процессов остеогенной дифференцировки и созревания костного вещества.

6. Введение животным с ИДС в костную рану челюсти одного Гапкола слабо активизирует регенераторный процесс (по сравнению с группой, где Гапкол не использовался). Включение в состав Гапкола НБК вызывает некоторое усиление костно-регенераторного процесса в костной ране, активизация процесса новообразования костных структур. При этом частицы Гапкола играют роль центров остеогенеза, в результате чего они оказывались запаянными в новообразованное костное вещество.

7. Коррекция ИДС у экспериментальных животных с помощью Полиоксидония и применение препаратов, оптимизирующих репаративный остеогенез: Гапкола в комплексе с НБК, может быть использована при иммунодефиците, как средство комплексной профилактики нарушений процесса заживления костной раны челюсти.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полиоксидоний в виде подкожных инъекций оказывает нормализующее действие на показатели периферической крови, отражающие состояние иммунной защиты у животных с ИДС, и частично нормализует течение репаративного процесса в костной ткани челюсти.

2. При необходимости восстановления репаративного процесса в костях лицевого скелета в условиях иммунодефицита для клинической апробации рекомендуется применение остеопластического материала (Гапкол), содержащего неколлагеновые белки кости совместно с назначением иммунотропного препарата (Полиоксидоний).

105