Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Новый подход к моделированию алкогольной кардиомиопатии и влияние мидроната на восставновление структурных повреждений сердечной мышцы

•" 3 о С I С р

Р

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР РОСТОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ПОПОВ Виктор Всеволодович

УДК 616.89-008.441.3.577.7

новый подход К МОДЕЛИРОВАНИЮ АЛКОГОЛЬНОЙ КАРДИОМИОПАТИИ

И ВЛИЯНИЕ МИЛДРОНАТА НА ВОССТАНОВЛЕНИЕ СТРУКТУРНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ

14.00.15 — ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону * 1990

Работа выполнена в Северо-Осетинском государственном медицинском институте.

Научные руководители:—доктор медицинских наук, профессор Ю. Л. Сутулов кандидат медицинских паук, старший научный сотрудник Л. В. Логунова.

Официальные оппоненты: — доктор медицинских паук, доцент И. С. Дерижанова доктор медицинских наук, профессор Ю. И. Ухов.

Ведущая организация: — Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР.

Защита состоится «_,_»,_,1990 г.

в-.часов па заседании специализированного совета К 074.20.02 в Ростовском ордена Дружбы народов медицинском институте (344700 г., Ростов-па-Дону, На-хнчеванский пер., 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке медицинского института.

Автореферат разослан «__,_»,-Д 550 г.

Ученый секретарь специализированного совета доцент

Е. А. Ставская.

:;/,ГСГ?;:. Л

:...ortv.

о и ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Ü. :1гн»r.a -тд e/i

£ЕМуУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Реализация постановления ЦК КПСС «О мерах по преодолению пьянства и алкоголизма» ставит перед медицинской наукой проблему детального изучения патогенеза, клиники ц морфологии алкогольных висцеропатий с целью разработки эффективных способов их профилактики и лечения.

Актуальность проблемы определяется широким кругом лиц злоупотребляющих алкоголем, так, к началу 1988 г. в лечебко-прсфилактических учреждениях состояло 4,6 миллионов человек, страдающих алкоголизмом (А. В. Логвинов, 1988).

Хроническая алкогольная интоксикация вызывает поражение практически всех органов и функциональных систем организма, что обусловило появление в последнее время термина «алкогольная болезнь» (В. В. Серов, С. П. Лебедев, 1985). Показано, что смертность алкоголиков мужчин в 4,1, а женщин в 7,7 раз выше чем смертность среди остального населения (N. В. Gronvall. J. Svend е. d, 1987) средний возраст умерших, злоупотребляющих алкоголем, составляет 46 лет (10. П. Лиснцин, 1985).

Среди висцеральных проявлений алкоголизма поражения сердечно-сосудистой системы занимают одно из ведущих мест и в 30% случаев являются непосредственной причиной смерти (S. D. Beasley, 19S6). На основании длительного наблюдения за больными хроническим алкоголизмом и анализа данных аутопсии R. S. Fink, S. В. Rosalki (1979) было показано, что поражения сердца у людей, злоупотребляющих алкоголем выявляются клиницистами в 30% случаев, а по данным секционного исследования явления АКМП наблюдаются в 90%.

Широкая распространненость злоупотребления спиртными напитками, высокая смертность и частота алкогольных поражений сердечной мышцы позволяют отнести проблему АКМП к числу наиболее актуальных в современной медицине.

В настоящее время работами многочисленных авторов установлена четкая взаимосвязь между злоупотреблением алкоголем и патологическими изменениями сердечной мышцы (А. М. Внхерт и др., 1981; И. Л. Краснопевцева, 1985; R. J. Bing, 1982; Е. Rubin, 1982), детально описаны специфические морфологические изменения миокарда, которые характеризуют АКМП как самостоятельную нозоологическую единицу (В. С. Пауков, С. П. Лебедев, 1985). Однако многие вопросы морфологии и патогенеза АКМП не нашли своего окончательного решения. В частности, еще не пол-

ностью выяснены взаимоотношения прямого действия этанола, продукта его метаболизма ацетальдегнда, сосудистого фактора и гормонального дисбаланса на миокард при хронической алкогольной интоксикации, недостаточно исследована роль нарушения жирового обмена, транспорта электролитов и удельный вклад каждого из этих факторов в развитие структурных повреждений сердечной мышцы. Не существует также уоедителыюго объяснения более выраженного поражения правых отделов сердца при АКМП.

Изучение действия алкогольной интоксикации на миокард животных также не внесло полную ясность в решение этих вопросов. Некоторые исследователи объясняют это отсутствием экспериментальной модели полностью воспоризводящей картину АКМП (Ю. П. Никитин, 1988; В. Г. Цыпленкова и др., 1988; G. Mall, 1986).

В настоящее время комплекс мероприятий, направленных на лечение больных с АКМП, сводится к прекращению потребления алкоголя, проведению симптоматической и общеукрепляющей терапии (А. И. Грицюк, 1984; Е. И. Чазов, 1984). В связи с этим необходим поиск новых лекарственных препаратов строго направленного действия, с учетом интимных механизмов повреждающего действия этилового алкоголя. Перспективным в этом отношении может быть применение 3— (2,2,2 — триметнлгидразиний) пропионата—милдроната. Являясь структурным аналогом естественного метаболита, участвующего в окислительно-восстапови-тельных процессах, милдронат оказывает стимулирующее действие на энергетические и синтетические процессы в клетке при гипоксии (Б. 3. Симхович, Д. В. Мейрена, X. Б. Хаги и др., 1986; Я. Б: Блюм и др., 1987).

Кроме того, как показали эксперименты, проведенные на белых крысах в ленинградском НИИ психоневрологии (И. П. Лапин, В. Б. Слезан, 1986), милдронат ослабляет симптомы острогс алкогольного отравления и уменьшает потребление алкоголу вплоть до полного отказа от него в условиях свободного выбора между этанолом и водой.

ЦЕЛЬ И ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Целью настоящее работы явилось создание новой модели алкогольных поражениг сердечной мышцы, позволяющей за короткий срок воспроизвестг основные структурные и обменные нарушения характерные дл* АКМП, а также оценить влияние милдроната на степень разви тия и восстановления поражений сердечной мышцы.

Исходя из поставленной цели, исследования были направлена на решение следующих задач: 1. Разработка нового способа мо делирования алкогольных поражений миокарда .2. Изучение мор

фо- н патогенеза алкогольных поражений сердечной мышцы в условиях эксперимента. 3. Исследование влияния мнлдроната на процессы развития л восстановления морфологических нарушений миокарда и некоторые биохимические показатели при острой и хронической алкогольной интоксикации. 4. Оценка различных гистологических, гистохимических, люмппесценгно-микроскопичес-кнх и поляризационных методов исследования в диагностике структурных изменений миокарда при алкогольной интоксикации.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В результате проведенного исследования разработана принципиально новая модель алкогольных поражений миокарда, позволяющая за сравнительно короткий срок воспроизвести основные структурные и обменные нарушения характерные для АКМП. Обосновано применение нового лекарственного препарата — мнлдроната для фармакологической коррекции алкогольных повреждений сердечной мышцы. Предложен люми-несцентно-млкроскопический метод выявления кальция для морфологической диагностики ранних признаков алкогольных повреждений кардиомиоцитов. Впервые высказано предположение о том, что изменение состояния сурфактанта является одним из механизмов лежащих в основе более выраженного поражения правых отделов сердца при АКМП.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Разработанная модель АКМП может служить для изучения патогенетических механизмов развития алкогольных поражений миокарда и методов их фармакологической коррекции. Высокая эффективность применения мнлдроната для коррекции экспериментальных алкогольных поражений сердечной мышцы обосновывает необходимость проведения клинического испытания. В случае его положительного результата практическому здравоохранению будет предложен новый лекарственный препарат для лечения АКМП. Люминесцентно-микроскопический метод выявления кальция можно использовать в практической работе патологоанатомическнх отделений, гистологических лабораторий БСМЭ для диагностики ранних признаков повреждения кардиомиоцитов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Адекватность разработанной модели АКМП.

2. Важная роль снижения активности альдегиддегидрогеназы н нарушения окисления ацетальдегида в возникновении и развитии алкогольных поражений миокарда.

3. Эффективность применения мнлдроната для коррекции алкогольных поражений сердечной мышцы в условиях эксперимента.

4. Обоснованность применения люминесцеитно-микроскопичес-кого метода выявления кальция для морфологической диагностики ранних признаков повреждения кардномноцитов.

5. Наличие взаимосвязи между изменением состояния сурфак-танта и более выраженным поражением правых отделов сердца при АКМП.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты настоящего исследования докладывались на научных сессиях сотрудников СОГМИ (1987— 1990), конференциях молодых ученых Северной Осетин и Северного Кавказа (1987—1990). Обсуждение диссертации проводилось на объединенном заседании кафедр патологической анатомии, патофизиологии, гистологии, нормальной физиологии, биохимии и центральной научно-исследовательской лаборатории Северо-Осетнн-ского медицинскогое.института (31.01.89), а также па кафедре патологической анатомии ордена Дружбы народов Ростовского медицинского института (16.02.1990).

По материалам диссертации опубликовано 5 статей, в ВНИИГПЭ направлены две заявки на изобретение, на одну из них (№ 4644029/30-14 получено положительное решение от 3.08.89. Разработано два рационализаторских предложения (№98; № 136).

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 14С страницах машинописи, содержит введение, обзор литературы, главу с описанием материала и методов исследования, три главы с изложением собственных результатов, заключение, выводы и указатель использованной литературы. (174 источника, из них 86 со ветских и 90 иностранных). .

Работа иллюстрирована 45 рисунками и 14 таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 370 белых беспородных крысах массо* 180—250 г. Животные находились в условиях стационарного в и вария на стандартном пищевом рационе. -Проведены следующш серии опытов:

1. Ежедневное введение (в течение 60 дней) 48% раствора эта нола в количестве 4,2 г/кг в желудок через зонд и через каждьк четыре дня в/ж введение суспензии тетурама на 48% раствор« этанола из расчета 25 мг/кг (контроль — опыты с введением эквн валентного количества водопроводной воды на фоне ннгибирова ния альдегиддегидрогеназы тетурамом).

2. Предварительное виутрижелудочпое введение милдроната I дозе 50 мг/кг (контроль — опыты с введением эквивалентного ко личества этанола и водопроводной воды).

3. Введение интраперитонеально мнлдроната в дозе 50 мг/'кг после однократного введения этанола в количестве 8,3 г/кг (контроль — опыты с введением эквивалентного количества этанола).

4. Введение мнлдроната п/п в дозе 50 мг/кг после сублеталь-ион дозы этанола (контроль — введение сублетальной дозы этанола).

5. Введение мнлдроната в дозе 50 мг/кг в течение 15 и 30 дней после 60 дневной алкоголизации на фоне ингнбирования альде-гиддегидрогеназы тетурамом (контроль — введение водопроводной воды после отмены этанола).

6. Эмоционально-болевой стресс (ЭБС) после 60 дневной алкоголизации и 30 дневного введения мнлдроната в дозе 50 мг/кг (контроль — ЭБС и ЭБС после 60 дневной алкоголизации и 30 дневного введения водопроводной воды).

7. Влияние введения мнлдроната (25 мг/кг) н тетурама на продолжительность алкогольного наркоза (интраперитоиеального введения 25% раствора этанола в количестве 4,2 г/кг).

Животные забивались путем декапптацни. Для гистологических исследований использовались методы световой, поляризационной и электронной микроскопии. Проводилась морфометрнчсская оценка состояния сердечной мышцы по результатам реакции на СДГ по методике И. Ф. Егоровой с соавт. (1987), определялась объемная плотность фуксипофильных ьсардиомноцитов и измерялись объемы клеточных ядер с последующим их логарифмированием и построением вариационных кривых.

В плазме крови исследовалось содержание общих литшов (OJI), триглицеридов (ТГ), свободных жирных кислот (СЖК) и А1В изоэнзима креатипфосфокиназы. Использовались готовые наборы фирм «Buringer» «Хемапол» и отечественные реактивы.

Оценка состояния сурфактанта производилась по частично модифицированному нами микроскопическому методу Patlle (1955). Полученные результаты подвергались статистической обработке, достоверность оценивали по критериям Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Структурные и метаболические изменения при моделировании АКМП путем ингнбирования эганол-окисляющих ферментных

систем.

Принимая во внимание утверждения группы авторов об отсутствии в настоящее время адекватной модели АКМП (Ю. П. Никитин, 1988; G Mall, 1986; L. С. Ward, 1987), а также то, что для

изучения интимных механизмов развития АКМП и выяснения роли отдельных звеньев в патогенезе данного заболевания целесообразно применять разнообразные методические приемы, акцептирующие внимание на том или ином повреждающем факторе, нам представилось возможным смоделировать алкогольное поражение сердечной мышцы, используя т^турам. Выбор тетурама обусловлен тем, что данный препарат является конкурентным ингибитором альдегиддегидрогеназы (АДГ), окисляющей высокотоксичный продукт метаболизма этанола — ацетальдегид до уксусной кислоты (М. Б. Кораблев и др., 1981). Тетурам ингибирует АДГ' и на фоне введения этанола увеличивает содержание ацетальдеги-да в десятки раз (С. S. Ericson е. а, 1985; Т. Matsubara е. а, 1987). При этом также наблюдается восстановление избытка ацетальде-гида в этанол, что также существенно влияет на элиминацию этилового алкоголя и увеличивает его воздействие на ткани (Т. Matsubara е. а, 1987; T.Cronholm е. а., 1987).

Таким образом, применение тетурама для моделирования АКМП позволяет, используя в качестве объекта исследования белых лабораторных крыс, имитировать ситуацию, которая наблюдается при длительном злоупотреблении алкоголем и характеризуется снижением активности АДГ и повышением концентрации ацетальдегида в крови (К. R. Palmer, 1982; D. Lucas, 1985; D. Meier-Tackmann, 1988), а также определить роль ацетальдегида в патогенезе АКМП.

Гистологическое и гистохимическое исследование миокарда, проведенное в разные сроки алкоголизации на фоне введения тетурама, показало, что неспецифические деструктивные изменения кардиомиоцитов, проявляющиеся в виде фуксинофилии, анизотропии, очаговом снижении активности СДГ, накоплении в саркоплазме кальция и свободных липидов, встречались на всем протяжении эксперимента (до 60 дней). Своего максимума они достигали на 10—15 сутки, после чего их выраженность несколько снижалась. Начиная с 30 суток опыта, наряду с данными изменениями в миокарде обнаруживались явления пролиферации соединительно-тканных элементов. На 45—60 день, помимо этого, отмечалось очаговое ожирение миокарда и развитие выраженного пери-васкулярного кардиосклероза.

Наряду с нарушением денатурационных свойств белков саркоплазмы, изменением липидного обмена и угнетением активности СДГ обращало на себя внимание выраженное изменение ядерных структур. Для количественной характеристики данного процесса была проведена кариометрия препаратов опытных и контрольных животных. При сопоставлении кариометрических по-

казателей контрольных и опытных животных, подвергшихся 60 дневной алкоголизации на фоне иигнбирования АДГ тетурамом, обращало на себя внимание выраженное уменьшение объемов клеточных ядер.

Полученные результаты можно рассматривать в свете известных представлений о закономерных колебаниях объемов ядер при действии различных факторов, влияющих на течение обменных процессов в клетке. Так, при голодании, угнетающем действии гормонов, дистрофии, понижении функции объем ядра, как прави-. ло, уменьшается, а при усилении метаболизма клеток и повышении функции тканевых элементов — увеличивается (А. Я. Хесин, 1967; И. В. Воробьев, 1971; К- Ташке, 1980). Вариабилыюсть объемов ядер характеризует при этом уровень клеточного метаболизма и отражает различное накопление в ядрах белков и нуклеиновых кислот (И. В. Воробьев, 1971).

В соответствии с этим паши данные об уменьшении объемов ядер в миокарде следует оценивать как проявление значительного угнетения обменных процессов в мышечных волокнах, сопровождающееся подавлением синтеза белка.

У животных, забитых на 60 сутки опыта, отмечалось резко выраженное нарушение липидпого обмена. Так, уровень ОЛ в плазме крови возрос с 0,70 ±0,067 г/л в контрольной группе до 2,53 ± ±0,36 г/л в опыте, ТГ с 0,489± 0,024 до 1,549+0,228 ммоль/л и СЖК с 451 ±14 до 1114±24 мкмоль/л соответственно.

Согласно существующим в настоящее время представлениям, наблюдаемые нами изменения отражают усиление периферического липолиза в результате выброса катехоламинов (Бельченко Д. И. с соавт., 1980; М. Abe е. а., 1981), повышение синтеза три-глицеридов из-за избыточного накопления в цитоплазме клеток ацетата и НАДН (В. Furmer е. а., 1977) и ослабление митохонд-риального окисления жирных кислот до СО2 в результате блокады его ацетальдегидом (А. 1 Gederbaum е. а., 1975).

Рассматривая в совокупности все морфологические и биохимические изменения, возникающие через 45—60 дней алкоголизации и со поставляя их со структурными и обменными нарушениями, наблюдаемыми у лиц с АКМП, можно сделать вывод о том, что в результате введения этанола на фоне ингибнроваиия АДГ -тетурамом нам удалось в условиях эксперимента воспроизвести основные признаки, характерные для данного заболевания.

Предлагаемый способ моделирования алкогольных поражений сердечной мышцы по сравнению с существующими обладает рядом преимуществ, к которым следует прежде всего отнести полноту воспроизведения морфологической картины АКМП и срав-

иительно короткие сроки эксперимента. Кроме того, использование тетурама для моделирования АКМП позволяет имитировать ситуацию, которая встречается при длительном злоупотреблении спиртными напитками и характеризуется снижением активности АДГ и повышением концентрации ацетальдегида. Последнее обстоятельство особенно интересно тем, что АМКП, как известно, развивается в тот период, когда в организме нарушается окисление ацетальдегида, то есть через 10—15 лет злоупотребления алкоголем (L. D. Segel, 1984; G. J. L. Mout е. а., 1987).

Все это в совокупности с литературными данными о высокой токсичности ацетальдегида (Ю. С. Ротенберг, 1981; И. Г. Забиро-ва с соавт., 1986; R. Nilius е- а., 1987) позволяет сделать вывод о том, что нарушение утилизации ацетальдегида играет важную роль в генезе структурных и.обменных нарушений при АКМП.

Изучение одного из важнейших элементов аэрогематического барьера — сурфактанта на 1-й, 15-й и 45-й день алкогольной интоксикации при помощи микроскопического метода Паттля показало, что во все сроки эксперимента имело место статистически достоверное снижение показателя стабильности пузырьков, что указывало на изменение физико-химических свойств сурфактанта.

Показатель стабильности уменьшался уже при однократном введении этанола (с 0,85±0,02 в контроле до 0,77±0,03), резко снижался на 15 сутки (0,50±0,02) и в дальнейшем к 45 дню несколько повышался, хотя и оставался на достаточно низком уровне (0,68±0,05). О прямом действии алкоголя на сурфактанг свидетельствовало также резкое снижение показателя стабильности до 0,44^=0,08, которое наблюдалось у животных при случайном введении этанола интратрахеально.

Полученные данные позволяют высказать предположение, что одним из механизмов лежащих в основе более выраженного поражения правых отделов сердца при АКМП является их функциональное отягощение вследствие стойкого повышения периферического сопротивления в малом круге кровообращения. При этом вызванное этанолом изменение состояния сурфактанта является пусковым фактором, обуславливающим комплекс реакций от повышения проницаемости до диффузного пневмосклероза, которые в свою очередь резко затрудняют кровоток.

Все это соответствует хорошо известному факту существования прямой зависимости между поражением правых отделов сердца и заболеваниями легких, в развитии которых в настоящее время важную роль отводят изменению состояния сурфактанта (А. А_ Биркун с соавт., 1981; Н. И. Пузырева с соавт., 1987).

В пользу вышеизложенного предположения свидетельствует ir

), что этанол является хорошим растворителем липпдов, а по-зрхпостная активность сурфактанта определяется его фосфолн-гдным компанеигом. Кроме того, по данным И. А. Сытинского 1980) до 10% от всего введенного в организм этанола элимиии-/ется через легкие в неизменённом виде.

В связи с этим дальнейшее изучение взаимосвязи между изме епием поверхностной активности сурфактанта, частыми заболе-аниями легких У больных алкоголизмом и преимущественным оражением правых отделов сердца при АКМП перспективно и ожет определить разработку эффективных методов их профи-актики ц фармакологической коррекции.

II. Влияние перорального и внутрибрюшинного введения

милдронага на степень структурных повреждений и некоторые биохимические показатели липидного обмена при острой и хронической алкогольной интоксикации.

Изучение влияния мнлдроната на развитие и восстановление труктурных поражений миокарда проводилось на моделях острой хронической алкогольной интоксикации.

В результате исследования было установлено, что мнлдронат аметно снижает степень структурных повреждений, вызванных окснческой дозой этилового алкоголя. При его введении были иачительио меньше выражены явления нарушения микроцирку-яции, реже встречались дистрофические изменения кардиомиоци-ов. Особенно отчетливо прослеживался защитный эффект мил-,роната при окраске препаратов по методу Ли. Так, морфометрия чагов фуксинофилии показала статистически достоверное (р> >0,01) снижение объемной плотности фуксинофильных кардио-[иоцитов. Если в группе животных, получавших милдронат, по-азатель объемной плотности был равен 2,43±0,б%, то у нелеченых животных он составлял 5,88±0,94% (у интактоых крыс ?„=1,13±0,23°/о). Оценка состояния сердечной мышцы по резуль-атам реакции гистохимического выявления СДГ также свиде-ельствовала о положительном влиянии мнлдроната. При его при-[епении отмечалось статистически достоверное (р>0,05) увсли-ение показателя сохранности (ПС = 3,98±0,38) и уменьшение оказателя повреждения (ПП=0,93±0,39) по сравнению с неле-енными животными (ПС = 2,34±0,51 и ПП=4,54± 1,16).

Наряду с этим отмечалось мембранопротекторпое действие-шлдроната, о чем свидетельствовало уменьшение мышечных во-окон с положительной реакцией на продукты распада липопро-зидов и кальций, а также статистически достоверное (р >0,01)

снижение в плазме крови концентрации МВ изоэнзима креатин фосфокиназы с 105±9 ед/л до 55±7,6 ед/л.

Результаты кариометрического исследования показали норма лизующее действие милдроната на объем клеточных ядер. Так если у животных после однократного введения этанола в доз< 6,7 г/кг отмечалось увеличение процента клеток с мелкими ядра ми и сдвиг вариационной кривой влево по сравнению с контролем то у животных получавших милдронат, эти изменения были мене^ выраженными.

.. Ультраструктурное исследование подтвердило выраженный по ложительный эффект милдроната. У животных, получавших мил дронат, значительно реже встречались кардиомиоциты с призна нами повреждения, а наблюдаемые в части мышечных волоко! патологические изменения носили в основном обратимый харак тер и были представлены явлениями внутриклеточного отека I частичной вакуолизацией митохондрий.

При биохимическом исследовании отмечалось значительно ■снижение содержания ОЛ, ТГ и СЖК по сравнению с нелеченны ми животными, (табл. № 1).

Таблица

Влияние предварительного введения милдроната на некоторые показатели липидного обмена при острой алкогольной интоксикации.

.№№ Группы животных

Общие липиды, г/л Триглнцериды, мм оль/л

0.769±0,065 0,552±0.036

2.047±0,214 1,383±0,107

0,866±0,111 0,996±0,038

р,_2>0,01 р,_2>0,01

. р2-з> 0.01 р2_3>0,01

Свободные жирные кнслоть' мкмоль/л

Интактные животные Острая алкогольная интоксикация Острая алкогольная интоксикация на фоне введения милдроната

Достоверность

441+36 947±118

469±29 р!_2>0,01 р2-з>0,01

3

О выраженном защитном эффекте милдроната свидетельство вало снижение вдвое количества смертельных исходов у белы: крыс при введении им сублетальной дозы этанола.

Изучение процессов восстановления повреждений сердечно; мышцы, вызванных хронической алкогольной интоксикацией щ

юне ингибированця АДГ тетурамом, показало, что даже через есяц после прекращения приема этанола сохраняются наруше-ия липидного обмена, биоэнергетических и синтетических процес-ов. В миокарде животных, выведенных из эксперимента на 30 утки после 60 дневной алкоголизации в сочетании с введением етурама, выявлялись отдельные группы волокон с признаками овреждения. При оценке состояния сердечной мышцы по резуль-атам реакции на СДГ отмечался высокий показатель поврежде-ия и низкий показатель сохранности миокарда по сравнению с онтролышмн данными. Наряду с этим наблюдалось большое ко-¡ичество кардиомиоцитов с мелкими ядрами и повышенное содержание в плазме крови ОЛ, ТГ, СЖК и МВ изоэнзима креагин-эосфокиназы (табл. 2).

Таблица 2

Некоторые показатели липидного обмена и уровень МВ-КФК V животных, 30 дней получавших воду или милдронат, после хронической алкоголизация

Группы животных

ОЛ г/л

ГГ ммоль/л

СЖК

мкмоль/л

мв-кфк

ед/л

1 Интактные животные

2 30 дневное введение воды после ХАИ

3 30 дгевное введение милдроната после ХАИ Достоверность

0,70±0,07 0,48Э±0,02

2,56±0,24 1,470±0,099

0,95±0,10 0,546±0,043

Р!-42>0,01 Р1_2>0,01

р2_3>0,01 р2_з>0,01

457+14

1110+16 114±8

559±9 38+11 Р,_2>0,01

р2_з>0,01 р2_з>0,01

Применение милдроната в течение 15 суток после 60 дневной лкоголизации способствовало уменьшению степени дистрофических процессов. В миокарде животных данной группы значительно еже встречались очаги фуксинофшши,, явления некробиоза и ва-:уольной дистрофии кардиомиоцитов чем у животных, получавших водопроводную воду. Меньше были выражены контрактур-[ые повреждения мышечных волокон и положительные реакции 1а кальций и липиды.

В сердце крыс, забитых на 30 сутки лечения милдронатом, отмечалось резкое снижение структурных повреждений. При про-:мотре препаратов, окрашенных по Ли, выявлялись лншь^ едпнич-ые мышечные волокна с фуксинофильной саркоплазмой. Мор-юметрическая оценка состояния миокарда по результатам реак-щи па СДГ показала статистически достоверное увеличение по-

клзателя сохранности (ПС = 2,92 —0,48) и уменьшение показателз повржедения (ПП = 3,13±0,82) по сравнению с нелеченными жн вотными (ПС=1,00±0,50; ПП=9,02±1,11). Кариометрическо. исследование свидетельствовало о значительном увеличении объемов клеточных ядер в данной группе эксперимента. Нормализую щее действие мнлдроната наблюдалось также при исследованш: биохимических показателей жирового обмена и данных определе ния МВ;изоэнзима креатинфосфокиназы (табл.2).

Еще одним тестом для оценки влияния мнлдроната на;восста цовление обменных процессов у животных через 30 суток. посл< 60 дневной алкогольной интоксикации на фоне ингнбирования АДГ явился ЭБС. Он позволил проверить эффективность фун' кционирования различных систем в чрезвычайной ситуации.

При морфологическом исследовании миокарда животных, под вергнутых ЭБС и забитых на 30 сутки после 60 дневной алкоголи зации, отмечалось более выраженное по сравнению с интактныш крысами, также перенесшими ЭБС, повреждение мышечных воло кон сердца. Об этом свидетельствовали ипользованные памп мето ды световой, поляризационной и люминесцентной микроскопии.

В миокарде животных, получавших милдронат, выраженное?; деструктивных и дисциркуляторных процессов была значительнс меньшей. Реже встречались миокардиоциты с положительно! реакцией на кальций и липиды, меньше степень фуксинофилии ! анизотропии, почти не встречался миоцнтолиз 1! метахромазия ин терстициальной ткани. Об улучшении биоэнергетических процес сов свидетельствовали результаты морфометрической оценки сос тояния миокарда при проведении реакции на СДГ. В группе жн вотных, получавших милдронат, отмечалось статистически досто верное повышение показателя сохранности (ПС—1,46±0,58) 1 снижение показателя повреждения (ПП = 6,4±1,9) по сравнении с нелеченными животными (ПС = 0,22 ±0,04; ПП = 13,2±0,8).

Нормализующее действие мнлдроната наблюдалось и при ис следовании биохимических показателей жирового обмена и дан ных определения МВ изоэнзима креатинфосфокиназы (табл. 3).

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что мил дронат обладает выраженным кардиопротекторнъш действием ] способствует быстрому восстановлению структурных поврежденш миокарда после хронической алкогольной интоксикации.

В основе защитного и стимулирующего эффекта милдронат; лежит несколько механизмов. Так, результаты морфометрическо! оценки активности ключевого фермента цикла Кребса у живот ных, получавших милдронат, свидетельствуют о нормализации на рушенных при острой и хронической алкогольной иитокепкацш

Таблица 3

Некоторые показатели липидного обмена и уровень КФК-МВ при ЭБС и ЭБС в отдаленные сроки после хронической алкоголизации у нелеченных н получавших милдронат животных

с№

Группы животных

ОЛ г/л

ТГ

миоль/л

СЖК

мкмоль/л

КФК-МВ

сд/л

1 Ко.ттрзль

2 ЭБС

3 ХАИ+вода + ЭБС

4 ХАИ±милдро-пат+ЭБС

Достоверность

0,70±0,07 2,42=Ь0,22 3,40±0,130

0,489±0,024 2,786±0,117 2,881±0,054

457+14 1309±16 Н63±7Т

193±14.7 196±9

1.04^0,070 0,509±0,018 541±14 38±11

Р!^>0,01 р(_2>0,01 р,-2>0,01

Рз_4>0,01 р3_4>0,01 р3-4>0,01 Рз_1 > 0,01

жислнтелыю-восстановптелышх процессов в сердечной мышце. Кроме того, необходимо также отметить, что милдронат активизирует синтетические процессы в мышечных волокнах. Это иоложе-ше основывается на выявленном нами увеличении количества <леток с крупными ядрами, что соответствует данным литературы, о стимуляции репаративпого и репликативного синтеза ДНК, тлдронатом (А1. В. Блюм с соавт., 1987).

Наряду с вышеприведенными механизмами действия, милдронат способствует стабилизации клеточных мембран, о чем свидетельствует значительное уменьшение под его влиянием количества мышечных волокон с положительной реакцией на продукты распада липопротеидов и кальций, а также статистически достовер-юе снижение в плазме крови концентрации МВ изоэнзима креа-чтфссфокиназы.

Все это позволяет сделать вывод о том, что в основе выраженного положительного эффекта милдроната лежит нормализация экислителыю-восстановительпых реакций, стимулирование синтетических процессов и стабилизация клеточных мембран мышечных волокон сердца.

Среди использованных нами методов диагностики повреждения кардиомиоцитов высокочувствительным и довольно простым оказался метод определения кальция. Он позволил выявить ранние признаки повреждения кардиомиоцитов, не регистрируемые другими методами. Высокая информативность данного метода объясняется тем, что перегрузка кальцием саркоплазмы является одним из самых ранних метаболических сдвигов, который запускает общий для самых разнообразных повреждающих факторов меха-

низм гибели мышечиы волокон сердца (S. Mallow, 1981; Е. Rubir 1982).

В связи с этим мы рекомендуем люминесцентно-микроскопи ческий метод с морином для диагностики ранних признаков струн турных повреждений кардиомиоцптов.

ВЫВОДЫ

1. Нами разработан новый способ моделирования алкогольны висцеропатий основанный на применении ингибитора альдегидде гидрогеназы тетурама в сочетании с этанолом.

2. Преимущество предлагаемого способа моделирования алкс гольных поражений внутренних органов заключается в том, чг он позволяет за короткий срок воспроизвести структурные и об менные нарушения характерные для АКМП.

3. Наиболее ранними морфологическими реакциями со сторонь миокарда в ответ на введение этанола после предварительное ингибирования альдегиддегидрогеназы тетурамом являются дис циркуляторные расстройства и неспецифические деструктивны изменения кардиомиоцитов, проявляющиеся в виде фуксинофи лии, анизотропии, очаговом снижении активности СДГ, накоплении в саркоплазме кальция и свободных липидов.

4. Введение этанола в течение 45—60 дней на фоне ингибиро вання альдегиддегидрогеназы тетурамом вызывает в сердечно! мышце комплекс морфологических реакций, которые представлены неспецифическцми деструктивными изменениями кардиомио цитов, очаговым ожирением миокарда, компенсаторно-приспособн тельными процессами структурной перестройки в виде замести тельного кардиосклероза и нечетких проявлений гипертрофии I заместительной регенерации.

5. Снижение активности альдегиддегидрогеназы, сопровождающееся нарушением утилизации ацетальдегида, играет важнук роль в генезе алкогольных повреждений сердечной мышцы.

6. Введение милдроната значительно снижает выраженност] деструктивных и дисциркуляторных процессов в сердечной мыш це, а также уменьшает содержание в плазме крови общих липи дов, триглнцеридов и свободных жирных кислот при острой алко .гольной интоксикации.

7. Применение милдроната способствует быстрому восстанов ленню структурной организации сердечной мышцы и нормализа ции обменных процессов после хронической алкогольной интокси нации.

8. В основе выраженного положительного эффекта милдрона-га лежит нормализация окислительно-восстановительных реакций, :тимулировапие синтетических процессов и стабилизация клеточных мембран мышечных волокон сердца.

9. Изменение состояния сурфактанта в процессе элиминации этанола обуславливает функциональное отягощение правых отделов сердца и возможно является одним из механизмов лежащих в основе их более выраженного поражения при АКД1П.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанный способ моделирования алкогольных висце-эопатий может быть использован при экспериментальных исследованиях для дальнейшего изучения патогенетических механизмов, алкогольных поражений внутренних органов и методов их фармакологической коррекции.

2. Положительный эффект милдроната позволяет рекомендо-зать его для клинических испытаний в качестве лекарственного средства для коррекция алкогольных поражении сердечной мышцы.

3. Простота и высокая информативность люмипесцентно-микро-гкопического метода с морином на кальций позволяет рекомендовать его для выявления ранних признаков повреждения кардио-мноцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К вопросу о ранних морфологических проявлениях дезадаптационных процессов в миокарде.//Тез. докл. обл. паучн.— практ. копф. молодых ученых «Механизмы интеграции биологических систем. Проблема адаптации».— Ростов-на-Дону, 1987,—С. 67—69 (В соавт. с Логуновой Л. В., Можаевой И. В.).

2. К вопросу профилактики дезадаптационных процессов в миокарде.//Тез. докл. обл. научн.-практ. конф. молодых ученых «Механизмы интеграции биологических систем. Проблема адаптации».— Ростов-на-Дону, 1988.— С. 67—68 (В соавт. с Логуновой Л. В., Сутуловым Ю. Л.).

3. К вопросу о механизмах биологического действия этилового алкого-ля.//Тез. докл. респ. научн.-практ. конф. молодых ученых «Молодежь на передовых рубежах науки, телннки, производства».— Орджоникидзе, 1988.— С. 85—86.

4. Способ моделирования алкогольных висцеропатий.//Заявка на изобретете № 4644029/30-14, положительное решение от 3.08.89 (В соавт. с Сутуло^ зым Ю. Л., Логуновой Л. В.).

5. Изучение модифицирующей роли мнлдроната на развитее острых алкогольных повреждений сердечной мышцы. // Экспериментальная и клиническая фармакотерапия. — 1990. (В соавт. с Сутуловым Ю. Л., Логуновой Л. В., Мо-жаевой И. В.)

6. К вопросу протекторного действия мнлдроната при экспериментальных стрессорных повреждениях миокарда. // Экспериментальная и клиническая фармакотерапия. — 1990. (В соавт. с Сутуловым Ю. Л., Логуновой Л. В., Андр'ю-шенко А. П.)

Печ. л. 1.0. Формат 60х84'/|6. Заказ № 653. Тираж 100 экз.

Рссп. книжная типография, им. В. А. Гассиева, ул. Тельмана, 16.