Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Нейромедиаторные биогенные амины в структурах тимуса при введении гидрокортизона

На правах рукописи 1

- о л

Ястребова Светлана Александровна ~ 4 НОЯ кВЗ

НЕЙРОМЕДИАТОРНЫЕ БИОГЕННЫЕ АМИНЫ В СТРУКТУРАХ ТИМУСА ПРИ ВВЕДЕНИИ ГИДРОКОРТИЗОНА

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Чебоксары -1999

Работа выполнена в медицинском институте Чувашского государственного университета им.И.Н.Ульянова

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор В.Е. СЕРГЕЕВА доктор ветеринарных наук, профессор А.А. ШУКАНОВ доктор биологических наук, профессор А.С. ПЫЛАЕВ Казанский государственный медицинский университет им. C.B. Курашова

Защита диссертации состоится "_"_ 1999 г. в "_" часов на заседании диссертационного совета К 064.15.11 в Чувашском государственном университете им.И.Н.Ульянова (428015, г.Чебоксары, Московский просп., 15, Чув.ГУ)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Чув.ГУ

Автореферат разослан "_"_1999 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук,

профессор Л. А. Любовцева

Е о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В центральных и местных механизмах регуляции иммунной системы, как известно, важную роль играют нейромедиаторы (Фролов Е.П. 1977; Денисенко П.П., 1980; Корнева Е.А. и др., 1978, 1992; Гордон Д.С. и др., 1972-1992). По данным Л.В.Девойно (1972-1983), Г.В.Идовой и др. (1995-1997), Т.АЛавиной и др. (1998), Brostoff (1995) гистамин- и серотонинер-гические системы участвуют в иммуносупрессии, а допамин стимулирующе влияет на продукцию лимфоцитов-хелперов. Наличие рецепторов к нейроме-диаторам (гистамину, катехоламинам, серотонину, ацетилхолину) на лимфоид-ных клетках доказывает подчиненность иммунной системы нейрогуморальному воздействию (Варданян И.К. и др., 1980; Брондз Б.Д., 1987; Michel et. al., 1986). Однако, несмотря на разнонаправленность действия биогенных аминов на иммунные органы и организм в целом, механизмы их влияния в норме и особенно после глюкокортикоидного воздействия до конца не изучены. Доказано, что ппококортикоиды непосредственно влияют на структуры тимуса: вызывают до-зозависимую инволюцию железы (Ажипа Я.И., 1976; Торбек В.Э и др., 1992), подавляютдифференцировку лимфоцитов (Юрина H.A., 1995), способствуют де-грануляции тучных клеток (Ковшарова С.И., 1976). Кроме того, А.Я. Тамахиной и H.A. Юриной (1995) выявлено, что гидрокортизон в первые 14 сут после введения приводит к активации аргирофильных клеток кортикомедуллярной зоны тимуса. Однако люминесцентная картина заведомо известной глюкокортикоид-но-индуцированной инволюции тимуса практически не изучена.

Анализ отечественной и мировой научной литературы по указанной проблеме показал недостаточную изученность механизмов секреции биогенных аминов нейроэндокринными клетками в органах иммунитета и взаимодействия их между собой. Явно отсутствуют комплексные исследования по влиянию гидрокортизона на биоаминный статус центрального органа иммунитета. В связи с вышеизложенным, актуальными являются морфологические и люминесцентно-гистохимические исследования аминосодержащих структур тимуса, их участия в реализации действия глюкокртикоида на лимфопоэз. Такие исследования по-

зволят произвести качественные и количественные оценки влияния биоаминов тимуса на иммунные реакции и, соответственно, уточнить методы лечения глю-кокортикоидами. Поэтому исследование морфофункционального состояния био-аминосодержащих структур тимуса после введения гидрокортизона имеет существенное значение для морфологии, иммунологии и нейроиммуноморфологии.

Настоящее исследование является фрагментом комплексного исследования кафедры медицинской биологии и гистологии Чувашского государственного университета им. И.Н. Ульянова и входит в программу "Университеты России" раздел "Гистохимия биогенных аминов, морофофункциональное состояние органов и тканей в норме и эксперименте" (№ госрегистрации 01.97.0007431)

Цель исследования. Проанализировать динамику нейромедиаторных биогенных аминов в структурах центрального органа иммунитета - тимуса при действии гидрокортизона.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить морфофункциональное состояние моно- и диаминосодержащих структур тимуса через 15, 30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона, учитывая сезон года.

2. Определить корреляционные связи между нейромедиаторными биогенными аминами в структурах тимуса у интаюиых, контрольных и экспериментальных животных с минутными и часовыми сроками гидрокортизонового воздействия.

3. Исследовать серотониновый индекс в тимусных структурах через 15, 30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1,3 и 7 сут после введения гидрокортизона.

4. Проследить в популяции тучных клеток тимуса изменения содержания биогенных аминов и степени дегрануляции при различных вариантах эксперимента с введением гидрокортизона.

Научная новнзна. Впервые проведен количественный анализ содержания серотонина, катехоламинов и гистамина в люминесцируюших гранулярных клетках (ЛГК) премедуллярной и субкапсулярной зон, в тучных клетках, в тимо-

цитах мозгового и коркового веществ долек, а также в адренергических нервных волокнах тимуса у животных с внутривенным введением гидрокортизона в дозе 10 мг/кг. Впервые определен серотониновый индекс в премедуллярных, субкап-сулярных и тучных клетках, в тимоцитах мозгового и коркового веществ в первые минуты, часы, сутки после введения гидрокортизона; выявлены изменения в популяции тучных клеток вилочковой железы по содержанию биогенных аминов, по степени зрелости гепарина, по степени дегрануляции у экспериментальных животных после гидрокортизонового воздействия.

Практическая значимость. Полученные результаты расширяют представления о роли моно- и диаминосодержащих структур тимуса в механизмах регуляции иммуногенеза, в частности иммуносупрессии, в вилочковой железе, а также расширяют представление о роли серотонина, катехоламинов и гистамина в регулирующем действии глюкокортикоидов на клеточно-тканевом уровне. Эти результаты могут быть использованы врачами-иммунологами, аллергологами, эндокринологами при лечении аллергических и аутоиммунных заболеваний с применением глюкокортикоидных препаратов. Полученные данные используются в лекциях, читаемых на кафедре медицинской биологии и гистологии медицинского института при Чувашском государственном университете им. И. Н. Ульянова.

Положения, выносимые на защиту:

1. Введете гидрокортизона вызывает изменения содержания и перераспределение нейромедиаторов в биоаминосодержащих премедуллярных, субкап-сулярных и тучных клетках тимуса, различные в зависимости от сезона года.

2. Введение гидрокортизона заметно влияет на морфологию тучных клеток, изменяя процентный состав подвидов в их популяции.

3. Высокие значения серотонинового индекса свидетельствуют о преобладании серотонина над катехоламинами в люминесцирующих биоаминсодержа-щих клетках тимуса при разных сезонных и временных вариантах введения гидрокортизона.

4. Нарушение корреляционных связей и появление отрицательных значе-

ний коэффициента корреляции свидетельствуют, что экзогенный гидрокортизон инициирует выход супрессорных биогенных аминов (серотонина и гнетамина) из люминесцирующих гранулярных клеток тимуса, что, в свою очередь, обуславливает усиленную дифференцировку тимоцитов-супрессоров.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на I национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, посвященной современным проблемам клинической иммунологии и иммунофармакологии (Москва, 1997), на 111 международной конференции "Колосовские чтения - 97", посвященной 100-летию со дня рождения члена-корреспоидеита АН и АМН СССР Н.Г. Колосова (Санкт-Петербург, 1997), на III съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), на II национальном конгрессе Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, посвященном современным проблемам аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии (Санкт-Петербург, 1998), на XVII съезде физиологов России (Росгов-на-Дону, 1998), на научно-практической конференции "Иммунодефицитные состояния в клинике внутренних болезней" (Чебоксары, 1999), на IV съезде Российских морфологов с международным участием (Москва, 1999).

Объем н структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, списка наиболее употребляемых сокращений, приложения и списка литературы. Диссертационная работа изложена на 133 страницах компьютерного исполнения, содержит 27 рисунков и 15 таблиц. Список литературы включает 211 названий, в том числе 63 иностранных.

Публикации по теме диссертации. Основные положения диссертации отражены в 11 опубликованных статьях и материалах международных, всероссийских, региональных и республиканских конференций.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служила вилочковая железа 180 белых беспородных крыс-самцов массой 170-200 г. Тимус животных забирался под глубоким эфирным наркозом через 15,30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1, 3 и 7 сут после воздействия гидрокортизоном. Исследования биоаминсодержащих структур тимуса в минутные и часовые сроки воздействия гидрокортизоном проводились в апреле (в период бодрствования) и в ноябре (в период подготовки к зимней спячке). Опыты с суточными сроками воздействия были поставлены в июле (в период летней спячки) и в феврале (в период после псевдоспячки). Следует отметить, что обеспечение биогенными аминами тимусных структур в переходные периоды (до и после псевдоспячки) ранее практически не изучалось.

Животные были разделены на 3 группы: 1-я - интактные (40); 2-я - контрольные животные (70), которым вводили физиологический раствор в хвостовую вену; 3-я - подопытные животные (70), которым вводили синтетический кортикостероид - гидрокортизон ("Гидрокортизона ацетат, 2,5% суспензия") в дозе 10 мг/кг. Из ткани тимуса готовились криостатные и парафиновые срезы, которые обрабатывались следующими гистохимическими методами.

1. Лммииеснентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа (Falck, Hillarp, 1962) в модификации Е.М.Крохиной (Крохина Е.М., Александров П.Н., 1969) применялся для выявления адренергической иннервации и аминосодер-жащих структур тимуса. 2. Люмннесцентно-гнстохимнческнй метод Кросса, Эвена, Роста (Cross S.A., Ewen S.W., Rost F.W., 1971) применялся для выявления гистаминсодержащих структур тимуса. 3. Метод спектрофлуорнметрнн использовался для идентификации и количественного выражения уровней серо-тонина, катехоламинов и гнетамина в тканевых структурах вилочковой железы. 4. Окраска полнхромным толундиновым синим по Унпа применялась для контроля состояния тканевых мукополисахаридов и гепарина в тучных клетках исследуемого органа. 5. Альцнаиовым сипим и сафраннном препараты окрашивались для выявления зрелого гепарина (рН-1,0) и других кислых гликозоа-

мингликанов (рН-2,4) с одновременным выявлением протеинов сафранином (Абрамов J1.H., 1980; Гордон Д.С., 1982, 1983). 6. Окраска Суданом черным "В" использована для выявления внутриклеточных комплексно связанных ли-пидов, 7. Корреляционный анализ проводился для установления взаимосвязей между биоаминами в каждой биоаминосодержащей структуре изучаемых органов. 8. Вычисление серотонинового индекса осуществлялось для оценки истинного преобладания серотонина в клетке над другими биогенными аминами. 9. Статистическая обработка материала проводилась с помощью персональной ЭВМ Pentium-200 ММХ с использованием пакета программ Microsoft Office (Word и Excel).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование аминосодержащнх структур тимуса люминнесцентно-гастохимическими методами

1. Люмннссцентно-гнстохимическое исследование аминосодержащнх структур тимуса у интактных животных

Гистохимическое исследование тимуса показало, что биогенные амины (катехоламины, серотонин, гистамин) выявляются в адренергических нервных терминалях, в люминесцирующих гранулярных клетках премедуллярной и суб-капсулярной зон, тучных клетках этой железы. Дольки вилочковой железы у интактных крыс разной формы и величины, четко разделены между собой септами. Под малым увеличением люминесцентного микроскопа в них хорошо различимы премедуллярные и субкапсулярные клетки коркового слоя. Субкапсулярные клетки, беспорядочно расположенные на периферии коркового вещества, имеют желтовато-зеленое свечение. Во внутренней части коркового слоя долек на границе кортикомедуллярной зоны в один или два ряда располагаются премедуллярные люминесцирующие гранулярные клетки. Эти клетки более крупные и лежат компактно. В их цитоплазме содержатся крупные включения с беловато-желтой люминесценцией. Окраска их Суданом черным "В" свидетельствует, что

в местах расположения ЛГК премедуллярной и субкапсулярной зон дольки тимуса выявляются комплексно-связанные фосфолипиды. Ядра премедуллярных клеток, так же как и субкапсулярных, не люминесцируют. Среди биоаминсодер-жащих клеток дольки тимуса довольно часто встречаются тучные клетки. Формы тучных клеток более или менее правильно овальные. Хорошо заметно темное ядро в середине цитоплазмы, наполненной желтоватыми гранулами. Среди биоаминсодержащих клеток дольки тимуса выявляются изумрудно-зеленые ад-ренергические нервные волокна, расположенные в основном по ходу кровеносных сосудов. Люминесцентная морфология тимусных структур у интакгных животных совпадает с результатами исследований В.Е. Сергеевой (1970, 1972, 1974, 1976, 1992), Sainte-Marie (1965, 1966). Данные, полученные в норме по гистамину методом Кросса, Эвена, Роста, идентичны результатам работ JI.A. Любовцевой (1980, 1988, 1993), Б.М. Гордон (1990), Z. Sulowska, I. Wyczolkowska ( 1991 ).

У интакгных животных содержание катехоламинов, серотонина и гистами-на определялось не только в вышеназванных структурах тимуса, но и в тимоци-тах мозгового и коркового вещества долек. Экспериментальные данные показывают, что в апреле содержание катехоламинов практически во всех изучаемых структурах тимуса гораздо ниже, чем в ноябре. При сравнении результатов, полученных в феврале и июле, наиболее высокими являются концентрации катехоламинов зимой. Анализ содержания биоаминов в исследуемых структурах тимуса показывает, что в феврале количество серотонина и катехоламинов выше, чем в остальные месяцы.

Как показывают флуоресцентно-микроскопические исследования, максимальное значение концентрации гистамина в исследуемых структурах железы отмечается в ноябре, минимальные значения - в феврале. Концентрация гистамина в феврале значительно ниже концентрации остальных нейромедиаторов. Данные по содержанию гистамина в тучных клетках тимуса аналогичны результатам Л.А.Любовцевой (1993), однако результаты исследований концентрации гистамина в люминесцирующих гранулярных клетках тимуса несколько расхо-

дятся с ее данными, что связано, очевидно, с особенностями функциональной активности лабораторных грызунов в разные сезоны года.

По результатам наблюдений сезонных особенностей биоаминного обеспечения тимусных структур (Сергеева В.Е., 1992; Любовцева Л.А., 1993; Гордон Б.М., Гордон Д.С., 1997; Стручко Г.Ю., 1999) можно сделать вывод, что в периоды бодрствования (например в апреле) уровни моноаминов в тимусных структурах выше, чем в периоды зимней и летней псевдоспячек. Неожиданными явились результаты исследований, полученные в переходные периоды. Оказалось, что содержание моноаминов в эти периоды (ноябрь и февраль) выше, чем даже во время бодрствования.

2. Аминосодержащие структуры тимуса через 15,30 мин и 1,4 ч после введения гидрокортизона

Эксперименты по изучению ранней реакции серотонин- и катехоламиносо-держащих структур тимуса на введение гидрокортизона были проведены в апреле и ноябре.

Через 15 мин после введения гидрокортизона в апреле спектрофлуоромет-рические исследования показывают подъем уровня катехоламинов в субкапсу-лярных клетках, а в ноябре - почти во всех аминосодержащих структурах, кроме тучных клеток. В апреле через 15 мин после введения гидрокортизона наблюдается тенденция к уменьшению концентрации серотонина в премедуллярных (рис. 1), субкапсулярных (рис. 2) и тучных клетках, а подъем - только в корковых тимоцитах. В ноябре содержание'тех же нейромедиаторных биоаминов у опытных животных выше, чем у ингактных. Исключение составляют тучные клетки, в которых наблюдается снижение количества серотонина как в апреле, так и в ноябре. Через 30 мин после введения гидрокортизона (апрель), интенсивность люминесценции катехоламинов во всех структурах падает. В ноябре их концентрация увеличивается только в корковых тимоцитах и премедуллярных клетках. В апрельских опытах через 30 мин после введения гидрокортизона содержание серотонина повышается только в премедуллярных клетках (рис. 1).

Здесь следует обратиться к работам Д.С. Гордон, В.Е. Сергеевой, И.Г. Зеленовой (1982), к монографии H.H. Демина, Т.Х. Шортановой (1988), в которых отмечается, что уровень биоаминов подвержен сезонным изменениям в организме не только дикоживущих грызунов, но и лабораторных. Указанные исследователи наблюдали некоторую активность животных в зимние месяцы и противоположную реакцию осенью и весной.

норма 15 ынн 30 мин 1ч 4 ч

Рис. I. Распределение серотонина и катехоламинов в премедуллярных клетках тимуса у интактных и экспериментальных животных через 15, 30 мин, 1,4 ч после введения гидрокортизона (апрель)

0,06 0.05 0,04 0,03 -0,02 - -0.01 -■ о

0.031 0.029

норма

15 мин

□ серотонии Нкатехоламины

0,021

0,02

30 мин

I ч

0,023

-„■Т.-

0,007 0,007

■fit-

4 ч

Рис. 2. Распределение серотонина и катехоламинов в субкапсулярных клетках тимуса у интактных и экспериментальных животных через 15, 30 мин, 1,4 ч после введения гидрокортизона (апрель)

Через 1 ч после введения гидрокортизона как в апреле, так и в ноябре обращает на себя внимание реакция корковых тимоцитов. которые, в отличие от

других структур, отвечают на воздействие резким подъемом серогонина уже через 15 мин. После воздействия препаратом заметна некоторая разнонаправлен-ность изменения концетрации серотонина в этих клетках, однако через 1 ч после воздействия, по апрельским данным, уровень серотонина в них становится выше нормы.

Согласно работам школы Л.В. Девойно, тимоциг с высоким уровнем серотонина может быть квалифицирован как клетка-супрессор. Снижение содержания серотонина в люминесцирующих гранулярных клетках можно рассматривать как отдачу данного биоамина тимоцитам. В научной литературе (Maestroni Y.J., Conti А., 1994; O'Flynn R.P., de Расе D.M., 1987; Madden K.S. et al., 1994; Altenburg S.P. et al., 1997) о различном влиянии биоаминов на цитодифференци-ровку иммунокомпетентных клеток существует определенное положительное мнение, в том числе - о влиянии серотонина на дифференцировку Т-супрессоров. Через 4 ч после гидрокортизонового воздействия корковые тимоциты стабильно удерживают постоянный уровень серотонина.

3. Амнносодержащие структуры тимуса через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона

Эксперименты по изучению влияния гидрокортизона на амнносодержащие структуры тимуса в более поздние сроки с момента воздействия гидрокортизона были проведены в феврале и в июле.

Через 1. 3 и 7 сут после введения глюкокортикоида интенсивно реагируют мозговые и корковые тимоциты, супрессивная дифференцировка которых осуществляется, очевидно, за счет повышения уровня серотонина и гнетамина. Мы считаем, что гидрокортизон имеет в качестве исполнительных посредников се-ротонин и гистамин, которые повышаясь в корковых и мозговых тимусных лимфоцитах, обеспечивают их превращение в Т-супрессоры. Важно также, что в июле через 1 сут после гидрокортизонового воздействия иммуносупрессия осуществляется корковыми и мозговыми тимоцнгами. Через 3 сут супрессию, вероятно, осуществляют люминесцирующие гранулярные клетки премедуллярной

зоны тимуса за счет повышение уровня в них серотонина (рис. 3), а также корковые тимоциты за счет увеличения гистамина. Через 7 сут гистамин, возможно, не принимает участие в иммуносупрессии. Абсолютные цифры обеспеченности клеток биоаминами, полученные методом спектрофлуориметрии, не позволяют нам однозначно ответить на ряд возникающих вопросов. Например, мы не можем знать об истинных причинах повышения уровней супрессорных биоаминов. Также нельзя ответить на вопрос, что обеспечивает супрессорную специфику клетки - абсолютное количество биоамина или его доля в общем биоамшшом обеспечении клетки.

Исследованиями Б. ВгозюП" е1 а1. (1980) гистамин был квалифицирован как иммуносупрессорное биоактивное вещество. Поэтому необходимо отдельно рассмотреть роль данного биоамина в проведенных экспериментах.

1,6 1.4 1.2 1 0,8 ■ 0.6 -0,4 0,2 - 0,67 | 0.192 [ гМН 0.432 0,123 Г*™] . г^ и . рсеротонин □ ■сатехоламины В гистамин 0,324 0,366 г-1- ), 18 ^ т 3,452 Г р.22- «ь 1.42; Т

норма 1 сут 3 сут 7 сут Рнс. 3. Распределение серотонина, катехоламинов и гистамина в премедуллярных клетках тимуса у интактных и экспериментальных животных через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона (июль)

В опытах с суточными сроками после введения гидрокортизона гистамин-ная реакция тимусных структур меняется в зависимости от срока воздействия. В феврале через 1 и 3 сут после введения гидрокортизона гистамин сосредоточивается в премедуллярных и тучных клетках. Это напоминает значения шгтакт-ных животных, но на более высоком количественном уровне. Концентрации гистамина в мозговых и корковых тимоцитах не соответствуют февральской норме: у интактных животных уровень этого диамина высокий в мозговых тимоцитах, а

после введения гидрокортизона - в корковых тимоцитах. Если состояние преме-дуллярных и тучных клеток надо понимать как проявление их нормальной био-аминодепонирующей функции (Любовцева Л.А., 1980; Гордон Б.М., 1982, 1997), то реакцию тимоцитов - как проявление иммуносупрессорной дифференцировки под действием гидрокортизона. Через 3 сут после введения гидрокортизона ведущая роль в гистамшшой супрессии принадлежит снова корковым тимоцитам. В июле как депоненты гистамина резко проявляют себя только субкапсулярные ЛГК. К 7 сут концентрации гистамина во всех структурах вилочковой железы падают.

4. Исследование популяций тучных клеток тимуса

при введении гидрокортизона 1) методом окраски толуидиновым синим по Унна

Для определения степе™ метахромазии мукополисахаридного комплекса в тканях тимуса и для контроля состояния гепарина в тучных клетках в наших экспериментах использовался метод окраски срезов тимуса толуидиновым синим по Унна.

У шпактных животных в апреле и ноябре в дольках тимуса как в паренхиме, так и в септе встречаются ß-метахроматичные тучные клетки, что свидетельствует о содержании в этих клетках сульфатировашюго созревающего гепарина. Преобладают тучные клетки, имеющие ßj-метахромазию с фиолетовой цитоплазмой и гранулами красноватого оттенка. И лишь немногие клетки обладают ßi-метахромазией, характеризующиеся фиолетовой цитоплазмой с сульфатиро-ванным менее зрелым гепарином. По данным H.A. Юриной, А.И. Радостной (1977), мегахроматичная окраска тучных клеток зависит от степени сульфатиро-ванности гепарина. Поскольку в организме большая часть гистамина находится в связанном состоянии с гепарином (Horsfield Q.J., 1966), можно сказать, что у интактных животных данный диамин нейтрализован зрелым гепарином, о чем свидетельствует ß-метахромазия тучных клеток тимуса.

Через 30 мин и через 1 ч после введения гидрокортизона в дольках тимуса

не удалось обнаружить ни одной тучной клетки, имеющей р2-метахромазию. Вся популяция тучных клеток имела р|-метахромазию. В опытах с 30-мин воздействием гидрокортизона в паренхиме тимуса (в апреле) были обнаружены единичные ортохромные тучные клетки.

Изменения в тучных клетках тесно связаны с уровнем моноаминов в той ткани, где располагаются названные клетки. В многочисленных экспериментах Д.С.Гордон с соавт. (1982) с экзогенными моноаминами установили, что введение адреналина заметно снижает метахромазию в тучных клетках, причем гипердозы гормона вызывают абортивную дегрануляцию. Напомним, что жесткая взаимосвязь тучных клеток с биоаминами была замечена еще В.В.Виноградовым и Н.Ф.Воробьевой (1972, 1973). К 4 ч после воздействия гидрокортизоном число Рг-метахроматичньгх тучных клеток значительно возрастает. Это можно считать признаком того, что в окружающей ткани произошла нормализация концентрации катехоламинов. С учетом того, что через 15 мин после введения гидрокортизона в премедуллярных клетках понижается уровень катехоламинов, можно считать их источником появления катехоламинов в этом тканевом регионе (они отдают их). При этом повышение концентрации катехоламинов в самих тучных клетках не наблюдается, хотя можно было бы этого ожидать. Объяснить это можно только тем, что катехоламинь: при попадании в тучные клетки нейтрализуются гепарином (Гордон Д.С., 1982).

Итак, под действием гидрокортизона увеличивается число Рг метахроматичных форм тучных клеток, что свидетельствует о торможении процессов их дифференцировки и созревания гепарина.

По степени дегрануляции тучные клетки подразделялись на 4 группы: То, Ть Т2) Тз (Рогрев е1.а1., 1949). Колебания дегрануляции тучных клеток в ходе эксперимента с гидрокортизоном могут интерпретироваться следующим образом. По данным Д.П.Линднер с соавт. (1976, 1980), В.А.Бочкарева (1988), Т0-формы тучных клеток считаются молодыми, Т| - это спокойно работающие клетки, Тг - клетки с нормально идущей дегрануляцией без разрушения цнто-мембраны. Все эти формы в определенных соотношениях, в разные сезоны

имеют место при нормальных концентрациях моноаминов в окружающей ткани, где тучные клетки поглощают определенное количество биоаминов, нейтрализуя их преимущественно гепарином, а затем, в конце жизненного цикла, осуществляют экзоцитоз гранул наружу без разрушения цитомембраны. Клетки Т3-формы - это клетки с абортивной дегрануляцией. Она наступает, когда клетка переполнена одним из своих компонентов: или биоаминами, или гепарином, или вследствие наличия комплекса антиген-антитело на ее мембране (Любовцева Л.А., 1980, 1988, 1993, Афанасьев Ю.И., Юрина H.A., 1989). Вследствие резкого уменьшения популяции тучных клеток из-за абортивной дегрануляции, их число начинает увеличиваться за счет молодых форм (Бочкарев В.А., 1988).

В апреле зимоспящие животные переживают спонтанное пробуждение, которое в свою очередь сопровождается резкой сменой соотношения между биогенными аминами (Демин H.H. с соавт., 1988; Шестопалова Л.В., 1994; Гордон Б.М., Гордон Д.С., 1997). Введение гидрокортизона уже через 15 мин увеличивает объем нормальной дегрануляции, хотя и уменьшает число спокойно работающих тучных клеток. Через 30 мин популяция этих клеток пополняется молодыми формами. На этом же сроке (30 мин) снова сокращается доля спокойно работающих клеток и возвращается абортивная дегрануляция. Через 1 ч доля спокойно работающих клеток продолжает незначительно уменьшаться. Слабо, но все-таки уменьшается объем нормальной дегрануляции, и снова появляется абортивная дегрануляция. К 4 ч популяция тучных клеток пытается восстановить себя молодыми формами, но абортивная дегрануляция усиливается.

Именно двойное свойство тучных клеток: накапливать и выделять биоамины - обусловливает эту сложную их реакцию и одновременно иллюстрирует волнообразность всей реакции биоаминного компонента тимусных структур в целом на введение иммуносупрессора -гидрокортизона. Ее главной причиной можно считать процессы внутреннего перераспределения биоаминов между структурами тимуса. К вышесказанному следует добавить, что клетки-депоненты биогенных аминов (ЛГК, тучные клетки) в разные сроки эксперимента берут на себя донорские функции.

Таким образом, введение гидрокортизона способствует увеличению в тканях тимуса общего количества и изменению процентного соотношения тучных клеток, при котором из всех выделенных форм тучных клеток преобладают Рг метахроматичные тучные клетки и по степени дегрануляции - Т1-формы.

2) методом окраски альциановым синим н сафраннном по Спаисеру Согласно классификации В.А.Бочкарева (1988) тучные клетки мы подразделяли на следующие формы: 1) развивающиеся; 2) реализующие программу; 3) завершающие свою программу; 4) абортивнр гибнущие.

У интакгных и контрольных животных в тимусе преобладают второй и третий типы тучных клеток, имеющих альцианофильную цитоплазму с альциано-фильным ядром и альцианофильную цитоплазму с розовым сафранинофильным ядром, причем клеток, завершающих свою программу, гораздо больше. После введения гидрокортизона общее количество тучных клеток достоверно возрастает - от 38 до 49 в пяти полях зрения, в то время как в норме - не более 15. Гидрокортизон способствует изменению соотношения между выделенными четырьмя группами тучных клеток. Уже через 15 мин после введения гидрокортизона в небольшом количестве появляются молодые, развивающиеся тучные клетки с сафранинофильной цитоплазмой и сафранинофильным ядром. Максимальное количество тучных клеток, обнаруженных в септе, приходится на заканчивающие свою программу тучные клетки.

Подобное соотношение типов тучных клеток сохраняется и в другие ранние сроки воздействия гидрокортизона. И лишь через 4 ч после введения исследуемого глюкокортикоида соотношения между формами тучных клеток изменяются: развивающихся тучных клеток становится намного больше, на втором месте -реализующие свою программу тканевые базофилы. Через 4 ч. так же как и через 1 ч после введения гидрокортизона, в дольках вилочковой железы очень редко обнаруживаются заканчивающие свою программу и абортивно гибнущие тучные клетки.

Результаты экспериментов показывают, что на ранние сроки воздействия

гидрокортизоном тучные клетки тимуса реагируют увеличением общего количества молодых, развивающихся тучных клеток. Затем идет спад общего количества тучных клеток, появление абортивных форм и частично возмещающих их молодых клеток.

5. Корреляционный анализ бноаминов структур тимуса при воздействии гидрокортизоном.

С помощью корреляционного анализа были изучены связи между биоаминами внутри структур тимуса у интакгаых, контрольных животных и у экспериментальных животных в разные сроки после введения гидрокортизона. Сильная положительная корреляционная связь означает одновременное повышение концентрации каждого биоамина в корреляционной паре, связанное с определенным естественным фактором регуляции. Отрицательная корреляциош1ая связь также обусловлена регуляторным фактором, но при этом содержание одного биоамина возрастает при убывании другого. Известно, что отрицательные связи между биоаминами существуют в форме так называемой конкуренции за место депонирования (Alm Р.В., Ehinger, Falck В., 1962). Если норадренапин вытесняет се-ротонин из клетки, то адреналин этим свойством не обладает (Соловьев В.Н., 1965, 1971). Ранее упоминалось, что некоторые из биоаминов противоположно воздействуют на иммунный ответ, являясь в этом случае антагонистами.

Нами были изучены следующие пары нейромедиаторных биогенных аминов: катехоламины-серотонин (КА/СТ), катехоламины-гистамин (КА/Г). Также была рассмотрена пара серого нин-гистамин (СТ/Г), то есть биоаминов, являющихся синергистами по своему действию на иммунологическую реакцию. Данные корреляционного анализа представлены на рис. 4.

Анализируя рис. 4, можно заметить, что отрицательные корреляционные связи имеют место в норме только в тучных клетках, через 15 мин после введения гидрокортизона появляются в субкапсулярных клетках, через 30 мин - снова в тучных клетках, через 4 ч - в субкапсулярных ЛГК и тучных кетках. Возможно, это плавный переход к нормальному корреляионному статусу тучных клеток.

Рис. 4. Корреляционные связи между бноамнннымн парами в структурах тимуса интактных животных и через 15,30 мин; 1,4 ч после введения гидрокортизона, ноябрь.

Структуры Премедул- Субкапсу- Тимоциты Тимоциты Тучные

лярные лярные мозгового коркового клетки

Сроки клетки клетки вещества вещества

воздействия

Интакгные СТ СТ СТ СТ СТ

животные // \ // \. " \ // \\ // \

КА- Г КА- Г КА = Г КА= Г КА - Г

Гидрокорти- СТ СТ СТ СТ СТ

зон, 15 мин // \ / \ // \ // \ // \

КА------Г КА-----Г КА= Г КА - Г КА----Г

Гидрокорти- СТ СТ СТ СТ СТ

зон, 30 мин // \ // \ / \ // \ // \

КА- Г КА- Г КА- Г КА = Г КА-Г

Гидрокорти- СТ СТ СТ СТ СТ

зон, 1 ч / \ // \ // \\ // \\ // \

КА- Г КА- Г КА=Г КА = Г КА - Г

Гидрокорти- СТ СТ СТ СТ СТ

зон, 4 ч / \ // // \\ // \\ // \

КА----Г КА - Г КА = Г КА = Г КА -Г

связь в паре слабая или отсутствует; связь в паре умеренная, положительная; связь в паре умеренная, отрицательная; связь в паре сильная, положительная; связь в паре сильная, отрицательная;

Очень высокие корреляционные связи наблюдаются в мозговых и корковых тимоцитах в паре катехоламины-серотонин через 15 мин, 1 и 4 ч после введения гидрокортизона, в паре серотонин-гистамин также постоянно усиливаются связи в тимоцитах, особенно корковых.

Таким образом, введение гидрокортизона вызывает сложное перераспределение биоаминов между структурами тимуса. Наиболее устойчивы корреляци-

' Обозначения:

онные связи проявляют тимоциты, особенно корковые, в паре синергистов- им-муносупрессоров СТ/Г.

6. Серотоииновый индекс в структурах вилочковой железы при воздействии гидрокортизоном.

Значение коэффициента влияния того или иного нейромедиаторного амина на общий процесс не всегда совпадает с величиной содержания этого биогенного амина в структурах органа. Даже при нарастании концентрации амина влияние его на суммарную биоаминную обеспеченность органа может уменьшаться (Вайсфельд И.Л., Кассиль Г.Н., 1981). Соотношение серотонина и катехолами-нов (Л,) принято называть серотониновым индексом. Когда Л, больше единицы, можно говорить о преобладании в клетке серотонина. Если меньше единицы, то в такой клетке преобладают катехоламины. Такая информация может быть полезной, так как серотонин, как упоминалось ранее, имеет свойство супресси-ровать иммунный ответ, увеличивая число лимфоцитов-супрессоров (Девойно Л.В. и др., 1972, 1977, 1982, 1983).

У интактных животных серотоииновый индекс изменяется в зависимости от сезона года. Обращает на себя внимание очень высокий ^ мозговых и корковых тимоцитов в апреле и резкое его 'снижение в феврале и июле.

В апреле наиболее высокая доля серотонина выявляется в мозговых и корковых тимоцитах через 15 и 30 мин после введения гидрокортизона. Через 1 ч после введения гидрокортизона в мозговых и корковых тимоцигах доля серотонина снижается, а через 4 ч серотоииновый индекс в этих клетках становится ниже, чем у интактных животных. В ноябре в эти же сроки показатели ниже. Исключения составляют 30-минутные сроки воздействия, когда значения достаточно высокие. В премедуллярных клетках через 15 и 30 мин после введения гидрокортизона ^ повышается, но через 1 ч после воздействия гидрокортизоном показатель понижается до уровня интактных животных. Через 1 сут в июле в премедуллярных и субкапсулярных клетках тимуса идет постепенное снижение серотонинового индекса, но к 7 сут он восстанавливается до значений

интакшых животных. Резкое снижение -Ь происходит в корковых и мозговых тимоцитах, хотя корковые тимоциты через 1 сут после гидрокортизонового воздействия испытывают резкий подъем доли серотонина.

В феврале в премедуллярных клетках через суточные сроки воздействия немного возрастает. Однако в субкапсулярных клетках этот показатель по сравнению с нормой остается почти без изменений. В мозговых тимоцитах имеет место незначительное повышение через 1 сут и плавное снижете к 3 сут. В июле серотониновые индексы в структурах тимуса у экспериментальных животных в среднем выше, чем в феврале.

Предпринятое нами изучение серогонинового индекса дает некоторую дополнительную информацию, позволяющую решить ряд поставленных вопросов. По всей вероятности, снижение серого нинового индекса в той или иной тимус-ной структуре после введения гидрокортизона можно рассмотреть как уход серотонина из этой структуры, в то время как подъем серого нинового индекса -это явное увеличение доли серотонина в структуре. Возможно, депонирующие серотонин структуры вилочковой железы разновременно снабжают серотонином тимоцитарную паренхиму. Первыми нейромедиаторной супрессии подвергаются мозговые тимоциты через 30 мин после введения гидрокортизона. Эти клетки, по-видимому, получают серотонин из клеток-посредников - премедуллярных ЛГК. В суточные сроки гидрокортизонового воздействия, судя по серотонино-вым индексам, ведущая супрессивная роль переходит к корковым тимоцитам. Серотониновые индексы, также как и другие показатели, свидетельствуют о волнообразности процесса супрессии гидрокортизоном.

Получеш1ые нами данные в сопоставлении с данными научной литературы позволяют сделать ряд выводов.

ВЫВОДЫ

1. Обеспеченность нейромедиаторными биогенными аминами тимусных структур после введения гидрокортизона зависит от времени года с максимальными отличиями между весной и осенью.

2. В апреле через 15, 30 мин, 1 и 4 ч наблюдается подъем уровня серотони-на в люминесцирующих гранулярных клетках (ЛГК) премедуллярной зоны и корковых тимоцитах, в то время как в ноябре через 15 мин после воздействия концентрация серотонина высокая в корковых и мозговых тимоцитах, а также в субкапсулярных клетках, через 4ч- только в корковых тимоцитах.

3. В июле и феврале на введение гидрокортизона интенсивно реагируют мозговые и корковые тимоцшы путем повышения в них концентрации серотонина и гистамина через 1, 3 и 7 сут после воздействия.

4. Введение гидрокортизона приводит к изменениям в популяции тучных клеток тимуса, которые заключаются в увеличении численности тучных клеток, возрастании доли р|-метахроматичных, ортохромных и сафранинофильных форм, а также в снижении процента дегрануляции тучных клеток к 15, 30 мин, 1 ч с последующим увеличением к 4 ч после воздействия.

5. Корреляционные взаимосвязи между катехоламинами-серотонином и ка-техоламинами-гистамином сильно варьируют в структурах вилочковой железы в разные сроки воздействия гидрокортизоном; с увеличением сроков воздействия появляются отрицательные связи в большинстве биоаминсодержащих структур в паре катехоламины-гистамин, а в паре катехоламины-серотонин коэффициенты корреляции остаются относительно постоянными.

6. В мозговых и корковых тимоцитах на разных сроках эксперимента определяются высокие серотониновые индексы, свидетельствующие о большой доле серотонина в биоаминном обеспечении этих клеток.

7. Проведенное исследование с учетом литературных данных позволяет заключить, что гидрокортизон инициирует выход из люминесцирующих гранулярных и тучных клеток тимуса серотонина и гистамина, которые, в свою очередь, обеспечивают иммуносупрессорную направленность дифференцировки мозговых и корковых тимоцигов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации: 1.Порфирьева С.А., Сергеева В.Е., Алексеев В.А. Реакция биоаминосодер-

жащих структур тимуса и селезенки на введение гидрокортизона // Сборник трудов III съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995. - С. 195.

2.Порфирьева С.А, Сергеева В.Е. Люминесцентно-гистохимические исследования аминосодержащих структур тимуса при введении гидрокортизона // Международная конференция "Колоссовские чтения". - СПб., 1997. — С. 73-74.

3.Стручко Г.Ю., Порфирьева С.А., Бычкова О.В., Мохаммед Захид Адре-нергические структуры тимуса и селезенки после введения растворимого антигена и гидрокортизона // Гистохимический анализ изменчивости и регенерации тканей. - СПб., 1997. - С. 85

4.Сергеева В.Е., Кляшева Р.И., Александрова Н.В., Порфирьева С.А. Влияние гидрокортизона на содержание аминов в тимусе // Бюллетень экспериментальной биологии. - 1997. - №6. - С. 677-679.

5. Struchko G.Yu., Porfireva S.A., Sergeeva V.E., Bychkova O.V., Muchammad Zahid Bioamines ensuring of structures of thymus and spleen during experiments // Internat. J. of Inununorehabilitetion. - Israël: F.ilat, 1997.-P. 189.

6.Сергеева B.E., Смородченко A.T., Кириллов H.A., Порфирьева С.А. Влияние иммуномодуляторов на лимфоидные ткани И XVII съезд физиологов. - Рос-.тов-на-Дону, 1998. - С. 373-374.

7.Стручко Г.Ю., Мохаммед Захид, Порфирьева С.А., Агафонкин С.А. Реакция центральных и периферических органов иммуногенеза после введения человеческого иммуноглобулина // Тез. докл. конф. молодых ученых России с международным участием. - М., 1998. - С. 92-93.

8.Бочкарева А.Г., Олангин О.И., Порфирьева С.А., Стручко Г.Ю., Гордон Д.С., Сергеева В.Е. Участие макрофагов тимуса и селезенки в реакциях интенсивного и подавленного иммунитета // Тез. докл. II науч. конф. РААКИ "Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммуно-коррекции". - М., 1998. - С. 339.

9.Сергеева В.Е., Смородченко А.Т., Кириллов Н.А., Порфирьева С.А., Кузьмин С.П. Влияние гидрокортизона на нейромедиаторное обеспечение структур

лимфоидных органов // Клиническая аллергология и иммунология. - Минск; Витебск, 1998. - С. 275-276.

Ю.Порфирьева С. А., Сергеева В.Е. Иммунная супрессия на фоне введения гидрокортизона // Тез. докл. к науч.-пракг. конф. "Иммунодефицитные состояния в клинике внутренних болезней". - Чебоксары, 1999. С.64-65.

11.Смородченко А.Т., Кириллов H.A., Порфирьева С.А., Стручко Г.Ю., Петрова T.JI., Кузьмин С.П. Комплексное изучение аминосодержащих структур иммунных органов в эксперименте // Российские морфологические ведомости. - М.: Ижевск: Экспертиза, 1999. - №1-2,- С. 137.

Актуальность темы. Одной из основных задач современной иммунологии является выявление биологических механизмов иммуногенеза на клеточном и молекулярном уровнях. Иммунологи близко подошли к познанию механизмов распознавания антигенов, клеточных коопераций, синтеза антител, их структуры и функции (Брондз Б.Д., 1978, 1987; Петров Р.В., 1985, 1987; Кетлинский С.А. и др., 1992; Хаитов P.M. с соавт., 1995, 1996).

Известно, что в центральных и местных механизмах регуляции иммунной системы важную роль играют нейромедиаторы (Фролов Е.П. 1977; Гордон Д.С., 1978,1987; Корнева Е.А. и др., 1978, 1988, 1992; Денисенко П.П., 1980; Головастиков И.Н. и др., 1981; Сысоева JT.A., 1985, 1987, 1988; Вогралик М.В., 1988). Данные Л.В. Девойно (1972,1983), Г.В. Идовой и др. (1995,1997), Т.А. Павиной и др. (1998) указывают, что серотонинергическая система участвует в иммуносупрессии, а допамины стимулирующе влияют на продукцию лимфоцитов-хелперов. Наличие рецепторов к нейромедиаторам (гистамину, катехо л аминам, серотонину, ацетилхолину на лимфоидных клетках доказывает подчиненность иммунной системы нейрогуморальному воздействию (Варданян И.К., 1980; Варданян И.К. и др., 1980; Michel et. al., 1986; Брондз Б.Д., 1987).

Д.С.Гордон, В.Е.Сергеева, И.Г.Зеленова (1982), Л.А.Любовцева (1980, 1993) установили, что морфологическим субстратом, создающим биоаминное обеспечение микроокружения лимфоцитов тимуса, кроме адренергических нервных волокон, являются люминесцирующие гранулярные клетки (ЛГК) коркового вещества долек и тучные клетки. Для подтверждения возможного существования в ЛГК премедуллярной зоны

Анализ мировой научной литературы по указанной проблеме показал недостаточную изученность механизмов секреции биогенных аминов нейроэн-докринными клетками в органах иммунитета и взаимодействия их между собой. Явно отсутствуют комплексные исследования по влиянию гидрокортизона на биоаминный статус центрального органа иммунитета. В связи с вышеизложенным, актуальными являются морфологические и люминесцентно-гистохимические исследования аминосодержащих структур тимуса, их участия в реализации действия глюкокртикоида на лимфопоэз. Такие исследования позволят произвести качественные и количественные оценки влияния биоаминов тимуса на иммунные реакции и, соответственно, уточнить методы лечения глюкокортикоидами. Поэтому исследование морфофункционального состояния биоаминсодержащих структур тимуса после введения гидрокортизона имеет существенное значение для морфологии, иммунологии и нейроиммуномор-фологии.

Настоящее исследование является фрагментом комплексного исследования кафедры медицинской биологии и гистологии Чувашского государственного университета им.И.Н.Ульянова и входит в программу "Университеты России" - раздел "Гистохимия биогенных аминов, морофофункциональное состояние органов и тканей в норме и эксперименте" (№ госрегистрации 01.97.0007431)

Цель исследования. Проанализировать динамику нейромедиаторных биогенных аминов в структурах центрального органа иммунитета - тимуса при действии гидрокортизона.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить морфофункциональное состояние моно- и диаминосодержащих структур тимуса через 15, 30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона, учитывая сезон года.

2. Определить корреляционные связи между нейромедиаторными биогенными аминами в структурах тимуса у интактных, контрольных и экспериментальных животных с минутными и часовыми сроками гидрокортизонового воздействия.

Анализ отечественной и мировой научной литературы по указанной проблеме показал недостаточную изученность механизмов секреции биогенных аминов ней-роэндокринными клетками в органах иммунитета и взаимодействия их между собой. Явно отсутствуют комплексные исследования по влиянию гидрокортизона на биоаминный статус центрального органа иммунитета. В связи с вышеизложенным, актуальными являются морфологические и люминесцентно-гистохимические исследования аминосодержащих структур тимуса, их участия в реализации действия глюкокртикоида на лимфопоэз. Такие исследования позволят произвести качественные и количественные оценки влияния биоаминов тимуса на иммунные реакции и, соответственно, уточнить методы лечения глюкокортикоидами. Поэтому исследование морфофункционального состояния биоаминсодержащих структур тимуса после введения гидрокортизона имеет существенное значение для морфологии, иммунологии и нейроиммуноморфологии.

Настоящее исследование является фрагментом комплексного исследования кафедры медицинской биологии и гистологии Чувашского государственного университета им.И.Н.Ульянова и входит в программу "Университеты России" - раздел "Гистохимия биогенных аминов, морофофункциональное состояние органов и тканей в норме и эксперименте" (№ госрегистрации 01.97.0007431)

Цель исследования. Проанализировать динамику нейромедиаторных биогенных аминов в структурах центрального органа иммунитета - тимуса при действии гидрокортизона.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить морфофункциональное состояние моно- и диаминосодержащих структур тимуса через 15, 30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона, учитывая сезон года.

2. Определить корреляционные связи между нейромедиаторными биогенными аминами в структурах тимуса у интактных, контрольных и экспериментальных животных с минутными и часовыми сроками гидрокортизонового воздействия.

3. Исследовать серотониновый индекс в тимусных структурах через 15, 30 мин, 1 и 4 ч, а также через 1, 3 и 7 сут после введения гидрокортизона.

4. Проследить в популяции тучных клеток тимуса изменения содержания биогенных аминов и степени дегрануляции при различных вариантах эксперимента с введением гидрокортизона.

Научная новизна. Впервые проведен количественный анализ содержания се-ротонина, катехоламинов и гистамина в люминесцирующих гранулярных клетках (JTTK) премедуллярной и субкапсулярной зоны, в тучных клетках, в тимоцитах мозгового и коркового вещества долек, а также в адренергических нервных волокнах тимуса у животных с внутривенным введением гидрокортизона в дозе 10 мг/кг. Впервые определен серотониновый индекс в премедуллярных, субкапсулярных и тучных клетках, в тимоцитах мозгового и коркового вещества в первые минуты, часы, сутки после введения гидрокортизона; выявлены изменения в популяции тучных клеток вилочковой железы по содержанию биогенных аминов, по степени зрелости гепарина, по степени дегрануляции у экспериментальных животных после гидрокортизонового воздействия.

Практическая значимость. Полученные результаты расширяют представления о роли моно- и диаминосодержащих структур тимуса в механизмах регуляции иммуногенеза, в частности иммуносупрессии, в вилочковой железе, а также расширяют представление о роли серотонина, катехоламинов и гистамина в регулирующем действии глюкокортикоидов на клеточно-тканевом уровне. Эти результаты могут быть использованы врачами-иммунологами, аллергологами, эндокринологами при лечении аллергических и аутоиммунных заболеваний с применением глюкокортикоидных препаратов. Полученные данные используются в лекциях, читаемых на кафедре медицинской биологии и гистологии медицинского института при Чувашском государственном университете им.И.Н.Ульянова.

Положения, выносимые на защиту:

1. Введение гидрокортизона вызывает изменения содержания и перераспределение нейромедиаторов в биоаминосодержащих премедуллярных, субкапсулярных и тучных клетках тимуса, различные в зависимости от сезона года.

2. Введение гидрокортизона заметно влияет на морфологию тучных клеток, изменяя процентный состав подвидов в их популяции.

3. Высокие значения серотонинового индекса свидетельствуют о преобладании серотонина над катехоламинами в люминесцирующих биоаминсодержащих клетках тимуса при разных сезонных и временных вариантах введения гидрокортизона.

4. Нарушение корреляционных связей и появление отрицательных значений коэффициента корреляции свидетельствуют, что экзогенный гидрокортизон инициирует выход супрессорных биогенных аминов (серотонина и гистамина) из люминесцирующих гранулярных клеток тимуса, что, в свою очередь, обуславливает усиленную дифференцировку тимоцитов-супрессоров.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на I национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, посвященной современным проблемам клинической иммунологии и иммунофармакологии (Москва, 1997), на III международной конференции "Колосовские чтения - 97", посвященной 100-летию со дня рождения члена-корреспондента АН и АМН СССР Н.Г. Колосова (Санкт-Петербург, 1997), на П1 съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), на II национальном конгрессе Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, посвященном современным проблемам аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии (Санкт-Петербург, 1998), на XVII съезде физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998), на научно-практической конференции "Иммунодефицитные состояния в клинике внутренних болезней" (Чебоксары, 1999), на IV съезде Российских морфологов с международным участием (Москва, 1999).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, списка наиболее употребляемых со

выводы

Полученные нами данные в сопоставлении с данными научной литературы позволяют сделать ряд выводов.

1. Обеспеченность нейромедиаторными биогенными аминами тимусных структур после введения гидрокортизона зависит от времени года с максимальными отличиями между весной и осенью.

2. В апреле через 15, 30 мин, 1 и 4 ч наблюдается подъем уровня серото-нина в люминесцирующих гранулярных клетках (ЛГК) премедуллярной зоны и корковых тимоцитах, в то время как в ноябре через 15 мин после воздействия концентрация серотонина высокая в корковых и мозговых тимоцитах, а также в субкапсулярных клетках, через 4ч- только в корковых тимоцитах.

3. В июле и феврале на введение гидрокортизона интенсивно реагируют мозговые и корковые тимоциты путем повышения в них концентрации серотонина и гистамина через 1, 3 и 7 сут после воздействия.

4. Введение гидрокортизона приводит к изменениям в популяции тучных клеток тимуса, которые заключаются в увеличении численности тучных клеток, возрастании доли |31-метахроматичных, ортохромных и сафранинофиль-ных форм, а также в снижении процента дегрануляции тучных клеток к 15, 30 мин, 1 ч с последующим увеличением к 4 ч после воздействия.

5. Корреляционные взаимосвязи между катехоламинами-серотонином и катехоламинами-гистамином сильно варьируют в структурах вилочковой железы в разные сроки воздействия гидрокортизоном; с увеличением сроков воздействия появляются отрицательные связи в большинстве биоаминсодер-жащих структур в паре катехоламины-гистамин, а в паре катехоламины-серотонин коэффициенты корреляции остаются относительно постоянными.

6. В мозговых и корковых тимоцитах на разных сроках эксперимента определяются высокие серотониновые индексы, свидетельствующие о большой доле серотонина в биоаминном обеспечении этих клеток.

7. Проведенное исследование с учетом литературных данных позволяет заключить, что гидрокортизон инициирует выход из люминесцирующих гранулярных и тучных клеток тимуса серотонина и гистамина, которые, в свою