Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфологические изменения нейроструктур эфферентной части рефлекторной дуги при одноэтапном удлинении голени методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза аппаратом Илизарова
Автореферат диссертации по медицине на тему Морфологические изменения нейроструктур эфферентной части рефлекторной дуги при одноэтапном удлинении голени методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза аппаратом Илизарова
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ИРОМЫПКБШОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИШШ ГОСУДАРСТВЕННЫ»! МЕДИЦИНСКИЙ КШТИТУТ 1 Б 0/1
< . На правах рукописи
УЖ 591.4:616. 832/. 833:616.5/. 001. 5-007.64-089. 818.3
КУДРЯВЦЕВА Ирина Петровна
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ КВШЕНКЯ НЕЙРОСГРУКТУР ЭКЕРЕНТНОП ЧАСТИ РЮЛЕКТ0Р1ЮЛ ДУГИ ПРИ ОДНОЗТАШОИ УДЛИНЕШ! ГОЛЕНИ МЕТОДАМИ НОШ- И ЕШШАЛЬКОГО ДВТРДКЦИСШЭГО ОСТЕОСШГГЕЗА АППАРАТОМ ИЯКЗАРОМ (эксперк!.!31гталько-1лзрфзлогическое исследован®)
14.00.15- патологическая анатомия-
Автореферат диссертации на соискание ученой степени. кандидата медицинских нал?
Челябинск. 1995
Работа выполнена в Уральском научно-исследовательском институте травматологии и ортопедии
НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: член-корр. Академии технологических наук Российской федерации, доктор медицинских наук, профессор Л. Н. КОЧУ ТИНА
ОИЩИАЛЬНЬЕ ОППОНЕНТЫ:
доктор медицинских наук, профессор И А. С,ШОХИН кандидат медицинских наук Л. Е АЕРАМОВСКАЯ
ВЕДУЩЕЕ УЧРЕДЦЕНИЕ: Центральный НИИ травматологии и ортопедии им. а Н. Приорова
Защита состоится ".. "...................года •
на заседании Диссертационного совета К 084.04.04. при Челябинском государственной медицинском институте Адрес: 454092, г.Челябинск, ул.Воровского, 64.'
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского государственного медицинского института.
Автореферат разослан "__1935 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета,
кандидат медицинских наук Л. Ы. СИНЕЛЬНИКОВА
Актуальность темы. Проблема коррекции укорочений конечностей продолжает оставаться- актуальной в ортопедии и травматологии. Введение в практику метода Илизарова расширило границы знаний о компенсаторш« и приспособительных процессах в тканях опорно-двигательного аппарата (Г. А. Илкэаро. , 1983).
Д. С. Саркисов (1977) указывал, что изучение любой проблемы связано с изучением вопросов адаптации, взаимодействия различных биологических процессов, компенсации наруоенных функций, предс-• тавлящих собой частные вопросы проблемы гомеостаза.
Изучение гистогенеза ряда тканей позволило уточнить структурно - функциональную) организацию клеток, составляющих линию цитодифференцировки, ка основе чего получило развитие учение о клеточных дифферонах (Н. Г. Хрущэв, 1976; А. А. Клигюв, 1982,1990; Vogel, 1969).
Изучение развития тканей нервной системы в фало-и онтогенезе, показывает, что один из кагйолее характерных морфологических признаков этого развития является ослояиешю связей нервных клеток между собой и с иякервируемши-клеткакя других систем: тканей (Д.С.Саркисов,1987). Полнота регенерации тканей нервней системы при удлинении голени определяется оптишльным соотношением процессов пролиферации и диф&еренцирозки в сспоннсм клеточном диф-фероке.
В настоящее время особую актуальность для практической глицины приобретают новые данные по регенерации, тканей нервной системы по ходу рентной части рефлекторной дуги при дозироЕач-ном удлинении, происходя^ в ней меетканевые взаимодействия. Это важно не только с точки • грения теоретического обоснования методов дистракционного остеоскптеза, но и при выборе тактики оперативного вмешательства.
Длл коррекции больше укорочений в целях сокраадэккя продолжительности лечения Г. А. Илизаров в 1977 году предложил метод би-локального дистракционкого остеосинтеза.
Одной из проблем, с которой сталкиваются хирурги при лечении больных методом монолокальниго дифракционного остеосинтеза, является возникновение нейроциркуляторяых расстройств в тканях оперированной конечности (А. В. Воронцов, IL IL Соболев, 1982; С. R Введенский, 1983; Г. А. Котельников, 1983).
Ряд авторов в эксперименте на хивотных, которым удлиняли гоне вдость до 40Х исходной длины ягодой МЭНОЛОВОЗЬЯОГО дистракци-
онного остеосинтеза. выявили наличие дистрофических, некротических и регенераторных процессов в сегментах спинного мозга и нервных стволах (R R Мажара, 1974; Ы. М. Щудло, 1983; А. И. Иванова. 1985; Г. А. Илизаров и соав., 1986; Г.С.Сафонова, ЕИКаляки-на. 1988).
Основной задачей проведенных исследований явилось выявление влияния тейпа дистракции на состояние нейроструктур рефлекторной дуги и рекомендации поэтапного проведения удлинения.
Вопрос о мэрфоадаптацк пых изменениях тканей нервной системы при билокальном дистракционном остеосинтезе остается неизученным.
Р. ЕЯеневская (1974) указывала на то, что нервные окончания влияют на пластический процесс в скелетной мышечной ткали. Вопрос о взаимодействии мышечной и нервной тканей при дистракции недостаточно полно освещен в литературе. Данные о межгканевых взаимодействиях в условиях применения Оилокаяьного дистракцион-ного остеосинтеза отсутствуют полностью.
Морфологические проявления адаптации тканей нервной системы на дозированное растяжение при однозтапном удлинении голени на БОХ ее исходной длины методом билокального дистракционного остеосинтеза, а также в плане сравнения с изменениями в них при монолокальном дистракционном остеосинтезе остаются неизученными и являются актуальной медико-биологической проблемой.
Цель настоящего исследования. Выявление в эксперименте динамики нейрогистологических изменений структур эфферентной части рефлекторной дуги (нейрон, аксон, моторные нервные окончания) при удлинении голени методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза аппаратом Илизарова..
Для достижения указанной цели было необходимо решить следующие задачи:
1. Изучить в эксперименте динамику морфологических изменений L(6,7)-S(l) сегментов спинного мозга при удлинении голени на 50¿ ее исходной длины методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза аппаратом Илизарова.
2. Изучить в эксперименте динамику морфологических изменений болысеберцового нерва при удлинении голени на 5.0% ее исходной длины методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза аппаратом Илизарова.
3. Изучить в эксперименте динамику морфологических изменений
моторных нервных окончаний голени при удлинении ее на ЬСХ. от исходной длины методами моно- и билокального дистракционного осте-осинтеза аппаратом Илизарова.
4. Сравнить морфоадаптационные изменения по ходу рефлекторной дуги при удлинении голени животных на 50Х ее исходной длины методами моно- и билокального дистракциснного остеосиятеза аппаратом Илизарова.
Научная новизна. Впервые проанализированы морфоадаптационные изменения эфферентной частя рефлекторной дуги при билокальном дистракционном остеосиятезе и проведено морфологическое сравнение его с методом монолокального дистракционного остеосинтеза при большом (502) удлинении голени аппаратом Илиоарова
В динамике развития реактивных измен шй и процессов репара-тивной регенерации нейрострукгур под воздействием дозированного растяжения при различных .методах дистракционного остеосинтез' показано взаимодействие основных клеточных дифферонов нервной,' соединительной и скелетной мышечной тканей. Прослежены межтканевые взаимодействия.
Впервые выявлено более раннее • образование нервно-мышечных структур яр:-! билокальном дистракционном остеосиятезе-(на стадии рмировапия шосишластов), в отличии от иэиолокального, при котором нервные. волокна концевых аппаратов аксонов наблюдается на стадий формирования миотуб.
Впервые мзтодои морфбметрии показана корреляционн&я зависимость между количеством измененных мэтонейронов, миелгагавых Нервных волокон, фибре б ластов в зпииеврии и величиной удлинения голени.
Впервые установлено, что условия билокального дистракционного остеосинтеза с двумя метаэпифизаркыми зонами "натяжения создают благоприятные условия для роста и регенерации нервных волокон, более полноценное восстановление иейроструктур. для сохранении тканевого гомеостаза.
В результате проведенного экспериментального исследования с применением комплекса современных методов, включащйх электронную трансмиссионную микроскопию,. морфоштриз, получение дакгае могут служить теоретическим обоснованием метода билокального дистракционного остеосинтеза
-
Положения, выносимые на защиту:
1. Морфологические проявления адаптации тканей нервной системы к дозированному растяжению характеризуются гетерохронностыа. Увеличение числа измененных мотонейронов, фибробластов зпинев-рия, уменьшение количества миелиновых волокон находится в корреляционной зависимости от величины удлинения голени. В условиях монолокального дистракционного остеосинтеза преобладают дистрофические и очаговые некротические изменения нейроструктур эфферентной части рефлекторной дуги, которые сохраняются через полгода после прекращения растяжения.
2. При Оилокальном дистракционном остеосинтеае явления репа-ративной регенерации преобладай!' над дистрофическими. В условиях билокального дистракционного остеосинтеза происходит более раннее образование нервно-мышечных структур - моторные нервные окончания начинают формироваться вблизи миосимпластов. а при монолокальном - возле миотуб. В периоде фиксации голени аппаратом происходит увеличение количества миелиновых нервных волокон, уменьшение числа измененных мотонейронов. Через полгода после прекращения растяжения в условиях билокального дистракционного остеосинтеза в нейрострукгурах сохраняются лшиь явления раздражения.
3. Воздействие дозированного растяжения при билокальном дистракционном остеосинтеае с наличием проксимальной и дистальной метаэпифизарных зон натяжения определяет рост нервов в длину, сходный с их ростом в онтогенезе. Дозированное растяжение при билокальном дистракционном стеосинтезе, в отличие от монолокального, создает наиболее оптимальные условия для взаимодействия основных клеточных дифферонов нервной, соединительной и скелетной мышечной тканей, в результате чего реализуются потенциальные регенерационные возможности тканей нервной системы
Практическая значимость работа В настоящем исследовании показано, что при билокальном дистракционном остеосинтезе, в отличии от монэлокального, менее выражены дистрофические изменения в тканях нервной системы, преобладают явления репаративной регенерации в процессе дистракции и особенно после ее прекращения. Полученные данные позволят практическому врачу понять возникающие в тканях нейротрофические расстройства и правильно распределить функциональную нагрузку на оперированную конечность.
Выявленные особенности регенерации нейроструктур при било-
калькой дистракционном остеосинтеве свидетельствуют о возможности применения этого метода при лечении больных со средними (30%) и большими (50%) укорочениями конечности.
Полученные результаты морфоадаптационных изменений в эфферентной части рефлекторной дуги могут служить теоретическим обоснованием метода билокального дистракционного остеосинтеза и позволяют рекомендовать его для более широкого использования в ортопедической практике.
Настоящее исследование направлено на дальнейшее изучение и оптимизацию условий применения методов дистракционного остеосинтеза Результаты исследования особенностей регенерации тканей нервной системы при дозированном растяжении голени используются в лекциях на курсах усовершенствования врачей в Уральском НИИ травматологии и ортопедии и в процессе преподавания раздела "Компенсаторно-приспособительные процессы" на соответствующих курсах Уральского государственного медицинского института
Апробация работы и публикации результатов исследования.
Основные положения работы обсуждены на III Международной конференции по усовершенствованию аппаратов и методов внешней фиксации (Рига, 1989), VIII Всесоюзной школе по биологии опорно-двигательного аппарата (Киев, 1990), Международном симпозиуме (Курган, 1991, 1993), научных конференциях (Курган, 1991; Казань 1991, 1992, 1994; Екатеринбург, 1994), итоговых сессиях Уральского НИИ травматологии и ортопедии (Екатеринбург, 1989, 1991, 1993), конференции Областной ассоциации патологоанатомов Свердловской области (Екатеринбург, 1994).
По теме диссертации опубликовано 10 работ (перечень работ приведен в конце автореферата).
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 227 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения, выводов, заключения, библиографического указателя, включающэго 255 отечественных и 99 иностранных источников. Работа иллюстрирована 89 микрофотографиями. Цифровой материал сгруппирован в 7 таблиц, текстовая часть составляет 118 страниц.
- 8 -
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЕ
Для проведения эксперимента были использованы 54 взрослые беспородные собаки весом 16-50 кг с длиной голени 17-19 см. Удлинение голени осуществляли до 50% ее исходной длины с применением методов монолокального и Оилокального дистракционного осте-осинтеэа аппаратом Илизарова. Были выполнены 2 серии опытов.
В первой серии (30 собак) удлинение голени проводили методом монолокального дистракционного остеосинтеза после компактотомии большеберцовой кости на уровне ее средней трети с постоянным темпом дистракции 1 мм в сутки. Сроки наблюдения в период удлинения составили от 10 до 90 дней, а после 90 дней растяжения (50% удлинения сегмента конечности), 90 и 180 дней фиксации голени в аппарате Илизарова.
Во второй серии эксперимента (21 собака) удлинение.голени проводили методом билокального дистракционного остеосинтеза. Ком-пактотомию большеберцовой кости производили в верхней и нижней трети на уровне мышечно-сухожильных соединений. Удлинение голени осуществляли с постоянным темпом дистракции 1 мм на каждом уровне, то есть при суммарном удлинении 2 мм в сутки. Сроки наблюдения составили от 5 до 45 дней дистракции. Величина удлинения после 45 дней растялйиия составила 50% от исходной длины сегмента конечности, то есть достигнутое удлинение было- аналогично первой серии опытов. Сроки наблюдения после 45 дней дистракции составили 90 и 180 дней фиксации голени в аппарате Илизарова
Бо Бремя выполнения эксперимента осуществляли рентгенологический контроль темпа дистракции, достигнутого удлинения, регенерации костной ткани. •
Контролем служили 3 животных, содержавшихся в аналогичных условиях, с аппаратом на голени, с кортикотомией без дистракции.
Дистракции начинали на 7 дней после операции у всех экспериментальных животных.
Оперативное вмешательство у животных происходило под внутри-ренным наркозом тиопенталом натрия из расчета 50мг на 1 кг веса аивотного( *). •
Шсде эвтаназии животных летальной дозой 10% раствора -шопе ¡.тала натрия извлекали экспериментальный материал: сегменты
* Операции проводил младший научный сотрудник А. И. Раутов.
Ц6,7)-Б( 1) спинного мозга, болыпеберцовый нерв, фрагмент икроножной мышцы на уровне середины брюшка Гистологический материал фиксировали в 10% нейтральном форма че или растворе Карнуа Затем вырезали по определенной схеме. Из материала спинного мозга вырезали поперечные и продольные срезы, обрабатывали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Затем производили гистологическое окрашивание гематоксилин-эозином, по ван-Гизон, Нисслю, Рассказовой.
Больпеберцовый нерв отсепаровывали соответственно' зонам дистракции (места формирования костнс. о регенерата) и зонам, прилегающим к ним, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, производили гистологическую проводку, заливку в парафин или делали срезы на санном микротоме и криостате. Гистологические препараты болыпеберцового нерва окрашивали гематоксилин-эозином и по ван -Гизон, Билыювскому-Гросс, Рассказовой.
С целью изучения моторных нервных окончаний использовали импрегнацию продольных срезов икроножной мышцы на уровне середины брюшка методом Бильшовского-Гросс.
Материал для электронномикроскопического исследования измельчали бритвой и фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида на 0,1м фосфатном буфере (рй- 7,2- 7,4) с последующей дофиксаци-ей в IX растворе осьмиевой кислоты.' После проводки по методике Г. Гайера (1974) материал заливали в аралдит, изготавливали полутонкие и ультратонкие срезы на ультратоме УМГП-б, контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу, затем просматривали ни электронном микроскопе ГШ-100.
С целью изучения адаптационных изменений в нервной ткани проводили гиетометрическое исследование на гистотопографических препаратах поперечного среза сегментов спинного мозга и больше-берцового нерва удлиняемой голени в различные периоды дистракционного остеосинтеза с помощью окулярной измерительной сетки точечным методом А. Д. Глаголева (1933). На гистотопографических препаратах поперечных срезов спинного мозга толщиной 5 мк определяли процентное соотношение измененных и неизмененных мотонейронов. С целью изучения изменений в Солыпеберцовом нерве на различных этапах удлинения подсчитывали процентное количество миелиновых еолокон в нервном стволе, количество фибробластов в зпиневрии (Г. Г. Автандилов. 1980).
Морфологические данные подвергались вариационно-статической обработке с применением непараметрического критерия "U" Вилкок-соиа-Манна-Уитни. Корреляционный анализ полученных данных проводили с величиной достигнутого удлинения конечярсти. Цифровые данные обрабатывали на lBM.no стандартной программе и вычисляли коэффициент парной корреляции, что позволило оценить динамику изменений нейроструктур на различных этапах эксперимента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОВСУВДЕНИЕ
В настоящем исследовании, у»й в начале периода дистрагадаи появлялись явления раздражения нейроструктур, как компенсаторно-приспособительная реакция на действие, фактора растяжения. Эти явления' проявлялись преимущественно на знутригслеточном уровне в виде расширения цистерн эндоплазматической сети, скоплений на ее мембранах рибосом, увеличения в размерах аппарата Гольджи и межкриетных пространств митохондрий.
По мере удлинения голени эти явления перерастали в дистрофические и очаговые некротические процессы. На уровне электронной (¿шсроскопии-это увеличение перинуклеарного пространства, вакуолизации митохондрий, разрушение их крист, появление мембранных клубков, миелиноподобных телец, лизосом, нарушение периодичности миелина, отоплений шкровезикул в лешоцитах и эндотелиоцитах. Подобные изменения на ультраструктурном уровне по данным ряда исследователей (а. А. {¿аника, 1976; Д.С. Саркисов, R R Вгюрин, 1976) трактуется. как. морфоадаптационные.
На уровне световой микроскопии выраженные дистрофические процессы о нервной ткани возникали по достижении 27% удлинения голени в обеих сериях эксперимента и увеличивались к 50% удлинении. в спинном мозге они выражались в виде округления тел мото-иейронов, смещении ядрышка и ядра к периферии клетки, перицеллю-дярного и периваскулярного отека, утолщения всех сдоев стенок сосудов кровеносного русла, просветления кариоплазмы, неравномерного распределения вещества Ниссля.
Установлений, что при различных патогенных воздействиях на пани нервной системы меняется зффекторная иннервация кровеносных сосудов, приводящая к склерозированию их стенок (А. А. Ыанина, 1У71; Г. Н. Крыжановский, EIL Туманов, Г. М.Графова, 1973; Е. П. Ыельман и соавт., 1981).
В Курганском НИИ "ВТО" отмечали влияние дозированного растяжения (до 70%) на нарушение иннервации стенок сосудов микроциркулярного русла с последующими их изменениями (Г. А. Илизаров и соавт., 1984).
В растоящем исследовании были отмечены изменения кровоснабжения тканей нервной системы под воздействием дозированного растяжения в условиях мэно- и билокального дистракционного остео-синтеза
В условиях применения дистракционных аппаратов на ткани нервной системы оказывает влияние комплекс факторов - сама дист-ракция, гипоксия и гипокинезия.
В настоящем исследовании было обнаружено, что в начальном периоде дистракции наблюдалось усиление сосудистой проницаемости : появлялся отек в периваскулярных пространствах, диапедез эритроцитов и других форменных элементов крови. Венозное полнокровие приводило к компенсаторно-приспособительнай перестройке-микроциркуляторного русла, увеличению количества расширенных, заполненных плазмой капилляров, что можно рассматривать как признак гипоксии. Подобные изменения сосудов микроциркуляторного русла наблюдали в своих исследованиях И. К Есипова (1.982) и К К Куприянов (1986) и расценивали их также как следствие гипоксии.
По мере удлинения конечности, вследствии усиления перестройки микроциркуляторного русла тканей нервной системы увеличивалось Еенозкое полнокровие-, затем происходила редукция части капилляров. Последнее явление преобладало в условиях применения метода юнолокального дистракционного остеосинтеза, в отличии от-билокального, вероятно за счет более продолжительного воздействия фактора растяжения. Аналогичные изменения наблюдал Н. Е Мажара (1974) яри удлинении голени до 25% ее исходной длины методом монолокального дистракционного остеосинтеза
К окончании периода дистракции, преимущественно в кровеносных сосудах эшшеврия и окружающих тканях вслед за- редукцией части капилляров, дистрофией эндотелиоцитов, происходило утолщэ-ние мышечной оболочки артерий с последующим склерозированием стенок артерий и вен.
При монолокальком дистракционном остеосинтезе эти изменения носили распространенный характер и к окончанию эксперимента полного восстановления кровоснабжения большеберцового нерва не происходило.
При билокальном дистракционном остеосинтезе в этот срок исследования лишь в некоторых кровеносных сосудах эпиневрия отмечалось склерозирование стенок артерий и вен.
Строение кровеносных сосудов спинного мозга восстанавливо-лось в обеих сериях эксперимента, т.к. явлений склерозирования их стенок не наблюдалось.
Такие изменения кровеносного русла вероятно возникали в результате дистрофических и очаговых некротических изменений нейроструктур при дозированном растяжении, причем, чем длительнее это воздействие, как при монолокальном дистракционном остеосинтезе, тем распространеннее и выраженнее подобные изменения.
Таким обрагом, изменение стенок кровеносных сосудов тканей нервной системы в настоящем исследовании следует расценивать как компенсаторно-приспособительную реакцию к изменившимся условиям кровотока и снижению влияния эфферентной иннервации.
Наблюдавшаяся в настоящем исследовании пролиферация фиброб-ластов взаимосвязана с изменениями сосудистого русла большебер-цового нерва и окружающих его тканей.
Изменения соединительнотканных элементов ободочек большебер-цового нерва при дозированном растяжении, по-видимому, происходит за счет того, что фибробласты йачинаят усиленно синтезировать коллаген в условиях возникшей гипоксии, происходит фибриллогенез с умеренной гиперплазией клеток, изменяется соотношение волокнистых структур и клеток (в сторону увеличения первых), рыхлая соединительная ткань превращается в фиброзную.
Г. И. Илизаров (1970) в условиях применения дистракционных аппаратов выявил общебиологическое свойство тканей отвечать на возникающее в них дозированное напряжение растяжения, регенерацией и ростом (эффект Илизарова).
При удлинении голени методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза результаты исследования свидетельствуют о пролиферации клеток фибробластического дифферона соединительной ткани эпиневрия. При электронной микроскопии в фибробластах были выявлены ультраструктурные признаки их функциональной активности (расширение эндоплазматического ретикулума, гиперхромные ядра с большим количеством ядрышек за счет перераспределения хроматина). После прекращения растяжения, в периоде фиксации голени в аппарате, происходили морфоадаптационные изменения сосудов мик-роциркуляторного русла, способствовавшие улучшению кровоснабже-
ния тканей нервной системы, скелетной мышечной ткани и как следствие- снижение пролиферативкой активности фибробластов и их диф1еренцировке. Вероятно, что этому процессу способствовало и то, что по мере накопления фибробластов, рост их тормозится в результате остановки деления зрелых клеток, перешедших к биосинтезу коллагена, истощении ростковых факторов фибробластов и выработки ими ингибиторов роста кейлонов (Ю. А. Романов. С. А-Кетлинский, 1984; А. Б. Шахтер и RВ Серов, 1991).
Проведенное мэрфометрическое исследование показало, что число фибробластов в эпиневрии болыэеберцового нерва и величина удлинения голени находятся в высокой корреляционной зависимости меаду собой. Установлено, что в условиях применения метода монолокального дистракционного остеосинтеза ( теш дистракции 1 мм в сутки) к окончанию растяжения число фибробластов в эпиневрии увеличивалось до 326 (0,01< р< 0,026) при.показателе в контрольной серии - 120. Коэффициент корреляции составил 0,96.
При билокальном дистракционнои остеосинтеае (суммарный суточный темп 2, мм) число фибробластов в этот срок исследования составило 260 ( 0,01<р<0,025). Коэффициент корреляции равен 0,98.
После окончания дистракции, в период фиксации голени в аппарате, происходила дальнейшая диффереицкровка фибробластов в эпиневрии.
Таким образом, в условиях применения билокального дистракционного остеосинтеза пролиферация соединительнотканных клеточных элементов ниие, при монолокааьЕои.
В условиях применения аппаратов дистракционного остеосинтева нейроструктуры эфферентной части рефлекторной дуги испытывали влияние частичной гипокинезии.
В нашем эксперименте изменений кейроструктур сп. того мозга и аксона, видимых на светооптическом уровне, в контрольной группе животных выявлено не было. Влиянию гипокинезии подвергаются в первую очередь нейроны. Ультраструктуркь» изменения в них были обнаружены в начальном периоде дистракции в виде неравномерного распределения хроматина в ядре, небольшого количества рибосом на мембранах эндоплазматической сети, набухания митохондрий. Эти данные подтверждают исследования ряда авторов, которые отмечали, что фивиологическая пассивность животных в результате ограничения их двигательной реакции приводит к снияенив структурно- функциональной активности органелл нейронов (А. А. Мамина, 1976;
Р. Л. Насыров и соавт.. 1982). В данном исследовании выраженных признаков изменения нейроструктур под влиянием гипокинезии обнаружено не было. Стимулирующее влияние напряжения растяжения, нарушение кровоснабжения и явления гипоксии при дистракции создают условия для пролиферации клеточных элементов, изменения взаимоотношений клеточных дифферонов тканей нервной системы. Распрост- * ранение дистрофических и очаговых некротических изменений аксонов сопрововдались пролиферацией фибробластов в эпиневрии. На дистрофические изменения в нейронах реагировали глиальные элементы, наблюдалось увеличение количества эпендимоцитов. На появление глиальной реакции (скопление клеток нейроглии вокруг нейронов) при наличии ретроградных изменений в нейроне исходящих от повреждения аксонов указывал ряд исследователей (Э. И Бакалски и Е. И. Рожков/ 1976; Г. И. Бородаевская и А. Ф. Никифоров, 1976; А. И. Иванова, 1985; Е Н. Квитницкий-Рымэв и соавт. ,1990; T. Kitamura, 1980).
Дистрофические изменения ыотонейронов в условиях применения метода монолокального дистракционного остеосинтеза были значительно выраженнее, чем при билокальном дистракционном остеосин-тезе. Они характеризовались нарастанием числа измененных нейронов. К окончанию эксперимента нейроны имели различный размер. Большинство мотонейронов были меньшего, чем в норме размера, но наряду с ними встречались и гипертрофированные нейроны.
В условиях применения обоих методов начальный период дист-ракцил характеризовался неравномерной импрегнацией нервных волокон в больоеберцовом нерве, чэткообразными утолщениями миелина, набуханием кейрофибрилл. Надобные гистологические изменения можно трактовать как «арфаадаптационные. Нате наблюдение подтверждает высказывание А. С. Симпсона (1991) о том, что при удлинении нервного ствола на 10£ от первоначальной длины нервы функционируют нормально. Дистрофические и очаговые некротические изменения нервных волокон бояьпеберцового нерва имели наибольшую выраженность в сегментах, на уровне формирующегося в процессе дистракции костного регенерата Эти изменения появлялись на 30 лень дистракции, распространялись при монолокальном дистракционном остеосинтезе по всему нервному стволу к 60 дню дистракции и достигали наибольшей выраженности к 90 дням дистракции.
В условиях бшгокалького дистракционного остеосинтеза при большом одооэтапном удлинении голени первые признаки дистрофии
были обнаружены на 15 день дистракции. Наиболее-распространенные дистрофические и очаговые некротические изменения большеберцово-' го нерва появлялись к 25 дню дистракции на дистальном и проксимальном уровнях удлинения, причем в дистальной зоне эти явления были выражены сильнее.
К 45 дню дистракции (окончание растяжения) дистрофичес;сие и очаговые некротические изменения распространялись по всему стволу большеберцового нерва. Однако они были менее выражены, чем к окончанию дистракции в условиях применения метода монолокального дистракционного остеосинтеза. Этот факт подтверждается тем, что при билокальном дистракционном стеосинтезе в этот период исследования оставалось несколько больше миелинизированных нервных волокон, чем при монолокалыгам дистракционном остеосинтезе. Количество миелинизированных нервных волокон при монолокальном дистракционном остеосинтезе составляло 55,4% (0,01<р<0,025), а при билокальном-57,7% (0,01<р<0,025). Показатель контрольной се-рии-82,4%.
После прекращения растяжения и 160 дней фиксации голени в аппарате дистрофические и очаговые некротические изменения нервных волокон Уменьшались. При монолокальном дистракционном остеосинтезе можно было наблюдать отдельные нервные волокна с признаками уоллеровской дегенерации, а в условиях применения метода билокального дистракционного остеосинтеза в .зонах дистракции' сохранялись явления раздражения (неравномерная имп. згнация, чет-кообразные утолщения миелиновой оболочки), в междистракционных вонах гистологическая картина большеберцового-нерва при светооп-тическом исследовании практически не отличалось от нормы.
В концевых аппаратах в условиях применения как метода моко-локального, так и билокального дистракционного остеосинтеза, ужй в начальный период дистракции появлялись реактивные изменения моторных нервных окончаний и прилежащих мышечных волокон, которые переходили затем в дистрофические к 30 дню дистракции. В мышечных волокнах появлялись очаги коагуляционного некрова, усиливалась пролиферация фиброблаетов межмышечной соединительной •гкани.
К окончанию периода дистракции, при моколокальном дистракционном остеосинтезе (90 дней) большинство претерминальных и терминальных волокон были представлены продуктами распада миелина. . В условиях применения метода билокального дистракционного остео-
синтеза (45 дней) подобных структур и "пустых" бляшек баю значительно меньше. В большенстве мышечных волокон, при билокальном дистр&кционком остеосинтеае, в этот период наблюдались изменения в виде "песочных часов", а при монолокальном дистракционном ос-теосинтезе- атрофия мышечных волокон и очаги некроза в некоторых иэ них.
После окончания дистракции и 180 дней фиксации голени в аппарате при монолокальном дистракционном остеосинтеза претермина-ли имели грубое строение, встречались единичные веточки с уолле-ровской дегенерацией. При билокальном-сохранялись дистрофические изменения претерминалей, но в значительно меньшей степени (Л. Л Кочутина, И. П. Кудрявцева, 1990; 1991). В скелетной мышечной ткани при монолокальном дистракционном остеосинтеае наблюдались обширные поля рубцовой ткани с участками тонких атрофичных мышечных волокон. Д. С. Саркисов (19 ?) указывал на то, что денерва-ция тканей сказывается отрицательно на нормальном цикле их развитая. Помимо дистрофических изменений в эфферентной части рефлекторной дуги, наблюдалась и регенерация тканей нервной системы.
йэрфоадаптанионная реакция в нейроструктурах происходила с самого качала действия растяжения. Репаративная регенерация включалась в ходе патологического процесса немедленно и сосуществовала с дистрофическими и очаговыми некротическими изменениям в тканях нервной системы. Это положение говорит о гетерох-ронности процессов . деструстивных и регенераторных, как ^мпенсаторно-приспособительная реакция, адаптация нервной системы к такому фактору, как дозированное растяжение, регенерация нервной ткани осуществлялась на клеточном и внутриклеточном уровнях. Характер и интенсивность ее протекания во многом зависит от применяемого суточного темпа дистракции.
В большинстве клиник используется аппарат Илизарова традиционной коьструкции, как в настоящем исследовании. Поэтому особенно важно показать морфоадаптационные возможности тканей нервной системы в создаваемых нами условиях дистракции при суточном темпе 2ш за 1 прием (по 1 мм на каздом уровне) методом билокального дистракционного остеосинтеза и достигнуть той же величены удлинения (50X), что и при монолокальном дистракционном остеосинтеэе (суточный теш 1 мм), но используя для этого вдвое меньий времени (45 и 90 дней соответственно). Тем не менее, оп- '
тимальный темп дистракции, даже в условиях билокального дистракционного остеосинтеза, должен подбираться индивидуально, в зависимости от функционального состояния скелетных тканей конечности.
В настоящем исследовании полнота восстановления тканей нервной системы при моно- и билокальном дистракционном остеосинтезе была различной. При использовании второго метода она значительно выше. Признаки внутриклеточной регенерации в мотонейронах появились в начале растяжения голени, нарастали к середине периода дистракции в обеих сериях эксперимента и были наиболее выражены в периоде фиксации, после прекращения растяжения. Они проявлялись в виде большого количества рибосом на мембранах зндоплазма-тической сети, обнаруживались свободно лежащие рибосомы, формирующие полисомы, отмечаяась гиперплазия митохондрий, конденсация хроматина на отдельных участках под оболочкой ядра, гипертрофия пластинчатого комплекса Гольдки.
Наблюдалась и клеточная форт регенерации (увеличение количества эпеядимоцитов, скопление клеток микроглии вокруг нейронов) . '
В настоящем исследовании было обнаружено реагирование мотонейронов на изменения, происходившие в большебёрцовом нерве удлиняемой голени. В условиях применения метода билокального дистракционного остеосинтеза явления пролиферации зпендимной глии на стороне оперированной конечности появлялись на 25 день дистракции (при мэколокальном-на 50-60 день), а скопление клеток сател-литной глии вокруг нейронов-на 15 день дистракции (при моноло-кальном-на 90 день).
После окончания растяжения и 180 дней фиксации голени в аппарате наблюдались уменьшенные в размере и гипертрофированные мотонейроны, последних было больше при билокальном дистракционном остеосинтезе. Гипертрофию клеток, обусловленную гиперплазией их ультраструктур следует рассматривать, как одну из форм регенерации (Д.С. Саркисов, 1987). Количество изменений мотонейронов уменьшается к окончанию эксперимента до 39% при билокальном дистракционном остеосинтезе и до 47% 'при монолокальном (показатель контрольной группы-15%).
При удлинении голени методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза процессы регенерации большеберцового нерва' начин&пизь в середине периода дистракции. в обеих сериях и выра-
жались в виде внутриклеточной и клеточкой форм. Внутриклеточные признаки повышения активности леммоцигов можно было наблюдать на более ранних этапах дистракции (10 день).
Процессы ■ репаративной регенерации болыиеберцового нерва нарастали по мере удлинения и возрастали после прекращения растяжения, в периоде фиксации голени в аппарате.
В большеберцовом нерве можно было наблюдать появление колб роста, дихотомическое деление аксонов, пролиферацию леммэцитов, образование бюнгнеровских тяжей, пучки тонких регенерирующих нервных волоконец, расширение цистерн эндоплазматической сети, повышение количества микротрубочек, отростки в цитолемме леммо-цитов, .что свидетельствовало об их функциональной активности. Важным моментом в процессе регенерации тканей нервной системы является фактор натяжения, что было отмечено многими авторами (Г. А. Илизаров, 1982; Б. Ы. Карлсон, .986; ЕР.Карымов, ' 1993; Л. Н. Кочутина, И. П. Кудрявцева, 1993).
Регенерирующие структуры имели преимущественно направленный рост (вдоль линии натяжения аппаратом), что согласуется с положением, высказанным Г. А. Илизаровым (1984) о влиянии фактора напряжения растяяйния на формообразовательные процессы в тканях при чрескостном остеосинтезе.
При монолокальном дистракционном остеосинтезе через 180 дней после окончания удлинения сохранялись отдельные нервные волокна с признаками уоллеровской дегенерации. Полного восстановления гистологической структуры болыиеберцового нерва не происходило. В условиях Оилокального дистракционного остеосинтеза в этот срок исследования в зонах дистракции сохранялись лишь явления раздражения, а в междистракционных зонах гистологическая картина боль-шеберцового нерва при исследовании на светооптическом уровне практически не отличалась от нормы.
Процессы миелинизации волокон нервного ствола также протекали с разной интенсивностью. Количество миелиновых волокон при монолокальном дистракционном остеосинтеве после прекращения растяжения нарастало к концу эксперимента с 55,4% до 71,6%. При би-локальном дистракционном остеосинтезе с 57,7Х до 79,5% (показатель контрольной серии - 82,42).
Проведенное нами морфометрическое исследование показало, высокую корреляционную зависимость (-0,95) и достоверность (0,01<р <0.025) изменений миелиновых волокон, от вёличины у дли-
нения голени. Для постчатального и репаративного гистогенеза характерны общие закономерности развития' (Д.С.Саркисов, 1977). Г. А. Илизаров и М. М. Щудло (1082) указывали на принципиальной сходство процессов дистракционного гистогенеза с развитием и дифференцкровкой тканей в онтогенезе.
В настоящем исследовании было показано, что более благоприятные условия для сохранения гистоструктуры нервных волокон имеются при удлинении на двух уровнях, гак как создаются условия для регенерации нерва,, подобного росту в постнатальНом периоде. Билокальный дистракционный осгвосиктез создает в тканях конечности определенное напряжение растяжения аналогично эпифизарным пластинкам при росте кости в длину и играет роль механического натяжения в пространственной организации клеток (Г. А. Илизаров, 1984; Л. а Кочутина, И. П. Кудрявцева, 1994).
В процессе регенерационного гистогенеза и во всех компенсаторно-приспособительных процессах важное значение принадлежит межгканевым взаимодействиям. Н.Онтилл и К.Клюбер.(1993) в своих исследованиях показали, что окончате. ,ная дифференцировка мышеч-' ных волокон происходит при условии установления и поддержания моторной иннервации.
В настоящем исследовании процессы регенерации моторных нервных окончаний и мышечных волокон начинали проявляться на 50-60 день при ионо локальном дистракциоином остеосинтезе н на 25 день при билокальном. В условиях применения метода монолокального дистракционного остеосинтева регенерирукцие нервные волоконца появлялись в период формирования ыиотуб (60 день дйстракции). Наши исследования подтверждают данные Р. П. Яеневской (1974) о том, что при выраменкой атрофии и бо.«ьши развитии соединитель-' ной ткани (что происходит при монолокальном дистракционном осте-осинтезе), аксон образует новый мионевральный синапс на стадии развития мышечных трубочек. Р. П. 2еневская отметила, что на стадии развития миосккпластов регенерирующие аксоны образуют очень простые первичные контакты с миогенными элементами, сходными с ранними эмбриональными. Это положение находит подтверждение в особенностях роста регенерирующих нервных волоконец в условиях применения метода Силокального дистракционного остеосинтеза.
Проведенное нами исследование выявило некоторое сходство морфогенетических механизмов регенерации скелетной мышечной ткани и моторных нервных окончаний с процессами регенерации нерв но-
мышечных структур в условиях дозированного растяжения при било-кальном дистракционном остеосинтезе (фактор. механического натяге ния на двух уровнях подобно условиям в онтогенезе; расположение регенерирующих терминале« вдоль мышечного волокна по линии существующего растяжения, иннервация миогенных структур на ранних стадиях миогистогенеза, постоянное чередование процессов регенерации, дистрофии и очагового некроза нервных структур).
. После окончания дистракции и 180 дней фиксации голени в аппарате большинство терминале*! были гипертрофированы, имели широкую разветвленную сеть, кустиковидную форму, нервные волоконца заканчивались на мышечном волокне в виде колечек и усиков. Судя по этим морфологическим картинам в этот срок формировались эфферентные нейромышечные соединения. Из следует отметить, что при монолокальном дистракционном остеосинтезе, в отличие от било-кального, такие, картины встречались редко (JLE Кочутина, И. Е Кудрявцева, Е. И. Чумасрв, К. М. Светикова, 1990). Однако, полного восстановления моторных нервных окок аний через 180 дней фиксации голени в аппарате, ни при том, ни при другом методе, не происходило.
Таким образом, проведенное нами морфологическое и морфомет-рическое исследование течения репаративной регенерации позволяет сделать вывод о наибольших адаптационных возможностях тканей нервной системы при применении метода билокального дистракципн-ного остеосинтеза
Межтканевые взаимодействия при билокальном дистракционном остеосинтезе создают оптимальные условия для репаративной регенерации тканей нервной системы. Указанные данные позволят шире использовать этот метод у больных со средним (30%) и большим (60%) укорочениями конечностей.
Применение результатов исследования в клинике у больных с укорочением конечности до 50%, необходимо учитывать их экспериментальный характер, в котором нет полной аналогии между опорно двигател! ным аппаратом собаки и человека.
Настоящее исследование раскрывает актуальную проблему морфо-адалтации нейроструктур к дозированному растямению с учетом определенного темпа дистракции у животных с нормальным строением скелетной мышечной ткани конечности. Применение в клинической практике дистракционных аппаратов, в том числе автодистрактора, при нарушениях нервно- мышечных взаикюдейсгвий (полиомиелит,
врожденное утсорочение конечности) приводит к необходимости дальнейшего исследования морфе даптационных возможностей нервной системы в условиях патологии. По всей вероятности оптимальный темп удлинения и при лечении методом билокального дистракционного остеосинтеза доллен быть подобран индивидуально в каждом отдельном случае с учетом приспособительных возможностей нейроет-рукгур и скелетных мышц.
Тем не менее, при билокальном дистракционном остеосинтез , в отличие от мэиолокального. создастся наиболее благоприятные условия для репаративного нейрогенеза, восстановления тканевого гомеостаза й реализуется потенциальные регенерационные возможности тканей нервной системы, что является теоретическим обоснованием преимущества этого метода лечения.
вывода
1. Норфоадаптационные изменения нейроструктур эфферентной части рефлеюторной дуги при дозированном удлинении имеют гете-рохронное течение. Дистрофические их изменения преобладают при монолокальном дистракционном остеосинтеае. Наряду с дистрофическими имеют место процессы ре парат ив ной регенерации, которые приобретают выраженный . характер в середине периода дистракции и усиливаются после прекращения растяжения.
2. Пэ мере удлинения, голени нарастают дистрофические и очаговые некротические изменения в спинном мозге (округление тел мотонейронов, просветление кариоплазмы,- дисхромия вещества Нисс-ли, вакуолизация и разрушение крист митохондрий, появление лизо-сом и миелинсподобных телец), Оолывеберцовом нерве, локализующиеся преимущ?ственно на уровне костных регенератов (вакуолизация, уоллеровская дегенерация, нарушение периодизации миелияа, образование мембранных клубков, микровезикуд в леммоцитах), в моторных нервных окончаниях с формированием "пустых" бляшек. При билокальном. дистракционном остеосинтезе очаговые дистрофические изменения »«нее выражены.
3. Дсзированное растяжение при билокальном дистракционном остзссинтезе в отличие от монолокального, создает наиболее благоприятные условия для межтканевих взаимодействий нейроструктур с соединительной и скелетной мышечной тканью (умеренная пролиферация фибробластов эпиневрия: к окончанию дистракции их количест-
во возрастает в 2,8 раза при монолокальном дистракционном остео-синтезе и в 2,2 раза- при билокальном; незначительное склерозирование стенок артерий и вен, дистрофические изменения эндотелиоцитов капилляров; более ранняя иннервация регенерирующей скелетной мышечной ткани).
4. Репаративная регенерация нейроструктур спинного мозга характеризуется пролиферацией эпендимоцитов, скоплением вокруг нейронов клеток сателлитной глии. В нейронах - гиперплазия и гипертрофия митохондрий, образование полисом, полиморфизм эндоп-лааматического ретикулума, т. е. наблвдаются внутриклеточные процессы регенерации. К окончанию эксперимента отмечается гипертрофия отдельных мотонейронов.
5. в болыцеберцовом нерве репаративная регенерация характеризуется увеличением количества мифотрубочек, образованием отростков у леммоцитов, бпнгнеровских тяжей, колб роста Наблюдается строгая направленность регенерирующих волоконец вдоль линии натяжения аппаратом. В конце периода фиксации в зонах дистракции сохраняются очаговые некротические изменения некоторых волокон при шнолокальном дистракционном остеосптезе и явления их раздражения при билокальном.
6. Воздействие дозированного растяжения выявляет некоторые морфогенетические закономерности в процессе репаративний регенерации моторных нервных окончаний (образование нервно-мышечных структур с миосимпластами при билокальном дистракционном остео-синтезе и с миотубами- при шнолокальном).
Рост нервных волокон в длину при билокальном дистракционном остеосинтезе с проксимальной и дистальной метазпифизарными зонами натяжения имеет сходство с их ростом в онтйгенезе.
7. При билокальном дистракционном остеосинтезе, в отличие от монолокального, создаются наиболее благоприятные условия для ре-паративной регенерации нейроструктур и реализуются потенциальные регенерационные возможности ткани нервной системы, что является ■ теоретическим обоснованием преимущества этого метода лечения для коррекции больших укорочений конечностей.
СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ГО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Эффективность морфоадаптациенных процессов в мышцах и нервах голени при билокальном дистракционном остеосинтезе / Материалы III Международного семинара по усовершенствованию аппаратов и методов внешней фиксации / Аппараты и методы внешней фиксации в травматологии и ортопедии. - Лат. НИИ травматологии и ортопедии. - Рига- 1989.- С. 124. (соавт. Л.Н. Кочутина).
2. Изменения нервных проводников и их концевых аппаратов в мышцах и коже при больших однозтапньи удлинениях конечности по Г. А. Илизарову // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. -Т. 98.- Выл. 4.- 1990.- С. 24-31. (соавт. JL Н. Кочутина,' Е. И. Чума-сов, К. Я Светикова).
а Шрфологиче'ские изменения болыпеберцового нерва при моно-и билокальном дистракционном оетеосинтеве голени по Г. А. Илиза-' рову // Адаптационно-компенсаторные и восстановительные процессы в тканях опорно-двигательного аппарата: Тез. докл. VIII школы по биологии опорно-двигательного аппарата, 19-21 июня 1990. - Киев, 1990. - С. 186-188. (соавт. Л. К Кочутина).
4. Проявление эффекта Г. А. Илизарова в регенерации скелетной мышечной ткани и периферических нервов в условия билокального дистракционного остеосинтеза //Метод Илизарова: теория, эксп., клиника: Тез. докл. Всесоюзной конф. с уч. ин. специалистов, посвящ. 70-летию Г. А. Илизарова и 40-летию разработанного им метода чрескостного остеосинтеза, Курган, 13 -15 июня 1991.- Курган, 1991.- С. 348-350. (соавт. Л.Н. Кочутина).
5. Репаративный миогистогенев и изменения в периферических нервах голени в условиях удлинения ее методами моно- и билокального дистракционного остеосинтеза /У Реактивность организма и регенерация пеаней при компрессионно-дистракционном остеосинте-зе." Курган: ВККЦ "ВТО", 1991.- С. .32-44. (соавт. Л. Н. Кочутина. А. И. Реутов).
6. Изменения моторных нервных окончаний при больших одноэ-тапных удлинениях конечности аппаратом Илизарова / Мат. научн. конф. // Современные аспекты чрескостного остеосинтеза по Илизарову. - Казань, 1991.- С. 144 - 145. (соавт. Л. Е йочутина). ,
Шрфологические проявлен!« нервно - мышечных взаимодействий в мышцах голени при дистракционном остеосинтезе аппаратом Илизарова. - Казань, 1992 / Мат. т.. чн. конф. // Лечение по в ре ж-
дений и заболеваний опорно -двигательного аппарата^ методом чрес-костного остеосинтеза по Илизарову. - 4.1. - Казань-, 1992.- С. 156 -159. (соавт. JL Е Кочутина, E.R Кормшшцина).
8. О проявлении клеточной и внутриклеточной рйгенерации ней-роструктур при дистракционном остеосинтезе аппаратом Илизарова // Метод Илизарова -достияэния и перспективы: Тез. докл. международной конф , посвящ. памяти ак. Г. А. Илизарова, Курган, 1516 *ипня 1993. - Курган, 1993. - С. 387 -388. (соавт. JL Е Кочутина).
9. Мэрфометрические изменения нервно-мышечного аппарата при удлинении конечности / / Клиника и эксперимент в травматологии и ортопедии: Тез. докл. юбилейн. научн. ионф. НИЦГ "БТО", 26-28 янв. 1994, Казань.- Т. XLI.- Казань, 1994.-С. 203 -204. (соавт. JL Е Кочутина).
10. Пространственная к временная координация регенерации мышечной и нервной тканей при дистракционном остеосинтезе // Актуальные проблемы экологической хронобиологии хрономедициньс Тез. докл. Международной научн. юонф., 22 -24 ноября 1994, Екатеринбург. - Екатеринбург, 1994. - С. 104 - 105. (соавт. ДН. Кочутина) .
Отпечатано на ротапринте ИФМ УрО РАН зак.93 ТИРАЖ 100 Подписано к печати 12.01.95. объви I п.л. формат 60x84 1/16 620219 г.Екатеринбург ГСП-170 ул.С.Ковалевской,18