Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфогенез и патологическая анатомия ожоговой раны кожи и органов-исполнителей иммунной системы в условиях лечебного применения фракций плазменных белков КОН-IV1 и альфа-I-кислого гликопротеина (экспериментальное исследование)

; 2 «*

На правах рукописи

САЧКО Алексей Александрович

морфогенез и патологическая анатом!! ожоговой раны кожи и органов-испол; ' ' иммунной системы в условиях лечебно применения фракций-плазменны;:

белков кон-1\/1 и альфа-1-кислого гликсп ина (экспериментальное исследование)

14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-1996

Работа выполнена в Челябинской государственной медицинской академии

Научный руководитель:

член-корреспондент РАЕН, профессор,

доктор медицинских наук В.Л.Коваленко

Научные консультанты: заслуженный деятель науки РФ,

член-кореспондент РАЕН, профессор,

доктор медицинских наук Р.И.Лифшиц

профессор,

доктор медицинских наук В.В.Саломатин

Официальные оппоненты:

профессор,

доктор медицинских наук Р.У.Гиниатулин

доцент,

кандидат медицинских наук Е.С.Беликов

Ведущая организация: Омская медицинская академия.

Защита состоится » 1996 г. в часов на

заседании Диссертационного Совета Д.084.04.03 при Челябинской государственной медицинской академии (454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан «^¿Г» -¡-¿¿су-^?) 1996 г

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор В.Н.Бордуновский

общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Термическая травма занимает третье место по частоте среди других травм ( Пахомов С.П., 1987). И это предопределяет важность ожоговой болезни как социальной, экономической и медицинской проблемы, в том числе в аспекте лечения пораженных. Известно, что ожоговая травма является не только местным поражением кожи и/или слизистых оболочек, но и общим заболеванием организма, представляющим собой сложный симптомокомплекс, характер которого зависит от периода болезни - ожоговый шок, токсемия, септикотоксемия, период репарации (Губер Е.В., 1973; Камилов Ф.Х. и соавт., 1973; Рябинин В.Е., 1977; Лифшиц Р.И., 1993). И это оправдывает при тяжелых травмах такое понятие как ожоговая болезнь. Нарушение микроциркуляции, обменных процессов, повышение проницаемости гематоэнцефалическиго барьера, проявления иммунного дефицита при ожоговой болезни в значительной мере связываются с воздействием токсических среднемолекулярных пептидов плазмы крови - СМП (Лифшиц Р.И., 1989; Волчегорский И.А. и соавт., 1991; Рябинин В.Е., Лютов Р.И., 1993). В связи с этим в патогенетической терапии термических поражений особое значение придается дезин-токсикационно-трансфузионной терапии. Сотрудниками кафедры биохимии Челябинской медицинской академии под руководством Р. И. Лифшица на основе новых технологий разработаны два новых белковых препарата из донорской плазмы крови для проведения трансфузионной терапии. Один из этих препаратов представляет собой модифицированную фракцию белков плазмы КОН-1У/,, охарактеризованную авторами как белок-ингибитор токсических олигопептидов - БИТО (Лифшиц Р.И., 1989). Второй препарат является индивидуальным белком плазмы - альфа-1-кислым гликопротеином (а-1-КГП). Оба препарата в качестве основных компонентов содержат острофазовые белки плазмы, имеющие по современным воззрения (Саломатин В.В., 1989; Маес1а Н., 1982) защитные свойства, связанные с выполнением ими транспортных, реологических, иммунорегуляторных и стимулирующих репарацию функций. В сериях исследований (Львовская Е.И., 1988, 1994; Саломатин В.В., 1993, 1995)

показано, что эти препараты способствуют ограничению проявлений ожоговой токсемии и нормализации нарушений гомеостаза. Для широкого внедрения в практику лечения обожженных этих препаратов необходимы дополнительные сведения о их воздействии на динамику заживления ожоговой раны и на иммунные механизмы регуляции репаративных процессов в посттравматическом периоде.

Цель работы - экспериментально-морфологическое обоснование применения при ожоговой болезни препаратов острофазовых белков плазмы на основании сравнительного изучения морфогенеза ожоговой раны кожи и реакций органов-исполнителей иммунной системы в различные периоды ожоговой болезни.

Задачи исследования:

1. С применением комплекса морфологических и морфометрических приемов изучить динамику заживления кожной раны при стандартном термическом повреждении у белых беспородных крыс, а также реакции регионарных лимфоузлов и селезенки в различные периоды индуцированной ожоговой болезни.

- 2. Выявить при морфологическом исследовании ожоговой раны, лимфатических узлов и селезенки особенности терапевтического патоморфоза ожоговой болезни при применении в период ожогового шока БИТО.

3. Выявить при морфологическом исследовании ожоговой раны, лимфатических узлов и селезенки особенности терапевтического патоморфоза ожоговой болезни при применении в период ожогового шока а-1-КГП.

4. На основании сравнительного анализа результатов морфологического исследования животных с различным воздействием в послеожоговом периоде установить характер и возможные механизмы изменчивости течения ожоговой болезни при использовании БИТО и а-1-КГП и дать рекомендации о возможности применения этих препаратов при лечении обожженных.

Научная новизна. Впервые изучен патоморфоз экспериментальной ожоговой болезни в аспекте изменчивости

морфогенеза ожоговой раны кожи и реакции органов лимфоидной ткани (регионарных лимфатических узлов, селезенки) при парентеральном введении после термической травмы острофазовых белков плазмы крови. Выявлена синхронность проявлений альтерации и репарации в ожоговой ране кожи и структурно-функциональной перестройке органов иммунной системы.

Практическая значимость работы.

Установленный при экспериментально-морфологическом исследовании положительный терапевтический эффект применения БИТО и а-1-КГП, связанны^ с ограничением токсической и аутоиммунной аутоагрессии, стимуляцией этими препаратами компенсаторных процессов при ожоговой болезни, является основанием для их применения в клинической практике. Оба препарата (БИТО и а-1-КГП) в настоящее время внедрены в практику работы Челбинского областного ожогового центра.

Основные положения, выносимые на за щ_и ту:

1. Белок-ингибитор токсических олигопептидов и альфа-кислый глико-протеин при введении в первые сутки после ожога обуславливают снижение выраженности циркуляторных расстройств и перифокального некроза в зоне термической травмы, изменяют темпы пролиферации и структурно-функциональной дифференцировки клеточных элементов кожи при репарации. Это приводит к более ранним отторжению струпа и эпителизации ожоговой раны.

2. Положительный терапевтический эффект парентерального применения указанных выше препаратов в определенной мере обусловлен ограничением лимфоцитолиза и атрофических процессов в лимфоидных органах, то есть с ограничением токсической и аутоиммунной аутоагрессии, а также со стимуляцией компенсаторных процессов в лимфоузлах и селезенке.

Апробация работы. Основные положения и материалы вошедшие в диссертацию доложены на конференции биохимиков «Обмен веществ в норме и патологии» (Тюмень, 1992), на второй межрегиональной конференции Урала и Западной Сибири «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Курган,

1993), на конференции дерматовенерологов «Актуальные проблемы дерматологии и венерологии» (Екатеринбург, 1994), на конференции «Актуальные вопросы практической и теоретической медицины» (Челябинск, 1995), на пленарном заседании ассоциации патологоанатомов Челябинской области (Челябинск, 1996).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 1 таблицу, 31 рисунок, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований и их обсуждения, общего заключения, выводов, списка использованной литературы (202 отечественных и 75 иностранных источников).

содержание работы

Материал ы_и методы исследования.

Проведены три серии опытов на 215 беспородных половозрелых разнополых белых крысах массой 160-200 г. В первой серии опытов 43 крысам нанесен ожог 15% поверхности кожи тела, во второй - ожог с последующим введением БИТО и в третьей серии - ожог с последующим введением a-l-КГП.

Животным всех трех серий наносили ожог кожи спины с глубиной повреждения, соответствующей Ш-Б степени. Белым крысам второй серии эксперимента через один и пять часов после ожога вводился стерильный 2% раствор БИТО в количестве 0,5 мл (60 мг/кг) в хвостовую вену дважды (суммарная доза 120 мг/ кг). Животным третьей серии через один и двадцать часов после ожога внутривенно вводился по 1 мл 3% раствор a-l-КГП в суммарной дозе 150 мг/кг массы.

Белые крысы всех серий выводились из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом в сроки, соответствующие периодам ожоговой болезни: 1-3 сутки - ожоговый шок, 3-7 -токсемия и септикотоксемия, 14-21-30 - репарация. При вскрытии изучалось состояние ожоговой раны, подмышечных лимфатических узлов и селезенки. Для гистологического

лимфатических узлов и селезенки. Для гистологического исследования иссекались кусочки кожи с подлежащими тканями из различных зон, а также лимфоузлы, селезенка после предварительного их взвешивания. Подовляющее большинство кусочков кожи с подлежащими тканями, лимфоузлов и селезенки фиксировались в 10% растворе формалина и после спиртовой проводки заливались в парафин. Депарафинированные гистологические срезы толщиной восемь микрон окрашивались гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону для выявления коллагеновых волокон, фуксилин-литиевым кармином по Вейгерту - на эластические волокна, импрегнировались серебром по Гомери на ретикулярный каркас. Для выявления кислых мукополисахаридов (гликозаминогликанов) тканевые срезы окрашивались альциановым голубым с контрольным воздействием на срезы раствора анимальной гиалуронидазы, ставилась ШИК-реакция на нейтральные полисахариды, причем применялась для идентификации гликогена контрольная реакция с перевариванием срезов в растворе амилазы слюны. Для выявления плазматических клеток срезы окрашивались по методу Браше. Для определения характера клеточных элементов в Т- и В-зависимых зонах лимфатических узлов и селезенки, а также в обожженной коже на нефиксированных криостатных срезах выявлялась активность гидролитических ферментов - кислой фосфотазы и неспецифической эстеразы методом азасочетания. В тканевых срезах нами изучались не только характер и динамика общепатологических процессов, но и для объективизации различий этих реакций использовался ряд морфометрических признаков:

1. Регенерация эпидермиса - а/ небольшые группы эпителиальных клеток в крае раны - 1 балл, б/ крупные скопления и пласты эпителия на поверхности и в глубине раны - 2 балла, в/ сплошной слой на поверхности грануляционной ткани - 3 балла.

2. Содержание фибробластов.

3. Содержание капилляров.

4. Содержание аморфных и нежноволокнистых альциановых масс в межклеточной субстанции в дне и краях разы.

5. Выраженность ШИК-реакции в межклеточном веществе

соединительной ткани.

6. Содержание фуксинофильных коллагеновых волокон.

Степень выраженности 2-6 морфологических признаков также оценивалась визуально по трехбальной системе: от одного балла, т.е. слабая выраженность процесса, до трех баллов.

На гистологических срезах органов-исполнителей иммунной системы (лимфоузлы и селезенка) определялись площади функциональных зон и содержание в них кариоцитов. Исследование проводилось с помощью светового микроскопа МБИ-З с бинокулярной насадкой АУ-12. Для морфологических измерений использовалась окулярметрическая сетка, цена деления у которой 0,1 мм при ок. 7, об. 8 и 0,009 мм при ок. 7, об. 90. Площади красной пульпы, паракортикальной зоны и синусов лимфатических узлов измерялись путем наложения сетки. Площадь фолликулов вычислялась по формуле:

а • Ь

3 = л-

4

где а - малый диаметр, Ь - большой диаметр. Подсчет клеток проводился в ста ячейках при увеличении: ок. 7, об. 90, что соответствует 0,0081 кв. мм.

Нами выводились следующие морфометрические индексы:

- индекс площади лимфатических фолликулов селезенки /ИПЛФС/ - то есть отношение суммы площадей фолликулов к площади среза селезенки;

- индекс площади зародышевых центров в лимфатических фолликулах селезенки / ИПЗЦС/ - отношение суммы площадей зародышевых центров в лимфоузлах селезенки к площади среза селезенки;

- индекс площади корковой зоны лимфатических узлов /ИПКЗЛУ/ - то есть отношение площади корковой зоны к площади среза лимфатического узла;

- индекс площади зародышевых центров в фолликулах лимфатических узлов /ИПЗЦЛУ/ - отношение суммы площадей зародышевых центров фолликулов к площади среза лимфатического узла;

- индекс площади паракортикальной зоны лимфатических узлов /ИППЗЛУ/ - отношение площади паракортикальной зоны к площади среза лимфатического узла;

- индекс площади мякотных (мозговых) тяжей лимфатических узлов / ИПМТЛУ/ - отношение площади мозговых тяжей к площади среза лимфатического узла;

- индекс площади синусов лимфатических узлов /ИПСЛУ/ - отношение площади синусов к площади среза лимфатического узла;

- индекс плотности кариоцитов /ИПК/ - то есть содержание всех клеток на площади 0,0081 мм - /ок. 8, об. 90/.

Статистическая обработка полученных цифровых данных проводилась общепринятым методом вариационной статистики / Меркулов A.M., Поляков А.Е., 1974; Автандилов Г.Г., 1980/.

Числовые характеристики вариационного ряда /х, т/ определялись с помощью микрокалькулятора БЗ-21.

Определялась средняя арифметическая - X :

х

X = Е-

п

где £ - сумма всех вариантов, п - число наблюдений.

Среднее квадратическое отклонение - а :

I 1 1

а = "V — (Ex2 —(Ех)2) " п-1 п

Средняя ошибка - m /при п < 30/.

Достоверными считались различия между группами по сравниваемому признаку при Р < 0,05.

результаты собственных исследований и их обсуждение

Патология ожоговой болезни - это в первую очередь, патология кожи, а ее повреждение при термической травме, особенности течения альтеративных, дисциркуляторных и репаративных процессов в ране предопределяют прогноз заболевания. В связи с этим сравнительную морфологическую оценку динамики развития перечисленных выше процессов в коже

и подлежащих тканях после нанесения термического повреждения мы избрали в качестве маркеров эффективности воздействия БИТО и а-1-КГП.

Терапевтический эффект применяемых нами белковых препаратов особенно четко проявлялся в периоды токсикосептицемии и репарации ожоговой болезни рядом морфологических феноменов в ожоговой ране крыс. Так, если у животных 11-ой и Ш-ей серий в первую неделю после повреждения регистрировалась более выраженная миграция гранулоцитов по периметру некротически измененных тканей, то на 14-е и, особенно, на 21-е сутки после ожога содержание нейтрофильных гранулоцитов в зоне повреждения достоверно снижалось по сравнению с крысами 1-ой серии. Возможно, это связано с менее выраженным инфицированием раны и менее частым развитием гнойных осложнений при применении БИТО и а-1-КГП. На это указывают также при анализе собственных экспериментальных исследований Е.И.Львовская (1988), Р.И.Лифшиц (1992) и Е.Р.Звеняцковская (1993).

Терапевтический патоморфоз ожоговой раны при введении после травмы БИТО и а-1-КГП характеризовался также более ранним (на семь-десять суток) отторжением струпа и эпителизацией раны (рис. 1). К тридцатым суткам после ожога лишь при гистологическом исследовании у отдельных животных Н-ой и Ш-ей серии обнаруживались неэпителизированные участки раневой поверхности, в то время как у крыс 1-ой серии этот процесс (эпителизации), как правило, не был завершен. Эпителиально-стромальные соотношения в зоне травмы кожи были более сохранными у животных 11-ой и Ш-ей серий. При этом мы обратили внимание, что накопление в лейкоцитах и других клеточных элементах главного резервного энергетического и пластического материала гликогена было более выраженным при введении обожженным указанных выше биологических препаратов. У крыс 11-ой и Ш-ей серий более значительным был прирост в ране фибробластов (рис. 2), волокнистых (аргирофильных и фуксинофильных) структур и содержание капилляров. Выявлена также тенденция к повышению уровня альцианофильных веществ типа гиалуроновой и

Выраженность процесса в условных единицах

3 -

гЬ

А

гЬ

гН

гЬ

•Ь

[41

3-й

7-е

14-е

21-е сутки после травмы

Рис. 1. Сравнительная динамика выраженности регенерации эпидермиса в ожоговой ране у подопытных животных различных серий.

Содержание в условных единицах

1 -

А

гЬ

3-й

гЬ

7-е

гЬ

гЬ

нп

гЬ

14-е

Рис. 2. Сравнительная динамика

21-е сутки после травмы изменений содержания

фибропластов в дне и краях ожоговой раны подопытных животных. Примечание:) [-1-я серия;| [-2-я серия; Щ£-3-я серия.

3

соединительной ткани в дне и по краям раны. Различие в характере и темпах регенерации в зоне ожоговой раны у крыс 11-ой и Ш-ей серий были несущественными. Нами отмечено лишь более выраженное в ране на четвертой неделе наблюдения содержание фуксинофильных волокон у крыс, которым после ожога вводился БИТО.

На наш взгляд, в какой-то мере объясняет более раннее заживление ожоговой раны у животных 11-ой и Ш-ей серий отсутствие перифокального отека и некроза в первые сутки после травмы. Этот феномен отмечен также В.В.Саломатиным (1993) у обожженных животных после введения а-1-КГП. Вероятно, в связи с этим феноменом площадь и глубина ожоговой раны при введении указанных выше препаратов существенно меньше, чем при ожогах без последующего терапевтического воздействия.

Положительное влияние БИТО на течение раневого процесса в коже обусловлено, по видимому, следующими моментами. Так, в состав препарата входит церуллоплазмин, который обладает антиоксидантными свойствами и влияет на процессы перекисного окисления липидов при ожогах. Е.И.Львовская (1988) доказала также, что кроме антиоксидантных БИТО обладает дезагрегантными свойствами, направленно изменяя состав липидов в мембранах, стабилизируя их, и тем самым устраняят структурно-функциональные и метаболитические нарушения, вызываемые термической травмой. Мембранопротекторные свойства БИТО связываются также с ингибированием токсических СМП, уменьшением степени вероятности микроциркуляторных расстройств. БИТО повышает уровень антиокислительной активности липидов и их окисляемость, снижает протеолиз белков, нормализует содержание в тканях циклических нуклеотидов (ц-АМФ, ц-ГМФ).

Патоморфоз раневого процесса под влиянием а-1-КГП, введенного в дозе, устраняющей его дефицит в зоне термического повреждения, вероятно, обусловлен следующими двумя патогенетическими механизмами: аккумуляцией препарата в зоне термического повреждения и его прямым взаимодействием с клеточными элементами ожоговой раны и перифокальных придатков кожи и подлежащих тканей, связыванием а-1-КГП

токсических СМП плазмы крови (Саломатин В.В., Ефименко Г.П., Лифшиц Р.И. 1985). Предществующими исследованиями показано также, что a-I-КГП выступает по отношению к эритроцитам как мембранный протектор, уменьшает способность тромбоцитов к агрегации, а следовательно, препятствует развитию ДВС-синдрома. Нами установлено также существенно более раннее развитие воспалительной отграничительной реакции на границе с мертвыми тканями, проявляющееся образованием более выраженного лейкоцитарного вала при введении этого препарата.

К тому же снижение проявления ожоговой токсемии при введении a-I-КГП, как указывали Саломатин В.В., Лютов А.Г., Цитович А.Л. (1992), сопровождается положительной динамикой образования продуктов ПОЛ, активности сывороточных ферментов (ACT, АЛТ, ЛДГ и др.) и показателей обмена окси-пролина, мобилизацией пластических ресурсов организма. Этим обусловлены, на наш взгляд, более выраженная пролиферация фибробластов, их ранняя структурно-функциональная дифференцировка и сопряженная регенерация эпителия в ожоговой ране при устранении дефицита a-I-КГП.

Морфологическое изучение с применением морфометри-ческих приемов лимфатических узлов, региональных по отношению к зоне термического повреждения кожи, и селезенки позволило установить, что в органах-исполнителях иммунной системы при индуцированной ожоговой болезни возникает комплекс дисциркуляторных, альтеративно-атрофических и репаративных процессов. Степень их выраженности и характер сочетания коррелирует с периодом ожоговой болезни и соответственно - с состоянием ожоговой раны. В конце периода ожогового шока и на стадии токсикосептицемии в лимфоидных органах преобладают явления лимфоцитолиза при активации клеток макрофагальной системы на фоне циркуляторных расстройств. Это документируется, прежде всего, изменением ряда морфометрических показателей состояния как лимфоузлов, так и селезенки.

В подавляющем большинстве функциональных Т- и В-зависимых зон лимфатических узлов и селезенки отмечено достоверное снижение индекса плотности кариоцитов за счет

некроза и апоптоза лимфоцитов. Особенно это касалось существенного снижения индекса плотности кариоцитов фолликулов лимфатических узлов и фолликулов селезенки, вплоть до 14 суток после нанесения травмы. С третьего дня после действия и до конца второй недели эти индексы оставались практически на одном уровне, в то время как содержание кариоцитов в паракортикальной зоне лимфоузлов уменьшилось менее существенно. В красной пульпе селезенки индекс плотности лимфоидных клеток более существенно снизился на 7-е сутки после травмы. Активация клеток макрофагальной системы, изученных лимфоидных органов, регистрировалась во всех функциональных зонах. При этом содержание этих клеток достоверно возросло в паракортикальной зоне лимфоузлов на 7-е и особенно на 14-е сутки после травмы, причем значительно возросли показатели синусового гистиоцитоза, в частности, на 3-и - 14-е сутки - площадь синусов лимфатических узлов. Структурно-функциональная перестройка лимфатических узлов и селезенки документировалась также параллельным снижением индекса площади корковой зоны лимфатических узлов, зародышевых центров лимфатических узлов вплоть до 14-ти суток после действия, до 7-х суток после ожога были низкими показатели индекса площади мякотных тяжей. В то же время площадь паракортикальной зоны относительно общей площади среза лимфоузлов существенно возросла. В селезенке в течении первых 14-ти суток примерно на одном уровне оставались показатели площади лимфатических узелков и их зародышевых центров. При этом нами отмечено уменьшение размеров и массы лимфатичесских узлов в начальный период ожоговой болезни, масса же селезенки несколько возросла за счет ее полнокровия и отека. Приведенные нами гистохимические реакции показали, что подавляющее большинство лимфоидных клеток различных функциональных зон лимфоузлов и селезенки отличались низким содержанием рибонуклеопротеидов (окраска по Браше), в то же время большинство макрофагов характеризовалось умеренной и сильной цитоплазматической активностью неспецифической эстеразы и кислой фосфотазы и нередко содержали в цитоплазме ШИК-позитивные включения.

ШИК-позитивные включения.

Выявленные нами изменения в лимфоидных органах, как указывалось выше, регистрировались уже на 3-й сутки после ожога, что в значительной мере обусловлено, по-видимому, ожоговым шоком и развивающейся при этом гиперкортизонемией (Эберт Л.Я. и соавт., 1979). В то же время наши данные подтверждают наблюдения С.ВеаШагс! е{ а1. (1974) о развитие тяжелой иммунной депрессии при термической травме, обусловленной непосредственным повреждением лимфоцитов, причем процессы альтерации доминируют в лимфоидных органах над другими реакциями вплоть до конца второй недели после ожога. Это заставляет предполагать, что лимфоцитолиз в органах-исполнителях лимфоидной ткани в значительной мере поддерживается и другими агрессивными факторами - в частности, воздействием среднемолекулярных токсических пептидов плазмы крови. Это согласуется со сведениями о снижении ряда иммунологических тестов под влиянием токсических пептидов (Чарная Л.Ф. и соавт., 1977; Долгушин И.И. и соавт., 1980; МоаК е! а!., 1974), а также данными о более глубоком повреждении органов иммуногенеза при отягощении экспериментальной ожоговой травмы введением среднемолекулярных пептидов крови обожженных (Абрамовская Л.В., 1985).

Период репарации (21-30-е сутки) после ожога характеризуется тенденцией к восстановлению клеточной плотности в функционально зависимых зонах органов-исполнителей иммунной системы, причем здесь обнаруживались клетки с высоким содержанием рибонуклеопротеидов в цитоплазме (преимущественно бластные формы лимфоцитов). В то же время до 30-х суток сохранялись высокие показатели площади мякотных тяжей лимфоузлов, значительным было содержание плазматических клеток различной степени зрелости в них, а также и в красной пульпе селезенки. Персистировали в поздних сроках наших опытов явления синусового гистиоцитоза, повышенного содержания макрофагов с различной степенью ферментной активности как в лимфоузлах, так и в селезенке. В регионарных лимфоузлах на 21-30-е сутки после ожога в корковом веществе на месте массивного лимфоцитолиза у животных 1-ой серии

обнаруживались явления очагового фиброза.

Представленные выше данные о динамике изменения лимфоидных органов в послеожоговом периоде подтверждают концепцию (Долгушин И.И., 1980; Федоров H.A. и соавт., 1985) о том, что в патогенезе ожоговой болезни имеет место не только токсемическая, но и аутоиммунная аутоагрессия. При этом на стадии репарации в лимфатических узлах и селезенке сохраняются длительное время признаки антигенной стимуляции в виде персистенции синусового гистиоцитоза, накопления в строме органов макрофагов, плазматизации мякотных тяжей лимфоузлов и красной пульпе селезенки. В этой связи представляют интерес данные Е.Р.Звеняцковской (1993) о том, что грубые нарушения иммунного гомеостаза при ожоговой болезни являются следствием гиперЦИК-емии с преобладанием мелко- и среднедисперсных иммунных комплексов независимо от площади ожоговой поверхности. Причем, автор отмечает, что иммунодефицитный синдром при ожоговой болезни имеет комбинированный характер, проявляется не только снижением противоинфекционной защиты, но и нарушением элиминационного процесса, задержкой ЦИК, в результате как избыточной антигенемии, так и деактивацией ключевых компонентов элиминации (С2,СЗ,С4).

При исходной картине структурно-функциональной перестройки лимфатическох узлов и селезенки у животных трех основных серий наших экспериментов выявлено, что введение БИТО и a-l-КГП в ранний период ожогового шока оказывает существенное влияние на степень выраженности и характер, прежде всего, процессов альтерации и репарации в этих органах. Так, в лимфатических узлах на третьи сутки имеется тенденция к снижению индекса площади корковой зоны, а на седьмые-четырнадцатые сутки этот показатель выше, чем у животных первой серии и даже интактных. Индекс площади зародышевых центров в лимфатических узлах на 3-й сутки мало отличается от этого индекса крыс l-ой серии, но резко возрастает в последующие сроки наших наблюдений при ожоговой болезни (рис. 3). Изменение индекса площади паракортикальной зоны в сторону увеличения менее выражены при введении этих препаратов в

различные сроки наблюдения по отношению к 1-ой серии опытов, а вот индекс площади мякотных тяжей был выше уже на 3-й сутки и достоверно выше во все последующие сроки наблюдения в сравнении с интактной группой и крысами первой серии опытов (рис. 4). Индекс плотности кариоцитов в лимфатических фолликулах лимфоузлов на 3-й сутки наблюдения близок к таковому у интактных крыс, но в последующие сроки возрастал по сравнению с первой серией наблюдения. Представляет интерес, что в паракортикальной зоне и в мякотных тяжах этот индекс был достоверно выше во все сроки наблюдения по отношению к индексу плотности кариоцитов у животных интактной группы и 1-ой серии наблюдения. В селезенке у крыс 11-ой и III-ей серии мы констатировали достоверное снижение проявлений альтерации лимфоидных клеток и атрофии белой пульпы, а также существенно пониженные темпы падения индекса площади лимфатических узелков и их зародышевых центров при введении БИТО и а-1-КГП по сравнению с крысами 1-ой серии наблюдений и интактными животными. Индекс общей площади клеток фолликулов лимфатических узлов был достоверно выше у крыс 11-ой и 111-ей серий наблюдения в разные сроки наблюдения. После введения обожженным БИТО и а-1-КГП на 21-30-е сутки опыта клеточность в функциональных зонах селезенки оказалась существенно выше по сравнению с крысами 1-ой серии и интактными животными за счет лимфоцитов, плазматических клеток и макрофагов (рис. 5, 6).

На основании сравнительного анализа состояния органов иммуногенеза у обожженных крыс И-ой и Ш-ей серии (введение БИТО или а-1-КГП) мы пришли к выводу, что различия в степени выраженности расстройств кровообращения, индексов, отражающих структурно-функциональное состояние органов-исполнителей иммунной системы у этих животных, были несущественными. Это позволяет сделать вывод об однозначности воздействия БИТО и а-1-КГП на реактивные процессы в лимфоидной системе при ожоговой болезни. Снижение показателей гибели иммунокомпетентных клеток (лимфоцитолиза в Т- и В-зависимых зонах лимфатических узлов и селезенки) уже на ранних стадиях ожоговой болезни является, по-видимому,

ипзцлу

0,05 ■ 0,04 0,03 0,02 0,01

гЬ

-ь

ГТ|

гЬ

гь

гЬ

гЬ

гЬ

+1

гЬ

интактные

животные

3-й 7-е 14-е 21-е сутки

после травмы

Рис. 3. Сравнительная динамика изменений индекса площади зародышевых центров лимфатических узлов (ИПЗЦЛУ) в различные сроки после ожога.

ипмтлу

0,6

0,5 ■ 0,4 0,3 0,2 0,1

гЬ

ж

гН

гЬ

гь

¿1

л

гЬ

гЬ

-ь

интактные

животные

3-й 7-е 14-е 21-е сутки

после травмы

Рис. 4. Сравнительная динамика изменения индекса площади мякотных тяжей лимфатических узлов (ИПМТЛУ) в различные сроки после ожога.

Примечание:

-1-я серия;

-2-я серия;

-3-я серия.

ипкф

180 -

170 160 150 140

гЬ

гЬ

гй

Г*1

интактные

гЬ

130 120

гЬ

-ь

4]

гЬ

г4п

41

животные

3-й

7-е 14-е 21"е СУТКИ

после травмы

Рис. 5. Сравнительная динамика изменения индекса общей плотности клеток фолликулов (ИПКФ) селезенки в различные сроки после ожога.

гЬ

ипккп

160

150 140 130 120 110 100

90 80 70 60

гЬ

гЬ

нь

гН

рЬ

Л

ж

гЬ

интактные

гЬ

Ж

животные

й

■е сутки

3-й 7-е 14-е 21

после травмы

Рис. 6. Сравнительная динамика изменения индекса общей плотности клеток красной пульпы (ИПККП) в различные сроки после ожога.

Примечание:

-1-я серия;

-2-я серия;

-3-я серия.

воздействии этих препаратов. Этот феномен был отмечен при введении обожженным животным альфа- и бета-глобулинов крови (Абрамовская Л.В., 1985). Выявленные другими авторами (Звеняцковская Е.Р., 1993; Рябинин В.Е., Лифшиц Р.И., 1995) снижения концентрации иммунных комплексов средних и малых размеров, активности отдельных компонентов комплемента, уменьшение протеолитической активности сыворотки, снижение степени нарушения процессов митохондриального, лизосомаль-ного окисления при введении обожженным в период шока депротеинизированных экстрактов плазмы или БИТО также объясняют зарегистрированные нами ограничения процессов альтерации в лимфоузлах и селезенке под воздействием этих препаратов. С другой стороны, нами показано более раннее и выраженное развитие процессов репарации как Т-, так и в В-зависимых зонах лимфатических узлов и селезенки, сопровождающееся более значительным накоплением в функциональных зонах лимфоидных клеток, среди которых было много бластных форм. В то же время ^известно (Бабаева А.Г., 1987), что в регенерации лимфоидных органов большое место занимает процесс миграции, а также во многом неясные еще тонкие структурно-функциональные внутриклеточные перестройки. В связи с этим, учитывая предшествующие работы, по изучению патологии иммунной системы при ожоговой токсемии, можно полагать, что и БИТО и а-1-КГП при введении обожженным обеспечивают структурно-функциональную сохранность центральных органов иммунопоэза. С позиций современного учения о лимфоидной регуляции процессов регенерации, иммуно-генетических механизмов регуляции репарации (Саркисов Д.С., 1987; Бабаева А.Г., 1985, 1987) нужно полагать, что положительный эффект применения БИТО и а-1-КГП в ускорении репарации и эпителизации ожоговой раны обусловлен, в определенной мере, влиянием этих препаратов на восстановление нарушенного иммунного гомеостаза при ожоговой токсемии. При этом представленные нами данные показывают, что оба препарата оказывают воздействие на структурно-функциональную характеристику как Т-, так и В-зависимых функциональных зон лимфоузлов и селезенки. Однако, как в токсикосептичесом, так

лимфоузлов и селезенки. Однако, как в токсикосептичесом, так и в восстановительном периоде ожоговой болезни, мы констатировали более выраженные, чем у обожженных животных 1-ой серии признаки активации B-звена иммунной системы (плазматизация лимфоузлов и селезенки, синусовый гистиоцитоз). Это, по-видимому, связано с проявлением антигенности применяемых препаратов по отношению к использованному виду экспериментальных животных. По данным Е.Р. Звеняцковской (1993) эти свойства при применении БИТО обожженному в клинике были выражены слабо.

Таким образом, представленные выше материалы экспериментально-морфологического характера свидетельствуют о существенном терапевтическом патоморфозе ожоговой болезни при применении в период ожогового шока БИТО и a-1-КГП. При этом в механизме положительного воздействия этих лекарств на течение репарации ожоговой раны определенное значение имеет ограничение повреждения и стимуляция регенеративных процессов в лимфоидных органах. Это дает нам основание рекомендовать БИТО и a-l-КГП для применения в клинической практике.

ВЫВОДЫ

1. Белок-ингибитор токсических олигопептидов - БИТО (120 мг на кг массы животного) и альфа-!-кислый гликопротеин -a-l-КГП (в дозе 150 мг на кг массы) у обожженных беспородных белых крыс при введении в первые сутки после ожога (15% поверхности тела белых крыс глубиной Ш-Б степени) оказывают положительное влияние на динамику раневого процесса, ускоряя на 7-10 суток отторжение струпа и эпителизацию раны. В зоне термической травмы снижается выраженность циркуляторных расстройств и перифокального некроза, ускоряются темпы пролиферации и структурнофункциональной дифференцировки мезенхимальных и эпителиальных клеточных элементов. При однонаправленном воздействии обоих препаратов БИТО оказывает более выраженное стимулирующее воздействие на пролиферацию фибробластов и образования коллагеновых

волокон.

2. В органах-исполнителях иммунной системы обожженных-регионарных лимфатических узлах и селезенке регистрируется комплекс дисциркуляторных, альтеративно-атрофических и репаративных процессов, степень выраженности и характер сочетания которых определяется периодом ожоговой болезни. На стадии шока и в период токсикосептицемии, как в Т-, так и в В-зависимых зонах указанных органов превалируют явления лимфоцитолиза при повышении содержания клеток макро-фагальной системы. Отторжение струпа и эпителизация ожоговой раны развиваются при выраженных явлениях репарации в лимфоидных органах. Однако, последняя имеет характер субституции и характеризуется как количественным приростом лимфоидных клеток, так и структурно-функциональной перестройкой лимфоузлов и селезенки с персистенцией явлений синусового гистиоцитоза и чрезмерной активацией В-зависимых зон с накоплением в них плазматических клеток.

3. Введение БИТО и а-1-КГП обожженным животным ограничивает лимфоцитолиз и атрофические процессы в их лимфоидных органах, ускоряет регенерацию иммунокомпетентных клеток, резко стимулируя прежде всего гуморальное звено иммунного ответа.

4. Положительный терапевтический эффект применения БИТО и а-1-КГП при ожоговой болезни в определенной мере связан с ограничением токсической и аутоиммунной аутоагрессии стимуляцией этими препаратами компенсаторных процессов в органах-исполнителях иммунной системы.

список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Морфологическая характеристика раневого процесса под влиянием дезинтоксикационной терапии в эксперименте // Обмен веществ в норме и патологии. Тез. докл. конф., - Тюмень, 1992. - С. 47, в соавторстве с Коваленко В.П., Саломатиным В.В.

2. Результаты исследования экспериментальной ожоговой раны // Сборник статей молодых ученых. - Челябинск, 1993, -

3. Характеристика терапевтического патоморфоза экспериментальной ожоговой раны // Актуальные вопросы патологической анатомии; Тез. докл. конф, - Курган, 1993. - С. 147-148.

4. Термические контактные дерматиты - постморфологические изменения в эксперименте // Актуальные проблемы дерматологии и венерологии: Тез. докл. конф. -Екатеринбург, - 1994. - С. 43.

5. Патоморфологическая характеристика иммунных органов при коррекции термической травмы препаратами БИТО и а-1-КГП // Актуальные вопросы практической и теоретической медицины. - Челябинск, 1995. - С. 60, в соавт. с Сачко В.Н.

Заказ 1542 от 28/VI-96r. Макет сверстан в издательской системе PageMaker. Гарнитура Arial Суг. Тираж 100 экз.