Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Морфофункциональное исследование механизмов воспаления в коже крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением

00505834и САВЧЕНКО ИРИНА АЛЕКСЕЕВНА

На правах рукописи

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ ВОСПАЛЕНИЯ В КОЖЕ КРЫС ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ УЛЬТРАФИОЛЕТОВЫМ ИЗЛУЧЕНИЕМ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 6 МАЙ 2013

Омск-2013

005058340

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Рукша Татьяна Геннадьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО ОмГМА Минздрава России, заведующий кафедрой патофизиологии с курсом клинической патофизиологии

Долгих Владимир Терентьевич

доктор медицинских наук, доцент, ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздрава России, заведующая

кафедрой патологической физиологии Жданова Екатерина Васильевна

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кемеровская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «14» мая 2013 г. в ^часов на заседании диссертационного совета Д 208.065.04 при Омской государственной медицинской академии по адресу: 644043, г.Омск, ул. Ленина, д. 12, тел. (3812) 23-13-32.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан апреля 2013г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Е.А. Потрохова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Ультрафиолетовое излучение (У ФИ) является одним из наиболее распространенных факторов внешней среды, воздействующих на кожу. УФИ может являться причиной развития таких дерматологических заболеваний, как дискоидная красная волчанка, солнечное лентиго, фотостарение кожи, фотодерматозы. Однако наиболее значимым является участие УФИ в формировании как доброкачественных, так и злокачественных новообразований кожи (Аравийская Е.Р., 2003). В свою очередь, заболеваемость доброкачественными, а также злокачественными новообразованиями кожи в Российской Федерации имеет тенденцию к росту, отражая общемировые тенденции. Параллельно отмечается увеличение показателей смертности от злокачественных новообразований кожи (Гырылова С.Н., 2009). Все это позволяет расценивать ультрафиолетовое излучение как важный фактор, приводящий к развитию онкологический заболеваний кожи, которые в настоящее время рассматриваются как серьезная медико-социальная проблема, наносящая значительный экономический ущерб обществу.

Известно, что ультрафиолетовое излучение вызывает активацию, изменение синтеза или функционирования большого числа молекул, включающих активные формы кислорода, цитокины, молекулы адгезии. В свою очередь, активные формы кислорода вызывают активацию внутриклеточных механизмов передачи сигнала. К одним из основных относится сигнальный путь МАРК (митоген-активируемых протеинкиназ), который играет одну из ключевых ролей в реализации воспалительного характера реакций в коже при воздействии УФИ (Ganington Т., 1999).

К белкам, находящимся под МАРК-регуляторным контролем, относится фоточувствительный белок TSPO, которому приписывается широкий спектр функций, таких как модуляция иммунологических реакций; активация микроглии, связанная с повреждением головного мозга и ишемией; воспаление; реакция на стресс; регулирование синтеза стероидов; апопгоз; регуляция митохондриального мембранного потенциала; регуляция дыхательной цепи митохондрий; модуляция кальциевых каналов; участие в росте и дифференцировке клеток, а также распространении раковых клеток (Papadopoulos V., 2004; Veenman L., 2007).

TSPO является внутриклеточным белком с преимущественной митохондриальной и ядерной локализацией (Decaudin D., 2002). Показано участие TSPO в регуляции пролиферации клеток, дифференцировки, апоптоза и ионного транспорта. Также выявлено, что лиганды TSPO при воспроизведении воспаления в эксперименте могут вносить свой вклад в развитие воспаления (Morgulis M.S., 2002).

Цель работы

Выявить роль белка-переносчика (TSPO) и функционально связанных с ним белков в развитии воспаления в коже, индуцированного воздействием УФИ.

Задачи исследования

1. Определить уровни и особенности экспрессии белков PCNA, TSPO, StAR и ММП-9 после воздействия УФИ в дозах 200 - 600 Дж/м2.

2. Установить характер влияния ультрафиолетового излучения на динамику апоптоза клеток кожи при развитии фотоиндуцированного воспаления.

3. Выявить особенности ангиогенеза, интенсивности периферического кровообращения, а также морфологических показателей, ассоциированных с изменениями дермального кровотока, в коже после воздействия УФИ в дозах 200 — 600 Дж/м2.

4. Оценить характер выраженности воспалительного процесса и определить уровни и особенности экспрессии РСЫА, ТБРО, морфологического состояния сосудов дермы, выраженность изменений перфузии при локальном использовании лиганда ТБРО диазепама.

Научная новизна

В представленной работе впервые исследован характер экспрессии ТБРО в клетках кожи, подвергшейся воздействию УФИ, в том числе после локального применения лиганда ТвРО - диазепама. Впервые охарактеризовано изменение функционально связанного с ТБРО белка 81АК после воздействия УФИ, а также выявлено однонаправленное изменение последнего с маркером пролиферации клеток РСТЧА.

Впервые определена возможность использования лиганда ТЭРО в терапии воспаления на экспериментальной модели.

Научно-практическая значимость работы

Полученные экспериментальные данные указывают на возможность использования ТБРО, 81АК, ММП-9 в качестве новых молекулярных мишеней при воспалении, индуцированном воздействием повреждающих факторов в коже, в частности, ультрафиолетовым излучением.

Кроме того, показано, что модуляция функциональной активности ТБРО требует дальнейшего разъяснения как возможный новый подход к патогенетическому лечению изменений в коже, вызванных воздействием ультрафиолетового излучения.

Положения, выносимые на защиту

1. Ультрафиолетовое излучение оказывает двунаправленное действие в коже на экспрессию Т8РО и уровень Р(ЖА: в низких дозах индуцирует увеличение тестируемых параметров, в более высоких - снижение, при этом вызывает изменение уровня 8(А11— белка, функционально связанного с ТвРО.

2. Максимальным апоптоз-модулирующим действием УФИ обладает на клетки дермы. Изменения уровня фоточувствительного апоптозассоциированного белка ТЙРО не связаны с выраженностью апоптоза в коже крыс после воздействия УФИ, что указывает на возможное отсутствие роли ТБРО в реализации апоптоза в коже после воздействия УФИ.

3. Использование лиганда ТЭРО диазепама для коррекции изменений вследствие воздействия УФИ, вызывает регресс воспалительного процесса (снижение эритемы, а также выраженности вторичных морфологических элементов), индуцирует нормализацию показателей клеточной пролиферации, ТЭРО, микроциркуляции в коже, а также препятствует развитию в дерме морфологических изменений, в частности, лимфоцитарной инфильтрации дермы, что может быть в дальнейшем использовано в терапии заболеваний кожи, вызванных УФИ.

Внедрение результатов исследования

Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии им. проф. В.В. Иванова Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии лечебного факультета Государственного бюджетного образовательного

учреждения высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на заседании кафедры патологической физиологии имени проф. В.В. Иванова Красноярского государственного медицинского университета имени проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, на XVI Межгородской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2010 г.),7-й и 8-й научно-практической конференции «Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири» (Красноярск, 2009,2010 гг.)

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе в 4 журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования статей, содержащих результаты диссертационных исследований.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 110 страницах текста, состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Работа содержит 22 рисунка, 4 таблицы. Библиографический список содержит 174 источника, из которых 33 отечественных и 141 иностранных авторов.

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации

Автором самостоятельно проведен информационный поиск и составлен литературный обзор по теме диссертации, были сформулированы цели, задачи научного исследования.

Все исследования были выполнены автором единолично. Исследования проводились на кафедре патологической физиологии им. проф. В.В. Иванова Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на кафедре патологической физиологии им. проф. В.В. Иванова Государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации и утверждены на локальном этическом комитете ГБОУ ВПО КрасГМУ (№34/2011).

Моделирование действия УФИ in vivo осуществлялось на белых половозрелых беспородных крысах-самцах массой 220-240 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Исследование выполнено с соблюдением основных принципов, изложенных в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (2007), а также в приказе МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики».

Выделены следующие группы обследуемых и контрольная группа:

• группа 1 — крысы, подвергшиеся облучению в дозе 200 Дж/м2 с биопсией кожи через 24 часа (п=12);

• группа 2 - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 200 Дж/м2 с биопсией кожи через 72 часа (п=12);

• группа 3 - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 400 Дж/м2 с биопсией кожи через 24 часа (п=12);

• группа 4 - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 400 Дж/м2 с биопсией кожи

через 72 часа (п=12);

• группа 5 - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 600 Дж/м2 с биопсией кожи

через 24 часа (п=12);

• группа б - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 600 Дж/м2 с биопсией кожи

через 72 часа (п=12);

• контрольная группа (п=13).

В качестве источника ультрафиолетового света использовалась лампа с длиной волны 240-400 им. У животных в области предполагаемого воздействия УФИ предварительно удалялся волосяной покров на участке размером 4x4 см. Время облучения 20 секунд соответствовало дозе 200 Дж/м2, 40 секунд - 400 Дж/м2, 60 секунд - 600 Дж/м2.

Схема экспериментальной работы представлена на рисунке 1.

Морфологические методы исследования

Приготовление гистологических препаратов и окрашивание гематоксилином и эозином

Взятие биопсии размером 1x1 см кожи у крыс проводилось под местной анестезией — 2% раствор лидокаина внутрикожно. Биоптаты кожи фиксировались в 10% нейтральном забуференном формалине с последующей заливкой в парафин. В дальнейшем изготавливались гистологические срезы толщиной до 5 мкм. Производилась окраска гематоксилином и эозином. Оценивались общая структура ткани и первичные морфологические изменения.

Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимическое исследование проводилось по стандартным протоколам (Brown D., 1996). Проводилась демаскировка антигена с помощью системы Retrievagen (Novocastra). Гистологические срезы инкубировались с моноклональными антителами к TSPO в разведении 1:200 (Trevigen), PCNA (1:200, Novocastra), StAR (1:100 Abeam, UK), ММП-9 (1:100, Abeam). Для визуализации комплекса антиген-антитело использовалась система детекции NovoLink Polymer Detection System (Leica Microsystems, Newcastle, United Kingdom). В дальнейшем срезы докрашивались гематоксилином. Подсчет положительно окрашенных клеток производился при увеличении в 600 раз с помощью микроскопа OlympusBX-41 с видеонасадкой Sanyo и компьютерной программы Infinity Analyze Software (V.4.6.0). Оценивалось количество положительно окрашенных клеток на 100 клеток эпидермиса.

Для каждой группы в дерме при увеличении в 600 раз с помощью микроскопа Olympus оценивалось количество сосудов, их диаметр (с помощью микрометра), число PCNA+ клеток в эндотелии сосудов, периваскулярная инфильтрация лимфоцитами в 10 полях зрения.

Детекция апоптоза

Для 6-й группы (доза облучения 600 Дж/м2 , биопсия кожи через 72 часа) определялся уровень апоптоза методом TUNEL (TDT-mediated dUTP-biotinnickend-labeling). Окрашивание с целью определения TUNEL+ клеток производилось согласно протоколам производителя (MebstainApoptosiskitDirect, <dmmunotech»). При флуоресцентной микроскопии оценивалось число TUNEL+ клеток в 10 полях зрения.

Лазерная допплеровская флоуметрия

Исследовался микроциркуляторный кровоток (МК) на боковой поверхности туловища крысы, подвергшейся воздействию УФИ, с помощью лазер-допплеровского флоуметра (ЛДФ) JIAKK-02 «Transonic» с регистрацией, записью на компьютере и последующим вычислением средней величины перфузии. Измерение данного показателя определяли у всех групп через 24 часа, у 2-й, 4-й, 6-й через 48 и 72 часа.

На следующем этапе было сформировано две группы:

• группа 1 - контрольная группа (п=12);

6

• группа 2 - крысы, подвергшиеся облучению в дозе 600 Дж/м2 с биопсией кожи

через 72 часа (п=12);

Во 2-й группе облучению подвергались два участка кожи крысы с противоположных сторон. На один участок после этого применяли 0,2% диазепам из расчета 0,15 мг/кг массы в виде мази. Для противоположной стороны — вазелин в качестве плацебо. Лечение проводилось в течение трех дней: в день облучения, через 24 часа, через 48 часов. Взятие биопсии осуществлялось через 72 часа после облучения у опытной и контрольной групп.

Дальнейшие действия аналогичны первому этапу. Проводилось иммуногистохимическое исследование с моноклональными антителами к РСЫА и Т8РО; измерение уровня перфузии в день облучения, через 24, 48 и 72 ч. после облучения; для каждой группы в дерме оценивалось количество сосудов, их диаметр, число РСЛЧА+ клеток в эндотелии сосудов, периваскулярная инфильтрация лимфоцитами в 10 полях зрения.

Схема экспериментальной работы представлена на рисунке 2.

Статистическая обработка результатов

Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований проводилась с использованием ^критерия Сгьюдента, Р критерия Манна-Уитни для непараметрических множественных сравнений, W критерия Уилкоксона для сравнения наблюдений до и после лечения, коэффициента ранговой корреляции Спирмена, Н критерия Крускала-Уоллиса для сравнения нескольких групп. Выборочные параметры, приводимые в таблицах, имеют следующие обозначения: М — среднее, в — стандартное отклонение, а — достигнутый уровень значимости, п - объем анализируемой группы.

~_^_^

Рисунок 5. Экспрессия ТЭРО в нормальной коже, ув. х400. Стрелками указаны ТЭРО+ клетки.

Ко^гтрояь irpvWKS ¿группа 3'.¡уупг.г 4:группз Srpymia бгрупп-з

♦-достоверно по сравнению с контрольной группой, а=0,01.

Рисунок 6. Уровни экспрессии TSPO в здоровой коже и коже, подвергшейся воздействию УФИ в дозе 200-600 Дж/м2 (М±т).

В образцах кожи, подвергшейся воздействию УФИ в дозе 200-600 Дж/м2, TSPO+ клетки также выявлялись во всех слоях эпидермиса, локализация рецептора сохранялась перинуклеарная; в дерме TSPO+ клетки визуализировались в фибробластах, плазматических клетках, лимфоцитах (особенно периваскулярно), в устьях волосяных фолликулов, сальных и потовых железах, а также их протоках.

Число TSPO+ клеток в нормальной коже составило 77,6 на 100 клеток эпидермиса. Достоверное увеличение уровня экспрессии рецептора происходило в 1-й и 2-й группах. В 5-й и 6-й группах регистрировалось снижение экспрессии рецептора (а=0,01) (Рисунок 6). Таким образом, регистрировался двоякий эффект УФИ на уровень TSPO в клетках - в низких дозах УФИ вызывало увеличение уровня TSPO, в то время как в более высоких -снижение уровня исследуемого белка.

В связи с тем, что показано участие TSPO в регуляции клеточной пролиферации, апоптоза, нами были исследованы изменения данных процессов в коже крыс после воздействия УФИ. Определение PCNA (ядерного антигена пролиферирующих клеток) было использовано в качестве маркера для оценки интенсивности клеточной пролиферации (Dietrich D.R., 1993).

При проведении гистологического исследования в препаратах здоровой кожи крыс при оценке экспрессии PCNA с помощью иммуногистохимического метода, было выявлено: в эпидермисе нормальной кожи ядра PCNA+ клеток окрашивались в коричневый цвет. Отмечалась преимущественная локализация данных клеток в базальном

Рисунок 7. Экспрессия РСЫ А в нормальной коже, ув. х400. Стрелками указаны ядра РС1ЧА+ клеток

"-достоверно по сравнению с контрольной группой, а=0,01.

Рисунок 8. Уровни экспрессии PCNA в здоровой коже и коже, подвергшейся воздействию УФИ в дозе 200-600 Дж/м2 (М±т).

Число РСЫА+ клеток в нормальной коже составило 14,1. Достоверное увеличение уровня РСИА регистрировалось в 1-й группе, во всех остальных группах определялось снижение интенсивности клеточной пролиферации (а=0,01). Максимально низкий уровень РСКА определялся в группе, подвергшейся облучению в дозе 600 Дж/м2 с биопсией через 72 часа (Рисунок 8).

При вычислении коэффициента ранговой корреляции Спирмена отмечалась положительная корреляционная связь между изменениями интенсивности клеточной пролиферации, определяемой по экспрессии PCNA, и экспрессией ТБРО (1=0,96, а=0,02). Повышение показателей ТБРО и РСМА наблюдались через 24 часа после облучения в дозе 200 Дж/м2, при этом облучение в дозе 600 Дж/м2 с биопсией кожи через 72 часа вызывало снижение данных показателей до минимальных значений (Рисунок 9).

100 V мг)

*

•* ^J, ............. Я6.4 *

73»3 mi ^

w .10 , Л _ W *

-TsPO •»PCNA

i групп.) ': :pyni¡;i

"-достоверно по сравнению с контрольной группой, а=0,01.

Рисунок 9. Изменение уровня экспрессии PCNA и TSPO после УФИ в дозе 200-600 Дж/м2.

Таким образом, ультрафиолетовое излучение оказывало одинаковое двунаправленное действие в коже на экспрессию TSPO и показатели интенсивности клеточной пролиферации. В дозе 200 Дж/м2 ультрафиолетовое излучение индуцировало увеличение тестируемых параметров, в дозах 400-600 Дж/м2, наоборот, вызывало снижение экспрессии TSPO и PCNA.

При детекции апоптоза методом TUNEL получены следующие данные: среднее количество апоптотических клеток, выявленных в контрольной группе, равно 1,1 на 10 полей зрения; в группе, подвергавшейся УФИ в дозе 600 Дж/м2, - 5,5 на 10 полей зрения

(Рисунок 11). __

¡ ................................................*

""" № »i 6 —.................. - I..............

Контроль Опыт

Как было сказано ранее, при визуальном осмотре через 24-48 часов после УФИ на облученном участке кожи развивались эритема и отек, в дальнейшем - микроэрозии, корочки и шелушение. Выявлено, что на участках кожи, где использовался диазепам, эритема и отечность кожи были менее выражены, корочки и микроэрозии отсутствовали.

На данном этапе оценивалось число РСКА+ и ТЭРО+ клеток в коже после действия УФИ на контрольном участке и участке, подвергшемуся лечению диазепамом. УФИ в дозе 600 Дж/м (3 минимальных эритемных дозы) вызывало уменьшение экспрессии ТБРО и РСЫА по сравнению с контрольной группой (а=0,01). Диазепам индуцировал статистически достоверное увеличение уровня ТЙРО по сравнению с группой, не подвергавшейся лечению. Уровень РСКА увеличивался по сравнению с группой, где выполнялось облучение кожи ультрафиолетовым излучением без диазепама (а=0,01) (Таблица 3).

Таблица 3

Уровни экспрессии Т8РО и РС^ после воздействия диазепамом_

Контроль УФИ УФИ + диазепам

% РСЫА+ клеток/100 клеток эпидермиса 14,1 ±4,2 4±0,9" 11±1,8*

% Т8РО+ клеток/100 клеток эпидермиса 77,6±9,1 62±6,4" 69±5,7**

# - достоверно по отношению к контролю, а=0,01.

* - достоверно по отношению к УФИ, а=0,01.

По данным допплеровской флоуметрии величина перфузии в нормальной коже составила 25,8±2,6 пф.ед. При измерении периферического кровообращения после облучения увеличивалась более чем в два раза (56,2±18,4 пф.ед.). Наблюдалось достоверное снижение перфузии до уровня контроля при использовании диазепама через 24ч. (22±2,1 пф.ед.), 48ч. (28,5±4,6 пф.ед.) и 72 ч. (20,0±5,1 пф.ед.) после облучения (а-0,05) (Рисунок 20).

#

* * *

■

1: ■И В

■

УФИтдиззелам, уфт-диззепам, уФИтдиэзешм,

Рисунок 20. Показатели перфузии в нормальной коже крыс, после воздействия ультрафиолетовым излучением и при применении диазепама через 24-72 ч. после облучения.

# - достоверно по отношению к контролю, а=0,01.

* - достоверно по отношению к УФИ, а=0,01.

При морфомегрии сосудов дермы выявлено: средний диаметр сосудов дермы в 10 полях зрения в нормальной коже составил 15,3 мкм, число РСЫЛ клеток - 3,5 на 100 клеток эпидермиса, уровень периваскулярной инфильтрации лимфоцитами 5,9 на 10 полей зрения. Достоверное увеличение данных параметров регистрировалось в группе, подвергшейся воздействию УФИ (а=0,05). В участках кожи, где применялся диазепам, данные показатели клеток оставались на уровне контроля (а=0,05) (Таблица 4).

Таблица 4

Особенности морфологии сосудов дермы после воздействия УФИ и _воздействия диазепамом_

Количество сосудов И, мкм РОЧА+в эндотелии Лимфоциты в поле зрения

Контроль 3,7±1,2 15,3±3,4 3,5±0,4 5,9±0,6

УФИ 4,3±1,3 24,9±1,9" 4,9±0,5* 8,1±1,1*

УФИ+диазепам 4,3±0,6 17±3,3* 3,6±0,4# 5,9±1,9#

Достоверно по отношению к контролю, а=0,05.

* Достоверно по отношению к УФИ, а=0,05.

Подводя итог вышесказанному, следует отметить, что в данном исследовании были оценены уровни нескольких белков в коже после воздействия ультрафиолетовым излучением, которые находятся под МАРК регуляторным контролем и участвуют в реализации фотоиндуцированного воспаления в коже. Было выявлено, что изменение уровня данных белков связано с формированием воспалительного процесса, что может являться свидетельством участия данных белков в развитии реакций в коже после воздействия УФИ.

И также можно предположить, что диазепам посредством взаимодействия с ТЭРО реализует противовоспалительный эффект в коже, нивелируя действие активных форм кислорода, возникающих в результате действия УФИ. Выявленные данные могут быть использованы для определения новых молекулярных мишеней для терапии состояний, вызванных воздействием УФИ.

ВЫВОДЫ

1. При воздействии ультрафиолетового излучения в дозах 200-600 Дж/м2 происходит двунаправленное изменение экспрессии ТвРО и уровня РС1ЧЛ в коже - в низких дозах УФИ индуцирует увеличение тестируемых параметров, в более высоких -вызывает снижение.

2. Уровни ТБРО и 81АК — белка, функционально связанного с ним, при развитии фотоиндуцированного воспаления изменялись различным образом, что указывает на разнонаправленную функциональную активность этих белков в коже при данном процессе.

3. Повышение уровня апоптотических клеток после воздействия УФИ в дозах 200 -600 Дж/м2 наблюдается только в дерме, но не в эпидермисе. Изменения уровня фоточувствительного апоптозассоциированного белка не связаны с выраженностью апоптоза в коже крыс после воздействия УФИ, что указывает на возможное отсутствие роли Т8РО в реализации апоптоза в коже после воздействия УФИ в вышеуказанных дозах.

4. Состояние микроциркуляции кожи после воздействия УФИ характеризуется повышением уровня перфузии, изменением морфологических показателей, ассоциированных с изменениями дермального кровотока (вазодилатацией и неоангиогенезом), а также повышением уровня ММП-9.

5. Диазепам при нанесении на кожу, подвергавшуюся воздействию УФИ в дозе 200 — 600 Дж/м2, вызывает изменение до уровня нормальных показатели клеточной пролиферации, Т8РО, микроциркуляции в коже, а также препятствует развитию в дерме морфологических изменений, характерных для фотоиндуцированного воспаления, что может быть в дальнейшем использовано в терапии фотозависимых заболеваний кожи.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Т8РО, 81АЯ, ММП-9 могут быть использованы в качестве маркеров выраженности патологических изменений кожи после воздействия УФИ.

2. Диазепам через TSPO-опосредованный механизм снижает выраженность признаков фотоиндуцированного воспаления в коже, что может быть использовано для совершенствования терапии заболеваний кожи воспалительного характера.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Василовская Л.А. Изменение уровня клеточной пролиферации в коже после воздействия ультрафиолетовым излучением / JI.A. Василовская, И.А. Савченко, О.М. Шемонаева О.М., В.В. Салмин, Т.Г. Рукша // Актуальные проблемы морфологии: Сборник научных трудов - Красноярск, 2007 - С.30-31.

2. Василовская Л.А. ПБР-опосредованное изменение интенсивности клеточной пролиферации в коже крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением / JI.A. Василовская, И.А. Савченко, О.М. Шемонаева // Материалы 71-й международной итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 130-летию со дня рождения профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА - Красноярск, 2007-С. 104-107.

3. Савченко И.А. Апоптоз клеток кожи после воздействия ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко, Т.Г. Рукша // Актуальные проблемы морфологии: Сборник научных трудов - Красноярск, 2008 - С. 109.

4. Савченко И.А. Применение метода TUNEL для детекции апоптоза клеток кожи после воздействия ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко, Т.Г. Рукша // Актуальные вопросы морфологической диагностики заболеваний: Материалы республиканской научно-практической конференции - Витебск, 2008 - С.187-188.

5. Савченко И.А. Изменение динамики клеточного цикла и микроциркуляции в коже после воздействия ультрафиолетового облучения / И.А. Савченко // Материалы 73-й итоговой студенческой научно-практической конференции с международным участием, посвященная 100-летию со дня рождения академика Л.В. Киренского - Красноярск, 2009 -С.548-549.

6. Савченко И.А. Исследование изменений клеточного цикла, индуцированных воздействием ультрафиолетового излучения / И.А. Савченко // Актуальные вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири: Материалы 7-й научно-практической конференции молодых ученых — Красноярск, 2009 - С. 69-71.

7. Савченко И.А. Морфофункциональное исследование изменений кожи, индуцированных воздействием УФИ / И.А. Савченко // Материалы V Всероссийской Бурденовской студенческой научной конференции - Воронеж, 2009 - С.71-75.

8. Савченко И.А. Изменение морфологических и функциональных параметров в коже крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко // Актуальные проблемы патофизиологии: Материалы XVI межгородской конференции молодых ученых - Санкт-Петербург, 2010 - С.155-156.

9. Рукша Т.Г. Изменение уровня TsPO и оксида азота у крыс при ультрафиолетовом излучении / Т.Г. Рукша, С.Н. Зобова, И.А. Савченко, A.B. Волкова, А.И. Кибальчич, В.Г. Кельберг // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - №3,- С.68-70. (из списка ВАК)

10. Савченко И.А. Изменения микроциркуляции в коже крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко, Т.Г. Рукша, Е.Ю. Сергеева, И.Г. Рагинене // Вопросы патогенеза типовых патологических процессов: Труды II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием - 2010, Новосибирск - С.301-306.

11. Савченко И.А. Исследование изменения экспрессии StAR в коже крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко, Т.Г. Рукша // Актуальные

вопросы охраны здоровья населения регионов Сибири: Материалы 8-й научно-практической конференции молодых ученых - 2010, Красноярск - С.57-58.

12. Савченко И.А. Патогенетическая коррекция морфофункциональных изменений в коже, вызванных воздействием ультрафиолетового излучения Z И.А. Савчепко ZZ Материалы 74-й итоговой студенческой научно-практической конференции с международным участием, посвященная 100-летию со дня рождения профессора А.М. Дыхно - 2010, Красноярск - С.786-787.

13. Савченко И.А. Результаты экспериментального изучения воздействия УФ-облучения на фоточувствительный белок кожи Z И.А. Савченко, Т.Г. Рукша, В.В. Салмин, Л.Д. Зыкова ZZ Вестник дерматологии и венерологии. — 2010. - №3.- С.33-36. (из списка ВАК)

14. Савчепко И.А. МАРК-опосредованная регуляция процессов стероидогенеза в клетках кожи после воздействия ультрафиолетового излучения Z И.А. Савченко ZZ Материалы 75-й итоговой студенческой научно-практической конференции с международным участием, посвященной 80-летию со дня рождения акад. Б.С. Гракова - 2011, Красноярск - С.433.

15. Савченко И.А. Модуляция уровней StAR и матриксной металлопротеиназы-9 в коже крыс ультрафиолетовым излучением / И.А. Савченко, Т.Г. Рукша ZZ Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. — 2011. - №5. -С.12-15. (из списка ВАК)

16. Савченко И.А. Применение лиганда TSPO для коррекции изменений, вызванных воздействием ультрафиолетового излучения / И.А. Савчепко, Т.Г. Рукша ZZ Сибирский медицинский журнал. -2012. -№4,- С. 117-119. (из списка ВАК)

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ

PCNA (proliferating cell nuclear ап^еп)-ядерный антиген пролиферирующих клеток TSPO (Translocator protein) — белок-траснлокатор

StAR (steroidogenic acute regulatory protein) - белок-регулятор стероидогенеза ММП-9 — матриксная металлопротеиназа-9

МАРК (Mitogen activating protein kinase signaling pathway) — сигнальный каскад митоген-активированных протеинкиназ УФИ — ультрафиолетовое излучение

На правах рукописи

САВЧЕНКО ИРИНА АЛЕКСЕЕВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ ВОСПАЛЕНИЯ В КОЖЕ КРЫС ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ УЛЬТРАФИОЛЕТОВЫМ ИЗЛУЧЕНИЕМ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Омск - 2013