Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Морфофункциональная организация лимфатических и кровеносных структур, дренирующих тонкий кишечник, при длительном воздействии фосфорорганического пестицида

•М ;: 9 #

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИЙ НОВОСИБИРСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ГАЙНАНОВА Нурия Камадтдиновна

УДК: 612. 42 : 615. 31 : 546.18 : 615. 099

ШРФ0ФУ1ИЦК0НМЫУЙ ОРГАНИЗАЦИЯ лшжтичвднх н КРОВЕНОСНЫХ СТРУКТУР, ДРИШРУЩИХ ТШКНЯ ЕШЧШ, ПРН ДШВЛЬНШ ВОЗДЕЙСТВИИ ООСФОРОРГАНКЧЕСЯПГО ПЕСТИЦИДА

14. СО. 02 - анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

НОВОСИБИРСК 1992

Работа выполнена в институте клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской Академии медицинских наук.

Научные консультанты: академик РАМН, доктор

медицинских наук, профессор ЕИ. БОРОДИН

доктор медицинских наук, профессор В. Е ГРИГОРЬЕВ

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор М. Д. ШМЕРЛИНГ

доктор биологических наук, профессор М. С. ВИНОГРАДОВА

доктор медицинских наук А. Ю. ЖГЯГИН

Ведущая организация: Институт морфологии человека РАМН

Защита состоится "от/, /X 199 ос г. в фО ч. на заседании специализированного совета Д 084. 52.02 Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института по адресу: г. Новосибирск, Красный проспект, 52.

Автореферат разослан 199 <£т.

Ученый секретарь специализированного совета доцент

А.Н.МАШАК

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуавьшсть исследования. Антропогенные факторы воздействия на окружающую среду вышли за национальные рамки, и в настоящее время экологическая проблема рассматривается в качестве глобальной, имеющей планетарный, транснациональный характер (Бородин Ю. К , 1989; Макарова И. В , 1990; Сидоренко Г. И. и др., 1990; Щздиметов 1й Ш., 1990). В частности, во всем мире ежегодно производится около 2 млн тонн пестицидов (Либерштейн И. И., 1986), что составило в 1986 году в СССР в среднем около 1,9 кг на 1 га пашен, или около 1,4 кг на душу населения (Экология и сельское хозяйство, 1989). В мире используется около 700 химических соединений с высокой пестицидной активностью (Harke H.J., 1989), а общее производство их достигло в СССР в 1990 году 750 тысяч тонн.

В экологическом плане пестициды относятся к наиболее опасным загрязнителям биосферы (Яблоков, А. Е, 1988; Шадиме-товКШ, 1990; Matsumura F., 1985; Wong J. L.. 1987). Катастрофические последствия воздействия пестицидов на здоровье человека выражаются в увеличении заболеваемости и. смертности населения, в том числе детской, сокращении средней продолжительности жизни, генетических отклонениях у значительной части населения С Саноцкий И. Ф., Фоменко В. И., 1979; Мажарова К R , 1989; Голубцов В. И. и др., 1990; Thiele Е., 1987). По данным зарубежных и отечественных исследователей доля ущерба здравоохранению (в виде повышения заболеваемости) в общем ущербе народному хозяйству, наносимым загрязнением окружающей среды, колеблется от 60 до 80 % (Сидоренко Г. И., Балацкий 0. Ф., 1988; Доценко В. А., 1990).

В сельском хозяйстве используется более 220 фосфорорга-нических соединений. Особенно широко они применяются для борьбы с вредителями растений, экто- и эндопаразитами домап-них животных и в быту. По масштабам применения в сельском хозяйстве эти соединения занимают первое место среди пестицидов различных классов и их мировое производство приближа-естя к 200 тыс. тонн в год (Мельников RH., 1987; Промонен-ков Е К. и др.. 1988), причем большая часть их производства

и практического использования приходится на карбофос (мала-тион, фосфотион). Остаточные количества фосфорорганических пестицидов обнаруживаются в пробах продуктов питания, а также в женском молоке (Горчев Г. Г., Джелинек Ч. Ф., 1985; Шар-манов Т. Ш., 1989, 1990; Bianchi A. et al. 1988; Wren J. J.,, 1989). Известно, что фосфорорганические пестициды отличаются избирательной токсичностью к нервной системе, проявляют угнетающее воздействие на эритропоэз с явлениями эритропении и анемии, лимфопении и изменением миелопоэза, нарушают функции желудочно-кишечного тракта, печени, поджелудочной железы, сердечно-сосудистой системы и других физиологических систем организма ( Каган Е С., 1981; Бадаева Л. Е, 1981; $удель-0си-пова и др., 1981 ; Закиров У. Б. и др., 1984; Бонашевская Т.Л, 1987; Николаев С.X и др., 1989). Однако в литературе не освещен вопрос о влиянии фосфорорганических пестицидов на лимфатическую систему и, в частносто, на лимфатическое русло тонкой юшки, в то же время известно, что желудочно-кишечный тракт является одним из главных путей поступления пестицидов, в том числе и карбофоса, в организм ( Шибанов С. Э., 1986; Кеферштайн Ф., Симе Ж., 1987; Клисенко Е А. и др., 1990; Sengarta Е., 1986). После всасывания карбофоса в корни лимфатической системы этот токсин практически в неизмененном виде поступает в центральный верхний брыжеечный лимфатический узел, на примере которого имеется возможность изучить прямое токсическое воздействие препарата на лимфоидную ткань ( Noguchl Т., et al. , 1985).

Вышеизложенное обусловливает актуальность детального изучения различных звеньев лимфатического русла тонкой кишки при воздействии фосфорорганического пестицида (карбофос), т. к. их состояние в значительной мере влияет на обеспечение иммунных реакций организма

Цель* настоящего исследования было изучение влияния фосфорорганического пестицида, на примере карбофоса, на дренажное (лимфатическое и кровеносное) русло тонкой кишки, включая и регионарные лимфатические узлы, в условиях различных режимов хронического отравления. Для достижения указан-

ной цели предполагалось решить слэдущш задачи:

1. Оценить характер гематолимфатических отношений в ворсинке тонкой кишки крысы на основе изучения ультрамикроскопической организации корней лимфатической системы и кровеносных капилляров в различных режимах хронического отравления фосфорорганическим пестицидом.

2. Дать морфофункциональную оценку микроанатомической организации регионарных лимфатичеких узлов тонкой кишки крысы в различных режимах хронического отравления фосфорорганическим пестицидом.

3. Изучить цитоархитектонику регионарных лимфатических узлов тонкой кишки в различных режимах хронического отравления фосфорорганическим пестицидом.

4. Оценить реакции гемато- и лимфомикроциркуляторного русел регионарных лимфатических узлов тонкой кишки на основе изучения их ультрамикроскопической организации после различных режимов хронического отравления фосфорорганическим пестицидом.

1!аучз:зя гаакана результатов ксснздзгздса. Впервые проведено сочетанное морфофункциональное исследование лимфатических и кровеносных структур тонкой кишки в восстановительный период после хронического воздействия малых доз фосфорорганического пестицида Показано, что лимфатические узлы являются мишенями токсического воздействия пестицидов, предполагающих проявление модифицирующего действия на лимфо- и иммуногенез.

Впервые показано, что изменения эндотелиальной выстилки корней лимфатических сосудов ворсинок тонкого кишечника под воздействием фоефорорганических пестицидов имеют тенденции развития атрофических процессов. Предварительное введение допороговых доз вызывает повышение их устойчивости к более высоким дозам ядохимиката (4 ДОК). Впервые обнаружено, что гемато- и лимфомикроциркуляторные русла брыжеечных лимфатических узлов длительно сохраняют структурный след на воздействие фосфорорганического пестицида, но предварительное

введение допороговой дозы карбофоса способствует их частичному восстановлению.

Дана характеристика микроанатомической организации регионарных к месту всасывания брыжеечных лимфатических узлов крыс после хронической интоксикации карбофосом. Показано, что малые дозы фосфорорганичекого пестицида вызывают совокупность общих изменений: отек и уменьшение численности клеточных элементов лимфоидной паренхимы, увеличение пропускной способности, разрастание стромальных элементов, увеличение числа дегенерирующих клеток, появление эритроцитов, уменьшение абсолютной площади паракортикальной зоны.

Показано, что брыжеечные лимфатические узлы после хронической интоксикации в более высоких дозах фосфороргани-ческого пестицида не восстанавливают абсолютную площадь сечения уела и составных структур.

Впервые показано, что предварительное поступление в организм допороговых доз пестицида (в пределах допустимых остаточных количеств) повышает устойчивость лимфоидной ткани к повторным токсическим действиям ядохимиката в более высоких концентрациях. (4 ДОК), тогда как малые дозы (2 ДОК) токсиканта не выявляют эту адаптацию.

Обнаружено, что цитологические реакции регионарных лимфатических узлов тонкой кишки крыс на хроническое отравление карбофосом связаны с увеличением числа дегенерирующих клеток, макрофагов, иммунобластов, плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов, а также гранулоцитов типа тучных клеток и нейрофилов, причем при уменьшении, как правило, числа зо-зинофилов.

Практическая значимость. Сделан существенный шаг к формированию нового научного направления - токсикологической лимнологии. как части экологической лимфологии. Полученные данные могут служить базой для прогнозирования отдаленных последствий воздействия малых доз пестицидов на периферические органы тимо-лимфатической системы для выявления ранних повреждений, обусловленных химическими токсикантами малой интоксикации. Работа ставит своей целью подготовку осно-

вы для разработки профилактических мероприятий и поиска веществ с антитоксическим коррегирувдим действием для восстановления структуры и функции лимфатической системы.

11а 33£££СУ е&йзосятся с&эдук^зэ подтвонив

1. Динамика структурного ответа лимфатической системы (корни лимфатического русла, регионарные лимфатические узлы) зависит от времени, количества, повторяемости и места приложения токсического агента

2. Длительное введение карбофоса в дозе 1 ДОК (допустимое остаточное количество) не выявляет достоверных изменений структурнофункциональной организации дренатзшх систем (лимфатической и кровеносной) тонкой кишки.

3. Длительное введение карбофоса в дозах 2 и 4 ОТ вызывает выраженные дозозависимьге изменения структурнофункциональной организации дренажных систем: атрофические процессы ультраструктурных образований зндотелиаяьных клеток лимфатических и кровеносных капилляров ворсинки тонкой кишки, литоральных клеток синусной системы регионарных лпшфоузлов в отдаленнее сроки; морфологическую перестройку лимфатических узлов, заключающуюся в увеличении объема самих узлов, их синусной системы, площади вторичных лимфоидных узелков,-капсулы; сохранение структурного следа в виде склерозирования лимфоузлов, атрофии их лимфоидной паренхимы, выраженных цир-куляторных нарушений и ультраструктурной перестройки их эн-дотелиальных клеток.

4. Предварительное поступление в организм допороговых доз (1 ДОК) фосфорорганического пестицида не предупреждает нарушений структурнофункциональной организации дренажных систем, вызванных повторным воздействием токсина в дозах 2 и 4 ДОК. Большая доза (4 ДОК) выявляет повышение устойчивости и ускорение восстановления лимфоидной ткани регионарных лш.5-фоузлов тонкой кишки, их гемомикроциркуляторного русла, литоральных клеток синусной системы и эндотелиальной выстилки млечных сосудов ворсинки, что доказывает выявление эффекта структурного "запечатлевания".

АщжЛапия ыахврмалов диссертация. Основные поломзния и результаты были доложены на: 1) 1-ом съезде физиологов Казахстана, Алма-Ата. 13-16 октября 1988 г.; 2) 4-ом Всесоюзном симпозиуме "Веновное кровообращение и лимфообращение", Алма-Ата, 10-13 октября 1989 г.; 3) Республиканской конференции морфологов Казахстана "Ыикрососудистое русло внутренних. органов в условиях патологии и эксперимента", Алма-Ата, •14 сентября 1990 г.; 4) Итоговой научной конференции ученых Семипалатинского зооветеринарного института, Семипалатинск, 8-12 апреля 1991 г.; 5) Республиканской научно-практической конференции ученых и специалистов "научные достижения молодых ученых'и специалистов - животноводству", Семипалатинск, 16-18 октября 1991 г.; 6) Всероссийской научной конференции "Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии", Но-восибирк, 2-4 июня 1992 г.; 7) Объединенном 8аседанш отделов структурных основ лимфатической системы и клинической лимфологии, лаборатории патофизиологии Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и кафедры нормальной анатомии Новосибирского медицинского института 27 октября 1992 г.

Цублкацим. Автором опубликовано 32 научные работы, из них по теме диссертации 11.

Структура к объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста (собственно текста - 275 страниц), состоит из 6 глав, включая обзор литературы, методы исследования, собственные исследования, обсуждение результатов, заключения, выводов. Работа иллюстрирована 1 схемой, 21 таблицей, 29 черно-белыми микрофотографиями, 35 черно-белыми электронограммами, полученными с помощью трансмиссионной электронной микроскопии.

Данная работа является фрагментом комплексного исследования, проводимого в институте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАЫН и на кафедре нормальной анатомии Новосибирского медицинского института по проблеме "Изучить структурно-функциональную организацию лимфатической системы

при экологически ориентированных дестабилизирующих воздействиях и возможности направленного управления ее функций-ми с помощью новых лечебных факторов" (тема 001). Все экспе«-рименты производились на базе отдела микролимфологии института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН (руководитель - д. м. н. , профессор В. К Григорьев). Автор приносит глубокую благодарность за предоставление рабочего места, 8а помощь и консультацию руководителю темы и своим научным консультантам академику РАМН Юрию Ивановичу БОРОДИНУ и д. м. н., профессору В. Я ГРИГОРЬЕВУ.

МАТЕРИАЛ И МВПШ) ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве экспериментальных животных использовали беспородных белых крыс-самцов массой тела 180-200 г, в возрасте 5-6 месяцев.

Для создания экспериментальной модели хронического отравления нами учтены следующие моменты. Во-первых, для исследования был использован один из широко применяемых пестицидов - малатион (карбофос) из группы фосфороргани-ческих пестицидов (Промоненков В. К и др., 1988). Во-вторых, есть необходимость расширения изучения отдаленных последствий действия на организм химических факторов, особенно малой интенсивности (Сидоренко Г.И., 1986; Трахтенберг И.М., 1991). В-третьих, в организм могут поступать достаточно высокие дозы пестицида (Спыну Е. И. и др., 1981; Антонович Е. А. и др., 1985). Более того, контроль остаточных количеств пестицидов осуществляется лишь на 3,4 % сельскохозяйственных продуктов (Мажарова И. В. , 1989). В-четвертых, до 85 7. пестицидов человек получает с продуктами питания (Горчев Г. Г., Джелинек Ч. Ф., 1985; Николаев А. И. и др., 1988; Шарьзанов Т.Е , 1990; Wren J.J. . 1989).

Является установленным, что ДОК - предельно допустимое остаточное количество в продуктах питания для карбофоса колеблется в пределах от 0,1 мг до 3,0 мг на кг сельскохозяйственных продуктов (Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых

продуктов. Справочник. - Ы., 1990). Учитывая, что человек в среднем употребляет 1,5-2,0 кг продуктов (Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов. - Киев, 1988), можно предположить, что в сутки им может быть получено до 2 мг карбофоса, т. е. на 1 кг массы тела - 0,033 мг в сутки. В наших экспериментах этой величине равен 1 ДОК (0,033 мг/кг/сутки).

,Пути всасывания карбофоса в организм (при пероральном введении) позволили в качестве объекта исследования использовать брыжеечные лимфатические узлы - центральный из верхних брьикечных лимфоузлов (Филиппович JL Е , Иванова Е. К., 1975; Mlotti R., 1965; Nicholas L. Т., 1971), взятые у зкпе-риментальных животных после декапитации. Именно эти лимфатические узлы находятся как под непосредственным токсическим прессингом, так и опосредованном воздействии через артериальную кровь продуктами утилизации карбофоса в печени. Кроме того, нельзя не учитывать и нейрорефлекторных влияний на эти лимфоузлы при введении в организм данного ингибитора холи-нэстеразы.

Для создания экспериментальной модели хронического отравления ежедневно в течение месяца с помощь» металлического Бонда вводили перорально эмульсию карбофоса на растительном масле (оливковое). В первой серии опытов доза составила на каждое животное 2 ДОК (0,066 мг/кг массы в сутки). 2о второй серии - 4 ДОК (0,132 мг/кг массы/сутки). Животные получали препарат натощак, всегда в утренние часы, учитывая суточные биоритмы (Летягин А. Ю., 1991). Для исследования возможного влияния предварительного химического контакта животного с пестицидом на реакцию регионарных лимфатических узлов и уль-траструкгуру гемолимфатических отношений животных подвергали воздействию карбофоса по следующей схеме: в течение месяца ежедневно вводили перорально эмульсию карбофоса в дозе 1 ДОК. Через месяц после указанного курса проводили повторное воздействие по схеме серии 1 и 2. Изучение всех групп животных проводили через 1, 7, 14 и 30 суток после хронического отравления в течение месяца. Для морфологических исследований в указанных сериях использовали 270 животных, по 15 крыс

на каждую точку, опыта, группы "норма" - животные, не подвергавшиеся воздействию, но получавшие в течение месяца растительное масло, и "контроль" - животные, подвергнутые воздействию карбофоса в доге 1 ДОК в течение месяца Для отравления животных был испольвован карбофос - эталон, полученный из Взесоюзного научноисследовательского института химических средств защиты растений, содержание действующего вещества -96 X.

Шсле декапитации животных лимфатические узлы фиксировали в жидкости Вуэна в течение 24 часов, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в парафин (Елисеев КГ. и др., 1967). С помощью санного микротома готовили парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм, проведенные через длинную ось лимфатических увлов (Котье А. и др., 1973). Срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином для изучения микроанатомической организации, азур 2 - эозином (Елисеев Е Г. и др. Л1967; ЬакзЬш1пагаз1ггЬап А., 1986; К. Ь.,

1986) для изуй^юга клеточного состава методом светоопти-ческой микроскопии.

Для трансмиссионной электронной микроскопии лимфатические узлы брали у животных из. группы "норма" и через 30 суток после прекращения первичного цикла воздействия карбофоса в дозах 2 и 4 ДОК, а такие после повторного цикла воздействия пестицида в дозах 2 и 4 ДОК. У этих же животных брали по одной тонкой полоске начального отдела тощей кишки. Всего в этих исследованиях использовано 25 яивотных. Материал фиксировали, в 1 %-ном растворе четырехокиси осмия ка фосфатном' буфере (рН 7,3), дегидратировали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в эпон (Уикли К, 1975; Соуапйег Б. В., 1686). Из 5 блоков от каждого лимфатического узла и 5 блоков тошной полоски стенка тощей киски, состоящей из одного ряда ворсянок на ультратснэ£КВ получали полутонкие срезы, окрашивали толуидиновым синий и использовали для выбора нужного участка лимфатического узла и кишечной ворсинки. От каадого блока лимфатического узла было случайным образом отобрано 2 поперечных ультратонких среза через артериальный и 2 - через венозный отделы капилляра, 2 -

через посткапиллярные венулы, 2 ультратонких среза внутренней стенки краевого и 2 - мозгового синусов. От каждого блока кишечной ворсинки (основание) было отобрано 2 ультратонких среза лимфатического капилляра и 2 - венозного отдела кровеносного капилляра. На каждом срезе исследовали по одной клетке. Ультратонкие срезы получали на ультратоме LKB, контрастировали насыпанным водным раствором уранилацетата и цитратом свинца и затем изучали в электронном микроскопе. В качестве дифференциальных критериев артериального и венозного отделов капилляра использовали диаметр поперечного сечения: в артериальном отделе от 2 до 7, в венозном - от 7 до 12 ыкм (Шахламов R А., 1967, 1971). Для дифференцкровки венозного отдела капилляра от посткапиллярной венулы лимфатического узла учитывали наличие высоких эндотелиальных клеток (Ohmann Н. В.1980; Сох J. Н. a. Ford W. L., 1982).

Клеточный состав лимфоидной паренхимы определял!! с помощью окулярной морфометрической вставки, представляющей собой закрытую квадратную тестовую систему, площадью 1600 кв. мкы при увеличении 1080 раз. Морфометрические параметра микроанатомической организации лимфатических узлов определяли с помощью микростереопроектора фирмы "Карл Дейс Иена" (ГДР), на экране которого помещали открытую тестовую систему, выполненную по методике В. К Григорьева, В. Е Гаврилина (1981).

При заборе материала стремились к максимальной стандартизации препаративных процедур при фиксации, проводке и заливке материалов, при контрастировании срезов, которые готовили приблизительно одинаковой толщины.

морфометрические параметры удьтраструктуркой организации клеток определяли путем проецирования негативных изображений профилей сечения последних на открытую квадратную тестовую систему при конечном увеличении 70000 по предложенной методике Ю. И. Бородина и соавторов (1983).

Цифровой материал обрабатывали с помощью системы для морфометрии фирмы "Leitz". фи графическом изображении полученных данных временную ось выражали в логарифмическом масштабе.

результаты щиздоздЕяя и юс

руслэ горсгггск

гкксЗ кхгго гаслэ грогакэсксго отразлшга фссЗрроргык-чесжы

паспэдда!

Электронномикроскопическое исследование показало, что стенка лимфатического капилляра в нижнем отделе ворсинки крысы на поперечном сечении образована 3-4 эндотелиальными клетками с ядрами, резко выбухаквдми в просвет (Шахламов ЕА., Дамерян А. П. , 1982; Камышова К В., 1986). Наши данные подтверждают это положение.

Корни лимфатической системы тонкой кишки играет существенную роль во всасывании пестицидов (ЫодгисЫ Т. et з1., 1985). Проводя детальный анализ ультрамикроскопических структур эндотелиальных клеток лимфатических капилляров кишечной ворсинки крысы после длительного химического воздействия мн пришли к выводу о прямой зависимости отдаленных эффектов от дозы фосфорорганического пестицида. Через 30 суток после прекращения месячного цикла перорального воздействия двукратного увеличения допустимого остаточного количества карбофоса в суточном рационе сохраняется значительный структурный след. Это выражалось в увеличении объема ядер, поверхности кариолеммы, уменьшении суммарного абсолютного объема шероховатого эндоплазматического рет:жулума, абсолютного количества митохондрий со снижением их сухарной поверхности внутренней мембраны (до 4 раз), во внутрикоыло-нентной перестройке комплекса Гольдки, увеличении абсолютного количества цитоплазматических микровезикул на фоне уменьшения люминальных и базальных. Резкое сни;~ние энергетических возможностей клеток приводило к наруиению синтеза биологических мембран, активно участвующих в выделении из :*лз-ток недоокисленных продуктов обмена и поддержания транспорта от цитоплазматической сети к пластинчатому комплексу, что приводило к развитию больного количества лизосом (Сапунов Ю. С. и др. , 1989). Одновременное нарушение биоэнергетических

процессов предполагало эначительное угнетение трансэндотели-ального переноса В отдаленном периоде после цикла воздействия 4-х кратным увеличением допустимого остаточного количества карбофоса в суточном рационе структурный след характеризовался дополнительно отеком клеток и уменьшением их поверхностно-объемных отношений, что свидетельствует о затруднении трансэндотелиального обмена, особенно из интерсти-циального пространства в просвет сосуда (Пзстерева ЕА., 1968). Однако эндотелиальные клетки отличались соответствием объема шероховатого эндоплазштического ретикулума и количества прикрепленных рибосом исходному уровню.

Анализ морфометрических параметров ультрамикроскопических структур зндотелиальных клеток лимфатического капилляра ворсинок тонкой кишки черев месячный перерыв после первичного цикла хронического отравления крыс пестицидом в дозе 1 ДОК не обнаружило достоверных изменений. Тем не менее у этих крыс проведение повторного цикла длительного воздействия карбофоса в догах 2 и 4 ДОК выявило существенную разницу в отдаленных ответных реакциях изучаемых клеток. Малая дога вызывала значительное увеличение (в 1,6 раза) объема самих клеток эндотелиальной выстилки лимфатического капилляра за счет возрастания объема их цитоплазмы и ядер. При этом индекс ядерно-цитоплазматических отношений не менялся, но уменьшалась поверхность плазмалеммы. Наряду с этим увеличивалась поверхность кариолеммы, на фоне уменьшения микровезикул, связанных с базальным отделом плазмалеммы, возрастало число цитоплазматических, количество прикрепленных рибосом, повышался абсолютный объем комплекса Гольджи га счет резкого увеличения вакуолярного компонента и уменьшения пластинчатого. Хотя количество митохондрий восстанавливалось, их объем увеличивался при уменьшении поверхностно-объемных отношений. Однако поверхность внутренней мембраны митохондрий и их суммарная длина профиля среза увеличивалась. Таким образом, очевидна гипертрофия зндотелиальных клеток, которая сопровождается возрастанием энергетических возможностей эндотелиоцитов лимфатического капилляра кишечной ворсинки. Эти энерговапасы, очевидно, испольгуются клетками

на синтез дополнительного количества биологических мембран. С необходимостью синтеза большого количества биологических мембран связано заметное увеличение объема комплекса Гольдяи (Уэйли У.. 1978; ВеЬпе^ а еЬ а1., 1974). Эндотел1!оциты в этот период нуждаются в обновлении и синтезе невосстановленной поверхности плазмалеммы. Однако, эта доза препарата сохраняла структурный след в виде нарушения транспорта веществ из интерстициального пространства в полость лимфатического капилляра как путем микровезикулярного переноса, так мембранными переносчиками и диффузионным путем.

Повторное воздействие карбофоса в дозе 4 ДОК характеризовалось восстановлением объема зндотелиальных клеток лимфатического капилляра при уменьшенном объеме цитоплазмы и значительном увеличении ядер. При этом индекс ядерно-цитоплаз-матических отношений возрастал до 2,4 раза. Одновременно возрастали поверхности всех видов мембран, особенно суяззст-венно суммарная поверхность внутренней мембраны митохондрий. Резко увеличивалось число цитоплазматических и базальнкх микровезикул, прикрепленных рибосом, митохондрий и их объем, суммарный объем шероховатого эндоплазматического ретикуяума и комплекса Гольджи за счет вакуолярного компонента Следовательно, отмечалась значительная гипертрофия мзмбран и ор-ганелл эндотелиоцитов с активизацией синтетических и трансцеллюлярных процессов, существенное накопление энерге-тичеких запасов (Заварзин А.А. , Базарова А.Д., 1982; Песте-реваКА., 1988).

Токсический прессинг через 30 суток после первичного цикла отравления характеризовался расширением просвета венозного. отдела капилляра кишечной ворсинки, а также площади его поперечного сечения. Внутриструктурные изменения зндотелиальных клеток при воздействии меньшей дозы карбофоса оказались более существенными - наблюдалось уменьшение объема цитоплазмы клеток, их поверхности плазмалеммы, значительное угнетение функционального состояния митохондрий. Воздействие обеих доз препарата вызывало увеличение количества микровезикул, связанных с базальной поверхностью клеток, но уменьшение люминальных и цитоплазматических, т. е. при уменьшении

микровезикулярного транспорта сохранялся перенос веществ из интерстициального пространства в полость кровеносного капилляра Кроме того, отмечено значительное понижение количества рибосом, объема шероховатого эндоплазматического ретикулума, комплекса Гольджи, ответственных за синтез, транспорт и утилизацию продуктов обмена в клетках, за обмен различных отделов клетки мембранными компонентами (Kessel К.G., 1971, 1973). Уменьшение числа митохондрий, суммарной поверхности их внутренней мембраны указывало на существенное падение энергетических возможностей клеток (Фрей-Висслинг А., 1976; Nakai V., Natori S., 1987).

Повторное воздействие карбофоса в дозе 2 ДОК выявляло несколько иную направленность структурного следа и характеризовалась увеличением площади поперечного сечения венозного отдела капилляра при восстановлении его внутреннего просвета Это связано с ростом объемов эндотелиальных клеток за счет цитоплазмы и ядер. Параллельно увеличивались поверхности плазмалемм и кариолемм, наружной мембраны митохондрий, суммарный объем шероховатого эндоплазматического ретикулума, число микровезикул, связанных с люминальным отделом плазма-леммы. Однако количество рибосом было снижено и особенно значительно митохондрий вместе с их 'суммарной длиной профиля среза внутренней мембраны. Следовательно, хотя отмечалась гипертрофия эндотелиальных клеток венозного отдела капилляра кишечной ворсинки при повторном воздействии малой дозой пестицида, но энергетичекие ресурсы клеток еще не достигали контрольных через 30 суток после прекращения отравления.

Повторное воздействие пестицида в большей дозе в отдаленном периоде характеризовалось более значительным, в сравнении с меньшей дозой токсина, увеличением площади поперечного сечения венозного отдела капилляра, его внутреннего просвета. Изменения со стороны зндотелиоцитов и их структурных компонентов отличаются значительным повышением морфо-функциональных показателей митохондрий - резко возрастало их количество, суммарная поверхность внутренней мембраны, поверхностно-объемные отношения. Последнее несомненно способствовало улучшению обмена через их наружную мембрану

(Яост X,, 1975; Jahn S. et al., 1985). В этих экспериментах наблюдалось более значительное возрастание суммарного абсолютного объема шероховатого эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи, а также количества прикрепленных рибосом, характеризующих синтетические возможности клеток.

Вышеизложенное позволяет предположить, что длительное воздействие пестицида оставляет неоднотипный структурный след на ультрамикроскопическом аппарате эндотелиальных клеток лимфатических и кровеносных капилляров ворсинки тонкой кишки крысы. Этот эффект имеет количественные и качественные различия в зависимости от дозы препарата и адаптированности организма Малая доза (2 ДОК) карбофоса повреждает в меньшей степени ультраструктуру эндотелиоцитов лимфатического капилляра, но более существенно венозного отдела кровеносного капилляра В первую очередь от токсина страдают митохондрии: снижается количество, отмечается их набухание и уменьшение крист. Кроме того, угнетается трансцеллюлярный обмен. Большая доза (4 ДОК) пестицида оказывала более значительный негативный эффект на эндотелиальные клетки лимфатического капилляра, который заключался в атрофических процессах их ультраструктурных образований. Повторное действие препарата существенно изменяло картину структурного следа, наблюдаемого у интактных животных. Можно предположить выявление феномена "запечатлевания", вызванного длительным предварительным введением карбофоса в организм животных в допороговой дозе. Особенно ярко выявлялось "запечатлевание" после повторного воздействия пестицида в большей дозе, что обнаруживалось в лимфатических и кровеносных капиллярах кишечной ворсинки в виде значительной гипертрофии клеток эндотелиальной выстилки и ее ультраструктурных образований через месяц после прекращения курса отравления.

Сфугггургго^ушцжншгшш организация рэгзжтркьк

js3£$aTH4eciafx узлов тозгюа тезе! црм хранячэскш отравления фосОороргашяескш гсэстицадаг

Жирорастворимые пестициды . при пероральном поступлении,

пройдя эпителиальный слой кишечника, попадают в лимфатические капилляры кишечных ворсинок, ватем оттекают в брыжеечные лимфатические узлы, где, можно предположить, происходит их определенное инактивирование.

Учитывая, что реакция лимфатичекого русла в условиях дестабилизации является одним из тонких показателей адаптивных потенций организма и поддержания тканевого гомеостаза (Бородин Ю. И., 1988,. 1989; Григорьев К Е и др., 1989), а лимфатический путь играет важную роль во всасывании пестицидов, в наших экспериментах исследовали центральный брыжеечный лимфоузел через 1, 7, 14 и 30 суток после прекращения первичного и повторного циклов воздействия токсина в дозах 2 ДОК и 4 ДОК.

В физиологических условиях площадь сечения брыжеечного лимфатического узла крыс-самцов составила 5,44 + 0,41 кв. мм. Хроническое отравление фосфорорганическим пестицидом в дозах, превышающих в 2 и 4 раза допустимое остаточное количество в суточном рационе, изменяет конструкцию регионарных для тонкой кишки лимфатических узлов - их внутреннюю структуру, численную плотность и цитологический профиль. Степень и глубина изменений зависят от дозы ядохимиката, от струк-турнофункциональной особенности брыжеечных лимфоузлов, связанных со спецификой функций тонкого кишечника, а также подготовленности лимфоузла к повторным воздействиям.

Полученные данные позволили выявить отсутствие достоверных морфофункциональных изменений брыжеечного лимфатического узла при воздействии карбофоса в дозе 1 ДОК. Двукратное превышение допустимого остаточного количества пестицида увеличивало общую плопвдь лимфоузла непосредственно к концу курса отравления. 4-х кратное превышение ДОК увеличивало этот показатель в течение недели после прекращения введения карбофоса, однако, в конце наблюдения площадь брыжеечного лимфоузла уменьшалась на 1/3 исходного уровня.

Перестройка структурной организации лимфоидной паренхимы лимфатических узлов после первичного цикла хронического отравления дозой 2 ДОК характеризовалась увеличением абсолютных плопвдей коркового плато, капсулы, лимфоидных узелков

с центрами размножения, сокращением количества первичных лимфоидных узелков, расширением синусной системы. Через 7 суток число первичных лимфоидных узелков возрастало и расширялись площади, занятые ими. Остальные зоны лимфоидной паренхимы возвращались к исходному уровню. В отдаленном периоде наблюдения (через 30 суток) отмечалось сохранение структурного следа отравления в виде сокращения вдвое объема краевого синуса, утолщения капсулы, свидетельствующих о выраженном склерозировании органа (Кассина Т. Ф., 1984; Бикбула-тов 3. Т., Колесников С. И. , 1987), уменьшения количества лимфоидных узелков, расширенных центров размножения.

Лимфатические узлы после хронического отравления в дозе 4 ДОК характеризовались более глубокими структурными преобразованиями. Здесь выявлялось увеличение площади капсулы, коркового плато, лимфоидных узелков с центрами размножения, объема синусной системы, уменьшение площади глубокой коры, мякотных тяжей, первичных лимфоидных узелков и их количества В конце месяца исследований сохранялось уменьшение объема синусной системы, плошадей коркового плато, первичных лимфоидных узелков и их количества, а также площади сечения самого узла и его капсулы. Указанное является свидетельством глубоких нарушений в структурнофункциональной организации лимфоузла, его склерозировании, атрофии лимфоидной паренхимы, что сопровождается понижением иммунологических возможностей брыжеечного лимфатического узла

Повторное воздействие карбофоса в дозе 2 ДОК подобно первичному циклу увеличивало общую площадь сечения лимфатического узла непосредственно к концу цикла отравления, а в дозе 1 ДОК не изменяла ее. В зонах лимфоидной паренхимы структурные изменения в основном сохраняли картину, аналогичную реакции после первичного курса воздействия идентичной дозой (2 ДОК). Таким образом, общие закономерности реагирования структур брыжеечного лимфоузла сохранялись. Однако структурный след токсического прессинга в этих экспериментах оказался менее существенным - нет сокращения объема краевого синуса в брыжеечном лимфоузле, хотя отмечалось утолщение капсулы, уменьшение общего количества лимфоидных узелков,

расширение площадей центров размножения.

Несмотря на стабильность общей площади брыжеечного лимфатического увла в конце цикла повторного хронического токсического' прессинга в дозе 4 ДОК морфометрическое исследование выявило внутриструктурную перестройку, аналогичную первичному циклу воздействия карбофоса. Однако уже через 7 суток в этих экспериментах выявлялись позитивные сдвиги -восстанавливалась площадь коркового плато, синусной системы и капсулы, увеличивалась суммарная площадь первичных и вторичных лимфоидных узелков и их количество, а черев 14 суток расширялась площадь, занятая паракортикальной зоной. Отдаленный эффект определялся уже в виде расширения площадей глубокой коры и первичных лимфоидных узелков.

ГЬдводя итог по данным экспериментов по исследованию воздействия первичных циклов отравления и учитывая при этом понижение численной плотности клеток в структурных зонах лимфоидной паренхимы брыжеечного лимфоузла, можно констатировать, что первичные циклы токсического прессинга карбофосом в дозах 2 и 4 ДОК вызывают отек лимфоидной паренхимы в основном коркового вещества, кроме глубокой коры, усиливают транспортную и депонирующую функции лимфоузлов за счет расширения синусной системы. В отдаленные сроки после отравления (через 30 суток) некоторые зоны лимфоидной паренхимы сохраняют негативный структурный след, особенно значительный после большей дозы ядохимиката: в виде атрофии лимфоидной паренхимы, склерозирования узла, уменьшения пропускной способности, угнетения иммунологических возможностей. После повторного цикла воздействия малой дозой карбофоса изменения лимфатического узла соответствуют, в основном, реакции ее структур после первичных курсов длительного отравления, а большие дозы (4 ДОК) выявляют повышение устойчивости лимфоидной паренхимы в& счет увеличения массы паракортикальной зоны в конце наблюдения и увеличения площади, занятой первичными лимфоидными узелками.

Иорфометрические данные по исследованию цитоархитекто-ники структурнофункциональных зон брыжеечного лимфоузла после отравления малой дозой карбофоса позволяют предполо-

жить усиленный приток из дренируемого региона и формирования в самом узле значительного количества дегенерирующих клеток, усиления миграции малых лимфоцитов как в пределах вон увла, так и рециркуляцию их в отдаленно расположенные лимфовдные органы, включение реакции бласттрансформации, пролиферации и дифференцировки клеток плазмоцитарного ростка Представляет интерес то, что в центрах размножения лимфатического узла наблюдается, по-видимому, угнетение дифференцировки зрелых форм плазмоцитов, так как накапливаются в значительных количествах незрелые плазмоциты, а зрелые, наоборот, уменьшаются. В паракортикальной зоне, несмотря на постоянство плотности клеток, через 14 суток после прекращения отравления возрастало число бластов и появлялись клетки плазмоцитарного ряда, что предполагает включение Т-зависимого клеточного иммунитета Большая доза карбофоса в течение месяца наблюдений вызывала значительные деструктивно-дегенеративные реакции, резкое уменьшение общего количества клеток.

Предварительное воздействие на крыс карбофоса в минимальной (допороговой) дозе способствовало возникновению более сдержанной клеточной реакции на повторное введение препарата в дозах 2 и 4 ДОК Причем !.~1лая доза в меньшей степени выявляла адаптацию лимфатического узла к хроническому отравлению. Кроме того, если в ранние сроки отравления наблюдаемые изменения напоминали ответ на первичный цикл воздействия, то в отдаленные сроки выявлялись положительные сдвиги - количество клеток плазмоцитарного ростка в корковом веществе приближалось к контрольным значениям, а в глубокой коре и мозговом синусе отмечаюсь их увеличение. В Т-зависи-мых зонах увеличивалась ччсленная плотность ретикулярных клеток. Отмечалась в этих экспериментах бурная макрофагаль-ная и тучноклеточная реакции, гранулоцитоз, что доказывает о существенной выраженности неспецифической реакции.

Ге1«шз£§эмнфоциркуляторное русло рэгшкаряых язафха-чэских узлов тонкой ккзад поело хронического отравязнкэ

фэсфорорганкчэстз* пэсткцадса в различия рэлкаж

Первой линией иммунной и химической защиты является

стенка тонкой кишки, содержащая лимфоидные увелки и лимфоид-ные бляшки, а также свободно лежащие там клетки лимфоидного ряда (Сапин М. Р., 1987; Gebbers J.O., Laissne J. А.» 1984; Frink R., Dancyglos H., 1986; Pabst R., 1987). Причем 90 7. межэндотелиальных лимфоцитов слизистой оболочки являются активированными или трансформированными лимфоцитами (Margh M.N., 1975). Рядом авторов после воздействия пестицидов выявлялось разрастание лимфоидного аппарата стенки кишечника, гипертрофия лимфоидных фолликулов, увеличение количества макрофагов, гистоцитов по ходу кровеносных сосудов, пери-васкулярный отек, а также воспалительная инфильтрация и кровоизлияния (Пупышева Г.И., 1972), снижение барьерной функции стенки кишки (Кенигсберг ЯЗ., 1981). Лимфа, оттекающая от лимфатических капилляров ворсинок тонкой кишки,»поступает по афферентным лимфатическим сосудам в лимфомикроциркуляторное русло брыжеечного лимфоузла, выполняющего роль следующего барьера иммунной защиты. В наших экспериментах исследовалась ультраструктура литоральных клеток синусной системы. Известно, что лимфатические синусы являются тем местом, где поступающая в лимфоузел лимфа находится в тесном контакте с лим-фоидной тканью лимфатического узла и пути ее микроциркуляции зависят от функционального состояния последней (Долгова М. А. , 1974; Борукаева Л. А., 1974; Сапин U. Р. и др., 1978; Бородин Ю. И., Григорьев Е Н., 1986; Kurokawa Т., Ogata Т., 1980).

Ультраструктурные преобразования литоральных клеток синусной системы брыжеечного лимфатического узла через 30 суток после первичного цикла хронического отравления свидетельствовали о наличии значительного структурного следа химического прессинга в отдаленном периоде наблюдения. Для литоральных клеток внутренней стенки краевого синуса после воздействия карбофоса в дозе 2 ДОК было характерно увеличение объема клеток за счет возрастания объемов цитоплазмы и ядер, повышение ядерно-цитоплавыатического отношения, падение поверхностно-объемных отношений ядер, митохондрий и лю-минального отдела плазмалеммы к объему цитоплазмы. Наряду с этим, возрастало число бавальных микровевикул, суммарный

абсолютный объем комплекса Гольджи, митохондрий, уменьшалось количество митохондрий и их'суммарная длина профиля срева внутренней мембраны, суммарный объем шероховатого зндоплаз-матического ретикулума. Вышеуказанное свидетельствует о возможном отеке литоральных клеток и значительной вакуолизации ее цитоплазмы. Активизация транспорта недоогасленных продуктов от эндоплазматической сети к пластинчатому комплексу, видимо, приводит к развитию большого числа лизосом, берущих .на себя функцию удаления продуктов распада (Сапунов КХС., 1989). Увеличение численности базальных микропиноцитозных везикул предполагает усиление пиноцитозного переноса веществ из лимфоидной паренхимы в полость краевого синуса, хотя снижены биоэнергетические ресурсы клеток.

Большая доза карбофоса (4 ДОК) не меняла объем самой литоральной клетки, ее цитоплазмы и ядра, однако значительно уменьшала поверхность плавмалеммы, поверхностно-объемные отношения люминальной поверхности к объему цитоплазмы клетки, суммарный объем шероховатого зндоплазматического ретикулума, Общее количество микровезшсул, рибосом, митохондрий, а также объем поверхности наружной и внутренней мембран последних образований и, особенно резко, суммарную поверхность их внутренней мембраны (до 8,2 % от нормы).

Структурный след в ультрамикроскопических образованиях литоральных клеток мозговых синусов брыжеечного лимфатического узла более вырачзэн на химический прессинг малой дозой. Мэрфометрия выявила уменьшение поверхности базального отдела плазмалеммы и его поверхностно-объемного отношения к цитоплазме, объема ядер клеток, уменьшение числа рибосом, суммарного объема шероховатого зндоплазматического ретикулума, комплекса Гольджи и снижение всех показателей морфофунк-ционального состояния митохондрий, разрыхление межклеточных связей. Большая доза пестицида оставляла структурный след в этих клетках в виде уменьшения объема клеток, их цитоплазмы и ядер, плопщей люминального и базального отделов плавмалеммы, резкого уменьшения числа микровезикул.. Изменен^} остальных ультраструктур, в основном, аналогичны влиянию меньшей доэы карбофоса.

Значительная качественная разница в ответе литоральных клеток внутренней стенки краевого синуса брыжеечного лимфо-увла на большую дозу (4 ДОЮ токсина выявляется, таким образом. в атрофии системы мембран и органелл клеток. Это снижает в клетках энергообеспечение синтетической функции и трансэндотелиального обмена за счет диффузионного и микровезикулярного механизмов (Шахламов ЕА., 1971; Григорьев ЕЕ, 1988). В этих экспериментах выявлялось формирование крупных вторичных лизосом в литоральных клетках краевого синуса. Ли-*^ зосомальный аппарат клеток очень чувствителен к влиянию различных токсических веществ. Установлено при воздействии пестицида севина снижение в лизосомах клеток печени общей активности катепсинов Вид (Тутельян Е А., Васильев А. Е , 1990). Причем "слабый" эффект токсических веществ выявлялся в увеличении числа вторичных лиеосом со средним уровнем активности ферментов (Крьютев Л., 1980).

Для литоральных клеток внутренней стенки краевого синуса брыжеечного лимфоузла структурный след после повторного цикла хронического отравления малой доэой пестицида характеризовался, в основном, аналогичными изменениями в ультраструктурных образованиях, наблюдаемых после первичного курса воздействия соответствующей дозой. Исключение составило возрастание поверхности кариолеммы наряду с объемом ядер, восстановление;.: поЕерхностко-объемных отношений ядер, суммарного абсолютного объема шероховатого эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи, увеличение числа люминальных и цитоплазматических микровезикул, прикрепленных рибоом, митохондрий и суммарной поверхности внутренней мембраны митохондрий. Подобные изменения отмечались и при действии большей дозы пестицида. Однако в этих экспериментах восстанавливалась площадь поверхности плазмалеммы, еще больше возрастали объем ядер, их кариолемма, оставались уменьшенными в количестве цитоплазматические микровезикулы, значительно воз-ратало число митохондрий и их суммрная поверхность внутренней мембраны (до 4-х раз). Указанное свидетельствует о частичном восстановлении ультраструктуры литоральных клеток после повторного отравления карбофосов

В литоральных клетках мозгового синуса после повторного цикла хронического отравления малой дозой пестицида выявлялись изменения в виде уменьшения объема цитоплазмы и ядра, хотя объем самой клетки достоверно не менялся. Отмечалось высокое поверхностно-объемное отношение ядер, увеличивалось количество базальных микровевикул, уменызалось число рибосом, суммарный объем шероховатого ретикулума. Наряду с этим, уменьшалось общее количество митохондрий, их суммарная поверхность внутренней мембраны и поверхностно-объемные отношения. В отдаленный период наблюдения большая доза (4 ДОК) препарата оказывала стимулирующее влиняиз на плазмалемму литоральных клеток мозгового синуса, повышала поверхностно-объемные отношения клеток, увеличивала поверхность карио-лэммы. количество люмикальных и базальных микровезикул на фоне уменьшения цит сп лаз мат иче croix, увеличивала суммарный объем комплекса Гольдля и суммарную поверхность внутренней мембраны митохондрий. Указанное свидетельствует о восстановлении синтетических и транспортных возможностей клеток и их энергообеспечения в отдаленный период после повторного цикла введения большей дозы препарата Наблюдаемая после первичных циклов отравления атрофия литеральных клеток (их цитоплазмы и ядер) мозгового синуса с формированием крупных вторичных лизосом, видимо, является результатом длительного следового действия пестицида в связи постепенного его выделения ив лимфоидной паренхимы, т. к. известно о достаточно высоком накоплении некоторых пестицидов в лимфатических узлах (Вась-ковская JL Ф., 1985) и защитной роли литоральных клеток мозгового синуса при токсических воздействиях ( Долгоза М. А.. 1982).

Общеизвестна значительная роль г е но > ежро циркуля торного русла лиь!фатического узла в выполняемых ею функциях по поддержанию тканевого гомеостаза ( Бородин Ю. И.. Григорьев R Е . 1986), а таюяе его подверженность к интенсивному возрастанию при воздействии промышленных ядов (Новоселов ЕЕ, чурияов Ю.С.. 1981), хлорорганических пестицидов (Кульчиковскач ЕЕ, 1978; Пушкарь Ы. С, Якубовский il U.. 1989). В наглх экспериментах структурный след после хронического отравления

карбофосом в дозе 2 ДОК выявлялся в увеличении просвета артериального отдела капилляра брыжеечного лимфоузла, хотя площадь поперечного сечения сосуда и не менялась. Ультраструктурные изменения эндотелиальных клеток характеризовались уменьшением объема цитоплазмы клеток и поверхности люминаль-ного отдела нлаамалеммы, резким повышением ядерно-цитоплаз-матических отношений, понижением абсолютного количества микровезикул, рибосом, митохондрий, их суммарной поверхности внутренней мембраны, несмотря на увеличение объема каждой митохондрии и поверхностей ее наружной и внутренней мембраны, уменьшение суммарного объема шероховатого эндоплазмати-ческого ретикулума Большая доза (4 ДОК) пестицида после первичного курса воздействия увеличивала объем эндотелиоци-тов и ее цитоплазмы, понижала поверхностно-объемные отношения- клеток. что несомненно ухудшало условия для трансэндоте-лиального обмена Кроме того, уменьшался индекс ядерно-ци-топлазматического отношения клеток, увеличивалось число лю-минальных и базальных микровезикул на фоне уменьшения цитоп-лазматических, хотя общее количество микропиноцитозных везикул восстанавливалось к исходному уровню. Морфологические изменения митохондрий были аналогичны структурному следу после введения малой довы пестицида

Влияние предварительного цикла воздействия карбофоса в допороговой дозе на ответ на повторное введение токсина выразилось в значительном расширении площадей поперечного сечения артериального отдела капилляра и его внутреннего про-вета, значительном увеличении объема зндотелиоцитов за счет их цитоплазмы и ядер, возрастании поверхности кариолеммы и плазмалемыы, суммарного объема комплекса Гольджи и шероховатого эндоплазматического ретикулума, числа люминальных и ба-эальных микровезикул и рибосом. Мэрфофункциональные показатели митохондрий в этих экспериментах резко возрастали после повторного воздействия малой дозы пестицида и нормализовались после большей дозы. Индекс ядерно-цитоплазматических отношений не менялся.

Отдаленная реакция венозного отдела капилляров брыжеечного лимфоузла на первичное хроническое отравление карбо-

фосом малой дозы характеризовалась стабильностью площади поперечного сечения, но сужением его внутреннего просвета. Это связано с увеличением объема эндотелиальных клеток за счет резкого возрастания объема цитоплазмы и ядер, причем индекс ядерно-цитоплазматического отношения понижался. Поверхности плазмалеммы и кариолеммы увеличивались, но поверхностно-объемные отношения клеток снижались,- а ядер - повышались, уменьшались в количестве рибосомы, базальные микровезикулы, а связанные с люминальной поверхностью увеличивались. Тем не менее активность микровезикулярного транспорта в венозном отделе капилляра, по-видимому, увеличивалась о чем свидетельствует возрастание численности всех групп микровезикул. Наряду с отмеченным', выявлялось резкое снижение количества ;,ятохондркй, их суммарной поверхности внутренней мембраны, хотя отмечался рост объема митохондрий и их наружной мембраны, что свидетельствует о набухании этих органоидов (Шкуру-пай Е А., 1989). Структурный след после воздействия большей дозы (4 ДОК) карбофоса менее выражен и не отражался на площади поперечного сечения сосуда и его просвета, на объеме эпдотелиоцитоз. Однако выявлялся в виде роста ядерно-цитоп-лагмагических отношений клеток и площади кариолеммы, снижении площади плазмалеммы и поверхностно-объемных отношен;® клеток, абсолютного объема шероховатого зндоплазматического ретикулума. Остальные изменения в ультраструктуре клеток идентичны отмеченным после действия первичного цикла карбофоса в меньшей дозе (2 ДОК).

Прр .верительный курс воздействия допороговой дозы предупреждал отрицательное влияние повторного введения карбофоса и усиливал ультраструктурные преобразования эндотелио-штов. Это выражалось'в увеличении поперечника венозного отдела капилляра, его внутреннего просвета, уменьшении объема эндотелиоцитов, их цитоплазмы и ядер, значительном снижении индекса, ядерно-цитоплазматических отношений, увеличении поверхностей всех мембран клеток, но в снижении поверхностно-объемных отношений клеток и митохондрий, повышении этого показателя в ядрах, увеличении количества всех видов микровезикул, рибосом, суммарного абсолютного объема шероховатого

эндоплааиатического ретикулума, комплекса Гольджи, в существенно положительных морфофункциональных изменениях митохондрий, в том числе увеличении их суммарной длины профиля среза внутренней мембрана Повторный цикл воздействия большей дозы (4 ДОЮ карбофоса оказывал более щадящее действие и некоторые показатели морфофункционального состояния ультраструктурных образований эндотелиальных клеток приближались к контрольным (объем шероховатого эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи, поверхностно-объемные отношения клеток и митохондрий, количество митохондрий).

Мшфоциркуляторное русло брыжеечного лим£оугла включает в себя посткадиллярные венулы, функции которых трудно переоценить. Здесь осуществляется проникновение лимфоцитов в лимфоузел (Kraal а et al., 1987; Hieran M.W. et al., 1989; Pals S. Т. et al., 1989), обеспечивается интенсивный обмен веществ за счет высокой проницаемости эндотелиальных клеток (•Щахламов & А., Цамерян А. Е , 1982; Бородин Ю, И., Григорьев ЕЕ, 1986), выявляется секреторная активность (Freemont A. J., Jones С. J., 1983).

Отдаленный эффект воздействия первичного курса хронического отравления в посткапиллярных венулах брыжеечного лимфатического увла характеризовался восстановлением объема эндотелиальных клеток и их поверхностей. Однако объем ядер возрастал, но снижались в количестве микровевикулы, рибосомы, митохондрии, уменьшались суммарный объем шероховатого эндоплазматического ретикулума (причем большая доза расширяла ее цистерны), объем митохондрий, поверхности наружной и внутренней мембран последних, в том числе суммарная внутренней мембраны. Выраженные морфологические изменения в посткапиллярных венулах лимфоузлов были обнаружены при хроническом отравлении фосфорорганическим дефолиантом и другими авторами (ГЬлинов А- Е и др., 1988).

Структурный след повторного курса отравления в дозе 2 ДОК, после предварительного воздействия препарата допорого-вой дозой, выявлялся в виде увеличения объема эндотелиальных клеток, их цитоплазмы и ядер, возрастания поверхности плазмалеммы и кариолеммы, на фоне уменьшения количества лю-

минальных микровезикул повышалось число цитоплавыатических микровезикул, рибосом, абсолютного объема шероховатого зн-доплазматического ретикулума, но ушньшался объем комплекса Гольджи. Количество митохондрий не менялось, но увеличивался их объем, наружная и внутренняя поверхности мембран и. особенно существенно, суммарная длина профиля среза внутренней мембраны. Пестицид в дозе 4 ДОК оставлял менее существенный след - нет увеличения объема эндотелиальных клеток, их цитоплазмы. Однако остальные изменения идентичны структурному следу после действия меньшей дозы, но степень выраженности их несколько слабее. Следовательно, предварительный курс введения карбофоса стимулировал компенсаторно-приспособительные реакции ультраструктурных образований эндотелиальных клеток капилляров и посткапиллярных венул брыжеечного лимфатического узла.

Подводя итог, можно отметить, что корни лимфе»ической системы и. лимфатические узлы, являясь мишенью для токсического воздействия фосфорорганического пестицида, длительно сохраняют структурный след повреждения, зависящий от дозы ядохимиката. Видимо, эти структуры участвуют в поддержании химического гомеостаза органов и тканей. Предварительное поступление в организм допороговой довы (1 ДОК) фосифорорга-нического пестицида не, предупреждает нарушений' структурно-функциональной организации дренажных систем тонкой кишки, вызванных повторным введением токсина в дозах 2 ДОК и 4 ДОК. Тем не менее, выявленная большая устойчивость дюфэидной ткани брыжеечного лимфатического узла, частичное восстановление ультраструктуры литоральных клеток ее синусной системы и эндотелиальной выстилкй гемомикроциркуляторного русла, а также эндотелиальных клеток лимфатических и кровеносных капилляров кишечной ворсинки свидетельствуют о проявлении готовности этих структур, дренирующих тонкий кишечник, к повторным встречам с токсином. Это структурное "запечатлевание" ярче выявляется на повторное более сильное воздействие (4 ДОК). Последнее позволяет предположить неправомерность переноса закономерностей формирования структурных механизмов действия фосфорорганического пестицида при его первичном

воздействии, на механизмы действия повторных контактов с этим веществом.

ВЫВОДЫ

1. Длительное введение карбофоса в дозе 1 ДОК не вызывает достоверных изменений структурнофункциональной организации дренажных систем тонкой кишки, включая брыжеечные лимфатические узлы.

2. Структурный след после длительного введения карбофоса в дозах 2 и 4 ДОК выявляется в снижении интенсивности трансэндотелиального переноса, обеднении органоидами цитоплазмы зндотелиальных клеток .лимфатического капилляра кишечной ворсинки, в расширении просвета венозного отдела кровеносного капилляра, атрофии ультраструктур их эндотелиоцитов, отвечающих за синтетическую деятельность и энергообеспечение, возрастании микровезикулярного переноса из перикапил-лярного пространства в просвет сосуда.

3. На длительное введение карбофоса по-разному реагируют литоральные клетки синусов лимфатического узла: в литоральных клетках внутренней стенки краевого синуса после 2 ДОК страдает митохондриальный аппарат, после 4 ДОК - снижаются синтетические процессы и трансцеллюлярный перенос за счет атрофии мембран и органелл клеток, формируются крупные вторичные лизосомы; последнее отмечается и в литоральных клетках мозгового синуса после 2 ДОК, а 4 ДОК вызывает более существенную атрофию с образованием крупных вакуолей и вторичных лизосом.

4. В отдаленные сроки после длительного введения карбофоса (2 и 4 ДОК) обнаруживается увеличение просвета артериального и сужение венозного отдела капилляра брыжеечного лимфоузла В эндотелиоцитах артериального отдела выявляется атрофия органелл, отвечающих за энергоресурсы, биотрансформацию, трансэндотелиальный обмен клеток; доза 4 ДОК дополнительно вызывает отек клеток и ускорение микровезикулярного переноса В эндотелиоцитах венозного отдела капилляра после

4 ДОК атрофия цитоплазматических структур клеток выявляется при сохранении общего объема клеток, после 2 ДОК угнетается функционирование митохондриального аппарата

5. Длительное воздействие карбофоса (2 и 4 ДОК) вызьь,-вает отек лимфоидной паренхимы коркового вещества (кроме глубокой коры), усиливает реактивную перестройку В-зависимых зон коркового вещества, транспортную и депонирующую функции узла за счет расширения синусной системы, введение 4 ДОК дополнительно угнетает Т-зависимую зону. Структурный след до-зозависим и более значителен после 4 ДОК - уменьшена пропускная способность, выявляется склерозирование узла, атрофия лимфоидной паренхимы, угнетение иммунологических возможностей (уменьшается общее количество лимфоидных узелков).

6. Длительное введение карбофоса вызывает в брымэечных узлах многократное увеличение содержания дегенерирующих клеток и макрофагов, активизацию плазмоцитогенеза, нейтрофиль-ный гранулоцитоз, эозинопенк» в корковом плато, глубокой коре, мякотных тяжах. Эффект более выражен при дозе 4 ДОК.

7. Предварительное воздействие препарата в дозе 1 ДОК ускоряет восстановление ультраструктур эндотелиоцитов лимфатического капилляра кишечной ворсинки на повторное введение пестицида в дозе 2 ДОК, выявляет их гипертрофию после 4 ДОК, способствует увеличению общей площади венозного отдела капилляра и гипертрофии их эндотелиоцитов и их органелл.

8. Повторное длительное введение карбофоса (2 и 4 ДОК) зыявляет разницу в отдаленном структурном следе литоральных клеток: литоральные клетки внутренней стенки краевого синуса восстанавливают основные ультраструктуры, после 4 ДОК дополнительно увеличивается энергонесущая поверхность митохондрий; литоральные клетки мозговых синусов реагируют на действие 2 ДОК разрыхлением межклеточных контактов и атрофией ультраструктурных образований при сохранении объема самих клеток и ее цитоплазмы, 4 ДОК - выявляют гипертрофию субклеточных структур.

9. Предварительное воздействие карбофоса изменяет реакцию микроциркуляторного русла на повторное длительное введение пестицида расширяется просвет венозного отдела, отмеча-

ется гипертрофия эндотелиоцитов, их ультраструктур, возрастают энергоресурсы и микровезикулярный транспорт через тело эндотелиоцитов обменных сосудов.

10. В ранние сроки после повторного длительного отравления карбофосом (2 и 4 ДОК) обнаруживаются структурные изменения лимфоузла, сходные с таковыми после первичных циклов, но в конце наблюдения (30 суток) выявляются положительные изменения: после 2 ДОК восстанавливается пропускная способность уела, после 4 ДОК повышается устойчивость лимфо-идной паренхимы за счет расширения площади глубокой коры и суммарной площади, занятой первичными лимфоидными узелками.

11. Цитологический статус лимфоузла после повторного воздействия карбофоса в дозе 2 ДОК аналогичен цитологическому профилю после первичного цикла. Доза 4 ДОК вызывает нарастание дегенерирующих клеток в различных зонах лимфоидной паренхимы, резкую макрофагальную реакцию, гранулоцитоз, туч-ноклеточную реакцию, повышение количества ретикулярных клеток, зрелых плазмоцитов, ослабление бласттрансформации и более существенное восстановление к контрольным показателям в отдаленные сроки (30 суток).

12. Более высокая доза (4 ДОК) фосфорьтэрганического пестицида рельефнее выявляет эффект структурного "запечатле-вания" после длительного влияния допороговой дозы токсина

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ КООЕДОЗАЩЯ В ПРАКТИКУ.

Результатом исследования является предложение количественных показателей, отражающих динамику структурной перестройки лимфатической системы (корней лимфатической системы, регионарных лимфатических узлов) для составления программы мониторинга за окружающей средой при оценке«, токсического экологического прессинга, реально существующего в регионах Сибири и Казахстана

Результаты исследования по зональной и клеточной перестройке регионарных лимфатических узлов тонкого кишечника

после длительного хронического отравления фосфорорганическим пестицидом внедрены в практику преподавания раздела анатомии по лимфатической системе кафедры нормальной анатомии Семипалатинского медицинского института и Семипалатинского зооветеринарного института

Результаты исследования корней лимфатической системы и лимфатических узлов при длительном воздействии фосфороргани-ческих соединений внедрены в практику преподавания раздела "Военная токсикология и медицинская защита от оружия массового поражения" на военной кафедре Новосибирского медицинского института

Методики, предложенные для исследования лимфатических уздов при отравлении пестицидами, позволяющие анализировать структурные изменения в лимфатических узлах и корнях лимфатической системы, внедрены в научно-исследовательскую работу лаборатории физиологии лимфатической системы Института физиологии АН Республики Казахстан.

Результаты исследования по механизму химического "запе-чатлевания" внедрены в практику научных исследований на кафедре патофизиологии Новосибирского медицинского института и в отделе структурных основ лимфатической системы Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН.

сгаахж РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ 1Ю tos диссертации

1. Гайнанова Е К., Трубицина Е Е , Гаврилин В. Е , Григорьев В. Е Структурно-функциональная организация кровеносных капилляров лимфатических узлов при воздействии карбофоса //Микрососудистое русло внутренних органов в условиях патологии и эксперимента - Алма-Ата, 1990. -с. 12.

2. Григорьев Е Е , Гаврилин Е Е , Гайнанова Е К. Применение серийных гистологических срезов лимфатических узлов для изучения объемов и топографических взаимоотношений структурных компонентов лимфомикроциркуляторной системы этих органов.//Микрососудистое русло внутренних органов в условиях патологии и эксперимента - Алма-Ата, 1990. -с. 15.

3. Григорьев К Е , Гайнанова Е К. Лимфомикроциркулятор-ное русло печеночного лимфатического узла крысы при хроническом отравлении карбофосом. //Материалы итоговой науч. конференции ученых института - Семипалатинск, 1991.-с. 48-49.

4. Григорьев Е Е , Гайнанова Е К. Влияние карбофоса на цитоархитектонику мозговых синусов регионарных лимфатических узлов крысы. //Материалы итоговой науч. конференции ученых института - Семипалатинск, 1991.-с. 48-49.

5. Григорьев Е Е, Гайнанова Е К Микроанатомическая организация печеночных лимфатических узлов крысы в условиях хронического воздействия карбофоса //Материалы итоговой науч. конференции ученых института - Семипалатинск. 1991. -с. 48-49.

6. Гайнанова Е К . Соломатина Г. М. Ток и состав печеночной лимфы при действии ацетилхолина в условиях острого и хронического эксперимента //Материалы итоговой научной конференции ученых института - Семипалатинск, 1991.-с. 48-49.

7. Григорьев Е Е , Гайнанова Е К Влияние малых доз карбофоса на численную плотность клеток коркового плато печеночного лимфатического узла крысы. //Тезисы докл. Республиканской научно-практической конференции ученых и специалистов. - Семипалатинск, 1991.-с. 42-43.

8. Григорьев Е Е , Гайнанова Е К. Структурные преобразования подколенного лимфатического узла крысы при первичном воздействии карбофосом.//Тезисы докл. Республиканской научно-практической конференции ученых и специалистов. - Семипалатинск, 1991. -с. 43.

9. Гайнанова Е К., Майбородин И. В. Структурная перестройка регионарных лимфатических узлов крысы при первичном хроническом воздействии карбофосом. //Проблемы клинической и экпериментальной лимфологии. _ Новосибирск, 1992. -С. 47-48.

10. Григорьев Е Е, Гайнанова Е К, Майбородин К Е Реактивные изменения лимфатических узлов на повторное воздействие фосфорорганического пестицида //Проблемы клинической и экпериментальной лимфологии. _ Новосибирск, 1992. -С. 56-57.

11. Григорьев ЕЕ, Гайнанова Е К., Зайко Т.М. Цитоар-хитектоника мякотных тяжей регионарных лимфатических узлов крысы в условиях хронического отравления карбофосом. //Бюлл. зкпериментальной биологии и медицины. - 1992, N0 3. -С. 315-318.

Зач .270.Тир ЛОЭ.Печ.л.2 .25. Тип .СО РАМН Новосибирск 1992