Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфо-функциональная характеристика эпидермиса, отслоенного с помощью отрицательного давления

НАУЧНО-ИССТЭДОЗАТЕЭЬСЮЙ ЕКЯИШ МОРЮДОГИИ ЧЕЛОВЕКА

ЮКЮ-ШШЩЮНАШИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭЩЕРМКСА, ОТСЛОЕННОГО С" ПОМОЩИ) ОТРИЦАТЕЛЬНОГО ДШЕНШ

14.00.23 -гистология, цетоногия, акбркологня

-Автореферат диссертации на соискание ученой степени каццедата ьгадгащнскпк наук

Иосква - 1953

На красах рукописи ¡ЩК 611.771:616-089.843-032;9

ЛЕВЭ Оаог Изсгсфовпч

Работа выполнена б Гродненском гссударствеиноикедицинс-ком института и в Институте биохимия АН республики Беларусь.

Научный руководитель: Кандидат биологических наук, доцент &. &. Островский.

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук,

ведущий научный сотрудник Е. Д. Ефимов.

Кандидат медицинских наук,

старлий научный сотрудник Д. Ю. Цнбулевский.

Ведущее учреждение" - Институт эволюционной морфологии и экологии хнвотных им. А. В. Север- цева Российской академии наук.

Запрета диссертации состоится "24" ивня 1893 г. в 12 часов на заседании специализированного совета Д001.04.01 по защите диссертаций при НИИ морфологии человека РАНВ (Носква, 117418, ул. Цюрупы, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ морфологи» человека РАМН.

Автореферат разослан " " маа 1883 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических .наук

Н.

Н. Емельаненко

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Лечение полнослойких когных дефектов, вызванных различными воздействиями виепгней среды, одна из крупнейших проблем современной недицккы. Прн поросении достаточно больпого участка когного покрова человека !?оз-никает вопрос о необходимости применения того или иного спо-соСа когной пластики. В условиях нерешенности проблею! иммунологической совместимости алло- и ксеногешшх трансплантатов, лишь кожный покров самого больного кохет бить источником пластического материала для закрытия рш:к. Поэтому в процессе лечения очень вагно обеспечить мкнкмальпсч ;па^яировенке донорского участка.

В настоящее время из варнантоз свободней когной шггстк::и наиболее широко применяется трансплантация р"с™°плзп!того кся-ного лоскута, полученного с помощью рзсзн^нмх дернатсмов. поскольку данный метод является однггн нз камбогео простых и £3-дпщих. Однако при его использовании донорский учесток попроз-дается все ае достаточно сильно. Процесс взятия тргксплгчтаге нуждается в обезболивании. Полное зааиэлониз донорского участка наступает через 2-4 недели, оставляя в яосгодугпем геиу гипер- или депигментации (Зодтгл Я., 1034). Персчмгзектгэ ггэ-достаткя дерматскноЯ ко5кой пластики оставсггют по-яреснвку актуальной проблему умеиы'ек!*.:: -стспски донорс-

кого участка при получении «отглх тракспяаптггсз.

Для экспериментальной ¿езк&толсгни такте кунка прося» методы получения различиях трзкспзантатоа, вклгчаа о;сто гпя-дермальные. В настоящее время дла гткх цггеЗ '."-руг.о ксяогьзу-ется механическое отделения зг.идерхгтеа от пссяз г,скз~э-

ния лоскута коаи в культу рал ьнуд сролу. ссдэ рявцуэ рлз-игтакз протеолнтичеекко оорманты плп этксепгпзкпигвтрвяцотот СИСгпо Т. «Ь а1., 1803; Ваког К. 9. вЬ п1., 1853; ЪопЦат аЬ в1., 1891). Однако с поксяьо этеЯ процедуры к)?гйяв огмеять

ЭПИДерМИС У ПОКрЫТИХ ПСрСТЬТЗ ГГ.УОТШЖ. ЛрОКО ТОГО, ВОСКСИ-'У для получения эпкдврмаяьного пгастл тяг.?™ пуг^л npc.~r.a-

рктольно ерэзвть когниЗ лоскут. дакний катод ка келгг Сыть

использован в клинике.

Весьма перспективным кетодом получения кохкых трансплантатов является Быравнвание их in vitro. После его первого применения в лечении огогов кояи человека в начале 80-х годов (O'Connor H. Е. et al., 1S81), данный метод интенсивно совер-иесТЕуется в настоящее время. Основное его преимущество связано с возможностью получения из относительно небольшого би-оптата трансплантата такого размера, который способен закрыть всю поверхность тела обокхенного человека (Pittelkow M. Е. et al., 1986; Kuicagai И. et 1966; Cerny H., 1987). Однако

прэдхогенный нетод очень трудоемок, требует наличия специального оборудования и подготовленного персонала. Значительным недостатком является бсльиой промежуток времени, проходящий с момента пеятие биоптата до трансплантации. Все .это существенно ограничивает возкоанссти широкого распространения упомянутого метода (Тумаков В. П. и др. 1986, 1989).

Б связи с этим, по-прегнеиу сохраняет актуальность проблема разработки новых, минимально травматичных методов получения ко2ных трансплантатов и изучения их свойств. Уменьшению остроты данной проблемы мохет способствовать использование отрицательного давления для получения когиых трансплантатов. Первые сообщения о возможности образования пузырей на кояе здорового человеке под воздействием неполного вакуума появились в 60-х годах (Slosey S. ci. al., 1061; Kiistala V. et al., 19Si), à первые работы, в которых бы использовались их крызк в качестве трансплантата - значительно позЕе (Falc.be 1-lc R. , 1971, 1984; Koga 1!., 1S3S). Однако с морфологической точки зрении такие трансплантаты не изучались. Остается много не выясненного такге е вопросе о морфо-функционадьном состояния вакуумно отделенного эпидермиса, оставленного в различных условиях из донорском участке.

Б связи со веек, указанким ьыие, возникла необходимость на основа предварительно разработанных методик вакуумной отслойки и трансплантации эпидермиса челоазка и крыс изучить изменения его морфо-функциснального состояния в различных условиях послй данных процедур. Последнее имеет существенное значение для экспериментальной ir клинической практики.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: оценить морфо-функциомальиоо состояние эпидермиса после вакуумной отслойки и возможность использования его в качестве трансплантата,

В соответстзии с целью были поставлен сяадуж;иа задачи:

1. Изучить динамику изменения структура хсмпонектог кояно-за-куумних пузырей крыс.

2. Охарактеризовать процесса, происходящие в отслоенном эпидермисе крыс, помеченном после вакуумной отслойки на прежнее место.

3. Изучить изменение корфо-функаксиального состояния вакуун-ноотдеяэнного эпидермиса человека в состава крыл ксано-ааку-умных пузырей.

4. Охарактеризовать развитие закуу>{ноотсяоэнного эпидермиса крыс, аутотрансплантироеанного непосредственно поело отслойки на поверхность подкояноЭ клетчатка.

5. Охарактеризовать особенности разелгия- '-¡тдэрииса-.человека посла хсенотрансплантация^на поверхность гголнослойного кожного дефекта.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые современными количественными методами изучено изменениа основных структурных компонентов ко2но-вакуумных пузырей крыс. Показано, что скорость гибели эпидермиса в составе крыа пузырей зависит от лейкоцитарного состава пузырной жидкости,

В эксперименте на животных продемонстрирована особенности развития вакуумноотслоенного эпидерииса на поверхности ин-тактной дермы с сохраненной базальноЯ мембраной и на поверхности клетчатки. Показано, что отслоенный эпидермис, размеченный на поверхности дерни, быстро приобретает черты интакт-ного эпидермиса, тогда к&:: ва клетчатке, поверхностям слои которой перестраиваются г. грануляционную ткань, длитольнсе время остается в состоянкя гиперплазии.

Впервые изучено изменение иэрфо-функдионазького состояния вакуунноотдэяенного эпидермиса человека и состава крыл хояно-вахуумкых пузырей. Показано, что после отсяойкд и сопутствовавшей этому частичной травматизацки, регенерация эпи-

. - 4 -

деркиса в состава крыш образовавшихся пузырей и развитие признаков дифференцирован осуцестзл.'ются без пролиферации.

Дана исрфо-функционаяьиая характеристика ранних стадий развития эпидермотрансплантата человека, получанного в результате вакуумной отслойки.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ Н ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ F&EOTU.

3 результата проведанного исследования расширены представления о клеточных основах реакций эпидермиса в ответ на травмнруяцйв влияния и различные условия развития.

На примере крыс показано, что судьба вакуумноотслоенного эпидермиса зависит от того, в каких, условиях он огакется в последующая: а отслоенной зпидзрмисэ, размеченном на своем презиеи мзете, практически все кератнноциты сохраняют жизнеспособность к быстро призив&этея; в эпидермисе, перенесенном на поверхность стерильной клетчатка, некоторая часть из них погибает, болькаа so часть развивается, а сам эпидермотранс-пдантат длительное греыя остается в состоянии, гиперплазии; в эпидермиса, оставленном в приподкптси состоянии, кератиноцл-та -базалыюго слоя погибают в течение 1-2 суток. Это лодтвер-гдаэт господствувдеа в настоящее время представление о том, что в целом структурная реакция эпидермиса определяется основой, на которой происходит его развитее.

Кератикоцита эпкдерииса человека, оказавшись в состава крызш пузир::, рагеиери.руат, порестраиваптсн и дифференцируются, но не делятся. Лиаь через 3 суток некоторая часть клеток Начинает погибать, остальные к на этот срок сохраняют призна-. ки лизноспособности. Это подтеврвдаат представление о структурно-функциональной разнородности каратнноцктов в пределах росткового сдоя эпкдармиса человека.

Похазакн черты сходства и различия в развитии вакуукно-отслселного ц •гранеялантирозаигаго эпидермиса человека и крыс. Первые из кит связана с началом пролафератигныг процессов после размещения эпидермиса на поверхности рецептивного sosa, вторые - с различной интенсивностью процессов пролиферации и разной скорсстьз развития деструктивных процассов в

- 5 -

составе крыш кохно-вакуумных пузырей.

Полученные данные показывают, что предварительно разработанные модели отслойки и трансплантации эпидермиса у экспериментальных животных позволяют проводить широкие исследования по изучению его морфо-функционаяьных свойств.

Экспериментально подтверждена возмохность использования вакуумноотслоенного эпидермиса человека в качестве полноценного когного трансплантата.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертация долозены и об-сухдены на:

-Гродненских областных конференциях молодых ученых к специалистов, Гродно, 1930, 1891, 1993г.

-2-м съезде анатомов, гистологов и гмбрнолсгов Беларуси, "Минск, 1991г.

-Гродненском областном обществе анатомов, гистологов я эмбриологов, Гродно, 1993г.

Работа была рассмотрена и обсуядена в научно-исследовательском институте морфология человека РАИН.

По теме диссертации опубгиковеяге-в работ. Нкевея автсре-хое свндетельсво на изобретение.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация состоят нэ ввод 9-кяз, обзора литературы, описания материала и методов, кэяохе-ния результатов исследований, их обсуждения, виводоа п списка литературы. Материал излоген на 110 страницах навтюписпого текста. Работа содераит 22 таблицы, иллюстрирована 4 графиками, 49 электронно-микроскопическими и свгтооптичесхими микрофотографиями. Список цитированной литература вялвчает 231 наименований, из них 199 иностранных авторов.

- 6 -

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Б процессе выполнения данного исследования во всем объеме использовано 280 беспородных крыс-самок массой 180-240 г., ряд явлений изучен у 146 мухчин, в возрасте 18-23 лет. В процессе манипуляций требовавших обезболивания или обездвихива-нип хивотных использовали эфирный наркоз. У человека ввиду незначительной болезненности процедур отслойки и взятия крыш пузырей, обезболивающие мероприятия не проводились.

Распределение материала по сериям, методам исследования и срокам изучения представлено в таблице I.

Таблица 1.

ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗУЧЕННОГО МАТЕРИАЛА

:Ко- :Ко- :Сроки :Методы

:ли- :ли- :наблю- :иссле-

Экспериментальные серии :чес-:чес-:дения. :дова-

:тво :тво :(сут.) :ния * :крыс:лю- :

: :дей : : '

- 1 2 3 4 5

ПРОЦЕССЫ НА КОЖЕ ПОСЛЕ ОТСЛОЙКИ ЭПИДЕРМИСА У крыс:

1.При оставлении эпидермиса в 43 0-5 А,В,С приподнятом состоянии.

2.После удаления жидкости из 42 - 0-5 А,В,С пузырей.

3.Контрольные группы. 46 - 0-5 А',В,С У человека:

4.После оставления эпидермиса - 84 0-3 А,С,Д в приподнятом состоянии.

РАЗВИТИЕ ЭПИДЕРМИСА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

1.Аутотрансплактация у крыс. 87 - 1-28 А,В,С

2.Ксенотрансплактация эпидер- 62 62 1-7 А,В,С миса человека крысам.

Всего: 426 биологических объектов (280 крыс и 148 людей)

*: А - световая микроскопия,

В - тритий-тимидиновая авторадиография, С - морфометрия гистологических препаратов, д - электронная микроскопия.

Для изучения процессов, происходящих на коже крыс, у животных в мехлопаточиой области выщипывали шерсть и с помощью вакуумной камеры отслаивали эпидермис на площади около 2 кв. см, который либо оставляли в приподнятом над дермой состоянии, либо размещали на прежнем месте (сосочковый слой дермы), удаляя из образовавшихся пузырей жидкость.

Дополнительно использовали два контроля. Хивотных первой контрольной группы использовали для того, чтобы выяснить в кахой степени манипуляции, связанные с подготовкой крыс к отслойке эпидермиса, влияли на динамику изменений структурных показателей. Вторую контрольную группу составили крысы, у которых лишь выщипывали шерсть непосредственно перед взятием участка кожи для исследования.

Животных всех групп за исключением второй контрольной забивали либо непосредственно после окончания всех манипуляций (срок 0 часов), либо через 1, 2, 3, 5 суток. В межлопаточной области на месте соответствующих воздействий вырезали прямоугольный участок кожи для дальнейпих гистологического и радиоавтогра<$ического исследований. 7 крыс второй контрольной группы непосредственно после удаления иерсти брали два участка кожи: с правого бока и нз межяопаточной области.

Вакуумную отслойку эпидермиса у человека осуществляли так, чтобы получить 3-4 пузыря на внутренней поверхности плеча, диаметром 5-5,5 мм. Затем либо непосредственно после прекращения воздействия отрицательного давления, либо спустя 1, 3, б, 12, 24, 48 и 72 часа крыши пузырей с помощью глазных ножниц подрезали по всему периметру и использовали для проведения гистологического исследования, в интервале 0, 1, 2 и 3 суток - для электронно-микроскопического.

Для изучение развития аутотранспяантированного эпидермиса крыс, последний после отслойки на боку животного с помощью специальной подлоаки переносили на раневую поверхность, предварительно подготовленную в межлопаточной области. Хивотных с целью последующего гистологического исследования структуры эпидермотрансплантата забивали через 1, 2, 3, 5, 7, 13, 14, 20 и 28 суток по 6-8 на срок. В этой ае серии 24 крысы готовили для авторадиографического исследования и забивали по од-

ной с интервалом 6 часов, начиная с двухчасового промежутка после трансплантации.

Для изучения развития ксенотранспдантированного эпидермиса человека, его после отслоения с помощью отрицательного давления на внутренней поверхности плеча мужчин переносили с помощью специально разработанной петли с изменяющейся конфигурацией на предварительно подготовленное рецептивное лохе крысы. При этом островки донорского эпидермиса последовательно укладывали один за другим впритык вдоль сагитальной линии на поверхности рецептивного доха и тщательно расправляли. Для гистологического исследования ксеноэпидермотрансплантата крыс забивали через 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7 суток после трансплантации по 5-6 штук на срок. Для авторадиографического исследования 24 крысы забивали по одной с 6-часовым интервалом, начиная с двухчасового интервала после трансплантации.

В процессе изучения препаратов на светооптическом уровне дополнительно определяли ряд морфометрических показателей, характеризующих общеморфологические признаки эпидермиса, процессы удаления некротических масс, внутриклеточной регенерации, миграции, пролиферации, дифференцировки кератиноцитов. При этом использовали известные методики (Автандилов Г. Г., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ 0БСУ1ДЕНИЕ

ПРОЦЕССЫ НА ДОНОРСКОМ УЧАСТКЕ ПОСЛЕ ВАКУУМНОЙ ОТСЛОЙКИ ЭПИДЕРМИСА.

В отличие от животных контрольных групп, у крыс, подвергшихся местному воздействию отрицательного давления на большей части поверхности коки происходила отслойка эпидермиса. В последующем во всех компонентах образовавшихся пузырей наблюдались выразительные динамичные процессы в течение всего срока наблюдения.

Так, при изучении препаратов, полученных от крыс, забитых непосредственно после прекращения всех манипуляций, 59,42 поверхности дермы было лишено эпидермиса (табл. 2), поскольку все слои последнего, оторвавшись от нее, образовывали крыши

- я -

Таблица 2. ФОРМИРОВАНИЕ ЭПИДЕРМДЛЬЕОГО ПОКРЫТИЯ НА ПОВЕРХНОСТИ ГЕРКЫ В ДВУХ УСЛОВИЯХ ПОСЛЕ БАЕУУК30Г0 ОТСЛОЕНИЯ ЗПИДЕРК?1СА

С р 0 к, КОЛ-во вариант Приподнятое состояние эпидермиса . Отслоенное состояние ! эпидермиса !

Доля поверхности дермы (Г), не похры-тая зпи-1} дермисом Доля поверхности соли (X), с отслоенным эпи-деркиссм Доля поверхности деркы (2), не покрытая эпидермисом Доля по- ! верхности ! гохи (X), ! .. с отслоен- ! нин эпя- ! деркисом !

0 сут п П 1 59,4:13,47 9 П 5 54.3i4.41 0 1

1 сут п П 2 2,ЭВ±0,65 9 Р1 =0,0000* П 4 ■45,3*3,98 9 Р1=0,81?1 П 3 - : П Б ! влаш.еэ 1 12.4+2,т • 9 ! .9 ! 1*5=0,3333 ! Р5=3,В303 ! Р2=3,С223 ! Р4-0.ССЗЗ 1

2 ' сут п П 3 В,С0±0,ПЭ 10 Р2=0,ЕВ13 1 П 7 ! 0,2О±В,СЗ ! ! 9 1 ! РЗ-Э,1518 1 »

«Примечание: показатель достсэоряосгя (Р) с гонор«»-переменкой <П), относятежьяо которой определена достоверность.

I

пузырей. При этом сосочяовьЛ слой двр«ы яа виз позрежлен и г:э имел на своей поверхности кя клатох, ки кг сстатхсз. Бсгыжн-стго кератиноцятов базалького, сзяозатого я зерккстого слова в составе крыл пузырей содержали по одисЗ врутгаоа яентрэльло располояенной вакуоли, двфсрикроваезгЭ сдро. Хсрапгкоцята с вакуолями часто встречались к «а•территории участков кегк между пузырями. Это свидетельствовало, что вакуолизация ксрз-тиноцитов предаествовала отделения зякдеряяа.

Через сутки посла отслойки 33,31 позврхкоста дна яуяцрэа било покрыто нсиж эпктелйэм з 1-2 клеточках слег, в котормт пли процессы синтеза ДНК. В бозахьком слоа появзлись порете делящиеся мнтоэо* клетки. Источкякск фор^вфоаакяа нового эпителиального покрытия поверхности дермы, судя по гол« догеодх клгток, были прежде всего нерулгао горнавиэ влвгагя^а гезоея-

ных фолликулов (дола печеных клеток в базальнои слое новообразованного эпидермиса дна пузырей составила 183,6 Хо, а в базальнои слое верхнего фрагмента корневых влагалищ - 381,2 Хо). В крыша пузырей часть кератиноцитов сохранили признаки жизнеспособности, однако меченые клетки там ке встречались. Причем доля клеток с признаками жизнеспособности коррелировала с долей нейтрофильных лейкоцитов в составе пузырной жидкости (г=-0,800; Р=0,0001).

Через 2 суток после отслойки эпителий, наросший на дно пузырей нередко состоял ухе кз 3-5 клеточных слоев, причем во многих клетках обнаруживались кератогиалиновые гранулы. По сравнение с первыми сутками в последующие двое суток количество меченых клеток резко снижалось и к третий суткам после отслойки приходило к значениям не отличающимся достоверно от контрольных (доля меченых клеток в баэальном слое новообразованного эпидермиса дна пузырей составила 65,3 ТСо, а в баэальном слое верхнего фрагмента корневых влагалип - 76,0 Хо). Через 5 суток на больпикстве участков кожи практически невозможно было отличить эпидермис, который не был отслоен, оказа-■впись-в-кромоаутке между пузырями, от эпидермиса, новообразованного на месте дна пузыря.

У животных второй подопытной группы на срок 0 суток на 54,3 X поверхности дермы можно было найти отслоенный эпидермис. Большинство кератиноцитов в его составе также были ваку-олизированы. Однако в данном случае между отслоенный эпидермисом и соответствующей ему поверхностью дермы было видно лишь целевидное пространство. У крыс этой подопытной группы ухе через сутки на больпей части протяжения сосочкового слоя дермы не только находился эпидермис, но имел в большинстве своем практически нормальный вид и интенсивно накапливал радиоактивную метку (доля меченых клеток в базальном слое эпидермиса дна пузырей составила 148,2 Ко). Интенсивно меченый» и в этом случае были клетки базальногб.слоя -верхнего фрагмента наружных корневых влагалиа-золосяных фолликулов (311,4 %о). Через 2-5 суток после отслойки эпидермиса и удаления жидкости из пузырей в препаратах трудно было найти какие-либо признаки, отличавоие отслаивавшийся ранее эпидермис от интактного.

В том числе количество меченых клеток к третим суткам после отслойки приходило к значениям не отличающимся достоверно от контрольных (доля меченых клеток в базальном сдое эпидермиса дна пузырей составила 70,0 Но, а в базальном слсе верхнего Фрагмента корневых влагалищ - 74,78 Хо).

Рассматривая в сравнительном аспекте процессы, протекающие на коже крыс после вакуумной отслойки эпидермиса, следует обратить внимание на то. что доля поверхности дермы, не по-хрытая эпидермисом на нулевые сутхи у крыс 1-й группы была на 14% больше доли поверхности кожи с отслоенным эпидермисом через сутки (табл. 2, переменные 1 и 4). Это позволяет предположить, что приблизительно на такую величину на части поверхности дермы был вторично восстановлен эпидермальный покров за счет спадения мелких пузырей и приживления эпидермиса их ярыл. Это же сопоставление во 2-й подопытной группе (переменные 5 и 8) позволяет утверждать, что около 42Х зпидермального покрытия могло повторно восстановиться на поверхности дермы за счет повторного приживления эпидермиса хрыа кожно-вакуумных пузырей, из которых была выдавлена зидкость. Рассмотренное сопоставление, а также ряд других морфометрических показателей свидетельствует в пользу способности вахуумноотслоенного эпидермиса повторно приливаться иа поверхности сосочкового слоя дермы, ускоряя восстановление эпидермального покрытия иа ней. Учитывая это, а также то, что эпидермис бкстреэ разрастается на дне сохраненных пузырей в сравнении с состоянием, когда крыЕги удалены (Кгаисгук 8. Э., 1971), возникает основание для предложений по поводу тактики хирургов и дерматологов, когда км приходится иметь дело с состояниями кем, одним из основных клинических признаков которых - наличие пузырей, крыши которых представлены жизнеспособным эпидермисом, а полость содержит стерильную зидкость. Если существует возможность обеспечения неподвижного состояния эпидермиса при его размещении на прежнем месте, а причина, вызвавшая образование пузырей устранена, то б этом случае их можно вскрыть и прижать. Если таких условий создать не удается и есть уверенность, что зидкость пузыря не будет инфицирована, пузырь лучие оставить в интактном состоянии. Выполнение этих условий будет способ-

-- 12 -

ствовать ускоренной реэпидермизации поверхности коги.

В эпидермиое человека непосредственно после вакуумного отделения и оставления в приподнятом состоянии, также как у крыс, присутствовали все клеточные слои, имеющиеся в интакт-ном состоянии. Однако при этом выявлялись признаки травмирования клеток, особенно в базалькок и шиповатом слоях. Ё первом в значительной части клеток была повреждена базадьная поверхность, во втором - в подавляющем большинстве клеток была видна крупная, круглая, центрально расположенная вакуоль, оттеснявшая к периферия и деформировавшая ядро. При электронно-микроскопическом исследовании было установлено, что вакуоли были окружены мембраной и неизменно находились около ядра, которое приобретало полулунную форму. Вакуоли не включали перинуклеарного пространства, как можно было предположить на осноза сватооптических данных, а образовывались за счет распирения » слияния цистерн зндоплазматичоской сети.

Через 3 часа после отделения в базальном слое эпидермиса в составе крыви пузыря, уяе достаточно четко различались клетки с признаками гибели. Они занкмали около 5В% площади ба-зальной поверхности эпидермиса <табл. 3) и, в отличие от аиз-яеспособных клеток, сохраняли изрезанный контур базаяьного края. Их цитоплазма,- как. правило, была оксифнлыюй, просветленной, ядра находились в состоянии кариопикноза и кариорек-сиса. Наблюдалось групповое расположение погибающих н жизнеспособных клеток, что колет быть объяснено неодинаковой сте- -пенью развития колудасиосои у различных групп базальньос кера-ткноцитов (Lavker Е. И. et cl-, 1982; Schulze H.-J. et al., 1991). Через 12 часов после отслойки эпидермиса основным процессом, происходящим в базальнон слое, было распластывание жизнеспособных клеток по поверхности виповатого слоя, приводящее к 24 часам экспозиции к восстановлению непрерывности банального слоя (табл. 3). На этот срок остатки погибших клеток., расположенное группами или по-отдельности, нередко модно было встретить Еытеснэными на поверхности восстановленного базального слоя.

Спустя еде сутки («18 часов экспозиции) в толще эпидермиса. начала возрастать объемная деля участков с признаками нек-

Таблица

ИЗМЕНЕНИЕ ВО ВРЕМЕНИ ОХАРАКТЕРИЗОВАННЫХ КОЛИЧЕСТВЕННО ПРИЗНАКОВ СТРУКТУРЫ ОТДЕЛЕННОГО ЭПИДЕРМИСА ЧЕЛОВЕКА

Вре- Общая Доля по- Индекс ! Зиповатый слой

мя толдина верхности формы --------- --------- ---------

экс- базально- эпидерми- кле- Обгемная Относи- Доля

по- го, шипо- са, покры- точных доля тельное кле-

зи~ ватого и тая лизне- ядер некроти- число точных

ции зернисто- способными в ба- ческих клеток ядер с

(ча го слоез базалькыми задь- участков без ва- ядрыя-

сы) клетками ном куолей ками

(мкн) < * ) слое (X ) ( * ) ( X )

0 М 30,1 _ _ 10.8 _

а 0,99 1,11

1 М 29,6 _ _ _ 21,4 _

а 1,37 1,05

3 Н 29,3 46,4 1,15 1,46 38,0" 22,7

о 1,39 1,24 0,04 0,50 1,23 1,91

6 М 26,2 48,1 1,45 1,53 38,5 34,3

а 1,02 2,49 0,05 0,33 1,03 1,30

12 Н 25,5 60,5 2,38 2,33 39,4 34,1

□ 1,32 1,84 0,09 3,45 1,25 ■2,06

24 М 24,5 94,7 4,04 5,59 50,8 23,1

а 1,14 1,98 0,17 1,69 2,17 1,82

40 Н 21,8 82,5 4,46 23,0 73,7 в,ев

п 1,32 2,81 3,18 2,42 1,84 0,79-

72 М 24,2 45,4 55,7 71,2 4,50

а 1,79 5,02 3,13 3,16 0,75

роза клеток (табл.- 3). В цитоплазме некоторых из клеток появились специфические кератогиалиновые гранулы, причем нередко в кератиноцитах, расположенных на границе с базальным слоем. Наличие, этих гранул з кератиноцитах, располозенных ба-зально, было подтверждено элехтронно-михросколически через 72 часа после отслойки. В целом же морфологическая картина эпидермиса в составе крыин пузыря была достаточно пестрой на данный срок и характеризовалась преобладанием процессов деструкции. В течение всего срока исследования вакуумноотслоенно-го эпидермиса человека не было выявлено никаких признаков пролиферации кератиноцитов.

- 14 -

РАЗВИТИЕ ВДКУУМНО ОТСЛОЕННОГО ЭЯНДЕРНИСА ПОСЛЕ . ТРАНСПЛАНТАЦИИ.

■ Через сутки поело аутотрансплантацим эпидермис крыс, оказавшее л на поверхности подкожной клетчатки, состоял в основной из 1-3 рядов ядросодержацих жизнеспособных клеток и рогового слоя, прячем последний практически всегда был складчатым. Зернистый слой бая прерывистым. На этот срок не встречались Сигуры митотичэского деления клеток, которые появились на 2-е сутки, а некротические участки элиминировались к 3-м суткам. Через 5-10 суток после трансплантации в эпидермисе на различных участках можно было насчитать от 4 до 1В слоев клеток. Зернистый сдой практически на всем протяжении был непрерывным и состоял из 1-4 рядов клеток, часто содержащих крупные кератогиалиновые гранулы. В трансплантате между зернистым слоем эпидермиса н старым роговым слоем можно было обнаружить новый роговой слой. Чэрез 14-28 суток после трансплантации толщина эпидермиса и количество рядов клеток в нем сильно колебались на протяжении одного и того же препарата, хотя в эпидермиса на Сояьшшстве участков встречались все его слои. Клетки базального слоя оставались кеяьче и чаща были вытянутыми вдоль поверхности рецептивного ложа в отличие от таковых в интахтной коже. Была занетна избыточная мононуклеарная кн-Фнльтрациа в толщу эпидермотрансплантата. Еа тех участках, где длительно на удалялся рогоеой слой, он был достаточно мощным.

Краткое обобщение динамики основных количественных показателей, характеризующих структуру эпидермиса в точение месяца после его трансплантации представлено в таблице 4. Видно, что величина больпикства из показателей нарастала к определенному сроку, а затем медленно унепъаалась. Так, число ядер с ядрыаками в толще сяповатого слоя было максимальным на 35-е сутхи и достигало более 65Х. Пик митотического индекса наблюдался на З-5-о сутки и превысил 2,53, достоверно отличаясь от такого же похазателя как на 2-е, так и 7-28-е сутки. Доля клеток, содержавших кератогиалиновые гранулы, среди общего числа клеток супрабазальных слоев была максимальной на 3-7-е сутки и составила около 20 X, а общая толщина базально-

1 15 -

Таблица 4. ИЗМЕНЕНИЕ СТРУКТУРЫ ЭПИДЕРМИСА КРЫС, АУТОТРАНСПЛАНТЯРОВАКНОГО НА ПОВЕРХНОСТЬ КЛЕТЧАТКИ

С Обцая тол- Доля по- Мктоти- Доля Дега кле-

щина ба- верхности ческий ядер с с гра-

У зального. эпидерми- индекс ЯЛРКИ- нулами ке-

шиповато- с жизне- в KSLMH 3 ратогкагк-

т го, зер- способным базаль- икпо- на в суп-

нистого базальным ном ваток рабазаль-

к слоев слоем слое слое ных слоях

и (мкм) а> (So) (S) (г)

1 М 14,4 64,6 0,3 58,1 4,40

□ 1.6 . 4,9 0,3 2,2 0,72

2 м 17,8 91,8 14,4 64,0 17,33

□ 0,8 3,0 3,4 3.7 1.30

3 н 24,1 1ВВ.0 28,1 89,8 21. <50

ш 1.7 а,в 4,4 4,8 2.43

5 н 42,3 _ 25, i ^7,0 19,75

п 2,8 3,7 2,7 2.32

7 м 47.7 3,2 55, Э 19.2:

П 5,3 <'»~ 2,7 1.СЗ

10 И 47,5 _ 3,1 53,1 18.08

□ 5,2 2,0 2.5 2.25

14 й 48,1 8,4 10,2 15.27

а 3,4 1,в 1.5 2.23

23 Н 43,1 _ 3,6 52.0 12, S3

в 2,9 2,9 2,3 1.СЭ

23 М ¿1,3 _ С, 3 •$5,7 11,68

а 2.1 1.8 3.0 0,09

го, сиповатого н зернистого сгоез злидорм:;са - на epos 7-14 суток. С учетом совокупности рсах эти:; показателей временной прокохуток моаду 5-ми и 7-хл сутками соответствует пику M5S-скиального развития гэпилериотрзкеплаэтета. Аутотргксплактпро-ванный эпидермис дага через месяц после порэегдк.ч, а отяичяа от состояния, когда он бил раэмеачн на поверхности керкы, оставался в гкперплазирозанно.ч состекя'<я (Сольгое количество рядов клеток, непрерывный зернистый с.'.сЯ). Эта позволяет ут-зерхдать, что грануляционная ткань, хотя я сбзсшггнззст ег-

ковные условия для жизнедеятельности, развития и специфической гистодифференцировки эпидермиса, но, в то же время, она является далеко не адекватной дерме. Полученные данные в целом согласуются с таковыми других авторов (Brifigaoan R. д., 1982; Lenoir И. С. et al., 1985).

При радиоавтографическом исследовании установлено, что первые меченные клетки при аутотрансплантации были обнаружены сначала в развивающейся грануляционной ткани (срок - 20 часов после трансплантации эпидермиса), а первые меченые жератино-циты появились в базальном слое еще спустя 6 часов. Средняя интенсивность мечения ядер жератиноцитов крыс примерно была равна интенсивности мечения ядер фибробластов формирующейся грануляционной ткани рецептивного ложа. После появления первых меченых клеток в базахьном слое эпидермотрансплантата их доля быстро достигала 20-25Z к концу вторых суток и оставалась в этих пределах вплоть до начала 4-х суток; Затем вплоть до конца исследования доля меченых клеток в базальном слое эпидермотрансплантата постепенно снижалась до 7-10Z. Однако она оставалась высокой по краям эпидермотрансплантата.

Островки эпидермиса человека, оказавшиеся на поверхности клетчатки крысы и находившиеся там в течение суток, состояли из всех слоев, характерных для интактного эпидермиса, а клетки в их составе в большинстве своем сохраняли основные признаки жизнеспособности. В то -же время в базальном и шиповатом слоях встречались участки с явными признаками гибели клеток. Митозы на данный срок еще отсутствовали. Зернистый слой был представлен одним прерывистым рядом клеток. Через 2 суток в базальном слое эпидермиса нередко обнаруживались фигуры ыито-тического деления клеток. В цитоплазме части верхних клеток шиповатого слоя обнаруживались многочисленные, очень мелкие кератогиалиновые гранулы. Е 3-м суткам полностью элиминировались погибшие во время отслойки эпидермиса клетки. Б составе части клеток рогового слоя обнаруживались ядра. Однако уже спустя сутки (4 суток -после ксенотрансплантации) не происходило дальнейшего роста митогичесгой активности кератиноцитов трансплантированного эпидермиса и увеличения числа содержащих кератогиалиновые гранулы клеток, а начиная с 5-х суток и

- 17 -

вплоть до 7-х доля митотически делящихся клеток в составе трансплантированного эпидермиса, а такле число клеток с кера-тогиалиновыми гранулами постепенно уменьшалось. На срок 7 суток болызинство участков эпидермиса человека оказывалось полностью разрушенными.

По данным корфоматрии трансплантированный эпидермис крка пузырей человека также активно развивался но поверхности рецептивного лога первые трое'суток (табл. 5). Росла митотичес-кая активность. К третим суткам полностью элиминировались некротические участки из шиповатого слоя, восстанавливалась целостность хизнеспособного базального слоя. С 4-х суток, процесс развития эпидермиса замедлялся, а с 5-х начинался процесс деструкции трансплантата.

Таблица 5.

СТРУКТУРА КСЕНОТРАНСПЛАНТИРОВАННОГО ЭПИДЕРМИСА ЧЕЛОВЕКА

Общая толщина базального, шиповатого, зернистого слоев (мкм)

Доля поверхности эпидермис хизне-способным базальным слоем (2)

Митоти-чесхий индекс в

баэаль-ном слое (Хо)

Доля ядер с ядрышками в акпо-еэтом

слое «>

Доля клеток с керато-гиалиновыми гранулами в су-прабазаль-ньис слоях («>

1 И

п

2 И

о

з.к

о

4 Н

□

5 Н

• в

6 И а

46.2 3,15

53,4 1,89

58,1 3,71

57,1 1,54

46,4 2,67

48.3 2,89

75.2 5,1С

93.3 1,94

103,0 0,3

0.00 Э.ЕЗ

9,20 2,47

15,8 1,73

11,8 1,69

7,45 1,45

4,88 0,57

75,9 4,33

79,9 2,68

"57,0 5,09

62,8 4,40

58,7 3,17

58,6 4,21

4,38 1,42

9,55 1,33

19,8 3,10

19.6 1,74

16.7 2,45

10,6 3,15

" 18 -

В ксенотрансплакткрованном эпидермисе человека, так же как и в опыте с 'аутотрансплантацией крысиного эпидермиса, первые меченные клетей были обнаружены сначала в развивающейся грануляционной ткани Серок - 20 часов после удаления пол-иослойного кожного лоскута и трансплантации эпидермиса), а первые меченые кератвноциты появились в базажьном слое ксено-эпидермотрансплантата спустя еще 6 часов (1 сутки и 2 часа после трансплантации). Однако в отличие от аутотрансплантиро-ванного эпидермиса крыс средняя интенсивность мечения ядер кератиноцитов человека, определяемая по количеству зерен серебра, расположенных над ядрами меченых клеток, с самого начала была и в течение всего срока исследования оставалась несколько ниже, чем ядер фибробластов формирующейся грануляционной ткани рецептивного ложа, что можно объяснить видовыми особенностями эпидермиса человека. После появления первых меченых клеток в базадьном сдое эпидермотрансплантата их доля быстро достигала 12-162 к концу вторых суток и оставалась в этих пределах вплоть до качала 4-х сутох. Затем вплоть до конца исследования (конец 6-х суток) доля меченых клеток базадьном слое эпидермотрансплантата постепенно снижалась до 42. В супрабазальном слое ксеноэпидермотрансплантата в отличие от крысиного аутоэпидермотрансплантата меченые клетки к началу 6-х суток переста!и выявлятся.

Таким образом данное исследование подтвердило, что эпидермис человеха и хрыс в целом сохраняет свою жизнеспособность после вакуумной отслойки. Его структурная перестройка в последующем определяется главным образом условиями его дальнейшего развития. С практической точки зрения важно, что отслоений с помощью отрицательного давления эпидермис является полноценным кожным трансплантатом.

- 19 -ВЫВОДЫ

1. Вакууино отслоенный эпидермис человека и крыс может быть эффективно использован в качестве полноценного колкого трансплантата.

2. Пузыри, образующиеся под воздействием" отрицательного давления на кохе крыс, характеризуются мелккки разнераин и обладают тенденцией к спадению в результате реабсорбцим жидкости. В составе крыл неспавшихся пузырей в течение 1-2 суток происходит гибель эпидермиса. За это время их дно покрывается новым многослойным эпидермисом.

3. После повторного приведения отслоенного эпндеринса крыс э контакт с поверхность» дермы, он успешно приживается на прежнем месте и быстро приобретает черты исходного состояния, обеспечивая ускоренное заживление поверхности кожи.

4. Большая часть эпидермоцигов человека после ЕахуукнеЯ отслойки сохраняет жизнеспособность. В кег>ат.~; :>ч:ггах, оказавшихся в составе крыш кохко-вакуумкых пузарей исчезают первоначально возникшие вакуоли, перестраивается тонофкбрпллярнае сеть и десмосокы, формируются признаки ди^^еренцнровкн. В ростковом слое кератиноцнты распластываются и югтоскеют погибшие клетки в полость пузыря. Все эти преобразования происходят в отсутствии пролиферация. К гонцу 3-х сутск в тохцз крыш пузырей нарастают деструктивные явления.

5. Вакууино отслоенный эпидермис крыс, аутотранедлактвроваи-. ный на поверхность стерильной клетчатки приживается и развивается на новом месте. Кератиноцнты в его составе активно делятся и типично дифференцируются. Эпидермотрансплантат проходит фазу наиболее активного развития в кнтервагя 5-10 сутоя. а затем по своей структуре начинает постепенно возэреиаться в норке, однако даже через моспгд его гге то структура полностью не восстанавливается.

6. Вакууино отслоенный эпядернве «ологажа, жссяотраясплвхтн-рованный на поверхность полкоежойного хозкого я&Ф®1гтл. актав-но развивается в точениз первых 3-4 суток. Бояьгинстео кератиноцитов росткового слоя 9 его ссстззэ делятся я тккячяо дифференцируется. Явные признаки отторвояия Есекотранспгькта-та появляются к 7-м суткам.

- 20 - '

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1.ЛЕВЭ О.И., ОСТРОВСКИЙ A.A. Структурные преобразования ксе-нотрансплантированного эпидермиса человека // Материалы 6-й Гродненской областной конференции молодых ученых и специалистов "Наука-практике". - Гродно, 1990. - С.68.

2.ЛЕВЭ 0.11., ШАТРОВА В. О., ОСТРОВСКИЙ A.A. Преобразования структуры эпидермадького ауготрансплантата у лабораторных

. крыс // Материалы 6-й Гродненской областной конференции молодых ученых и специалистов. - Гродно, 1990. - С.69. 3.ОСТРОВСКИЙ A.A., ЛЕБЭ О.Н., ПАТРОВД В.О. Развитие аутоэпи-дермотрансплаитата на поверхности некоторых видов рецептив-. ного лоха в эксперименте // 2-й съезд анатомов, гистологов и эмбриологов БССР. - ÜH., 1991. - С.134.

4.ЛЕБЭ A.I., АС7Р0УСК1 A.A. Эп1тэлгзацыя nasepxHi дэрмы пасля адслаення эп1дэрм1са i яго вцдалеыш // Матэрыялы 7-й гро-дзенскай абласной г!анферэнцы1 каладых вучоных i спецыял!с-тау. - Гродна, 1991. - С.14.

5.ЛЕВЭ O.K., ОСТРОВСКИЙ A.A., ЕДТРОВА В.О. Восстановительные процессы, на козе крыс после отслоения эпидермиса с помощь» отрицательного давления, удаления жидкости из образовавшихся пузырей или их края / Гродн. мед. ин-т. - Гродно, 1992.

- 46 с. Деп. в ВИНИТИ S8.05.82, К. 1495-В 92. e.OCTFOBCKim А.А., ЛЕЗЭ О.И. Развитие и деструкция эпидермиса человека, ксенотрансплантированного лабораторным крысам// Морфология.- 1892.- K1.-TOH 102.- с. 78-63. 7.0СТРОБСХИЯ A.A., ЛЕВЭ О.И., НДТРОВА В.О. Развитие нежфолли-

кулярного эпидермиса r.puc noefe аутотрансплантации // Корфо-. логня.- 1992.- НБс. 105-112.

8. ЛЕВЭ А Л., АСТР0УС21 A.A. Прал1фарадая керац1нацытау ваку- ' уннаадслоеннага эп1дзрм1су чалавека i пацукоу пасля транс-плечтацы! // Матэрыялы 8-й гродзанехай абласной какферэнцы! ма^адах вучонах i спецыялхстоу. -Гродна, 1993. - С.10.

Основное показатели изобретательской деятельности -i.A.с. К.1718834 "Устройство для трансплантации крип коано-ла-еуушшх пузырей" ка заявщГ на изобретение H .4804795/14, при. оритет от 20 нарта 1СЗЭГ. Опубл. 15.03.92 г. Бмл. кзоерэтвкзЗ H.ID, 1S32 г. Соавтора: Островский Л.А., Есвамад В.Д.