Автореферат и диссертация по медицине (14.03.08) на тему:Микробиота кожных покровов человека в условиях герметичных помещений и длительных космических полетов при детектировании методом хроматомасс-спектрометрии микробных маркеров

На правах рукописи ГЕГЕНАВЛ AHITA ВЯЧЕСЛАВОВНА

МИКРОБИОТА КОЖНЫХ ПОКРОВОВ ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ ГЕРМЕТИЧНЫХ ПОМЕЩЕНИЙ И ДЛИТЕЛЬНЫХ КОСМИЧЕСКИХ ПОЛЕТОВ ПРИ ДЕТЕКТИРОВАНИИ МЕТОДОМ ХРОМАТОМАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ МИКРОБНЫХ МАРКЕРОВ

14.03.08 - авиационная, космическая и морская медицина 03.02.03 - микробиология

005019273

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 5 АПР 2012

Москва, 2012

005019273

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Государственном научном центре Российской Федерации - Институте медико-биологических проблем Российской академии наук

Научные руководители: Доктор медицинских наук Доктор биологических наук, профессор Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, иммунологии Московского государственного медико-стоматологического университета

Доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом «Клинико-физиологических исследований и экспертизы» ГНЦ РФ - ИМБП РАН

Мухамедпева Лана Низамовна Осипов Георгий Андреевич

Царев Виктор Николаевич

Воронков Юрий Иванович

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский испытательный центр подготовки космонавтов имени Ю.А.Гагарина»

Защита состоится 2012 в/^часов на заседании диссертационного

совета Д 002.111.0) в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Государственном научном центре Российской Федерации - Институте медико-биологических проблем РАН по адресу: 123007, г. Москва, Хорошевское шоссе, д.76а. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНЦ РФ - ИМБП РАН (123007, г. Москва, Хорошевское шоссе, д.76а).

Автореферат разослан « 012

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Левинских М. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы

Одной из основных проблем медико-биологического обеспечения длительных пилотируемых космических полетов является предотвращение возможности развития инфекционных заболеваний у членов экипажей [Лебединский A.B. с соавт., 1964; Левашов В.В., Финогенов A.M., 1967; Нефедов Ю.Г. с соавт., 1979; Ташпулатов Р.Ю. с соавт., 1979; Залогуев С.Н. с соавт., 1986; Поликарпов H.A., 1991; Пирсон Д.Л., 1994; Горшков В.П., 1995; Лизько H.H., 1996; Викторов А.Н. с соавт., 1998; Новикова Н.Д., 2003; Ильин В.К., 2004,2008; Lechtman M.D. et al., 1967; Berry Ch.A., 1970; Ferguson J.K. et al., 1973; Rodgers E., 1986; Taylor G.R., 1997; Costello E.K. et al., 2009]. Известно, что кожные покровы являются мощным источником загрязнения воздушной среды герметичных помещений ограниченного объема. Количество микроорганизмов, поступающих с покровных тканей человека в окружающую среду герметично замкнутого помещения, увеличивается практически в три раза по сравнению с обычными условиями обитания [Берлин A.A., 1990]. При этом эпидемиологическое значение имеют условно-патогенные представители аутомикрофлоры кожных покровов человека, проявление патогенных свойств которых в герметично замкнутом помещении существенно возрастает [Нефедов Ю.Г., 1979; Викторов А.Н. с соавт., 1986,1998; Залогуев С.Н. с соавт., 1986; Новикова Н.Д., 2003].

Изменения функционального состояния кожи у космонавтов развиваются в результате нарушения колонизационной резистентности организма, как результат воздействия неблагоприятных условий среды обитания: ограниченного объема помещения, перекрестной аутоинфекции, многокомпонентного загрязнения воздуха химическими веществами, астении, стрессовых ситуаций, которые в сочетании со снижением иммунологической реактивности организма и нарушением барьерной функции эпителия, способствуют активизации потенциально патогенной микрофлоры у космонавтов [Залогуев С.Н. с соав., 1980; Поликарпов H.A., 1991; Ильин В.К. с соавт., 2004].

Следует отметить, что в условиях эксплуатации Международной космической станции при частой сменяемости членов экипажей из различных географических регионов возрастает опасность развития оппортунистических инфекций у человека, обусловленных активацией условно-патогенной микрофлоры [Дроздова В.П. с соавт., 1970; Прохоров В.Я., 1971; Старцева Н.Д., 1976; Борисова O.K., 1976; Залогуев С.Н. с соавт.,1986; Новикова Н.Д., 2001; Mishra S.K., Pierson D.L.,1992; Taylor G.R., 1993; Пирсон Д.Л. с соавт., 1997].

Однако проблемой остается невозможность оценки роли некоторых групп микроорганизмов, трудно культивируемых с помощью классического бактериологического метода, прежде всего анаэробов. Используемые в последнее десятилетие молекулярно-биологические методы видоспецифичны, однако могут дать ложноположительные результаты. Результаты анализов значительно варьируют, затрудняя оценку общей численности популяции микроорганизмов [Noble W.C., 1993; Dekio I. et. al., 2005].

Перспективным является метод газовой хроматографии - масс спектрометрии (ГХ-МС) [Осипов Г.А. с соавт., 1996, 2003], основанный на идентификации и количественном

3

определении специфических маркерных молекул, входящих в состав клеточных липидов микроорганизмов в биопробе [Васюренко З.П., 1992; Goodfellow М., Minnikin D.E., 1985; Grice Е.А. et al., 2009].

Хемодифференциация микроорганизмов методом газовой хроматографии - масс спектрометрии по видоспецифичным, генетически детерминированным высшим жирным кислотам, альдегидам и стеринам клеточной стенки позволяет детектировать микроорганизмы на уровне семейства, рода и вида с количественной оценкой ауто- и инородной микробиоты человека [Албертс Б., 1994; Турова Е.С., 1996; Осипов Г.А., 2005, 2007].

Высокочувствительный, селективный метод газовой хроматографии - масс спектрометрии с установлением микробных маркеров, применительно к специфичным условиям обитания человека в герметичных помещениях и длительных космических полетах, позволит оперативно проводить мониторинг микробиоты человека (длительность ГХ-МС анализа составляет 3 часа) и разработать адекватные методы профилактики для снижения риска возникновения инфекционных заболеваний.

В связи с этим научный и практический интерес представляют исследования, позволяющие расширить спектр родового и видового составов микробных сообществ, формируемых на кожных покровах человека при длительной изоляции в герметичных помещениях и космических полетах, с внедрением в практику космической медицины оперативного метода контроля и оценки микробиоценоза кожи человека в реальном времени по молекулярным маркерам.

Цель работы. Исследование микробиоты кожных покровов человека при длительной изоляции в герметичных помещениях методом масс-спекгрометрии микробных маркеров и установление возможности применения метода ГХ-МС для оперативной индикации условно-патогенной микрофлоры человека в длительных космических полетах.

Задачи исследования:

1. Установить возможность применения метода ГХ-МС для индикации условно-патогенной микрофлоры в условиях длительной изоляции в герметичных помещениях.

2. Экспериментально сравнить родо/видовой составы микробиоты кожных покровов здорового человека при длительности изоляции от 105 и до 390 суток в герметичном помещении, и в условиях космическом полета (до 180 суток).

3. Провести сравнительный анализ микробиоты кожных покровов человека культуральным методом и методом ГХ-МС детектирования.

4. Установить диагностически значимые микроорганизмы (индикаторные), которые могут служить показателями дисбиотических процессов в организме человека при изоляции в герметичном объекте и в космическом полете с использованием метода кластерного анализа.

5. Установить опорные точки, достаточные для объективной и оперативной оценки количественного и качественного состава микробиоты кожных покровов человека.

6. Разработать технологию отбора и сохранения кожных проб, отобранных в условиях космического полета и герметичных помещений, для анализа методом ГХ-МС.

Научная новизна работы.

Впервые детектированием методом ГХ-МС при длительной изоляции в гермообъеме и космическом полете расширен родовой/видовой диапазон комменсальной и условно-патогенной аутомикрофлоры кожных покровов человека, трудно культивируемой классическим бактериологическим методом, включая анаэробную микрофлору глубоких слоев кожи: Eubacterium lentum, Bacillus cereus, Nocardia spp., Actinomycetes, Pseudonocardia spp., Rhodococcus spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Propionibacterium sp„ Propionibacterium acnes, Clostridium spp., Fusobacterium spp., Malassezia spp., Peptostreptococcus anaerobius.

Микробиота кожных покровов человека делится на две группы - микроорганизмы, которые претерпели количественные изменения в результате условий изоляции в гермобъеме (Actinomycetes, Rhodococcus spp., P. acnes. Streptococcus spp., Candida spp., Peptostreptococcus anaerobius, Pseudonocardia spp., Bacillus cereus), среди которых преобладали представители условно-патогенной аутомикрофлоры, и - микроорганизмы, количественно не отреагировавшие на экстремальные условия длительной изоляции в гермообъекте (Nocardia spp., Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Pseudomonas aeruginosa, Propionobacterium sp., Acinetobacter spp., Fusobacterium spp., Lactobacillus spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Malassezia spp., Eubacterium lentum, Clostridium spp.).

Показано, что дисбиотические изменения кожных покровов человека при длительной (390 суток) изоляции в герметичных помещениях характеризуются определенной закономерностью и имеют волнообразный характер с периодом увеличения численности условно-патогенной аутомикрофлоры в первый месяц адаптации человека к условиям изоляции и периодом относительной стабилизации видового и количественного состава микробиоты. Второй период увеличения численности условно-патогенной микрофлоры наблюдается с 270 суток изоляции и достигает максимальных значений по мере увеличения длительности изоляции человека до года. Из числа микроорганизмов, количественно прореагировавших на условия длительной изоляции, группу риска составили: Streptococcus spp., - потенциальный возбудитель стрептодермий, в частности импетиго и рожистого воспаления кожи, Р. acnes - являющиеся главным звеном в патогенезе угревой болезни, и Actinomycetes - потенциальные возбудители актиномикоза.

Практическая значимость работы.

Разработана и апробирована технология отбора и сохранения кожных проб, отобранных в условиях космического полета и герметичных помещений, для анализа методом ГХ-МС.

Внедрение метода ГХ-МС для оперативного контроля дисбиотических нарушений кожных покровов человека позволит проводить мониторинг условно-патогенной микробиоты кожных покровов и снизить риск возникновения инфекционных заболеваний при длительной изоляции человека в герметичном помещении и в условиях космического полета.

Установление индикаторных микроорганизмов кожных покровов человека создаст основу для разработки бортовой аналитической аппаратуры и оперативного контроля дисбиотических нарушений человека в условиях космического полета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Метод ГХ-МС, являясь высокочувствительным, некультуральным методом детектирования микробиоты кожных покровов человека, позволяет в условиях герметичных помещений и космических полетов расширить родовой/видовой диапазон идентификации комменсальной и условно-патогенной аутомикрофлоры, включая микроорганизмы, трудно культивируемые классическими бактериологическими методами: Pseudonocardia spp., Actinomycetes, Rhodococcus spp., Nocardia spp., Pseudonocardia spp., Propionibacterium spp., Bacillus cereus, Peptostreptococcus anaerobius, Fusobacterium spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Malassezia spp., Eubacterium lentum, Clostridium spp. и др.

2. Хемодифференциацией микроорганизмов методом ГХ-МС детектирования показано, что при длительной изоляции в гермобъеме и в космическом полете микробиота кожи человека характеризуется количественными и видовыми изменениями, с увеличением доли условно-патогенных микроорганизмов (включая анаэробные), что является одним из факторов микробиологического риска и определяет необходимость осуществления оперативного мониторинга состояния микрофлоры кожных покровов по молекулярным маркерам.

Апробация работы.

Основные результаты и положения диссертации докладывались и обсуждались: на Международном конгрессе «Человек в космосе» (Москва, Россия, май 2009); на VIII «Конференции молодых ученых, специалистов и студентов», посвященной дню космонавтики (Москва, апрель 2009); на Всероссийской конференции «Экотоксикология - 2009. Современные биоаналитические системы, методы и технологии» (Пущино - Тула, Россия, октябрь 2009); на IX «Конференции молодых ученых, специалистов и студентов», посвященной дню космонавтики (Москва, апрель 2010); на «XXXVIII Международных общественно-научных чтениях, посвященных памяти Ю. А. Гагарина» (Гагарин, Россия, март 2011); на конференции «Актуальные проблемы космической биологии и медицины» (Москва, Россия, октябрь 2011).

Диссертация прошла апробацию на заседании секции Ученого Совета ГНЦ РФ -ИМБП РАН "Космическая медицина" (протокол №1 от 12 января 2012 г.).

Личный вклад автора. Все результаты, составляющие основное содержание диссертационной работы, получены автором самостоятельно. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведена подготовка проб к анализу, проведение ГХ-МС анализа, расшифровка и анализ масс-спектрограмм. Научно обоснованы и обобщены результаты экспериментальных исследований. Вклад автора является определяющим в выборе микроорганизмов индикаторов дисбиотических состояний и опорных точек для диагностики микробиологического статуса человека при длительной изоляции в герметичных помещениях и космических полетах. Автор принимал непосредственное участие на всех этапах экспериментально-теоретического обоснования и обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и их внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.03.08 - «авиационная, космическая и морская медицина» (соответствуют области исследования специальности, конкретно пункту 4 паспорта авиационной, космической и морской медицины) и 03.02.03 — «микробиология» (соответствуют области исследования специальности, конкретно пункту 2 паспорта микробиологии).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 34 рисунками. Библиографический указатель включает 230 наименований, из них 118 российских и 112 иностранных.

Внедрение результатов исследований подтверждено в акте № 682-121-03/12 по результатам контроля состава микробиоты кожных покровов человека при длительной (520 суток) изоляции в гермобъекте, утвержденном ГНЦ - РФ ИМБП РАН (2012 г.).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

При выполнении работы проведены исследования с участием добровольцев при длительности изоляции от 105 до 390 суток в герметичных обитаемых помещениях и космонавтов в длительных космических полетах. Группу контроля составили добровольцы в обычных условиях жизнедеятельности.

Основные направления экспериментальных исследований и их объем представлены в табл. 1.

Отбор проб.

Отбор проб микрофлоры кожных покровов испытателей проводился по общепринятой в микробиологической практике методике - методом кожных смывов [Залогуев С.Н., Тейлор Г.Р., 1974]. В условиях космического полета для взятия кожных проб использовали стандартные укладки со стерильным ватным тампоном, помещенным в пробирку с консервантом, обеспечивающим сохранение исходного состава микрофлоры на срок до 5 суток. Отбор аутомикрофлоры у космонавтов - членов экипажей МКС проводился со следующих биотопов: лба, щек, шеи, груди, подмышечных впадин, паховой области, ладоней рук. В наземных экспериментах забор кожных проб производился с участков подмышечных впадин и паховой области. Отбор микрофлоры осуществлялся в одно и то же время: натощак, до принятия душа не ранее 2 часов перед шлюзованием. Площадь исследуемой поверхности кожи - 4X5 см. После

этого 'Л тампона, отделенного пинцетом, использовалась при ГХ-МС анализе, а другая 'Л - при бактериологическом исследовании.

Таблица 1. Структура и объем проведенных исследований.

Изучение Периодичность Длитель- Коли- Количество Биотопы

динамики исследования ность чество проанализирован-

микробной исследо- человек ных проб

обсемененности ваний ГХ- Бакте-

кожи человека МС риоло-

мето- гичес-

дом ким

методом

Подмышеч-

А. однократные — 34 34 34 ная впадина

Исследования

здоровых людей

в обычных Паховая

условиях 34 34 область

обитания

Наземные перед 105 6 42 42 Подмышеч-

испытания в экспериментом; суток ная впадина

гермобъеме на 35, 70, 90, 105

сутки

а) длительность эксперимента; 42 42 Паховая

105 суток на 7 и 14 сутки область

после

эксперимента

перед Подмышеч-

б)длительность экспериментом 390 6 78 78 ная впадина

390 суток и каждые 30 суток

суток Паховая

эксперимента 78 78 область

перед полетом; 28 28 Лоб

Б. на 7 сутки 6 7 28 28 Щека

полета; месяцев 28 28 Шея

Пилотируемые на 0 и 7сутки 28 28 Грудь

полеты после 28 28 Подмышеч-

приземления. ная впадина

28 28 Паховая

область

28 28 Ладонь

Общее количество проанализированных проб методом ГХ-МС 504

Анализ микрофлоры кожи бактериологическим методом исследования.

Микробиологические исследования у здоровых лиц производились в лаборатории микроэкологии человека Отдела санитарно-гигиенической безопасности человека в искусственной среде обитания ГНЦ РФ - ИМБП РАН.

Исследование мазков: посев, микроскопию, оценку количественным методом, оценку результатов и идентификацию выделенных культур (с использованием соответствующих сред и методов) проводили в соответствии с методикой, описанной в приказе МЗ №535 от 22.04.1985г. Биохимическая идентификация проводилась с использованием коммерческих тест систем LACHEMA в соответствии с инструкцией производителя.

Анализ микрофлоры кожи методом хроматомасс-спектрометрического детектирования.

ГХ-МС анализ отобранных проб проводился в лаборатории санитарно-химической безопасности и токсикологии ГНЦ РФ - ИМБП РАН.

Анализ и обоснование принадлежности маркеров конкретным микроорганизмам осуществляли по методике «Оценка микроэкологического статуса человека методом хроматомасс-спектрометрии», утвержденной Росздравнадзором № 2010/038 от 24.02.2010 г. с внесенными изменениями для кожных проб.

Анализ проводился непосредственно после отбора проб или, если немедленный анализ проб был невозможен, пробы замораживали и хранили при -5/ -18°С. Пробоподготовка предусматривала проведение кислого метанолиза: в пробирку (виал) с пробой приливали 400 мкл 1М соляной кислоты в метаноле, завинчивали плотно крышкой и термостатировали при 80 С в течение 1 часа. К реакционной среде добавляли 400 мкл гекеана. Смесь помещали в систему интенсивного встряхивания Vortex на 2 мин. и затем отстаивали до разделения фаз в течение 5 мин. при комнатной температуре. Верхнюю гексановую фракцию отбирали порциями по 80 мкл в чистый виал и высушивали 5-7 мин. при 80°С. В сухой остаток добавляли 20 мкл Ы,0-бис(триметнлс11лил)-трифторацетамида и помещали в термостат на 15 мин. при 80°С. К реакционной смеси добавляли микропипеткой 80 мкл гекеана и переносили смесь в коническую вставку, которую помещали в тот же виал, и завинчивали его плотно крышкой. Смесь эфиров в количестве 1 мкл вводили в инжектор ГХ-МС системы АТ-5973 Agillent Technologies (США). Для управления и обработки данных использовали штатные программы прибора. Хроматографическое разделение пробы осуществляли на капиллярной колонке с метилсиликоновой привитой фазой HP-5ms Хьюлетг-Паккард. Масс-спектрометр -квадрупольный, с ионизацией электронами (70эв) работал в режиме селективных ионов (S1M) при периодическом детектировании до 30 ионов в пяти интервалах времени.

Площади пиков маркеров на масс-фрагментограммах интегрировали автоматически по заданной программе с использованием внутреннего стандарта -тридейтеро-метилового эфира тридекановой кислоты. Верификация данных масс-фрагментограмм состояла в измерении площадей пиков ионов определенной массы на селективной хроматограмме специфических веществ - маркеров микроорганизмов, учитывая время хроматографического удерживания. Данные автоматической обработки

проверяли визуально. Затем эти данные вводили в программу расчета, подготовленную в электронных таблицах EXCEL.

Статистическая обработка результатов.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием кластерного анализа [Егоров А.Д с соавт., 2009; Трифонова О.П. с соавт., 2010]. Достоверными считали различия при р<0,05. Статистическую обработку данных, полученных при фоновых исследованиях, выполняли с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0» для Microsoft Windows.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Топическая характеристика микробной обсемененности кожных покровов и выбор реперных точек для мониторинга микробиоты кожи в условиях космического полета.

В соответствии с задачами исследование микрофлоры кожных покровов обследованных проводилась классическим бактериологическим методом и методом хроматомасс-спектрометрического детектирования (ГХ-МС). На коже обследованных методом ГХ-МС идентифицированы микроорганизмы, принадлежащие к 22 видам/родам. Количественно определены следующие микроорганизмы: Pseudonocardia spp., Актиномицеты* Rhodococcus spp., Nocardia spp., Propionibacterium sp.**, Propionibacterium acnes, Corynebacterium spp., Streptococcus spp.. Staphylococcus spp., Lactobacillus spp., Enterococcus spp., Peptostreptococcus anaerobius, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp., Fusobacterium spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Candida spp., Malassezia spp., Bacillus cereus, Eubacterium lentum, Clostridium spp.

В результате исследований методом ГХ-МС детектирования расширен родовой/видовой диапазон комменсальной и условно-патогенной аутомикрофлоры, трудно культивируемой классическим бактериологическим методом, включая анаэробную микрофлору глубоких слоев кожи: Eubacterium lentum. Bacillus cereus, Nocardia spp., Actinomycetes, Pseudonocardia spp., Rhodococcus spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Propionibacterium spp., Clostridium spp., Fusobacterium spp., Malassezia spp., Peptostreptococcus anaerobius (рис. 1, 3).

""Примечание: Актиномицеты - аэробные представители класса Асйпотусе1еБ, молекулярным маркером которых является мицеловая кислота 10Ме14.

* *РгорюпоЬас1е>чит .чр,- представители пропионовых бактерий, молекулярным

маркером которых является изопентадекановая (¡15) кислота.

Огн.

3 6 9 12 15 16 21

Группы микроорганизмов

ГРУДЬ

к А

/оЛ .

/■•' ° V о I А

12 15 Группы микроорганизмов ЩЕКА

микроорганизмов

Рис.

1. Распределение микроорганизмов количественной реакции на воздействие ("достоверное различие между кластерами р<0,05).

6 9 12 15 13 Группы микроор!аниэмоа

-о- Cluster I - с динамикой

3-Acthomycetes 8-Propionobacterium acnes

4- Rhodococcus spp. 10-Streptococcus spp.

5-Pseudonocardiaspp. 20-Candida spp. ■□- C!jsÄr 2 - без динамики

1-CI. difficile 15-Pseijdomonas aeruginosa

2-CI. perfringens 16-Acinetobacter spp.

■ 6-Nocardia spp. 17-Fusobacterium spp.

7-Propionobacterium sp.18-A!caligenes spp. 9- Corinebacterium spp. 19-Prevote!la spp.

11-Staphylococcusspp. 21-Malassesia spp.

12-Lactobac/llus spp. 22-Bacillus cereus

13-Enterococcus spp. 23-Eubacterium lentum

14-Peptostreptococcus anaerobius

кожных покровов по кластерам, с учетом комплекса факторов космического полета

Кластерный анализ полученных результатов позволил все идентифицированные микроорганизмы биотопов лба, щеки, шеи, груди, руки, подмышечной впадины и паховой области разделить на две группы - два кластера (рис. 2, 3). Первая - группа микроорганизмов, которая количественно отреагировала на действие комплекса факторов

космического полета - Cluster 1. Cluster 2 - группа микроорганизмов, количественно не отреагировавших на действие факторов космического полета, находившихся на относительно стабильном уровне в течение всех сроков исследования.

Отн. един.

Лоб

/ А

/ / \ \

/ / ъ

У

До Полет После После 7 дн

Рука

Отн. един.

Шея

о---

/ /

До Полет После После 7 дн. Грудь

А

/ / \ \ \ X

X

До Полет После После 7 дн. До Полет После После 7 дн.

-о- Cluster I - группа микроорганизмов, -о- Cluster 2 -группа микроорганизмов,

количественно не прореагировавших количественно прореагировавших

на воздействие комплекса факторов на действие комплекса факторов

космического полета космического полета

Рис. 2. Динамика общей обсемененности микроорганизмов кожных покровов в

исследованных биотопах у космонавтов (""достоверное различие между кластерами р<0,05).

При длительной изоляции человека в космическом полете видовой состав микрофлоры во всех исследованных биотопах был одинаков с индивидуальной вариабельностью количественного состава по биотопам. К Claster 1 относились Actinomycetes, Rhodococcus spp., Р. acnes, Streptococcus spp., Candida spp., Pseudonocardia spp. Причем с наибольшей значимостью и наименьшими расхождениями количественно

12

прореагировали Actinomycetes, P. acnes, Streptococcus spp., являющиеся условно-патогенными для человека (р<0,05). Данные микроорганизмы значительно увеличили свою численность при исследовании микробиоты кожных покровов на 0 сутки после приземления космонавтов.

Вторая группа микроорганизмов, представленная в исследованиях - Claster 2. К ним относились: Nocardia spp., Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Peptostreptococcus anaerobius, Lactobacillus spp., Pseudomonas aeruginosa, Propionobacterium sp., Acinetobacter spp., Corynebacterium spp., Fusobacterium spp., Alcaligenes spp., Prevotella spp., Malassezia spp., Eubacterium lentum, CI. perfringens, CI. difficile. Микроорганизмы этой группы оставались относительно стабильными по численности на протяжении всего периода исследования.

Область подмышечной впадины (ПВ) и паховой области (ПО) отличались наибольшей микробной обсемененностью и количественной динамикой составов прореагировавших групп у космонавтов - что обусловило выбор данных биотопов в качестве наиболее показательных (опорных) для оценки микробиоценоза кожи (рис.3).

Подмышечная впадина

Отн. един.

Подмышечная впадина

г;:5 :Е5 1 f"5

IE5 ЇЖО О

■530'D

един.

/ / 5*000 <0X0 Л КЗ і I

/ !C:0G 0 А • / \ -Vr ' л

•5 MD

До

Полет После После 7 дн.

6 9 12 15

Группы микроорганизмов

-о- Cluster 1 - с динамикой 8- Propionobacterium acnes

3- Actinomycetes Ю- Streptococcus spp.

4- Rhodococcus spp. 22-Bacillus cereus Cluster ? - без динамики Рис. За. Основные группы микроорганизмов кожных покровов подмышечной впадины, прореагировавшие количественно на условия среды обитания космического полета (♦достоверное различие между кластерами р<0,05).

Оін. Паховая область

1.4 Е5

1.2 Е5

1Е5 / /

бОШО і /

«ООО 20000 / і /

0 ......................

-20000

Паховая область

До

Попет После После 7 дн.

6 9 12 15 18

Группы микроорганизмов

-о- Cluster 1 - с динамикой 8- Propionobactenum acnes

3- Actynomycetes 10- Streptococcus spp.

4-Rhodococcus 22-Bacillus cereus -o- Cluster ? - без динамики Рис. 36. Основные группы микроорганизмов кожных покровов паховой области, прореагировавшие количественно на факторы космического полета (* достоверное различие между кластерами р<0,05).

Ранее исследователями отмечалось, что особенно обильно заселены микроорганизмами те области кожных покровов, которые защищены от действия света и высыхания [Noble W.C., 1993; Hopwood D. et al., 2005; Wilson M., 2008]. Преимущественная микробная обсемененность подмышечной и паховой областей обусловлена значительным количеством апокриновых и эккриновых желез, наличием грубых волос, более высоким значениям pH, по сравнению с другими исследованными биотопами, относительно постоянными показателями температуры и высокой влажностью. При длительной изоляции человека в гермообъеме к физиологически обусловленным, благоприятным для развития микроорганизмов условиям добавляются неблагоприятные условия среды обитания: ограничение объема помещения и средств личной гигиены.

Исследования в выбранных биотопах (подмышечной впадине - ПВ, и паховой области - ПО) показали, что на кожных покровах космонавтов в начале полета (6-10 сутки) наблюдается небольшое увеличение численности некоторых представителей условно-патогенной микробиоты: Р. acnes - (на 11,9 % в ПВ и 9,4 % в ПО) и Candida - (на 2,3 % в ПО), Actinomycetes (в ПВ - на 2% , в ПО - на 2,5%) с одновременным уменьшением доли защитных групп микроорганизмов кожных покровов -Corynebacterium - на 2,5% в ПВ и 1,1% в ПО (рис. 4).

пв

по

□ Eubacterium lentum

■ Bacillus cereus nMalassezia spp.

■ Candida spp.

□ Prevotella spp.

■ Alcallgenes spp.

■ Fusobacterlumspp. oAcinetobacter spp. и Pseudomonas aeruginosa

■ Peptostreptococcus anaeroblus

■ Enterococcus spp.

в Lactobacillus spp. oStaphylococcusspp.

■ Streptococcus spp. mCotynebacterlum spp.

■ Propionibacterium acnes ¡nproplonibacteriumsp.

■ Nocardia spp.

■ Pseudonocardla spp.

□ Rhodococcus spp. ш Actlnomycetes

■ Clostridium spp.

ДК8Й

Рис. 4. Динамика (%) анаэробной и аэробной микрофлоры кожных покровов, обследованных в подмышечной впадине и паховой области до полета, в длительном космическом полете и после приземления.

Данные факты свидетельствуют о начальных дисбиотических проявлениях и подтверждают литературные данные о снижении колонизационной резистентности организма в начале полета, что согласуется с данными литературы [Залогуев С.Н. с соавт., 1983; Поликарпов H.A., 1991; Викторов А.Н. с соавт., 1995; Ильин В.К. с соавт, 2008]. Для некоторых условно-патогенных групп микроорганизмов (Р. acnes, Streptococcus, Acinomycetes, Rhodococcus) значимое (p<0,05) повышение численности зафиксировано на 0 сутки после приземления, с тенденцией к восстановлению состава биоценоза к 7 суткам по окончании полета.

Микробиологический статус кожных покровов здорового человека в обычных условиях жизнедеятельности и в условиях длительной изоляции в гермобъеме при детектировании методом ГХ-МС.

Исследована микрофлора кожных покровов практически здоровых обследованных в обычных условиях жизнедеятельности и в условиях изоляции в герметично замкнутых помещениях (длительностью 105 и 390 суток). Результаты исследований показали

100% - ШШШ —ЕЗ —П 100%

90%

V

60%

50%

40%

30%

20%

10%

70%

60%

II 20%

| ■ « | | I ■

ft) Полет После После/дней Я® Поля Item Пи?

однотипность количественной реакции и состава микроорганизмов кожных покровов обследованных на длительную изоляцию в герметичном помещении и космическом полете, что позволило оценку микробиоты кожи обследованных при длительной изоляции в гермобъеме проводить по опорным точкам - подмышечной впадине (ПВ) и паховой области (ПО).

При исследовании микроорганизмов кожных покровов в обычных условиях жизнедеятельности человека с использованием метода ГХ-МС был составлен микробный пейзаж данных областей (рис. 5). Был выявлен широкий спектр микроорганизмов и показано, что представители анаэробов (Peptostreptococcus anaerobius, Eubacterium lentum, Clostridium spp., Propionobacterium spp. и др.) являются полноправными участниками биоценоза кожи, что подтверждается и литературными данными [Шендеров Б.А., Зубков М.Н., 2003; КабаеваТ.И., 2005; Costello Е.К. et al„ 2009].

Оim. ед. 8000 7000 6000 5000 4000 ЗООО 2000 ЮОО

X

М ill 1 =g

ё '5> .S Si ^ "§

2 .2 га £,

э «.§-!.= <£ ¡1^11

Ш

<В I

S

а) ПВ

■ Mean

f~""l ±SE

ZС =M.ae-3E

б)ПО

ш Mean I I iSE ~1~ ±1 ,96-SE

Рис. 5. а) Микробный пейзаж подмышечной впадины человека (п=34) в обычных условиях жизнедеятельности.

б) Микробный пейзаж паховой области человека (п=34) в обычных условиях жизнедеятельности.

При длительной (105 суток) изоляции обследованных в герметически замкнутых помещениях «пик» повышения контаминации условно-патогенных микроорганизмов пришелся на 35 сутки исследований в ПВ, ПО (рис. 6).

До 30 суг. 70 cyi. 90 сут. 105 сут. 7 после. 14 после

-о- Cluster I - 8-Propionobacterium С динамикой acnes

3-Actinorrycetes 10-Streptococcus spp.

4- Rhodococcus 20-Candida spp.

12 1S микроорганизмов

-a- Cluster2 -без динамики

Рис. 6. Динамика численности условно-патогенных микроорганизмов кожных покровов человека в паховой и подмышечной областях при длительности изоляции 105 суток (♦достоверное различие между кластерами р<0,05).

Исследование содержания анаэробной и аэробной микрофлоры кожных покровов, обследованных в опорных точках - ПВ и ПО, показало, что на 35 сутки изоляции наблюдается значимое (р<0,05) увеличение численности Р. acnes, Streptococcus spp., Actinomycetes, Candida spp., Peptostreptococcus anaerobius, Pseudonocardia spp. Rhodococcus spp. на фоне уменьшения Corynebacterium spp.- на 3,5% в ПВ и 1,25% в ПО. В дальнейшем, по мере увеличения длительности изоляции (105 суток) наблюдался процесс стабилизации численности микроорганизмов с уменьшением (р<0,05) условно-патогенной микрофлоры. В первые сутки по окончании периода изоляции дисбиотические

изменения проявлялись только в ПВ с увеличением численности Streptococcus spp., Actinomycetes, P. acnes., Candida spp. (рис. 7).

Таким образом, при длительности изоляции человека в герметичном помещении до 105 суток наблюдается два периода изменения количественного состава микрофлоры: увеличение численности условно-патогенной микрофлоры в первые 35 суток изоляции и период относительной стабилизации микробной обсемененности кожных покровов, который продолжается до 105 суток изоляции. Это явление было описано ранее и объясняется снижением колонизационной резистентности в первый месяц изоляции [Залогуев С.Н. с соавт., 1983; Викторов А.Н. с соавт., 1998; Поликарпов H.A., 1991; Ильин В.К. с соавт., 2008]. По нашим данным повторное проявление дисбиотических изменений наблюдалось в первые сутки по окончанию изоляции длительностью 105 суток и характеризовалось повышением численности условно-патогенной микрофлоры.

Относ, един

7000 6000 5000 4000 3000 2000

Streptococcus spp. (ПВ)

I 3000

Coivnebacterium spp. (ПО)

Ii

До

А—rifcJ

35сут 70сут ЭОсут 105сут 7посл Ипосл

L з» 1а Г. I

¿я

До

ЗБсут 70сут 90сут 105сут 7посл 14посл

Относ, един.

40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000

Propionobacterium acnes (ПВ)

Actinomycetes (ПО)

i

12000 10000

8000 6000 4000 2000

А.

35сут 70сут ЭОсут 105сут 7лосл 14посл

Испытуемые: 1 ■. 2 \

Éfi

До 35сут 70сут ЭОсут 105сут 7посл 14посл

,3 4 ■ 5 й, 6 ПИ

Рис.7. Динамика индивидуальных изменений численности защитных (Corynebacterium spp.) и условно-патогенных микроорганизмов (Actinomycetes, Р. acnes, Streptococcus spp.) подмышечной впадины и паховой области при 105 суточной изоляции (ГХ-МС детектирование).

Общая динамика дисбиотических изменений кожных покровов обследованных с превалированием условно-патогенной микрофлоры по данным ГХ-МС подтверждается данными бактериологических исследований, в которых также показано, что при длительной изоляции человека в гермообъекте (105 суток) наблюдается увеличение доли групп условно-патогенных микроорганизмов.

Бактериологический анализ микробиоты кожных покровов испытуемых выявил наличие представителей резидентной микрофлоры: S. epidermidis и S. aureus (рис. В). При этом в первый месяц изоляции наблюдалось преимущественное увеличение доли транзиторной компоненты микробиоценоза кожи: Enterococcus spp.- до 38% в ПО, ПВ, Е. coli - на 27% в ПВ, Proteus spp - до 5% в ПО, Streptococcus spp. - на 1% в ПВ и дрожжей Candida - на 1% в ПВ на фоне увеличения общей обсемененности исследованных биотопов. С 90 суток наступал процесс стабилизации дисбиотических нарушений.

Шдеышечнаяыидпш Подмышишявшдша Подмышечная впадпна

ДОНСПШНШ о; 35 CV1KII 1+еС)ТК11П0СЛеПСПЬГП1ИЙ

Паховая облапь До испытании

0%

Ibxomotam. 1+((1ТМ11Юсл(1кпы1амп'|

ЛЛI № Ilm

PS epidermidss IS aureus "P aeruginosa nEnterococcus spp DE coli □Streptococcusspp DProteusspp

Рис. 8. Динамика микрофлоры кожных покровов человека при исследовании классическим бактериологическим методом в условиях длительной (105 суток) изоляции, в герметичном помещении.

При увеличении длительности изоляции до 390 суток динамика повышения численности условно-патогенной микрофлоры кожных покровов обследованных соответствовала той, которая наблюдалась при 105-суточной изоляции. Состав микрофлоры при исследовании ГХ-МС методом характеризовался статистически значимым (р<0,05) повышением численности в ПВ на 30-е сутки эксперимента, в ПО - на 30-е и 90-е сутки исследования (рис. 9), По приоритетности колонизации ПО и ПВ доминирующими были условно-патогенные микроорганизмы: Streptococcus spp.(Z9,f>% в ПВ и 40 % в ПО;, Actinomycetes (35,5 % ПВ и 19,2 % в ПО), Rhodococcus spp.(\l,9% в ПВ и 16,7 % в ПО), Candida spp.( 13,3% в ПВ и 9,9% в ПО), Staphylococcus spp.( 10,6 % в ПВ и 1,1 % в ПО), Р. acnes ( 8,4% в ПВ и 3,7 % в ПО). Защитные группы микроорганизмов -Corynebacterium spp., составляющие до эксперимента в ПВ 3,68% и в ПО 3,98%,

уменьшили свою долю среди других микроорганизмов, составив на 30-е сутки изоляции 0,1% и 1,49% в ПВ и ПО соответственно.

сл„ ПВ

Отн. ПВ .

Группы микроор! эмизмои

10- Streptococcus spp. 20- Candida spp.

22-Bacillus cereus -о- Cluster 2 - без динамики

~До ЗОсут Юс/1. ~ 150сут. 210сут. 270cyi. 390cyi -о— Cluster 1 -с динамикой

3- Actinomycetes

4- Rodococcus spp.

8- Propionobacterium

acnes

Рис. 9. Динамика условно-патогенных микроорганизмов кожных покровов человека при увеличении длительности изоляции до 390 суток (* достоверное различие между кластерами р<0,05).

Данные, полученные при увеличении длительности до 390 суток показали, что период стабилизации длится до 270-х суток и характеризуется относительной стабилизацией видового и количественного состава микробиоты с уменьшением численных значений представителей условно-патогенной флоры. Однако, начинал с 270-х суток, наблюдается постепенное нарастание потенциала патогенности, ставшее значимым (р<0,05) к 360-м суткам (рис. 10). Наиболее значимо (р<0,05) количественно прореагировали на условия длительной изоляции в гермобъеме Streptococcus spp., Р. acnes, Actinomycetes - что позволяет рекомендовать их как диагностически значимые (индикаторные) микроорганизмы, позволяющие характеризовать микробный статус человека.

Испытуемые: 1 2 =,3 -,4 ■i 5 6 ШЗ

Рис. 10. Динамика индивидуальных изменений численности защитных (Corynebacterium spp.) и условно-патогенных (Streptococcus spp., Р. acnes, Actinomycetes) микроорганизмов подмышечной впадины и паховой области при 390- суточной изоляции (ГХ-МС детектирование).

Таким образом, дисбиотические изменения кожных покровов человека при увеличении длительности изоляции до 390 суток человека в герметичных помещениях характеризуются определенной закономерностью и имеют волнообразный характер (рис. 11). Повышение численности условно-патогенной аутомикрофлоры наблюдается в первый месяц адаптации человека к условиям изоляции. В последующие сутки (120-270) прослеживается относительная стабилизация видового и количественного состава микробиоты. Постепенное увеличение с 270 суток численности условно-патогенной микрофлоры предполагает снижение защитных резервов организма и, как следствие, колонизационной резистентности кожных покровов. Значимое (р<0,05) нарастание (на 360 сутки) условно-патогенной микрофлоры является прогностически важным для длительных межпланетных полетов. Наибольшая значимость из числа микроорганизмов, количественно прореагировавших на условия длительной изоляции - у Streptococcus spp., потенциального возбудителеля сгрептодермий, в частности импетиго и рожистого воспаления кожи, Р. acnes - являющихся главным звеном в патогенезе угревой болезни, и Actinomycetes - потенциальных возбудителей актиномикоза.

| - увеличение условно-патогенной микрофлоры J - период стабилизации условно-патогенной микрофлоры ^ - уменьшение условно-патогенной микрофлоры

Рис. 11. Выявленная закономерность формирования условно-патогенной микрофлоры кожных покровов человека при длительной изоляции в герметичных помещениях и космическом полете.

Аналогичная динамика изменения микробиоценоза кожных покровов наблюдалась и у космонавтов и характеризовалась дисбиотическими проявлениями на этапе острой адаптации к среде обитания космических кораблей. Увеличение численности условно-патогенной микрофлоры космонавтов после приземления (0 сутки) обусловлено, по-видимому, снижением иммунобиологической реактивности в длительном полете и стрессовой реакцией организма на экстремальные условия приземления.

Таким образом, исследованиями методом ГХ-МС был значительно расширен спектр микрофлоры кожных покровов человека и установлена определенная закономерность формирования микробиоты человека при длительной изоляции в герметичных помещениях. Метод ГХ-МС является высокочувствительным, некультурапьным методом детектирования микробиоты кожных покровов человека по микробным маркерам (видоспецифичным высшим жирным кислотам, альдегидам, стеринам) и служит дополнением к классическому бактериологическому методу. Оперативность проведения анализа (не более 3 часов) и возможность детектирования условно-патогенных микроорганизмов по молекулярным маркерам делает метод перспективным для контроля дисбиотических нарушений у человека в длительных пилотируемых космических полетах.

Выводы:

1. Метод ГХ-МС эффективен для анализа микробиоты кожи в условиях герметичных помещений, как высокочувствительный, видоспецифичный, некультуральный метод, который позволяет расширить видовой/родовой диапазоны идентификации аутомикрофлоры кожи, включая микробиоту, трудно культивируемую классическим бактериологическим методом. Метод ГХ-МС является перспективным для оперативного мониторинга условно-патогенной микрофлоры кожных покровов человека в эпидемиологически значимых концентрациях, составляющих микробиологический риск при длительной изоляции человека в герметичном помещении.

2. Методом ГХ-МС установлено, что при длительной изоляции человека в гермобъекте и в условиях космического полета видовой состав микрофлоры во всех исследованных биотопах (грудь, лоб, щека, шея, паховая область, подмышечная впадина, рука) был одинаков при индивидуальной вариабельности количественного состава. Важными составляющими микробиоценоза кожных покровов человека являются анаэробные бактерии, включая Propionobacterium spp., Peptostreptococcus anaerobius, Eubacterium lenlum, Clostridium spp.

3. Дисбиотические изменения кожных покровов при длительной изоляции человека в герметичных помещениях характеризуются определенной закономерностью и имеют волнообразный характер. Увеличение численности условно-патогенной аутомикрофлоры наблюдалось в первый месяц адаптации человека к условиям изоляции. Относительная стабилизация видового и количественного составов микрофлоры наблюдалась до 270 суток с повторным увеличением количества (р<0.05) условно-патогенных микроорганизмов на 360-390 сутки и в первые сутки по окончанию воздействия неблагоприятных условий обитания, что было обусловлено снижением колонизационной резистентности кожных покровов.

4. Микрофлора кожных покровов космонавтов при длительности полета 180 суток характеризуется дисбиотическими изменениями на этапе адаптации (первые 10 суток) к

среде и 0 сутках после приземления и проявляется увеличением численности условно-патогенной микрофлоры с тенденцией к возвращению микробиоты в исходное состояние (до полета) на 7 сутки после приземления.

5. На основании данных ГХ-МС микробиоту кожных покровов человека в условиях изоляции в герметичном помещении можно разделить на две группы: микрофлора, подверженная количественным изменениям, важной составляющей которой были условно-патогенные микроорганизмы: Actinomycetes, Rhodococcus spp., Propionobacterium acnes, Streptococcus spp., Candida spp., Peptostreptococcus anaerobius, Pseudonocardia spp., Bacillus cereus и микроорганизмы, которые количественно не прореагировали на экстремальные условия изоляциии и были в основном представлены комменсальной микрофлорой.

6. Сравнительным анализом микрофлоры кожных покровов человека с использованием классического бактериологического метода и ГХ-МС детектирования установлены индикаторные микроорганизмы (Propionibacterium acnes, Streptococcus spp. и Actinomycetes) - показатели дисбиотических процессов кожных покровов человека в условиях космического полета.

7. Определены опорные точки (подмышечная впадина и паховая область) для оперативной оценки методом ГХ-МС количественного и качественного состава микробиоты кожных покровов человека.

8. Разработана и апробирована технология отбора и сохранения кожных проб, отобранных в условиях космического полета и герметичных помещений, для анализа методом ГХ-МС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Результаты исследований видового состава и количественной характеристики микрофлоры кожных покровов человека рекомендуются для медицинского обеспечения длительных космических полетов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Оценка влияния 105-суточной изоляции в герметично замкнутом пространстве на микрофлору кожных покровов человека с использованием метода хромаггомасс-спектрометрии / Гегенава A.B., Марданов Р.Г., Родионова Т.А., Батов А.Б., Осипов Г.А. / Авиакосмическая и экологическая медицина - 2010. - Т. 44. - №4. - С. 46-52.

2. Микрофлора человека в условиях применения аутопробиотиков на основе Enterococcus feacium при 105-суточной изоляции / Ильин В.К., Баггов A.B., Новикова Н.Д., Мухамедиева JI.H., Подцубко С.В., Гегенава A.B., Марданов Р.Г., Соловьева З.О., Скедина М.А. / Авиакосмическая и экологическая медицина. -2010. - Т. 44. -№4. - С. 52-57.

3. Оперативная диагностика микробиологического статуса кожных покровов человека методом хроматомасс-спектрометрического детектирования / Гегенава A.B. / Авиакосмическая и экологическая медицина. -2011. - Т. 45. - №3. - С. 12-17.

4. Исследование влияния изоляции в герметично замкнутом пространстве на микрофлору кожных покровов человека с использованием метода хроматомасс-

спектрометрии / Гегенава А.В., Родионова Т.А. / Сборник материалов по коференции «Экотоксикология. Современные биоаналитические системы, методы и технологии». -Пущино - Тула. - 2009. - С. 26-28 .

5. Non-cultural methods of human microflora evaluation for the benefit of crew medical control in confined habitat / Ilyin V., Moukhamedieva L., Osipov G., Batov A., Soloviova Z., Mardanov R., PaninaY., Gegenava A. / Acta Astronáutica. - 2011. - V. 68. - P. 1529-1536.

6. Диагностика микроэкологического статуса человека методом хроматомасс-спектрометрического (ҐХ-МС) детектирования клеточных маркеров / Мухамедиева Л.Н., Осипов Г.А., Ильин В.К., Гегенава А.В., Пахомова А.А. / Материалы научно-практической конференции сотрудников Таджикского НИИ Профилактической медицины «Современные аспекты краевой инфекционной патологии в Таджикистане». - Душанбе. -2010. -С. 61-64.

7. Исследование микрофлоры кожных покровов космонавтов методом хроматомасс-спектрометрического детектирования / Гегенава А.В., Багов А.Б. / Сб. тезисов VIII Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики. - Москва. -2009. - С. 15-16.

8. Экспресс- диагностика микрофлоры кожных покровов здорового человека в эксперименте « Марс- 105» методом ГХМС детектирования / Гегенава А.В., Батов А.Б. / Сб. тезисов IX Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики. - Москва. - 2010. - С. 29.

9. Исследование микрофлоры кожи участников МКС методом хроматомасс-спектрометрического детектирования / Гегенава А.В., Ильин. В.К., Осипов Г.А. / Сб. тезисов XXXVIII Общественно-научных чтений, посвященных памяти Ю.А. Гагарина -Гагарин. -2011. - С. 215-225.

10. Топическая характеристика микробной обсемененности кожных покровов для выбора реперных точек оценки микробиологического статуса человека в условиях герметичных помещений / Гегенава А.В. / Сб. тезисов конференции «Актуальные проблемы космической биологии и медицины». - Москва. 2011.-151-152.

11. Контроль микробиологического статуса космонавтов в длительном космическом полете: настоящее и перспективы / Ильин В.К., Соловьева З.О., Скедина М.А., Гегенава А.В., Папп Л.Г. / Сб. тезисов конференции «Актуальные проблемы космической биологии и медицины». - Москва. - 2011,- С. 165-166.

Акт по реализации результатов исследований:

Акт № 682-121-03/12 по результатам контроля состава микробиоты кожных покровов человека при длительной (520 суток) изоляции в гермобъекте. Утвержден ГНЦ РФ - ИМБП РАН (2012 г.).

Основные сокращения, использованные в работе: ГХ-МС - Газовая хроматография-масс-спектрометрия МКС - Международная космическая станция ПВ - Подмышечная впадина ПО - Паховая область

Подписано в печать:

09.04.2012

Заказ № 7097 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Объем: 1 усл.п.л. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru