Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Метаболические нарушения как показатель вредного действия промышленных ядов в проблеме профилактической токсикологии

министерство здравоохранения российской федерации санкт41етербургский ихэдлнзтвенныя слниташо-гигиеничеош медицинский инсешгг

На правах рукописи

8 АВГ ТО

С1ЩОГИН Геннадий Иванович

метаболические нашенш как показатель вщцного действия промышленных дцоз в

проке® профилактической токсикологии. 14.00.07 - гигиена

автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 1994

/ '.'/. / )

Работа выполнена в лаборатории промышленной токсикологии Санкт-Петербургского НИИ гигиены труда и профзаболеваний.

Научной консультант -

действительный член РАМН, доктор медицинских наук, профссор Л. А. ТИУНОВ

0<*мциялыгыа оппоненты:

дсГстБИтедып,:;» член РАЕН, доктор биологических наук, прэ^йссор В.А.СЖОВ

член-корреспондент РАЕН, доктор медицинских наук, профессор Г.В.СЗЖйаЩ!й1Й

доктор медицинских наук, профессор Н.В.САВАТЕЕВ

Еадущая организация: н&уч.чо-ис следовательский институт гигиены им.Ф.З.Эрисмама, Московской области,.

Защита состоится " 190-1 г., в часов

на заседании специализированного совета Д.084.21.01 при Санкт-Петербургском государственном санитарно-гигиеническом медицинском института ЫЗ

Адрес: 195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр.,47.

С диссертацией мо;»но ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " Х994 г.

Учении секретарь епоцнмияирооднногс совета доктор медицинских наук,

профессор А.Н.НГНАШС

С увеличением уровня нагрузки на человека химическими вещз-:тваыи, постоянно поступаициш в организм из различных сред обитания, а также в результате одномоментннх выбросов значительных збъемов токсических продуктов при производственных авариях (Л.А. 1дьин и соавт.,1990) важнейшей проблемой медички становится охрана здоровья люде?! я окрукаяцей среды от воздействия фактора стоической природы. История науки и практики медицины показква-5Т, что наиболее эффективным методом предупреждения роста заболеваемости от воздействия компонентов окружающей среди и сохранения экологического равновесия является разработка н своевременное внедрение научно-обоснованных профилактических мероприятий.

Однако, как справедливо отмечает Д.С.Саркисов (1987),"няуч-ио обоснованная профилактика требует столь Ее полного знания этиологии и патогенеза болезней человека, как и их лечение:чтобц 5ыть высокоэффективной, она должна строиться ко столько на во многом предположительных "факторах риска",сколько на точном представлении о механизмах становления и развития потологических процессов".

В современной литературе по вопросам токсикологии значительное внимание уделяется исследованиям окислительного метаболизма ксенобиотиков и, в частности, структурно-функциональному комплексу монооксигеназ, локализованному на мембранах эндоплаз-иатической сети как важнейшему звену системы детоксикации различных субстратов.

Превращение промыоленных ядов, состояние ыикросомального окисления и связанных с ним других биологических процессов, ня-првленных на детоксикацию химического агента и компенсацию повреждений, в зависимости от дозы,концентрации и времени воздействия будет основным предметом исследования настоящей работы,

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ;

Актуальность темы. Поиск объективных критериев для установления безопасных для здоровья населения уровней воздействия химического фактора на основе фундаментальных достижений биохимии, физиологии и других наук является актуальнейшей задачей профилактической токсикологии к гигиены в целом. Вэтению таких профилактических задач,безусловно,будет способствовать проведение теоретических и систематических эксперимек-

талышх исследований по выявлению закономерностей в детоксикаци онних процессах и механизмах повреждающего действия ксенобиотиков. Система детоксикацик химических веществ на современном эта по развития токсикология рассматривается некоторыми исследовате лями как основной биохимический механизм адоптации и компенсаця прк действии ядов (Л. А.Тиунов, 1937). Уже накопился значительны!1 материпх, в основном на примера лекарственных средств, о том , что мчогио химические вещества биотрансформируются НАДФ- Н-зави-симой редокс-системоЯ, локализованной на мембранах оцдоплазмати ческой сети (П.&'Ый, ,1971; А.И.Арчаков.^огьмг/е^ , 1938 и др.). Вместе с тем известно (В.В.Ллхошч, И.В.Цырлов, 19! и др.), что генетически обусловленное состояние ыегаболизирукцу систем может в значительной степени изменяться под влиядаем экзогенных 4<акторов химической природы'.

Однако результаты биохимических исследований в области ом слительно-восстаиовителышх процессов, связанных с биотраисфор-мацюй ксенобиотиков, по причине нерешенности нзкоторьк теореи ческих и экспериментально-методических вопросов недостаточно з^ Активно используются в практике профилактической токсиколопш, Так, и литературе отсутствуют четкие представления о процессах бногрансформации к их нарушениях в зависимости от дозы и иреме! поступления /гда» л также способ количественной оценки опсносп воздействия нсенобиотикоз на функциональное состояние ферлентш систем, обеспечиваемых мэтаболизм. Недостаточно изучены связь функционального состояния окислительнз-восстановительнцх реакц; ЧсучсстБЛякцих детоксикацию, с другими биологическими процесса обеспечивавши гомсостаэ организма в динамике доз к времени п< ступлешя ада. В настояци.1 период ецо мало изучена роль процес сов биотраисформацш дцов о механизме формирования адаптации и развитии патологических явлений при остром (экстремальном) и х р с. I глч з с к ом поступлении ядов, до сих пор еце неопределенно к о1 поаенпо к вопросу об использовании различных состогашй метабол] зирухщих систем при воздействии химических веществ в качества критерия вредного действия как в токсиколого-гнгиеинческпх исследованиях, так и в клинической практике ь качестве днагности ческих тестов.

Таким образом, исследование путей и иехянизыоп сютракзфо ыашш проыьгмеюнк ядов в комплексе я взаимосвязи с другими си темаь:,!, обеспечиошадими адаптация организма к зкстасналыаи к

хроническим воздействиям промьакегашх и' лекарственных жгмичзских веществ, поиск способов оценки активности ферментных сполем,осуществляющих дегоксикационные процессы, имеют весьма актуальное значение в проблемах гигиенического норг/яроЕшия, ранней диагностики и лечения интоксикаций. ,

Важным является' и то, что практически всв.иссяэдуемыэ з представленной работе,химические гецестса внедрялись в различные отрасли промышленности в качестве исходник, промежуточных к конечных продуктов и требовали тщательного экспериментального исследования с целью гигиенического регламентирования в различный объектах окружающей среды.

Цель и задачи исследования. Основной целью работы было изучить биологическую роль процессов катаболизма ксенобиотиков в развитии патологии и форшровании лпэ~ птадаонно-компенсаторньж реакций организма в динамике доза-временных параметров воздействия нда; возможность • использования показателей этих процессов в качестве критериев вредного действия для потребностей теории и практики про^лактической токсикологии.

Для достижения поставленной целя необходимо было решить следующие задачи:

1. Установить параметры токсичности.исследуемых в данной работе химических ве!цеств* на разных видах лабораторных аивотны* и при различных путях введения.

2. Исследовать токсикокинетику промшленных ядов на приборе отдельных представителей изучаемых групп химических соединений.

3. Выявить участие в метаболизме исследуемых веществ мсно-оксигеназ, локализованных ка мембранах эндоплазматкчзского рети-кулума. Исследовать изменения тг чсикокинетических и токсикодина-мических параметров ядов на фоне повышенной активности ферментов микросомального окисления.

4. Изучить характер изменений никросомального окисления в общем механизме развития интоксикации при экстремальном воздействии различных химических ядов.

5. Изучить динамку, функции цитохром Р-450 зависимых МОГ в ряду исследуемых патологических и адаптационных реакций оргаки:;-ма в зависимости от дозы и времени поступления адов через келу-дочно-кииечный тракт.

6. Исследовать динамику изменения санкции цитохром Р-450

- б -

зависимых МОГ в сравнении с изменениями других исследуемых йунк-циэнальных.и структурных показателей состояния организма а зависимости от концентрации и времени ингаляционного поступления промасленных ядов.

Научная новизна и теоретическая г и а и и и с ? ь;- В представленной работевперзые показано, что функциональное состояние ферментов микросомапьного окислешя в комплексе с друт*ими,' осуществляющий воаммо связанны-с ним окислительно-восстановительные реакции, являмся высокочувствительными и информативными показателями действия на орташэл химических взществ, относящихся к различным классам соединений.

Впервые прозедено исследование токсикокинетики ряда промышленных ядов в' комплексе с их токсякодинамикой, а так.те зависимостей кинетических параметров отих соединений от активности дер-ментов гжкросомальннх монооксигеназ, где продемонстрировано, чтс кх активация, как'правило,'ускоряет прохондекие веществ через организм путем увеличения процессов окисления и выведения, что привода*« Б конечном результате, к снижению общей и специфической токсичности.

На примере исследуемых веществ показано, что их поступление в организм модайЕицирует активность ферментов микросомальчых МОГ; характер и степень отой шдифлкаадот зависит от физико-химическиа свойств, г гутой поступления, величины доз и концентраций, а также длительности воздействия еда.

На основе экспериментальных данных предложен способ расчет« коэффкцжяа опасности острого воздействия химических веществ на >лихросомальное окисление, показано наличие корреляционной связи коэффициента с величинами средаесиертельных доз. Предложена хла-сси'!икацик веществ по степени кх опасности острого воздействия на активность микросоааяьяого окисления.

.'Сфсрмулйроэана'концзядая об,обязательном взаимодействии (непосредственном или косвенном") большинства химических веществ, попадающих в.организм, с системой иикросомальных МОГ. Теоретически и экспериментально обоснована роль микросомальногл. окисления как наиболее важного механизма биохимической адаптаци/. к воздействие ксенобиотихоэ.

. . Впервые изучен механизм токсического действия ряда групп .химических веществ (сложные эфиры китроуксусной кислоты,некото-

- ? -

рыз производные гидразина, алифатические амины, амшнжитрнлн, производные емикобутановой кислоты); материалы исследования использованы для научного обоснования гигиенических регламентоз (ПДК и обув) для воздуха рабочей зоны и атмосферы населенных мест.

Обоснована целесообразность исследования функционального состояния никросемадьного окисления и взаимосвязанных с ним окислительных процессов организма при гигиеническом регламентировании химических вецестз в различных средах обитания человека.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Токсикокинетика и токсикодинашка яда - взаимосвязанные, одновременно протекающие процессы,которые отображает взаимодействие яда с организмом, а наиболее эффективным механизмом обеспечения гомеостаза организма, после попадания в его внутренние среды ксенобиотика, являются структурно-функциональные (биохимические) системы, способные быстро обеспечить деградации и выведение яда из зоны его возможного действия и организма в целом.

2. Монооксигеназная система, локализованная на мембран«, эцдоплазматического ретикулума, обладает высокими эдаптационны-1Л1 возможностями к действия химических ядов, что позволяет рас-сматр!вать ее функциональное состояние как индикатор, с одной стороны, вредного действия ксенобиотиков, а с другой - адаптивности организма.

3. Большинство химических веществ при экстремальном и ироническом воздействии на организм модифицируют активность микро-сомшгьных монооксигеноз. Механизм воздействия связан как с непосредственным воздействием на ферменты, так и оиос--редоеанпэ,

4. Степень и характер воздействия промышленных адов на активность микросомальных ЬЮР зависят от их физико-хишческих свойств, дозы (или концентрации) и длительности .ос поступлэкия.

5. Динамика показателей состояния микросомального окислетая коррелирует с изменениями показателей ф/нкцни других органов и систем организма.

В н едренив результатов в практику. Использование полученных материалов способствует объ-5ктивной оценке реальной опасности промшленных ядов и лекарственных средств при их остром и хроническом поступлении в орта-

¡r.u>M, позволяет учитывать и прогнозировать характер их комбинированного действия, "ахерналы диссертаг,ионной работ« ксподьзова-¡щ v обосновали ПДК дл.ч воздуха рабочей зоны 13 исследуемых ь данной работе h"luí, ънодряе:.<1а в про^-гпвнность хтшческих сое-дип-.'нчс.. Зги p^ra.wcHtH утвер.гдены !.3 СССР: ПДК МЭ!1УК и ЭНУК -приват. J? I918-7B от 22Л2.7в.-;Пда ТУДГ, ТВ А, ДНО" - приход .V 3?1о~с5 от It3.07.C5 г.; ДЗА - приказ № 4235-86 от 30.12.8-ПДд »VPA - «никла № 4617-8« от 2ft.C5.fx3 г.; Г1Д:С кваптаэаня - пр ш* » 46I7-K3 от 5.12.50 г.; Г1£{ П.!Н- N а - приказ ¡Í 5920-91 от 11.05.91 г,; ЦДК Д''Ц'|Д, И 1РДГА и ыпнчого отвердителя >11-ОСГгЗ - rtjjHfa'i » 0CGI-S1 от 19.11.91 г.; ПДя гаммоксине. - Поста-тг.илаго Kí СГНР Я '1 от 10.02.93 г. Вомчана пости ьел;еств ил г-тог о числа ( ¡^;Ш{55:Ш,едгДБА,Д;.!ДТ и ДЭА) гключени в'ТОСТ

I.C-X-í.'b ССБГ. CCt^e cajiii-гарно-гигиенические требования к во '•'■X '-'.У ¡i'íowa noicí." Но основе получчтч« материалов рг-зрайотьн .х у гь.-р&они íí- СССР С.'Л! для атм.;с.^:;;г.; населен: м мост да-Н-<5у г.: :¡:a, »ра-И-бутйлйч.ша, длот&нодапини - приказ }> 4944-68 от 22.12.10 г.

Kpí.Mj того, материалы диссертация использованы при <f«p.aipo гякип кетс;чческмх рскомзццщдай "Биологически;5, контроль произво Д':т< oiuoru воздоГсх-гия Dp'-днж некоего" .утваркенщ« ¡3 СССР,

К' 5205-5Ü от 7.12.5=0 г.; !-;т,,д:г?"с:сйо гекемзкдагда "Kpi-ъ-.ц'.л выявления ранних признаков интоксикаций при гигиеническом регл^.кпчирэрглий" ,1993 г.( в стадии утЕОп^енип). В процессе вьпояюнйя оксперпмснталькых исследований разрабствня: "Способ е-п разделения повреждения почзк при воздействии химических Beqeci íiU.;;¡me о еэд&чз патента от £0.06.93 г., заявка № 4376901/14 (106777) и "Камера для ингаляционной затравки иелких лабораториях животных"( /шт. спид.» II63I02).

Утвг.рзденныс гигиенические регламенты применяются заинтере соеаннчми предприятия«! для есу^естгления предупредительного v тех>и;^го сл.) гитарного надзора, в частности, НЛО П'ЛХ (письмо И 772-7364 от 21.06.68 г.), НПО Нефтехим (письмо № 04/600 от 3.06.Ш г.).

А п р о с а ц и я работы. Материалы диссертации дс клад^еались на 1-ом Пленуме правления ЕНОТ по "Проблеме гомеос-таза. е химическое патологии я окспериментадьной терапии отравлс ьмй"(Яекмкград,19вЗ); Бсесоюзной конкуренции "Проблема оценки

функциональных возможностей человека и прогнозирование здоровья" (Москва,1985); 1-ом Всесоюзном съезде токсикологов "Проблемы охраны здоровья населения и защиты окружающей среды от химических вредных факторов" (1Ъстов-на-Доку,1985); П-й Всесоюзной конференции "Физиология экстремальных состояний и индивидуальная защита человека" (Москва,1986); Учредительной конференции Пермского областного общества токсикологов (Пермь,1987); 1У Пленума правления ВНОТ "Экология и токсикология" (Ленингрзд,1990); Л1 Всероссийском съезде гигиенистов и санитарных врачей (1991); 1У Всесоюзной конференции "Рвдокряннак система организма и вредные факторы окружаящеЯ среды" (Леданград,1991); Республиканской конференции "Актуальные проблемы адаптации и здоровья населения Севера" (Архангельск,1991); Международной конференции,посвященной 100-летюо со дня роядения академика С.В.Аничкова "Нейрофармако-логия на рубеже двух тысячелетий"(СПб,1992)« конференции "Экологическая безопасность городов"(СПб,1993); Международной конференции "Загрязнете окружающей среды. Проблемы токсикологии и эпидемиологии" (Пермь, 1993) и др.

Публикации. По теме диссертации опубликовано печатные работы.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 439 станицах машинописного текста, содержит 81 таблицу, 61 рисунок. Состоит Из введения, девяти глав, вывсдов , указателя литературы, включающего 485 источников отечественных (253) и иностранных (232) авторов.

Материалы и методы исследования. Экспериментальные исследования проводились lia половозрелых беспородных белых мышах с исходной массой 18-20 г, белых беспородных крысах - 180-200 г, морских свинках - не более 250 -300 г. Всего было использовано 9500 крыс, 650 мышеЯ, 300 морских свинок. Все животные поступали из питомника рЬлполово и содержались в виварии на стандартном рационе.

Исследуемые вещества вводились в яелудок, брюшную полость, накожно и через легкие путем ингаляции. В желудок вещества вводились с помощью металлического зонда в виде водных растворов или эмульсий на 3 % растворе крахмала. Контрольные животцые одновременно с опытными в равных объемах получали соответствующий

растворитель. Ингаляционныо затравки осуществляли динамическим способом в каморах Курлян^кого Б.А. (И.В.Саноцкий,1970), а также в каморах для индивидуальной затравки мелких лабораторных животных собственной конструкции (Авт.свид.№ 1183102, кл. А-61, 10/02; рац. предл. № 195 от 24.03.82 г.). Вещества,в зависимости от их физико-химических свойств, подавались в камеру в виде паров, аэрозолей конденсации или аэрозолей дезинтеграции (пыли). Соэдоние необходимых ковдентраций осуществлялось с помощью дозирующих устройств, в основном собственной конструкции (рац.нредл. }Г> 20? от 13Л1.86 г.; рац. прздл. » 368 от 22.11.88 г.; рац. предл. I," 392 от 19.02.90 г.).

Список исследуемых веществ приведен в таблице I.

Экспериментальные исследования проводили поэтапно в порядке поставленных задач, для решения которых был использован комплекс биохимических, физиологических, гистологических, гистохимических и статистических методов.

Количественное определение веществ и их метаболитов проводили гаэохроматографическим, радиоизотопным и биохимическим методами .

Состояние мембран о нд о п л аз м ати ч е с к о г о ретикулума гепатоцн-тсв определяли по активности маркерного фермента - гл:окозо-6-фо-сфатазы оп ,1955), содержания датохрома Р-450 (т.отиг«^

И.$а{о ,1Э64; И.Д.Мансурова и соавт.,1976) и активности мик-росомальннх монооксигеназ: по времеш! окисления гексенала - длительности гекееналового наркоза (М.С.Гию1арян,1976; В.Н.Большой, 1930) и количеству метаболитов амидопирина в моче (Т.А.Г!опог,, О.Б.Леоненко,1977). Интенсивность перакисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по накоплению малонового диальдегида (1.1ДА) в го-могенатах печени (Л.И.Майоро, Э.С.Берман,1972). Тиол-дисульфицное равновесие определяли по изменения соотношения восстановленных и окисленных тиолов методом обратного амперометрического титрования (В.В.Соколовский и соавт., 1977). Влияние веществ на состояние тканевого энергетического дыхания изучали по активности ферментов дыхательной цепи - сукиинатдегидрогеназы (СДГ) в гомогзнатах печени (е.АЖич, !..г.¿ЬсоЛ ,1949) и гепатоцитах (чм. никель Ы о!-, 1957), по активности цитохромокеидалы (ЦХО) в гомогенатах печени по метолу Уггпоп (Д.М.ЫихлинДЭбО). Определение активности . мигохоидриальной монопминоксидазы (МАО) в гомогенатах печени

¿шлица 1.

Химические вещества, исследуемые в работе.

К . Вещества Формула Мол. ДЦзд,в/ж,г/кг «Кр.».. мг/м3

п/п масса (б.крысы)

I 2 3 4 5 6

I. Производные гкдшзияа;

I. I,3-бяс(п-хлорбензилиденамино) С15Н13" 5С£2 334 2,35 (1,14*1,55 ) -

гуанидин, (химкокцяд) .

2. Хдорид-1,1-диметил-1(2-хлор- °5Н12" 2^2 159 3,65 1,0 (а)

этил)гидразиния, (квартазин)

3. Натриевая соль гидразида ма- СзН4Й 202На 134 12,8 (12,2*13,4 ) 10,0 (а)

леиновой кислоты, (1Ш- Ма)

П.Проязволнне ачинобутановой

теотгн."

4. Гидрохло рид-З-окси-З-фенил» 249 2,59 -1,0 (а)

-4-аминобутанозой кислота ,

(гаммоксан)

Ш. Аминонитоилн: <%НЮЙ 2

5. Диывтялаыинопропионлтрил, (ДШН) 98 2,34 10,0

б. Диыетялцяакэтилпропандиамин, N3 . 155 1,92 (1,39*2,65) 1.0

(дата)

7-. Н -$>-(цаанэтал)дкэталентряамин, С7Н1б"4 156 7,05 (7,4446,65) 1.0

(К->-ЦЭДГА)

Продолкзтаэ табяжи I-

I 2 3 4 5 - . 6

]У. Ляпйятическяе агмтгл:

8. Д:п.!ет;адштрогг-шегГГриа;.ш-:, (ДЦЦТ) 65% ^з 159 1.43 ( 1,19*1,72 ) 1,0

9. Тетракетадднпропилентриа:лпн, С10НГ5[| 3 187 1,10 (0,67 1,33) 1,0

(ЗДГ)

10. Дпбуталамин, (ДВА) СдЬ^д К 129 0,23 (0,16 4 0,34) -

II.. Трябутилвмин, (ТВ А) С12"Ч27 н 185 0,89 (0,75 1,06) 1.0

12. Даматилпропбндаамлн, (ДМПД) °5Н14 ^ 2 102 1,0 (0,86 * 1,35) 2,0

13. Калиевая соль дпт.:г,::*.':г-:тппро- <у?10мок 133 4,4 ( 3,6 ^ 5,4 ) -

пионовой кислоты

14. Диэтаноламкн, (ДЭА) с4нля о2 105 1,9 5,0

15. Ыетялдизтанолзмин, (-ЧДЭА) а-ИтдН 0? 19Э 5,4 (4,54 + .6,43) 5,0

У. Сйожнне э4иш нптгюуксусноЗ

кислоты:

16. Метиловый эфф нитроуксусной С3н5г1°4 .119 3,77 (3,12 + 4,56) 2,0

Зиелста,(МЭНУК)

17. Этиловый эфф нитроуксусной с4",й о3 133 5,25 (4,75 * 5,80) 5,0

кислоты,(ЭНУН)

фоводили по методу В.В.Горкина и соазт.(1968), где в качестве :убстрата использовали солянокислый гира-яш, а такке в гепатоци-гах методом гистохимии (З.Лойда, Р. Госсрау.Т.Шиблер, 1932). Вдия-гао веществ на углеводный обмен оценивали п'о содержанию гликоге-т в печени методом Кар?оиГ (В.В.Лецкий,1970).

Изменение функционального состояния нервной системы регистрировали по величинам суммациснно-порогового показателя (СПП) [В.В.Загсов, 1943; С.В.Сперанский, 1965), по изменению поведенческих тестов (Е.С.Балынина,Л.Л.Тимо$иевская,1978; Л.Д.Попович, [989). Кроме того, проведена серия экспериментов по изучении действия ядов (на примере диметиламинопропионитрнла) ■ непосредствэ-шо на мембраны нервных клеток, где в качество модели использовали гигантские нейроны моллюсков из класса брюхоногих (А-Е.Нозз^Ч и.Ни««у ,1952).

функции почек исследовали опрзделекием суточного диуреза, 5елха в коче (В.И.Михневич,1956).мочевой кислоты з мочз и сьгао-татке крови методомМопяз^-Ы^п (0.В.Травина,1955), титруемой кислотности-мочи поМоог (Е.В.Берхкн.Ю.В.Иванов, 1972).

ГЬакцию форменных элементов крови и клеток костного мозга ^а воздействие химических веществ исследовали по изменению ко'ли-1ества лейкоцитов, эритроцитов, ретикулоцнтов. Подсчет лейкоци-гарной формулы проводили на мазках крови,окрашенных по Рэманов-;кому-Гимза; ретикулоцитн окрашивали суправитально бриллианткре-жловым синим. Костный мозг брали из бедренной кости крысы спате-тем и делали тонкий отпечаток на стекле, высушивали мазки на во- ' »духэ, затем окрашивали по йманоБСконуСмоди^икалрш Палпенгейма) 5ез предварительной фиксации (В.Н.Никитин, 1956). Намазках под-:читцвата 500 форменных элементов костного'мозга (увел.9 х 45), результаты выраяата в процентах.

Гистохимически в клетках крови исследовали щелочную фосфа-газу (Щ5) (В.В.Лецкий,1973),сукцинатдегидрогеяазу по методу Р.П. 1арциосова (1969) с п-нитротетразолием фиолетовым. Количествен-гае содержание ЩФ в лейкоцитах определяли на цитофотсметре "Лп-гам-ИЗ" плак-методом, СДГ - средним числом гранул форм азан а в метках.

Внутренние органы (печень,почки,сердца,легкие) отравленных I контрольных животных в различные сроки от момента затравки повергали гистологическим исследованиям после их фиксации 10 % гайтральным формалином и окрашивания препаратов гематоксилином

и эозином. В препаратах печени проводили дополнительные кариоме-трические исследования.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали методами параметрической и непараметрической статистики.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучаемые в данной работе химические вещества, как показал! эксперименты, отличаются по уровню острой токсичности (таблицаГ Более того, эти отличия наблюдаются даже в раду веществ, близки) по химическому строению, Так, среднесмертельные дозы аминонитри-лов, введенных в брюшную полость (,ЩЩ, N -^-ЦЭДТА, Д!,ЯН) .относятся между собой,как 1:1,5:3,8. При этом, если в клинике острого отравления ДШН имеются признаки цианидной интоксикации, то 1 клинике отравления ДМЦТД и Ч-^-ЦЭДТА они отсутствуют. В группе производных гидразина наиболее токсичным оказался химкокцид,в т< время как другой представитель этой группы - натриевая соль гид-развда малеиновой кислоты,-для животных оказался биологически инертным веществом. Среди сложных эфиров метиловый э$яр нитроук-сусной.кислоты почти в 2 раза более токсичен, чем этиловый. В группе алифатических аминов наиболее токсичными, как видно из таблицы I, являются вторичные и третичные аминоспирты: п-цибу-тиламин, п-трибутиламин. Следует также отметить, что уровень то ксичности, полученный при введении веществ в желудок, часто не соответствует уровню токсичнооти при поступлении веществ парен-теральнш путем. Так,если согласно существующим представлениям, обычное соотношение при внутрибргашинном и внутрижелудочном введениях выражается уравнением: ДЛзд в/бр.= 0,32 ДЛзд в Дел. (С.Д. Заугольников и соавт.,1978), то для некоторых исследуемых нами соединений эти соотношения находятся в пределах от 0,13 (для I,З-Зис(п-хлорбензилиденамино)гуанидина) до 0,03 (для М -£-(ци-анзтил)диэтилентриамина), т.е. значительно ниже среднестатистической ведичины.

По способности к кумуляции (при введении в желудок по мето ду 1<т й ) исследуемые вещества в своем большинстве относят ся к слабо-кумулирующим соединениям (Ш - 1У класс). Наибольшую опасность в этом плане представляют химкокцид (К^ -1*1). сложные э<1иры иитроуксусной кислоты (К^ «2,0 и 2,4) и* (^-2,66). ^

Таким образом,анализ полученных токсикоматрических данных свидетельствует о том,что исследуемые вещества,являясь представителями различных классов химических соединений,располагаются в широком диапазоне величин биологической активности,что дает возможность в рамках данной работы исследовать как индивидуальные, так и общие закономерности в развитии патологических явлений, вызываемых действием вредного фактора химической природы.

I. Исследование биотрансформагдаи кчов в организме.

Получение количественных параметров прохождения токсиканта через организм является одним из наиболее адекватных способов расшифровки токсикодинамики и механизма повреждения химическим агентом. Получаемые токсикокинетические параметры,даже саше простые ( период полувыведешя / Т 1/2 /.время максимального накопления вещества в биосредах А ^^Лвремя полной элиминации из организма).позволяют объективно принимать решение по самым разным теоретическим и практическим вопросам,связанным с прогнозированием кумулятивного эффекта,оценкой потенциальных адаптационных возможностей организма, а также с лечением и профилактикой интоксикаций (В.А.$илов,1988). Очень часто тленно токсикокинетические процессы определяют закономерности взаимоотношений организма и яда в виде зависимостей "доза-эффект".

Проведенные исследования показали,чтокинетика изучаемых веществ в биосредах после однократного поступления определенной дозы подчиняется классическому закону,описываемому уравнением: у — ( е"^ -е-**) .график которого имеет вид параболы или двуэкспоненциальной кривой (В.А.5клоз,1973). Указанное уравнение выражает одновременное течение двух экспоненциальных процессов г поступления и выведения яда, как результата взаимодействия еда с организмом, с его потенциальной адаптационной возможностью я метаболизму и выведению.

Вместе с тем,кинетика ядов,обладающих гидрофильными свойствами,у которых скорость всасывания достаточно велика относительно скорости выведения,может удовлетворительно описываться более простым уравнением экспоненты или гиперболы,т.е. фактически позволяет ограничиться исследованием только процесса элиминации яда. Так.токсикокинетика С*4-квартазина (рисунок I) после однократного введения в брюшную полость удовлетворительно описывается уравне-

т

о

"О

1) yj = 72,1 . х-0'426

2) у0 =195,0. х-0'59

Гас Л. Л.Токсккокинз'Гкка СА -хлорид 1,1-д!шеткл-1(2-хлорттил) г?драоиния (квартагкна) в печени гнгактшк и предварительно шщуцировашгьк фенобарбиталом крыс.

Обозначения: I-теоретическая кривая содержания кваотазина в печени крус поело однократного введения интактнам животным; 2-те-оротичзская кривая содержания квартазина в печени крыс после однократного введения предварительно индуцированным животным; о-;ж:иричзская кривая содержания квартозииа в печени интактных крус; '¿-экспериментальное содержите квартапина в печени пред-ьамтеяьио индуцированных крыс; I) ,2)-уравнения соответствуют!« кризьк.

Б.Гкбель интакгньк и предварительно индуцированных фенобарбиталом крыс после введения б брюшную полость 200 мг/кг квартазина. Обозначения: р -гибель при введении 300 мг/кр квартазина;

р -гибель на фоне предварительной индукции.

нием: у=»72,1>х~®,4^,где у »(кип./»лик./г белкаЫО5; х-время в мин. Кинетика выведения гаммоксина обладала близкими к указаным параметрам значениями. При введении его в дозе 10 мг/кг уравне-

шю кривой имело вид: у=15,5-х®^,где у-содертанио гаммоксина в мкг/мл в крови; х-время в минутах.

Дозовая зависимость величины концентрации веществ а плазме крови,показанная на примерз гаммоксина и этилового эфира нитроуксусной кислоты,носит л!пгеРлый характер,что имеет важное практическое значение,так как позволяет использовать эту зависимость при разработке экспозиционных тестов для расчета суммарной поглощенной дозм,поступившей в организм из объектов окружающей среды,особенно в экстремальных условиях. Показано также,что с повышением дозы скорость выведения вещества линейно увеличивается. Полученные матер:!алы согласуются с теоретическими и экспериментальными данными других исследователей (Е.Пиотровски,1976; \f.Scdiretой,1976; В.А.Филов, 1980). Указанный феномен можно рассматривать, как один из адаптационных механизмов защиты от действия яда. Однако,эффективность этого пути защиты ограничена функциональными возможностями вцделительной системы почек,з которых чрезвычайная нагрузка,возникающая от действия большинства ксенобиотиков,как правило,заканчивается развитием патологии (Г.Ыалд-раков,1973; М Сирс^ ,1983; Е.Б.Берхлн, Б.Я.Варшавский,193б). Поэтому нарушение линейной зависимости скоростей (или объема)эли-минации,безусловно,является одним из объективных показателей вредного действия яда.

На приоре С^-квартазина и С*^-химкокцида показано,что исследуемые токсиканты распределяются по органам неравномерно,особенно четко это наблюдается в первые часы после введения яда. Так,при вцутрибрюшинном введении С^-квартазика наибольшее количество метки через 15-30 минут от начала затравки обнаружили э сердце и легких,наименьшее - в мозге. Однако,через 1-3 часа содержание С ^-кв арталина в исследуемых органах было почти на одном уровне. Было также продемонстрировано,что даже водорастворимые соединения легко проникают в цитоплазму и фиксируются на мембранах внутриклеточных органелл,о чем свидетельствовало наличие "метки" квартазина в микросомах,где она накапливалась больше всего,а также.в ядерной и митоховдриалькой фракциях. Характер распределения химических веществ на мембранах внутриклеточных органелл носит индивидуальный характер и связан с химическим строе-.нием токсиканта,однако величина максимального накопления,т.е., количественная характеристика этого процесса,определяется,главным образом,липофильностью ада (Н.В.Лазарев, 1944;С.ЙатсЬ ^ а^.,

- 18 -

1965; В.А.Зилов,1968; М.И.Михеев и соавт.,1977).

досматривая вопрос токсикокинетики химических веществ,следует отдельно остановиться на соединениях,подвергающихся в организме частичной или полной деградации. В этом случае детоксика-ционный процесс складывается из взаимосвязанно между собой динамических реакций окислительного метаболизма,механизмов связывания, элиминации метаболитов и,частично,вещества в неизменном виде. Проведенные эксперименты показали,что кинетика накопления

мкг/мл

2,5 . V /

2,0. / (\ V3

1,5. / / ' \ 1 1 \ ! 1 4 I

к/ / !

1,0. : \ а *

0,5 . / 1 1 У / ' +

0 1 1 / [П (час)

0,25 1 I 3 1 6 ^48^96

Рис 2. Динамика содержания роданвдов в сыворотке крови после

однократного введения в бршную полость ДЛзд ДМПН,

ДЗДЦ и N -^-ЦЭДТА.

Обозначения: 1-ДШН; 2-ДМЩЦ; 3-М -Д-ЦЭДТА; Нф -результат статистически достоверно отличается от контроля, р 0,05. * . .

и выведения метаболитов после однократного введения яда. также может описываться уравнением,отражающим процесс одновременного накопления метаболитов и их выведения. Однако,эти кинетические кривые,как видно на рисунке 2.имеют существенные различия,определявшееся, главным образом,физико-химическими свойствами веществ.

Так,анализируя параметры кинетики родакидов.кзобрачшнной на рисунке 2,обнаружили,что время их максимального накопления (t max) и период полузизедения увеличиваются в ряду по пера нарастания молекулярной массы (длины углеродной цепочки) от ДДШ к fJ-f>-ЦЭДТЛ,т.е.скорость отщепления Cfi -группы от молекулы вещества тем выше,чем меньше молекулярная масса,и чем лучше растворимость в воде.

Скорость метаболизма сложных ojnpoB нитрокарбонових кислот, как и в случае с другими сложным! эфирами (В.Л.Филод,1960;19о1), наоборот,возрастает с увеличением молекулярного веса. .

Экспериментально установлено.что скорость метаболизма,также как и скорость выведения неизменных веществ.нарастает с увеличением дозы,однако до определенного предела,после которого наступает процесс торможения. На возможность отклонения процессов метаболических превращений от линейности,даже при довольно низких дозах вводимых соединений,имеются указания в монографии Е._ Пиотровски (1976). Несмотря на то,что механизм торможения метаболизма для разных веществ,как нами показано,неоднозначен,в&тно то,что он всегда сопряжен с истощении! потенциальных возможностей организма,и поэтому переход линейного процесса образования* метаболитов к нелинейному,как справедливо отмечает И.В.Саноцкий (1976).можно расценивать как начало развития патологии. Однако, касаясь использования этого показателя в качестве вредного действия при длительном поступлении яда,чуяно иметь в виду,что оно не всегда правомочно (В.Л.Филов,1980; Л.И.Дьякова,1993).

Одновременны!! анализ токсикокинетики и токсикодинамики позволил получить информация о различной обусловленности отдельных клинических симптомов действием г^лой молекулы вещества или его метаболитов. В частности,показан,,что явления адинамии,снижения ректальной температуры,регистрируемые в начальном периоде острой интоксикации нитрозйирами обусловлены действием целой молекулы. Последующее развитие характерных судорожных явлений связано с накопление-:«! метаболита нитрометана. Угнетение моноаминоксидаэн при действии химкокцида также обусловлено влиянием целой молекулы; угнетение цитохромсксидазы при поступлении ДШШ - действием циан-иона - одного из метаболитов этого вещества,а поражение мотонейронов спинного мозга - целой молекулы этого соединег^ия.

Экспериментально показано,что токсикокинетика и токсикоди-намика яла - взаимосвязанные,одновременно протекающие процессы,

которые отображают его взаимодействие с организмом и теоретически могут быть описано одним уравнением. Полученные данные,в принципе, согласуются с экспериментальны.« результата:.« других исследователей (В.А.Копанев и соавт.,1963) и,таким образом,наличие выявленных зависимостей носит,По-Еидимог.'у,закономерны": характер, что дает право строить кривые токсикокинстики по их эффекту (B.A.v'.íлов, 1973) и наоборот. Отсюда также следует,что время наступления эффекта после однократного введения вещества,степень поражения организма (при прочих равных условипх:доза,путь введения яда и т.д.) во многом определяются скоростью диф^зиа ксенобиотика из области поступления до органа-г",ппени,с одной стороны, и скоростью элиминации вещества и его метаболитов из организма -с другой.

Псэтому наиболее эффективным механизмом обеспечения гомео-стаза организма после попадания в его внутренние среди ксенобиотиков,должны быть структурные и биохимические систол.',функционирование которых способно обеспечить быстрое выведение яда из зоны его возможного действия к организма в целом.

Одним из таких механизме:;,как известно из литературы,являются системы,метаболизируюцие яды,особенно с липофильнкми свойствами. В результате гиароксияирования гидрофобные соединения превращаются в водорастворимые,что ведет к легкому накоплению их в водной фазе организма и быстрой олимлиагзш,в то ко арзмя, затрудненному - в других фазах,где активность яда гораздо вмлз {В. А. (Гилов, IS69).

При исследовании влияния функционального состояния бкохими-ческих систем,потенциально способных к метаболизму изучаемых в данной работе ксенобиотиков,на скорость их выведения,токсикоди-ка!.ику и токсичность,было показано,во-первых,что активация £унк-ц>» цитохром Р-450 зависимых МОГ фенобарбиталом приводила к более быстрому прохождению веществ через организм. Так,у нивотных, предварительно получавших фенобарбитал (рис.I—А).максимальное количество С^4-квартазина после однократного введения в бровную полость накапливалось в печен;! в 2 раза быстрее,чем у интактных кивотньк;коэФфицяент bu-б еде ни я (г£ ) увеличивался в 3 оаза и в 3 раза уменьшался период полувыведения "метки". Анал;гичннми оказались результаты при исследовании токсикокинетикк этилового эфира нитроуксуснэй кислоты,где фенобарбитальная активация мик-• росомяльннх МОГ увеличивала скорость превращения и выведения

эфира и его метаболитов.

Во-вторых,изменение токсикокинетических параметров у предварительно индуцированных тавотных в значительной степени меняло клинику отравления. Так,у индуцированных крыс поело введения ДЛ^д ЗНУК снижение ректальной температуры бшо достоверно меньше, чем у тавотных некндуцированнцх,получавших ту да дозу эфира;вос-становлениэ ее до нормального уровня у выяивсих животных проходило скорее,чем у неиицуцнрованннх,и,наконец,у животных,получавших предварительно фенобарбитал,судорожный период был более сглажен. Хчмкокцид,введенный предварительно ицдуцированны» фенобарбиталом гивстнкм,практически полностью терял способность угнетать монопмкноксидазу печени.

В-третьих,введение химических веществ »предварительно ¡гиду-цированным гавотным.в больпинстве случаев,сопрововдалось сгашз-кисм токсичности веществ. Так,на рисунке I-Б и таблице 2 видно, что постаение активности мнкросомальных МОГ а значительной сте-пэга снижало процент гибели гпивотных. Ингибирование микросомаль-ной системы МОГ четыроххлористым углеродом,наоборот,сопровождалось увеличением токсичности большинства испытанных веществ. Змссте с тем, как видно из таблицы,имелись и вецества СШ'-jlfa, Д'ДД, ДЭЛ) .токсичность которых при изменении активности микросо-г?члы?ого окисления была такой же,как у интактных животных. По-рндим^!.7,эти соединения обладают низким сродством к цлтохрому Р—150 или но являются его субстратами вообще. И только при действии Д?'<ДТ обнаружено существенное увеличение токсичности вещес-гна з результате активирования микросомальгак МОГ. О возможности образования в первой фазе метаболизма промежуточных продуктов , 1ревосходящих по езоей токсичности исходное вещество,показано в Работах других авторов (В.Ю.Бонатенко и соаят.,1979; 3-Я. li at. ,1973).

Исследуемые в данной работе ашно нитрилы {ДШН,даЦТД, I» .1ЭДТА),как и белыошетво других нитрилов,попадая в организм,подвергались биотрансформации с отщеплением Сf/ -группы я последующим превращением в роданиды (тиоцланаты) .свидетельством чего яв-тялось повышение их содержания в сыворотка крови и моче эксперя-•ентальних тавотных. РЬакция связнзания цианида втиоцианат кэу-;она достаточно подробно (P.Schhlinqrrl.Wfstty ,1974; :977; Л.Л.Тдуноэ,1986),

Что касается участия микросомалышх МОГ в биотрансформаций

Таблица 2.

Изменение токсичности исследуемых веществ в зависимости от'активности микросомальных монооксигеназ ( в %% к п.бели интактных животных)?**

Наименования

% изменения токсичности на фоне

веществ фенобарбитала* CCé4**

Квартазин - 20 + 60

Химкокцид - 90 + 34

1Ш-1/& 0 0

Гаммоксин 0 • + 20

ЫЭНУК - 40 0

анук -.40 -

ДИ1Н - 17,5 0

дшвд + 10 - 10

Н -$-ЦЭДГА 0 + 50

ТБА - 70 + 60

ДВА - 30 0

твдт - 30 + 10

двдг + 30 + 20

ДМПД 0 0

ДЭА 0 + Ю

Примечание: к - индуктор микросомальных МОГ; хк - ингибитор микросомальных МОГ; ккк - величина ДЛзд исследуемых веществ при введении их интактным животным принята за 100 %.

исследуемых нитрилов,то оно,по нашему мнению,маловероятно в метаболизме ДМПН. Это заключение основывается на таких фактах,как: во-первых,отсутствие существенных изменений в токсичности вещества на фоне индуцирования активности монооксигеназ; во-вторых, выраженные гидрофильные свойства ДШН,затрудняющие проникновение яда к активному центру фермента и,наоборот,способствующие его быстрому выведению из организма и,в-третьих,высокая скорость отщепления СЙ -иона (признаки цианидной интоксикации наступает через 1-3 минуты,а роданиды в сыворотке появляются через 15 минут от момента введения). Можно полагать,что гидролитическое

отщеппение циан-иона от молекулы ДМПН происходит неферментативным пуа ч,сразу после попадшшя вещества в сыворотку крови. Это подтверждается данными,полученными в эксперименте с другими подобными веществами (З.Франке, 1973; 6и! с1а(. ,1975).

Хотя убедительных данных участия микросомальных МОГ а метаболизме ДМЩД и К-.Р-ЦЭДГА получить не удалось,можно предположить, однако, что отщеплению СН -иона от молекул этих соединений (веществ гидрофобных) предыествуют ферментативная деградация молекул с участием микросомальных монооксигеназ. По-видимому, в силу малого сродства этих соединений к цитохрому Р-450 доля вещества,подвергающегося гидроксилированию,по отношению к введенной дозе,невелика. Об этом свидетельствует относительно низкая скорость накопления родашдов (рисунок 2),а также обнаруживаемый эффект аутоингибировашя роданообразования в узком диапазоне вводимых доз ^ -ЦЭДТА.при незначительных уровнях роданидов в исследуемых биосредах и полном отсутствии признаков ци анидной интоксикации.

2. Исследование функционального состояния пптохром Р-450 зависимых МОР в общем механизме интоксикации при остром (экстремальном) воздействии ядов.

В качестве модели экстремальной интоксикации бьяо использовано трехкратное введете исследуемых веществ в брюшную полость в изоэффектизиых дозах,равных 1/3 ДЛзд. Результаты проведенных экспериментов показали,что практически все изучаемые вещества (за исключением ПЖ-А/а) в указанном режиме воздействия оказали эффект на различные реакции цитохром Р-450 зависимых МОГ, главным образом,по типу ингибирования. Об этом свидетельствовали увеличение времени окисления гексенапа (реакция гидроксили-рования).снижение количества метаболитов амидопирина в моче (реакции деметилироБшшя и ацетилирования),а также снижение количества цитохрома Р-450.

Обсуждая механизм угнетения микросомального окисления эндогенных и экзогенных субстратов при экстремальном воздействии химических веществ,необходимо учитывать появление целого комплекса взаимосвязанных неблагоприятных.факторов. Одним из таких механизмов является так называемый конкурентный или неконкурентный антагонизм,т.е.когда химический агент или его метаболит взаимодействует с активным центром или аллостсричесним участком

фермента и,таким образом,мешает вступить в связь с другими субстратами. При этом сам химический агент (антагонист) мокет подвергаться метаболическому окислению (И.В.Комиссаров,19С9;А.Ле-№шдкер,1974; А.И.Арчаков,1975).

В основе другого механизма снижения активности цитохром Р-450 зависимых МОГ могут быть нарушения образования энергопрэ-дукции,с последующим истощением потенциала клетки,обеспечивающего ее нормальное функционирование,в том числе и процессы де-токсикации. Многочисленные исследования (Ю.С. Вэтенберг.Н.А.Сер-биновская,1975; Ю.С.ГЬтенберг, 1932) показали,что нарушения тканевого дыхания к знергопрадукцяп пря воздействии многих ксенобиотиков возникают как обязательные компоненты. Появляющийся при этом энергодефяцит связан с гипоксическим состоянием,вызванным, в первую очередь,специфическим действием яда.

Примером такого опосредованного икгибирования цитохром Р-450 зависимых МОГ является действие,исследованного в данной работе, диыетилашноцропяонятрила (ДЖ1Н) ,где причиной снижения активности цианрезис;здТг<ого окисления амидопирина было угнетенна активности цитохромохеидазы с последующим снижением гликогена в гепатоцитах и накоплением <>"".$ -групп. Аналогичные данные получены Н.Д.Лукъяновой и соавт.(1981),где показано,что КСМ на 40-50% подавлял процесс окисления амидопирина,особенно у голодных крыс. Эти результаты свидетельствуют о том,что при действии ДМПН,также, как и цианистого калия,в результате угнетения цатохромоксида-зы - конечного акцептора кислорода в цепи ферментов окислительного фосфорилирования,- отщепляющейся циан-группой,снабжение организма макроэргами происходит,главным образом,за счет гликолиза, который быстро приводит к истощению запасов гликогена - источника энергии,обеспечивающего восстановление ферментов макросом и системы глютатиона.Вместе с тем,анализ полученных материалов свидетельствует о том,что большинство промышленных ядов действует одновременно: на активные центры цитохрома Р-450 и систему энергетического обеспечения процееса микросомального окисления. При этом причинами энергодефицита могут быть неспецифические по раяения мембран митохондрий,приводящие к функциональным изменениям электронтранспортной проводимости (Р.^ИсЬеМ ,1951;В.П. Скулачев,1971),а также сам процесс детоксикации,вызывающий исто щение фовда НДЦШ Ф.М.Цецкг ,1988) гликогена,аскорбиновой кислоты и 9=- 5Н. Свидетельством этого является то,чтв выявленное

нижение детоксицнрующей ¿г/акции печени,как правило,сопровождаюсь рядом признаков,характерных для состояния энергодес[яцита ; .^строфическими изменениями а печени и почках,снижением активно-ти сукцинатдегидрогеназы,уменьшением содержания гликогена в леткаЛ и выраженным сдвигом тиол-дисульфедного равновесия в торону окисленных тиолов (5-5) :характерным показателем интоксн-:я1ми большинством исследуемых химических соединений,что особен-ю >, -тко просле.тнвалось при отравлении алифатическими аминами и минонитрмлеш.

В основе механизма нарушения тиол-дисулы£идного обмена при 'травлении алифатическими аминами лежат,по-видшо!^,два одновре-;енно протекающих процесса. Это -- активация микросомального оки-ления с частичной переоксицацней липидов,когда низкомолекуляр-'не таолы выполняют в клетках функции антноксидантоз (А.Ю.Влади--нроа,А.И. Арчаков,1972; В.В.Соколовский,1979; Л.А.Тиунов,1996;

,1983 и др.),и образование перекисей а ¡епультате дез^минирования аз.шноз штоховдриальной !.1А0,активко-:ть которой при отравлении ими била попаена. Образующаяся е [роцессе деземнирования эндогенных и экзогенных аминов перекись юдорода.как известно (Л.А.Тиунов,1971;1981;1986),обезвреживается в системе глутатионпероксидаза-глутатионредуктаза. В случае ювьчяенного образования перекиси и возникает нарушение соотнопэ-ил окисленных и восстановленных форм низкомолекулярных тиолов. ¡роме того,доказано,что многие химические вещества (з частности, итрялы) и их метаболиты способны легко вступать з реакции непо-;родственно с 5 Н-группами глутатиона и другими эндогеиныки тио-ювыми соединениями (Л.А.Тиунов,В.В.Кустов, 1980; Л.А.Тиунов ¡, ;986; бг Рси«зоп Д979 п др.).

Другим ва*снш признаком,подтверждающим падение энергзтичес-:ого уровня внутриклеточного потенциала под воздействием нссле-1уемнх ксенобиотиков,является адаптационная перестройка оргагаз-га отравлегашх животных по гиперпластическому типу. Так,при ин-'оксикац!от ДШЩ и -ЦЭДТА в костном мозге подопытных крыс [аблюдалось достоверное увеличение гемицитобластоа,некоторых неточных популяций эритроидного ростка,а также количества мито-ов клеток миелондного ряда. При поступлении в организм КЭНУК, рДДТ# ТЭДТ, химкокцида и ДШН в периферической крови достоверно снижалось относительное количество лимфоцитов,и развивался ней-рофиллез (сдвиг формулы влево) с активацией в нейтрофилах

щелочной фосфатазы. Последнее обстоятельство является характерным для состояния,так называемого (по терминологии С.Н.Голикова, 1981)."токсикологического стресса".

3. Исследование (функционального состояния цитохром Р-450 завис! лдс МОГ в зависимости от величины введенной в организм дозы химического вещества.

Проведенные исследования зависимости функционального состояния микросомального окисления от величин доз ксенобиотиков,поступающих оральный путем (на примере химкокцида,квартазина,трибу-тилаыина.тетраметилдипропилентриамина.СС^ и фенобарбитала), выявили в определенном для каждого соединения диапазоне доз наличиз линейной зависимости "доза-ответ". Угол наклона,а также точка перехода линейной зависимости в нелинейную для разных веществ имеют существенные различия и определяются,по-видимому,степенью сродства ксенобиотика к цитохрому.что.в конечном результате,зависит от физико-химических (главным образом,гидрофобных) свойств вещества.

На основе полученных данных предлагается формула для расчета коэффициента опасности острого действия химических веществ на активность ферментов иикросом (Коп :

"оп.Р-450- 5

где -угол наклона регрессионной прямой зависимости "доза-ответ". По величине Коп р_45о предлагается классификация ядов по степени их опасности острого действия на монооксигеназ ну ¡о систему: I класс (внсокооп&сные, > 10); 2 класс (опасные, 1,0 - 10,0) 3 класс (малоопасные, <£ 1,0). Бойкий коэфс[ициент опасности ( I-2 классы) свидетельствует о специфическом действии вещества на микросомальцую систему МОГ. На примере изученных веществ,относящихся к различным классам химических соединений,показана удовлетворительная корреляционная связь между полученными величинами коэффициентов опасности и среднесмертельнши дозами этих веществ

Д%о(мМ/кг) . 0.914 - 0,417 Ц К^.р^о ;

Г - -0,98; р < 0,01 "

Это еще раз свидетельствует о том,что изменение активности цитохром Р-450 зависимых МОГ вносит существенный вклад в развитие интоксикации и определяет тянесть поражения при действии

на организм химического агента и,безусловно.может быть использован ■> в качества интегрального,а в отдельных случаях и специфического, показателя отравления ядом.

Следует также заметить,что характер и степень воздействия ца активность микросомальных МОГ зависит не только от дозы,но я от пути поступления яда. Так,введение трибутиламяна парентеральным путем приводило к ингибированио микросомальных ферментов, в то время как введение изоэффективной дозы ( в долях от ДЛдд) вещества в желудок вызывало их активацию.

Получение информации о характере действия промышленных ядов (а также лекарственных препаратов) на активность микросомальных МОГ в зависимости от дозы и пути поступления имеет важное значение для прогнозирования характера комбинированного действия препаратов при их одновременном поступлении в организм. Кроме того, информация такого плана окажется полезной при разработке мероприятий по профилактике острых отравлений при работе с ядами э экстремальных условиях,а также поиске методов лечения отравлений.

4. Изменение функционального состояния микросомалышх МОГ в зависимости от величины вводимой дозы и длительности поступления ядов в организм.

Выло исследовано 7 веществ: ССЙ^, фенобарбитал,химкокцид, квартазин, ТЕА, ТЭДЦТ и ДМПН. Оказалось,что по своему характеру действия на активность микросомальных МОГ исследуемые вещества можно разделить на три основные типа действия,известные в токсикологии: "хроноконцентрационный","концентрационный" и "промежуточный" .

Наиболее типичным представителем веществ с "хроноконцентра-ционным" типом действия на эту систему,среди указанных соединений,можно назвать СС{^. Хорошо проникая во все мембранные образования печеночной клетки, СС14 связывается с цитохромом Р-450 и угнетает его активность <А.И.Арчаков,1975) и,талям образом, способствует собственному накоплении в различных биос родах организма. Этому благоприятствует и низкая скорость метаболизма ССб^ (А.И.Арчаков,1975). Накопление еда в организме убедительно подтверждается динамикой угнетения микросомальных ферментов,гидрок-силирущих гексенал,которая,как видно на рисунке 3,близка к линейной зависимости,описываемой уравнением: у-51,2 + 4,86 х,гда у - % увеличения времени окисления гексенала; х - время в днях.

Рис.З. Динамика активности микросомальных МОГ (по времени окисления гексенала) в зависимости от дозы и времени поступления' ядов в желудок (в от контроля).

Обозначения: I - СС^ (1/100 ДЛ^; 0,5 ыМ/кг), в -теоретическая, - экспериментальная? 2 - химкокцид (1/60 ДОзд; 0,07 мМ/кг), + - теоретическая; 3 - химкокцид (1/20 ДЛзд; 0,27 мМ/кг), о - теоретическая,-ф— экспериментальная; 4 - химкокцид (1/100 ДЛзд; 0,04 мМ/кг), а - теоретическая.

Безусловно,по мере накопления яда включаются и другие патологические механизмы, которые еще больше снижают адаптационные возможности организма. Одним из таких механизмов является угнетение активности штохоцдриального дыхания, Сопряженного с фэсфо-рилированием (Ю.С.Н>тенберг,Н.А.Сербиновская,1974),которое, по данным авторов,наступает очень быстро от момента контакта с ядом и длится более 24 часов. Кроме того, ССв^, разрушая структуру

мембран,инактивирует ферменты,встроенные внутри эндоплазматичёс-ког ретикулума и,в частности,активность глюкозо-6-фосфатазы (А.И.Арчаков,И.М.Карузина,1973). Угнетение этой фосфатазы создает дополнительные трудности для фракционирования НДЦ®-зависимых мпкросомальных МОГ из-за невозможности использования запасов гликогена - основного энергетического источника указанных реакций. 3 этих условиях нарушаются биосинтетическив реакции,снижается интенсивность внутриклеточных регенераторных процессов (Д.С.Саркисов и др.,1980). И,наконец,при постепенном концентрировании СС#4 в крови он начинает действовать непосредственно на стенки мелких сосудов,вызывая периваскулиты и васкулиты,что,по-видимому, является причиной вторичной гипоксии тканей.

Представленная картина биохимических нарушений вполне коррелирует с выявленными структурными изменениями в исследуемых органах и тканях,где деструктивно-дегенеративные процессы з значительной степени преобладали над регенераторно-адалтационными. Взлно отметить,что сосудистые и дистрофические изменения одновременно наблюдались на только в печени и почках,где происходят активные метаболические процессы ксенобиотика,но и в шо карде, где подобные реакции практически отсутствуют,что еще раз свидетельствует о накоплении и действии ССб^ за счет целой молекулы.

Примером другого типа действия на монооксигеназную систему является интоксикация химкокцидом. Химкокцид по параметрам острой токсичности (Д%о в/ж=1350 мг/кг) - биологически более активное вещество,чем (Д%о в/ж=6200 мг/кг). Хроническое поступление химкокцида з желудок в дозах 1/20, 1/100 ДЛ^ (иэоэффект тинных с вводимые дозами ССЙ^ - 1/60 и 1/100 ДЛ^) хотя и вызывало изменения активности микросомальных НОГ,а также структуры тканей исследуемых внутренних органов,однако эти изменения значительно отличались по своей динамике и характеру от тех,которые были вызваны СС£^ (рисунок 3), Во-первых,активность шкросомаль-ннх МОГ при интоксикации химкокцидом в диапазоне указанных доз, в отличие от таковой при действии СС£4,носила выраженный фазовый характер,что само по себе является свидетельством развития адаптации к воздействию яда. На преимущественное развитие адаптационные реакций в детокенцирущей функции печени указывает результат анализа теоретических кривых динамики времени окисления гек-сенала в зависимости от дозы и длительности воздействия химкокцида. Из полученных уравнений при введении химкокцида в дозах:

1/20 ДИзд (0,27мМ/кг), у =. 131,5 + 0,04 х

1/60 ДЛзд (0,07 ыМ/кг), у = 115,9 + 0,16 х

1/100 ДПэд^О'. мМ/кг), у « 112,2 - 0,42 х ,

где у - % увеличения времени окисления гексенала; х - время в днях, очевидно,что коэффициенты при аргументе "х",характеризующие угол наклона кривых,т.е. отображающие скорость нарастания эффекта в виде угнетения активности МОГ,в процессе поступления исследуемых доз химкокцида относительно невелики: +0,04; +0,16; -0,42, в то время как при введении 1/100 ДЛдд(0,5 мМ/кг) ССС4 этот коэффициент равен +4,86.

Во-вторых,в изменениях структуры исследуемых тканей внутренних органов регенераторные процессы преобладали над деструктивными. Следует подчеркнуть,что такие изменения были характерны не только для печени,где наблюдалась пролиферация клеток Куп-фера,полиморфизм ядер гепатоцитов и увеличение в клетках запасов гликогена,но и для других тканей. Например,в костном мозге обнаруживали повипение полихроматофильных нормоцитов с последующим ретикулоцитоаом в периферической крови,а также лейкоцитоз со сдвигом формулы влево.

Основной причиной указанного отличия токсикодинамики химкокцида от таковой четыреххлористого углерода является более высокая скорость метаболизма химкокцида. Так,если химкокцид полностью исчезает из организма через 48 часов от момента введения,то СС£4 - через 12 - 75 дней (В.М.Чаркова,1983;ММоссо/^^ Ы а1., 1951).

Длительное введение в желудок в динамике доз квартазина, ТБА,ТЗДТ,ДШН выявило индуцирующий характер их действия,что можно рассматривать,как удовлетворительную адаптивность организма к действию этих веществ в испытанном дозо-временном режиме воздействия. Установленный эффект,по-видимому,не является только результатом прямого контакта веществ с ферментами данной системы, а должен квалифицироваться как общая адаптационная реакция на повреадение структуры клеток химическим веществом,связанная и с другими механизмами. Кроме того,необходимо учитывать, что некоторые вещества,вводимые в желудок,подвергаются окислительной деструкции под воздействием ферментов пристеночного пищеварения (А.М.Угодев,1967),в результате которого биологическая

активность вещества,как было показано,значительно изменяется как по величине,так и характеру.

Это обстоятельство позволяет рассматривать показатели функционального состояния ферментов эндоплозматического ретикулума в наядом конкретном случае отравления не только как специфический, но и как интегральные признаки интоксикации.

Проведенный анализ экспериментально установленных максимально недействующих доз (ЩЦ) при острых и хронических воздействиях исследуемых веществ на систему микросомальных МОГ выявил мекцу ниш положительную корреляционную связь,выражающуюся прямолинейной функцией:

^М1Щс(1 (мМ/кг) . 1,43 + 0,87 Ц ЩЦас(мМ/кг) п =» 6, Г я + 0,87, р<0,001

Это свидетельствует о достаточно удовлетворительной и объективной информативности этого показателя для прогнозирования и оценки вредного действия различных ксенобиотиков.

о. Изменение функционального состояния микросомальных МОГ з зависимости от концентрации и длительности ингаляционного воздействия химических веществ на организм.

Дтя моделирования хронических ингаляционных интоксикаций были использованы соединения,относящиеся к разным классам химических веществ,и разнообразные по агрегатному состоянию: трибу-тиламин (пары), квартазин (яидкий аэрозоль дезинтеграции) и гамме каш (твердый мелкодисперсный аэрозоль,пыль).

Установлено,что ингаляционное поступление указанных соединений в организм,в отличие от орального,вызывало ингибкрование активности микросомальных ферментов,сопровождавшееся снижением содержания цитохрома Р-450 в гепатоцитах. Динамика активности монооксигеназ при действии ТБА,кварт аз ина и гаммоксина,несмотря на различия их физико-химических и токсических свойств,носила идентичный характер. Теоретические кривые этой динамики,построенные на основе экспериментальных данных,изображены на рисунке 4,где гидно,что ингибирующий эффект исследуемых соединений достиг,ял максимального значения практически в течение первого месяца воздействия. Затем,на фоке дальнейшего поступления постоянных концентраций веществ,активность микросомальных МОГ медленно восстанавливалась по закону.наиболее близко описываемому уровне-

% Л

140. 3 •

1К щ о 120. ¿Л/ /

р.

ё о 100

(с е* -О 80

0

%

.140 . •3 Б .•'',

£ 120 .

о а

ж 100

о ге

Е* 60 .

о

0 ! - ' месяцы

I 2 3 4 5

Й1С.4. Динамика времени

окисления гексенала в зависимости от концентрации и дли. тельности воздействия квартазина.гам-моксина и трибутил-амина (в %% от контроля).

Обозначения: А:1-квартазин (0,09 ыМ/м3); 2-гаммоксин (0,02 м.М/м3); 3-трибутил-амик (0,04 мМ/м3); Б: соответственно вгконцентрациях: 1-0,4 ыМ/м3; 20,05 мМ/ы3; 3-0,36 мМ/м3.

нием прямолинейной функции:. у = а + вх, где.у"- величина изменения активности фз^мента в процентах от контроля, „х"- длитель -ность воздействия ( в месяцах ).

Общая форма кривой динамики активности ыикросомальных МОГ при ингаляционном поступлении ядов с различными физико-химическими и биологическими свойствами в надпороговых или близких к порогу вредного действия концентрациях свидетельствует о том, • что причиной такого характера токсикодинамики являются не столько токсические свойства исследуемых веществ,сколько генетически обусловленные механизмы самого организма,обеспечивающие гомеос-таз биологической системы в реальных условиях окружающей среды.

Важно отметить,что динамика исследуемых показателей других органов и систем в зависимости от длительности поступления и величины концентрации веществ по своем/ характеру оказалась очень близка к изменениям функционального*состояния микросомальных МОГ,особенно это касается систем,непосредственно связанных

с ;;?гокся.чацией и выведением ксенобиотиков,в частности,системы гл>"чтиона и почек. Выявленные обстоятельства еще раз подтперж-дают мнение о том,что монооксигеназный аппарат эвдоплазматичес-кого ретикулума входит з единую систему защиты организма от эо-эдейстрия вредного фактора химической природы как ее ведущее звено (Л.А.Тиунов,1581; С.Н.Голиков,1986). Это позволяет рассматривать .функциональное состояние активности микросомальных МОГ как индикатор вредного действия,с одной стороны,а с другой -как показатель адаптивности организма.

Таким образом,субстратное сродство химических веществ я системе детоксикации.ее высокая чувствителькость,функциональная подвижность позволяют использовать эту систему как специфический показатель (маркер) контакта яда с организмом.

Стало уже очевидным,что- неспецифичесхий стандартный характер патологических измеизгай и адаптационных реакций,разви?а>сщ;1-хся в р.-оульгате действия любого фактора малой и сродней интенсивности,затрудняет вычленение и оценку вклада химической экологической нагрузки в общий ксшлекс причин,влияющих на здоровье населения. Поэтому использование показателей фунш^иотльного состояния систрлп^изтаболиэарумдеи ксенобиотики,я токсиколого-ги-гиеничэских н клинических исследованиях,;« дальнейший поиск совершенствование ножэт существенно сбъектиризировать границы этого"вклада" в общую заболеваемость населения и,таким образом, пов»яить эффективность борьбы с химическими загрязнениями.

В П В О Д Ы :

1. Изменение состояния микросомального окисления и других взаимосвязанных с ¡{им окислительных процессов,характер и степень которых хорошо коррелируют с доз о (концентрация) -в ременными параметра;.!'.! воздействия ядов,являются чувствительными и высоко-ннфюрмативннми показателями действия на организм различных по своей структуре токсических веществ. Изменения этой системы служат объективными и надежными показателями пороговых доз и концентраций вредного действия ядов при установлении их гигиенических регламентов в различных объектах окружающей среды.

2. После однократного поступления в организм яд из области введения пронуает в клетки ргэличн-гк органов и тканей и связывается с мембранами внутриклеточных органалл. Время максимпльн»-го гмк1пл°'ия вещества в биосредпх ергакизмг и его выведения

определяется физико-химическими свойствами яда. Гидрофильные соединения (квартазин.гаммоксин) быстро (5-30 мин) достигают максимальных концентраций в биосредах и в течение нескольких часов выводятся из организма. Токсикокинетика этих соединений описывается уравнением гиперболы (у = ахв). Исследуемые аминонитрилы (ДШН,Й -„б-ЦЭДГА и ДМЦРД) при попадании в организм подвергаются метаболическим превращениям с отщеплением СУ -иона и последующим его связыванием и выведением в виде родададов. Время максимального накопления роданидов в крови и период их подувьшедения увеличивается по мере нарастания молекулярной массы вещества.

3. Динамика острого отравлений ядом (токсикодинамика) развивается по закону токсикокинетики данного вещества,являясь отражением активного взаимодействия яда и организма.

4. Активация микросомального окисления фенобарбиталом ускоряет время прохождения через организм ряда исследуемых веществ за счет увеличения скорости окисления и выведения молекул ксенобиотиков и их метаболитов,что приводит к сглаживанию клинических симптомов отравлония и снижению токсичности. Исключение составил даЦГ,токсичность которого увеличивалась. йнгибирование активности микросомального окисления ССб^,.наоборот,вызывало увеличение токсичности- Не удалось обнаружить какой-либо зависимости между активностью микросомальных МОГ и токсичность!) ГЫК-М а,ДМГ1Н и ДЭА.

5. На примера аминонитрилов (ДШ,ДЩЩ, К -.Р-ЦЭДГА) и сложных эфиров нитроуксусной кислоты (ЮНУК.ЭНУК) показано,что токсический эффект веществ,превращение которых протекает с относительно высокой скоростью метаболизма (ДМПН,МЭНУК,ЭНУК) в условиях острого воздействия определяется комбинированным действием метаболитов и целой молекулы. При хроническом воздействии в концентрациях и дозах,близких к пороговым,их токсичность будет определяться, главным образом,действием целой молекулы вещества. Вещества с низкой скоростью метаболизма,в частности,ДМЭДЦ, " ЦЭДГА,как при остром,так и при хроническом поступлении будут действовать целой молекулой.

6. Экстремальное воздействие большинства исследуемых веществ на организм сопровождается ингибированием цитохром Р-450 зависимых МОГ. Механизм угнетения связан как с непосредственным воздействием на ферментные структуры мембран эндоплазматическэго ре-тикулума, так и опосредованно.

»

- 35 -

7. По результатам проведенных экспериментов предложена формула расчета и получены коэффициенты ожсности острого действия исследуемых веществ на активность микросомаяьньк МОГ (KQn р_45д)« Полученные коэффициенты удовлетворительно коррелирует с величинами среднесиертельных доз ( f * - 0,98; р<.0,01). На основе величин коэффициентов предлокена классификация химических веществ по степени опасности их острого действия на активность микросо-мального окисления.

8. Действие химических веществ на состояние микросомального окисления при их длительное поступлении з организм через желудок по свсему характеру и динамике можно условно разделить на три типа действия:"хрококонцентрационный","концентрационный","проме-ауточкия". Характер и степень изменений функционального состояния МОГ коррелировали с изменением структуры и функции исследуемых органов и систем. Показана корреляционная зависимость (Г = + 0,87; р<0,001) мевду максимально недействующими дозами,установленном при остром (ЩЩас) и хроническом (МНД^) оральном поступлении иссле^екых соединений.

9. Ингаляционное поступление исследуемых ядов в организм в концентрациях на уровне пороговых и близких к порогу вредного действия приводило к однотипным изменениям функционального состояния микросокальных МОГ,которое характеризовалось снижением активности в начальный период воздействия,с последующим восстановлением доурозня контроля- Динамика микросомального окисления коррелировала с изменением структуры и функции других исследуемых эрганоз и систем. При этом как.патологические,тая и адаптационные процосси в организме яизотшх при действии всех исследуемых соединений носили песпецифичэский характер.

10. Исследованные з дачной работе химические соединения по величине срэднесмертелькых доз относятся к Iii классу опасности. Метиловый эфир нлтроуксусиой кислоты и натриевая соль гидразида малйииовой кислоты - к ЗУ классу опасности. По опасности вызывать хронические отравления исследуешз вещества расползается б диапазоне Л ~ 1У класса.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ' ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К токсикологии промежуточных продуктов промышленного синтеза некоторых незаменимых аминокислот // Гигиенические аспекты охраны здоровья населения.- Ы., 1977.- С.144-145.

2. К зоксикологии сложных эфиров нитроуксусной кислоты // Некоторые вопросы экспериментальной промышленной токсикологии.-U., 1977.- С. 76-79.

3. Экспериментальное обоснование ПДК метилового и этилового эфиров нитроуксусной кислоты // Гиг.труда и профзабол.-1980.-» ?.- С. 49-51. (В соавторство с Ткачук Г.Н., Фроловой А.Д., 111а-вкуновым С.А.).

4. Метаболизм и токсичность некоторых эфиров нитроуксусной кислоты // Актуальные проблемы .гигиенической токсикологии. - Ь!., КЮО.- С.47-53. ( В соавторстве с Фроловой А.Д., Новиковым Ю.А., Степановым C.B.).

5. Об использовании методики культивирования постимпланта-ционных аародыпей крыс при тестировании промышленных ядов на . тератогенность // Генетика аномалий развития человека,- Киев.-1983.- С. 76-79. ( В соавторстве с Пучковым В.£>., Поповым В.В. ).

о. О механизме нарушения гомеостаза при действии алифатических аминов // Тезисы докл. 1-го Пленума БНОТ.- Л.,(Ftennno), 1983.- С. 26-27. (В соавторстве с Дуковниковой Л.В., Дьяковой Д.И., Сходкиной Н.И.).

7. О метаболизме некоторых эфиров нитрокарбоновых кислот // Гкг.труда и профзабол.- 1984.- № 8.- К> 6802-83 деп. ( В соавторстве с Фроловой А.Д., Новиковым Ю.А., Степановым C.B.).

8. О проблеме ускоренного гигиенического регламентирования химических веществ // Актуальные вопросы гиг. труда и профпато-логии в радиоэлектронной и маданострбительной промышленности.-M.s 1984,- С, 59-65. ( В соавторстве с Ыихеевым М.И., Строковым Ю.Н., Дуковниковой Л.В. ).

9. О токсичности некоторых алифатических аминов // Гиг. труда и профзабол.- 1984,- $ II.- G. 50-53. '( В соавторстве с Луковниковой Л.В., Стройковым Ю.Н. и др.).

10. Состояние кетаболизирувщих систем как показатель фукк-

цчон мыяк возможностей организма // Здоровье и функциональные в'>зг.!' псти человека (оценка и прогноз).- М., 1965.- С.389. ( В соавторстве с Стройковым D.H.„ Луковниковой Л.В.).

11. Алифатические и ароматические амины // Вредные вещества в промышленности. Справочник.- Л., 1985.- С. 158—171.

12. Аминоспирты // Вредные вещества в промышленности. Справочник.- Л., 1985.- С. 172-173.

13. Камора для ингаляционных затравок мелких лабораторных животных // Авторское свидетельство СССР. I? II83I02 А кл A-6I 10/02 ( В соавторстве с Дубейковской Л.С., Крупкинкм Г.Я. и др).

14. Перспективы изучения метаболиэирующих систем в практике гигиенического регламентирования химических веществ // Проблемы охраны здоровья населения и защиты окружающей среда от химических вредных факторов. Тезисы докл. I Всесоюзного съезда токсикологов.- РЬстов-на-Дону.- 1966.- С. 322-323. ( В соавторство с Стройковым D.H., Луковниковой Л.В.).

15. К механизму нарушения гомеостаза при экстремальном воздействии токсического фактора // Физиология экстремальных состо-Я1мй и индивидуальная защита человека. Тезисы докл. П Всесоюзной конференции.- И., 1936.- С. 233. ( В соавторстве с Стройковым D.H., Луковниковой Л.В.).

16. О токсичности некоторых ингибиторов полимеризации изопрена //Учредительная конференция Пер.тского областного общества токсикологов.- Перл.- 1987.- С. 101. ( В соавторстве с Луковниковой Л.В., Сходкиной Н.И. и др.).

17. Пути метаболизма и механизма ловрездадщего действия химкокцида // Деп. в ВИНИТИ. 4929- В 88. PZ "Охрана природы и воспроизводство природных ресурсов" $ 10.-публ.10.72.429.

( В соавторстве с Луковниковой Л.В., Сходкиной Н.И. и др.).

18. К методологии группового регламентирования премиален-ных веществ // Ускоренные методы санитарно-гигиенического нормирования вредных, веществ в воздухе рабочей зоны. - Ереван.-1963.- С. 104. ( 3 соавторстве с Луковшкозой Л.В.).

19. Исследование мётаболизируящих систем в ретеши проблем гигиенического регламентирования // Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии.- М., i960.- С. 11-27. ( В со-«ьторстзо с Луковниковой Л.В.).

20. Сравнительная характеристика токсического действия не-

которых аминов и подходы к их ускоренному регламентированию // Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии.-11., 1988.- С. 44-53. ( В соавторстве с Луковниковой Л.З., Дьяковой Л.И. и др.).

21. Значение функционального состояния метаболизирующих систем при оценке уровня экологической нагрузки на организм // Экология и токсикология. Сборник материалов 1У Пленума правления ВНОТ.- Ярославль, 1990.- С. 116-118. ( В соавторстве с Луковниковой Л.В., Дьяковой Л.И. и др.).

22. Биохимические реакции организма и процессы адаптации // Материалы Ш Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей. С<5.науч.трудов.- М., 1991.-С. 242-243.

23. Влияние гаммоксина на нейроэндокринцую регуляцию функции почек // 1У Всесоюзная конференция "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды. Тезисы докл.- Л., 1991.- С. 33. ( В соавторстве с Берлинер Е.Г., Луковниковой Л.В.).

24. Биохимическая адаптация и механизмы повреждения при воздействии промышленных ядов // Актуальные проблемы адаптации и здоровья населения Севера. Материалы Изспубл.науч.конф.- Архангельск, 1991.- С. 95-97. ( В соавторстве с Луковниковой Л.В.)

25. К вопросу о биохимической адаптация! при экстремальном и хроническом действии промышленных адов // Современные проблемы профилактической токсикологии.- П., 1991.- С. 4-25.

26. Особенности биологического действия некоторых производных гидразина // Современные проблемы профилактической токсикологии.- М., 1991.- С. 68-84 ( В соавторстве с Сходкиной Н.И., Луковниковой Л.В. и др.).

2?.. Современные проблемы профилактической токсикологии. Сборник научных трудов.- М., 1991.- 174 с.(редактор).

28. .0 патогенезе трихлорэтиленовой интоксикации // №. труда и профзабол. - 1992,- * 2.- С. 32-34. ( В соавторстве • с Суворовы« И.М., Луковниковой Л.В., Пановым Б.В.). -

29. Влияние гашоксина на поведенческие реакции белых крыс // Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетий. Материалы Международной науч. конференсрш .посвященной 100-летию со дня рождения академика С.В.Аничкова,- СПб, 1992.- С. 131. ( В соавторст-

ре с Луковниновой Л.В.).

¿0. О методологии установления временных регламентов для работы с химическими веществами в экстремальных условиях // Экологическая безопасность городов. Материалы конф,- СГ1Й1993.- С. 210-219.

31. Метаболизм нитрилов и его значение в развитии острых

и хронических отравлений // Экологическая безопасность городов. Материалы конф.- <316,1993.- С. 220-221. ( В соавторстве с Дьяковой Л.И., Луковниковой Л.В., Сходкиной Н.И.).

32. Характеристика биологического окисления - критерий экологической нагрузки различными химическими веществами на организм // Экологическая безопасность городов. Материалы конф.-<316, 1993,- С. 177-178. ( В соавторство с Зроловой А.Д., Луков-ннковой Л.З.).

33. Закономерности функционального состояния микросомальных МОГ в зависимости от дозо-временных параметров воздействия ксенобиотиков // Загрязнение окружающей среды. Проблемы токсикологии и эпидемиологии. Тезисы докл.мевдународной конф.-М.-Пермь, 1993.- С. 226-227. ( В соавторстве с Луковниковой Л.В. ,■ Фроловой А.Д., Сходкиной Н.И.).

Тир. 100, фор. бум. 50x34,2,7 печ. л. Бесплатно, т-йия С.-Пб ГААКП Большая Порская 67